JP2000217592A - ３−カルバミルピコリン酸の生物学的製造方法 - Google Patents
３−カルバミルピコリン酸の生物学的製造方法Info
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 ２，３−ピリジンカルボキシイミドから３−
カルバミルピコリン酸を経済的かつ簡便に製造する方法
を提供する。 【解決手段】 下記の一般式（Ｉ） 【化１】 で示される２，３−ピリジンカルボキシイミドに、該化
合物の環状イミドを位置選択的に加水分解する能力を有
する微生物の菌体及び／または該菌体処理物を作用させ
ることを特徴とする一般式（II） 【化２】
カルバミルピコリン酸を経済的かつ簡便に製造する方法
を提供する。 【解決手段】 下記の一般式（Ｉ） 【化１】 で示される２，３−ピリジンカルボキシイミドに、該化
合物の環状イミドを位置選択的に加水分解する能力を有
する微生物の菌体及び／または該菌体処理物を作用させ
ることを特徴とする一般式（II） 【化２】
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、微生物の菌体及び
／または該菌体処理物を利用して環状イミドを位置選択
的に加水分解しカルバミル体を製造する方法に関する。
３−カルバミルピコリン酸は医薬、農薬の重要な合成中
間体である。
／または該菌体処理物を利用して環状イミドを位置選択
的に加水分解しカルバミル体を製造する方法に関する。
３−カルバミルピコリン酸は医薬、農薬の重要な合成中
間体である。
【０００２】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】３−カ
ルバミルピコリン酸は生理活性又は薬理活性成分（医薬
品、農薬など）の中間原料として有用な物質である。こ
の３−カルバミルピコリン酸の化学的製造法において
は、２，３−ピリジンジカルボキシイミドをアルカリ中
で加水分解する方法があるが、イミドの加水分解反応に
位置選択性がないため、３−カルバミルピコリン酸と２
−カルバミルニコチン酸の混合物となり経済的に有利に
製造方法とは言えない。また生化学的手法により環状イ
ミドを加水分解する方法としてラット肝臓のイミダーゼ
によるイミド類の加水分解例の報告（Ｙ．ＹａｎｇらＴ
ｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ
Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ２６８，１０８７０ （１９９
３））があるが、物質の生産を目的とした方法ではな
く、また、加水分解反応の位置特異性を検討した報告で
はない。
ルバミルピコリン酸は生理活性又は薬理活性成分（医薬
品、農薬など）の中間原料として有用な物質である。こ
の３−カルバミルピコリン酸の化学的製造法において
は、２，３−ピリジンジカルボキシイミドをアルカリ中
で加水分解する方法があるが、イミドの加水分解反応に
位置選択性がないため、３−カルバミルピコリン酸と２
−カルバミルニコチン酸の混合物となり経済的に有利に
製造方法とは言えない。また生化学的手法により環状イ
ミドを加水分解する方法としてラット肝臓のイミダーゼ
によるイミド類の加水分解例の報告（Ｙ．ＹａｎｇらＴ
ｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ
Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ２６８，１０８７０ （１９９
３））があるが、物質の生産を目的とした方法ではな
く、また、加水分解反応の位置特異性を検討した報告で
はない。
【０００３】
【課題を解決するための手段】本発明者は、経済的に優
れ、かつ、簡便な方法で３−カルバミルピコリン酸を得
るため、２，３−ピリジンカルボキシイミドを原料とし
微生物及び／又はその処理物による製造方法に着目して
鋭意検討したところ、特定の微生物及び／又はその酵素
により、２，３−ピリジンカルボキシイミドから３−カ
ルバミルピコリン酸が効率良く生成することを見い出
し、本発明を完成した。すなわち、本発明の要旨は、
２，３−ピリジンカルボキシイミドに微生物及び／また
は該菌体処理物を作用させ、３−カルバミルピコリン酸
を製造する方法に存する。
れ、かつ、簡便な方法で３−カルバミルピコリン酸を得
るため、２，３−ピリジンカルボキシイミドを原料とし
微生物及び／又はその処理物による製造方法に着目して
鋭意検討したところ、特定の微生物及び／又はその酵素
により、２，３−ピリジンカルボキシイミドから３−カ
ルバミルピコリン酸が効率良く生成することを見い出
し、本発明を完成した。すなわち、本発明の要旨は、
２，３−ピリジンカルボキシイミドに微生物及び／また
は該菌体処理物を作用させ、３−カルバミルピコリン酸
を製造する方法に存する。
【０００４】
【発明の実施の形態】本発明に用いられる微生物は、
２，３−ピリジンカルボキシイミドに作用し３−カルバ
ミルピコリン酸を生成する能力を有する微生物である。
具体例としては、例えばアルスロバクター（Ａｒｔｈｒ
ｏｂａｃｔｅｒ）属に属する微生物が挙げられ、具体的
菌株としては、アルスロバクター・エスピー( Ａｒｔｈ
ｒｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ． )ＭＣＩ３６５２、アルスロ
バクター・エスピー( Ａｒｔｈｏｒｏｂａｃｔｅｒ ｓ
ｐ．) ＭＣＩ３６５３株が挙げられる。ＭＣＩ３６５２
株，ＭＣＩ３６５３株は、本発明者らにより天然土壌か
ら分離された細菌であり、それぞれ工業技術院生命工学
技術研究所にＦＥＲＭ Ｐ−１７１５４およびＦＥＲＭ
Ｐ−１７１５５として寄託されている。ＭＣＩ３６５
２株及びＭＣＩ３６５３株の菌学的性質は以下の通りで
ある。
２，３−ピリジンカルボキシイミドに作用し３−カルバ
ミルピコリン酸を生成する能力を有する微生物である。
具体例としては、例えばアルスロバクター（Ａｒｔｈｒ
ｏｂａｃｔｅｒ）属に属する微生物が挙げられ、具体的
菌株としては、アルスロバクター・エスピー( Ａｒｔｈ
ｒｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ． )ＭＣＩ３６５２、アルスロ
バクター・エスピー( Ａｒｔｈｏｒｏｂａｃｔｅｒ ｓ
ｐ．) ＭＣＩ３６５３株が挙げられる。ＭＣＩ３６５２
株，ＭＣＩ３６５３株は、本発明者らにより天然土壌か
ら分離された細菌であり、それぞれ工業技術院生命工学
技術研究所にＦＥＲＭ Ｐ−１７１５４およびＦＥＲＭ
Ｐ−１７１５５として寄託されている。ＭＣＩ３６５
２株及びＭＣＩ３６５３株の菌学的性質は以下の通りで
ある。
【０００５】
【表１】
【０００６】
【表２】
【０００７】５．分類学的考察 （１）属の同定 本菌株ＭＣＩ３６５２及び３６５３株は１）グラム陽性
桿菌、２）好気性、３）芽胞を形成しない、４）多形性
を示す、５）グルコース等の糖類から酸を生成しない、
６）細胞壁の主要アミノ酸としてリジンを有する、７）
細胞壁のアシル基型はアセチル型、８）主要なイソプレ
ノイドキノンはメナキノンＭＫ９（Ｈ2）を有する、な
どの特徴を持っている。これらの特徴から、本菌株はバ
ージェイズマニュアル・システマティック・バクテリオ
ロジー[Bergey's Manual of Systematic Bacteriol
ogy]第２巻、１２８８〜１３０１頁（１９８６）に記載
されているアルスロバクター（Arthrobacter）属に帰属
することが判明した。
桿菌、２）好気性、３）芽胞を形成しない、４）多形性
を示す、５）グルコース等の糖類から酸を生成しない、
６）細胞壁の主要アミノ酸としてリジンを有する、７）
細胞壁のアシル基型はアセチル型、８）主要なイソプレ
ノイドキノンはメナキノンＭＫ９（Ｈ2）を有する、な
どの特徴を持っている。これらの特徴から、本菌株はバ
ージェイズマニュアル・システマティック・バクテリオ
ロジー[Bergey's Manual of Systematic Bacteriol
ogy]第２巻、１２８８〜１３０１頁（１９８６）に記載
されているアルスロバクター（Arthrobacter）属に帰属
することが判明した。
【０００８】（２）種の同定 現在、アルスロバクター属は、細胞壁のアミノ酸および
糖組成、また、メナキノンの分子種によって種が区別さ
れている。ＭＣＩ３６５２及び３６５３株はアミノ酸の
モル比から、架橋部分にアラニン２モル及びスレオニン
１モルを有していると考えられたため、表１に周辺種と
の比較を示した。本菌株は細胞壁にガラクトースのみを
有すという点で、アルスロバクター ウレアファシエン
ス( Arthr obacter ureafaciens)またはアルスロバクタ
ー シトレウス( Arthrobactercit reus) に近縁である
ことが示唆された。そこで本菌株２株の１６ＳｒＤＮＡ
（約１５００ｂｐ）の塩基配列を決定し、データベース
において検索したところ、ＭＣＩ３６５２株とアルスロ
バクター ウレアファシエンス及びアルスロバクター
シトレウスとの相同性は、それぞれ９９. ４％及び９
５. ８％であった。従って以上の結果から、運動性の有
無で相違が見られたが、本菌株ＭＣＩ３６５２及び３６
５３株をアルスロバクター ウレアファシエンス( Arth
robacterureafaciens)に帰属させるのが妥当と考えた。
また、ＭＣＩ３６５２株と３６５３株は、コロニー色
調、無機窒素源利用及び１６Ｓ ｒＤＮＡ塩基配列の相
違から、同種異株であることが判明した。
糖組成、また、メナキノンの分子種によって種が区別さ
れている。ＭＣＩ３６５２及び３６５３株はアミノ酸の
モル比から、架橋部分にアラニン２モル及びスレオニン
１モルを有していると考えられたため、表１に周辺種と
の比較を示した。本菌株は細胞壁にガラクトースのみを
有すという点で、アルスロバクター ウレアファシエン
ス( Arthr obacter ureafaciens)またはアルスロバクタ
ー シトレウス( Arthrobactercit reus) に近縁である
ことが示唆された。そこで本菌株２株の１６ＳｒＤＮＡ
（約１５００ｂｐ）の塩基配列を決定し、データベース
において検索したところ、ＭＣＩ３６５２株とアルスロ
バクター ウレアファシエンス及びアルスロバクター
シトレウスとの相同性は、それぞれ９９. ４％及び９
５. ８％であった。従って以上の結果から、運動性の有
無で相違が見られたが、本菌株ＭＣＩ３６５２及び３６
５３株をアルスロバクター ウレアファシエンス( Arth
robacterureafaciens)に帰属させるのが妥当と考えた。
また、ＭＣＩ３６５２株と３６５３株は、コロニー色
調、無機窒素源利用及び１６Ｓ ｒＤＮＡ塩基配列の相
違から、同種異株であることが判明した。
【０００９】
【表３】
【００１０】また、上記微生物は、変異株、あるいは細
胞融合もしくは遺伝子組換え法などの遺伝学的手法によ
り誘導される組換え株などのいずれの株であってもよ
い。本発明の製造方法においては、上記微生物の１種あ
るいは２種以上が菌体及び／または菌体処理物として用
いられる。具体的には、上記微生物を培養して得られた
菌体をそのまま、あるいは培養して得られた菌体を公知
の手法で処理したもの、即ち、アセトン処理したもの、
凍結乾燥処理したもの、菌体を物理的または酵素的に破
砕したもの等の菌体処理物を用いることができる。ま
た、これらの菌体または菌体処理物から、２，３−ピリ
ジンジカルボキシイミドに作用し３−カルバミルピコリ
ン酸に変換するする能力を有する酵素画分を粗製物ある
いは精製物として取り出して用いることも可能である。
さらには、このようにして得られた菌体、菌体処理物、
酵素画分等を通常の固定化技術を用いて、すなわち、ポ
リアクリルアミド、カラギーナンゲル等の担体に固定化
したもの等を用いることも可能である。そこで本明細書
において、「菌体及び／または該菌体処理物」の用語
は、上述の菌体、菌体処理物、酵素画分、及びそれらの
固定化物全てを含有する概念として用いられる。
胞融合もしくは遺伝子組換え法などの遺伝学的手法によ
り誘導される組換え株などのいずれの株であってもよ
い。本発明の製造方法においては、上記微生物の１種あ
るいは２種以上が菌体及び／または菌体処理物として用
いられる。具体的には、上記微生物を培養して得られた
菌体をそのまま、あるいは培養して得られた菌体を公知
の手法で処理したもの、即ち、アセトン処理したもの、
凍結乾燥処理したもの、菌体を物理的または酵素的に破
砕したもの等の菌体処理物を用いることができる。ま
た、これらの菌体または菌体処理物から、２，３−ピリ
ジンジカルボキシイミドに作用し３−カルバミルピコリ
ン酸に変換するする能力を有する酵素画分を粗製物ある
いは精製物として取り出して用いることも可能である。
さらには、このようにして得られた菌体、菌体処理物、
酵素画分等を通常の固定化技術を用いて、すなわち、ポ
リアクリルアミド、カラギーナンゲル等の担体に固定化
したもの等を用いることも可能である。そこで本明細書
において、「菌体及び／または該菌体処理物」の用語
は、上述の菌体、菌体処理物、酵素画分、及びそれらの
固定化物全てを含有する概念として用いられる。
【００１１】次に、本発明の製造方法について具体的に
説明する。本発明においては、原料として２，３−ピリ
ジンジカルボキシイミドを用い、これに上記特定の微生
物の菌体又は該菌体処理物を作用させて、３−カルバミ
ルピコリン酸を製造する。本発明の製造方法において微
生物は、通常、培養して用いられるが、この培養につい
ては定法通り行うことができる。本微生物の培養の為に
用いられる培地には本微生物が資化しうる炭素源、窒素
源、及び無機イオン等が含まれる。炭素源としては、グ
ルコース、フルクトース、サッカロース等の炭水化物、
グリセロール、マンニトール、キシリトール、リビトー
ル等のポリアルコール類、有機酸その他が適宜使用され
る。窒素源としては、ＮＺアミン、トリプトース、酵母
エキス、ポリペプトン、肉エキス、大豆抽出物などの有
機窒素源、あるいは硫酸アンモニウム塩、硝酸アンモニ
ウム塩などの無機窒素源、その他などが適宜使用され
る。無機イオンとしては、リン酸イオン、マグネシウム
イオン、鉄イオン、マンガンイオン、モリブデンイオン
その他が必要に応じ適宜使用される。更に、イノシトー
ル、パントテン酸、ニコチン酸アミドその他のビタミン
類を必要に応じ添加することは有効である。酵素の誘導
剤として、イミド類が適宜使用される。培養は、好気的
条件下に、ｐＨ約３〜１１、温度約４〜５０℃の適当な
範囲に制御しつつ１〜１００時間行う。
説明する。本発明においては、原料として２，３−ピリ
ジンジカルボキシイミドを用い、これに上記特定の微生
物の菌体又は該菌体処理物を作用させて、３−カルバミ
ルピコリン酸を製造する。本発明の製造方法において微
生物は、通常、培養して用いられるが、この培養につい
ては定法通り行うことができる。本微生物の培養の為に
用いられる培地には本微生物が資化しうる炭素源、窒素
源、及び無機イオン等が含まれる。炭素源としては、グ
ルコース、フルクトース、サッカロース等の炭水化物、
グリセロール、マンニトール、キシリトール、リビトー
ル等のポリアルコール類、有機酸その他が適宜使用され
る。窒素源としては、ＮＺアミン、トリプトース、酵母
エキス、ポリペプトン、肉エキス、大豆抽出物などの有
機窒素源、あるいは硫酸アンモニウム塩、硝酸アンモニ
ウム塩などの無機窒素源、その他などが適宜使用され
る。無機イオンとしては、リン酸イオン、マグネシウム
イオン、鉄イオン、マンガンイオン、モリブデンイオン
その他が必要に応じ適宜使用される。更に、イノシトー
ル、パントテン酸、ニコチン酸アミドその他のビタミン
類を必要に応じ添加することは有効である。酵素の誘導
剤として、イミド類が適宜使用される。培養は、好気的
条件下に、ｐＨ約３〜１１、温度約４〜５０℃の適当な
範囲に制御しつつ１〜１００時間行う。
【００１２】３−カルバミルピコリン酸を製造する方法
として、本微生物を培養し、得られた菌体及び／または
該菌体処理物に２，３−ピリジンジカルボキシイミドを
添加し反応させ３−カルバミルピコリン酸を得る方法、
培地に２，３−ピリジンジカルボキシイミドを添加し培
養と反応を同時に行う方法、あるいは培養終了後、２，
３−ピリジンジカルボキシイミドを添加して更に反応を
行う方法等を適宜用いることができる。反応は温度４〜
７０℃、好ましくは２０〜５０℃の範囲で行い、ｐＨは
２〜１１、好ましくは６〜９のの範囲で行う。２，３−
ピリジンジカルボキシイミドの濃度は０．０００１〜８
０％、好ましくは０．０１〜５０％の範囲が望ましく、
必要ならば反応の間、２，３−ピリジンジカルボキシイ
ミドは追補添加される。
として、本微生物を培養し、得られた菌体及び／または
該菌体処理物に２，３−ピリジンジカルボキシイミドを
添加し反応させ３−カルバミルピコリン酸を得る方法、
培地に２，３−ピリジンジカルボキシイミドを添加し培
養と反応を同時に行う方法、あるいは培養終了後、２，
３−ピリジンジカルボキシイミドを添加して更に反応を
行う方法等を適宜用いることができる。反応は温度４〜
７０℃、好ましくは２０〜５０℃の範囲で行い、ｐＨは
２〜１１、好ましくは６〜９のの範囲で行う。２，３−
ピリジンジカルボキシイミドの濃度は０．０００１〜８
０％、好ましくは０．０１〜５０％の範囲が望ましく、
必要ならば反応の間、２，３−ピリジンジカルボキシイ
ミドは追補添加される。
【００１３】培養及び反応で得られた３−カルバミルピ
コリン酸の採取方法としては、微生物などの固形分を遠
心分離、フィルタープレス、限外濾過などの通常の分離
装置によりを除去した後に反応液を有機溶媒による抽
出、晶析、カラムクロマトグラフィー、濃縮、蒸留など
の分離精製手段に供することにより光学活性体を得るこ
とができ、分離精製手段は単独でまたは複数の手段を組
み合わせて利用できる。前記有機溶媒としては例えばブ
タノールなどのアルコール類、ヘキサン、シクロヘキサ
ン、トルエン等の炭化水素類、クロロホルム、塩化メチ
レンなどのハロゲン化炭化水素類、酢酸エチル、酢酸メ
チルなどのエステル類、ケトン類、エーテル類、これら
の混合溶媒などが利用できる。本発明では微生物または
その処理物の活性を利用して２，３−ピリジンジカルボ
キシイミドから３−カルバミルピコリン酸を簡便な方法
で経済的に有利に製造できる。
コリン酸の採取方法としては、微生物などの固形分を遠
心分離、フィルタープレス、限外濾過などの通常の分離
装置によりを除去した後に反応液を有機溶媒による抽
出、晶析、カラムクロマトグラフィー、濃縮、蒸留など
の分離精製手段に供することにより光学活性体を得るこ
とができ、分離精製手段は単独でまたは複数の手段を組
み合わせて利用できる。前記有機溶媒としては例えばブ
タノールなどのアルコール類、ヘキサン、シクロヘキサ
ン、トルエン等の炭化水素類、クロロホルム、塩化メチ
レンなどのハロゲン化炭化水素類、酢酸エチル、酢酸メ
チルなどのエステル類、ケトン類、エーテル類、これら
の混合溶媒などが利用できる。本発明では微生物または
その処理物の活性を利用して２，３−ピリジンジカルボ
キシイミドから３−カルバミルピコリン酸を簡便な方法
で経済的に有利に製造できる。
【００１４】
【実施例】以下に実施例を示し、本発明を具体的に説明
するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものでは
ない。 実施例１ リン酸水素２カリウム０．１％，リン酸２水素カリウム
０．１％，硫酸マグネシウム０．０３％，酵母エキス
０．０１％，塩化アンモニウム０．２％，フタルイミド
０．１５％（ｐＨ７．０）の組成からなる２％寒天培地
にアルスロバクター・エスピーＭＣＩ３６５２を接種
し，２８℃で７２時間好気的に培養した。培養終了後，
菌体を集め１５０ｍＭ塩化ナトリウム溶液で洗浄した。
得られた洗浄湿菌体１０ｍｇに１０ｍＭの２，３−ピリ
ジンジカルボキシイミドを含む１００ｍＭ酢酸緩衝液
（ｐＨ５．０）を加え，全量を０．２５ｍＬとし３０℃
で６時間反応させた。１５％過塩素酸水溶液を０．０５
ｍＬ加えて反応終了させ遠心の後，得られた上精を高速
液体クロマトグラフィー（カラム：Ｃｏｓｍｏｓｉｌ
５Ｃ１８、溶離液組成：水／アセトニトリル／トリフル
オロ酢酸＝９０／１０／０．１）で分析した。分析の結
果、３−カルバミルピコリン酸４．０ｍＭ，２−カルバ
ミルニコチン酸０．４９ｍＭが蓄積した。
するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものでは
ない。 実施例１ リン酸水素２カリウム０．１％，リン酸２水素カリウム
０．１％，硫酸マグネシウム０．０３％，酵母エキス
０．０１％，塩化アンモニウム０．２％，フタルイミド
０．１５％（ｐＨ７．０）の組成からなる２％寒天培地
にアルスロバクター・エスピーＭＣＩ３６５２を接種
し，２８℃で７２時間好気的に培養した。培養終了後，
菌体を集め１５０ｍＭ塩化ナトリウム溶液で洗浄した。
得られた洗浄湿菌体１０ｍｇに１０ｍＭの２，３−ピリ
ジンジカルボキシイミドを含む１００ｍＭ酢酸緩衝液
（ｐＨ５．０）を加え，全量を０．２５ｍＬとし３０℃
で６時間反応させた。１５％過塩素酸水溶液を０．０５
ｍＬ加えて反応終了させ遠心の後，得られた上精を高速
液体クロマトグラフィー（カラム：Ｃｏｓｍｏｓｉｌ
５Ｃ１８、溶離液組成：水／アセトニトリル／トリフル
オロ酢酸＝９０／１０／０．１）で分析した。分析の結
果、３−カルバミルピコリン酸４．０ｍＭ，２−カルバ
ミルニコチン酸０．４９ｍＭが蓄積した。
【００１５】実施例２ リン酸水素２カリウム０．１％，リン酸２水素カリウム
０．１％，硫酸マグネシウム０．０３％，酵母エキス
０．０１％，塩化アンモニウム０．２％，フタルイミド
０．１５％（ｐＨ７．０）の組成からなる２％寒天培地
にアルスロバクター・エスピーＭＣＩ３６５３を接種
し，２８℃で７２時間好気的に培養した。培養終了後，
菌体を集め１５０ｍＭ塩化ナトリウム溶液で洗浄した。
得られた洗浄湿菌体１０ｍｇに１０ｍＭの２，３−ピリ
ジンジカルボキシイミドを含む１００ｍＭ酢酸緩衝液
（ｐＨ５．０）を加え，全量を０．２５ｍＬとし３０℃
で６時間反応させた。１５％過塩素酸水溶液を０．０５
ｍＬ加えて反応終了させ遠心の後，得られた上精を高速
液体クロマトグラフィー（カラム：Ｃｏｓｍｏｓｉｌ
５Ｃ１８、溶離液組成：水／アセトニトリル／トリフル
オロ酢酸＝９０／１０／０．１）で分析した。分析の結
果、３−カルバミルピコリン酸３．１ｍＭ，２−カルバ
ミルニコチン酸０．５６ｍＭが蓄積した。
０．１％，硫酸マグネシウム０．０３％，酵母エキス
０．０１％，塩化アンモニウム０．２％，フタルイミド
０．１５％（ｐＨ７．０）の組成からなる２％寒天培地
にアルスロバクター・エスピーＭＣＩ３６５３を接種
し，２８℃で７２時間好気的に培養した。培養終了後，
菌体を集め１５０ｍＭ塩化ナトリウム溶液で洗浄した。
得られた洗浄湿菌体１０ｍｇに１０ｍＭの２，３−ピリ
ジンジカルボキシイミドを含む１００ｍＭ酢酸緩衝液
（ｐＨ５．０）を加え，全量を０．２５ｍＬとし３０℃
で６時間反応させた。１５％過塩素酸水溶液を０．０５
ｍＬ加えて反応終了させ遠心の後，得られた上精を高速
液体クロマトグラフィー（カラム：Ｃｏｓｍｏｓｉｌ
５Ｃ１８、溶離液組成：水／アセトニトリル／トリフル
オロ酢酸＝９０／１０／０．１）で分析した。分析の結
果、３−カルバミルピコリン酸３．１ｍＭ，２−カルバ
ミルニコチン酸０．５６ｍＭが蓄積した。
【００１６】実施例３ 実施例１で培養した菌体の洗浄湿菌体１０ｍｇに０．１
２５ｍＬの１００ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ５．０）を加
え，さらに、２０mMの２，３−ピリジンジカルボキシイ
ミドを含むシクロヘキサノン溶液を０．１２５ｍＬ添加
し、全量を０．２５ｍＬとし３０℃で６時間反応させ
た。１５％過塩素酸水溶液を０．０５ｍＬ加えて反応終
了させ遠心の後，得られた水溶液相を高速液体クロマト
グラフィー（カラム：Ｃｏｓｍｏｓｉｌ ５Ｃ１８、溶
離液組成：水／アセトニトリル／トリフルオロ酢酸＝９
０／１０／０．１）で分析した。分析の結果、３−カル
バミルピコリン酸５．１ｍＭ，２−カルバミルニコチン
酸０．３５ｍＭが蓄積した。
２５ｍＬの１００ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ５．０）を加
え，さらに、２０mMの２，３−ピリジンジカルボキシイ
ミドを含むシクロヘキサノン溶液を０．１２５ｍＬ添加
し、全量を０．２５ｍＬとし３０℃で６時間反応させ
た。１５％過塩素酸水溶液を０．０５ｍＬ加えて反応終
了させ遠心の後，得られた水溶液相を高速液体クロマト
グラフィー（カラム：Ｃｏｓｍｏｓｉｌ ５Ｃ１８、溶
離液組成：水／アセトニトリル／トリフルオロ酢酸＝９
０／１０／０．１）で分析した。分析の結果、３−カル
バミルピコリン酸５．１ｍＭ，２−カルバミルニコチン
酸０．３５ｍＭが蓄積した。
【００１７】実施例４ 実施例２で培養した菌体の洗浄湿菌体１０ｍｇに０．１
２５ｍＬの１００ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ５．０）を加
え，さらに、２０mMの２，３−ピリジンジカルボキシイ
ミドを含むシクロヘキサノン溶液を０．１２５ｍＬ添加
し、全量を０．２５ｍＬとし３０℃で６時間反応させ
た。１５％過塩素酸水溶液を０．０５ｍＬ加えて反応終
了させ遠心の後，得られた水溶液相を高速液体クロマト
グラフィー（カラム：Ｃｏｓｍｏｓｉｌ ５Ｃ１８、溶
離液組成：水／アセトニトリル／トリフルオロ酢酸＝９
０／１０／０．１）で分析した。分析の結果、３−カル
バミルピコリン酸３．８ｍＭ，２−カルバミルニコチン
酸０．３６ｍＭが蓄積した。
２５ｍＬの１００ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ５．０）を加
え，さらに、２０mMの２，３−ピリジンジカルボキシイ
ミドを含むシクロヘキサノン溶液を０．１２５ｍＬ添加
し、全量を０．２５ｍＬとし３０℃で６時間反応させ
た。１５％過塩素酸水溶液を０．０５ｍＬ加えて反応終
了させ遠心の後，得られた水溶液相を高速液体クロマト
グラフィー（カラム：Ｃｏｓｍｏｓｉｌ ５Ｃ１８、溶
離液組成：水／アセトニトリル／トリフルオロ酢酸＝９
０／１０／０．１）で分析した。分析の結果、３−カル
バミルピコリン酸３．８ｍＭ，２−カルバミルニコチン
酸０．３６ｍＭが蓄積した。
【００１８】
【発明の効果】本願の方法によれば、２，３−ピリジン
カルボキシイミドから簡便に３−カルバミルピコリン酸
を製造することが出来る。
カルボキシイミドから簡便に３−カルバミルピコリン酸
を製造することが出来る。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ１２Ｒ 1:06） Ｆターム(参考） 4B064 AE49 CA02 CB05 CC03 CD12 CE01 CE08 CE10 CE15 DA01 DA11 4B065 AA13X BA23 BB13 BC01 BD14 BD34 CA18 CA31 CA43 CA44
Claims (2)
- 【請求項１】 下記の一般式（Ｉ） 【化１】 で示される２，３−ピリジンカルボキシイミドに、該化
合物の環状イミドを位置選択的に加水分解する能力を有
する微生物の菌体及び／または該菌体処理物を作用させ
ることを特徴とする一般式（II） 【化２】 で表される３−カルバミルピコリン酸の製造方法。 - 【請求項２】 微生物として、アルスロバクター属の微
生物を用いることを徴とする請求項１記載の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11023511A JP2000217592A (ja) | 1999-02-01 | 1999-02-01 | ３−カルバミルピコリン酸の生物学的製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11023511A JP2000217592A (ja) | 1999-02-01 | 1999-02-01 | ３−カルバミルピコリン酸の生物学的製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2000217592A true JP2000217592A (ja) | 2000-08-08 |
Family
ID=12112487
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP11023511A Pending JP2000217592A (ja) | 1999-02-01 | 1999-02-01 | ３−カルバミルピコリン酸の生物学的製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2000217592A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2004090147A1 (ja) * | 2003-04-01 | 2004-10-21 | Dia-Nitrix Co., Ltd. | アミド化合物水溶液の精製方法およびアミド化合物の製造方法 |
-
1999
- 1999-02-01 JP JP11023511A patent/JP2000217592A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2004090147A1 (ja) * | 2003-04-01 | 2004-10-21 | Dia-Nitrix Co., Ltd. | アミド化合物水溶液の精製方法およびアミド化合物の製造方法 |
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