JPH11124395A - システイン導入ペプチドおよびその製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 動物、植物、微生物などの天然物由来の蛋白
質を加水分解して得られた加水分解ペプチドまたはその
誘導体に、それらの有する特性を損なうことなく、さら
に有用な特性を付加する。 【解決手段】 動物、植物、微生物などの天然物由来の
蛋白質を加水分解して得られた加水分解ペプチドまたは
その誘導体にＮ，Ｎ’−ジカルボキシ無水シスチンをア
ルカリの存在下で反応させ、その後、酸を用いて脱炭酸
することによってシスチン導入ペプチドを得、そのシス
チン導入ペプチドのジスルフィド結合を還元することに
よってシステインが導入された加水分解ペプチドまたは
その誘導体を得る。これにより、加水分解ペプチドまた
はその誘導体の有する特性に加え、システインの有する
特性を付加するか、またはシステインに基づく特性をさ
らに強めたシステイン導入ペプチドを製造する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、動物、植物、微生
物などの天然物由来の蛋白質を加水分解して得られた加
水分解ペプチドまたはその誘導体にシステインを導入し
たシステイン導入ペプチドおよびその製造方法に関し、
さらに詳しくは、システインを含有しない加水分解ペプ
チドまたはその誘導体にシステインを導入することによ
り、加水分解ペプチドまたはその誘導体にシステインの
有する特性を付与し、また、システインを含有する加水
分解ペプチドまたはその誘導体に対してはシステインを
導入することにより、システインに基づく特性をさらに
高めたシステイン導入ペプチドおよびその製造方法に関
する。

【０００２】

【従来の技術】従来から、動物、植物、微生物などの天
然物由来の蛋白質を加水分解することによって得られる
加水分解ペプチドやその誘導体を化粧品に配合したり、
それらの加水分解ペプチドやその誘導体で繊維を処理す
ることが行われている。

【０００３】これは、毛髪化粧品の場合、それらの加水
分解ペプチドやその誘導体が毛髪に収着して毛髪の損傷
を防止したり、損傷した毛髪を回復させる作用を有し、
しかも毛髪上に被膜を形成して毛髪に艶や潤いを付与す
る作用を有することによるものであり、皮膚化粧品の場
合は、それらの加水分解ペプチドやその誘導体が皮膚に
艶を付与したり、それらが有する保湿性により皮膚にし
っとり感を付与する作用を有し、しかも、それらの加水
分解ペプチドやその誘導体が天然の蛋白質から誘導され
る物質であって、皮膚に対する刺激性が少なく、安全性
が高いという理由によるものである。

【０００４】また、繊維処理においては、それらの加水
分解ペプチドやその誘導体が繊維を保湿性の高い繊維に
したり、木綿繊維にウール様の感触を付与する作用を有
し、かつ皮膚に触れる部分に用いても刺激性が少なく、
安全性が高いという理由によるものである。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】しかしながら、化粧品
基材や繊維処理剤の研究に携わる者にとっては、加水分
解ペプチドやその誘導体の有する上記特性を損なうこと
なく、加水分解ペプチドやその誘導体にさらに有用な特
性を付加し、それらを化粧品や繊維処理剤に配合するこ
とによって、より高品質のものを得たいという要望があ
る。

【０００６】たとえば、ケラチンペプチドは、ジスルフ
ィド結合を有していて毛髪のジスルフィド結合と酸化還
元反応により結合しやすく、毛髪の保護や損傷回復作用
が優れ、シルクペプチドは中性アミノ酸を多く含み緻密
な被膜を形成することから毛髪や皮膚に艶や潤い感を付
与する作用が優れていることが知られている。また、酸
性アミノ酸を多く含む植物由来の大豆蛋白や小麦蛋白の
加水分解ペプチドやリン酸基を含むカゼインペプチドな
どは保湿性に優れているといわれている。

【０００７】しかしながら、上記のような性質のすべて
を併せ持つ加水分解ペプチドはなく、それらの加水分解
ペプチドを２種以上併用することによってユーザーから
の要求に対応しているが、異なった性質を有する加水分
解ペプチドの特性を並立して充分に発揮させることはむ
ずかしく、ユーザーからの要求に対して充分な対応がで
きていないのが現状である。

【０００８】たとえば、ケラチンペプチドとフィブロイ
ンペプチドを洗い流すタイプのシャンプーやリンスに配
合した場合、ケラチンペプチドはそのジスルフィド結合
の作用により毛髪に収着しやすいが、フィブロインペプ
チドはすすぎにより流されやすいため、それらの化粧料
の使用後にフィブロインペプチドの特性を充分に発揮さ
せることはむずかしい。

【０００９】また、加水分解ペプチドを含めたペプチド
類にアジド法、アミノ酸エステル縮合法、ジケトピペラ
ジン法などを利用して特定のアミノ酸を導入することに
より他の特性を付加することも検討されているが、これ
らの方法による場合、ペプチドとの反応前に官能基を保
護するため、アミノ酸の導入後に保護基を外し、その外
した保護基を除去して精製する必要があったり、反応に
大量の有機溶媒を必要とするなど、大量生産には向か
ず、特定のペプチド合成以外は、工業的にはあまり利用
されていない。

【００１０】また、最近では遺伝子組み替え技術を利用
して特定のアミノ酸を組み込んだペプチドの合成も行わ
れているが（たとえば、特表平４−５０４８０１号公
報）、核酸合成やその核酸を宿主細胞に取り込ませる工
程が必要で、かつ生成したペプチドを精製分離するため
に煩雑な工程と時間を要するため、製造コストが高くな
り、一部の医薬品を除いてほとんど利用されていない。

【００１１】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記の事
情に鑑み鋭意研究を重ねた結果、動物、植物、微生物な
どの天然物由来の加水分解ペプチドまたはその誘導体に
システインを導入することによって、システインを含有
しない加水分解ペプチドまたはその誘導体にシステイン
の有する特性を付与し、また、システインを含有する加
水分解ペプチドまたはその誘導体に対してはシステイン
に基づく特性をさらに高めることができることを見出
し、本発明を完成するにいたった。

【００１２】上記システイン導入ペプチドは、保湿性、
艶や潤いの付与作用といった加水分解ペプチドまたはそ
の誘導体が本来有する特性に加えて、システインの導入
によりメルカプト基（−ＳＨ基）を有していて、たとえ
ば、毛髪や皮膚への収着性が高められている。

【００１３】上記システイン導入ペプチドは、たとえ
ば、動物、植物、微生物などの天然物由来の蛋白質を加
水分解して得られた加水分解ペプチドまたはその誘導体
にＮ，Ｎ’−ジカルボキシ無水シスチンをアルカリの存
在下で反応させ、その後、酸を用いて脱炭酸して得られ
たシスチン導入ペプチドを還元することによって得られ
る。この方法による場合は、脱炭酸することに基づき、
Ｎ，Ｎ’−ジカルボキシ無水シスチンと加水分解ペプチ
ドまたはその誘導体との反応液中に保護基が残らないの
で、その後の精製が容易である。

【００１４】また、上記システイン導入ペプチドは、動
物、植物、微生物などの天然物由来の蛋白質を加水分解
して得られた加水分解ペプチドまたはその誘導体にＮ−
カルボキシ無水システインをアルカリの存在下で反応さ
せ、その後、酸を用いて脱炭酸することによっても得る
ことができる。ただし、この方法による場合は、Ｎ−カ
ルボキシ無水システインの合成に先立ち、システインの
有するメルカプト基を保護する必要があり、また、加水
分解ペプチドまたはその誘導体とＳ−保護−Ｎ−カルボ
キシ無水システインとの反応後に保護基をはずす必要が
あるなど、上記シスチン導入ペプチドの還元を経る方法
に比べてわずらわしさがある。

【００１５】

【発明の実施の形態】本発明で使用する加水分解ペプチ
ドまたはその誘導体のタンパク（蛋白）源としては、天
然物由来の蛋白質、たとえば、コラーゲン（その変成物
であるゼラチンも含む）、ケラチン、絹フィブロイン、
セリシン、カゼイン、コンキオリン、エラスチン、鶏な
どの卵の卵黄タンパク、卵白タンパクなどの動物由来の
ものや、大豆、小麦、ビール粕、トウモロコシ、米（米
糠）、イモ類のタンパクなどの植物由来のもの、さらに
は、サッカロミセス属、カンディダ属、エンドミコプシ
ス属の酵母菌や、いわゆるビール酵母、清酒酵母といわ
れる酵母菌より分離した酵母タンパク、キノコ類（担子
菌）やクロレラより分離したタンパクなどの微生物由来
のものなどが挙げられる。

【００１６】本発明で使用する加水分解ペプチドは、上
記蛋白質を酸、アルカリ、酵素またはそれらの併用によ
り加水分解することによって得られるが、その際、使用
する酸、アルカリ、酵素の量や、反応温度、反応時間な
どを適宜選択することにより、得られる加水分解ペプチ
ドのアミノ酸重合度を種々に変え得るが、本発明のシス
テイン導入ペプチドの製造方法によれば、加水分解ペプ
チドが水溶性である限りは、加水分解ペプチドの大きさ
（アミノ酸重合度）に関係なく使用することができる。

【００１７】蛋白質の酸加水分解に際しては、たとえ
ば、塩酸、硫酸、リン酸、硝酸、臭化水素酸などの無機
酸や、酢酸、蟻酸などの有機酸が用いられ、蛋白質のア
ルカリ加水分解に際しては、たとえば、水酸化ナトリウ
ム、水酸化カリウム、水酸化リチウム、水酸化バリウ
ム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸リチウムなど
の無機アルカリが用いられる。そして、蛋白質の酵素加
水分解に際しては、ペプシン、プロクターゼＡ、プロク
ターゼＢなどの酸性蛋白質分解酵素、パパイン、ブロメ
ライン、サーモライシン、トリプシン、プロナーゼ、キ
モトリプシンなどの中性ないしアルカリ性蛋白質分解酵
素が使用される。また、スブチリシン、スタフィロコッ
カスプロテアーゼなどの菌産生の中性ないしアルカリ性
蛋白質分解酵素も使用できる。

【００１８】また、加水分解ペプチドの誘導体として
は、上記加水分解ペプチドのカルボキシル基におけるア
ルコールとのエステル、たとえば、メチルエステル、エ
チルエステル、プロピルエステル、イソプロピルエステ
ル、ラウリルエステル、セチルエステル、２−エチルヘ
キシルエステル、２−ヘキシルデシルエステル、ステア
リルエステルなどの炭素数１〜２０の炭化水素アルコー
ルとのエステルなどが挙げられる。

【００１９】システイン導入ペプチドを得るには、前記
のように、システインをＳ−保護−Ｎ−カルボキシ無水
システインとしてペプチドに付加させてシステイン導入
ペプチドを得る方法と、シスチンをＮ，Ｎ’−ジカルボ
キシ無水シスチンとしてペプチドに付加させ、シスチン
導入ペプチドにし、その後、ジスルフィド結合を還元に
より切断してシステイン導入ペプチドにする方法とがあ
るが、後者のシスチン導入ペプチドの還元を経る方法の
方が、保護基の導入や脱炭酸後の保護基の除去などのわ
ずらわしさがなく、有用性が高いので、主として、後者
のシスチン導入ペプチドの還元を経る方法について説明
する。

【００２０】後者の方法のごとく、シスチン導入ペプチ
ドを得るには、まず、シスチンをＮ，Ｎ’−ジカルボキ
シ無水シスチンに変換するが、このＮ，Ｎ’−ジカルボ
キシ無水シスチンを得る方法としては、公知の方法を採
用することができる。たとえば、まず、シスチンのアル
カリ水溶液にクロル炭酸ベンジル、クロル炭酸メチル、
クロル炭酸アリルなどのクロル炭酸エステルをアルカリ
条件下で滴下し、下記の反応式〔Ｉ〕に示すようにシス
チンのアミノ基を保護する。

【００２１】

【化１】

【００２２】（式中、Ｒはベンジル基、アルキル基また
はアリル基）

【００２３】ついで、反応液を塩酸、硫酸などの鉱酸で
酸性にした後、酢酸エチルなどの有機溶媒で反応生成物
を抽出し、食塩水および水で有機層を洗浄した後、有機
溶媒を減圧濃縮して除去することにより、アミノ基が保
護されたシスチンが得られる。

【００２４】つぎに、上記で得られたアミノ基が保護さ
れたシスチンを酢酸エチルなどの溶解可能な有機溶媒に
溶解し、下記の反応式〔II〕に示すように、窒素ガス雰
囲気下で、塩化チオニル（塩化チオニルに代えて、三塩
化リン、五塩化リンなどでもよい）などを作用させてカ
ルボキシル基をカルボニルクロライドにし、ついで減圧
下８０℃以上で加熱縮合させると、Ｎ，Ｎ’−ジカルボ
キシ無水シスチンが得られる。

【００２５】

【化２】

【００２６】また、シスチンにホスゲン、ホスゲンダイ
マー、ホスゲントリマーなどを直接反応させて、Ｎ，
Ｎ’−ジカルボキシ無水シスチンを合成することもでき
る。

【００２７】加水分解ペプチドまたはその誘導体と上記
のようにして得られたＮ，Ｎ’−ジカルボキシ無水シス
チンとの反応は、下記の反応式〔III 〕に示すように進
行する。

【００２８】

【化３】

【００２９】（式中、Ｒ’は種々のアミノ酸の側鎖を示
し、ｎはアミノ酸の重合度を示す）

【００３０】まず、加水分解ペプチドまたはその誘導体
の水溶液を水酸化ナトリウム水溶液などのアルカリ剤で
ｐＨを１０．０〜１０．５程度に調整し、その中に酢酸
エチルなどの溶媒に溶解したＮ，Ｎ’−ジカルボキシ無
水シスチンを氷冷下で滴下して反応させるが、同時に水
酸化ナトリウム水溶液などのアルカリ剤も滴下してｐＨ
を１０．０〜１０．５に保つ。

【００３１】Ｎ，Ｎ’−ジカルボキシ無水シスチンの滴
下終了後、氷冷下で２〜５時間攪拌を続けて反応を完結
させる。つぎに反応液にｎ−ヘキサンなどの水と相溶し
ない溶媒を添加して洗浄し、未反応のＮ，Ｎ’−ジカル
ボキシ無水シスチンを有機層に移して除去した後、水層
を硫酸、塩酸などでｐＨ３〜４に調整して脱炭酸するこ
とによって、シスチン導入ペプチドが得られる。このシ
スチン導入ペプチドでは、式〔III 〕に示すように加水
分解ペプチドまたはその誘導体のアミノ基とシスチンの
カルボキシル基とがアミド結合することにより、加水分
解ペプチドまたはその誘導体にシスチンが導入されてい
る。

【００３２】上記のようにして得られたシスチン導入ペ
プチドからシステイン導入ペプチドを得るには、反応式
〔IV〕に示すように、シスチン導入ペプチドを還元して
ジスルフィド結合を還元切断してメルカプト基にするこ
とによる。

【００３３】

【化４】

【００３４】還元は一般的には還元剤を用いて行われる
が、電解装置を用いた電解還元も利用することができ
る。

【００３５】還元剤としては、たとえば、２−メルカプ
トエタノール、チオグリコール酸、チオグリセロール、
水素化ホウ素ナトリウム、システインなどが挙げられ
る。また、亜硫酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウムな
どを用いて還元することもできるが、その際には、シス
チンがシステインとＳ−スルホシステインになるので、
得られるシステイン導入ペプチドは前記の還元剤の使用
や電解還元処理による場合の半分になる。

【００３６】シスチン導入ペプチドの還元は、シスチン
導入ペプチドを水酸化ナトリウムや水酸化カリウムなど
のアルカリ剤の添加によりｐＨ７〜１１のアルカリ域に
調整した還元剤の水溶液に入れ（あるいはシスチン導入
ペプチド水溶液をｐＨ７〜１１に調整し、その中に還元
剤を入れてもよい）、好ましくは窒素などの不活性ガス
雰囲気下で、０〜６０℃の温度で１〜３６時間攪拌する
ことによって、シスチン導入ペプチド中のジスルフィド
結合を還元切断してメルカプト基を生成させることによ
りシステイン導入ペプチドが得られる。

【００３７】電解還元により還元を行う場合は、たとえ
ば、湯浅アイオニクス（株）製のＭＡＲＫ−ＩＬ２室流
動型電解装置などの電解還元装置が用いられる。

【００３８】電解還元においては、還元は陰極で生じ、
酸化は陽極で生じる。したがって、本発明における還元
操作では、陰極槽にシスチン導入ペプチドを導入し、陽
極槽には電解質（たとえば濃度３重量％程度の硫酸）を
導入し、両者の間をイオン交換膜などで隔離して電解還
元が行われる。

【００３９】このようにして得られたシステイン導入ペ
プチドでは、式〔IV〕に示すように加水分解ペプチドま
たはその誘導体のアミノ基とシステインのカルボキシル
基とがアミド結合することにより、加水分解ペプチドま
たはその誘導体にシステインが導入されている。

【００４０】システイン導入ペプチドは、加水分解ペプ
チドまたはその誘導体にＮ−カルボキシ無水システイン
を反応させることによっても得ることができるが、その
際には、Ｎ−カルボキシ無水システインを調製する前
に、システインのメルカプト基（−ＳＨ基）をベンジル
エステルなどで保護しておく必要があり、ペプチドとの
反応後にこの保護基を外し、その後に反応液より外した
保護基を溶媒抽出などによって除去する必要があり、精
製が煩雑になるため、前記のシスチン導入ペプチドの還
元を経てシステイン導入ペプチドを得る方法の方が有用
性が高く、優れている。

【００４１】得られたシステイン導入ペプチド溶液は使
用目的に合ったｐＨに調整し、そのままあるいは粉末化
して化粧品や繊維処理剤などへの配合剤などとして使用
に供され、また、必要に応じて、イオン交換樹脂、透析
膜、電気透析、ゲル濾過、限外濾過などによって精製し
た後、液体のままあるいは粉末化して使用に供される。

【００４２】

【発明の効果】上記のようにして得られる本発明のシス
テイン導入ペプチドは、加水分解ペプチドまたはその誘
導体が本来有している毛髪の保護・損傷回復作用、保湿
作用、艶、潤いなどの付与作用を保有している上に、シ
ステインの導入により、システインを含まない加水分解
ペプチドではメルカプト基を有するようになり、また、
システインを含む加水分解ペプチドではシステイン量が
増加するので、毛髪や皮膚への収着性が高められ、たと
えば、毛髪化粧品に配合した時には、毛髪への収着性が
高く、加水分解ペプチドまたはその誘導体が本来有して
いる毛髪の保護・損傷回復作用、保湿作用、艶、潤いな
どの付与作用が一層強められ、それらの効果がより顕著
に発揮される。また、繊維処理剤に配合された場合は、
繊維に動物繊維様の感触を与え、形状記憶性も増強され
る。

【００４３】

【実施例】つぎに実施例を挙げて本発明をより具体的に
説明する。ただし、本発明はそれらの実施例のみに限定
されるものではない。なお、以下の実施例などにおい
て、溶液や分散液などの濃度を示す％は特にその単位を
付記していないかぎり重量％である。また、実施例に先
立ち、Ｎ，Ｎ’−ジカルボキシ無水シスチンの製造例を
参考例として示す。

【００４４】参考例１（Ｎ，Ｎ’−ジカルボキシ無水シ
スチンの製造例１） シスチン１８ｇを１５０ｍｌの１Ｎ水酸化ナトリウム水
溶液に溶解し、氷冷下で攪拌しながらクロル炭酸ベンジ
ル３８．３ｇを３０分かけて滴下した。その間、水酸化
ナトリウム水溶液を添加して反応液のｐＨが９〜１０に
なるように保った。クロル炭酸ベンジルの滴下終了後、
室温で２時間攪拌を続け、反応を完結させた。

【００４５】反応終了後、希塩酸で反応液のｐＨを１に
し、酢酸エチル３００ｍｌを加えて反応生成物を抽出し
た。有機層は２％食塩水１５０ｍｌで２回洗浄し、さら
に７５ｍｌの水で洗浄した後、無水硫酸ナトリウム３０
ｇを加えて有機層を乾燥した。濾過により無水硫酸ナト
リウムを除去した後、濾液を減圧濃縮乾固し、残留物を
クロロホルムにより再結晶して３０ｇのＮ，Ｎ’−ジベ
ンジルオキシカルボニルシスチンを得た。

【００４６】つぎに、このＮ，Ｎ’−ジベンジルオキシ
カルボニルシスチンを２６７ｍｌのベンゼン−ジオキサ
ン混合液（体積比＝２５０：１７）に溶解し、窒素ガス
雰囲気下で攪拌し、その中に１７．２ｍｌの塩化チオニ
ルを１時間かけて滴下した。滴下終了後、反応液の温度
を５５℃まで上昇させ、３時間攪拌を続けて反応を完結
させた。

【００４７】反応終了後、減圧下で反応液の温度を８０
〜８５℃に保ち、２時間かけて加熱縮合させた後、反応
液を２０ｍｌのｎ−ヘキサンで５回洗浄し、水層を減圧
濃縮して１９．３ｇのＮ，Ｎ’−ジカルボキシ無水シス
チンを得た。

【００４８】参考例２（Ｎ，Ｎ’−ジカルボキシ無水シ
スチンの製造例２） シスチン１２ｇを１００ｍｌの１Ｎ水酸化ナトリウム水
溶液に溶解し、氷冷下で攪拌しながらクロル炭酸メチル
１４．１ｇを３０分かけて滴下した。その間、水酸化ナ
トリウム水溶液を添加して反応液のｐＨが９〜１０にな
るように保った。クロル炭酸メチルの滴下終了後、室温
で２時間攪拌を続け、反応を完結させた。

【００４９】反応終了後、希塩酸で反応液のｐＨを１に
し、酢酸エチル２００ｍｌを加えて反応生成物を抽出し
た。有機層は２％食塩水１００ｍｌで２回洗浄し、さら
に１００ｍｌの水で洗浄した後、無水硫酸ナトリウム２
０ｇを加えて有機層を乾燥した。濾過により無水硫酸ナ
トリウムを除去した後、濾液を減圧濃縮乾固し、残留物
をｎ−ヘキサンで洗浄し、減圧乾燥して１０ｇのＮ，
Ｎ’−ジメトキシカルボニルシスチンを得た。

【００５０】つぎに、このＮ，Ｎ’−ジメトキシカルボ
ニルシスチンを３０ｍｌの酢酸エチルに溶解し、窒素ガ
ス雰囲気下で攪拌し、その中に８．０７ｍｌの塩化チオ
ニルを１時間かけて滴下した。滴下終了後、反応液の温
度を５５℃まで上昇させ、４時間攪拌を続けて反応を完
結させた。

【００５１】反応終了後、減圧下で反応液の温度を８０
〜８５℃に保ち、２時間かけて加熱縮合させた後、反応
液を２０ｍｌのｎ−ヘキサンで５回洗浄し、水層を減圧
濃縮して７．９ｇのＮ，Ｎ’−ジカルボキシ無水シスチ
ンを得た。

【００５２】実施例１ 平均分子量４５０の加水分解コラーゲンの３０％水溶液
１００ｇ（アミノ態窒素の測定によって得られた化学量
論的モル数として６６．７ミリモル）を水酸化ナトリウ
ム水溶液でｐＨを１０．２に調整し、この溶液に、氷冷
下、上記参考例１で製造したＮ，Ｎ’−ジカルボキシ無
水シスチン５．８ｇ（２０ミリモル、加水分解コラーゲ
ンに対して０．６当量）を８０ｍｌの酢酸エチルに溶解
した溶液を添加し攪拌して混合し、３時間攪拌を続けて
反応させた。その間、水酸化ナトリウム水溶液を添加し
て反応液のｐＨが１０．０〜１０．５になるように保っ
た。

【００５３】反応終了後、反応物を３００ｍｌのｎ−ヘ
キサンで３回洗浄して未反応物を除去した後、水層に濃
硫酸を添加してｐＨを４に調整して減圧下で脱炭酸し、
シスチン導入加水分解コラーゲンの水溶液を得た。

【００５４】ついで、この溶液を水酸化ナトリウム水溶
液でｐＨを９に調整し、３１．２ｇの２−メルカプトエ
タノール（０．４モル）を加えて５０℃で２０時間攪拌
を続けて還元した。還元終了後、この溶液を希塩酸を用
いてｐＨ６．５にし、濃度を調整して、システイン導入
加水分解コラーゲンの３０％溶液を１４９ｇ得た。

【００５５】上記のようにして得られたシステイン導入
加水分解コラーゲンの一部をモノヨード酢酸を用いてシ
ステイン残基のＳＨ基をアルキル化した後、６Ｎ塩酸で
２０時間完全加水分解し、アミノ酸オートアナラーザー
でアミノ酸分析をしたところ、システインはＳ−カルボ
キシメチルシステインとして９．４モル％、シスチンは
ハーフシスチンとして４．４モル％が検出された。ま
た、上記のようにして得られたシステイン導入加水分解
コラーゲンの一部を、塩酸による加水分解を行わずにア
ミノ酸分析をしたところ、シスチンやシステインは検出
されず、上記で検出されたシステインやシスチンはすべ
て加水分解コラーゲンに結合していることが明らかにさ
れた。

【００５６】原料の加水分解コラーゲンにはシスチンや
システインが含まれていないため、このシスチンやシス
テインはすべて上記のシスチン導入法により加水分解コ
ラーゲンに導入されたものであることが明らかであり、
導入されたシスチンのうち約６８％がシステインに還元
され、システイン導入加水分解コラーゲンになってい
た。

【００５７】実施例２ 平均分子量４５０の加水分解コラーゲンに代えて平均分
子量７００の加水分解小麦タンパクの２５％水溶液１０
０ｇ（アミノ態窒素の測定によって得られた化学量論的
モル数として３５．７ミリモル）と前記参考例１で製造
したＮ，Ｎ’−ジカルボキシ無水シスチン４．２ｇ（１
４．３ミリモル、加水分解小麦タンパクに対して０．８
当量）を８０ｍｌの酢酸エチルに溶解した溶液を用いた
ほかは、実施例１と同様にして、シスチン導入加水分解
小麦タンパクの水溶液を得た。

【００５８】ついで、この溶液を水酸化ナトリウム水溶
液でｐＨを９に調整し、２６ｇのチオグリコール酸
（０．２８モル）を加えて５０℃で１２時間攪拌を続け
て還元した。還元終了後、この溶液を希塩酸を用いてｐ
Ｈ６．５にし、濃度を調整して、システイン導入加水分
解小麦タンパクの２５％水溶液を１２０ｇ得た。

【００５９】上記のようにして得られたシステイン導入
加水分解小麦タンパクの一部をモノヨード酢酸を用いて
システイン残基のＳＨ基をアルキル化した後、６Ｎ塩酸
で２０時間完全加水分解し、アミノ酸オートアナラーザ
ーでアミノ酸分析をしたところ、システインはＳ−カル
ボキシメチルシステインとして８．５モル％、シスチン
はハーフシスチンとして２．６モル％が検出された。ま
た、上記のようにして得られたシステイン導入加水分解
小麦タンパクの一部を、塩酸による加水分解を行わずに
アミノ酸分析をしたところ、シスチンやシステインは検
出されず、上記で検出されたシステインやシスチンはす
べて加水分解小麦タンパクに結合していることが明らか
にされた。

【００６０】原料の加水分解小麦タンパクにはシステイ
ンは含まれず、シスチンはハーフシスチンとして０．４
モル％含まれていたので、検出された８．５モル％のシ
ステインは上記のシステイン導入法で加水分解小麦タン
パクに導入されたものであり、２．６モル％のハーフシ
スチンのうち２．２モル％は上記のシスチン導入法で加
水分解小麦タンパクに導入されたものであることが明ら
かであり、導入されたシスチンおよび原料中に含まれて
いたシスチンのうち約７６％がシステインに還元され、
システイン導入加水分解小麦タンパクになっていた。

【００６１】実施例３ 平均分子量４５０の加水分解コラーゲンに代えて平均分
子量３５０の加水分解シルクの３０％水溶液１００ｇ
（アミノ態窒素の測定によって得られた化学量論的モル
数として８５．７ミリモル）と前記参考例１で製造した
Ｎ，Ｎ’−ジカルボキシ無水シスチン６．２ｇ（２１．
４ミリモル、加水分解シルクに対して０．５当量）を１
００ｍｌの酢酸エチルに溶解した溶液を用いたほかは、
実施例１と同様にして、シスチン導入加水分解シルクの
水溶液を得た。

【００６２】ついで、この溶液に２−メルカプトエタノ
ール３３ｇ（０．４３モル）を加え、水酸化ナトリウム
水溶液でｐＨを１０に調整して５０℃で１２時間攪拌を
続けて還元した。還元終了後、この溶液を希塩酸を用い
てｐＨ６．５にし、濃度を調整して、システイン導入加
水分解シルクの３０％水溶液を１１９ｇ得た。

【００６３】上記のようにして得られたシステイン導入
加水分解シルクの一部をモノヨード酢酸を用いてシステ
イン残基のＳＨ基をアルキル化した後、６Ｎ塩酸で２０
時間完全加水分解し、アミノ酸オートアナラーザーでア
ミノ酸分析をしたところ、システインはＳ−カルボキシ
メチルシステインとして６．８モル％、シスチンはハー
フシスチンとして２．９モル％が検出された。また、上
記のようにして得られたシステイン導入加水分解シルク
の一部を、塩酸による加水分解を行わずにアミノ酸分析
をしたところ、シスチンやシステインは検出されず、上
記で検出されたシステインやシスチンはすべて加水分解
シルクに結合していることが明らかにされた。

【００６４】原料の加水分解シルクにはシステインやシ
スチンは含まれていないため、このシステインはすべて
上記のシステイン導入法により加水分解シルクに導入さ
れたものであることが明らかであり、導入されたシスチ
ンのうち約７０％がシステインに還元され、システイン
導入加水分解シルクになっていた。

【００６５】実施例４ 平均分子量４５０の加水分解コラーゲンに代えて平均分
子量１０００の加水分解ケラチンの２５％水溶液１００
ｇ（アミノ態窒素の測定によって得られた化学量論的モ
ル数として２５ミリモル）と前記参考例１で製造した
Ｎ，Ｎ’−ジカルボキシ無水シスチン２．９ｇ（１０ミ
リモル、加水分解ケラチンに対し０．８当量）を８０ｍ
ｌの酢酸エチルに溶解した溶液を用いたほかは、実施例
１と同様にして、シスチン導入加水分解ケラチンの水溶
液を得た。

【００６６】ついで、この溶液にチオグリコール酸４６
ｇ（０．５モル）を加え、水酸化ナトリウム水溶液でｐ
Ｈを１０に調整して５０℃で１２時間攪拌を続けて還元
した。還元終了後、この溶液を希塩酸を用いてｐＨ６．
５にし、電気透析で精製した後、濃縮により濃度を調整
して、システイン導入加水分解ケラチンの２５％水溶液
を１１１ｇ得た。

【００６７】上記のようにして得られたシステイン導入
加水分解ケラチンの一部をモノヨード酢酸を用いてシス
テイン残基のＳＨ基をアルキル化した後、６Ｎ塩酸で２
０時間完全加水分解し、アミノ酸オートアナラーザーで
アミノ酸分析をしたところ、システインはＳ−カルボキ
シメチルシステインとして１３．１モル％、シスチンは
ハーフシスチンとして４．４モル％が検出された。ま
た、上記のようにして得られたシステイン導入加水分解
ケラチンの一部を、塩酸による加水分解を行わずにアミ
ノ酸分析をしたところ、シスチンやシステインは検出さ
れず、上記で検出されたシステインやシスチンはすべて
加水分解ケラチンに結合していることが明らかにされ
た。

【００６８】原料の加水分解ケラチンには９．１モル％
のハーフシスチンが含まれていたので、検出されたシス
テインおよびシスチンの合計量１７．５モル％のうち
８．４モル％は上記のシステイン導入法により加水分解
ケラチンに導入されたものであり、導入されたシスチン
および原料中に含まれていたシスチンのうち約７５％が
システインに還元され、システイン導入加水分解ケラチ
ンになっていた。

【００６９】実施例５ 平均分子量７００の加水分解大豆タンパクの２５％水溶
液１００ｇ（アミノ態窒素の測定によって得られた化学
量論的モル数として３５．７ミリモル）を水酸化ナトリ
ウム水溶液でｐＨを１０．２に調整し、この溶液に氷冷
下、前記参考例２で製造したＮ，Ｎ’−ジカルボキシ無
水シスチン２．６ｇ（８．９ミリモル、加水分解大豆タ
ンパクに対して０．５当量）を８０ｍｌの酢酸エチルに
溶解した溶液を添加し攪拌して混合し、３時間攪拌を続
けて反応させた。その間、水酸化ナトリウム水溶液を添
加して水溶液のｐＨが１０．０〜１０．５になるように
保った。

【００７０】反応終了後、反応物を２００ｍｌのｎ−ヘ
キサンで３回洗浄して未反応物を除去した後、水槽に濃
硫酸を添加してｐＨを４に調整して減圧下で脱炭酸し、
濃度を調整して、シスチン導入加水分解大豆タンパクの
水溶液を得た。

【００７１】ついで、この溶液に水酸化ナトリウム水溶
液を加えてｐＨを８に調整し、１４ｇの２−メルカプト
エタノール（０．１８モル）を加えて５０℃で１２時間
攪拌を続けて還元した。還元終了後、この溶液を希塩酸
を用いてｐＨ６．５にし、濃度を調整して、システイン
導入加水分解大豆タンパクの３０％水溶液を９８ｇ得
た。

【００７２】上記のようにして得られたシステイン導入
加水分解大豆タンパクの一部をモノヨード酢酸を加えて
加熱攪拌してシステイン残基のＳＨ基をアルキル化し、
ついで６Ｎ塩酸で２０時間完全加水分解した後、アミノ
酸オートアナラーザーでアミノ酸分析をしたところ、シ
ステインはＳ−カルボキシメチルシステインとして７．
４モル％、シスチンはハーフシスチンとして０．７モル
％が検出された。また、上記のようにして得られたシス
テイン導入加水分解大豆タンパクの一部を、塩酸による
加水分解を行わずにアミノ酸分析をしたところ、シスチ
ンやシステインは検出されず、上記で検出されたシステ
インやシスチンはすべて加水分解大豆タンパクに結合し
ていることが明らかにされた。

【００７３】原料の加水分解大豆タンパクには０．８モ
ル％のハーフシスチンが含まれていたので、検出された
システインおよびシスチンの合計量８．１モル％のうち
７．３モル％は上記のシスチン導入法により加水分解大
豆タンパクに導入されたものであり、導入されたシスチ
ンおよび原料中に含まれていたシスチンのうち約７８％
がシステインに還元され、システイン導入加水分解大豆
タンパクになっていた。

【００７４】実施例６ 加水分解大豆タンパクに代えて平均分子量６５０の加水
分解酵母タンパクの２５％水溶液５０ｇ（アミノ態窒素
の測定によって得られた化学量論的モル数として１９ミ
リモル）と、前記参考例２で製造したＮ，Ｎ’−ジカル
ボキシ無水シスチン１．９ｇ（６．７ミリモル、加水分
解酵母タンパクに対して０．７当量）を５０ｍｌの酢酸
エチルに溶解した溶液を用いたほかは、実施例５と同様
にして、シスチン導入加水分解酵母タンパクを得た。

【００７５】ついで、この溶液に２−メルカプトエタノ
ール１５．６ｇ（０．２モル）を加え、水酸化ナトリウ
ム水溶液でｐＨを１０に調整して５０℃で８時間攪拌を
続けて還元した。還元終了後、この溶液を希塩酸を用い
てｐＨ６．５にし、濃度を調整して、システイン導入加
水分解酵母タンパクの２５％水溶液を３２．８ｇ得た。

【００７６】上記のようにして得られたシステイン導入
加水分解酵母タンパクの一部をモノヨード酢酸を用いて
システイン残基のＳＨ基をアルキル化した後、６Ｎ塩酸
で２０時間完全加水分解し、アミノ酸オートアナラーザ
ーでアミノ酸分析をしたところ、システインはＳ−カル
ボキシメチルシステインとして８．８モル％、シスチン
はハーフシスチンとして１．９モル％が検出された。ま
た、上記のようにして得られたシステイン導入加水分解
酵母タンパクの一部を、塩酸による加水分解を行わずに
アミノ酸分析をしたところ、シスチンやシステインは検
出されず、上記で検出されたシステインやシスチンはす
べて加水分解酵母タンパクに結合していることが明らか
にされた。

【００７７】原料の加水分解酵母タンパクには０．２モ
ル％のハーフシスチンが含まれていたので、検出された
シスチンおよびシステインの合計量１０．７モル％のう
ち１０．５モル％は上記のシスチン導入法により加水分
解酵母タンパクに導入されたものであることが明らかで
あり、導入されたシスチンおよび原料中に含まれていた
シスチンのうち約８３％がシステインに還元され、シス
テイン導入加水分解酵母タンパクになっていた。

【００７８】〔システイン導入ペプチドの毛髪への収着
性試験〕上記のようにして製造されたシステイン導入ペ
プチドの毛髪への収着性を、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓ
ＣＣＪ Ｖｏｌ．２１，Ｎｏ．２記載の「毛髪の損傷度
評価法（Ｉ）」中のカラム循環法に従って試験した。

【００７９】すなわち、直径７．５ｍｍ、長さ７５ｍｍ
の液体クロマト用カラムに、平均長さ２ｍｍに切断した
毛髪１．８ｇを充填し、その中に試料濃度２％に調整し
た試験液を流速２ｍｌ／ｍｉｎで一定時間循環させる。

【００８０】循環後の試験液中の試料濃度は試験液をゲ
ル濾過分析することによって求め、循環前後の試験液中
の試料濃度の変化より毛髪１ｇ当たりの試料の収着量を
算出する。なお、毛髪への浸透による試料濃度の低下量
は、対照に平均分子量１０００のポリオキシエチレング
リコールの２％溶液を用いて上記と同じ条件下で試験液
を循環させ、ポリオキシエチレングリコール濃度の低下
量を毛髪への浸透によるものとして補正した。

【００８１】試験には実施例１〜６で製造したシステイ
ン導入加水分解コラーゲン、システイン導入加水分解小
麦タンパク、システイン導入加水分解シルク、システイ
ン導入加水分解ケラチン、システイン導入加水分解大豆
タンパクおよびシステイン導入加水分解酵母タンパクを
用い、それぞれの２％水溶液を調製し、それを試験液と
して、上記の方法により、毛髪への収着性を調べた。な
お、比較対照として、システイン導入ペプチドのそれぞ
れの原料である、平均分子量４５０の加水分解コラーゲ
ン、平均分子量７００の加水分解小麦タンパク、平均分
子量３５０の加水分解シルク、平均分子量１０００の加
水分解ケラチン、平均分子量７００の加水分解大豆タン
パクおよび平均分子量６５０の加水分解酵母タンパクの
毛髪への収着性も調べた。それらの結果〔毛髪への収着
量（ｍｇ／ｇ）〕を表１および表２に示す。

【００８２】

【表１】

【００８３】

【表２】

【００８４】表１および表２に示す結果から明らかなよ
うに、実施例１〜６のシステイン導入ペプチドは、いず
れも原料の加水分解ペプチドに比べて毛髪への収着性が
向上していた。特に実施例１のシステイン導入加水分解
コラーゲンや実施例３のシステイン導入加水分解シルク
では、それぞれ原料の加水分解コラーゲンや加水分解シ
ルクに比べて、毛髪への収着量が約２．５倍に向上して
いた。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 ＦＩ Ｃ０７Ｋ 14/78 Ｃ０７Ｋ 14/78 // Ａ６１Ｋ 7/00 Ａ６１Ｋ 7/00 Ｃ 7/06 7/06

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 動物、植物、微生物などの天然物由来の
   蛋白質を加水分解して得られた加水分解ペプチドまたは
   その誘導体にシステインを、上記加水分解ペプチドまた
   はその誘導体のアミノ基とシステインのカルボキシル基
   とのアミド結合により、導入したことを特徴とするシス
   テイン導入ペプチド。
2. 【請求項２】 動物、植物、微生物などの天然物由来の
   蛋白質を加水分解して得られた加水分解ペプチドまたは
   その誘導体にＮ，Ｎ’−ジカルボキシ無水シスチンをア
   ルカリの存在下で反応させ、その後、酸を用いて脱炭酸
   して得られたシスチン導入ペプチドを還元してシステイ
   ン導入ペプチドを得ることを特徴とするシステイン導入
   ペプチドの製造方法。