JPH107569A - ベルベリン誘導体含有ｈｓｐ４７合成抑制剤 - Google Patents
ベルベリン誘導体含有ｈｓｐ４７合成抑制剤Info
- Publication number
- JPH107569A JPH107569A JP8177534A JP17753496A JPH107569A JP H107569 A JPH107569 A JP H107569A JP 8177534 A JP8177534 A JP 8177534A JP 17753496 A JP17753496 A JP 17753496A JP H107569 A JPH107569 A JP H107569A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- berberine
- hsp47
- collagen
- extract
- derivative
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
- A61K31/4353—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
- A61K31/4375—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems the heterocyclic ring system containing a six-membered ring having nitrogen as a ring heteroatom, e.g. quinolizines, naphthyridines, berberine, vincamine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/02—Drugs for disorders of the urinary system of urine or of the urinary tract, e.g. urine acidifiers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 コラーゲン合成を抑制することによって、細
胞外マトリックス産生の亢進の病態を示す病気を治療す
ることができる、分子量４７キロダルトンの熱ショック
タンパク質の合成抑制剤を提供する。 【解決手段】 下記一般式（Ｉ）で表されるベルベリン
誘導体、又はその薬剤学的に許容される塩を有効成分と
して含有する。 【化１】 （式中、Ｒ1 及びＲ2 は炭素数１〜３のアルキル基）
胞外マトリックス産生の亢進の病態を示す病気を治療す
ることができる、分子量４７キロダルトンの熱ショック
タンパク質の合成抑制剤を提供する。 【解決手段】 下記一般式（Ｉ）で表されるベルベリン
誘導体、又はその薬剤学的に許容される塩を有効成分と
して含有する。 【化１】 （式中、Ｒ1 及びＲ2 は炭素数１〜３のアルキル基）
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、ベルベリン誘導体
又はその薬剤学的に許容される塩を有効成分として含有
する、分子量が４７キロダルトン（ｋＤ）の熱ショック
タンパク質（以下、ＨＳＰ４７と称する）の合成抑制剤
に関する。本発明のＨＳＰ４７合成抑制剤は、特に、臓
器内のコラーゲンの合成を抑制することにより肝硬変、
間質性肺疾患、慢性腎不全（又は慢性腎不全に陥いる疾
患）、心肥大、術後の瘢痕や熱傷性瘢痕、交通事故等の
後に生じるケロイドや肥厚性瘢痕、強皮症、動脈硬化、
又は関節リウマチなどの細胞外マトリックス（細胞外基
質）産生亢進の病態を示す病気の患者の生理学的状態を
有効に改善させ、肝硬変、間質性肺疾患、慢性腎不全
（又は慢性腎不全に陥いる疾患）、心肥大、術後の瘢痕
や熱傷性瘢痕、交通事故等の後に生じるケロイドや肥厚
性瘢痕、強皮症、動脈硬化、又は関節リウマチなどの細
胞外マトリックス産生亢進の病態を示す病気を効果的に
治療することができる。
又はその薬剤学的に許容される塩を有効成分として含有
する、分子量が４７キロダルトン（ｋＤ）の熱ショック
タンパク質（以下、ＨＳＰ４７と称する）の合成抑制剤
に関する。本発明のＨＳＰ４７合成抑制剤は、特に、臓
器内のコラーゲンの合成を抑制することにより肝硬変、
間質性肺疾患、慢性腎不全（又は慢性腎不全に陥いる疾
患）、心肥大、術後の瘢痕や熱傷性瘢痕、交通事故等の
後に生じるケロイドや肥厚性瘢痕、強皮症、動脈硬化、
又は関節リウマチなどの細胞外マトリックス（細胞外基
質）産生亢進の病態を示す病気の患者の生理学的状態を
有効に改善させ、肝硬変、間質性肺疾患、慢性腎不全
（又は慢性腎不全に陥いる疾患）、心肥大、術後の瘢痕
や熱傷性瘢痕、交通事故等の後に生じるケロイドや肥厚
性瘢痕、強皮症、動脈硬化、又は関節リウマチなどの細
胞外マトリックス産生亢進の病態を示す病気を効果的に
治療することができる。
【０００２】
【従来の技術】近年、コラーゲンなどの細胞外マトリッ
クスの産生の亢進の病態を示す病気が大きな問題となっ
ている。ここでいう細胞外マトリックス産生の亢進の病
態を示す病気とは、例えば肝硬変、間質性肺疾患、慢性
腎不全（又は慢性腎不全に陥いる疾患）、心肥大、術後
の瘢痕や熱傷性瘢痕、交通事故等の後に生じるケロイド
や肥厚性瘢痕、強皮症、動脈硬化、又は関節リウマチな
どを含む。
クスの産生の亢進の病態を示す病気が大きな問題となっ
ている。ここでいう細胞外マトリックス産生の亢進の病
態を示す病気とは、例えば肝硬変、間質性肺疾患、慢性
腎不全（又は慢性腎不全に陥いる疾患）、心肥大、術後
の瘢痕や熱傷性瘢痕、交通事故等の後に生じるケロイド
や肥厚性瘢痕、強皮症、動脈硬化、又は関節リウマチな
どを含む。
【０００３】例えば、死亡者がわが国だけでも年間約２
万人にものぼるといわれている肝硬変は、肝臓が結合組
織の増殖のため固くなる病気の総称で、種々の慢性肝疾
患の終末像であるといわれ、肝全体にわたるびまん性の
肝線維症である。すなわち、炎症などの肝傷害が長期に
及ぶ慢性肝炎においては、線維芽細胞や伊東細胞などの
細胞外マトリックス（特にＩ型コラーゲン）産生の著し
い亢進を伴い肝臓は線維化する。肝の線維化が慢性的に
進行すると、ますます正常な肝再生は妨害され、肝細胞
に置き換わり、線維芽細胞とＩ型コラーゲンを主体とす
る細胞外マトリックスが肝組織のかなりの部分を占め、
多くの凝小葉からなる肝硬変に至る。肝硬変の進行に伴
い、線維隔壁が肝全体に進展し、その結果生じる血流の
異常は、肝実質細胞の変性を更に押し進める一因にもな
り、肝硬変における悪循環が続くことになり、更にはア
ルコール、ウイルス、自己免疫等種々の原因によって、
肝臓中に多量の膠質線維が生成され、肝細胞の壊死と機
能消失とが生じ、肝硬変患者は遂には死に至る。Ｉ型コ
ラーゲンは正常肝では全タンパク質量の約２％を占める
が、肝硬変となると１０〜３０％を占めるようになる。
万人にものぼるといわれている肝硬変は、肝臓が結合組
織の増殖のため固くなる病気の総称で、種々の慢性肝疾
患の終末像であるといわれ、肝全体にわたるびまん性の
肝線維症である。すなわち、炎症などの肝傷害が長期に
及ぶ慢性肝炎においては、線維芽細胞や伊東細胞などの
細胞外マトリックス（特にＩ型コラーゲン）産生の著し
い亢進を伴い肝臓は線維化する。肝の線維化が慢性的に
進行すると、ますます正常な肝再生は妨害され、肝細胞
に置き換わり、線維芽細胞とＩ型コラーゲンを主体とす
る細胞外マトリックスが肝組織のかなりの部分を占め、
多くの凝小葉からなる肝硬変に至る。肝硬変の進行に伴
い、線維隔壁が肝全体に進展し、その結果生じる血流の
異常は、肝実質細胞の変性を更に押し進める一因にもな
り、肝硬変における悪循環が続くことになり、更にはア
ルコール、ウイルス、自己免疫等種々の原因によって、
肝臓中に多量の膠質線維が生成され、肝細胞の壊死と機
能消失とが生じ、肝硬変患者は遂には死に至る。Ｉ型コ
ラーゲンは正常肝では全タンパク質量の約２％を占める
が、肝硬変となると１０〜３０％を占めるようになる。
【０００４】また、間質性肺疾患は、肺胞及び肺胞管の
みならず、しばしば呼吸細気管支や終末気管支も巻き込
む下部気道の慢性炎症（肺胞炎 alveolitis)とその結果
である間質の線維化と肺胞内線維化を特徴とする疾患群
である。ここでいう間質性肺疾患とは、例えば、間質性
肺炎、肺線維症などのびまん性間質性肺疾患、特発性肺
線維症、透過性肺水腫、膠原病肺、サルコイドーシスな
どを含む。間質性肺疾患においては、線維化組織では細
胞外マトリックスの過剰な産生と蓄積が認められてい
る。すなわち、間質性肺疾患の肺線維化組織では、肥大
した間質に著明なＩ型及び III型コラーゲンの集積がみ
られており、特に III型コラーゲンは、線維化の早期に
肥厚した肺胞中隔に集積し、病期が進行し、後期にはＩ
型コラーゲンが増加し、主要なコラーゲンとなる。基底
膜は早期に破壊されており、肺胞腔側へのコラーゲン線
維の侵入が観察される。
みならず、しばしば呼吸細気管支や終末気管支も巻き込
む下部気道の慢性炎症（肺胞炎 alveolitis)とその結果
である間質の線維化と肺胞内線維化を特徴とする疾患群
である。ここでいう間質性肺疾患とは、例えば、間質性
肺炎、肺線維症などのびまん性間質性肺疾患、特発性肺
線維症、透過性肺水腫、膠原病肺、サルコイドーシスな
どを含む。間質性肺疾患においては、線維化組織では細
胞外マトリックスの過剰な産生と蓄積が認められてい
る。すなわち、間質性肺疾患の肺線維化組織では、肥大
した間質に著明なＩ型及び III型コラーゲンの集積がみ
られており、特に III型コラーゲンは、線維化の早期に
肥厚した肺胞中隔に集積し、病期が進行し、後期にはＩ
型コラーゲンが増加し、主要なコラーゲンとなる。基底
膜は早期に破壊されており、肺胞腔側へのコラーゲン線
維の侵入が観察される。
【０００５】また、慢性腎不全とは慢性腎炎症候群の結
果、腎機能の荒廃により体内の恒常性が維持できなくな
った状態である。慢性腎不全の進行を病理学的にみると
糸球体硬化と間質線維化の進行である。糸球体硬化症
は、メサンギウム領域を中心とした細胞外マトリックス
の増生である。メサンギウム硬化症の成分は正常と比較
し、著明にIV型コラーゲンなどの糸球体基底膜の成分が
増加し、また間質成分であるＩ型コラーゲンも硬化症部
位に一致して増生している。すなわち、慢性に経過する
糸球体硬化に対しては、細胞外マトリックスの産生亢進
が大きな要因である。ここで慢性腎不全に陥いる疾患と
は、例えばＩｇＡ腎症、巣状糸球体硬化症、膜性増殖性
腎炎、糖尿病性腎症、慢性間質性腎炎、慢性糸球体腎炎
などを含む。
果、腎機能の荒廃により体内の恒常性が維持できなくな
った状態である。慢性腎不全の進行を病理学的にみると
糸球体硬化と間質線維化の進行である。糸球体硬化症
は、メサンギウム領域を中心とした細胞外マトリックス
の増生である。メサンギウム硬化症の成分は正常と比較
し、著明にIV型コラーゲンなどの糸球体基底膜の成分が
増加し、また間質成分であるＩ型コラーゲンも硬化症部
位に一致して増生している。すなわち、慢性に経過する
糸球体硬化に対しては、細胞外マトリックスの産生亢進
が大きな要因である。ここで慢性腎不全に陥いる疾患と
は、例えばＩｇＡ腎症、巣状糸球体硬化症、膜性増殖性
腎炎、糖尿病性腎症、慢性間質性腎炎、慢性糸球体腎炎
などを含む。
【０００６】また、心筋細胞は高度に分化した細胞で、
分裂して増殖する能力を持ち合わせていない。したがっ
て、心臓に何らかの負荷が加わると、心筋細胞はその一
つ一つが肥大して収縮力を増大させ、心機能を保とうと
する。更に、負荷が長時間持続すると、虚血の要因を中
心に多彩な障害が蓄積され、負荷に対する代償機構に破
綻をきたし、心筋の収縮力は急激に低下し、心臓のポン
プ機能は損なわれて、心不全に陥いることが知られてお
り、心肥大は我が国における心不全の成因として最も大
きな部分を占めている。また、心肥大の形成は、心不全
発症の最大の危険因子になるばかりでなく、虚血性心疾
患や重篤な心室性不整脈の合併率が有意に高くなり、生
命予後を独立に規定する要因になっている。心肥大進展
時には個々の心筋細胞が著しく肥大するだけでなく、そ
の心筋細胞をしっかり束ねるために、間質の線維化が促
進され、細胞外マトリックスであるコラーゲンが増加す
る。また、心筋炎・心筋虚血などにより心筋細胞を失う
と、コラーゲンが生合成され間隙を置換する。間質の線
維化が過剰に進展すると、その結果、心筋は固くなり、
拡張が障害される。更に、筋小体機能も低下して心筋の
拡張期の弛緩も障害される。その他、術後の瘢痕や熱傷
性瘢痕、あるいは強皮症、動脈硬化等の細胞外マトリッ
クス産生亢進の病態を示す病気は、何らかの原因により
コラーゲン合成の異常亢進が起こり、線維化が進んで組
織の硬化変化を生ずることが主要な成因と考えられてい
る。
分裂して増殖する能力を持ち合わせていない。したがっ
て、心臓に何らかの負荷が加わると、心筋細胞はその一
つ一つが肥大して収縮力を増大させ、心機能を保とうと
する。更に、負荷が長時間持続すると、虚血の要因を中
心に多彩な障害が蓄積され、負荷に対する代償機構に破
綻をきたし、心筋の収縮力は急激に低下し、心臓のポン
プ機能は損なわれて、心不全に陥いることが知られてお
り、心肥大は我が国における心不全の成因として最も大
きな部分を占めている。また、心肥大の形成は、心不全
発症の最大の危険因子になるばかりでなく、虚血性心疾
患や重篤な心室性不整脈の合併率が有意に高くなり、生
命予後を独立に規定する要因になっている。心肥大進展
時には個々の心筋細胞が著しく肥大するだけでなく、そ
の心筋細胞をしっかり束ねるために、間質の線維化が促
進され、細胞外マトリックスであるコラーゲンが増加す
る。また、心筋炎・心筋虚血などにより心筋細胞を失う
と、コラーゲンが生合成され間隙を置換する。間質の線
維化が過剰に進展すると、その結果、心筋は固くなり、
拡張が障害される。更に、筋小体機能も低下して心筋の
拡張期の弛緩も障害される。その他、術後の瘢痕や熱傷
性瘢痕、あるいは強皮症、動脈硬化等の細胞外マトリッ
クス産生亢進の病態を示す病気は、何らかの原因により
コラーゲン合成の異常亢進が起こり、線維化が進んで組
織の硬化変化を生ずることが主要な成因と考えられてい
る。
【０００７】また、血管新生においても基底膜及び基底
膜中のコラーゲン合成が、重要な役割をはたすことが指
摘されている（Maragoudakis, E., Sarmonika, M., and
Panoutsacopoulous, M., "J. Pharmacol. Exp. The
r.", 244 : 729, 1988 ; Ingber, D. E., Madri, J.
A., and Folkman, J., "Endocrinology", 119 : 1768,
1986）。血管新生による疾患としては、例えば、糖尿
病性網膜症、後水晶体線維増殖症、角膜移植に伴う血管
新生、緑内症、眼腫瘍、トラコーマ、幹せん、化膿性肉
芽腫、血管腫、線維性血管腫、肥大性はん痕、肉芽、リ
ューマチ性関節炎、浮腫性硬化症、アテローム性動脈硬
化症、各種腫瘍などが知られている。このようにコラー
ゲンなどの細胞外マトリックスの産生の亢進の病態を示
す病気が大きな問題となっているにもかかわらず、従来
では副作用や薬理効果等の種々の面で満足すべき細胞外
マトリックス合成抑制剤（例えば、コラーゲン合成抑制
剤）は未だ開発されていなかったのである。
膜中のコラーゲン合成が、重要な役割をはたすことが指
摘されている（Maragoudakis, E., Sarmonika, M., and
Panoutsacopoulous, M., "J. Pharmacol. Exp. The
r.", 244 : 729, 1988 ; Ingber, D. E., Madri, J.
A., and Folkman, J., "Endocrinology", 119 : 1768,
1986）。血管新生による疾患としては、例えば、糖尿
病性網膜症、後水晶体線維増殖症、角膜移植に伴う血管
新生、緑内症、眼腫瘍、トラコーマ、幹せん、化膿性肉
芽腫、血管腫、線維性血管腫、肥大性はん痕、肉芽、リ
ューマチ性関節炎、浮腫性硬化症、アテローム性動脈硬
化症、各種腫瘍などが知られている。このようにコラー
ゲンなどの細胞外マトリックスの産生の亢進の病態を示
す病気が大きな問題となっているにもかかわらず、従来
では副作用や薬理効果等の種々の面で満足すべき細胞外
マトリックス合成抑制剤（例えば、コラーゲン合成抑制
剤）は未だ開発されていなかったのである。
【０００８】一方、熱ショックタンパク質（heat shock
protein；ＨＳＰ、ストレスタンパク質ともいう）は、
細胞を何らかのストレス、例えば熱、重金属、薬剤、ア
ミノ酸類似体、又は低酸素（低濃度酸素）などで刺激す
ることにより、細胞に発現される一群のタンパク質であ
る。熱ショックタンパク質は、自然界に普遍的に存在し
ており、細菌、酵母、植物、昆虫、及びヒトを含む高等
動物により産生される。ＨＳＰは、その種類は多種多様
であるが、分子量の大きさからＨＳＰ９０ファミリー
（例えば、９０ｋＤ又は１１０ｋＤのＨＳＰなど）、Ｈ
ＳＰ７０ファミリー（例えば、７０〜７３ｋＤのＨＳＰ
など）、ＨＳＰ６０ファミリー（例えば、５７〜６８ｋ
ＤのＨＳＰなど）、低分子ＨＳＰファミリー（例えば、
２０ｋＤ、２５〜２８ｋＤ、又は４７ｋＤのＨＳＰな
ど）の４ファミリーに大別することができる。なお、本
明細書においては、特定分子量を有するＨＳＰを、ＨＳ
Ｐとその直後に記載する数字とによって示すものとし、
例えば、分子量４７ｋＤのＨＳＰを『ＨＳＰ４７』と称
するものとする。以上のように、ＨＳＰには多くの種類
が存在するが、これらは分子量だけでなく、構造、機
能、又は性質などもそれぞれ異なるものである。ストレ
スへの応答に加えて、これらのタンパク質の中には構成
的に合成されるものがあり、正常な環境の下で、タンパ
ク質のフォールディング、アンフォールディング、タン
パク質サブユニットの会合、タンパク質の膜輸送のよう
な、必須の生理的な役割を演じていることが示されてい
る。熱ショックタンパク質としてのこれらの機能は、分
子シャペロンと称される。
protein；ＨＳＰ、ストレスタンパク質ともいう）は、
細胞を何らかのストレス、例えば熱、重金属、薬剤、ア
ミノ酸類似体、又は低酸素（低濃度酸素）などで刺激す
ることにより、細胞に発現される一群のタンパク質であ
る。熱ショックタンパク質は、自然界に普遍的に存在し
ており、細菌、酵母、植物、昆虫、及びヒトを含む高等
動物により産生される。ＨＳＰは、その種類は多種多様
であるが、分子量の大きさからＨＳＰ９０ファミリー
（例えば、９０ｋＤ又は１１０ｋＤのＨＳＰなど）、Ｈ
ＳＰ７０ファミリー（例えば、７０〜７３ｋＤのＨＳＰ
など）、ＨＳＰ６０ファミリー（例えば、５７〜６８ｋ
ＤのＨＳＰなど）、低分子ＨＳＰファミリー（例えば、
２０ｋＤ、２５〜２８ｋＤ、又は４７ｋＤのＨＳＰな
ど）の４ファミリーに大別することができる。なお、本
明細書においては、特定分子量を有するＨＳＰを、ＨＳ
Ｐとその直後に記載する数字とによって示すものとし、
例えば、分子量４７ｋＤのＨＳＰを『ＨＳＰ４７』と称
するものとする。以上のように、ＨＳＰには多くの種類
が存在するが、これらは分子量だけでなく、構造、機
能、又は性質などもそれぞれ異なるものである。ストレ
スへの応答に加えて、これらのタンパク質の中には構成
的に合成されるものがあり、正常な環境の下で、タンパ
ク質のフォールディング、アンフォールディング、タン
パク質サブユニットの会合、タンパク質の膜輸送のよう
な、必須の生理的な役割を演じていることが示されてい
る。熱ショックタンパク質としてのこれらの機能は、分
子シャペロンと称される。
【０００９】ＨＳＰ４７は、永田等によって１９８６年
に発見されたタンパク質で、分子量４７キロダルトンの
塩基性タンパク質（ｐＩ＝９．０）である。ＨＳＰ４７
の発現が増大するにつれて、コラーゲンの合成も増加す
ることが様々な細胞で示されている（"J. Biol. Che
m.", 261 : 7531, 1986 ; "Eur. J. Biochem.", 206 :
323, 1992 ; "J. Biol. Chem.", 265 : 992, 1990 ;
"J. Clin. Invest.", 94：2481, 1994）。すなわち、Ｈ
ＳＰ４７は、細胞内で小胞体内でのプロコラーゲンのプ
ロセシング、三重鎖ヘリックス形成、あるいは小胞体か
らゴルジ装置へのプロコラーゲン輸送・分泌という局面
で、コラーゲンの特異的分子シャペロンとして機能して
いるとされているので、増大したＨＳＰ４７発現は、細
胞外マトリックスにおけるコラーゲン分子の蓄積を刺激
する。このようにコラーゲン結合熱ショックタンパク質
であるＨＳＰ４７は、発現と同様に機能においても、細
胞外マトリックスタンパク質であるコラーゲンに密接に
関連した熱ショックタンパク質である。
に発見されたタンパク質で、分子量４７キロダルトンの
塩基性タンパク質（ｐＩ＝９．０）である。ＨＳＰ４７
の発現が増大するにつれて、コラーゲンの合成も増加す
ることが様々な細胞で示されている（"J. Biol. Che
m.", 261 : 7531, 1986 ; "Eur. J. Biochem.", 206 :
323, 1992 ; "J. Biol. Chem.", 265 : 992, 1990 ;
"J. Clin. Invest.", 94：2481, 1994）。すなわち、Ｈ
ＳＰ４７は、細胞内で小胞体内でのプロコラーゲンのプ
ロセシング、三重鎖ヘリックス形成、あるいは小胞体か
らゴルジ装置へのプロコラーゲン輸送・分泌という局面
で、コラーゲンの特異的分子シャペロンとして機能して
いるとされているので、増大したＨＳＰ４７発現は、細
胞外マトリックスにおけるコラーゲン分子の蓄積を刺激
する。このようにコラーゲン結合熱ショックタンパク質
であるＨＳＰ４７は、発現と同様に機能においても、細
胞外マトリックスタンパク質であるコラーゲンに密接に
関連した熱ショックタンパク質である。
【００１０】
【発明が解決しようとする課題】本発明者らは、上記事
情に鑑み、肝硬変、間質性肺疾患、慢性腎不全（又は慢
性腎不全に陥いる疾患）、心肥大、術後の瘢痕や熱傷性
瘢痕、交通事故等の後に生じるケロイドや肥厚性瘢痕、
強皮症、動脈硬化、又は関節リウマチなどの細胞外マト
リックス産生亢進の病態を示す病気の患者の生理学的状
態を有効に改善させ、肝硬変、間質性肺疾患、慢性腎不
全（又は慢性腎不全に陥いる疾患）、心肥大、術後の瘢
痕や熱傷性瘢痕、交通事故等の後に生じるケロイドや肥
厚性瘢痕、強皮症、動脈硬化、又は関節リウマチなどの
細胞外マトリックス産生亢進の病態を示す病気を効果的
に治療することのできる、細胞外マトリックス合成抑制
剤を提供するために、種々検討を重ねてきた。
情に鑑み、肝硬変、間質性肺疾患、慢性腎不全（又は慢
性腎不全に陥いる疾患）、心肥大、術後の瘢痕や熱傷性
瘢痕、交通事故等の後に生じるケロイドや肥厚性瘢痕、
強皮症、動脈硬化、又は関節リウマチなどの細胞外マト
リックス産生亢進の病態を示す病気の患者の生理学的状
態を有効に改善させ、肝硬変、間質性肺疾患、慢性腎不
全（又は慢性腎不全に陥いる疾患）、心肥大、術後の瘢
痕や熱傷性瘢痕、交通事故等の後に生じるケロイドや肥
厚性瘢痕、強皮症、動脈硬化、又は関節リウマチなどの
細胞外マトリックス産生亢進の病態を示す病気を効果的
に治療することのできる、細胞外マトリックス合成抑制
剤を提供するために、種々検討を重ねてきた。
【００１１】上記したように、肝硬変、間質性肺疾患、
慢性腎不全（又は慢性腎不全に陥いる疾患）、心肥大、
術後の瘢痕や熱傷性瘢痕、交通事故等の後に生じるケロ
イドや肥厚性瘢痕、強皮症、動脈硬化、又は関節リウマ
チなどの線維症は臓器内の細胞外マトリックスの著しく
増加した病態が主病変と理解されている。肝硬変、間質
性肺疾患、慢性腎不全（又は慢性腎不全に陥いる疾
患）、心肥大、術後の瘢痕や熱傷性瘢痕、交通事故等の
後に生じるケロイドや肥厚性瘢痕、強皮症、動脈硬化、
又は関節リウマチなどの細胞外マトリックス産生亢進の
病態を示す病気に伴う線維化は、コラーゲン生合成増加
やコラーゲン分解能の低下により生ずると考えられてい
る。例えば、肝の線維化において、Ｉ型、 III型、IV型
コラーゲンの合成活性化が起こるが、特に主要成分であ
るＩ型コラーゲンの合成活性化が重要な意味をもつ。
慢性腎不全（又は慢性腎不全に陥いる疾患）、心肥大、
術後の瘢痕や熱傷性瘢痕、交通事故等の後に生じるケロ
イドや肥厚性瘢痕、強皮症、動脈硬化、又は関節リウマ
チなどの線維症は臓器内の細胞外マトリックスの著しく
増加した病態が主病変と理解されている。肝硬変、間質
性肺疾患、慢性腎不全（又は慢性腎不全に陥いる疾
患）、心肥大、術後の瘢痕や熱傷性瘢痕、交通事故等の
後に生じるケロイドや肥厚性瘢痕、強皮症、動脈硬化、
又は関節リウマチなどの細胞外マトリックス産生亢進の
病態を示す病気に伴う線維化は、コラーゲン生合成増加
やコラーゲン分解能の低下により生ずると考えられてい
る。例えば、肝の線維化において、Ｉ型、 III型、IV型
コラーゲンの合成活性化が起こるが、特に主要成分であ
るＩ型コラーゲンの合成活性化が重要な意味をもつ。
【００１２】こうした状況下で、本発明者らは、意外に
も、オウバク又は黄連等の成分であるベルベリン、若し
くはその誘導体、又はそれらの薬剤学的に許容される塩
が、病態を示す組織の細胞におけるＨＳＰ４７の合成を
特異的に抑制することを見出した。すなわち、ベルベリ
ン誘導体又はその薬剤学的に許容される塩を投与するこ
とにより、細胞内でのＨＳＰ４７の合成を抑制し、臓器
内でのコラーゲン合成を抑制し、ひいては肝硬変、間質
性肺疾患、慢性腎不全（又は慢性腎不全に陥いる疾
患）、心肥大、術後の瘢痕や熱傷性瘢痕、交通事故等の
後に生じるケロイドや肥厚性瘢痕、強皮症、動脈硬化、
又は関節リウマチなどの細胞外マトリックス産生亢進の
病態を示す病気の治療が可能であることを見出したので
ある。本発明はこうした知見に基づくものであり、肝硬
変、間質性肺疾患、慢性腎不全（又は慢性腎不全に陥い
る疾患）、心肥大、術後の瘢痕や熱傷性瘢痕、交通事故
等の後に生じるケロイドや肥厚性瘢痕、強皮症、動脈硬
化、又は関節リウマチなどの細胞外マトリックス産生の
亢進の病態を示す病気を効果的に治療することのできる
ＨＳＰ４７合成抑制剤であって、細胞内でのコラーゲン
の成熟及び輸送過程に重要な役割を果たしているコラー
ゲン特異的な分子シャペロンであるＨＳＰ４７の合成抑
制剤を提供することを目的とする。
も、オウバク又は黄連等の成分であるベルベリン、若し
くはその誘導体、又はそれらの薬剤学的に許容される塩
が、病態を示す組織の細胞におけるＨＳＰ４７の合成を
特異的に抑制することを見出した。すなわち、ベルベリ
ン誘導体又はその薬剤学的に許容される塩を投与するこ
とにより、細胞内でのＨＳＰ４７の合成を抑制し、臓器
内でのコラーゲン合成を抑制し、ひいては肝硬変、間質
性肺疾患、慢性腎不全（又は慢性腎不全に陥いる疾
患）、心肥大、術後の瘢痕や熱傷性瘢痕、交通事故等の
後に生じるケロイドや肥厚性瘢痕、強皮症、動脈硬化、
又は関節リウマチなどの細胞外マトリックス産生亢進の
病態を示す病気の治療が可能であることを見出したので
ある。本発明はこうした知見に基づくものであり、肝硬
変、間質性肺疾患、慢性腎不全（又は慢性腎不全に陥い
る疾患）、心肥大、術後の瘢痕や熱傷性瘢痕、交通事故
等の後に生じるケロイドや肥厚性瘢痕、強皮症、動脈硬
化、又は関節リウマチなどの細胞外マトリックス産生の
亢進の病態を示す病気を効果的に治療することのできる
ＨＳＰ４７合成抑制剤であって、細胞内でのコラーゲン
の成熟及び輸送過程に重要な役割を果たしているコラー
ゲン特異的な分子シャペロンであるＨＳＰ４７の合成抑
制剤を提供することを目的とする。
【００１３】ところで、特開平２−６９４１６号公報に
は、ベルベリンを有効成分とする「肝障害改善剤」が記
載されており、その「肝障害改善剤」が、Ｐ．アクネス
（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｎｅｓ）
の腹腔内投与７日後にリポポリサッカリドを腹腔内投与
したマウスの生存率の向上に有効であったことが記載さ
れている。しかしながら、Ｐ．アクネスで感作すると少
量のリポポリサッカリドに反応して、著しく血圧が低下
し、かつ、肝小葉内への単核細胞湿潤やその周囲の肝細
胞壊死を示す急性肝臓障害以外に、脾臓や肺にも病変が
認められ、この病態モデルの実体が全身的なものである
ことが報告されている（“薬理と治療”，２２：Ｓｕｐ
ｐｌｅｍｅｎｔ，１６１−１６５，１９９４）。ところ
が前記公開公報には、上記病態モデルの肝臓の組織に対
するベルベリンの影響に関しては、それを示唆する記載
は全く無く、ベルベリンが肝障害を改善しているとする
科学的根拠に極めて乏しい。しかも、この公開公報に
は、ベルベリンがＨＳＰ４７の合成を抑制する作用、若
しくはコラーゲンの合成を抑制する作用、又は細胞外マ
トリックスの産生亢進を抑制する作用、あるいは臓器の
線維化を抑制する作用を有することの開示はなく、それ
を示唆する記載もない。
は、ベルベリンを有効成分とする「肝障害改善剤」が記
載されており、その「肝障害改善剤」が、Ｐ．アクネス
（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｎｅｓ）
の腹腔内投与７日後にリポポリサッカリドを腹腔内投与
したマウスの生存率の向上に有効であったことが記載さ
れている。しかしながら、Ｐ．アクネスで感作すると少
量のリポポリサッカリドに反応して、著しく血圧が低下
し、かつ、肝小葉内への単核細胞湿潤やその周囲の肝細
胞壊死を示す急性肝臓障害以外に、脾臓や肺にも病変が
認められ、この病態モデルの実体が全身的なものである
ことが報告されている（“薬理と治療”，２２：Ｓｕｐ
ｐｌｅｍｅｎｔ，１６１−１６５，１９９４）。ところ
が前記公開公報には、上記病態モデルの肝臓の組織に対
するベルベリンの影響に関しては、それを示唆する記載
は全く無く、ベルベリンが肝障害を改善しているとする
科学的根拠に極めて乏しい。しかも、この公開公報に
は、ベルベリンがＨＳＰ４７の合成を抑制する作用、若
しくはコラーゲンの合成を抑制する作用、又は細胞外マ
トリックスの産生亢進を抑制する作用、あるいは臓器の
線維化を抑制する作用を有することの開示はなく、それ
を示唆する記載もない。
【００１４】また、特開平４−１９３８３０号公報に
は、ベルベリンを有効成分とする「抗腎炎剤」が記載さ
れており、その「抗腎炎剤」が、抗ＧＢＭ（ｇｌｏｍｅ
ｒｕｌａｒ ｂａｓｅｍｅｎｔ ｍｅｍｂｒａｎｅ）腎
炎に有効であったことが記載されている。しかしなが
ら、この公開公報にも、ベルベリンがＨＳＰ４７の合成
を抑制する作用、若しくはコラーゲンの合成を抑制する
作用、又は細胞外マトリックスの産生亢進を抑制する作
用、あるいは臓器の線維化を抑制する作用を有すること
の開示はなく、それを示唆する記載もない。
は、ベルベリンを有効成分とする「抗腎炎剤」が記載さ
れており、その「抗腎炎剤」が、抗ＧＢＭ（ｇｌｏｍｅ
ｒｕｌａｒ ｂａｓｅｍｅｎｔ ｍｅｍｂｒａｎｅ）腎
炎に有効であったことが記載されている。しかしなが
ら、この公開公報にも、ベルベリンがＨＳＰ４７の合成
を抑制する作用、若しくはコラーゲンの合成を抑制する
作用、又は細胞外マトリックスの産生亢進を抑制する作
用、あるいは臓器の線維化を抑制する作用を有すること
の開示はなく、それを示唆する記載もない。
【００１５】一方、本発明は前記のように、ベルベリン
誘導体を投与することにより、細胞内でのＨＳＰ４７の
合成を抑制し、臓器内でのコラーゲン合成を抑制し、そ
の結果、細胞外マトリックス産生も抑制することにな
り、臓器や組織の線維化及び／又は硬化が阻止され、更
には肝硬変、あるいは慢性腎不全（又は、ＩｇＡ腎症、
巣状糸球体硬化症、膜性増殖性腎炎、糖尿病性腎症、慢
性間質性腎炎、慢性糸球体腎炎などの慢性腎不全に陥る
疾患）などの細胞外マトリックス産生亢進の病態を示す
病気の患者の生理学的状態を有効に改善させ、肝硬変あ
るいは慢性腎不全（又は慢性腎不全に陥る疾患）などの
細胞外マトリックス産生亢進の病態を示す病気の効果的
な治療が可能であることを、見出したものである。本発
明はこうした知見に基づくものであり、肝硬変あるいは
慢性腎不全（又は慢性腎不全に陥る疾患）などのコラー
ゲンの増加を伴う細胞外マトリックス産生の亢進の病態
を示す病気を効果的に治療することのできるＨＳＰ４７
合成抑制剤であって、細胞内でのコラーゲンの成熟及び
輸送過程に重要な役割を果たしているコラーゲン特異的
な分子シャペロンであるＨＳＰ４７の合成抑制剤を提供
することを目的とする。
誘導体を投与することにより、細胞内でのＨＳＰ４７の
合成を抑制し、臓器内でのコラーゲン合成を抑制し、そ
の結果、細胞外マトリックス産生も抑制することにな
り、臓器や組織の線維化及び／又は硬化が阻止され、更
には肝硬変、あるいは慢性腎不全（又は、ＩｇＡ腎症、
巣状糸球体硬化症、膜性増殖性腎炎、糖尿病性腎症、慢
性間質性腎炎、慢性糸球体腎炎などの慢性腎不全に陥る
疾患）などの細胞外マトリックス産生亢進の病態を示す
病気の患者の生理学的状態を有効に改善させ、肝硬変あ
るいは慢性腎不全（又は慢性腎不全に陥る疾患）などの
細胞外マトリックス産生亢進の病態を示す病気の効果的
な治療が可能であることを、見出したものである。本発
明はこうした知見に基づくものであり、肝硬変あるいは
慢性腎不全（又は慢性腎不全に陥る疾患）などのコラー
ゲンの増加を伴う細胞外マトリックス産生の亢進の病態
を示す病気を効果的に治療することのできるＨＳＰ４７
合成抑制剤であって、細胞内でのコラーゲンの成熟及び
輸送過程に重要な役割を果たしているコラーゲン特異的
な分子シャペロンであるＨＳＰ４７の合成抑制剤を提供
することを目的とする。
【００１６】
【課題を解決するための手段】従って、本発明は、式
（Ｉ）：
（Ｉ）：
【化３】 （式中、Ｒ1 及びＲ2 は炭素数１〜３のアルキル基であ
る）で表されるベルベリン誘導体又はその薬剤学的に許
容される塩を有効成分として含有することを特徴とす
る、ＨＳＰ４７合成抑制剤に関する。
る）で表されるベルベリン誘導体又はその薬剤学的に許
容される塩を有効成分として含有することを特徴とす
る、ＨＳＰ４７合成抑制剤に関する。
【００１７】
【発明の実施の形態】以下、本発明について詳細に説明
する。本発明の合成抑制剤は、有効成分として前記式
（Ｉ）で表されるベルベリン誘導体又はその薬剤学的に
許容される塩を含有する。炭素数１〜３のアルキル基と
は、例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、又
はｉ−プロピル基である。前記式（Ｉ）で表される化合
物において、Ｒ1 及びＲ2 はそれぞれ独立して前記の炭
素数１〜３のアルキル基であることができる。本発明の
合成抑制剤において有効成分として使用することのでき
るベルベリン誘導体としては、式（II）：
する。本発明の合成抑制剤は、有効成分として前記式
（Ｉ）で表されるベルベリン誘導体又はその薬剤学的に
許容される塩を含有する。炭素数１〜３のアルキル基と
は、例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、又
はｉ−プロピル基である。前記式（Ｉ）で表される化合
物において、Ｒ1 及びＲ2 はそれぞれ独立して前記の炭
素数１〜３のアルキル基であることができる。本発明の
合成抑制剤において有効成分として使用することのでき
るベルベリン誘導体としては、式（II）：
【化４】 で表されるベルベリン（ｂｅｒｂｅｒｉｎｅ）が好まし
い。ベルベリンは、例えば、オウバク又は黄連等の生薬
に含まれている。
い。ベルベリンは、例えば、オウバク又は黄連等の生薬
に含まれている。
【００１８】また、本発明の合成抑制剤において使用す
ることのできる、薬剤学的に許容されるベルベリン誘導
体の塩には、有機酸又は無機酸との薬剤学的に許容され
る塩が含まれ、例えば、塩酸塩、硫酸塩、メタンスルホ
ン酸塩、又はｐ−トルエンスルホン酸塩、更には、シュ
ウ酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、又はフマル酸
などのジカルボン酸との塩、更に、酢酸、プロピオン
酸、又は酪酸などのモノカルボン酸との塩などを挙げる
ことができ、特には塩酸塩、例えば、塩化ベルベリン
（塩酸ベルベリン；ｂｅｒｂｅｒｉｎｅ ｃｈｌｏｒｉ
ｄｅ）が最も好適である。塩化ベルベリンは、式（II
I)：
ることのできる、薬剤学的に許容されるベルベリン誘導
体の塩には、有機酸又は無機酸との薬剤学的に許容され
る塩が含まれ、例えば、塩酸塩、硫酸塩、メタンスルホ
ン酸塩、又はｐ−トルエンスルホン酸塩、更には、シュ
ウ酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、又はフマル酸
などのジカルボン酸との塩、更に、酢酸、プロピオン
酸、又は酪酸などのモノカルボン酸との塩などを挙げる
ことができ、特には塩酸塩、例えば、塩化ベルベリン
（塩酸ベルベリン；ｂｅｒｂｅｒｉｎｅ ｃｈｌｏｒｉ
ｄｅ）が最も好適である。塩化ベルベリンは、式（II
I)：
【化５】 で表される化合物である。
【００１９】本発明の合成抑制剤に含有されるベルベリ
ン誘導体又はその薬剤学的に許容される塩は、化学合成
によって、又は天然物から抽出して精製することによっ
て、調製することができる。あるいは、市販品を用いて
もよい。本発明の合成抑制剤において有効成分として用
いるベルベリン誘導体又はその薬剤学的に許容される塩
を、天然物から抽出する場合には、例えば、ベルベリン
誘導体又はその薬剤学的に許容される塩を含有する植物
の全体又は一部分（例えば、全草、葉、根、根茎、茎、
根皮、若しくは花）をそのまま用いて、又は簡単に加工
処理（例えば、乾燥、切断、湯通し、蒸気加熱、若しく
は粉末化）したもの（例えば、生薬）を用いて抽出す
る。抽出条件は一般的に植物抽出に用いられる条件なら
ば特に制限はない。ベルベリンを含有する植物として
は、これに限定するものではないが、例えば、キハダ
（Ｐｈｅｌｌｏｄｅｎｄｒｏｎ ａｍｕｒｅｎｓｅ Ｒ
ｕｐｒｅｃｈｔ）又はオウレン（Ｃｏｐｔｉｓ ｊａｐ
ｏｎｉｃａＭａｋｉｎｏ）等を使用することができる。
ン誘導体又はその薬剤学的に許容される塩は、化学合成
によって、又は天然物から抽出して精製することによっ
て、調製することができる。あるいは、市販品を用いて
もよい。本発明の合成抑制剤において有効成分として用
いるベルベリン誘導体又はその薬剤学的に許容される塩
を、天然物から抽出する場合には、例えば、ベルベリン
誘導体又はその薬剤学的に許容される塩を含有する植物
の全体又は一部分（例えば、全草、葉、根、根茎、茎、
根皮、若しくは花）をそのまま用いて、又は簡単に加工
処理（例えば、乾燥、切断、湯通し、蒸気加熱、若しく
は粉末化）したもの（例えば、生薬）を用いて抽出す
る。抽出条件は一般的に植物抽出に用いられる条件なら
ば特に制限はない。ベルベリンを含有する植物として
は、これに限定するものではないが、例えば、キハダ
（Ｐｈｅｌｌｏｄｅｎｄｒｏｎ ａｍｕｒｅｎｓｅ Ｒ
ｕｐｒｅｃｈｔ）又はオウレン（Ｃｏｐｔｉｓ ｊａｐ
ｏｎｉｃａＭａｋｉｎｏ）等を使用することができる。
【００２０】本発明におけるベルベリン又はその薬剤学
的に許容される塩を生薬から抽出する場合、これに限定
するものではないが、例えば、オウバク又は黄連から抽
出することが好ましい。オウバク（黄柏：Ｐｈｅｌｌｏ
ｄｅｎｄｒｉ Ｃｏｒｔｅｘ；Ｐｈｅｌｌｏｄｅｎｄｒ
ｏｎ Ｂａｒｋ）とは、キハダ（Ｐｈｅｌｌｏｄｅｎｄ
ｒｏｎ ａｍｕｒｅｎｓｅ Ｒｕｐｒｅｃｈｔ）又はそ
の同属植物（Ｒｕｔａｃｅａｅ）の周皮を除いた樹皮を
意味し、それらの部分を単独であるいは任意に組み合わ
せて使用することができる。黄連（Ｃｏｐｔｉｄｉｓ
Ｒｈｉｚｏｍａ；Ｃｏｐｔｉｓ Ｒｈｉｚｏｍｅ）と
は、オウレン（Ｃｏｐｔｉｓ ｊａｐｏｎｉｃａ Ｍａ
ｋｉｎｏ）又はその同属植物（Ｒａｎｕｎｃｕｌａｃｅ
ａｅ）の根をほとんど除いた根茎を意味し、それらの部
分を単独であるいは任意に組み合わせて使用することが
できる。なお、本明細書においては、便宜上、植物とし
ての『オウレン』と、生薬としての『黄連』とを、カタ
カナと漢字とで区別して表記する。
的に許容される塩を生薬から抽出する場合、これに限定
するものではないが、例えば、オウバク又は黄連から抽
出することが好ましい。オウバク（黄柏：Ｐｈｅｌｌｏ
ｄｅｎｄｒｉ Ｃｏｒｔｅｘ；Ｐｈｅｌｌｏｄｅｎｄｒ
ｏｎ Ｂａｒｋ）とは、キハダ（Ｐｈｅｌｌｏｄｅｎｄ
ｒｏｎ ａｍｕｒｅｎｓｅ Ｒｕｐｒｅｃｈｔ）又はそ
の同属植物（Ｒｕｔａｃｅａｅ）の周皮を除いた樹皮を
意味し、それらの部分を単独であるいは任意に組み合わ
せて使用することができる。黄連（Ｃｏｐｔｉｄｉｓ
Ｒｈｉｚｏｍａ；Ｃｏｐｔｉｓ Ｒｈｉｚｏｍｅ）と
は、オウレン（Ｃｏｐｔｉｓ ｊａｐｏｎｉｃａ Ｍａ
ｋｉｎｏ）又はその同属植物（Ｒａｎｕｎｃｕｌａｃｅ
ａｅ）の根をほとんど除いた根茎を意味し、それらの部
分を単独であるいは任意に組み合わせて使用することが
できる。なお、本明細書においては、便宜上、植物とし
ての『オウレン』と、生薬としての『黄連』とを、カタ
カナと漢字とで区別して表記する。
【００２１】本発明による合成抑制剤において有効成分
として用いることのできるオウバク抽出物又は黄連抽出
物は、前記のベルベリン又はその薬剤学的に許容される
塩を含有していればよく、従って、オウバクの粗抽出物
又は黄連の粗抽出物を用いることができる。本発明で用
いることのできるオウバク抽出物又は黄連抽出物の製造
方法としては、黄連又はオウバクを、水（例えば、冷
水、温水、又は熱湯）によって抽出するか、又は有機溶
媒を用いて抽出することによって、得ることができる。
有機溶媒としては、例えば、炭素数１〜６のアルコール
（例えば、メチルアルコール、エチルアルコール、ｎ−
プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、若しく
はブチルアルコール）、エステル（例えば、酢酸メチ
ル、酢酸エチル、酢酸プロピル、若しくは酢酸ブチ
ル）、ケトン（例えば、アセトン若しくはメチルイソブ
チルケトン）、エーテル、石油エーテル、ｎ−ヘキサ
ン、シクロヘキサン、トルエン、ベンゼン、炭化水素の
ハロゲン誘導体（例えば、四塩化炭素、ジクロロメタ
ン、若しくはクロロホルム）、ピリジン、グリコール
（例えば、プロピレングリコール、若しくはブチレング
リコール）、ポリエチレングリコール、又はアセトニト
リルなどを用いることができ、これらの有機溶媒を単
独、又は適宜組み合わせ、一定の比率で混合し、更には
無水又は含水状態で用いることができる。好ましくは、
メチルアルコール等が望ましい。水抽出又は有機溶媒抽
出の方法としては、通常の生薬抽出に用いられる方法を
用いることができ、例えば、（乾燥）オウバク又は黄連
１重量部に対し、水又は有機溶媒３〜３００重量部を用
いて、攪拌しながら、その沸点以下の温度で加熱還流、
常温で超音波抽出、あるいは冷浸することが望ましい。
抽出工程は、通常は５分〜７日間、好ましくは１０分〜
６０時間実施し、必要に応じて、攪拌等の補助的手段を
加えることにより、抽出時間を短縮することができる。
なお、抽出処理をする前に、例えば、エーテル又はベン
ゼン等により脱脂することが、より好ましい。
として用いることのできるオウバク抽出物又は黄連抽出
物は、前記のベルベリン又はその薬剤学的に許容される
塩を含有していればよく、従って、オウバクの粗抽出物
又は黄連の粗抽出物を用いることができる。本発明で用
いることのできるオウバク抽出物又は黄連抽出物の製造
方法としては、黄連又はオウバクを、水（例えば、冷
水、温水、又は熱湯）によって抽出するか、又は有機溶
媒を用いて抽出することによって、得ることができる。
有機溶媒としては、例えば、炭素数１〜６のアルコール
（例えば、メチルアルコール、エチルアルコール、ｎ−
プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、若しく
はブチルアルコール）、エステル（例えば、酢酸メチ
ル、酢酸エチル、酢酸プロピル、若しくは酢酸ブチ
ル）、ケトン（例えば、アセトン若しくはメチルイソブ
チルケトン）、エーテル、石油エーテル、ｎ−ヘキサ
ン、シクロヘキサン、トルエン、ベンゼン、炭化水素の
ハロゲン誘導体（例えば、四塩化炭素、ジクロロメタ
ン、若しくはクロロホルム）、ピリジン、グリコール
（例えば、プロピレングリコール、若しくはブチレング
リコール）、ポリエチレングリコール、又はアセトニト
リルなどを用いることができ、これらの有機溶媒を単
独、又は適宜組み合わせ、一定の比率で混合し、更には
無水又は含水状態で用いることができる。好ましくは、
メチルアルコール等が望ましい。水抽出又は有機溶媒抽
出の方法としては、通常の生薬抽出に用いられる方法を
用いることができ、例えば、（乾燥）オウバク又は黄連
１重量部に対し、水又は有機溶媒３〜３００重量部を用
いて、攪拌しながら、その沸点以下の温度で加熱還流、
常温で超音波抽出、あるいは冷浸することが望ましい。
抽出工程は、通常は５分〜７日間、好ましくは１０分〜
６０時間実施し、必要に応じて、攪拌等の補助的手段を
加えることにより、抽出時間を短縮することができる。
なお、抽出処理をする前に、例えば、エーテル又はベン
ゼン等により脱脂することが、より好ましい。
【００２２】抽出工程終了後、濾過又は遠心分離等の適
当な方法により、水又は有機溶媒抽出液から、不溶物を
分離して粗抽出物を得ることができる。なお、本発明の
合成抑制剤において、天然物より抽出、分画したベルベ
リン又はその薬剤学的に許容される塩を用いる場合に
は、前記の粗抽出物を特に精製することなく、そのまま
使用してもよい。常法による水抽出物又は有機溶媒抽出
物の他に、前記の粗抽出物を各種有機溶媒又は吸着剤等
により、更に処理した精製抽出物も、本発明の合成抑制
剤の有効成分として用いることができる。これらの粗抽
出物及び各種の精製処理を終えた精製抽出物を含むオウ
バク抽出物又は黄連抽出物は、抽出したままの溶液を用
いても、溶媒を濃縮したエキスを用いても良いし、溶媒
を留去し乾燥した粉末、更には結晶化して精製したも
の、あるいは粘性のある物質を用いても良く、またそれ
らの希釈液を用いることもできる。こうして得られたオ
ウバク抽出物又は黄連抽出物は、オウバク又は黄連に含
まれるベルベリン、又はその薬剤学的に許容される塩を
含み、同時に原料のオウバク又は黄連に由来する不純物
を含んでいる。
当な方法により、水又は有機溶媒抽出液から、不溶物を
分離して粗抽出物を得ることができる。なお、本発明の
合成抑制剤において、天然物より抽出、分画したベルベ
リン又はその薬剤学的に許容される塩を用いる場合に
は、前記の粗抽出物を特に精製することなく、そのまま
使用してもよい。常法による水抽出物又は有機溶媒抽出
物の他に、前記の粗抽出物を各種有機溶媒又は吸着剤等
により、更に処理した精製抽出物も、本発明の合成抑制
剤の有効成分として用いることができる。これらの粗抽
出物及び各種の精製処理を終えた精製抽出物を含むオウ
バク抽出物又は黄連抽出物は、抽出したままの溶液を用
いても、溶媒を濃縮したエキスを用いても良いし、溶媒
を留去し乾燥した粉末、更には結晶化して精製したも
の、あるいは粘性のある物質を用いても良く、またそれ
らの希釈液を用いることもできる。こうして得られたオ
ウバク抽出物又は黄連抽出物は、オウバク又は黄連に含
まれるベルベリン、又はその薬剤学的に許容される塩を
含み、同時に原料のオウバク又は黄連に由来する不純物
を含んでいる。
【００２３】本発明の合成抑制剤は、ベルベリン誘導体
又はその薬剤学的に許容される塩、ベルベリン誘導体又
はその薬剤学的に許容される塩を含有する植物の抽出
物、例えば、ベルベリン誘導体又はその薬剤学的に許容
される塩を含有する生薬の抽出物（特には、オウバク抽
出物又は黄連抽出物）を、それ単独で、又は好ましくは
製剤学的若しくは獣医学的に許容することのできる通常
の担体と共に、動物、好ましくは哺乳動物（特にはヒ
ト）に投与することができる。投与剤型としては、特に
限定がなく、例えば、散剤、細粒剤、顆粒剤、錠剤、カ
プセル剤、懸濁液、エマルジョン剤、シロップ剤、エキ
ス剤、若しくは丸剤等の経口剤、又は注射剤、外用液
剤、軟膏剤、坐剤、局所投与のクリーム、若しくは点眼
薬などの非経口剤を挙げることができる。これらの経口
剤は、例えば、ゼラチン、アルギン酸ナトリウム、澱
粉、コーンスターチ、白糖、乳糖、ぶどう糖、マンニッ
ト、カルボキシメチルセルロース、デキストリン、ポリ
ビニルピロリドン、結晶セルロース、大豆レシチン、シ
ョ糖、脂肪酸エステル、タルク、ステアリン酸マグネシ
ウム、ポリエチレングリコール、ケイ酸マグネシウム、
無水ケイ酸、又は合成ケイ酸アルミニウムなどの賦形
剤、結合剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、流動性促進
剤、希釈剤、保存剤、着色剤、香料、矯味剤、安定化
剤、保湿剤、防腐剤、又は酸化防止剤等を用いて、常法
に従って製造することができる。例えば、塩化ベルベリ
ン１重量部と乳糖９９重量部とを混合して充填したカプ
セル剤などである。
又はその薬剤学的に許容される塩、ベルベリン誘導体又
はその薬剤学的に許容される塩を含有する植物の抽出
物、例えば、ベルベリン誘導体又はその薬剤学的に許容
される塩を含有する生薬の抽出物（特には、オウバク抽
出物又は黄連抽出物）を、それ単独で、又は好ましくは
製剤学的若しくは獣医学的に許容することのできる通常
の担体と共に、動物、好ましくは哺乳動物（特にはヒ
ト）に投与することができる。投与剤型としては、特に
限定がなく、例えば、散剤、細粒剤、顆粒剤、錠剤、カ
プセル剤、懸濁液、エマルジョン剤、シロップ剤、エキ
ス剤、若しくは丸剤等の経口剤、又は注射剤、外用液
剤、軟膏剤、坐剤、局所投与のクリーム、若しくは点眼
薬などの非経口剤を挙げることができる。これらの経口
剤は、例えば、ゼラチン、アルギン酸ナトリウム、澱
粉、コーンスターチ、白糖、乳糖、ぶどう糖、マンニッ
ト、カルボキシメチルセルロース、デキストリン、ポリ
ビニルピロリドン、結晶セルロース、大豆レシチン、シ
ョ糖、脂肪酸エステル、タルク、ステアリン酸マグネシ
ウム、ポリエチレングリコール、ケイ酸マグネシウム、
無水ケイ酸、又は合成ケイ酸アルミニウムなどの賦形
剤、結合剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、流動性促進
剤、希釈剤、保存剤、着色剤、香料、矯味剤、安定化
剤、保湿剤、防腐剤、又は酸化防止剤等を用いて、常法
に従って製造することができる。例えば、塩化ベルベリ
ン１重量部と乳糖９９重量部とを混合して充填したカプ
セル剤などである。
【００２４】非経口投与方法としては、注射（皮下、静
脈内等）、又は直腸投与等が例示される。これらのなか
で、注射剤が最も好適に用いられる。例えば、注射剤の
調製においては、有効成分としてのベルベリン誘導体又
はその薬剤学的に許容される塩、又はベルベリン誘導体
又はその薬剤学的に許容される塩を含有する植物の抽出
物、例えば、ベルベリン誘導体又はその薬剤学的に許容
される塩を含有する生薬の抽出物（特には、オウバク抽
出物又は黄連抽出物）の他に、例えば、生理食塩水若し
くはリンゲル液等の水溶性溶剤、植物油若しくは脂肪酸
エステル等の非水溶性溶剤、ブドウ糖若しくは塩化ナト
リウム等の等張化剤、溶解補助剤、安定化剤、防腐剤、
懸濁化剤、又は乳化剤などを任意に用いることができ
る。また、本発明の合成抑制剤は、徐放性ポリマーなど
を用いた徐放性製剤の手法を用いて投与してもよい。例
えば、本発明の合成抑制剤をエチレンビニル酢酸ポリマ
ーのペレットに取り込ませて、このペレットを治療すべ
き組織中に外科的に移植することができる。
脈内等）、又は直腸投与等が例示される。これらのなか
で、注射剤が最も好適に用いられる。例えば、注射剤の
調製においては、有効成分としてのベルベリン誘導体又
はその薬剤学的に許容される塩、又はベルベリン誘導体
又はその薬剤学的に許容される塩を含有する植物の抽出
物、例えば、ベルベリン誘導体又はその薬剤学的に許容
される塩を含有する生薬の抽出物（特には、オウバク抽
出物又は黄連抽出物）の他に、例えば、生理食塩水若し
くはリンゲル液等の水溶性溶剤、植物油若しくは脂肪酸
エステル等の非水溶性溶剤、ブドウ糖若しくは塩化ナト
リウム等の等張化剤、溶解補助剤、安定化剤、防腐剤、
懸濁化剤、又は乳化剤などを任意に用いることができ
る。また、本発明の合成抑制剤は、徐放性ポリマーなど
を用いた徐放性製剤の手法を用いて投与してもよい。例
えば、本発明の合成抑制剤をエチレンビニル酢酸ポリマ
ーのペレットに取り込ませて、このペレットを治療すべ
き組織中に外科的に移植することができる。
【００２５】本発明の合成抑制剤は、これに限定される
ものではないが、ベルベリン誘導体又はその薬剤学的に
許容される塩を、０．０１〜９９重量％、好ましくは
０．１〜８０重量％の量で含有することができる。ま
た、ベルベリン誘導体又はその薬剤学的に許容される塩
を含有する植物の抽出物、例えば、ベルベリン誘導体又
はその薬剤学的に許容される塩を含有する生薬の抽出物
（特には、オウバク抽出物又は黄連抽出物）を有効成分
として含有する本発明の合成抑制剤は、その中に含まれ
るベルベリン誘導体又はその薬剤学的に許容される塩が
前記の量範囲になるように適宜調整して、調製すること
ができる。なお、ベルベリン誘導体又はその薬剤学的に
許容される塩を含有する植物の抽出物、例えば、ベルベ
リン誘導体又はその薬剤学的に許容される塩を含有する
生薬の抽出物（特には、オウバク抽出物又は黄連抽出
物）を有効成分として含有する合成抑制剤を、経口投与
用製剤とする場合には、製剤学的に許容することのでき
る担体を用いて、製剤化することが好ましい。本発明の
合成抑制剤を用いる場合の投与量は、病気の種類、患者
の年齢、性別、体重、症状の程度、又は投与方法などに
より異なり、特に制限はないが、ベルベリン誘導体量と
して通常成人１人当り１ｍｇ〜１０ｇ程度を、１日１〜
４回程度にわけて、経口的に又は非経口的に投与する。
更に、用途も医薬品に限定されるものではなく、種々の
用途、例えば、機能性食品や健康食品として飲食物の形
で与えることも可能である。
ものではないが、ベルベリン誘導体又はその薬剤学的に
許容される塩を、０．０１〜９９重量％、好ましくは
０．１〜８０重量％の量で含有することができる。ま
た、ベルベリン誘導体又はその薬剤学的に許容される塩
を含有する植物の抽出物、例えば、ベルベリン誘導体又
はその薬剤学的に許容される塩を含有する生薬の抽出物
（特には、オウバク抽出物又は黄連抽出物）を有効成分
として含有する本発明の合成抑制剤は、その中に含まれ
るベルベリン誘導体又はその薬剤学的に許容される塩が
前記の量範囲になるように適宜調整して、調製すること
ができる。なお、ベルベリン誘導体又はその薬剤学的に
許容される塩を含有する植物の抽出物、例えば、ベルベ
リン誘導体又はその薬剤学的に許容される塩を含有する
生薬の抽出物（特には、オウバク抽出物又は黄連抽出
物）を有効成分として含有する合成抑制剤を、経口投与
用製剤とする場合には、製剤学的に許容することのでき
る担体を用いて、製剤化することが好ましい。本発明の
合成抑制剤を用いる場合の投与量は、病気の種類、患者
の年齢、性別、体重、症状の程度、又は投与方法などに
より異なり、特に制限はないが、ベルベリン誘導体量と
して通常成人１人当り１ｍｇ〜１０ｇ程度を、１日１〜
４回程度にわけて、経口的に又は非経口的に投与する。
更に、用途も医薬品に限定されるものではなく、種々の
用途、例えば、機能性食品や健康食品として飲食物の形
で与えることも可能である。
【００２６】
【作用】上記したように、本発明の合成抑制剤に含有さ
れるベルベリン誘導体又はその薬剤学的に許容される塩
は、細胞内のＨＳＰ４７合成を特異的に抑制する作用が
あるので、前記ベルベリン誘導体又はその薬剤学的に許
容される塩を投与すると細胞内でのＨＳＰ４７生合成が
特異的に減少し、コラーゲンの生合成が抑制される。そ
の結果、細胞外マトリックス産生も抑制されることにな
る。従って、前記ベルベリン誘導体又はその薬剤学的に
許容される塩は、コラーゲンの増加を伴う細胞外マトリ
ックス産生亢進の病態を示す病気、例えば肝硬変、間質
性肺疾患、慢性腎不全（又は慢性腎不全に陥いる疾
患）、心肥大、術後の瘢痕や熱傷性瘢痕、交通事故等の
後に生じるケロイドや肥厚性瘢痕、強皮症、動脈硬化、
又は関節リウマチなどの予防及び治療に使用することが
できる。すなわち、本発明の合成抑制剤は、コラーゲン
特異的シャペロンであるＨＳＰ４７の合成を抑制するこ
とによりコラーゲンの合成を抑制する。
れるベルベリン誘導体又はその薬剤学的に許容される塩
は、細胞内のＨＳＰ４７合成を特異的に抑制する作用が
あるので、前記ベルベリン誘導体又はその薬剤学的に許
容される塩を投与すると細胞内でのＨＳＰ４７生合成が
特異的に減少し、コラーゲンの生合成が抑制される。そ
の結果、細胞外マトリックス産生も抑制されることにな
る。従って、前記ベルベリン誘導体又はその薬剤学的に
許容される塩は、コラーゲンの増加を伴う細胞外マトリ
ックス産生亢進の病態を示す病気、例えば肝硬変、間質
性肺疾患、慢性腎不全（又は慢性腎不全に陥いる疾
患）、心肥大、術後の瘢痕や熱傷性瘢痕、交通事故等の
後に生じるケロイドや肥厚性瘢痕、強皮症、動脈硬化、
又は関節リウマチなどの予防及び治療に使用することが
できる。すなわち、本発明の合成抑制剤は、コラーゲン
特異的シャペロンであるＨＳＰ４７の合成を抑制するこ
とによりコラーゲンの合成を抑制する。
【００２７】また、前記のように、血管新生において
も、基底膜及び基底膜中のコラーゲン合成が重要な役割
をはたすことが指摘されているので、本発明の合成抑制
剤は、血管新生の異常増殖に基づく多くの疾患の予防治
療薬として極めて有用であり、先に述べたような各疾
患、すなわち糖尿病性網膜症、後水晶体線維増殖症、角
膜移植に伴う血管新生、緑内症、眼腫瘍、トラコーマ、
乾せん、化膿性肉芽腫、血管腫、線維性血管腫、肥大性
はん痕、肉芽、リューマチ性関節炎、浮腫性硬化症、ア
テローム性動脈硬化症及び各種腫瘍などに用いることが
できる。更に、Ｉ型コラーゲンとフィブロネクチンを基
本骨格とする間質（interstitial stroma)が癌の転移に
おいて、離脱した癌細胞が近傍の脈管に侵入するまでの
ガイド役を果たすことが、明らかとなっているので〔"B
IOTHERAPY", 7 (8) : 1181, 1993〕、本発明の合成抑制
剤を投与することにより、癌の転移を抑制することも可
能である。
も、基底膜及び基底膜中のコラーゲン合成が重要な役割
をはたすことが指摘されているので、本発明の合成抑制
剤は、血管新生の異常増殖に基づく多くの疾患の予防治
療薬として極めて有用であり、先に述べたような各疾
患、すなわち糖尿病性網膜症、後水晶体線維増殖症、角
膜移植に伴う血管新生、緑内症、眼腫瘍、トラコーマ、
乾せん、化膿性肉芽腫、血管腫、線維性血管腫、肥大性
はん痕、肉芽、リューマチ性関節炎、浮腫性硬化症、ア
テローム性動脈硬化症及び各種腫瘍などに用いることが
できる。更に、Ｉ型コラーゲンとフィブロネクチンを基
本骨格とする間質（interstitial stroma)が癌の転移に
おいて、離脱した癌細胞が近傍の脈管に侵入するまでの
ガイド役を果たすことが、明らかとなっているので〔"B
IOTHERAPY", 7 (8) : 1181, 1993〕、本発明の合成抑制
剤を投与することにより、癌の転移を抑制することも可
能である。
【００２８】
【実施例】以下、実施例によって本発明を具体的に説明
するが、これらは本発明の範囲を限定するものではな
い。実施例１：抗ＨＳＰ４７ポリクローナル抗体の作製 （１）抗ＨＳＰ４７ポリクローナル抗体の調製 ヒトＨＳＰ４７のＮ末端から２〜１６番目のアミノ酸配
列に対応するアミノ酸１５個からなるペプチド〔以下、
ヒトＨＳＰ４７ペプチド（２−１６）と称する〕を自動
ペプチド合成装置（ＰＳＳＭ−８システム，島津製作
所）を用いて作製し、スクシニミジル４−（ｐ−マレイ
ミドフェニル）ブチレート〔ＳＭＰＢ：Succinimidyl 4
-(p-maleimidophenyl)butyrate〕を架橋剤として用い、
常法（"Biochemistry", 18：690, 1979)によりラクトグ
ロブリンと結合させ、感作抗原を作製した。この感作抗
原１５０μｇを含むリン酸緩衝生理食塩水〔組成：ＫＣ
ｌ＝０．２ｇ／ｌ，ＫＨ2 ＰＯ4 ＝０．２ｇ／ｌ，Ｎａ
Ｃｌ＝８ｇ／ｌ，Ｎａ2 ＨＰＯ4 （無水）＝１．１５ｇ
／ｌ：以下ＰＢＳ（−）と称する：コスモバイオ，カタ
ログ番号320-01〕０．２ｍｌと、等量のフロイント完全
アジュバント（ヤトロン，カタログ番号RM606-1)とを混
和し、得られた混合液０．２ｍｌを、ルーラット（６週
齢，雌性：日本クレア）の皮下に投与し、免疫した。同
様の方法で第２次及び第３次免疫を繰り返した後、アジ
ュバント（Hunter's TiterMax ; CytRx Corporation,米
国ジョージア州）を用いて６回免疫感作を行った。感作
動物より採血し、常法により血清を分離して採取し、以
下に示す酵素抗体法（ＥＬＩＳＡ法）及びウェスタンブ
ロット法によって血清中の抗体価を測定した。
するが、これらは本発明の範囲を限定するものではな
い。実施例１：抗ＨＳＰ４７ポリクローナル抗体の作製 （１）抗ＨＳＰ４７ポリクローナル抗体の調製 ヒトＨＳＰ４７のＮ末端から２〜１６番目のアミノ酸配
列に対応するアミノ酸１５個からなるペプチド〔以下、
ヒトＨＳＰ４７ペプチド（２−１６）と称する〕を自動
ペプチド合成装置（ＰＳＳＭ−８システム，島津製作
所）を用いて作製し、スクシニミジル４−（ｐ−マレイ
ミドフェニル）ブチレート〔ＳＭＰＢ：Succinimidyl 4
-(p-maleimidophenyl)butyrate〕を架橋剤として用い、
常法（"Biochemistry", 18：690, 1979)によりラクトグ
ロブリンと結合させ、感作抗原を作製した。この感作抗
原１５０μｇを含むリン酸緩衝生理食塩水〔組成：ＫＣ
ｌ＝０．２ｇ／ｌ，ＫＨ2 ＰＯ4 ＝０．２ｇ／ｌ，Ｎａ
Ｃｌ＝８ｇ／ｌ，Ｎａ2 ＨＰＯ4 （無水）＝１．１５ｇ
／ｌ：以下ＰＢＳ（−）と称する：コスモバイオ，カタ
ログ番号320-01〕０．２ｍｌと、等量のフロイント完全
アジュバント（ヤトロン，カタログ番号RM606-1)とを混
和し、得られた混合液０．２ｍｌを、ルーラット（６週
齢，雌性：日本クレア）の皮下に投与し、免疫した。同
様の方法で第２次及び第３次免疫を繰り返した後、アジ
ュバント（Hunter's TiterMax ; CytRx Corporation,米
国ジョージア州）を用いて６回免疫感作を行った。感作
動物より採血し、常法により血清を分離して採取し、以
下に示す酵素抗体法（ＥＬＩＳＡ法）及びウェスタンブ
ロット法によって血清中の抗体価を測定した。
【００２９】（２）酵素抗体法（ＥＬＩＳＡ法）による
抗ＨＳＰ４７ポリクローナル抗体特性の評価 前項（１）で調製したヒトＨＳＰ４７ペプチド（２−１
６）をＰＢＳ（−）に溶解し、１０μｇ／ｍｌの濃度の
ペプチド溶液を調製し、リジットアセイプレート（ファ
ルコン，カタログ番号3910）の各ウェルに前記ペプチド
溶液を５０μｌずつ滴下した。最も外側のウェルにはＰ
ＢＳ（−）５０μｌのみを入れ、湿潤下で４℃にて一晩
放置した後、前記ペプチド溶液を捨て、ＰＢＳ（−）を
用いて各ウェルを洗浄した後、１％ウシ血清アルブミン
（以下、ＢＳＡと略称する）を含むＰＢＳ（−）１００
μｌを各ウェルに入れ、室温下で１時間放置した。ＰＢ
Ｓ（−）で３回洗浄した後、前項（１）で取得したルー
ラット血清５０μｌを各ウェルに入れ、１時間室温にて
放置した。ＰＢＳ（−）で３回洗浄した後、各ウェルに
２次抗体としてペルオキシダーゼ標識抗ラットＩｇＧ５
０μｌを入れ、室温下で１時間放置した。ＰＢＳ（−）
で２回洗浄した後、過酸化水素水４μｌを加えた０．１
Ｍクエン酸バッファー（ｐＨ４．５）１０ｍｌにｏ−フ
ェニレンジアミン（ＯＰＤ）タブレット（シグマ，カタ
ログ番号P8287)１個（１０ｍｇ）を溶解して調製した基
質液１００μｌずつを各ウェルに滴下し、室温にて遮光
下で３０分間放置した後、各ウェルの４９２ｎｍの吸光
度をマイクロプレートリーダー（東ソー，ＭＰＲ−Ａ４
ｉ型）にて測定した。抗体価の上昇が確認された血清を
抗ヒトＨＳＰ４７ポリクローナル抗体として以下の実施
例に用いた。
抗ＨＳＰ４７ポリクローナル抗体特性の評価 前項（１）で調製したヒトＨＳＰ４７ペプチド（２−１
６）をＰＢＳ（−）に溶解し、１０μｇ／ｍｌの濃度の
ペプチド溶液を調製し、リジットアセイプレート（ファ
ルコン，カタログ番号3910）の各ウェルに前記ペプチド
溶液を５０μｌずつ滴下した。最も外側のウェルにはＰ
ＢＳ（−）５０μｌのみを入れ、湿潤下で４℃にて一晩
放置した後、前記ペプチド溶液を捨て、ＰＢＳ（−）を
用いて各ウェルを洗浄した後、１％ウシ血清アルブミン
（以下、ＢＳＡと略称する）を含むＰＢＳ（−）１００
μｌを各ウェルに入れ、室温下で１時間放置した。ＰＢ
Ｓ（−）で３回洗浄した後、前項（１）で取得したルー
ラット血清５０μｌを各ウェルに入れ、１時間室温にて
放置した。ＰＢＳ（−）で３回洗浄した後、各ウェルに
２次抗体としてペルオキシダーゼ標識抗ラットＩｇＧ５
０μｌを入れ、室温下で１時間放置した。ＰＢＳ（−）
で２回洗浄した後、過酸化水素水４μｌを加えた０．１
Ｍクエン酸バッファー（ｐＨ４．５）１０ｍｌにｏ−フ
ェニレンジアミン（ＯＰＤ）タブレット（シグマ，カタ
ログ番号P8287)１個（１０ｍｇ）を溶解して調製した基
質液１００μｌずつを各ウェルに滴下し、室温にて遮光
下で３０分間放置した後、各ウェルの４９２ｎｍの吸光
度をマイクロプレートリーダー（東ソー，ＭＰＲ−Ａ４
ｉ型）にて測定した。抗体価の上昇が確認された血清を
抗ヒトＨＳＰ４７ポリクローナル抗体として以下の実施
例に用いた。
【００３０】（３）ウェスタンブロット法による抗ＨＳ
Ｐ４７ポリクローナル抗体特性の評価 Ｌａｅｍｍｌｉのバッファー系（Laemmli, N. K., "Nat
ure", 283 : pp. 249-256, 1970)を用いて、ＨｅＬａ細
胞のライセートのドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）ポ
リアクリルアミドゲル電気泳動を、以下の方法に従って
行った。濃縮ゲルの調製は次のように行った。蒸留水
６．１ｍｌ、０．５Ｍトリス（バイオ・ラッド，カタロ
グ番号161-0716）−ＨＣｌ（ｐＨ６．８）２．５ｍｌ、
１０％ＳＤＳ（バイオ・ラッド，カタログ番号161-030
1）１００μｌ、及び３０％アクリルアミド（バイオ・
ラッド，カタログ番号161-0101）／Ｎ，Ｎ’−メチレン
ビスアクリルアミド（バイオ・ラッド，カタログ番号16
1-0201）１．３ｍｌを混合して、１５分間脱気し、１０
％過硫酸アンモニウム（バイオ・ラッド，カタログ番号
161-0700）５０μｌ及びＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメ
チルエチレンジアミン（以下、ＴＥＭＥＤと略称する）
（バイオ・ラッド，カタログ番号161-0800）１０μｌを
加えて、濃縮ゲルを調製した。また、分離ゲルの調製は
次のように行った。蒸留水４．０４５ｍｌ、１．５Ｍト
リス−ＨＣｌ（ｐＨ８．８）２．５ｍｌ、１０％ＳＤＳ
１００μｌ、及び３０％アクリルアミド／Ｎ，Ｎ’−メ
チレンビスアクリルアミド３．３ｍｌをゆっくり混合し
て、１５分間アスピレータで脱気し、１０％過硫酸アン
モニウム５０μｌ、及びＴＥＭＥＤ５μｌを加えた。泳
動バッファーとしては、トリス９．０ｇ、グリシン（バ
イオ・ラッド，カタログ番号161-0717）４３．２ｇ、及
びＳＤＳ３．０ｇに蒸留水を加えて６００ｍｌにし、こ
れを蒸留水で５倍希釈したものを用いた。サンプルバッ
ファーは、蒸留水２ｍｌ、２Ｍトリス−ＨＣｌ（ｐＨ
６．８）５００μｌ、ＳＤＳ０．３２ｇ、β−メルカプ
トエタノール８００μｌ、及び０．０５％（ｗ／ｖ）ブ
ロモフェノールブルー（バイオ・ラッド，カタログ番号
161-0404）４００μｌを混合したものを用いた。
Ｐ４７ポリクローナル抗体特性の評価 Ｌａｅｍｍｌｉのバッファー系（Laemmli, N. K., "Nat
ure", 283 : pp. 249-256, 1970)を用いて、ＨｅＬａ細
胞のライセートのドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）ポ
リアクリルアミドゲル電気泳動を、以下の方法に従って
行った。濃縮ゲルの調製は次のように行った。蒸留水
６．１ｍｌ、０．５Ｍトリス（バイオ・ラッド，カタロ
グ番号161-0716）−ＨＣｌ（ｐＨ６．８）２．５ｍｌ、
１０％ＳＤＳ（バイオ・ラッド，カタログ番号161-030
1）１００μｌ、及び３０％アクリルアミド（バイオ・
ラッド，カタログ番号161-0101）／Ｎ，Ｎ’−メチレン
ビスアクリルアミド（バイオ・ラッド，カタログ番号16
1-0201）１．３ｍｌを混合して、１５分間脱気し、１０
％過硫酸アンモニウム（バイオ・ラッド，カタログ番号
161-0700）５０μｌ及びＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメ
チルエチレンジアミン（以下、ＴＥＭＥＤと略称する）
（バイオ・ラッド，カタログ番号161-0800）１０μｌを
加えて、濃縮ゲルを調製した。また、分離ゲルの調製は
次のように行った。蒸留水４．０４５ｍｌ、１．５Ｍト
リス−ＨＣｌ（ｐＨ８．８）２．５ｍｌ、１０％ＳＤＳ
１００μｌ、及び３０％アクリルアミド／Ｎ，Ｎ’−メ
チレンビスアクリルアミド３．３ｍｌをゆっくり混合し
て、１５分間アスピレータで脱気し、１０％過硫酸アン
モニウム５０μｌ、及びＴＥＭＥＤ５μｌを加えた。泳
動バッファーとしては、トリス９．０ｇ、グリシン（バ
イオ・ラッド，カタログ番号161-0717）４３．２ｇ、及
びＳＤＳ３．０ｇに蒸留水を加えて６００ｍｌにし、こ
れを蒸留水で５倍希釈したものを用いた。サンプルバッ
ファーは、蒸留水２ｍｌ、２Ｍトリス−ＨＣｌ（ｐＨ
６．８）５００μｌ、ＳＤＳ０．３２ｇ、β−メルカプ
トエタノール８００μｌ、及び０．０５％（ｗ／ｖ）ブ
ロモフェノールブルー（バイオ・ラッド，カタログ番号
161-0404）４００μｌを混合したものを用いた。
【００３１】５％二酸化炭素条件下で、３７℃で、１０
％非働化ウシ胎児血清（以下、ＦＢＳと略称する）を含
むＭＥＭ培地中でＨｅＬａ細胞を培養し、そのライセー
トを調製した。得られたＨｅＬａ細胞ライセートのＳＤ
Ｓ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動を行った後、０．
４５μｍニトロセルロース膜（Schleicher & Schuell，
カタログ番号401196）にゲルを密着させ、タンパク質転
写装置（Trans-Blot Electrophoretic Transfer Cell：
バイオ・ラッド）を用いて、室温にて１００Ｖで、３時
間ブロッティングを行った。ブロッティングバッファー
としては０．０２５Ｍトリス及び０．１９２Ｍグリシン
よりなりｐＨ８．５に調整されたトリスグリシンバッフ
ァー（Tris Gly Running and Blotting Buffer；Enprot
ech,米国マサチューセッツ州，カタログ番号SA100034）
にメチルアルコールを２０％になるように加えて調製し
たバッファーを用いた。ブロッティング後、５％スキム
ミルク（雪印乳業）を含むＰＢＳ（−）溶液にニトロセ
ルロース膜を室温にて３０分間浸し、ブロッキングを行
った。ブロッキング後、スクリーナーブロッター（サン
プラテック）を用いて、前項（１）で取得したルーラッ
ト血清を１次抗体として、１次抗体反応を行った。１次
抗体反応は、２％スキムミルク（雪印乳業）を含むＰＢ
Ｓ（−）にて１０倍希釈した前記ルーラット血清２００
μｌで、室温にて１２０分間行った。１次抗体反応終了
後、スロー・ロッキング・シェイカーを用いて、ＰＢＳ
（−）で５分間の振盪を２回、０．１％Ｔｗｅｅｎ２０
（バイオ・ラッド，カタログ番号170-6531）を含むＰＢ
Ｓ（−）溶液で１５分間の振盪を４回、更にＰＢＳ
（−）で５分間の振盪を２回行うことにより、ニトロセ
ルロース膜を洗浄した。洗浄終了後、ペルオキシダーゼ
標識ヤギ抗ラットＩｇＧ抗体（Southern Biotechnolog
y，カタログ番号3030-05)を、２％スキムミルクを含む
ＰＢＳ（−）溶液で５０００倍に希釈した溶液５ｍｌを
用いて、２次抗体反応を２時間行った。反応終了後、Ｐ
ＢＳ（−）溶液、及び０．１％Ｔｗｅｅｎ２０を含むＰ
ＢＳ（−）溶液で、１次抗体反応後の洗浄と同じ条件下
にてニトロセルロース膜の洗浄を行った。
％非働化ウシ胎児血清（以下、ＦＢＳと略称する）を含
むＭＥＭ培地中でＨｅＬａ細胞を培養し、そのライセー
トを調製した。得られたＨｅＬａ細胞ライセートのＳＤ
Ｓ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動を行った後、０．
４５μｍニトロセルロース膜（Schleicher & Schuell，
カタログ番号401196）にゲルを密着させ、タンパク質転
写装置（Trans-Blot Electrophoretic Transfer Cell：
バイオ・ラッド）を用いて、室温にて１００Ｖで、３時
間ブロッティングを行った。ブロッティングバッファー
としては０．０２５Ｍトリス及び０．１９２Ｍグリシン
よりなりｐＨ８．５に調整されたトリスグリシンバッフ
ァー（Tris Gly Running and Blotting Buffer；Enprot
ech,米国マサチューセッツ州，カタログ番号SA100034）
にメチルアルコールを２０％になるように加えて調製し
たバッファーを用いた。ブロッティング後、５％スキム
ミルク（雪印乳業）を含むＰＢＳ（−）溶液にニトロセ
ルロース膜を室温にて３０分間浸し、ブロッキングを行
った。ブロッキング後、スクリーナーブロッター（サン
プラテック）を用いて、前項（１）で取得したルーラッ
ト血清を１次抗体として、１次抗体反応を行った。１次
抗体反応は、２％スキムミルク（雪印乳業）を含むＰＢ
Ｓ（−）にて１０倍希釈した前記ルーラット血清２００
μｌで、室温にて１２０分間行った。１次抗体反応終了
後、スロー・ロッキング・シェイカーを用いて、ＰＢＳ
（−）で５分間の振盪を２回、０．１％Ｔｗｅｅｎ２０
（バイオ・ラッド，カタログ番号170-6531）を含むＰＢ
Ｓ（−）溶液で１５分間の振盪を４回、更にＰＢＳ
（−）で５分間の振盪を２回行うことにより、ニトロセ
ルロース膜を洗浄した。洗浄終了後、ペルオキシダーゼ
標識ヤギ抗ラットＩｇＧ抗体（Southern Biotechnolog
y，カタログ番号3030-05)を、２％スキムミルクを含む
ＰＢＳ（−）溶液で５０００倍に希釈した溶液５ｍｌを
用いて、２次抗体反応を２時間行った。反応終了後、Ｐ
ＢＳ（−）溶液、及び０．１％Ｔｗｅｅｎ２０を含むＰ
ＢＳ（−）溶液で、１次抗体反応後の洗浄と同じ条件下
にてニトロセルロース膜の洗浄を行った。
【００３２】余分なＰＢＳ（−）溶液を除去した後、ウ
ェスタンブロッティング検出試薬（ECL Western blotti
ng detection reagent；アマーシャム，カタログ番号RP
N2106)をニトロセルロース膜上に振りかけ、１分間室温
にて静置した後、余分な検出試薬を除去し、ニトロセル
ロース膜をラップに包み、反応面をＸ線フィルム（コダ
ック X-OMAT, AR,カタログ番号165 1454）に密着させて
露光させた。現像後、ＨＳＰ４７に相当する分子量４７
キロダルトン付近のバンドを測定することによって、抗
ＨＳＰ４７ポリクローナル抗体の反応性の検討を行っ
た。抗体価の上昇が確認された血清を、抗ヒトＨＳＰ４
７ポリクローナル抗体として、以下の実施例に用いた。
ェスタンブロッティング検出試薬（ECL Western blotti
ng detection reagent；アマーシャム，カタログ番号RP
N2106)をニトロセルロース膜上に振りかけ、１分間室温
にて静置した後、余分な検出試薬を除去し、ニトロセル
ロース膜をラップに包み、反応面をＸ線フィルム（コダ
ック X-OMAT, AR,カタログ番号165 1454）に密着させて
露光させた。現像後、ＨＳＰ４７に相当する分子量４７
キロダルトン付近のバンドを測定することによって、抗
ＨＳＰ４７ポリクローナル抗体の反応性の検討を行っ
た。抗体価の上昇が確認された血清を、抗ヒトＨＳＰ４
７ポリクローナル抗体として、以下の実施例に用いた。
【００３３】実施例２：ヒト培養癌細胞のＨＳＰ発現量
の測定 （１）ヒト培養癌細胞の培養 以下の各種ヒト培養癌細胞を、５％二酸化炭素条件下
で、熱ショック処理時以外は、３７℃で培養した。肺癌
細胞株Ｈ６９（ＡＴＣＣ ＨＴＢ １１９）、胃癌細胞
株ＫＡＴＯ III （ＡＴＣＣ ＨＴＢ １０３）、大腸
癌細胞株ＣＯＬＯ２０５（ＡＴＣＣ ＣＣＬ ２２
２）、及び前立腺癌細胞株ＤＵ １４５（ＡＴＣＣ Ｈ
ＴＢ ８１）は、１０％非働化ＦＢＳ含有ＲＰＭＩ１６
４０培地中で培養した。乳癌細胞株ＭＣＦ７（ＡＴＣＣ
ＨＴＢ ２２）は、１０-8Ｍβ−エストラジオール及
び１０％非働化ＦＢＳ含有ＲＰＭＩ１６４０培地中で培
養した。腎癌細胞株ＡＣＨＮ（ＡＴＣＣ ＣＲＬ １６
１１）は、１０％非働化ＦＢＳ含有ＭＥＭ培地にて培養
した。
の測定 （１）ヒト培養癌細胞の培養 以下の各種ヒト培養癌細胞を、５％二酸化炭素条件下
で、熱ショック処理時以外は、３７℃で培養した。肺癌
細胞株Ｈ６９（ＡＴＣＣ ＨＴＢ １１９）、胃癌細胞
株ＫＡＴＯ III （ＡＴＣＣ ＨＴＢ １０３）、大腸
癌細胞株ＣＯＬＯ２０５（ＡＴＣＣ ＣＣＬ ２２
２）、及び前立腺癌細胞株ＤＵ １４５（ＡＴＣＣ Ｈ
ＴＢ ８１）は、１０％非働化ＦＢＳ含有ＲＰＭＩ１６
４０培地中で培養した。乳癌細胞株ＭＣＦ７（ＡＴＣＣ
ＨＴＢ ２２）は、１０-8Ｍβ−エストラジオール及
び１０％非働化ＦＢＳ含有ＲＰＭＩ１６４０培地中で培
養した。腎癌細胞株ＡＣＨＮ（ＡＴＣＣ ＣＲＬ １６
１１）は、１０％非働化ＦＢＳ含有ＭＥＭ培地にて培養
した。
【００３４】（２）塩化ベルベリン処理及び熱ショック
処理 播種２日後の前記各種培養ヒト癌細胞の培地中に、最終
濃度２０μＭになるように前記式（II）で表される塩化
ベルベリン（松浦薬業）を添加し、２４時間培養した。
その後、４５℃にて１５分間熱ショック処理をしてか
ら、３７℃にて終夜培養した。対照試験は、塩化ベルベ
リンを添加しないこと以外は前記と同様に実施した。
処理 播種２日後の前記各種培養ヒト癌細胞の培地中に、最終
濃度２０μＭになるように前記式（II）で表される塩化
ベルベリン（松浦薬業）を添加し、２４時間培養した。
その後、４５℃にて１５分間熱ショック処理をしてか
ら、３７℃にて終夜培養した。対照試験は、塩化ベルベ
リンを添加しないこと以外は前記と同様に実施した。
【００３５】（３）ヒト培養癌細胞でのＨＳＰ発現量の
測定 前項（２）で処理した各細胞を、以下に示す方法により
ホモジナイズし、ＨＳＰ発現量をウェスタンブロット法
にて測定した。すなわち、前項（２）で処理した細胞を
ＰＢＳ（−）で洗浄した後、ライシスバッファー（ｌｙ
ｓｉｓ ｂｕｆｆｅｒ）〔１．０％ＮＰ−４０、０．１
５Ｍ塩化ナトリウム、５０ｍＭトリス−ＨＣｌ（ｐＨ
８．０）、５ｍＭ−ＥＤＴＡ、２ｍＭ−Ｎ−エチルマレ
イミド、２ｍＭフェニルメチルスルホニルフルオリド、
２μｇ／ｍｌロイペプチン及び２μｇ／ｍｌペプスタチ
ン〕１ｍｌを加え、氷上で２０分間静置した。その後、
４℃で１２０００ｒｐｍにて、２０分間、遠心を行っ
た。遠心後の上清１０μｌをＰＢＳ（−）７９０μｌに
加え、更にプロテインアッセイ染色液（Dye Reagent Co
ncentrate : バイオラッド，カタログ番号500-0006）２
００μｌを加えた。５分間、室温にて静置した後、５９
５ｎｍで吸光度を測定してタンパク質定量を行った。タ
ンパク質定量を行った試料を用いて、Ｌａｅｍｍｌｉの
バッファー系にて、等量のタンパク質を含むライセート
のＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動を行った。電
気泳動後、実施例１で述べた方法に従って、ブロッティ
ング及びそれに続くブロッキングを行った。すなわち、
タンパク質転写装置（Trans-Blot Electrophoretic Tra
nsfer Cell：バイオ・ラッド）を用いて、室温にて１０
０Ｖにて、０．４５μｍニトロセルロース膜（Schleich
er & Schuell，カタログ番号401196）にゲルを密着さ
せ、３時間ブロッティングを行った。ブロッティングバ
ッファーとしては、前記実施例１（３）で用いたバッフ
ァーと同じものを用いた。ブロッティング後、ニトロセ
ルロース膜を１０％スキムミルク（雪印乳業）−ＰＢＳ
（−）溶液に室温にて３０分間、インキュベートし非特
異的結合をブロックした。
測定 前項（２）で処理した各細胞を、以下に示す方法により
ホモジナイズし、ＨＳＰ発現量をウェスタンブロット法
にて測定した。すなわち、前項（２）で処理した細胞を
ＰＢＳ（−）で洗浄した後、ライシスバッファー（ｌｙ
ｓｉｓ ｂｕｆｆｅｒ）〔１．０％ＮＰ−４０、０．１
５Ｍ塩化ナトリウム、５０ｍＭトリス−ＨＣｌ（ｐＨ
８．０）、５ｍＭ−ＥＤＴＡ、２ｍＭ−Ｎ−エチルマレ
イミド、２ｍＭフェニルメチルスルホニルフルオリド、
２μｇ／ｍｌロイペプチン及び２μｇ／ｍｌペプスタチ
ン〕１ｍｌを加え、氷上で２０分間静置した。その後、
４℃で１２０００ｒｐｍにて、２０分間、遠心を行っ
た。遠心後の上清１０μｌをＰＢＳ（−）７９０μｌに
加え、更にプロテインアッセイ染色液（Dye Reagent Co
ncentrate : バイオラッド，カタログ番号500-0006）２
００μｌを加えた。５分間、室温にて静置した後、５９
５ｎｍで吸光度を測定してタンパク質定量を行った。タ
ンパク質定量を行った試料を用いて、Ｌａｅｍｍｌｉの
バッファー系にて、等量のタンパク質を含むライセート
のＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動を行った。電
気泳動後、実施例１で述べた方法に従って、ブロッティ
ング及びそれに続くブロッキングを行った。すなわち、
タンパク質転写装置（Trans-Blot Electrophoretic Tra
nsfer Cell：バイオ・ラッド）を用いて、室温にて１０
０Ｖにて、０．４５μｍニトロセルロース膜（Schleich
er & Schuell，カタログ番号401196）にゲルを密着さ
せ、３時間ブロッティングを行った。ブロッティングバ
ッファーとしては、前記実施例１（３）で用いたバッフ
ァーと同じものを用いた。ブロッティング後、ニトロセ
ルロース膜を１０％スキムミルク（雪印乳業）−ＰＢＳ
（−）溶液に室温にて３０分間、インキュベートし非特
異的結合をブロックした。
【００３６】ブロッキング後、ニトロセルロース膜の上
で、実施例１で製造した抗ヒトＨＳＰ４７ラットポリク
ローナル抗体により、１次抗体反応を行った。その後、
ＰＢＳ（−）で５分間ずつ、溶液を取り替えて２回の洗
浄をスロー・ロッキング・シェイカーによって行い、更
にＰＢＳ（−）−０．１％Ｔｗｅｅｎ２０（バイオ・ラ
ッド，カタログ番号170-6531）溶液で１５分間ずつ、溶
液を取り替えて４回の洗浄を行った。最終的に、ＰＢＳ
（−）で５分間ずつ、２回の洗浄を行った。洗浄終了
後、ペルオキシダーゼ標識ヤギ抗ラットＩｇＧ抗体（So
uthern Biotechnology，カタログ番号3030-05)を、２％
スキムミルクを含むＰＢＳ（−）溶液で５０００倍に希
釈して調製した抗体溶液５ｍｌを用いて、２時間、２次
抗体反応を行った。反応終了後、ニトロセルロース膜に
関して、ＰＢＳ（−）溶液で５分間ずつ溶液を変えて２
回、更にＰＢＳ（−）−０．１％Ｔｗｅｅｎ２０溶液で
１５分間ずつ溶液を変えて５回の洗浄をスロー・ロッキ
ング・シェイカーにより行った。最後にＰＢＳ（−）溶
液で５分間ずつ２回の洗浄を行った。余分なＰＢＳ
（−）溶液を除去した後、ウェスタンブロッティング検
出試薬（ECL Westernblotting detection reagent；Ame
rsham，カタログ番号RPN2106)をニトロセルロース膜上
に振りかけ、１分間インキュベートした後、余分な検出
試薬を除去し、ニトロセルロース膜をラップに包み、反
応面をＸ線フィルム（コダック X-OMAT,AR,カタログ番
号165 1454）に密着させて露光し、現像してＨＳＰ４７
の有無の検討を行った。結果を表１に示す。表中、
「↓」は、対照に比べて、塩化ベルベリン処理によりＨ
ＳＰ４７発現量が減少したことを意味する。
で、実施例１で製造した抗ヒトＨＳＰ４７ラットポリク
ローナル抗体により、１次抗体反応を行った。その後、
ＰＢＳ（−）で５分間ずつ、溶液を取り替えて２回の洗
浄をスロー・ロッキング・シェイカーによって行い、更
にＰＢＳ（−）−０．１％Ｔｗｅｅｎ２０（バイオ・ラ
ッド，カタログ番号170-6531）溶液で１５分間ずつ、溶
液を取り替えて４回の洗浄を行った。最終的に、ＰＢＳ
（−）で５分間ずつ、２回の洗浄を行った。洗浄終了
後、ペルオキシダーゼ標識ヤギ抗ラットＩｇＧ抗体（So
uthern Biotechnology，カタログ番号3030-05)を、２％
スキムミルクを含むＰＢＳ（−）溶液で５０００倍に希
釈して調製した抗体溶液５ｍｌを用いて、２時間、２次
抗体反応を行った。反応終了後、ニトロセルロース膜に
関して、ＰＢＳ（−）溶液で５分間ずつ溶液を変えて２
回、更にＰＢＳ（−）−０．１％Ｔｗｅｅｎ２０溶液で
１５分間ずつ溶液を変えて５回の洗浄をスロー・ロッキ
ング・シェイカーにより行った。最後にＰＢＳ（−）溶
液で５分間ずつ２回の洗浄を行った。余分なＰＢＳ
（−）溶液を除去した後、ウェスタンブロッティング検
出試薬（ECL Westernblotting detection reagent；Ame
rsham，カタログ番号RPN2106)をニトロセルロース膜上
に振りかけ、１分間インキュベートした後、余分な検出
試薬を除去し、ニトロセルロース膜をラップに包み、反
応面をＸ線フィルム（コダック X-OMAT,AR,カタログ番
号165 1454）に密着させて露光し、現像してＨＳＰ４７
の有無の検討を行った。結果を表１に示す。表中、
「↓」は、対照に比べて、塩化ベルベリン処理によりＨ
ＳＰ４７発現量が減少したことを意味する。
【００３７】
【表１】癌種 癌細胞 肺 Ｈ６９ ↓ 胃 ＫＡＴＯ III ↓ 大腸 ＣＯＬＯ ２０５ ↓ 乳 ＭＣＦ７ ↓ 前立腺 ＤＵ １４５ ↓腎臓 ＡＣＨＮ ↓
【００３８】対照試験、すなわち、塩化ベルベリンを添
加しなかった細胞では、肺癌細胞株Ｈ６９、胃癌細胞株
ＫＡＴＯ III 、大腸癌細胞株ＣＯＬＯ ２０５、乳癌
細胞株ＭＣＦ７、前立腺癌細胞株ＤＵ １４５、及び腎
癌細胞株ＡＣＨＮにおいて、分子量約４７ｋＤのバンド
が一本検出された。なお、分子量は、分子量マーカー
（ウシカーボニックアンヒドラーゼ、卵白オバルブミ
ン、及びウシ血清アルブミン）により決定した。塩化ベ
ルベリンを添加した細胞では、肺癌細胞株Ｈ６９、胃癌
細胞株ＫＡＴＯ III 、大腸癌細胞株ＣＯＬＯ ２０
５、乳癌細胞株ＭＣＦ７、及び前立腺癌細胞株ＤＵ １
４５において、分子量約４７ｋＤのバンドが検出されな
かった。腎癌細胞株ＡＣＨＮにおいては、対照試験に比
べて分子量約４７ｋＤのバンドの濃度が薄くなった。す
なわち、塩化ベルベリンは、ＨＳＰ４７の発現を抑制す
る合成抑制剤の活性を有するものと結論づけられ、この
事実は、塩化ベルベリンが細胞外マトリックス産生の亢
進に抑制的に働くことを示している。
加しなかった細胞では、肺癌細胞株Ｈ６９、胃癌細胞株
ＫＡＴＯ III 、大腸癌細胞株ＣＯＬＯ ２０５、乳癌
細胞株ＭＣＦ７、前立腺癌細胞株ＤＵ １４５、及び腎
癌細胞株ＡＣＨＮにおいて、分子量約４７ｋＤのバンド
が一本検出された。なお、分子量は、分子量マーカー
（ウシカーボニックアンヒドラーゼ、卵白オバルブミ
ン、及びウシ血清アルブミン）により決定した。塩化ベ
ルベリンを添加した細胞では、肺癌細胞株Ｈ６９、胃癌
細胞株ＫＡＴＯ III 、大腸癌細胞株ＣＯＬＯ ２０
５、乳癌細胞株ＭＣＦ７、及び前立腺癌細胞株ＤＵ １
４５において、分子量約４７ｋＤのバンドが検出されな
かった。腎癌細胞株ＡＣＨＮにおいては、対照試験に比
べて分子量約４７ｋＤのバンドの濃度が薄くなった。す
なわち、塩化ベルベリンは、ＨＳＰ４７の発現を抑制す
る合成抑制剤の活性を有するものと結論づけられ、この
事実は、塩化ベルベリンが細胞外マトリックス産生の亢
進に抑制的に働くことを示している。
【００３９】
【発明の効果】以上詳述したように、本発明の合成抑制
剤は、例えば、肝硬変、間質性肺疾患、慢性腎不全（又
は慢性腎不全に陥いる疾患）、心肥大、術後の瘢痕や熱
傷性瘢痕、交通事故等の後に生じるケロイドや肥厚性瘢
痕、強皮症、動脈硬化、又は関節リウマチなどの細胞外
マトリックス産生の亢進の病態を示す病気に罹患した細
胞にみられるコラーゲン合成亢進を改善する作用を有す
る。従って、本発明による合成抑制剤を投与することに
より、臓器、組織の線維化、硬化が阻止され、その結
果、前記病気の患者の生理学的状態を有効に改善させ、
前記病気を効果的に治療することができる。また、本発
明の合成抑制剤は、血管新生の異常増殖を伴う各種疾患
の予防治療にも有用である。更に、Ｉ型コラーゲンとフ
ィブロネクチンを基本骨格とする間質が、癌の転移にお
いて離脱した癌細胞が近傍の脈管に侵入するまでのガイ
ド役を果たすことが、明らかとなっているので、本発明
の合成抑制剤を投与することにより、癌の転移を抑制す
ることも可能である。
剤は、例えば、肝硬変、間質性肺疾患、慢性腎不全（又
は慢性腎不全に陥いる疾患）、心肥大、術後の瘢痕や熱
傷性瘢痕、交通事故等の後に生じるケロイドや肥厚性瘢
痕、強皮症、動脈硬化、又は関節リウマチなどの細胞外
マトリックス産生の亢進の病態を示す病気に罹患した細
胞にみられるコラーゲン合成亢進を改善する作用を有す
る。従って、本発明による合成抑制剤を投与することに
より、臓器、組織の線維化、硬化が阻止され、その結
果、前記病気の患者の生理学的状態を有効に改善させ、
前記病気を効果的に治療することができる。また、本発
明の合成抑制剤は、血管新生の異常増殖を伴う各種疾患
の予防治療にも有用である。更に、Ｉ型コラーゲンとフ
ィブロネクチンを基本骨格とする間質が、癌の転移にお
いて離脱した癌細胞が近傍の脈管に侵入するまでのガイ
ド役を果たすことが、明らかとなっているので、本発明
の合成抑制剤を投与することにより、癌の転移を抑制す
ることも可能である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 35/78 ＡＣＤ Ａ６１Ｋ 35/78 ＡＣＤＦ ＡＣＳ ＡＣＳＫ Ｃ０７Ｄ 491/147 Ｃ０７Ｄ 491/147
Claims (3)
- 【請求項１】 式（Ｉ）： 【化１】 （式中、Ｒ1 及びＲ2 は炭素数１〜３のアルキル基であ
る）で表されるベルベリン誘導体又はその薬剤学的に許
容される塩を有効成分として含有することを特徴とす
る、分子量４７キロダルトンの熱ショックタンパク質の
合成抑制剤。 - 【請求項２】 式（Ｉ）： 【化２】 （式中、Ｒ1 及びＲ2 は炭素数１〜３のアルキル基であ
る）で表されるベルベリン誘導体又はその薬剤学的に許
容される塩を含有する植物の抽出物を有効成分として含
有することを特徴とする、分子量４７キロダルトンの熱
ショックタンパク質の合成抑制剤。 - 【請求項３】 オウバク又は黄連の抽出物を有効成分と
して含有することを特徴とする、分子量４７キロダルト
ンの熱ショックタンパク質の合成抑制剤。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8177534A JPH107569A (ja) | 1996-06-18 | 1996-06-18 | ベルベリン誘導体含有ｈｓｐ４７合成抑制剤 |
| EP97109805A EP0813871A1 (en) | 1996-06-18 | 1997-06-17 | Berberine derivates for inhibiting production of HSP47 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8177534A JPH107569A (ja) | 1996-06-18 | 1996-06-18 | ベルベリン誘導体含有ｈｓｐ４７合成抑制剤 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH107569A true JPH107569A (ja) | 1998-01-13 |
Family
ID=16032623
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8177534A Pending JPH107569A (ja) | 1996-06-18 | 1996-06-18 | ベルベリン誘導体含有ｈｓｐ４７合成抑制剤 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0813871A1 (ja) |
| JP (1) | JPH107569A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2000054793A1 (en) * | 1999-03-18 | 2000-09-21 | Medvill Co., Ltd. | Pharmaceutical composition comprising mixed aqueous extract of anemarrhena rhizoma and phellodendron bark for analgesic and anti-inflammation |
| WO2001082941A1 (en) * | 2000-05-02 | 2001-11-08 | Medvill Co., Ltd. | Composition for treatment of b-type hepatitis and liver cirrhosis |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2004503463A (ja) * | 1998-08-24 | 2004-02-05 | ザ ボード オブ トラスティーズ オブ ザ リーランド スタンフォード ジュニア ユニバーシティ | 免疫系媒介損傷から器官、組織および細胞を保護するための組成物および方法 |
| KR20010112798A (ko) * | 2000-06-15 | 2001-12-22 | 송기원 | 마이토젠에 의해 활성화되는 단백질에 대한 인산화 효소의활성을 억제하는 프로토베르베린 유도체 |
| KR100383285B1 (ko) * | 2000-06-22 | 2003-05-09 | (주)뉴트리산업 | 항균 및 항진균 활성을 갖는 신규한 베르베루빈 유도체와이의 염 |
| CN104127414B (zh) * | 2013-05-03 | 2018-04-13 | 中国科学院上海药物研究所 | 一种六氢二苯并[a,g]喹嗪类化合物的药物用途 |
| CN108187016A (zh) * | 2018-03-06 | 2018-06-22 | 周建福 | 一种治疗银屑病的中药组合物 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS55155056A (en) * | 1979-05-24 | 1980-12-03 | Shikamitsu Honsha:Kk | Production of yellow coloring matter for food using berberine as raw material |
| JPH04193830A (ja) * | 1990-11-27 | 1992-07-13 | Tsumura & Co | 抗腎炎剤 |
| US5690944A (en) * | 1994-12-20 | 1997-11-25 | Chesebrough-Pond's Usa Co., Division Of Conopco, Inc. | Cosmetic compositions containing lactate dehydrogenase inhibitors |
| AU689036B2 (en) * | 1995-05-10 | 1998-03-19 | Kureha Chemical Industry Co., Ltd. | Pharmaceutical composition containing substance inhibiting HSP47 production |
-
1996
- 1996-06-18 JP JP8177534A patent/JPH107569A/ja active Pending
-
1997
- 1997-06-17 EP EP97109805A patent/EP0813871A1/en not_active Withdrawn
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2000054793A1 (en) * | 1999-03-18 | 2000-09-21 | Medvill Co., Ltd. | Pharmaceutical composition comprising mixed aqueous extract of anemarrhena rhizoma and phellodendron bark for analgesic and anti-inflammation |
| WO2001082941A1 (en) * | 2000-05-02 | 2001-11-08 | Medvill Co., Ltd. | Composition for treatment of b-type hepatitis and liver cirrhosis |
| KR100389131B1 (ko) * | 2000-05-02 | 2003-06-25 | (주) 메드빌 | 마타리와 황백피의 혼합 추출물로 구성된 비형 간염 및간경화 치료 조성물 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0813871A1 (en) | 1997-12-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US9938320B2 (en) | Peptides for promoting angiogenesis and use thereof | |
| KR20020035855A (ko) | 약용인삼을 포함하는 뇌세포 또는 신경세포 보호제 | |
| JPH107559A (ja) | Ｈｓｐ２７ファミリーに属するタンパク質のベルベリン誘導体含有合成抑制剤 | |
| JPH107569A (ja) | ベルベリン誘導体含有ｈｓｐ４７合成抑制剤 | |
| JPH1036388A (ja) | ジンセノサイド類含有ｈｓｐ４７合成抑制剤 | |
| JPH10330256A (ja) | グリチルレチン酸化合物含有ｈｓｐ４７合成抑制剤 | |
| US20230340491A1 (en) | Compositions and methods for treating metabolic and cardiovascular diseases | |
| JP3003978B2 (ja) | ペオニフロリン含有ｈｓｐ４７合成抑制剤 | |
| JPH09227365A (ja) | ジンゲロール含有ｈｓｐ４７合成抑制剤 | |
| JPH1029940A (ja) | エボジアミン誘導体含有ｈｓｐ４７合成抑制剤 | |
| US9249185B2 (en) | Peptides for promoting angiogenesis and an use thereof | |
| JPH10330268A (ja) | ピラノピラノン化合物含有ｈｓｐ４７合成抑制剤 | |
| JP2933511B2 (ja) | フェルラ酸含有ｈｓｐ４７合成抑制剤 | |
| JPH1045575A (ja) | シコニン含有ｈｓｐ４７合成抑制剤 | |
| JPH1036262A (ja) | アコニチン含有ｈｓｐ４７合成抑制剤 | |
| JPH1045573A (ja) | マグノロール含有ｈｓｐ４７合成抑制剤 | |
| KR102421601B1 (ko) | 퇴행성 신경질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물 | |
| JPH1045604A (ja) | アロイン誘導体含有ｈｓｐ４７合成抑制剤 | |
| JPH1036264A (ja) | コリダリン誘導体含有ｈｓｐ４７合成抑制剤 | |
| JPH08301781A (ja) | Ｈｓｐ４７合成抑制剤 | |
| JP2892300B2 (ja) | Ｈｓｐ４７合成抑制剤 | |
| JP2023521974A (ja) | メリッサ・オフィシナリス葉の分画抽出物及びそれを含む新規の医薬組成物。 | |
| JPH10330249A (ja) | レチノール化合物含有ｈｓｐ４７合成抑制剤 | |
| EP2709643B1 (en) | Compositions comprising extracts or materials derived from palm oil vegetation liguor for inhibition of vision loss due to macular degeneration | |
| TWI797455B (zh) | 安卓錠化合物用於預防或治療非酒精性脂肪肝病的用途 |