JPH09227365A - ジンゲロール含有ｈｓｐ４７合成抑制剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 コラーゲン合成を抑制することによって、細
胞外マトリックス産生の亢進の病態を示す病気を治療す
ることができる、分子量４７キロダルトンの熱ショック
タンパク質の合成抑制剤を提供する。 【解決手段】 ジンゲロール又はその誘導体を有効成分
として含有する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、ジンゲロール又は
その誘導体、特に［６］−ジンゲロールを有効成分とし
て含有する、分子量４７キロダルトン（ｋＤ）の熱ショ
ックタンパク質（以下、ＨＳＰ４７と称する）の合成抑
制剤に関する。本発明のＨＳＰ４７合成抑制剤は、特
に、臓器内のコラーゲンの合成を抑制することにより肝
硬変、間質性肺疾患、慢性腎不全（又は慢性腎不全に陥
いる疾患）、術後の瘢痕や熱傷性瘢痕、交通事故等の後
に生じるケロイドや肥厚性瘢痕、強皮症、動脈硬化、又
は関節リウマチなどの細胞外マトリックス（細胞外基
質）産生亢進の病態を示す病気の患者の生理学的状態を
有効に改善させ、肝硬変、間質性肺疾患、慢性腎不全
（又は慢性腎不全に陥いる疾患）、術後の瘢痕や熱傷性
瘢痕、交通事故等の後に生じるケロイドや肥厚性瘢痕、
強皮症、動脈硬化、又は関節リウマチなどの細胞外マト
リックス産生亢進の病態を示す病気を効果的に治療する
ことができる。

【０００２】

【従来の技術】近年、コラーゲンなどの細胞外マトリッ
クスの産生の亢進の病態を示す病気が大きな問題となっ
ている。ここでいう細胞外マトリックス産生の亢進の病
態を示す病気とは、例えば肝硬変、間質性肺疾患、慢性
腎不全（又は慢性腎不全に陥いる疾患）、術後の瘢痕や
熱傷性瘢痕、交通事故等の後に生じるケロイドや肥厚性
瘢痕、強皮症、動脈硬化、又は関節リウマチなどを含
む。

【０００３】例えば、死亡者がわが国だけでも年間約２
万人にものぼるといわれている肝硬変は、肝臓が結合組
織の増殖のため固くなる病気の総称で、種々の慢性肝疾
患の終末像であるといわれ、肝全体にわたるびまん性の
肝線維症である。すなわち、肝炎などの肝傷害が長期に
及ぶ慢性肝炎においては、線維芽細胞や伊東細胞などの
細胞外マトリックス（特にＩ型コラーゲン）産生の著し
い亢進を伴い肝臓は線維化する。肝の線維化が慢性的に
進行すると、ますます正常な肝再生は妨害され、肝細胞
に置き換わり、線維芽細胞とＩ型コラーゲンを主体とす
る細胞外マトリックスが肝組織のかなりの部分を占め、
多くの凝小葉からなる肝硬変に至る。肝硬変の進行に伴
い、線維隔壁が肝全体に進展し、その結果生じる血流の
異常は、肝実質細胞の変性を更に押し進める一因にもな
り、肝硬変における悪循環が続くことになり、更にはア
ルコール、ウイルス、自己免疫等種々の原因によって、
肝臓中に多量の膠質線維が生成され、肝細胞の壊死と機
能消失とが生じ、肝硬変患者は遂には死に至る。Ｉ型コ
ラーゲンは正常肝では全タンパク質量の約２％を占める
が、肝硬変となると１０〜３０％を占めるようになる。

【０００４】また、間質性肺疾患は、肺胞及び肺胞管の
みならず、しばしば呼吸細気管支や終末気管支も巻き込
む下部気道の慢性炎症（肺胞炎 alveolitis)とその結果
である間質の線維化と肺胞内線維化を特徴とする疾患群
である。ここでいう間質性肺疾患とは、例えば、間質性
肺炎、肺線維症などのびまん性間質性肺疾患、特発性肺
線維症、透過性肺水腫、膠原病肺、サルコイドーシスな
どを含む。間質性肺疾患においては、線維化組織では細
胞外マトリックスの過剰な産生と蓄積が認められてい
る。すなわち、間質性肺疾患の肺線維化組織では、肥大
した間質に著明なＩ型及び III型コラーゲンの集積がみ
られており、特に III型コラーゲンは、線維化の早期に
肥厚した肺胞中隔に集積し、病期が進行し、後期にはＩ
型コラーゲンが増加し、主要なコラーゲンとなる。基底
膜は早期に破壊されており、肺胞腔側へのコラーゲン線
維の侵入が観察される。

【０００５】また、慢性腎不全とは慢性腎炎症候群の結
果、腎機能の荒廃により体内の恒常性が維持できなくな
った状態である。慢性腎不全の進行を病理学的にみると
糸球体硬化と間質線維化の進行である。糸球体硬化症
は、メサンギウム領域を中心とした細胞外マトリックス
の増生である。メサンギウム硬化症の成分は正常と比較
し、著明にIV型コラーゲンなどの糸球体基底膜の成分が
増加し、また間質成分であるＩ型コラーゲンも硬化症部
位に一致して増生している。すなわち、慢性に経過する
糸球体硬化に対しては、細胞外マトリックスの産生亢進
が大きな要因である。ここで慢性腎不全に陥いる疾患と
は、例えばＩｇＡ腎症、巣状糸球体硬化症、膜性増殖性
腎炎、糖尿病性腎症、慢性間質性腎炎、慢性糸球体腎炎
などを含む。その他、術後の瘢痕や熱傷性瘢痕、あるい
は強皮症、動脈硬化等の細胞外マトリックス産生亢進の
病態を示す病気は、何らかの原因によりコラーゲン合成
の異常亢進が起こり、線維化が進んで組織の硬化変化を
生ずることが主要な成因と考えられている。

【０００６】また、血管新生においても基底膜及び基底
膜中のコラーゲン合成が、重要な役割をはたすことが指
摘されている（Maragoudakis, E., Sarmonika, M., and
Panoutsacopoulous, M., "J. Pharmacol. Exp. The
r.", 244 : 729, 1988 ; Ingber, D. E., Madri, J.
A., and Folkman, J., "Endocrinology", 119 : 1768,
1986）。血管新生による疾患としては、例えば、糖尿
病性網膜症、後水晶体線維増殖症、角膜移植に伴う血管
新生、緑内症、眼腫瘍、トラコーマ、幹せん、化膿性肉
芽腫、血管腫、線維性血管腫、肥大性はん痕、肉芽、リ
ューマチ性関節炎、浮腫性硬化症、アテローム性動脈硬
化症、各種腫瘍などが知られている。このようにコラー
ゲンなどの細胞外マトリックスの産生の亢進の病態を示
す病気が大きな問題となっているにもかかわらず、従来
では副作用や薬理効果等の種々の面で満足すべき細胞外
マトリックス合成抑制剤（例えば、コラーゲン合成抑制
剤）は未だ開発されていなかったのである。

【０００７】一方、熱ショックタンパク質（heat shock
protein；ＨＳＰ、ストレスタンパク質ともいう）は、
細胞を何らかのストレス、例えば熱、重金属、薬剤、ア
ミノ酸類似体、又は低酸素（低濃度酸素）などで刺激す
ることにより、細胞に発現される一群のタンパク質であ
る。熱ショックタンパク質は、自然界に普遍的に存在し
ており、細菌、酵母、植物、昆虫、及びヒトを含む高等
動物により産生される。ＨＳＰは、その種類は多種多様
であるが、分子量の大きさからＨＳＰ９０ファミリー
（例えば、９０ｋＤ又は１１０ｋＤのＨＳＰなど）、Ｈ
ＳＰ７０ファミリー（例えば、７０〜７３ｋＤのＨＳＰ
など）、ＨＳＰ６０ファミリー（例えば、５７〜６８ｋ
ＤのＨＳＰなど）、低分子ＨＳＰファミリー（例えば、
２０ｋＤ、２５〜２８ｋＤ、又は４７ｋＤのＨＳＰな
ど）の４ファミリーに大別することができる。なお、本
明細書においては、特定分子量を有するＨＳＰを、ＨＳ
Ｐとその直後に記載する数字とによって示すものとし、
例えば、分子量４７ｋＤのＨＳＰを『ＨＳＰ４７』と称
するものとする。以上のように、ＨＳＰには多くの種類
が存在するが、これらは分子量だけでなく、構造、機
能、又は性質などもそれぞれ異なるものである。ストレ
スへの応答に加えて、これらのタンパク質の中には構成
的に合成されるものがあり、正常な環境の下で、タンパ
ク質のフォールディング、アンフォールディング、タン
パク質サブユニットの会合、タンパク質の膜輸送のよう
な、必須の生理的な役割を演じていることが示されてい
る。熱ショックタンパク質としてのこれらの機能は、分
子シャペロンと称される。

【０００８】ＨＳＰ４７は、永田等によって１９８６年
に発見されたタンパク質で、分子量４７キロダルトンの
塩基性タンパク質（ｐＩ＝９．０）である。ＨＳＰ４７
の発現が増大するにつれて、コラーゲンの合成も増加す
ることが様々な細胞で示されている（"J. Biol. Che
m.", 261 : 7531, 1986 ; "Eur. J. Biochem.", 206 :
323, 1992 ; "J. Biol. Chem.", 265 : 992, 1990 ;
"J. Clin. Invest.", 94：2481, 1994）。すなわち、Ｈ
ＳＰ４７は、細胞内で小胞体内でのプロコラーゲンのプ
ロセシング、三重鎖ヘリックス形成、あるいは小胞体か
らゴルジ装置へのプロコラーゲン輸送・分泌という局面
で、コラーゲンの特異的分子シャペロンとして機能して
いるとされているので、増大したＨＳＰ４７発現は、細
胞外マトリックスにおけるコラーゲン分子の蓄積を刺激
する。このようにコラーゲン結合熱ショックタンパク質
であるＨＳＰ４７は、発現と同様に機能においても、細
胞外マトリックスタンパク質であるコラーゲンに密接に
関連した熱ショックタンパク質である。

【０００９】

【発明が解決しようとする課題】本発明者らは、上記事
情に鑑み、肝硬変、間質性肺疾患、慢性腎不全（又は慢
性腎不全に陥いる疾患）、術後の瘢痕や熱傷性瘢痕、交
通事故等の後に生じるケロイドや肥厚性瘢痕、強皮症、
動脈硬化、又は関節リウマチなどの細胞外マトリックス
産生亢進の病態を示す病気の患者の生理学的状態を有効
に改善させ、肝硬変、間質性肺疾患、慢性腎不全（又は
慢性腎不全に陥いる疾患）、術後の瘢痕や熱傷性瘢痕、
交通事故等の後に生じるケロイドや肥厚性瘢痕、強皮
症、動脈硬化、又は関節リウマチなどの細胞外マトリッ
クス産生亢進の病態を示す病気を効果的に治療すること
のできる、細胞外マトリックス合成抑制剤を提供するた
めに、種々検討を重ねてきた。

【００１０】上記したように、肝硬変、間質性肺疾患、
慢性腎不全（又は慢性腎不全に陥いる疾患）、術後の瘢
痕や熱傷性瘢痕、交通事故等の後に生じるケロイドや肥
厚性瘢痕、強皮症、動脈硬化、又は関節リウマチなどの
線維症は臓器内の細胞外マトリックスの著しく増加した
病態が主病変と理解されている。肝硬変、間質性肺疾
患、慢性腎不全（又は慢性腎不全に陥いる疾患）、術後
の瘢痕や熱傷性瘢痕、交通事故等の後に生じるケロイド
や肥厚性瘢痕、強皮症、動脈硬化、又は関節リウマチな
どの細胞外マトリックス産生亢進の病態を示す病気に伴
う線維化は、コラーゲン生合成増加やコラーゲン分解能
の低下により生ずると考えられている。例えば、肝の線
維化において、Ｉ型、 III型、IV型コラーゲンの合成活
性化が起こるが、特に主要成分であるＩ型コラーゲンの
合成活性化が重要な意味をもつ。

【００１１】こうした状況下で、本発明者らは、意外に
も、ショウキョウの成分であるジンゲロール又はその誘
導体、特に［６］−ジンゲロールが、病態を示す組織の
細胞におけるＨＳＰ４７の合成を特異的に抑制すること
を見出した。すなわち、ジンゲロール又はその誘導体を
投与することにより、細胞内でのＨＳＰ４７の合成を抑
制し、臓器内でのコラーゲン合成を抑制し、ひいては肝
硬変、間質性肺疾患、慢性腎不全（又は慢性腎不全に陥
いる疾患）、術後の瘢痕や熱傷性瘢痕、交通事故等の後
に生じるケロイドや肥厚性瘢痕、強皮症、動脈硬化、又
は関節リウマチなどの細胞外マトリックス産生亢進の病
態を示す病気の治療が可能であることを見出したのであ
る。本発明はこうした知見に基づくものであり、肝硬
変、間質性肺疾患、慢性腎不全（又は慢性腎不全に陥い
る疾患）、術後の瘢痕や熱傷性瘢痕、交通事故等の後に
生じるケロイドや肥厚性瘢痕、強皮症、動脈硬化、又は
関節リウマチなどの細胞外マトリックス産生の亢進の病
態を示す病気を効果的に治療することのできるＨＳＰ４
７合成抑制剤であって、細胞内でのコラーゲンの成熟及
び輸送過程に重要な役割を果たしているコラーゲン特異
的な分子シャペロンであるＨＳＰ４７の合成抑制剤を提
供することを目的とする。

【００１２】

【課題を解決するための手段】従って、本発明は、ジン
ゲロール又はその誘導体（特に［６］−ジンゲロール）
を有効成分として含有することを特徴とする、ＨＳＰ４
７合成抑制剤に関する。

【００１３】

【発明の実施の形態】以下、本発明について詳細に説明
する。本発明の合成抑制剤は、有効成分としてジンゲロ
ール又はその誘導体を含有する。本明細書においてジン
ゲロールとは、例えば、［３］−ジンゲロール（［３］
−ｇｉｎｇｅｒｏｌ）、［４］−ジンゲロール（［４］
−ｇｉｎｇｅｒｏｌ）、［５］−ジンゲロール（［５］
−ｇｉｎｇｅｒｏｌ）、［６］−ジンゲロール（［６］
−ｇｉｎｇｅｒｏｌ）、［８］−ジンゲロール（［８］
−ｇｉｎｇｅｒｏｌ）、［１０］−ジンゲロール（［１
０］−ｇｉｎｇｅｒｏｌ）、又は［１２］−ジンゲロー
ル（［１２］−ｇｉｎｇｅｒｏｌ）等を意味する。本発
明においては、それらのジンゲロール同族体は、単独で
用いることもできるし、あるいは、異なる複数のジンゲ
ロールを組み合わせて同時に用いることもできる。本発
明の合成抑制剤において用いられるジンゲロールとして
は、特に、［６］−ジンゲロール〔（Ｓ）−５−ヒドロ
キシ−１−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）
−３−デカノン；Ｃ₁₇Ｈ₂₆Ｏ₄ ＝２９４．３８〕が最も
好適である。［６］−ジンゲロールは、式

【化１】 で表される化合物であり、例えば、ショウキョウ等の生
薬に含まれている。

【００１４】本発明の合成抑制剤に含有されるジンゲロ
ール又はその誘導体は、化学合成によって、又は天然物
から抽出して精製することによって、調製することがで
きる。あるいは、市販品を用いてもよい。また、本発明
の合成抑制剤において有効成分として用いるジンゲロー
ルを、天然物から抽出する場合には、ジンゲロールを含
有する植物の全体又は一部分（例えば、全草、葉、根、
根茎、茎、根皮、若しくは花）をそのまま用いて、又は
簡単に加工処理（例えば、乾燥、切断、若しくは粉末
化）したもの（例えば、生薬）を用いて抽出する。抽出
条件は一般的に植物抽出に用いられる条件ならば特に制
限はない。

【００１５】本発明におけるジンゲロールは、生薬から
抽出する場合、これに限定するものではないが、例えば
ショウキョウから抽出することが好ましい。ショウキョ
ウ（生姜：Ｇｉｎｇｅｒ；Ｚｉｎｇｉｂｅｒｉｓ Ｒｈ
ｉｚｏｍａ）とは、ショウガ（Ｚｉｎｇｉｂｅｒ ｏｆ
ｆｉｃｉｎａｌｅ Ｒｏｓｃｏｅ）の根茎の生又は乾燥
物を意味し、それらの部分を単独であるいは任意に組み
合わせて使用することができる。

【００１６】本発明による合成抑制剤において有効成分
として用いることのできるショウキョウ抽出物は、前記
のジンゲロール、特には［６］−ジンゲロールを含有し
ていればよく、従って、ショウキョウの粗抽出物を用い
ることができる。本発明で用いるショウキョウ抽出物の
製造方法としては、ショウキョウを、例えば、水（例え
ば、温水、好ましくは熱湯）によって抽出するか、又は
有機溶媒を用いて抽出する。有機溶媒としては、例え
ば、炭素数１〜６のアルコール（例えば、メチルアルコ
ール、エチルアルコール、ｎ−プロピルアルコール、イ
ソプロピルアルコール、若しくはブチルアルコール）、
脂肪酸エステル（例えば、酢酸メチル、酢酸エチル、酢
酸プロピル、若しくは酢酸ブチル）、ケトン（例えば、
アセトン若しくはメチルイソブチルケトン）、エーテ
ル、石油エーテル、シクロヘキサン、トルエン、ベンゼ
ン、炭化水素のハロゲン誘導体（例えば、四塩化炭素、
ジクロロメタン、若しくはクロロホルム）、ピリジン、
グリコール（例えば、プロピレングリコール、若しくは
ブチレングリコール）、ポリエチレングリコール、又は
アセトニトリルなどを用いることができ、これらの有機
溶媒を単独、又は適宜組み合わせ、一定の比率で混合
し、更には無水又は含水状態で用いることができる。好
ましくは、エチルアルコール−水混合溶媒、エチルアル
コール、エーテル、クロロホルム、ベンゼン、アセト
ン、又は熱石油エーテル等が望ましい。

【００１７】水抽出又は有機溶媒抽出の方法としては、
通常の生薬抽出に用いられる方法を用いることができ、
例えば（乾燥）ショウキョウ１重量部に対し、水又は有
機溶媒５〜３００重量部を用いて、攪拌しながら、その
沸点以下の温度で加熱還流することが望ましい。抽出工
程は、通常は５分〜７日間、好ましくは１０分〜２４時
間実施し、必要に応じて、攪拌等の補助的手段を加える
ことにより、抽出時間を短縮することができる。

【００１８】抽出工程終了後、濾過又は遠心分離等の適
当な方法により、水又は有機溶媒抽出液から、不溶物を
分離して粗抽出物を得ることができる。なお、本発明の
合成抑制剤において、天然物より抽出、分画したジンゲ
ロール、特に［６］−ジンゲロールを用いる場合には、
前記の粗抽出物を特に精製することなく、そのまま使用
してもよい。常法による熱水抽出物又は有機溶媒抽出物
の他に、前記の粗抽出物を各種有機溶媒又は吸着剤等に
より、更に処理した精製抽出物も、本発明の合成抑制剤
の有効成分として用いることができる。これらの粗抽出
物及び各種の精製処理を終えた精製抽出物を含むショウ
キョウ抽出物は、抽出したままの溶液を用いても、溶媒
を濃縮したエキスを用いても良いし、溶媒を留去し乾燥
した粉末、更には結晶化して精製したもの、あるいは粘
性のある物質を用いても良く、またそれらの希釈液を用
いることもできる。こうして得られたショウキョウ抽出
物は、ショウキョウに含まれるジンゲロール（例えば、
［３］−ジンゲロール、［４］−ジンゲロール、［５］
−ジンゲロール、［６］−ジンゲロール、［８］−ジン
ゲロール、［１０］−ジンゲロール、及び／又は［１
２］−ジンゲロール等）を混合物として含み、同時に原
料のショウキョウに由来する不純物を含んでいる。

【００１９】また、ジンゲロール誘導体としては、例え
ば、天然物中に本来含有されているジンゲロール誘導
体、抽出又は分画の際の化学的処理によって変換したジ
ンゲロール誘導体、及び化学的修飾を行ったジンゲロー
ル誘導体等が含まれる。天然物中に本来含有されている
ジンゲロール誘導体としては、例えば、［６］−ジンジ
ャージオール（［６］−ｇｉｎｇｅｒｄｉｏｌ）、
［８］−ジンジャージオール（［８］−ｇｉｎｇｅｒｄ
ｉｏｌ）、［１０］−ジンジャージオール（［１０］−
ｇｉｎｇｅｒｄｉｏｌ）、メチル［６］−ジンジャージ
オール（ｍｅｔｈｙｌ［６］−ｇｉｎｇｅｒｄｉｏ
ｌ）、メチル［６］−ジンジャージオールジアセテート
（ｍｅｔｈｙｌ ［６］−ｇｉｎｇｅｒｄｉｏｌ ｄｉ
ａｃｅｔａｔｅ）、又はデヒドロジンゲロン（ｄｅｈｙ
ｄｒｏｚｉｎｇｅｒｏｎｅ）等を挙げることができる。
抽出若しくは分画の際の化学的処理によって変換したジ
ンゲロール誘導体としては、例えば、［６］−ショウガ
オール（［６］−ｓｈｏｇａｏｌ）、［８］−ショウガ
オール（［８］−ｓｈｏｇａｏｌ）、［１０］−ショウ
ガオール（［１０］−ｓｈｏｇａｏｌ）、又はジンゲロ
ン（ｚｉｎｇｅｒｏｎｅ）等を挙げることができる。化
学的修飾を行ったジンゲロール誘導体としては、例え
ば、メチルジンゲロール（ｍｅｔｈｙｌｇｉｎｇｅｒｏ
ｌ）、ジメチルジンゲロール（ｄｉｍｅｔｈｙｌｇｉｎ
ｇｅｒｏｌ）、又はジニトロフェニルジンゲロール（ｄ
ｉｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌｇｉｎｇｅｒｏｌ）等を挙げ
ることができる。なお、前記のジンゲロール又はその誘
導体には、立体異性体が存在し、本発明では、それらの
任意の純粋な立体異性体又はそれらの混合物を用いるこ
とができる。

【００２０】本発明の合成抑制剤は、ジンゲロール若し
くはその誘導体、又はジンゲロール含有植物、例えば、
ジンゲロール含有生薬（特には、ショウキョウ）より抽
出、分画したジンゲロール含有抽出物を、それ単独で、
又は好ましくは製剤学的若しくは獣医学的に許容するこ
とのできる通常の担体と共に、動物、好ましくは哺乳動
物（特にはヒト）に投与することができる。投与剤型と
しては、特に限定がなく、例えば、散剤、細粒剤、顆粒
剤、錠剤、カプセル剤、懸濁液、エマルジョン剤、シロ
ップ剤、エキス剤、若しくは丸剤等の経口剤、又は注射
剤、外用液剤、軟膏剤、坐剤、局所投与のクリーム、若
しくは点眼薬などの非経口剤を挙げることができる。

【００２１】これらの経口剤は、例えば、ゼラチン、ア
ルギン酸ナトリウム、澱粉、コーンスターチ、白糖、乳
糖、ぶどう糖、マンニット、カルボキシメチルセルロー
ス、デキストリン、ポリビニルピロリドン、結晶セルロ
ース、大豆レシチン、ショ糖、脂肪酸エステル、タル
ク、ステアリン酸マグネシウム、ポリエチレングリコー
ル、ケイ酸マグネシウム、無水ケイ酸、又は合成ケイ酸
アルミニウムなどの賦形剤、結合剤、崩壊剤、界面活性
剤、滑沢剤、流動性促進剤、希釈剤、保存剤、着色剤、
香料、矯味剤、安定化剤、保湿剤、防腐剤、又は酸化防
止剤等を用いて、常法に従って製造することができる。
例えば、［６］−ジンゲロール１重量部と乳糖９９重量
部とを混合して充填したカプセル剤などである。

【００２２】非経口投与方法としては、注射（皮下、静
脈内等）、又は直腸投与等が例示される。これらのなか
で、注射剤が最も好適に用いられる。例えば、注射剤の
調製においては、有効成分としてのジンゲロール若しく
はその誘導体（特には［６］−ジンゲロール）、又はジ
ンゲロール含有植物抽出物、例えば、ジンゲロール含有
生薬抽出物（特には、ショウキョウ抽出物）の他に、例
えば、生理食塩水、リンゲル液等の水溶性溶剤、植物
油、若しくは脂肪酸エステル等の非水溶性溶剤、ブドウ
糖、若しくは塩化ナトリウム等の等張化剤、溶解補助
剤、安定化剤、防腐剤、懸濁化剤、又は乳化剤等を任意
に用いることができる。また、本発明の合成抑制剤は、
徐放性ポリマーなどを用いた徐放性製剤の手法を用いて
投与してもよい。例えば、本発明の合成抑制剤をエチレ
ンビニル酢酸ポリマーのペレットに取り込ませて、この
ペレットを治療すべき組織中に外科的に移植することが
できる。

【００２３】本発明の合成抑制剤は、これに限定される
ものではないが、ジンゲロール又はその誘導体を、０．
０１〜９９重量％、好ましくは０．１〜８０重量％の量
で含有することができる。また、ジンゲロール含有植物
抽出物、例えば、ジンゲロール含有生薬抽出物（特に
は、ショウキョウ抽出物）を有効成分として含有する本
発明の合成抑制剤は、その中に含まれるジンゲロール
（特には、［６］−ジンゲロール）が前記の量範囲にな
るように適宜調整して、調製することができる。なお、
ジンゲロール含有植物抽出物、例えば、ジンゲロール含
有生薬抽出物（特には、ショウキョウ抽出物）を有効成
分として含有する合成抑制剤を、経口投与用製剤とする
場合には、製剤学的に許容することのできる担体を用い
て、製剤化することが好ましい。

【００２４】本発明の合成抑制剤を用いる場合の投与量
は、病気の種類、患者の年齢、性別、体重、症状の程
度、又は投与方法などにより異なり、特に制限はない
が、［６］−ジンゲロール量として通常成人１人当り１
ｍｇ〜１０ｇ程度を、１日１〜４回程度にわけて、経口
的に又は非経口的に投与する。更に、用途も医薬品に限
定されるものではなく、種々の用途、例えば、機能性食
品や健康食品として飲食物の形で与えることも可能であ
る。

【００２５】

【作用】上記したように、本発明の合成抑制剤に含有さ
れるジンゲロール又はその誘導体、特に［６］−ジンゲ
ロールは、細胞内のＨＳＰ４７合成を特異的に抑制する
作用があるので、ジンゲロール又はその誘導体を投与す
ると細胞内でのＨＳＰ４７生合成が特異的に減少し、コ
ラーゲンの生合成が抑制される。その結果、細胞外マト
リックス産生も抑制されることになる。従って、ジンゲ
ロール又はその誘導体は、コラーゲンの増加を伴う細胞
外マトリックス産生亢進の病態を示す病気、例えば肝硬
変、間質性肺疾患、慢性腎不全（又は慢性腎不全に陥い
る疾患）、術後の瘢痕や熱傷性瘢痕、交通事故等の後に
生じるケロイドや肥厚性瘢痕、強皮症、動脈硬化、又は
関節リウマチなどの予防及び治療に使用することができ
る。すなわち、本発明の合成抑制剤は、コラーゲン特異
的シャペロンであるＨＳＰ４７の合成を抑制することに
よりコラーゲンの合成を抑制する。

【００２６】また、前記のように、血管新生において
も、基底膜及び基底膜中のコラーゲン合成が重要な役割
をはたすことが指摘されているので、本発明の合成抑制
剤は、血管新生の異常増殖に基づく多くの疾患の予防治
療薬として極めて有用であり、先に述べたような各疾
患、すなわち糖尿病性網膜症、後水晶体線維増殖症、角
膜移植に伴う血管新生、緑内症、眼腫瘍、トラコーマ、
乾せん、化膿性肉芽腫、血管腫、線維性血管腫、肥大性
はん痕、肉芽、リューマチ性関節炎、浮腫性硬化症、ア
テローム性動脈硬化症及び各種腫瘍などに用いることが
できる。更に、Ｉ型コラーゲンとフィブロネクチンを基
本骨格とする間質（interstitial stroma)が癌の転移に
おいて、離脱した癌細胞が近傍の脈管に侵入するまでの
ガイド役を果たすことが、明らかとなっているので〔"B
IOTHERAPY", 7 (8) : 1181, 1993〕、本発明の合成抑制
剤を投与することにより、癌の転移を抑制することも可
能である。

【００２７】

【実施例】以下、実施例によって本発明を具体的に説明
するが、これらは本発明の範囲を限定するものではな
い。実施例１：抗ＨＳＰ４７ポリクローナル抗体の作製 （１）抗ＨＳＰ４７ポリクローナル抗体の調製 ヒトＨＳＰ４７のＮ末端から２〜１６番目のアミノ酸配
列に対応するアミノ酸１５個からなるペプチド〔以下、
ヒトＨＳＰ４７ペプチド（２−１６）と称する；ラット
のＨＳＰ４７の相当する部分と共通アミノ酸配列を示
す〕を自動ペプチド合成装置（ＰＳＳＭ−８システム，
島津制作所）を用いて作製し、スクシニミジル４−（ｐ
−マレイミドフェニル）ブチレート〔ＳＭＰＢ：Succin
imidyl 4-(p-maleimidophenyl)butyrate〕を架橋剤とし
て用い、常法（"Biochemistry", 18：690, 1979)により
ラクトグロブリンと結合させ、感作抗原を作製した。こ
の感作抗原１５０μｇを含むリン酸緩衝生理食塩水〔組
成：ＫＣｌ＝０．２ｇ／ｌ，ＫＨ₂ ＰＯ₄ ＝０．２ｇ／
ｌ，ＮａＣｌ＝８ｇ／ｌ，Ｎａ₂ ＨＰＯ₄ （無水）＝
１．１５ｇ／ｌ：以下ＰＢＳ（−）と称する：コスモバ
イオ，カタログ番号320-01〕０．２ｍｌと、等量のフロ
イント完全アジュバント（ヤトロン，カタログ番号RM60
6-1)とを混和し、得られた混合液０．２ｍｌを、ルーラ
ット（６週齢，雌性：日本クレア）の皮下に投与し、免
疫した。同様の方法で第２次及び第３次免疫を繰り返し
た後、アジュバント（Hunter's TiterMax ; CytRx Corp
oration,米国ジョージア州）を用いて６回免疫感作を行
った。感作動物より採血し、常法により血清を分離して
採取し、以下に示す酵素抗体法（ＥＬＩＳＡ法）及びウ
ェスタンブロット法によって血清中の抗体価を測定し
た。

【００２８】（２）酵素抗体法（ＥＬＩＳＡ法）による
抗ＨＳＰ４７ポリクローナル抗体特性の評価 前項（１）で調製したヒトＨＳＰ４７ペプチド（２−１
６）をＰＢＳ（−）に溶解し、１０μｇ／ｍｌの濃度の
ペプチド溶液を調製し、リジットアセイプレート（ファ
ルコン，カタログ番号3910）の各ウェルに前記ペプチド
溶液を５０μｌずつ滴下した。最も外側のウェルにはＰ
ＢＳ（−）５０μｌのみを入れ、湿潤下で４℃にて一晩
放置した後、前記ペプチド溶液を捨て、ＰＢＳ（−）を
用いて各ウェルを洗浄した後、１％ウシ血清アルブミン
（以下、ＢＳＡと略称する）を含むＰＢＳ（−）１００
μｌを各ウェルに入れ、室温下で１時間放置した。ＰＢ
Ｓ（−）で３回洗浄した後、前項（１）で取得したルー
ラット血清５０μｌを各ウェルに入れ、１時間室温にて
放置した。ＰＢＳ（−）で３回洗浄した後、各ウェルに
２次抗体としてペルオキシダーゼ標識抗ラットＩｇＧ５
０μｌを入れ、室温下で１時間放置した。ＰＢＳ（−）
で２回洗浄した後、過酸化水素水４μｌを加えた０．１
Ｍクエン酸バッファー（ｐＨ４．５）１０ｍｌにｏ−フ
ェニレンジアミン（ＯＰＤ）タブレット（シグマ，カタ
ログ番号P8287)１個（１０ｍｇ）を溶解して調製した基
質液１００μｌずつを各ウェルに滴下し、室温にて遮光
下で３０分間放置した後、各ウェルの４９２ｎｍの吸光
度をマイクロプレートリーダー（東ソー，ＭＰＲ−Ａ４
ｉ型）にて測定した。抗体価の上昇が確認された血清を
抗ヒトＨＳＰ４７ポリクローナル抗体として以下の実施
例に用いた。

【００２９】（３）ウェスタンブロット法による抗ＨＳ
Ｐ４７ポリクローナル抗体特性の評価 Ｌａｅｍｍｌｉのバッファー系（Laemmli, N. K., "Nat
ure", 283 : pp. 249-256, 1970)を用いて、ＨｅＬａ細
胞のライセートのドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）ポ
リアクリルアミドゲル電気泳動を、以下の方法に従って
行った。濃縮ゲルの調製は次のように行った。蒸留水
６．１ｍｌ、０．５Ｍトリス（バイオ・ラッド，カタロ
グ番号161-0716）−ＨＣｌ（ｐＨ６．８）２．５ｍｌ、
１０％ＳＤＳ（バイオ・ラッド，カタログ番号161-030
1）１００μｌ、及び３０％アクリルアミド（バイオ・
ラッド，カタログ番号161-0101）／Ｎ，Ｎ’−メチレン
ビスアクリルアミド（バイオ・ラッド，カタログ番号16
1-0201）１．３ｍｌを混合して、１５分間脱気し、１０
％過硫酸アンモニウム（バイオ・ラッド，カタログ番号
161-0700）５０μｌ及びＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメ
チルエチレンジアミン（以下、ＴＥＭＥＤと略称する）
（バイオ・ラッド，カタログ番号161-0800）１０μｌを
加えて、濃縮ゲルを調製した。また、分離ゲルの調製は
次のように行った。蒸留水４．０４５ｍｌ、１．５Ｍト
リス−ＨＣｌ（ｐＨ８．８）２．５ｍｌ、１０％ＳＤＳ
１００μｌ、及び３０％アクリルアミド／Ｎ，Ｎ’−メ
チレンビスアクリルアミド３．３ｍｌをゆっくり混合し
て、１５分間アスピレータで脱気し、１０％過硫酸アン
モニウム５０μｌ、及びＴＥＭＥＤ５μｌを加えた。泳
動バッファーとしては、トリス９．０ｇ、グリシン（バ
イオ・ラッド，カタログ番号161-0717）４３．２ｇ、及
びＳＤＳ３．０ｇに蒸留水を加えて６００ｍｌにし、こ
れを蒸留水で５倍希釈したものを用いた。サンプルバッ
ファーは、蒸留水２ｍｌ、２Ｍトリス−ＨＣｌ（ｐＨ
６．８）５００μｌ、ＳＤＳ０．３２ｇ、β−メルカプ
トエタノール８００μｌ、及び０．０５％（ｗ／ｖ）ブ
ロモフェノールブルー（バイオ・ラッド，カタログ番号
161-0404）４００μｌを混合したものを用いた。

【００３０】後述する実施例２に示す方法に基づいてＨ
ｅＬａ細胞を培養し、そのライセートを調製した。得ら
れたＨｅＬａ細胞ライセートのＳＤＳ−ポリアクリルア
ミドゲル電気泳動を行った後、０．４５μｍニトロセル
ロース膜（Schleicher & Schuell，カタログ番号40119
6）にゲルを密着させ、タンパク質転写装置（Trans-Blo
t Electrophoretic Transfer Cell：バイオ・ラッド）
を用いて、室温にて１００Ｖで、３時間ブロッティング
を行った。ブロッティングバッファーとしては０．０２
５Ｍトリス及び０．１９２ＭグリシンよりなりｐＨ８．
５に調整されたトリスグリシンバッファー（Tris Gly R
unning and Blotting Buffer；Enprotech,米国マサチュ
ーセッツ州，カタログ番号SA100034）にメチルアルコー
ルを２０％になるように加えて調製したバッファーを用
いた。ブロッティング後、５％スキムミルク（雪印乳
業）を含むＰＢＳ（−）溶液にニトロセルロース膜を室
温にて３０分間浸し、ブロッキングを行った。ブロッキ
ング後、スクリーナーブロッター（サンプラテック）を
用いて、前項（１）で取得したルーラット血清を１次抗
体として、１次抗体反応を行った。１次抗体反応は、２
％スキムミルク（雪印乳業）を含むＰＢＳ（−）にて１
０倍希釈した前記ルーラット血清２００μｌで、室温に
て１２０分間行った。１次抗体反応終了後、スロー・ロ
ッキング・シェイカーを用いて、ＰＢＳ（−）で５分間
の振盪を２回、０．１％Ｔｗｅｅｎ２０（バイオ・ラッ
ド，カタログ番号170-6531）を含むＰＢＳ（−）溶液で
１５分間の振盪を４回、更にＰＢＳ（−）で５分間の振
盪を２回行うことにより、ニトロセルロース膜を洗浄し
た。洗浄終了後、ペルオキシダーゼ標識ヤギ抗ラットＩ
ｇＧ抗体（Southern Biotechnology，カタログ番号3030
-05)を、２％スキムミルクを含むＰＢＳ（−）溶液で５
０００倍に希釈した溶液５ｍｌを用いて、２次抗体反応
を２時間行った。反応終了後、ＰＢＳ（−）溶液、及び
０．１％Ｔｗｅｅｎ２０を含むＰＢＳ（−）溶液で、１
次抗体反応後の洗浄と同じ条件下にてニトロセルロース
膜の洗浄を行った。

【００３１】余分なＰＢＳ（−）溶液を除去した後、ウ
ェスタンブロッティング検出試薬（ECL Western blotti
ng detection reagent；アマーシャム，カタログ番号RP
N2106)をニトロセルロース膜上に振りかけ、１分間室温
にて静置した後、余分な検出試薬を除去し、ニトロセル
ロース膜をラップに包み、反応面をＸ線フィルム（コダ
ック X-OMAT, AR カタログ番号165 1454）に密着させて
露光させた。現像後、ＨＳＰ４７に相当する分子量４７
キロダルトン付近のバンドを測定することによって、抗
ＨＳＰ４７ポリクローナル抗体の反応性の検討を行っ
た。抗体価の上昇が確認された血清を、抗ヒトＨＳＰ４
７ポリクローナル抗体として、以下の実施例に用いた。

【００３２】実施例２：ヒト培養癌細胞のＨＳＰ発現量
の測定 （１）ヒト培養癌細胞の培養 以下の各種ヒト培養癌細胞を、５％二酸化炭素条件下
で、熱ショック処理時以外は、３７℃で培養した。肺癌
細胞株Ｈ６９（ＡＴＣＣ ＨＴＢ １１９）は、１０％
非働化ウシ胎児血清（以下、ＦＢＳと略称する）を含む
ＲＰＭＩ１６４０培地中で培養した。子宮癌細胞株Ｈｅ
Ｌａ Ｓ３（ＡＴＣＣ ＣＣＬ ２．２）は、１０％非
働化ＦＢＳを含むＭＥＭ培地にて培養した。

【００３３】（２）［６］−ジンゲロール処理及び熱シ
ョック処理 播種２日後の前記各種培養ヒト癌細胞の培地中に、最終
濃度１００μＭになるように［６］−ジンゲロール（松
浦薬業）を添加し、２４時間培養した。その後、４５℃
にて１５分間熱ショック処理をしてから、３７℃にて終
夜培養した。対照試験は、［６］−ジンゲロールを添加
しないこと以外は前記と同様に実施した。

【００３４】（３）ヒト培養癌細胞でのＨＳＰ発現量の
測定 前項（２）で処理した各細胞を、以下に示す方法により
ホモジナイズし、ＨＳＰ発現量をウェスタンブロット法
にて測定した。すなわち、前項（２）で処理した細胞を
ＰＢＳ（−）で洗浄した後、ライシスバッファー（ｌｙ
ｓｉｓ ｂｕｆｆｅｒ）〔１．０％ＮＰ−４０、０．１
５Ｍ塩化ナトリウム、５０ｍＭトリス−ＨＣｌ（ｐＨ
８．０）、５ｍＭ−ＥＤＴＡ、２ｍＭ−Ｎ−エチルマレ
イミド、２ｍＭフェニルメチルスルホニルフルオリド、
２μｇ／ｍｌロイペプチン及び２μｇ／ｍｌペプスタチ
ン〕１ｍｌを加え、氷上で２０分間静置した。その後、
４℃で１２０００ｒｐｍにて、２０分間、遠心を行っ
た。遠心後の上清１０μｌをＰＢＳ（−）７９０μｌに
加え、更にプロテインアッセイ染色液（Dye Reagent Co
ncentrate : バイオラッド，カタログ番号500-0006）２
００μｌを加えた。５分間、室温にて静置した後、５９
５ｎｍで吸光度を測定してタンパク質定量を行った。タ
ンパク質定量を行った試料を用いて、Ｌａｅｍｍｌｉの
バッファー系にて、等量のタンパク質を含むライセート
のＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動を行った。電
気泳動後、実施例１で述べた方法に従って、ブロッティ
ング及びそれに続くブロッキングを行った。すなわち、
タンパク質転写装置（Trans-Blot Electrophoretic Tra
nsfer Cell：バイオ・ラッド）を用いて、室温にて１０
０Ｖにて、０．４５μｍニトロセルロース膜（Schleich
er & Schuell，カタログ番号401196）にゲルを密着さ
せ、３時間ブロッティングを行った。ブロッティングバ
ッファーとしては、前記実施例１（３）で用いたバッフ
ァーと同じものを用いた。ブロッティング後、ニトロセ
ルロース膜を１０％スキムミルク（雪印乳業）−ＰＢＳ
（−）溶液に室温にて３０分間、インキュベートし非特
異的結合をブロックした。

【００３５】ブロッキング後、ニトロセルロース膜の上
で、実施例１にて製造した抗ヒトＨＳＰ４７ラットポリ
クローナル抗体により、１次抗体反応を行った。その
後、ＰＢＳ（−）で５分間ずつ、溶液を取り替えて２回
の洗浄をスロー・ロッキング・シェイカーによって行
い、更にＰＢＳ（−）−０．１％Ｔｗｅｅｎ２０（バイ
オ・ラッド，カタログ番号170-6531）溶液で１５分間ず
つ、溶液を取り替えて４回の洗浄を行った。最終的に、
ＰＢＳ（−）で５分間ずつ、２回の洗浄を行った。洗浄
終了後、ペルオキシダーゼ標識ヤギ抗ラットＩｇＧ抗体
（Southern Biotechnology，カタログ番号3030-05)を、
２％スキムミルクを含むＰＢＳ（−）溶液で５０００倍
に希釈して調製した抗体溶液５ｍｌを用いて、２時間、
２次抗体反応を行った。反応終了後、ニトロセルロース
膜に関して、ＰＢＳ（−）溶液で５分間ずつ溶液を変え
て２回、更にＰＢＳ（−）−０．１％Ｔｗｅｅｎ２０溶
液で１５分間ずつ溶液を変えて５回の洗浄をスロー・ロ
ッキング・シェイカーにより行った。最後にＰＢＳ
（−）溶液で５分間ずつ２回の洗浄を行った。余分なＰ
ＢＳ（−）溶液を除去した後、ウェスタンブロッティン
グ検出試薬（ECL Westernblotting detection reagen
t；Amersham，カタログ番号RPN2106)をニトロセルロー
ス膜上に振りかけ、１分間インキュベートした後、余分
な検出試薬を除去し、ニトロセルロース膜をラップに包
み、反応面をＸ線フィルム（コダック X-OMAT,AR,カタ
ログ番号165 1454）に密着させて露光し、現像してＨＳ
Ｐ４７の有無の検討を行った。結果を表１に示す。表
中、「↓」は、対照に比べて、［６］−ジンゲロール処
理によりＨＳＰ４７発現量が減少したことを意味する。

【００３６】

【表１】癌種 癌細胞 肺 H69 ↓子宮 HeLa S3 ↓

【００３７】表１に示すとおり、［６］−ジンゲロール
は、肺癌細胞株Ｈ６９及び子宮癌細胞株ＨｅＬａ Ｓ３
においてＨＳＰ４７の発現を抑制した。すなわち、
［６］−ジンゲロールは、ＨＳＰ４７の発現を抑制する
合成抑制剤の活性を有するものと結論づけられ、この事
実は、［６］−ジンゲロールが細胞外マトリックス産生
の亢進に抑制的に働くことを示している。

【００３８】

【発明の効果】以上詳述したように、本発明の合成抑制
剤は、例えば、肝硬変、間質性肺疾患、慢性腎不全（又
は慢性腎不全に陥いる疾患）、術後の瘢痕や熱傷性瘢
痕、交通事故等の後に生じるケロイドや肥厚性瘢痕、強
皮症、動脈硬化、又は関節リウマチなどの細胞外マトリ
ックス産生の亢進の病態を示す病気に罹患した細胞にみ
られるコラーゲン合成亢進を改善する作用を有する。従
って、本発明による合成抑制剤を投与することにより、
臓器、組織の線維化、硬化が阻止され、その結果、前記
病気の患者の生理学的状態を有効に改善させ、前記病気
を効果的に治療することができる。また、本発明の合成
抑制剤は、血管新生の異常増殖を伴う各種疾患の予防治
療にも有用である。更に、Ｉ型コラーゲンとフィブロネ
クチンを基本骨格とする間質が、癌の転移において離脱
した癌細胞が近傍の脈管に侵入するまでのガイド役を果
たすことが、明らかとなっているので、本発明の合成抑
制剤を投与することにより、癌の転移を抑制することも
可能である。

フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 31/12 ＡＤＡ Ａ６１Ｋ 31/12 ＡＤＡ 35/78 ＡＥＤ 35/78 ＡＥＤＣ (72)発明者 清輔 洋一 東京都新宿区百人町３−26−１−303 (72)発明者 吉村 真 神奈川県川崎市麻生区下麻生1154−91 (72)発明者 吉汲 親雄 東京都国立市東２−19−46 (72)発明者 西條 長宏 東京都目黒区東が丘２−５−28

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 ジンゲロール又はその誘導体を有効成分
   として含有することを特徴とする、分子量４７キロダル
   トンの熱ショックタンパク質の合成抑制剤。
2. 【請求項２】 ジンゲロールが［６］−ジンゲロールで
   ある、請求項１に記載の分子量４７キロダルトンの熱シ
   ョックタンパク質の合成抑制剤。
3. 【請求項３】 ジンゲロール含有植物の抽出物を有効成
   分として含有することを特徴とする、分子量４７キロダ
   ルトンの熱ショックタンパク質の合成抑制剤。
4. 【請求項４】 ショウキョウの抽出物を有効成分として
   含有することを特徴とする、分子量４７キロダルトンの
   熱ショックタンパク質の合成抑制剤。