JPH10510427A - 固定化させたオリゴヌクレオチドと三重らせんを形成させることによるdna精製 - Google Patents
固定化させたオリゴヌクレオチドと三重らせんを形成させることによるdna精製Info
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Abstract
Description
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1. 他の構成成分と混ざっている二本鎖DNAを含む溶液を、前記DNA中 に存在する特定の配列とのハイブリダイゼーションにより三重らせんを形成する ことが可能なオリゴヌクレオチドが共有結合した支持体を通す少なくとも一つの 段階を含むことを特徴とする二本鎖DNAの精製方法。 2. 前記DNAを含む溶液が細胞溶解物であることを特徴とする、請求の範 囲1に記載の方法。 3. 細胞溶解物が透明溶解物であることを特徴とする、請求の範囲2に記載 の方法。 4. 二本鎖DNAが予め精製されることを特徴とする、請求の範囲1に記載 の方法。 5. DNA中に存在する特定の配列がホモプリン−ホモピリミジン配列を含 み、かつ前記オリゴヌクレオチドがそのホモプリン−ホモピリミジン配列と三重 らせんを形成する配列を含むことを特徴とする、請求の範囲1に記載の方法。 6. 特定の配列が二本鎖DNA内に人工的に組み込まれていることを特徴と する、請求の範囲1〜5の内の一つに記載の方法。 7. オリゴヌクレオチドがポリ(CTT)配列を含み、かつそのDNA内に 存在する特定の配列がポリ(GAA)配列であることを特徴とする、請求の範囲 5に記載の方法。 8. オリゴヌクレオチドが配列GAGGCTTCTTCTTCTTCTTC TTCTT(配列番号1)を保持することを特徴とする、請求の範囲5に記載の 方法。 9. オリゴヌクレオチドが配列(CTT)7(配列番号26)を保持するこ とを特徴とする、請求の範囲5に記載の方法。 10. 前記DNA中に存在する特定の配列が配列(GAA)7、(GAA)14 、もしくは(GAA)17を含むことを特徴とする、請求の範囲8もしくは9に記 載の方法。 11. 前記DNA中に存在する特定の配列が配列番号5の配列を含み、かつオ リゴヌクレオチドが配列番号6もしくは配列番号7の配列を含むことを特徴とす る、請求の範囲5に記載の方法。 12. 前記DNA中に存在する特定の配列が配列番号17の配列を含み、かつ オリゴヌクレオチドが配列番号18の配列を含むことを特徴とする、請求の範囲 5に記載の方法。 13. 前記DNA中に存在する特定の配列が配列(GA)25を含み、かつオリ ゴヌクレオチドが配列番号19の配列を含むことを特徴とする、請求の範囲5に 記載の方法。 14. 特定の配列が二本鎖DNA中に天然に存在する特定の配列であることを 特徴とする、請求の範囲1〜5の内の一つに記載の方法。 15. 前記DNA内に天然に存在する特定の配列が、プラスミドの複製起点内 に存在するホモプリン−ホモピリミジン配列であることを特徴とする、請求の範 囲14に記載の方法。 16. 特定のDNA配列が、大腸菌(E.coli)の複製起点ColE1内 に存在する配列番号2の配列の全部もしくは部分を含むことを特徴とする、請求 の範囲15に記載の方法。 17. オリゴヌクレオチドが配列番号3の配列を含むことを特徴とする、請求 の範囲16の方法。 18. 特定のDNA配列が、プラスミドpBR322のβ−ラクタマーゼ遺伝 子内に存在する配列番号4の配列もしくは配列番号8の配列の内の全部もしくは 部分を含むことを特徴とする、請求の範囲14に記載の方法。 19. オリゴヌクレオチドが、ジスルフィド、チオエーテル、エステル、アミ ド、もしくはアミン結合を通して支持体に連結されることを特徴とする、前述の 請求の範囲の内の一つに記載の方法。 20. オリゴヌクレオチドが炭素鎖(CH2)n[式中、nは1〜18までの間 の整数である]からなるアームを介してカラムに連結され、前記アームがリン酸 を通してオリゴヌクレオチドに、次いではアミド結合を通してカラムに連結する ことを特徴とする、請求の範囲19に記載の方法。 21. アームが6つの炭素原子を含む直鎖状炭素鎖でできていることを特徴と する、請求の範囲20に記載の方法。 22. アームが12の炭素原子を含む直鎖状炭素鎖でできていることを特徴と する、請求の範囲20に記載の方法。 23. オリゴヌクレオチドが少なくとも一つの化学的改変を保持し、そのこと によりそのオリゴヌクレオチドがヌクレアーゼに対して耐性となるか、もしくは ヌクレアーゼに対して保護されるか、または特定の配列に対する親和性を増加さ せることとなることを特徴とする、前述の請求の範囲の内の一つに記載の方法。 24. オリゴヌクレオチドが、少なくとも一つのシトシンがメチル化されてい る、ホモピリミジン配列を保持することを特徴とする、請求の範囲23に記載の 方法。 25. DNAが更に一つもしくは複数の治療学的に重要な配列を含むことを特 徴とする、前述の請求の範囲の内の一つに記載の方法。 26. 二本鎖DNAが例えばプラスミドのような環状DNAであることを特徴 とする、前述の請求の範囲の内のいずれか一つに記載の方法。 27. 二本鎖DNA内に存在する特定の配列がオリゴヌクレオチドとのハイブ リダーゼーションのための数々の位置を含むことを特徴とする、請求の範囲1に 記載の方法。 28. 支持体が、機能化させたクロマトグラフー用支持体、機能化させたプラ スチック表面、および機能化させたラテックスビーズから選択されることを特徴 とする、請求の範囲1に記載の方法。 29. 支持体がクロマトグラフィー用支持体であることを特徴とする、請求の 範囲28に記載の方法。 30. 請求の範囲1〜29の内の一つに記載される方法により取得されるDN Aを含む薬剤学的組成物。 31. 0.5%を下回るかもしくはそれに等しい染色体DNA含有量を特徴と する、精製された組換えプラスミドDNAの調製物。 32. 0.2%を下回るかもしくはそれに等しい染色体DNA含有量を特徴と する、精製された組換えプラスミドDNAの調製物。 33. 0.1%を下回るかもしくはそれに等しい染色体DNA含有量を特徴と する、精製された組換えプラスミドDNAの調製物。 34. 二本鎖RNAの精製のための、請求の範囲1に記載の方法。
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