JPH10501694A - ピロジクチウム・キシラナーゼ、アミラーゼ及びプルラナーゼ - Google Patents
ピロジクチウム・キシラナーゼ、アミラーゼ及びプルラナーゼInfo
- Publication number
- JPH10501694A JPH10501694A JP8501488A JP50148896A JPH10501694A JP H10501694 A JPH10501694 A JP H10501694A JP 8501488 A JP8501488 A JP 8501488A JP 50148896 A JP50148896 A JP 50148896A JP H10501694 A JPH10501694 A JP H10501694A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- amylase
- xylanase
- pullulanase
- preparation
- pyrodictium
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 101710121765 Endo-1,4-beta-xylanase Proteins 0.000 title claims abstract description 50
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 title claims abstract description 47
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 title claims abstract description 47
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 title claims abstract description 47
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 title claims abstract description 46
- 108090000637 alpha-Amylases Proteins 0.000 title claims abstract description 41
- 241000204671 Pyrodictium Species 0.000 claims abstract description 12
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 31
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 26
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 25
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 claims description 21
- 239000008107 starch Substances 0.000 claims description 21
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 claims description 21
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 15
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 229920001221 xylan Polymers 0.000 claims description 11
- 150000004823 xylans Chemical class 0.000 claims description 11
- 241000846576 Pyrodictium abyssi DSM 6158 Species 0.000 claims description 8
- 241000531165 Pyrodictium abyssi Species 0.000 claims description 7
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 7
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 claims description 7
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 claims description 7
- 229920001218 Pullulan Polymers 0.000 claims description 6
- 239000004373 Pullulan Substances 0.000 claims description 6
- 235000019423 pullulan Nutrition 0.000 claims description 6
- 101710108253 Pullulanase A Proteins 0.000 claims description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 13
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 13
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 13
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- 241000205196 Desulfurococcaceae Species 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- WDMUXYQIMRDWRC-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxy-3,4-dinitrobenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C([N+]([O-])=O)=C1O WDMUXYQIMRDWRC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000203069 Archaea Species 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 238000004061 bleaching Methods 0.000 description 3
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 3
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 3
- 230000000984 immunochemical effect Effects 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 102220201851 rs143406017 Human genes 0.000 description 3
- 239000007974 sodium acetate buffer Substances 0.000 description 3
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 241000205160 Pyrococcus Species 0.000 description 2
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 2
- 238000013095 identification testing Methods 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 102000004157 Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090000604 Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 241000205156 Pyrococcus furiosus Species 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 241000204652 Thermotoga Species 0.000 description 1
- 241000287433 Turdus Species 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 229940025131 amylases Drugs 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000000951 immunodiffusion Effects 0.000 description 1
- 238000000760 immunoelectrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
- C12N9/2405—Glucanases
- C12N9/2408—Glucanases acting on alpha -1,4-glucosidic bonds
- C12N9/2411—Amylases
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
- C12N9/2405—Glucanases
- C12N9/2408—Glucanases acting on alpha -1,4-glucosidic bonds
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
- C12N9/2405—Glucanases
- C12N9/2451—Glucanases acting on alpha-1,6-glucosidic bonds
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
- C12N9/2405—Glucanases
- C12N9/2451—Glucanases acting on alpha-1,6-glucosidic bonds
- C12N9/2457—Pullulanase (3.2.1.41)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
- C12N9/2477—Hemicellulases not provided in a preceding group
- C12N9/248—Xylanases
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
- C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
- C12Y302/01008—Endo-1,4-beta-xylanase (3.2.1.8)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
- C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
- C12Y302/01032—Xylan endo-1,3-beta-xylosidase (3.2.1.32), i.e. endo-1-3-beta-xylanase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
- C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
- C12Y302/01041—Pullulanase (3.2.1.41)
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02E—REDUCTION OF GREENHOUSE GAS [GHG] EMISSIONS, RELATED TO ENERGY GENERATION, TRANSMISSION OR DISTRIBUTION
- Y02E50/00—Technologies for the production of fuel of non-fossil origin
- Y02E50/10—Biofuels, e.g. bio-diesel
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】
本発明はピロジクチウムより得られる新規の熱安定性アミラーゼ、プルラナーゼ及びキシラナーゼに関する。
Description
【発明の詳細な説明】
ピロジクチウム・キシラナーゼ、アミラーゼ及びプルラナーゼ
発明の分野
本発明は新規の熱安定性アミラーゼ及び新規の熱安定性プルラナーゼ、並びに
デンプンからの甘味料及びエタノールの製造におけるその利用、並びに新規の熱
安定性キシラナーゼ及び製紙及びパルプ産業におけるその利用に関する。
発明の背景
デンプンからの甘味料の製造は良好な品質及び収量を得るよう種々の微生物酵
素の適用により非常に改善されているが、しかし高温での数段階のデンプン加水
分解プロセスの実施の必要性は、強められた熱安定性を有する新規のデンプン加
水分解酵素の必要性がまだあることを意味する。
ピロコッカス（Pyrococcus）、例えばピロコッカス・ウーセイ（Pyrococcus w oesei
）及びピロコッカス・フリオスス（P.furiosus）（例えばArch.Microbiol
．155 ，1991，pp.572-578及びAppl.Env.Microbiol．56，1990，pp 1985-1991を
参照のこと）は非常に熱安定性なアミラーゼを産生できる。
製紙及びパルプ産業は漂白パルプの輝度を高めるため、漂白化学物質、例えば
漂白段階において使用する塩素の量を減らすため、及びリサイクルした製紙プロ
セスにおけるパルプの自由度を高めるために漂白プロセスにおいてキシラナーゼ
組成物を使用する。
サーモトガ（Thermotoga）由来の熱安定性キシラナーゼが記述されている。例
えばBiochem.J. 277(2)，1991，pp 413-418を参照
のこと。
本発明の目的は 100℃以上の至適温度を有するキシラナーゼ、アミラーゼ及び
プルラナーゼを提供することにある。
発明の概要
我々は新規の熱安定性キシラナーゼ、新規の熱安定性アミラーゼ及び新規の熱
安定性プルラナーゼが、従来熱安定性キシラナーゼ、アミラーゼ及びプルラナー
ゼを生成することの報告されていない属であるピロジクチウム属から得られうる
ことを驚くべきことに見い出した。これらの新しい酵素は約 110〜120 ℃の至適
温度を有する。
従って、本発明は、ピロジクチウム属のキシラナーゼ産生株の培養により産生
可能であることを特徴とする、ピロジクチウム属のアミラーゼ産生株の培養によ
り産生可能であることを特徴とするキシラーゼ調製品、並びにピロジクチウム属
のプルラナーゼ産生株の培養により産生可能であることを特徴とするプルラナー
ゼ調製品を提供する。
図面の簡単な説明
本発明を添付図面を参考に更に説明する。ここで：
図１は様々な温度での本発明のアミラーゼ（◆）及びプルラナーゼ（□）の比
活性（％rel）を示す（基質としてのデンプン及びプルランそれぞれによりpH 5.
5で決定）。
図２ａは様々な温度での本発明のキシラナーゼの比活性（％rel）（基質とし
てキシランによりｐＨ 5.5で決定）を示し、そして図２ｂは様々なpHでの本発明
のキシラナーゼの比活性（基質としてキシランにより 100℃で決定）を示す。
発明の詳細な説明微生物
極端に熱安定性の酵素を探すのに、極端に好熱性の古細菌が可能な起源となり
うる。古細菌由来の非常に安定な細胞外酵素も報告されている。参考のため、J.
M.Braggerら「Very stable Enzymes from extremely thermophilic archaebacte
ria and eubacteria」Appl.Microbiol.Biotechnol. 31，1989，p.556-561を参照
のこと。しかしながら、ピロジクチウム属は今まで細胞アミラーゼ、プルラナー
ゼ及びキシラナーゼを産生することが報告されておらず、実際にはデスルフロコ
ッカセア（Desulfurococcaceae）科の構成員が細胞外キシラナーゼを産生するこ
とははじめて報告されたことである。デスルフロコッカセア科の分類学の概要は
「The Prokaryotes；A Handbook on the Biology of Bacteria：Ecophysiology
，Isolation，Identification，Applications」第２版、Springer-Verlag，Vol
I，p.678に記載されている。
本発明によれば、キシラナーゼはデスルフロコッカセア科のキシラナーゼ産生
株、特にピロジクチウム属、例えばＰ．アビッシ（P.abyssi）に由来し、そして
アミラーゼはピロジクチウム属のアミラーゼ産生株、特にＰ．アビッシに由来し
、そしてプルラナーゼはピロジクチウム属のプルラナーゼ産生株、特にＰ．アビ
ッシに由来する。
ピロジクチウム・アビッシの代表株は受託番号DSM 6158で公的に入手できる。
この番号はStrains，1993 の DSMカタログにおいて公表されている。キシラナーゼ、アミラーゼ及びプルラナーゼの製造
本発明のキシラナーゼ、アミラーゼ及びプルラナーゼは適当な炭素及び窒素源
を含む栄養培地上での上記の株の嫌気培養により産生
され得、かかる培地は当業界において公知である。嫌気性条件はH2／CO2 の噴霧
（２bar過剰圧）及び Balch and WolfeのAppl.Env.Microbiol．32，1976，pp.78
1-791の実施により、培地の調製の際に達し得る。
他方、本発明のキシラナーゼ、アミラーゼ及びプルラナーゼは上記の株由来の
適当な遺伝情報を含む形質転換宿主生物の嫌気培養により産生できうる。かかる
形質転換体は当業界において公知の方法により調製及び培養できる。
このキシラナーゼ、アミラーゼ及びプルラナーゼは発酵培地からの細胞の除去
（例えば遠心又は濾過による）、その後の培養液の濃縮（例えば限外濾過による
）により回収できうる。所望するなら、キシラナーゼ、アミラーゼ及びプルラナ
ーゼは公知の方法により更に精製できうる。免疫化学特性
本発明の酵素はピロジクチウム・アビッシ株DSM 6158由来の酵素のそれと同一
又は部分的に同一（即ち、少なくとも部分的に同一）である免疫化学特性を有す
る。
免疫化学特性は交差反応同定試験により免疫学的に決定できうるこの同定試験
は公知のアウターロニー・ダブル免疫拡散手順により、又はAxelsen N.H.；Hand
book of Immunoprecipitation-in-Gel Techniques；Blackwell Scientific Publ
ications（1983）第５及び14章に従うタンデム交差免疫電気泳動により実施でき
うる。「抗原同一性」及び「部分抗原同一性」なる語はその書物の第５，19及び
20章に記載されている。
一価の抗血清は本発明の精製酵素によるウサギの免疫により上記の方法に従っ
て作られる。免疫原をフロインドアジュバントと混合し、そしてウサギに２週置
きに皮下注射する。８週間の全免疫期間
を経て抗血清が得られ、そしてイムノグロブリンをAxelsen N.H.前掲に記載の通
りにしてそれから調製する。酵 素
本発明のキシラナーゼは、70℃〜約 120℃の温度においてキシラナーゼ活性を
有し、105〜115 ℃の域における温度において至適活性を有することを特徴とし
うる。それは基質としてのキシランによりpH 5.5で決定される。キシラナーゼは
pH 4.0〜約pH 8.5のpH値においてキシラナーゼ活性を有し、pH 5.5〜pH 6.5の域
において至適性を有することも特徴としうる。これは基質としてのキシランによ
り 100℃で決定される。
本発明のアミラーゼは60℃〜 120℃の温度においてアミラーゼ活性を有し、11
0〜120 ℃の域における温度において至適活性を有することを特徴としうる。こ
れは基質としてのデンプンによりpH 5.5で決定される。
本発明のプルラナーゼは60℃〜 120℃の温度においてプルラナーゼ活性を有し
、110〜120 ℃の域における温度において至適活性を有することを特徴としうる
。これは基質としてのプルランによりpH 5.5で決定される。アミラーゼ活性の決定
アミラーゼ活性はデンプンとのインキュベーションの際に遊離される還元糖の
量の測定により決定される。１単位（Ｕ）のアミラーゼ活性は１分当りに１μmo
leの還元糖（マルトース標準品として）を以下のアッセイ条件下で遊離させるキ
シラナーゼの量と定義する：0.05ml容量の１％の可溶性デンプンを0.05mlの 0.1
Ｍの酢酸ナトリウムバッファーpH 5.5に加える。25μｌの酵素溶液をこの混合物
に加え、そしてこのサンプルを90℃で30分インキュベートする。この反応を氷上
で冷却により停止させ、そして還元糖の量をジニトロサ
リチル酸により決定する。還元糖の非酵素的遊離を補正するためにサンプルブラ
ンクを使用する。プルラナーゼ活性の決定
プルラナーゼ活性はプルランとのインキュベーションの際に遊離される還元糖
の量の測定により決定される。１単位（Ｕ）のプルラナーゼ活性は１分当りに１
μmoleの還元糖（マルトース標準品として）を以下のアッセイ条件下で遊離させ
るプルラナーゼの量と定義する：0.05ml容量の１％のプルランを0.05mlの 0.1Ｍ
の酢酸ナトリウムバッファーpH 5.5に加える。25μｌの酵素溶液をこの混合物に
加え、そしてこのサンプルを90℃で30分インキュベートする。この反応を氷上で
冷却により停止させ、そして還元糖の量をジニトロサリチル酸により決定する。
還元糖の非酵素的遊離を補正するためにサンプルブランクを使用する。キシラナーゼ活性の決定
キシラナーゼ活性はキシランとのインキュベーションの際に遊離される還元糖
の量の測定により決定される。１単位（Ｕ）のキシラナーゼ活性は１分当りに１
μmoleの還元糖（キシロース標準品として）を以下のアッセイ条件下で遊離させ
るアミラーゼの量と定義する：0.05ml容量の１％の可溶性キシランを0.05mlの 0
.1Ｍの酢酸ナトリウムバッファーpH 5.5に加える。25μｌの酵素溶液をこの混合
物に加え、そしてこのサンプルを90℃で30分インキュベートする。この反応を氷
上で冷却により停止させ、そして還元糖の量をジニトロサリチル酸により決定す
る。還元糖の非酵素的遊離を補正するためにサンプルブランクを使用する。
産業上の利用性
本発明の酵素は様々な産業上の利用性を可能にする有用な特性を
もつ。特に、熱安定性であるアミラーゼ及びプルラカーゼはデンプンからの甘味
料及びエタノールの製造において潜在的な用途がある。慣用のデンプン転化プロ
セス並びに液化及び／又は糖化のための条件は例えば米国特許第 3,912,590号並
びにヨーロッパ特許公開番号 252,730及び63,909号に記載されている。
キシラナーゼの優れた温度安定性により、本発明のキシラナーゼは製紙及びパ
ルプ産業において潜在的な用途がある。製紙及びパルプ産業におけるキシラナー
ゼの利用は例えば WO 93／19171 に開示されている。
以下の実施例は本発明を更に例示し、そして本発明の範囲を限定することは意
図していない。
実施例１キシラナーゼ、アミラーゼ及びプルラナーゼ
ピロジクチウム・アビッシ株DSM 6158をDeutsche Sammlung von Mikroorganis
men（DSM）により推奨されている培地を利用してグリセロール保存細胞により再
培養した。
この微生物を以下の条件下で１リットルのバッチ培養物の中で増殖させた：培
地：DSM 283、クエン酸抜き（DSM 283は Strains，1993の DSMカタログに記載）
、0.5ｇ／ｌの酵母抽出物、0.1mg／ｌのNa2WO4×2H2O、0.5％（ｗ／ｖ）のデン
プン（アミラーゼ、プルラナーゼ）又は0.5％（ｗ／ｖ）のキシラン（キシラナ
ーゼ）入り；pH 5.5〜6.0；温度97℃。この培地において達成される細胞密度は
≧107細胞／mlであった。嫌気性条件の培地の調製中にH2／CO2の噴霧（２bar 過
圧）及び BalchのAppl.Env.Microbiol．32，1976，pp.781-791記載の技術の実施
により達成せしめた。
培養後、培養流体を12,000ｇで30分、４℃で遠心し、そして無細胞上清液をAm
icon限外濾過システムを用いて100倍濃縮した。
上清液中以下の全活性（Ｕ）が見い出された：
アミラーゼ活性： 2.2Ｕ／ｌ
プルラナーゼ活性： 3.0Ｕ／ｌ
キシラナーゼ活性： 1.5Ｕ／ｌ至適温度
至適温度はpH 5.5、60℃〜 120℃の温度で30分のサンプルのインキュベーショ
ンにより決定した。インキュベーションは溶液の沸騰を防ぐために密閉 Hungate
チューブの中で行った。
図１（アミラーゼ（◆）及びプルラナーゼ（□））及び図２ａ（キシラナーゼ
）は結果を示す。至適pH
キシラナーゼの至適pHを決定するため、万能バッファー（Britten and Robins
on）をpH 4.0〜pH 8.5の値を得るために用いた。サンプルを 100℃で30分、課題
のpHでインキュベーションした。
図２ｂは結果を示す。
【手続補正書】特許法第１８４条の８
【提出日】１９９６年６月１１日
【補正内容】
請求の範囲
１．（ａ）デスルフロコッカセア科のキシラナーゼ産生株の培養により産生可
能；
（ｂ）基質としてのキシランによる 100℃での決定に従い、pH 5.5〜pH 6.5の
域における至適活性；
（ｃ）基質としてのキシランによるpH 5.5での決定に従い、105〜115 ℃の域
における温度においての至適活性；
を特徴とする、キシラナーゼ調製品。
２．前記キシラナーゼ産生株がピロジクチウム属に属する、請求項１記載のキ
シラナーゼ調製品。
３．前記キシラナーゼ産生株がピロジクチウム・アビッシに属する、請求項２
記載のキシラナーゼ調製品。
４．前記キシラナーゼ産生株がピロジクチウム・アビッシDSM 6158である、請
求項３記載のキシラナーゼ調製品。
５．リグノセルロースパルプの処理のためのプロセスにおける請求項１〜４の
いづれか１項記載のキシラナーゼの利用。
６．ピロジクチウム属のアミラーゼ産生株の培養により産生可能であることを
特徴とするアミラーゼ調製品。
７．前記アミラーゼ産生株がピロジクチウム・アビッシに属する、請求項６記
載のアミラーゼ調製品。
８．前記アミラーゼ産生株がピロジクチウム・アビッシDSM 6158に属する、請
求項７記載のアミラーゼ調製品。
９．基質としてのデンプンによるpH 5.5での決定に従い、110〜120 ℃の域に
おける温度においての至適活性を更なる特徴とする、請求項８記載のアミラーゼ
。
10．ピロジクチウム属のプルラナーゼ産生株の培養により産生可
能であることを特徴とするプルラナーゼ調製品。
11．前記プルラナーゼ産生株がピロジクチウム・アビッシに属する、請求項10
記載のプルラナーゼ調製品。
12．前記プルラナーゼ産生株がピロジクチウム・アビッシDSM 6158に属する、
請求項11記載のプルラナーゼ調製品。
13．基質としてのプルランによるpH 5.5での決定に従い、110〜120 ℃の域に
おける温度においての至適活性を更なる特徴とする、請求項12記載のプルラナー
ゼ調製品。
14．デンプンから甘味料を製造するプロセスにおける請求項６〜９のいづれか
１項記載のアミラーゼの利用。
15．デンプンからエタノールを製造するプロセスにおける請求項６〜９のいづ
れか１項記載のアミラーゼの利用。
16．デンプンから甘味料を製造するプロセスにおける請求項10〜13のいづれか
１項記載のプルラナーゼの利用。
17．デンプンからエタノールを製造するプロセスにおける請求項10〜13のいづ
れか１項記載のプルラナーゼの利用。
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ
(Ｃ１２Ｎ 9/30
Ｃ１２Ｒ 1:645）
(Ｃ１２Ｎ 9/42
Ｃ１２Ｒ 1:645）
(Ｃ１２Ｎ 9/44
Ｃ１２Ｒ 1:645）
(81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，
ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，Ｍ
Ｃ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ
，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，
ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，
ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，Ｃ
Ｈ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ
，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，
ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，Ｍ
Ｎ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ
，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＴ，
ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １．デスルフロコッカセア科のキシラナーゼ産生株の培養により産生可能であ ることを特徴とするキシラナーゼ調製品。 ２．前記キシラナーゼ産生株がピロジクチウム属に属する、請求項１記載のキ シラナーゼ調製品。 ３．前記キシラナーゼ産生株がピロジクチウム・アビッシに属する、請求項２ 記載のキシラナーゼ調製品。 ４．前記キシラナーゼ産生株がピロジクチウム・アビッシDSM 6158である、請 求項３記載のキシラナーゼ調製品。 ５．（ａ）基質としてのキシランによる 100℃での決定に従い、pH 5.5〜pH 6 .5の域における至適活性； （ｂ）基質としてのキシランによるpH 5.5での決定に従い、105〜115 ℃の域 における温度においての至適活性； を更なる特徴とする、請求項４記載のキシラナーゼ。 ６．ピロジクチウム属のアミラーゼ産生株の培養により産生可能であることを 特徴とするアミラーゼ調製品。 ７．前記アミラーゼ産生株がピロジクチウム・アビッシに属する、請求項６記 載のアミラーゼ調製品。 ８．前記アミラーゼ産生株がピロジクチウム・アビッシDSM 6158に属する、請 求項７記載のアミラーゼ調製品。 ９．基質としてのデンプンによるpH 5.5での決定に従い、110〜120 ℃の域に おける温度においての至適活性を更なる特徴とする、請求項８記載のアミラーゼ 。 10．ピロジクチウム属のプルラナーゼ産生株の培養により産生可能であること を特徴とするプルラナーゼ調製品。 11．前記プルラナーゼ産生株がピロジクチウム・アビッシに属す る、請求項10記載のプルラナーゼ調製品。 12．前記プルラナーゼ産生株がピロジクチウム・アビッシDSM 6158に属する、 請求項11記載のプルラナーゼ調製品。 13．基質としてのプルランによるpH 5.5での決定に従い、110〜120 ℃の域に おける温度においての至適活性を更なる特徴とする、請求項12記載のプルラナー ゼ調製品。 14．リグノセルロースパルプの処理のためのプロセスにおける請求項１〜５の いづれか１項記載のキシラーゼの利用。 15．デンプンから甘味料を製造するプロセスにおける請求項６〜９のいづれか １項記載のアミラーゼの利用。 16．デンプンからエタノールを製造するプロセスにおける請求項６〜９のいづ れか１項記載のアミラーゼの利用。 17．デンプンから甘味料を製造するプロセスにおける請求項10〜13のいづれか １項記載のプルラナーゼの利用。 18．デンプンからエタノールを製造するプロセスにおける請求項10〜13のいづ れか１項記載のプルラナーゼの利用。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DK0682/94 | 1994-06-15 | ||
| DK68294 | 1994-06-15 | ||
| PCT/DK1995/000211 WO1995034644A1 (en) | 1994-06-15 | 1995-05-31 | Pyrodictium xylanase, amylase and pullulanase |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH10501694A true JPH10501694A (ja) | 1998-02-17 |
Family
ID=8096341
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8501488A Pending JPH10501694A (ja) | 1994-06-15 | 1995-05-31 | ピロジクチウム・キシラナーゼ、アミラーゼ及びプルラナーゼ |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US5688668A (ja) |
| EP (1) | EP0769049A1 (ja) |
| JP (1) | JPH10501694A (ja) |
| AU (1) | AU2669195A (ja) |
| WO (1) | WO1995034644A1 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2016518108A (ja) * | 2013-03-15 | 2016-06-23 | ビーエーエスエフ エンザイムズ エルエルシー | プルラナーゼ活性を有する酵素 |
Families Citing this family (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7288400B2 (en) | 1996-02-16 | 2007-10-30 | Verenium Corporation | Nucleic acids encoding esterases and methods of making and using them |
| US5942430A (en) * | 1996-02-16 | 1999-08-24 | Diversa Corporation | Esterases |
| KR20050010053A (ko) * | 2002-06-14 | 2005-01-26 | 다이버사 코포레이션 | 자일라나제, 이를 암호화하는 핵산, 및 이의 제조 및 사용방법 |
| CA2638801C (en) | 2006-02-14 | 2016-12-13 | Verenium Corporation | Xylanases, nucleic acids encoding them and methods for making and using them |
| US20110108222A1 (en) * | 2009-11-11 | 2011-05-12 | International Paper Company | Effect of low dose xylanase on pulp in prebleach treatment process |
| BR112012011106C8 (pt) | 2009-11-13 | 2019-11-26 | Novozymes As | método de mosturação |
| EP2638170B1 (en) | 2010-11-08 | 2017-10-18 | Deinove | Enzymes and uses thereof |
| US8759041B1 (en) * | 2013-02-12 | 2014-06-24 | Novozymes Inc. | Polypeptides having xylanase activity and polynucleotides encoding same |
| JP2016029908A (ja) | 2014-07-28 | 2016-03-07 | 本田技研工業株式会社 | Ｇｈファミリー１０に属する耐熱性キシラナーゼ |
| JP6354462B2 (ja) | 2014-08-29 | 2018-07-11 | 本田技研工業株式会社 | Ｇｈファミリー１０に属する耐熱性キシラナーゼ |
| US10597645B2 (en) | 2015-12-22 | 2020-03-24 | Novozymes A/S | Process of extracting oil from thin stillage |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4966850A (en) * | 1987-01-21 | 1990-10-30 | Forintek Canada Corp. | Production of thermostable xylanase and cellulase |
| US5711986A (en) * | 1988-10-14 | 1998-01-27 | National Starch And Chemical Investment Holding Corporation | Method of replacing fats with short chain amylose |
| DE3909096A1 (de) * | 1989-03-20 | 1990-09-27 | Garabed Antranikian | Alpha-amylase |
| DK47291D0 (da) * | 1991-03-15 | 1991-03-15 | Novo Nordisk As | Pullulanase |
| JP3026857B2 (ja) * | 1991-07-05 | 2000-03-27 | ナガセ生化学工業株式会社 | 新規プルラナーゼおよびその製造法 |
| DK175391D0 (da) * | 1991-10-18 | 1991-10-18 | Novo Nordisk As | Nye enzymer |
| JPH05236959A (ja) * | 1992-02-28 | 1993-09-17 | Yoshiyuki Takasaki | プルラナーゼ、その製造法及び該酵素を用いる澱粉の 糖化法 |
| DK34892D0 (da) * | 1992-03-16 | 1992-03-16 | Novo Nordisk As | Nyt enzym |
| US5491086A (en) * | 1993-05-14 | 1996-02-13 | Hoffmann-La Roche Inc. | Purified thermostable nucleic acid polymerase and DNA coding sequences from pyrodictium species |
| EP0795012A1 (en) * | 1994-03-04 | 1997-09-17 | Novo Nordisk A/S | $i(FERVIDOBACTERIUM) AMYLASE AND PULLULANASE |
-
1995
- 1995-05-31 EP EP95921723A patent/EP0769049A1/en not_active Withdrawn
- 1995-05-31 AU AU26691/95A patent/AU2669195A/en not_active Abandoned
- 1995-05-31 US US08/737,559 patent/US5688668A/en not_active Expired - Fee Related
- 1995-05-31 WO PCT/DK1995/000211 patent/WO1995034644A1/en not_active Application Discontinuation
- 1995-05-31 JP JP8501488A patent/JPH10501694A/ja active Pending
-
1997
- 1997-05-13 US US08/855,429 patent/US5912150A/en not_active Expired - Fee Related
- 1997-05-13 US US08/855,427 patent/US5972665A/en not_active Expired - Fee Related
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2016518108A (ja) * | 2013-03-15 | 2016-06-23 | ビーエーエスエフ エンザイムズ エルエルシー | プルラナーゼ活性を有する酵素 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US5688668A (en) | 1997-11-18 |
| AU2669195A (en) | 1996-01-05 |
| WO1995034644A1 (en) | 1995-12-21 |
| EP0769049A1 (en) | 1997-04-23 |
| US5972665A (en) | 1999-10-26 |
| US5912150A (en) | 1999-06-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CA1214407A (en) | Maltogenic amylase enzyme, preparation and use thereof | |
| JP4199422B2 (ja) | ポリペプチド | |
| JPH05508997A (ja) | 新規熱安定性プルラナーゼ | |
| Saha | Purification and properties of an extracellular β-xylosidase from a newly isolated Fusarium proliferatum | |
| Koch et al. | Purification and properties of a thermostable pullulanase from a newly isolated thermophilic anaerobic bacterium, Fervidobacterium pennavorans Ven5 | |
| JPH04503757A (ja) | 新規超熱安定性α―アミラーゼ | |
| JPH06217770A (ja) | プルラナーゼ、それを生産する微生物、そのプルラナーゼの調製方法及び使用 | |
| JPH10501694A (ja) | ピロジクチウム・キシラナーゼ、アミラーゼ及びプルラナーゼ | |
| JPH0330672A (ja) | 新規耐熱性および耐酸性プルラナーゼ酵素およびその製造方法 | |
| Thomas et al. | Identification and characterization of a highly alkaline and thermotolerant novel xylanase from Streptomyces sp. | |
| JPS62201577A (ja) | β−アミラ−ゼ酵素 | |
| EP0793716A1 (en) | $i(THERMOCOCCUS) AMYLASE AND PULLULANASE | |
| CA1081633A (en) | Heat and acid-stable alpha-amylase enzymes and processes for producing the same | |
| EP0402092A2 (en) | Alpha-amylase-pullulanase enzyme | |
| WO1995023853A1 (en) | Desulfurococcus amylase and pullulanase | |
| US5714369A (en) | Fervidobacterium amylase and pullulanase | |
| JPH11318441A (ja) | 超耐熱耐酸性アミロプルラナーゼ | |
| EP0558036A1 (en) | Debranching enzyme and process for producing the same | |
| JPS61162181A (ja) | 耐熱性キシラナ−ゼの製造法 | |
| US5882906A (en) | Staphylothermus amylase | |
| JP7460978B2 (ja) | β－グルコシダーゼを生産する微生物及び該β－グルコシダーゼを生産する微生物を用いたセルロース系バイオマスの糖化方法。 | |
| EP0640138B1 (en) | Dna fragment containing gene for alkaline pullulanase | |
| US6355467B1 (en) | Saccharification enzymes from hyperthermophilic bacteria and processes for their production | |
| CN116064480A (zh) | 一种热稳定性提高的α-葡萄糖苷酶环化突变体及其构建方法 | |
| JP2913411B2 (ja) | セルラーゼ遺伝子 |