JPH10500287A - 非交差性レトロウイルスベクター - Google Patents
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- C12N2740/13051—Methods of production or purification of viral material
- C12N2740/13052—Methods of production or purification of viral material relating to complementing cells and packaging systems for producing virus or viral particles
Abstract
Description
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1.5’LTR、 tRNA結合部位、パッケージングシグナル、1つ又はそれ より多い異種配列、第2ストランドのDNA合成源及び3’LTRを含むレトロ ウイルスベクター構築物であって、その際該ベクター構築物は gag/pol 及びen v コード化配列を欠いている。 2.上記ベクター構築物が延長されたパッケージングシグナルを欠いている請 求項1に記載のレトロウイルスベクター構築物。 3.上記構築物が上記5’LTRの上流にレトロウイルス核酸配列を欠いてい る請求項1に記載のレトロウイルスベクター構築物。 4.上記構築物が上記5’LTRの上流にenv コード化配列を欠いている請求 項3に記載のレトロウイルスベクター構築物。 5.上記構築物が上記3’LTRの上流にレトロウイルスパッケージングシグ ナル配列を欠いている請求項1に記載のレトロウイルスベクター構築物。 6.上記レトロベクターがアンホトロピック、エコトロピック、キセノトロピ ック又はポリトロピックウイルスから選択されるレトロウイルスから構築される 請求項1から5のいずれか1項に記載のレトロウイルスベクター構築物。 7.上記レトロベクターがネズミ白血病ウイルスから構築される請求項1から 5のいずれか1項に記載のレトロウイルスベクター構築物。 8.上記異種配列が少なくともxbpの長さであり、その際xは2、3、4、5 、6、7及び8からなる群から選択される請求項1から5のいずれか1項に記載 のレトロウイルスベクター構築物。 9.上記異種配列が細胞毒性タンパク質をコードする遺伝子であ る請求項8に記載のレトロウイルスベクター構築物。 10.上記細胞毒性タンパク質がリシン、アブリン、ジフテリアトキシン、コ レラトキシン、ゲロニン、ポークウィード、抗ウイルスタンパク質、トリチン、 赤痢菌トキシン及びシュードモナスエキソトキシンAからなる群から選択される 請求項9に記載のレトロウイルスベクター構築物。 11.上記異種配列がアンチセンス配列である請求項8に記載のレトロウイル スベクター構築物。 12.上記異種配列が免疫アクセサリー分子をコードする請求項8に記載のレ トロウイルスベクター構築物。 13.上記免疫アクセサリー分子がIL−1、IL−3、IL−4、IL−5 、IL−6、IL−7、IL−8、IL−9、IL−10、IL−11及びIL−13 からなる群から選択される請求項12に記載のレトロウイルスベクター構築物。 14.上記免疫アクセサリー分子がIL−2、IL−12、IL−15及びガンマ インターフェロンからなる群から選択される請求項12に記載のレトロウイルス ベクター構築物。 15.上記免疫アクセサリー分子がICAM−1、ICAM−2、β−ミクロ グロビン、LFA3、HLAクラスI 及びHLAクラスII分子からなる群から選 択される請求項12に記載のレトロウイルスベクター構築物。 16.上記異種配列が殆ど又は全く細胞毒性を有していない化合物を毒性生成 物に活性化する遺伝子産生物をコードする請求項8に記載のレトロウイルスベク ター構築物。 17.上記遺伝子産生物がHSVTK及びVZVTKからなる群から選択され る請求項16に記載のレトロウイルスベクター構築物。 18.上記異種配列がリボザイムである請求項8に記載のレトロウイルスベク ター構築物。 19.上記異種配列が置換遺伝子である請求項8に記載のレトロウイルスベク ター構築物。 20.上記置換遺伝子がVIII 因子、ADA、HPRT、CF及びLDLレセ プターからなる群から選択されるタンパク質をコードする請求項19に記載のレ トロウイルスベクター構築物。 21.上記異種配列がHBV、HCV、HPV、EBV、FeLV、FIV及 びHIVからなる群から選択されるウイルスの免疫原性部分をコードする請求項 8に記載のレトロウイルスベクター構築物。 22.gag/pol 遺伝子に操作して結合したプロモーターとポリアデニル化配 列を含む gag/pol 発現カセットであって、その際上記 gag/pol 遺伝子はgag の縮重であるコドンを含有するように修正されている。 23.上記 gag/pol 遺伝子の5’末端がレトロウイルスパッケージングシグ ナル配列を欠いている請求項22に記載の gag/pol 発現カセット。 24.gag/pol 遺伝子に操作して結合したプロモーターとポリアデニル化配 列を含む gag/pol 発現カセットであって、その際上記 gag/pol 遺伝子の3’ 末端が欠失されておりインテグラーゼの生物学的活性をもたらさない。 25.上記 gag/pol 遺伝子の5’末端がgag の縮重であるコドンを含有する ように修正されている請求項24に記載の gag/pol 発現カセット。 26.上記 gag/pol 遺伝子がレトロウイルスパッケージングシグナル配列を 欠いている請求項24に記載の gag/pol 発現カセッ ト。 27.上記3’末端が配列ID No 1のヌクレオチド5751の上流で欠失され ている請求項24から26に記載の gag/pol 発現カセット。 28.上記プロモーターが異種プロモーターである請求項22から26のいず れか1項に記載の gag/pol 発現カセット。 29.上記プロモーターがCMV IE、HSVTKプロモーター、RSVプ ロモーター、アデノウイルス主要−後期プロモーター及びSV40プロモーターか らなる群から選択される請求項28に記載の gag/pol 発現カセット。 30.上記ポリアデニル化配列が異種ポリアデニル化配列である請求項22か ら26のいずれか1項に記載の gag/pol 発現カセット。 31.上記異種ポリアデニル化配列がSV40後期ポリAシグナル及びSV40前 期ポリAシグナルからなる群から選択される請求項30に記載の gag/pol 発現 カセット。 32.gag/pol 遺伝子に操作して結合したプロモーターとポリアデニル化配 列を含む gag/pol 発現カセットであって、その際該発現カセットは複製コンピ テントウイルスと一緒にはキャプシド内に包含されていない。 33.env 遺伝子に操作して結合したプロモーターとポリアデニル化配列を含 むenv 発現カセットであって、その際上記env 遺伝子の上流には僅か6個の連続 レトロウイルスヌクレオチドしか含有されていない。 34.env 遺伝子に操作して結合したプロモーターとポリアデニル化配列を含 むenv 発現カセットであって、その際該env 発現カセットは gag/pol 遺伝子中 に見られる8個のヌクレオチドより多い ヌクレオチド連続配列を含有していない。 35.env 遺伝子に操作して結合したプロモーターとポリアデニル化配列を含 むenv 発現カセットであって、その際上記env 遺伝子は3’末端が欠失されてお りenv の生物学的活性をもたらさない。 36.上記env 遺伝子の上記3’末端が、env 発現カセットによって完全なR ペプチドが産生されないように欠失されている請求項35に記載のenv 発現カセ ット。 37.上記env 遺伝子がタイプCレトロウイルスから誘導され、そして上記en v 遺伝子が上記Rペプチドをコードする18個の核酸より少ない核酸を含有するよ うに3’末端が欠失されている請求項36に記載のenv 発現カセット。 38.上記3’末端が配列ID.No.1のヌクレオチド7748から下流で欠失さ れている請求項36に記載のenv 発現カセット。 39.上記プロモーターが異種プロモーターである請求項33から38のいず れか1項に記載のenv 発現カセット。 40.上記プロモーターがCMV IE、HSVTKプロモーター、RSVプ ロモーター、アデノウイルス主要後期プロモーター及びV40プロモーターからな る群から選択される請求項39に記載のenv 発現カセット。 41.上記ポリアデニル化配列が異種ポリアデニル化配列である請求項33か ら38のいずれか1項に記載のenv 発現カセット。 42.上記異種ポリアデニル化配列がSV40後期ポリAシグナル及びSV40前 期ポリAシグナルからなる群から選択される請求項41に記載のenv 発現カセッ ト。 43.gag/pol 発現カセットとenv 発現カセットを含むパッケージング細胞 株であって、その際 gag/pol 発現カセットはenv 発現カセット中に見られる8 個の連続ヌクレオチドより多いヌクレオ チド連続配列を欠いている。 44.請求項22から32に記載の gag/pol 発現カセットとenv 発現カセッ トを含むパッケージング細胞株。 45.gag/pol 発現カセットと請求項33から42に記載のenv 発現カセッ トを含むパッケージング細胞株。 46.請求項43から45のいずれか1項に記載のパッケージング細胞株とレ トロウイルスベクター構築物を含む産生細胞株。 47.上記レトロウイルスベクター構築物が請求項1から21のいずれか1項 に記載のレトロウイルスベクター構築物である請求項46に記載の産生細胞株。 48.gag/pol 発現カセット、env 発現カセット及びレトロウイルスベクタ ー構築物を含む産生細胞株であって、その際上記 gag/pol 発現カセット、env 発現カセット及びレトロウイルスベクター構築物は共通した8個のヌクレオチド より多い連続配列を欠いている。 49.パッケージング細胞の製造方法であって、該方法は (a)請求項22から32に記載の gag/pol 発現カセットを動物細胞内に導 入し; (b)高レベルの gag/pol を発現する gag/pol 発現カセットを含有する細 胞を選択し; (c)env 発現カセットを上記の選択した細胞内に導入し; そして (d)高レベルのenv を発現する細胞を選択し、そしてそれによって上記パッ ケージング細胞を製造する、 ことを含む。 50.パッケージング細胞の製造方法であって、該方法は (a)請求項33から42に記載のenv 発現カセットを動物細胞 内に導入し; (b)高レベルのenv を発現する細胞を選択し; (c) gag/pol 発現カセットを上記の選択した細胞内に導入し; そして (d)高レベルの gag/pol を発現する gag/pol 発現カセットを含有する細 胞を選択し、そしてそれによって上記パッケージング細胞を製造する、 ことを含む。 51.レトロウイルスベクター構築物を請求項49から50に記載のパッケー ジング細胞株内に導入することを含む組換え体レトロウイルス粒子の製造方法。 52.上記レトロウイルスベクター構築物が請求項1から21のいずれか1項 に記載のレトロウイルスベクター構築物である請求項51に記載の方法。
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