JPH10271999A - Ｓ，ｓ−エチレンジアミン−ｎ，ｎ’−ジコハク酸の製造法 - Google Patents
Ｓ，ｓ−エチレンジアミン−ｎ，ｎ’−ジコハク酸の製造法Info
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- JPH10271999A JPH10271999A JP22206697A JP22206697A JPH10271999A JP H10271999 A JPH10271999 A JP H10271999A JP 22206697 A JP22206697 A JP 22206697A JP 22206697 A JP22206697 A JP 22206697A JP H10271999 A JPH10271999 A JP H10271999A
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Abstract
(57)【要約】
【解決手段】 リアーゼ活性を有する微生物または該処
理物の作用により、エチレンジアミンとフマル酸の混合
物からＳ，Ｓ−エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ジコハク
酸を製造するに際し、該反応系にアルカリ土類金属、
鉄、亜鉛、銅、ニッケル、アルミニウム、チタニウムお
よびマンガンからなる群から選ばれる少なくとも一種の
金属のイオンを存在させる。 【効果】 反応収率を向上させると共に、適宜、Ｓ，Ｓ
−エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ジコハク酸またはその
金属錯体を効率的に製造し得る。
理物の作用により、エチレンジアミンとフマル酸の混合
物からＳ，Ｓ−エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ジコハク
酸を製造するに際し、該反応系にアルカリ土類金属、
鉄、亜鉛、銅、ニッケル、アルミニウム、チタニウムお
よびマンガンからなる群から選ばれる少なくとも一種の
金属のイオンを存在させる。 【効果】 反応収率を向上させると共に、適宜、Ｓ，Ｓ
−エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ジコハク酸またはその
金属錯体を効率的に製造し得る。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は微生物の作用により
エチレンジアミンとフマル酸からＳ，Ｓ−エチレンジア
ミン−Ｎ，Ｎ’−ジコハク酸を製造する方法に関する。
Ｓ，Ｓ−エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ジコハク酸は重
金属を補足するという特異な性質を持ち、且つ、自然界
に放出された後に生分解を受け易いため、キレート剤や
洗剤用ビルダーなどの用途が見込まれる。
エチレンジアミンとフマル酸からＳ，Ｓ−エチレンジア
ミン−Ｎ，Ｎ’−ジコハク酸を製造する方法に関する。
Ｓ，Ｓ−エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ジコハク酸は重
金属を補足するという特異な性質を持ち、且つ、自然界
に放出された後に生分解を受け易いため、キレート剤や
洗剤用ビルダーなどの用途が見込まれる。
【０００２】
【従来の技術】エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ジコハク
酸の立体異性体混合物（Ｓ，Ｓ−、Ｒ，Ｒ−、ｍｅｓｏ
−体）は有機合成的手法によりマレイン酸とエチレンジ
アミンから〔米国特許第3,158,635 号参照〕、また、そ
の光学活性体の一つであるＳ，Ｓ−体はＬ−アスパラギ
ン酸とジブロムエタンから〔John A. Neal et al. Inor
ganic Chem. ７, 2405 (1968)参照〕各々製造できると
の報告がある。しかし、Ｌ−アスパラギン酸とジブロム
エタンからの製法では、製造原料が比較的高価となり、
安価で汎用性のある光学活性体を供給することは困難で
ある。
酸の立体異性体混合物（Ｓ，Ｓ−、Ｒ，Ｒ−、ｍｅｓｏ
−体）は有機合成的手法によりマレイン酸とエチレンジ
アミンから〔米国特許第3,158,635 号参照〕、また、そ
の光学活性体の一つであるＳ，Ｓ−体はＬ−アスパラギ
ン酸とジブロムエタンから〔John A. Neal et al. Inor
ganic Chem. ７, 2405 (1968)参照〕各々製造できると
の報告がある。しかし、Ｌ−アスパラギン酸とジブロム
エタンからの製法では、製造原料が比較的高価となり、
安価で汎用性のある光学活性体を供給することは困難で
ある。
【０００３】一方、微生物による生産に関して、Ｓ，Ｓ
−エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ジコハク酸が、放線菌
ＭＧ４１７−ＣＦ１７株の培養液からホスホリパーゼＣ
の特異的阻害剤として単離同定されている〔T. Nishiki
ori et al., J. Antibiotics37, 426 (1984) 参照〕。
しかし、この放線菌による生産性は極めて低く、工業的
製法とは成り難い。
−エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ジコハク酸が、放線菌
ＭＧ４１７−ＣＦ１７株の培養液からホスホリパーゼＣ
の特異的阻害剤として単離同定されている〔T. Nishiki
ori et al., J. Antibiotics37, 426 (1984) 参照〕。
しかし、この放線菌による生産性は極めて低く、工業的
製法とは成り難い。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】これに対し、本発明者
らは、先に、微生物の触媒作用を利用して、フマル酸と
各種ジアミンから効率よく光学活性ジアミノアルキレン
−Ｎ，Ｎ’−ジコハク酸などを製造する新規な方法を提
案した〔特開平9-140390号公報参照〕。本発明は、同方
法のＳ，Ｓ−エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ジコハク酸
の反応収率を向上させることを課題としている。
らは、先に、微生物の触媒作用を利用して、フマル酸と
各種ジアミンから効率よく光学活性ジアミノアルキレン
−Ｎ，Ｎ’−ジコハク酸などを製造する新規な方法を提
案した〔特開平9-140390号公報参照〕。本発明は、同方
法のＳ，Ｓ−エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ジコハク酸
の反応収率を向上させることを課題としている。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、この課題
を改善すべく鋭意研究を行った結果、反応系に、生成す
るＳ，Ｓ−エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ジコハク酸が
配位し、錯体を形成し得る金属のイオンを存在させるこ
とにより、Ｓ，Ｓ−エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ジコ
ハク酸の反応収率を飛躍的に改善できることを見い出し
本発明に到達した。
を改善すべく鋭意研究を行った結果、反応系に、生成す
るＳ，Ｓ−エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ジコハク酸が
配位し、錯体を形成し得る金属のイオンを存在させるこ
とにより、Ｓ，Ｓ−エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ジコ
ハク酸の反応収率を飛躍的に改善できることを見い出し
本発明に到達した。
【０００６】すなわち、本発明は、リアーゼ活性を有す
る微生物または該処理物の作用により、エチレンジアミ
ンとフマル酸の混合物からＳ，Ｓ−エチレンジアミン−
Ｎ，Ｎ’−ジコハク酸を製造するに際し、該反応系にア
ルカリ土類金属、鉄、亜鉛、銅、ニッケル、アルミニウ
ム、チタニウムおよびマンガンからなる群から選ばれる
少なくとも一種の金属のイオンを存在させることを特徴
とするＳ，Ｓ−エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ジコハク
酸の製造法、である。
る微生物または該処理物の作用により、エチレンジアミ
ンとフマル酸の混合物からＳ，Ｓ−エチレンジアミン−
Ｎ，Ｎ’−ジコハク酸を製造するに際し、該反応系にア
ルカリ土類金属、鉄、亜鉛、銅、ニッケル、アルミニウ
ム、チタニウムおよびマンガンからなる群から選ばれる
少なくとも一種の金属のイオンを存在させることを特徴
とするＳ，Ｓ−エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ジコハク
酸の製造法、である。
【０００７】上記したところを要旨とする本発明の反応
機構については、以下の様に考えられる。まず最初に、
リアーゼ活性を有する微生物または該処理物の作用によ
りフマル酸とエチレンジアミンからＳ，Ｓ−エチレンジ
アミン−Ｎ，Ｎ’−ジコハク酸が生成し、次いで、生成
したＳ，Ｓ−エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ジコハク酸
が基質であるフマル酸やエチレンジアミンに比べて反応
系に存在する金属のイオンに、より強く配位し、安定な
錯体を形成することにより、化学平衡点が生成物側に移
動する。すなわち、フマル酸とエチレンジアミンから
Ｓ，Ｓ−エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ジコハク酸が生
成する平衡反応に、安定な錯体を形成する平衡反応が加
わることにより、遊離のＳ，Ｓ−エチレンジアミン−
Ｎ，Ｎ’−ジコハク酸とその金属錯体の総和としての収
率が、金属イオンを存在させない場合に比べて向上する
ものと推察される。
機構については、以下の様に考えられる。まず最初に、
リアーゼ活性を有する微生物または該処理物の作用によ
りフマル酸とエチレンジアミンからＳ，Ｓ−エチレンジ
アミン−Ｎ，Ｎ’−ジコハク酸が生成し、次いで、生成
したＳ，Ｓ−エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ジコハク酸
が基質であるフマル酸やエチレンジアミンに比べて反応
系に存在する金属のイオンに、より強く配位し、安定な
錯体を形成することにより、化学平衡点が生成物側に移
動する。すなわち、フマル酸とエチレンジアミンから
Ｓ，Ｓ−エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ジコハク酸が生
成する平衡反応に、安定な錯体を形成する平衡反応が加
わることにより、遊離のＳ，Ｓ−エチレンジアミン−
Ｎ，Ｎ’−ジコハク酸とその金属錯体の総和としての収
率が、金属イオンを存在させない場合に比べて向上する
ものと推察される。
【０００８】
【発明の実施の形態】本発明における金属のイオンは、
アルカリ土類金属、鉄、亜鉛、銅、ニッケル、アルミニ
ウム、チタニウムおよびマンガンのイオンであり、例え
ば、Ｍｇ(II)、Ｃａ(II)、Ｓｒ(II)、Ｂａ(II)、Ｆｅ(I
I)、Ｆｅ(III) 、Ｚｎ(II)）、Ｃｕ(II)、Ｎｉ(II)、Ａ
ｌ(III) 、Ｔｉ(IV)およびＭｎ(II)イオンならびにこれ
らの各種錯イオンを挙げることができる。
アルカリ土類金属、鉄、亜鉛、銅、ニッケル、アルミニ
ウム、チタニウムおよびマンガンのイオンであり、例え
ば、Ｍｇ(II)、Ｃａ(II)、Ｓｒ(II)、Ｂａ(II)、Ｆｅ(I
I)、Ｆｅ(III) 、Ｚｎ(II)）、Ｃｕ(II)、Ｎｉ(II)、Ａ
ｌ(III) 、Ｔｉ(IV)およびＭｎ(II)イオンならびにこれ
らの各種錯イオンを挙げることができる。
【０００９】これら金属のイオン源としては、これら金
属の水酸化物、酸化物ならびに硫酸、塩酸、硝酸、リン
酸、炭酸および酢酸等の無機または有機酸塩、さらにこ
れら金属化合物を含む鉱物や本発明の基質であるフマル
酸やエチレンジアミンとの化合物等を挙げることができ
る。これらの化合物は２種以上混合して用いることも可
能である。
属の水酸化物、酸化物ならびに硫酸、塩酸、硝酸、リン
酸、炭酸および酢酸等の無機または有機酸塩、さらにこ
れら金属化合物を含む鉱物や本発明の基質であるフマル
酸やエチレンジアミンとの化合物等を挙げることができ
る。これらの化合物は２種以上混合して用いることも可
能である。
【００１０】また、これらの金属化合物中には、水に対
し溶解度の低いものあるいは難溶性のものもあるが、こ
れらを飽和濃度以上に、例えば、懸濁状態として存在さ
せた場合でも、Ｓ，Ｓ−エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−
ジコハク酸の配位能により相当量が可溶化されるため使
用可能である。すなわち、本発明の「金属のイオン」源
としての化合物は、金属のイオンがＳ，Ｓ−エチレンジ
アミン−Ｎ，Ｎ’−ジコハク酸と配位し、本発明の効果
が得られるものである限り使用できる。
し溶解度の低いものあるいは難溶性のものもあるが、こ
れらを飽和濃度以上に、例えば、懸濁状態として存在さ
せた場合でも、Ｓ，Ｓ−エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−
ジコハク酸の配位能により相当量が可溶化されるため使
用可能である。すなわち、本発明の「金属のイオン」源
としての化合物は、金属のイオンがＳ，Ｓ−エチレンジ
アミン−Ｎ，Ｎ’−ジコハク酸と配位し、本発明の効果
が得られるものである限り使用できる。
【００１１】前記の通り、本発明は、金属のイオンによ
り化学平衡点を基質側から生成物側に移動させることに
基づいているが、通常、化学平衡点は触媒の種類に左右
されない。したがって、本発明における化学平衡点は金
属のイオンの種類によってのみ値が変化し、副反応やそ
の他の反応が関わらない限り、すべての触媒について一
定の値を示す。このことは、本発明の実施例および参考
例によって立証される。すなわち、本発明の触媒である
リアーゼは、いずれの微生物由来であるかは、それが
Ｓ，Ｓ−エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ジコハク酸を生
成する能力を有する限り、特に限定されない。
り化学平衡点を基質側から生成物側に移動させることに
基づいているが、通常、化学平衡点は触媒の種類に左右
されない。したがって、本発明における化学平衡点は金
属のイオンの種類によってのみ値が変化し、副反応やそ
の他の反応が関わらない限り、すべての触媒について一
定の値を示す。このことは、本発明の実施例および参考
例によって立証される。すなわち、本発明の触媒である
リアーゼは、いずれの微生物由来であるかは、それが
Ｓ，Ｓ−エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ジコハク酸を生
成する能力を有する限り、特に限定されない。
【００１２】リアーゼ活性を有する微生物としては、例
えば、バークホルデリア（Burkholderia）属、アシドボ
ラックス（Acidovorax）属、シュードモナス（Pseudomo
nas)属、パラコッカス（Paracoccus）属、スフィンゴモ
ナス（Sphingomonas）属およびブレブンジモナス（Brev
undimonas)属等の細菌を挙げることができる。
えば、バークホルデリア（Burkholderia）属、アシドボ
ラックス（Acidovorax）属、シュードモナス（Pseudomo
nas)属、パラコッカス（Paracoccus）属、スフィンゴモ
ナス（Sphingomonas）属およびブレブンジモナス（Brev
undimonas)属等の細菌を挙げることができる。
【００１３】具体的には、Burkholderia sp.ＫＫ−５株
〔ＦＥＲＭ ＢＰ−５４１２〕、同ＫＫ−９株〔ＦＥＲ
Ｍ ＢＰ−５４１３〕、Acidovorax sp.ＴＮ−５１株
〔ＦＥＲＭ ＢＰ−５４１６〕、Pseudomonas sp. ＴＮ
−１３１株〔ＦＥＲＭ ＢＰ−５４１８〕、Paracoccus
sp.ＫＫ−６株〔ＦＥＲＭ ＢＰ−５４１５〕、Sphing
omonas sp.ＴＮ−２８株〔ＦＥＲＭ ＢＰ−５４１
９〕、Brevundimonas sp. ＴＮ−３０株〔ＦＥＲＭ Ｂ
Ｐ−５４１７〕および同ＴＮ−３株〔ＦＥＲＭ ＢＰ−
５８８６〕を挙げることができる。
〔ＦＥＲＭ ＢＰ−５４１２〕、同ＫＫ−９株〔ＦＥＲ
Ｍ ＢＰ−５４１３〕、Acidovorax sp.ＴＮ−５１株
〔ＦＥＲＭ ＢＰ−５４１６〕、Pseudomonas sp. ＴＮ
−１３１株〔ＦＥＲＭ ＢＰ−５４１８〕、Paracoccus
sp.ＫＫ−６株〔ＦＥＲＭ ＢＰ−５４１５〕、Sphing
omonas sp.ＴＮ−２８株〔ＦＥＲＭ ＢＰ−５４１
９〕、Brevundimonas sp. ＴＮ−３０株〔ＦＥＲＭ Ｂ
Ｐ−５４１７〕および同ＴＮ−３株〔ＦＥＲＭ ＢＰ−
５８８６〕を挙げることができる。
【００１４】これらの細菌は、本発明者らにより自然界
から新たに分離され、上記番号にて通産省工業技術院生
命工学工業技術研究所に寄託されている。本菌の菌学的
性質は以下に示す通りである。
から新たに分離され、上記番号にて通産省工業技術院生
命工学工業技術研究所に寄託されている。本菌の菌学的
性質は以下に示す通りである。
【００１５】 菌学的性質 ＫＫ−５株 ＫＫ−９株 形態 桿菌 桿菌 グラム染色 − − 胞子 − − 運動性 ＋ ＋ 鞭毛 極多毛 極多毛 酸素に対する態度 好気性 好気性 オキシダーゼ ＋ ＋ カタラーゼ ＋ ＋ ＯＦテスト Ｏ Ｏ キノン系 Ｑ−８ Ｑ−８ プロトカテキン酸の開裂 ｏｒｔｈｏ型 ｏｒｔｈｏ型 蛍光色素の生成 − − 硝酸塩還元 − ＋ インドール生成 − − アルギニンジヒドロラーゼ − − 尿素分解 − − エスクリン分解 − − ゼラチン液化 − − ＰＮＰＧ ＋ − キシロースからの酸生成 ＋ ＋ 資化性 グルコース ＋ ＋ Ｌ−アラビノース ＋ ＋ Ｄ−マンノース ＋ ＋ Ｄ−マンニトール ＋ ＋ マルトース − − グルコン酸カリウム ＋ ＋ ｎ−カプリン酸 ＋ ＋ アジピン酸 − − ｄｌ−リンゴ酸 ＋ ＋ クエン酸 ＋ − 酢酸フェニル ＋ ＋
【００１６】
【００１７】
【００１８】
【００１９】
【００２０】 ＴＮ−３０株 ＴＮ−３株 形態 桿菌 桿菌 グラム染色性 − − 胞子 − − 運動性 ＋ ＋ 鞭毛 極毛 極毛 酸素に対する態度 好気性 好気性 オキシダーゼ ＋ ＋ カタラーゼ ＋ ＋ ＯＦテスト − − 集落の色調 特徴的色素 特徴的色素 を生成せず を生成せず 蛍光色素の生成 − − ＰＨＢの蓄積 ＋ ＋ 栄養要求性 ＋ ＋ キノン系 Ｑ−１０ Ｑ−１０ 硝酸塩還元 ＋ ＋ インドール生成 − − アルギニンジヒドロラーゼ − − 尿素分解 − − エスクリン分解 − − ゼラチン液化 − − ＰＮＰＧ − − 資化性 グルコース − − Ｌ−アラビノース − − Ｄ−マンノース − − Ｄ−マンニトール − − Ｎ−アセチル− − − Ｄ−グルコサミン マルトース − − グルコン酸カリウム ＋ ＋ ｎ−カプリン酸 − − アジピン酸 ＋ ＋ ｄｌ−リンゴ酸 − ＋ クエン酸 ＋ ＋ 酢酸フェニル − −
【００２１】上記菌学的性質を、Bergey's Manual of S
ystematic Bacteriology Vol.1(1984)およびBergey's M
anual of Determinative Bacteriology ９版(1994)によ
り分類すると、ＫＫ−５株およびＫＫ−９株はバークホ
ルデリア（Burkholderia）属に、ＴＮ−５１株はアシド
ボラックス（Acidovorax）属に、ＴＮ−１３１株はシュ
ードモナス（Pseudomonas)属に、Bergey's Manual of S
ystematic Bacteriology Vol.1(1984)により分類すると
ＫＫ−６株はパラコッカス（Paracoccus）属に、Berge
y's Manual of Determinative Bacteriology ９版(199
4)およびMicrobiol. Immunol. 34, 99(1990)により分類
するとＴＮ−２８株はスフィンゴモナス（Sphingomona
s）属に、また、Bergey's Manual of Determinative Ba
cteriology９版(1994)およびInt. J. Syst. Bacteriol.
44, 499(1994)により分類すると、ＴＮ−３0 株および
ＴＮ−３株はブレブンジモナス（Brevundimonas)属に属
する細菌と同定された。
ystematic Bacteriology Vol.1(1984)およびBergey's M
anual of Determinative Bacteriology ９版(1994)によ
り分類すると、ＫＫ−５株およびＫＫ−９株はバークホ
ルデリア（Burkholderia）属に、ＴＮ−５１株はアシド
ボラックス（Acidovorax）属に、ＴＮ−１３１株はシュ
ードモナス（Pseudomonas)属に、Bergey's Manual of S
ystematic Bacteriology Vol.1(1984)により分類すると
ＫＫ−６株はパラコッカス（Paracoccus）属に、Berge
y's Manual of Determinative Bacteriology ９版(199
4)およびMicrobiol. Immunol. 34, 99(1990)により分類
するとＴＮ−２８株はスフィンゴモナス（Sphingomona
s）属に、また、Bergey's Manual of Determinative Ba
cteriology９版(1994)およびInt. J. Syst. Bacteriol.
44, 499(1994)により分類すると、ＴＮ−３0 株および
ＴＮ−３株はブレブンジモナス（Brevundimonas)属に属
する細菌と同定された。
【００２２】生物界に幅広く存在するフマラーゼは、本
反応の基質であるフマル酸をリンゴ酸に水和し、収率を
低下させる要因となるため、使用する菌株のフマラーゼ
活性が弱いか、容易に失活する場合を除いて、除去ある
いは阻害するのが望ましい。例えば、菌体破砕液から、
クロマトグラフィー、塩析、電気泳動等の手法で除去す
る方法、阻害剤により阻害する方法、菌体のままでフマ
ラーゼを失活させる方法〔I. Umehara et al., Appl Mi
crobiol Biotechnol 20, 291(1984)および湯川ら農芸化
学 59, 279(1985)〕などが知られている。
反応の基質であるフマル酸をリンゴ酸に水和し、収率を
低下させる要因となるため、使用する菌株のフマラーゼ
活性が弱いか、容易に失活する場合を除いて、除去ある
いは阻害するのが望ましい。例えば、菌体破砕液から、
クロマトグラフィー、塩析、電気泳動等の手法で除去す
る方法、阻害剤により阻害する方法、菌体のままでフマ
ラーゼを失活させる方法〔I. Umehara et al., Appl Mi
crobiol Biotechnol 20, 291(1984)および湯川ら農芸化
学 59, 279(1985)〕などが知られている。
【００２３】次に本発明の一般的実施態様について説明
する。本発明で使用される微生物の培養液には何ら特別
の制限がなく、資化しうる炭素源、窒素源、無機塩、更
に微量の有機栄養物などを適当に含有するものであれば
合成培地、天然培地のいずれでもよい。また、培養に当
っては培地へのエチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ジコハク
酸、エチレンジアミン−Ｎ−モノコハク酸、アスパラギ
ン酸、グルタミン酸、ヒスチジンなどのアミノ酸やフマ
ル酸等の添加は、目的とする活性の高い菌体が得られる
ことがあり好ましい。培養条件は菌体や培地により異な
るが、培地のｐＨは４〜１０、好ましくは６〜９の範
囲、培養温度は２０〜４５℃、好ましくは２５〜３５℃
の範囲で１〜１０日間好気的に行い、活性が最大となる
まで１〜１０日間培養すればよい。
する。本発明で使用される微生物の培養液には何ら特別
の制限がなく、資化しうる炭素源、窒素源、無機塩、更
に微量の有機栄養物などを適当に含有するものであれば
合成培地、天然培地のいずれでもよい。また、培養に当
っては培地へのエチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ジコハク
酸、エチレンジアミン−Ｎ−モノコハク酸、アスパラギ
ン酸、グルタミン酸、ヒスチジンなどのアミノ酸やフマ
ル酸等の添加は、目的とする活性の高い菌体が得られる
ことがあり好ましい。培養条件は菌体や培地により異な
るが、培地のｐＨは４〜１０、好ましくは６〜９の範
囲、培養温度は２０〜４５℃、好ましくは２５〜３５℃
の範囲で１〜１０日間好気的に行い、活性が最大となる
まで１〜１０日間培養すればよい。
【００２４】一般に、Ｓ，Ｓ−エチレンジアミン−Ｎ，
Ｎ’−ジコハク酸生産反応は、前記の金属化合物、およ
びエチレンジアミンとフマル酸を含む水溶液中で、上記
菌体または該菌体処理物（乾燥菌体、菌体の破砕物、粗
・精製酵素、固定化菌体・酵素など）を接触させること
により行われるが、菌体培養液に、金属化合物およびエ
チレンジアミンとフマル酸を直接添加しても行うことが
できる。
Ｎ’−ジコハク酸生産反応は、前記の金属化合物、およ
びエチレンジアミンとフマル酸を含む水溶液中で、上記
菌体または該菌体処理物（乾燥菌体、菌体の破砕物、粗
・精製酵素、固定化菌体・酵素など）を接触させること
により行われるが、菌体培養液に、金属化合物およびエ
チレンジアミンとフマル酸を直接添加しても行うことが
できる。
【００２５】反応温度やｐＨにより異なるが、フマル酸
の濃度は０．０１Ｍ〜飽和濃度、好ましくは０．０２〜
１．２Ｍの範囲であり、エチレンジアミンの濃度は０．
０１Ｍ〜２Ｍ、好ましくは０．０１５〜１Ｍの範囲であ
る。金属化合物の量は生成するＳ，Ｓ−エチレンジアミ
ン−Ｎ，Ｎ’−ジコハク酸の理論量に対して、通常、金
属として０．０１〜２倍モルである。金属化合物は、反
応開始時に一括して添加しても、反応途上で添加しても
構わない。微生物などの使用量は基質に対する乾燥菌体
換算で、通常、０．０１〜５重量％である。反応液のｐ
Ｈは４〜１１、好ましくは６〜１０の範囲である。
の濃度は０．０１Ｍ〜飽和濃度、好ましくは０．０２〜
１．２Ｍの範囲であり、エチレンジアミンの濃度は０．
０１Ｍ〜２Ｍ、好ましくは０．０１５〜１Ｍの範囲であ
る。金属化合物の量は生成するＳ，Ｓ−エチレンジアミ
ン−Ｎ，Ｎ’−ジコハク酸の理論量に対して、通常、金
属として０．０１〜２倍モルである。金属化合物は、反
応開始時に一括して添加しても、反応途上で添加しても
構わない。微生物などの使用量は基質に対する乾燥菌体
換算で、通常、０．０１〜５重量％である。反応液のｐ
Ｈは４〜１１、好ましくは６〜１０の範囲である。
【００２６】反応は、通常５〜６０℃、好ましくは１０
〜５５℃の範囲で行うが、反応速度の面では高い温度が
有利である。しかしながら、フマル酸とエチレンジアミ
ンからＳ，Ｓ−エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ジコハク
酸が生成する反応も、それが金属錯体を形成する反応も
発熱反応であるため、反応収率の面からいえば低い温度
が有利である。したがって、反応は、初期には高い温度
で、後期には低い温度で行うことも可能である。
〜５５℃の範囲で行うが、反応速度の面では高い温度が
有利である。しかしながら、フマル酸とエチレンジアミ
ンからＳ，Ｓ−エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ジコハク
酸が生成する反応も、それが金属錯体を形成する反応も
発熱反応であるため、反応収率の面からいえば低い温度
が有利である。したがって、反応は、初期には高い温度
で、後期には低い温度で行うことも可能である。
【００２７】反応は回分、連続のいずれの方法でも行う
ことができる。また、原料がいずれかに関わらず、エチ
レンジアミン、フマル酸を他化合物から合成し得る反応
系を、本反応系に共存させたとしても、本発明の要旨と
する効果が得られる限り差し支えない。
ことができる。また、原料がいずれかに関わらず、エチ
レンジアミン、フマル酸を他化合物から合成し得る反応
系を、本反応系に共存させたとしても、本発明の要旨と
する効果が得られる限り差し支えない。
【００２８】Ｓ，Ｓ−エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ジ
コハク酸の金属錯体を必要とする場合には、所定の金属
のイオンの存在下で反応を行った後、ｐＨ調整、濃縮、
その他の操作により目的化合物を直接得ることができ
る。一方、反応終了液からＳ，Ｓ−エチレンジアミン−
Ｎ，Ｎ’−ジコハク酸を採取するには、通常、鉱酸によ
る酸析が行われる。しかしながら、鉄等の重金属のイオ
ンの存在下に反応を行った場合のように、酸析のｐＨで
安定な錯体を形成している系においては、酸析以前に該
金属のイオンを除去する操作が必要である。したがっ
て、Ｓ，Ｓ−エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ジコハク酸
を必要とする場合には、酸析に際し上記のような除去操
作を省略できるマグネシウム、カルシウム等のアルカリ
土類金属のイオンの存在下に反応を行うことが効率的で
ある。
コハク酸の金属錯体を必要とする場合には、所定の金属
のイオンの存在下で反応を行った後、ｐＨ調整、濃縮、
その他の操作により目的化合物を直接得ることができ
る。一方、反応終了液からＳ，Ｓ−エチレンジアミン−
Ｎ，Ｎ’−ジコハク酸を採取するには、通常、鉱酸によ
る酸析が行われる。しかしながら、鉄等の重金属のイオ
ンの存在下に反応を行った場合のように、酸析のｐＨで
安定な錯体を形成している系においては、酸析以前に該
金属のイオンを除去する操作が必要である。したがっ
て、Ｓ，Ｓ−エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ジコハク酸
を必要とする場合には、酸析に際し上記のような除去操
作を省略できるマグネシウム、カルシウム等のアルカリ
土類金属のイオンの存在下に反応を行うことが効率的で
ある。
【００２９】
【実施例】次に、本発明を実施例により具体的に説明す
る。
る。
【００３０】実施例１ （１）培養 Brevundimonas sp. ＴＮ−３株、Sphingomonas sp.ＴＮ
−２８株およびPseudomonas sp. ＴＮ−１３１株を斜面
培地から１白金耳取り、下記の培地に接種し、３０℃、
４日間好気的に振とう培養した。
−２８株およびPseudomonas sp. ＴＮ−１３１株を斜面
培地から１白金耳取り、下記の培地に接種し、３０℃、
４日間好気的に振とう培養した。
【００３１】 培地組成（ｐＨ７．５，１００ｍｌ） エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ジコハク酸 ０．２ｇ グルコース ０．２ｇ 酵母エキス ０．１ｇ ポリペプトン ０．０５ｇ 硫酸マグネシウム・７Ｈ2 Ｏ ０．１ｇ 硫酸ナトリウム ０．２８ｇ 燐酸緩衝液 ２５ｍＭ 金属塩混合物溶液* ０．５ｍｌ
【００３２】＊金属塩混合物溶液（１００ｍｌ）；塩化
マグネシウム・６Ｈ2 Ｏ ８ｇ，塩化カルシウム ０．
８ｇ，硫酸マンガン・４Ｈ2 Ｏ ０．６ｇ，塩化第二鉄
・６Ｈ2 Ｏ ０．１２ｇ，硫酸亜鉛 ０．０６ｇ
マグネシウム・６Ｈ2 Ｏ ８ｇ，塩化カルシウム ０．
８ｇ，硫酸マンガン・４Ｈ2 Ｏ ０．６ｇ，塩化第二鉄
・６Ｈ2 Ｏ ０．１２ｇ，硫酸亜鉛 ０．０６ｇ
【００３３】（２）フマラーゼ等を除去した活性画分の
取得 菌体培養液２０ｍｌを遠心管に取り１０，０００ｒｐ
ｍ、５℃、１５分間遠心分離し菌体を集めた後、５０ｍ
Ｍリン酸緩衝液で２回洗浄した。得られた菌体に対し５
０Ｗ、５分間の超音波処理を行い、１０，０００ｒｐ
ｍ、２０分間の遠心分離により粗酵素液を得た。さら
に、６０％飽和硫安沈殿、透析による脱塩の後、５０ｍ
Ｍリン酸緩衝液で平衡化されたＤＥＡＥ−セファセル
〔ファルマシア〕に吸着させ、同緩衝液から、０．６Ｍ
食塩を含む同緩衝液までの直線勾配法で溶出させた。さ
らに、必要に応じ、同条件で、ＤＥＡＥ−セファセルの
代わりにＨＰＬＣ〔TSK-gel DEAE-5PW（東ソー）〕を用
い、フマラーゼ等のフマル酸減少活性をできる限り除去
した画分を得た。
取得 菌体培養液２０ｍｌを遠心管に取り１０，０００ｒｐ
ｍ、５℃、１５分間遠心分離し菌体を集めた後、５０ｍ
Ｍリン酸緩衝液で２回洗浄した。得られた菌体に対し５
０Ｗ、５分間の超音波処理を行い、１０，０００ｒｐ
ｍ、２０分間の遠心分離により粗酵素液を得た。さら
に、６０％飽和硫安沈殿、透析による脱塩の後、５０ｍ
Ｍリン酸緩衝液で平衡化されたＤＥＡＥ−セファセル
〔ファルマシア〕に吸着させ、同緩衝液から、０．６Ｍ
食塩を含む同緩衝液までの直線勾配法で溶出させた。さ
らに、必要に応じ、同条件で、ＤＥＡＥ−セファセルの
代わりにＨＰＬＣ〔TSK-gel DEAE-5PW（東ソー）〕を用
い、フマラーゼ等のフマル酸減少活性をできる限り除去
した画分を得た。
【００３４】（３）反応 反応液は、６８．４ｍＭフマル酸と３４．２ｍＭエチレ
ンジアミン、２００ｍＭほう酸緩衝液、１７．１ｍＭ
（金属としての濃度）の表１に示す金属化合物、上記活
性画分を含み、６Ｎ水酸化ナトリウムによってｐＨ８に
調整したものを用い、３０℃で１０日間反応させた。反
応液のｐＨは、６Ｎ硫酸、６Ｎ水酸化ナトリウムを用い
て８に保った。尚、比較のため、金属化合物を含まない
系についても同様に反応を行った。反応終了液中の生成
物であるＳ，Ｓ−エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ジコハ
ク酸（Ｓ，Ｓ−ＥＤＤＳ）の定量は、１５，０００ｒｐ
ｍ、５℃で５分間遠心分離後の上清を WAKOSIL 5C8（和
光純薬）〔溶出液；１０ｍＭ 水酸化テトラ−ｎ−ブチ
ルアンモニウムと０．４ｍＭ ＣｕＳＯ4 を含む５０ｍ
Ｍ燐酸ｐＨ２〕およびMCI GEL CRS 10W （三菱化学）
〔溶出液；１０ｍＭ ＣｕＳＯ4 〕による液体クロマト
グラフィーで行った。また、Ｓ，Ｓ−ＥＤＤＳの分離精
製は、T, Nishikiori et al., J. Antibiotics 37, 426
(1984)に記載のイオン交換樹脂を用いる手法で行い、結
晶を取得した後にＮＭＲとマススペクトルによる分析で
化学構造の確認を行った。
ンジアミン、２００ｍＭほう酸緩衝液、１７．１ｍＭ
（金属としての濃度）の表１に示す金属化合物、上記活
性画分を含み、６Ｎ水酸化ナトリウムによってｐＨ８に
調整したものを用い、３０℃で１０日間反応させた。反
応液のｐＨは、６Ｎ硫酸、６Ｎ水酸化ナトリウムを用い
て８に保った。尚、比較のため、金属化合物を含まない
系についても同様に反応を行った。反応終了液中の生成
物であるＳ，Ｓ−エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ジコハ
ク酸（Ｓ，Ｓ−ＥＤＤＳ）の定量は、１５，０００ｒｐ
ｍ、５℃で５分間遠心分離後の上清を WAKOSIL 5C8（和
光純薬）〔溶出液；１０ｍＭ 水酸化テトラ−ｎ−ブチ
ルアンモニウムと０．４ｍＭ ＣｕＳＯ4 を含む５０ｍ
Ｍ燐酸ｐＨ２〕およびMCI GEL CRS 10W （三菱化学）
〔溶出液；１０ｍＭ ＣｕＳＯ4 〕による液体クロマト
グラフィーで行った。また、Ｓ，Ｓ−ＥＤＤＳの分離精
製は、T, Nishikiori et al., J. Antibiotics 37, 426
(1984)に記載のイオン交換樹脂を用いる手法で行い、結
晶を取得した後にＮＭＲとマススペクトルによる分析で
化学構造の確認を行った。
【００３５】（４）結果
【００３６】実施例２ （１）培養 実施例１と同様に行った。 （２）フマラーゼ等を除去した活性画分の取得 実施例１と同様に行った。 （３）反応 金属化合物として塩化カルシウムおよび硫酸マンガンを
使用した以外は実施例１と同様に行った。
使用した以外は実施例１と同様に行った。
【００３７】（４）結果
【００３８】参考例１ 次に、実施例１および２で得られたＳ，Ｓ−ＥＤＤＳ生
成量 (mM）が、平衡点における生成量であることを確か
めた。 （１）培養 Brevundimonas sp. ＴＮ−３株を実施例１と同様の条件
で培養した。 （２）フマラーゼ等を除去した活性画分の取得 実施例１と同様に行った。
成量 (mM）が、平衡点における生成量であることを確か
めた。 （１）培養 Brevundimonas sp. ＴＮ−３株を実施例１と同様の条件
で培養した。 （２）フマラーゼ等を除去した活性画分の取得 実施例１と同様に行った。
【００３９】（３）反応 反応液は、３４．２ｍＭＳ，Ｓ−ＥＤＤＳ、２００ｍＭ
ほう酸緩衝液、１７．１ｍＭ（金属としての濃度）の表
３に示す金属化合物、上記活性画分を含み、６Ｎ水酸化
ナトリウムによってｐＨ８に調整したものを用い、３０
℃で１０日間、Ｓ，Ｓ−ＥＤＤＳの分解がほぼ見られな
くなるまで反応させた。反応液のｐＨは６Ｎ硫酸、６Ｎ
水酸化ナトリウムを用いて８に保った。尚、比較のた
め、金属化合物を含まないものについても同様に反応を
行った。反応液中のＳ，Ｓ−ＥＤＤＳは、実施例１と同
様の方法で定量した。
ほう酸緩衝液、１７．１ｍＭ（金属としての濃度）の表
３に示す金属化合物、上記活性画分を含み、６Ｎ水酸化
ナトリウムによってｐＨ８に調整したものを用い、３０
℃で１０日間、Ｓ，Ｓ−ＥＤＤＳの分解がほぼ見られな
くなるまで反応させた。反応液のｐＨは６Ｎ硫酸、６Ｎ
水酸化ナトリウムを用いて８に保った。尚、比較のた
め、金属化合物を含まないものについても同様に反応を
行った。反応液中のＳ，Ｓ−ＥＤＤＳは、実施例１と同
様の方法で定量した。
【００４０】
【００４１】実施例３ （１）培養 Brevundimonas sp. ＴＮ−３株を実施例１と同様の条件
で培養した。 （２）フマラーゼ等を除去した活性画分の取得 実施例１と同様に行った。
で培養した。 （２）フマラーゼ等を除去した活性画分の取得 実施例１と同様に行った。
【００４２】（３）反応 反応液は、６８．４ｍＭフマル酸と３４．２ｍＭエチレ
ンジアミン、２００ｍＭほう酸緩衝液、表４に示す濃度
の硫酸第二鉄、上記活性画分を含み、６Ｎ水酸化ナトリ
ウムによってｐＨ８に調整したものを用い、３０℃で４
〜１０日間、Ｓ，Ｓ−ＥＤＤＳの生成がほぼ見られなく
なるまで反応させた。反応液のｐＨは６Ｎ硫酸を用いて
８に保った。尚、比較のため、硫酸第二鉄を含まないも
のについても同様に反応を行った。反応液中のＳ，Ｓ−
ＥＤＤＳは、実施例１と同様の方法で定量した。
ンジアミン、２００ｍＭほう酸緩衝液、表４に示す濃度
の硫酸第二鉄、上記活性画分を含み、６Ｎ水酸化ナトリ
ウムによってｐＨ８に調整したものを用い、３０℃で４
〜１０日間、Ｓ，Ｓ−ＥＤＤＳの生成がほぼ見られなく
なるまで反応させた。反応液のｐＨは６Ｎ硫酸を用いて
８に保った。尚、比較のため、硫酸第二鉄を含まないも
のについても同様に反応を行った。反応液中のＳ，Ｓ−
ＥＤＤＳは、実施例１と同様の方法で定量した。
【００４３】
【００４４】実施例４ （１）培養 Brevundimonas sp. ＴＮ−３株を実施例１と同様の条件
で培養した。 （２）フマラーゼ等を除去した活性画分の取得 実施例１と同様に行った。
で培養した。 （２）フマラーゼ等を除去した活性画分の取得 実施例１と同様に行った。
【００４５】（３）反応 反応液は、６８．４ｍＭフマル酸と３４．２ｍＭエチレ
ンジアミン、２００ｍＭほう酸緩衝液、１７．１ｍＭ硫
酸第二鉄（鉄として３４．２ｍＭ）、上記活性画分を含
み、６Ｎ水酸化ナトリウムによってｐＨ８に調整したも
のを用い、２０、３０、４０℃で４〜１０日間、Ｓ，Ｓ
−ＥＤＤＳの生成がほぼ見られなくなるまで反応させ
た。反応液のｐＨは６Ｎ硫酸を用いて８に保った。尚、
比較のため、硫酸第二鉄を含まないものについても同様
に反応を行った。反応液中のＳ，Ｓ−ＥＤＤＳは、実施
例１と同様の方法で定量した。
ンジアミン、２００ｍＭほう酸緩衝液、１７．１ｍＭ硫
酸第二鉄（鉄として３４．２ｍＭ）、上記活性画分を含
み、６Ｎ水酸化ナトリウムによってｐＨ８に調整したも
のを用い、２０、３０、４０℃で４〜１０日間、Ｓ，Ｓ
−ＥＤＤＳの生成がほぼ見られなくなるまで反応させ
た。反応液のｐＨは６Ｎ硫酸を用いて８に保った。尚、
比較のため、硫酸第二鉄を含まないものについても同様
に反応を行った。反応液中のＳ，Ｓ−ＥＤＤＳは、実施
例１と同様の方法で定量した。
【００４６】
【００４７】実施例５ （１）培養 Brevundimonas sp. ＴＮ−３株を実施例１と同様の条件
で培養した。 （２）フマラーゼ等を除去した活性画分の取得 実施例１と同様。
で培養した。 （２）フマラーゼ等を除去した活性画分の取得 実施例１と同様。
【００４８】（３）反応 反応液は、６８．４ｍＭフマル酸と３４．２ｍＭエチレ
ンジアミン、２００ｍＭほう酸緩衝液、１７．１ｍＭ硫
酸第二鉄（鉄として３４．２ｍＭ）、上記活性画分を含
み、６Ｎ水酸化ナトリウムによってｐＨ６、７、８ ９
に調整したものを用い、３０℃で４〜１０日間、Ｓ，Ｓ
−ＥＤＤＳの生成がほぼ見られなくなるまで反応させ
た。反応液のｐＨは６Ｎ硫酸を用いてそれぞれ一定に保
った。尚、比較のため、金属化合物を含まないものにつ
いても同様に反応を行った。反応液中のＳ，Ｓ−ＥＤＤ
Ｓは、実施例１と同様の方法で定量した。
ンジアミン、２００ｍＭほう酸緩衝液、１７．１ｍＭ硫
酸第二鉄（鉄として３４．２ｍＭ）、上記活性画分を含
み、６Ｎ水酸化ナトリウムによってｐＨ６、７、８ ９
に調整したものを用い、３０℃で４〜１０日間、Ｓ，Ｓ
−ＥＤＤＳの生成がほぼ見られなくなるまで反応させ
た。反応液のｐＨは６Ｎ硫酸を用いてそれぞれ一定に保
った。尚、比較のため、金属化合物を含まないものにつ
いても同様に反応を行った。反応液中のＳ，Ｓ−ＥＤＤ
Ｓは、実施例１と同様の方法で定量した。
【００４９】
【００５０】実施例６ （１）培養 Brevundimonas sp. ＴＮ−３株を実施例１と同様の条件
で培養した。 （２）フマラーゼ等を除去した活性画分の取得 実施例１と同様に行った。
で培養した。 （２）フマラーゼ等を除去した活性画分の取得 実施例１と同様に行った。
【００５１】（３）反応 反応液は、３４２ｍＭフマル酸、１７１ｍＭエチレンジ
アミン、金属として１７１ｍＭの水酸化カルシウムまた
は水酸化第二鉄、上記活性画分を含み、６Ｎ水酸化ナト
リウムによって表７に示すｐＨに調整したものを用い、
３０℃で１０〜２０日間、Ｓ，Ｓ−ＥＤＤＳの生成がほ
ぼ見られなくなるまで反応させた。反応液のｐＨは６Ｎ
水酸化ナトリウムまたは６Ｎ硫酸を用いてそれぞれ一定
に保った。尚、比較のため、水酸化カルシウムおよび水
酸化第二鉄を含まないものについても同様に反応を行っ
た。反応液中のＳ，Ｓ−ＥＤＤＳは、実施例１と同様の
方法で定量した。
アミン、金属として１７１ｍＭの水酸化カルシウムまた
は水酸化第二鉄、上記活性画分を含み、６Ｎ水酸化ナト
リウムによって表７に示すｐＨに調整したものを用い、
３０℃で１０〜２０日間、Ｓ，Ｓ−ＥＤＤＳの生成がほ
ぼ見られなくなるまで反応させた。反応液のｐＨは６Ｎ
水酸化ナトリウムまたは６Ｎ硫酸を用いてそれぞれ一定
に保った。尚、比較のため、水酸化カルシウムおよび水
酸化第二鉄を含まないものについても同様に反応を行っ
た。反応液中のＳ，Ｓ−ＥＤＤＳは、実施例１と同様の
方法で定量した。
【００５２】
【００５３】実施例７ （１）培養 Burkholderia sp.ＫＫ−５株、同ＫＫ−９株、Acidovor
ax sp. ＴＮ−５１株、Pseudomonas sp. ＴＮ−１３１
株、Paracoccus sp.ＫＫ−６株、Sphingomonassp.ＴＮ
−２８株、Brevundimonas sp. ＴＮ−３０株および同Ｔ
Ｎ−３株を斜面培地から１白金耳取り、実施例１記載の
培地に接種し、３０℃、３日間好気的に振とう培養し
た。
ax sp. ＴＮ−５１株、Pseudomonas sp. ＴＮ−１３１
株、Paracoccus sp.ＫＫ−６株、Sphingomonassp.ＴＮ
−２８株、Brevundimonas sp. ＴＮ−３０株および同Ｔ
Ｎ−３株を斜面培地から１白金耳取り、実施例１記載の
培地に接種し、３０℃、３日間好気的に振とう培養し
た。
【００５４】（２）菌体の取得 菌体培養液２０ｍｌを遠心管に取り、１０，０００ｒｐ
ｍ、５℃、１５分間遠心し菌体を集めた後、５０ｍＭほ
う酸緩衝液ｐＨ８．０で２回洗浄した。
ｍ、５℃、１５分間遠心し菌体を集めた後、５０ｍＭほ
う酸緩衝液ｐＨ８．０で２回洗浄した。
【００５５】（３）反応 反応液は、２００ｍＭフマル酸と２００ｍＭエチレンジ
アミン、１００ｍＭの水酸化第一鉄または水酸化第二
鉄、上記菌体を含み、６Ｎ水酸化ナトリウムによってｐ
Ｈ８に調整したものを用い、３０℃で２４時間、振とう
しながら反応させた。尚、比較のため、水酸化第一鉄お
よび水酸化第二鉄を含まないものについても同様に反応
を行った。反応液中のＳ，Ｓ−ＥＤＤＳは、実施例１と
同様の方法で定量した。
アミン、１００ｍＭの水酸化第一鉄または水酸化第二
鉄、上記菌体を含み、６Ｎ水酸化ナトリウムによってｐ
Ｈ８に調整したものを用い、３０℃で２４時間、振とう
しながら反応させた。尚、比較のため、水酸化第一鉄お
よび水酸化第二鉄を含まないものについても同様に反応
を行った。反応液中のＳ，Ｓ−ＥＤＤＳは、実施例１と
同様の方法で定量した。
【００５６】
【００５７】
【発明の効果】特定の金属のイオンを存在させることに
より、反応収率を向上させると共に、適宜、Ｓ，Ｓ−エ
チレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ジコハク酸またはその金属
錯体を効率的に製造し得る。
より、反応収率を向上させると共に、適宜、Ｓ，Ｓ−エ
チレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ジコハク酸またはその金属
錯体を効率的に製造し得る。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 遠藤 隆一 神奈川県横浜市鶴見区大黒町10番１号 日 東化学工業株式会社中央研究所内
Claims (1)
- 【請求項１】 リアーゼ活性を有する微生物または該処
理物の作用により、エチレンジアミンとフマル酸の混合
物からＳ，Ｓ−エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ジコハク
酸を製造するに際し、該反応系にアルカリ土類金属、
鉄、亜鉛、銅、ニッケル、アルミニウム、チタニウムお
よびマンガンからなる群から選ばれる少なくとも一種の
金属のイオンを存在させることを特徴とするＳ，Ｓ−エ
チレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ジコハク酸の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP22206697A JP3450663B2 (ja) | 1996-08-20 | 1997-08-05 | Ｓ，ｓ−エチレンジアミン−ｎ，ｎ’−ジコハク酸の製造法 |
Applications Claiming Priority (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP08235797 | 1996-08-20 | ||
| JP3139997 | 1997-01-31 | ||
| JP8-235797 | 1997-01-31 | ||
| JP9-31399 | 1997-01-31 | ||
| JP22206697A JP3450663B2 (ja) | 1996-08-20 | 1997-08-05 | Ｓ，ｓ−エチレンジアミン−ｎ，ｎ’−ジコハク酸の製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH10271999A true JPH10271999A (ja) | 1998-10-13 |
| JP3450663B2 JP3450663B2 (ja) | 2003-09-29 |
Family
ID=27287315
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP22206697A Expired - Lifetime JP3450663B2 (ja) | 1996-08-20 | 1997-08-05 | Ｓ，ｓ−エチレンジアミン−ｎ，ｎ’−ジコハク酸の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3450663B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1999054492A1 (fr) * | 1998-04-17 | 1999-10-28 | Mitsubishi Rayon Co., Ltd. | Procede servant a preparer des [s,s]-ethylenediamine-n,n'-disuccinates de metaux alcalins |
-
1997
- 1997-08-05 JP JP22206697A patent/JP3450663B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1999054492A1 (fr) * | 1998-04-17 | 1999-10-28 | Mitsubishi Rayon Co., Ltd. | Procede servant a preparer des [s,s]-ethylenediamine-n,n'-disuccinates de metaux alcalins |
| US6136573A (en) * | 1998-04-17 | 2000-10-24 | Mitsubishi Rayon Co., Ltd. | Process for producing alkali metal [S,S]-ethylenediamine-n,n'-disuccinates |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3450663B2 (ja) | 2003-09-29 |
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