JP3261336B2 - 光学活性アミノ酸の製造法 - Google Patents
光学活性アミノ酸の製造法Info
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- JP3261336B2 JP3261336B2 JP12470097A JP12470097A JP3261336B2 JP 3261336 B2 JP3261336 B2 JP 3261336B2 JP 12470097 A JP12470097 A JP 12470097A JP 12470097 A JP12470097 A JP 12470097A JP 3261336 B2 JP3261336 B2 JP 3261336B2
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Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は微生物の作用により
フマール酸とアミノ基を有する化合物から光学活性アミ
ノ酸を製造する方法に関する。光学活性アミノ酸は医農
薬合成中間体として重要であると共に、重金属を補足す
るという特異な性質を有し、光学活性であることから自
然界に放出された後に生分解を受け易いなどの可能性が
期待できるため、キレート剤や洗剤用ビルダーなどの用
途が見込まれる。
フマール酸とアミノ基を有する化合物から光学活性アミ
ノ酸を製造する方法に関する。光学活性アミノ酸は医農
薬合成中間体として重要であると共に、重金属を補足す
るという特異な性質を有し、光学活性であることから自
然界に放出された後に生分解を受け易いなどの可能性が
期待できるため、キレート剤や洗剤用ビルダーなどの用
途が見込まれる。
【０００２】
【従来の技術】後記一般式〔２〕で示されるアミノ酸の
光学異性体混合物は有機合成的手法により各種のアミン
とマレイン酸またはフマール酸から容易に合成すること
ができるが、光学活性アミノ酸の場合には、その有機合
成的手法の出発原料として光学活性アスパラギン酸など
が必要となる。例えば、ジアミノアルキレン−Ｎ，Ｎ’
−ジコハク酸は分子内に２個の不斉炭素を有する化合物
であるが、その立体異性体混合物（Ｓ，Ｓ−、Ｒ，Ｒ
−、ｍｅｓｏ−体）は有機合成的手法によりマレイン酸
と各種のジアミンから〔米国特許第3,158,635 号参
照〕、また、その光学活性体はＬ−アスパラギン酸とジ
ブロムエタンから〔John A. Neal et al. Inorganic Ch
em. ７, 2405 (1968) 参照〕各々製造できるとの報告が
ある。しかし、Ｌ−アスパラギン酸やジブロムエタンか
らの製法では、製造原料が比較的高価であるため、安価
で汎用性のある光学活性体を供給することは困難であ
る。
光学異性体混合物は有機合成的手法により各種のアミン
とマレイン酸またはフマール酸から容易に合成すること
ができるが、光学活性アミノ酸の場合には、その有機合
成的手法の出発原料として光学活性アスパラギン酸など
が必要となる。例えば、ジアミノアルキレン−Ｎ，Ｎ’
−ジコハク酸は分子内に２個の不斉炭素を有する化合物
であるが、その立体異性体混合物（Ｓ，Ｓ−、Ｒ，Ｒ
−、ｍｅｓｏ−体）は有機合成的手法によりマレイン酸
と各種のジアミンから〔米国特許第3,158,635 号参
照〕、また、その光学活性体はＬ−アスパラギン酸とジ
ブロムエタンから〔John A. Neal et al. Inorganic Ch
em. ７, 2405 (1968) 参照〕各々製造できるとの報告が
ある。しかし、Ｌ−アスパラギン酸やジブロムエタンか
らの製法では、製造原料が比較的高価であるため、安価
で汎用性のある光学活性体を供給することは困難であ
る。
【０００３】一方、微生物によるジアミノアルキレン−
Ｎ，Ｎ’−ジコハク酸の製造に関しては、例えば、Ｓ，
Ｓ−エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ジコハク酸が放線菌
ＭＧ４１７−ＣＦ１７株の培養液からホスホリパーゼＣ
の特異的阻害剤として単離同定されている〔T. Nishiki
ori et al., J. Antibiotics 37, 426 (1984) 参照〕。
しかし、この放線菌による生産性は極めて低く工業的製
法とはなり難い。
Ｎ，Ｎ’−ジコハク酸の製造に関しては、例えば、Ｓ，
Ｓ−エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ジコハク酸が放線菌
ＭＧ４１７−ＣＦ１７株の培養液からホスホリパーゼＣ
の特異的阻害剤として単離同定されている〔T. Nishiki
ori et al., J. Antibiotics 37, 426 (1984) 参照〕。
しかし、この放線菌による生産性は極めて低く工業的製
法とはなり難い。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】これに対し、本発明者
らは、先にフマル酸と各種ジアミンから微生物の触媒作
用を利用して効率よく光学活性ジアミノアルキレン−
Ｎ，Ｎ’−ジコハク酸などを製造する新規な方法を提案
している〔特願平8-79404 号明細書参照〕。本発明は、
同方法の菌体当りの活性および生産性をさらに向上させ
ることを課題としている。
らは、先にフマル酸と各種ジアミンから微生物の触媒作
用を利用して効率よく光学活性ジアミノアルキレン−
Ｎ，Ｎ’−ジコハク酸などを製造する新規な方法を提案
している〔特願平8-79404 号明細書参照〕。本発明は、
同方法の菌体当りの活性および生産性をさらに向上させ
ることを課題としている。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、この課題
を解決すべく鋭意研究を行った結果、反応系にマグネシ
ウムイオンを存在させることにより、菌体および酵素に
よる光学活性アミノ酸の生産活性が飛躍的に改善される
ことを見い出し本発明に到達した。
を解決すべく鋭意研究を行った結果、反応系にマグネシ
ウムイオンを存在させることにより、菌体および酵素に
よる光学活性アミノ酸の生産活性が飛躍的に改善される
ことを見い出し本発明に到達した。
【０００６】すなわち、本発明は、下記一般式〔１〕で
示されるアミノ基を有する化合物とフマール酸の混合物
にリアーゼ活性を有する微生物または該処理物を作用さ
せ、下記一般式〔２〕で示される光学活性アミノ酸を製
造するに際し、該反応系にマグネシウムイオンを存在さ
せることを特徴とする光学活性アミノ酸の製造法、であ
る。
示されるアミノ基を有する化合物とフマール酸の混合物
にリアーゼ活性を有する微生物または該処理物を作用さ
せ、下記一般式〔２〕で示される光学活性アミノ酸を製
造するに際し、該反応系にマグネシウムイオンを存在さ
せることを特徴とする光学活性アミノ酸の製造法、であ
る。
【０００７】
【０００８】〔式中、Ｒ1 およびＲ2 は、互いに同一で
も異なっていてもよく、それぞれ水素原子（但し、Ｒ1
とＲ2 は共に水素原子であることはない）、アミノ基も
しくはカルボキシル基で置換されたアルキル基、アミノ
基で置換されたシクロアルキル基またはアミノ基で置換
されたアリール基、Ｒ3 およびＲ4 はＲ1 とＲ2 と同一
またはＲ1 とＲ2 のアミノ基の少なくとも１個がその窒
素原子を介してコハク酸のエチレン基の炭素原子と結合
した構造を有する基を表す〕
も異なっていてもよく、それぞれ水素原子（但し、Ｒ1
とＲ2 は共に水素原子であることはない）、アミノ基も
しくはカルボキシル基で置換されたアルキル基、アミノ
基で置換されたシクロアルキル基またはアミノ基で置換
されたアリール基、Ｒ3 およびＲ4 はＲ1 とＲ2 と同一
またはＲ1 とＲ2 のアミノ基の少なくとも１個がその窒
素原子を介してコハク酸のエチレン基の炭素原子と結合
した構造を有する基を表す〕
【０００９】一般式〔１〕において、好ましくはＲ1 と
Ｒ2 の少なくとも１つはアミノ基で置換されたアルキル
基、アミノ基で置換されたシクロアルキル基またはアミ
ノ基で置換されたアリール基である。
Ｒ2 の少なくとも１つはアミノ基で置換されたアルキル
基、アミノ基で置換されたシクロアルキル基またはアミ
ノ基で置換されたアリール基である。
【００１０】さらに、一般式〔１〕で示されるアミノ基
を有する化合物および一般式〔２〕で示される光学活性
アミノ酸が、それぞれ下記一般式〔３〕および〔４〕で
示される場合がより好ましい。
を有する化合物および一般式〔２〕で示される光学活性
アミノ酸が、それぞれ下記一般式〔３〕および〔４〕で
示される場合がより好ましい。
【００１１】
【００１２】式中、Ｒ5 はアルキレン基、シクロアルキ
レン基またはフェニレン基を表す。一般式〔３〕および
〔４〕において、好ましくはＲ5 はアルキレン基であ
る。
レン基またはフェニレン基を表す。一般式〔３〕および
〔４〕において、好ましくはＲ5 はアルキレン基であ
る。
【００１３】上記したところを要旨とする本発明の反応
機構は、以下のように考えられる。まず最初に、リアー
ゼ活性を有する微生物または該処理物の作用によりフマ
ル酸と一般式〔１〕で示されるアミノ基を有する化合物
から一般式〔２〕で示される光学活性アミノ酸が生成
し、次いで、生成した該光学活性アミノ酸が基質である
フマル酸や一般式〔１〕で示されるアミノ基を有する化
合物に比べて反応系に存在するマグネシウムイオンに、
より強く配位し、安定な錯体を形成することにより、化
学平衡点が生成側に移動する。すなわち、光学活性アミ
ノ酸が生成する平衡反応に、安定な錯体を形成する平衡
反応が加わることにより、遊離の光学活性アミノ酸とそ
の金属錯体の総和としての収率が、マグネシウムイオン
を存在させない場合に比べて向上するものと推察され
る。
機構は、以下のように考えられる。まず最初に、リアー
ゼ活性を有する微生物または該処理物の作用によりフマ
ル酸と一般式〔１〕で示されるアミノ基を有する化合物
から一般式〔２〕で示される光学活性アミノ酸が生成
し、次いで、生成した該光学活性アミノ酸が基質である
フマル酸や一般式〔１〕で示されるアミノ基を有する化
合物に比べて反応系に存在するマグネシウムイオンに、
より強く配位し、安定な錯体を形成することにより、化
学平衡点が生成側に移動する。すなわち、光学活性アミ
ノ酸が生成する平衡反応に、安定な錯体を形成する平衡
反応が加わることにより、遊離の光学活性アミノ酸とそ
の金属錯体の総和としての収率が、マグネシウムイオン
を存在させない場合に比べて向上するものと推察され
る。
【００１４】
【発明の実施の形態】本発明におけるマグネシウムイオ
ン源としては、反応系が水性であるところより、硫酸
塩、塩酸塩、硝酸塩、水酸化物等の水溶性のマグネシウ
ム化合物を使用することがふつうである。また、本反応
における基質、生成物はキレート能を有し、難溶性のマ
グネシウム化合物を用いても相当量が可溶化されるた
め、炭酸塩、燐酸塩などの難溶性のマグネシウム化合物
を用いることも可能である。その他、マグネシウムイオ
ン存在下で培養または処理された菌体または該菌体処理
物を用いることもできる。
ン源としては、反応系が水性であるところより、硫酸
塩、塩酸塩、硝酸塩、水酸化物等の水溶性のマグネシウ
ム化合物を使用することがふつうである。また、本反応
における基質、生成物はキレート能を有し、難溶性のマ
グネシウム化合物を用いても相当量が可溶化されるた
め、炭酸塩、燐酸塩などの難溶性のマグネシウム化合物
を用いることも可能である。その他、マグネシウムイオ
ン存在下で培養または処理された菌体または該菌体処理
物を用いることもできる。
【００１５】一般式〔１〕で示されるアミノ基を有する
化合物としては、例えば、エチレンジアミン、１，３−
プロパンジアミン、２−メチル−１，３−プロパンジア
ミン、１，２−シクロヘキシレンジアミン、１，３−シ
クロヘキシレンジアミン、１，４−シクロヘキシレンジ
アミン、１，３−フェニレンジアミンおよび１，４−フ
ェニレンジアミン等のジアミン、グリシン、イミノジ酢
酸、３−アミノプロピオン酸、３，３−イミノジプロピ
オン酸、グルタミン酸等のモノアミン、トリエチレンテ
トラミン、テトラエチルペンタミンおよびペンタエチレ
ンヘキサミン等のポリアミンなどを挙げることができ
る。
化合物としては、例えば、エチレンジアミン、１，３−
プロパンジアミン、２−メチル−１，３−プロパンジア
ミン、１，２−シクロヘキシレンジアミン、１，３−シ
クロヘキシレンジアミン、１，４−シクロヘキシレンジ
アミン、１，３−フェニレンジアミンおよび１，４−フ
ェニレンジアミン等のジアミン、グリシン、イミノジ酢
酸、３−アミノプロピオン酸、３，３−イミノジプロピ
オン酸、グルタミン酸等のモノアミン、トリエチレンテ
トラミン、テトラエチルペンタミンおよびペンタエチレ
ンヘキサミン等のポリアミンなどを挙げることができ
る。
【００１６】また、本発明で得られる一般式〔２〕で示
される光学活性アミノ酸としては、Ｓ，Ｓ−体のエチレ
ンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ジコハク酸、１，３−プロパン
ジアミン−Ｎ，Ｎ’−ジコハク酸、２−メチル−１，３
−プロパンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ジコハク酸、１，２−
シクロヘキシレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ジコハク酸、
１，３−シクロヘキシレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ジコハ
ク酸、１，４−シクロヘキシレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−
ジコハク酸、１，３−フェニレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−
ジコハク酸および１，４−フェニレンジアミン−Ｎ，
Ｎ’−ジコハク酸、ならびにＳ−体のアスパラギン酸−
Ｎ−モノ酢酸、アスパラギン酸−Ｎ，Ｎ−ジ酢酸、アス
パラギン酸−Ｎ−モノプロピオン酸、アスパラギン酸−
Ｎ，Ｎ−ジプロピオン酸およびアスパラギン酸−Ｎ−２
−グルタール酸などを挙げることができる。
される光学活性アミノ酸としては、Ｓ，Ｓ−体のエチレ
ンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ジコハク酸、１，３−プロパン
ジアミン−Ｎ，Ｎ’−ジコハク酸、２−メチル−１，３
−プロパンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ジコハク酸、１，２−
シクロヘキシレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ジコハク酸、
１，３−シクロヘキシレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ジコハ
ク酸、１，４−シクロヘキシレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−
ジコハク酸、１，３−フェニレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−
ジコハク酸および１，４−フェニレンジアミン−Ｎ，
Ｎ’−ジコハク酸、ならびにＳ−体のアスパラギン酸−
Ｎ−モノ酢酸、アスパラギン酸−Ｎ，Ｎ−ジ酢酸、アス
パラギン酸−Ｎ−モノプロピオン酸、アスパラギン酸−
Ｎ，Ｎ−ジプロピオン酸およびアスパラギン酸−Ｎ−２
−グルタール酸などを挙げることができる。
【００１７】一般式〔１〕で示されるアミノ基を有する
化合物は、好ましくはジアミン、特に好ましくはアルキ
レンジアミンであり、一般式〔２〕で示される光学活性
アミノ酸はこれらのジアミンに対応するものである。と
りわけ、一般式〔１〕で示されるアミノ基を有する化合
物がエチレンジアミンであり、一般式〔２〕で示される
光学活性アミノ酸がＳ，Ｓ−エチレンジアミン−Ｎ，
Ｎ’−ジコハク酸である場合が最も好ましい。
化合物は、好ましくはジアミン、特に好ましくはアルキ
レンジアミンであり、一般式〔２〕で示される光学活性
アミノ酸はこれらのジアミンに対応するものである。と
りわけ、一般式〔１〕で示されるアミノ基を有する化合
物がエチレンジアミンであり、一般式〔２〕で示される
光学活性アミノ酸がＳ，Ｓ−エチレンジアミン−Ｎ，
Ｎ’−ジコハク酸である場合が最も好ましい。
【００１８】前記のとおり、本発明は、マグネシウムイ
オンにより化学平衡点を基質側から生成物側に移動させ
ることに基づくと考えられる。通常、化学平衡点は触媒
の種類に左右されないため、本発明における化学平衡点
は、副反応やその他の反応が関わらない限り、すべての
触媒について一定の値を示す。こことは、本発明の実施
例および参考例によって立証される。したがって、本発
明の触媒であるリアーゼは、いずれの微生物由来である
かは、それが光学活性アミノ酸を生成する能力を有する
限り、特に限定されない。
オンにより化学平衡点を基質側から生成物側に移動させ
ることに基づくと考えられる。通常、化学平衡点は触媒
の種類に左右されないため、本発明における化学平衡点
は、副反応やその他の反応が関わらない限り、すべての
触媒について一定の値を示す。こことは、本発明の実施
例および参考例によって立証される。したがって、本発
明の触媒であるリアーゼは、いずれの微生物由来である
かは、それが光学活性アミノ酸を生成する能力を有する
限り、特に限定されない。
【００１９】本発明で使用される微生物としては、例え
ば、ハフニア（Hafnia）属、バークホルデリア（Burkho
lderia）属、アシドボラックス（Acidovorax）属、シュ
ードモナス（Pseudomonas)属、アースロバクター（Arth
robacter）属、パラコッカス（Paracoccus）属、スフィ
ンゴモナス（Sphingomonas）属、ブレブンジモナス（Br
evundimonas)属等の細菌を挙げることができる。具体的
には、Hafnia alvei ＡＴＣＣ９７６０株、Burkholder
ia sp.ＫＫ−５株〔ＦＥＲＭ ＢＰ−５４１２〕、同Ｋ
Ｋ−９株〔ＦＥＲＭ ＢＰ−５４１３〕、Acidovorax s
p.ＴＮ−５１株〔ＦＥＲＭ ＢＰ−５４１６〕、Pseudo
monas sp. ＴＮ−１３１株〔ＦＥＲＭ ＢＰ−５４１
８〕、Arthrobacter sp.ＫＫ−３株〔ＦＥＲＭ ＢＰ−
５４１４〕、Paracoccus sp.ＫＫ−６株〔ＦＥＲＭ Ｂ
Ｐ−５４１５〕、Sphingomonas sp.ＴＮ−２８株〔ＦＥ
ＲＭ ＢＰ−５４１９〕、Brevundimonas sp. ＴＮ−３
０株〔ＦＥＲＭ ＢＰ−５４１７〕および同ＴＮ−３株
〔ＦＥＲＭ ＢＰ−５８８６〕を挙げることができる。
ば、ハフニア（Hafnia）属、バークホルデリア（Burkho
lderia）属、アシドボラックス（Acidovorax）属、シュ
ードモナス（Pseudomonas)属、アースロバクター（Arth
robacter）属、パラコッカス（Paracoccus）属、スフィ
ンゴモナス（Sphingomonas）属、ブレブンジモナス（Br
evundimonas)属等の細菌を挙げることができる。具体的
には、Hafnia alvei ＡＴＣＣ９７６０株、Burkholder
ia sp.ＫＫ−５株〔ＦＥＲＭ ＢＰ−５４１２〕、同Ｋ
Ｋ−９株〔ＦＥＲＭ ＢＰ−５４１３〕、Acidovorax s
p.ＴＮ−５１株〔ＦＥＲＭ ＢＰ−５４１６〕、Pseudo
monas sp. ＴＮ−１３１株〔ＦＥＲＭ ＢＰ−５４１
８〕、Arthrobacter sp.ＫＫ−３株〔ＦＥＲＭ ＢＰ−
５４１４〕、Paracoccus sp.ＫＫ−６株〔ＦＥＲＭ Ｂ
Ｐ−５４１５〕、Sphingomonas sp.ＴＮ−２８株〔ＦＥ
ＲＭ ＢＰ−５４１９〕、Brevundimonas sp. ＴＮ−３
０株〔ＦＥＲＭ ＢＰ−５４１７〕および同ＴＮ−３株
〔ＦＥＲＭ ＢＰ−５８８６〕を挙げることができる。
【００２０】上記細菌のうち、ＡＴＣＣ９７６０株は公
知であり、アメリカン タイプカルチャー コレクショ
ン（ＡＴＣＣ）から容易に入手することができる。その
他の細菌は、本発明者らにより自然界から新たに分離さ
れ、上記番号にて通産省工業技術院生命工学工業技術研
究所に寄託されている。本菌の菌学的性質は以下に示す
通りである。
知であり、アメリカン タイプカルチャー コレクショ
ン（ＡＴＣＣ）から容易に入手することができる。その
他の細菌は、本発明者らにより自然界から新たに分離さ
れ、上記番号にて通産省工業技術院生命工学工業技術研
究所に寄託されている。本菌の菌学的性質は以下に示す
通りである。
【００２１】 菌学的性質 ＫＫ−５株 ＫＫ−９ 形態 桿菌 桿菌 グラム染色 − − 胞子 − − 運動性 ＋ ＋ 鞭毛 極多毛 極多毛 酸素に対する態度 好気性 好気性 オキシダーゼ ＋ ＋ カタラーゼ ＋ ＋ ＯＦテスト Ｏ Ｏ 蛍光色素の生成 − − キノン系 Ｑ−８ Ｑ−８ 蛍光色素の生成 − − 硝酸塩還元 − ＋ インドール生成 − − アルギニンジヒドロラーゼ − − 尿素分解 − − エスクリン分解 − − ゼラチン液化 − − ＰＮＰＧ ＋ − キシロースからの酸生成 ＋ ＋ 資化性 グルコース ＋ ＋ Ｌ−アラビノース ＋ ＋ Ｄ−マンノース ＋ ＋ Ｄ−マンニトール ＋ ＋ マルトース − − グルコン酸カリウム ＋ ＋ ｎ−カプリン酸 ＋ ＋ アジピン酸 − − ｄｌ−リンゴ酸 ＋ ＋ クエン酸 ＋ − 酢酸フェニル ＋ ＋
【００２２】
【００２３】
【００２４】 ＫＫ−３株 形態 多形性桿菌 グラム染色性 ＋ 胞子 − 運動性 − 酸素に対する態度 好気性 オキシダーゼ − カタラーゼ ＋ 集落の色調 特徴的色素を生成せず 抗酸性 − rod-coccus cycle ＋ 集落の周辺の伸長 認めず 細胞壁のジアミノ酸 リジン グリコリル試験 −（アセチル型） 細胞壁のアラビノ・ −（全細胞の酸加水分解 ガラクタンポリマー 物を用いて推定） キノン系 ＭＫ−９（Ｈ2 ），８（Ｈ2 ） ＤＮＡのＧＣ含量（モル%) ６５（ＨＰＬＣ法）
【００２５】
【００２６】
【００２７】 ＴＮ−３０株 ＴＮ−３株 形態 桿菌 桿菌 グラム染色性 − − 胞子 − − 運動性 ＋ ＋ 鞭毛 極毛 極毛 酸素に対する態度 好気性 好気性 オキシダーゼ ＋ ＋ カタラーゼ ＋ ＋ ＯＦテスト − − 集落の色調 特徴的色素 特徴的色素 を生成せず を生成せず 蛍光色素の生成 − − ＰＨＢの蓄積 ＋ ＋ 栄養要求性 有り 有り キノン系 Ｑ−１０ Ｑ−１０ 硝酸塩還元 ＋ ＋ インドール生成 − − アルギニンジヒドロラーゼ − − 尿素分解 − − エスクリン分解 − − ゼラチン液化 − − ＰＮＰＧ − − 資化性 グルコース − − Ｌ−アラビノース − − Ｄ−マンノース − − Ｄ−マンニトール − − Ｎ−アセチル− − − Ｄ−グルコサミン マルトース − − グルコン酸カリウム ＋ ＋ ｎ−カプリン酸 − − アジピン酸 ＋ ＋ ｄｌ−リンゴ酸 − ＋ クエン酸 ＋ ＋ 酢酸フェニル − −
【００２８】上記菌学的性質を、Bergey's Manual of S
ystematic Bacteriology Vol.1(1984)および Bergey's
Manual of Determinative Bacteriology 9版(1994)によ
り分類するとＫＫ−５株およびＫＫ−９株はバークホル
デリア（Burkholderia）属に、ＴＮ−５１株はアシドボ
ラックス（Acidovorax）属に、ＴＮ−１３１株はシュー
ドモナス（Pseudomonas)属に、Bergey's Manual of Sys
tematic BacteriologyVol.2(1986)により分類するとＫ
Ｋ−３はアースロバクター（Arthrobacter）属に、Berg
ey's Manual of Systematic Bacteriology Vol.1(1984)
により分類するとＫＫ−６株はパラコッカス（Paracocc
us）属に、Bergey's Manual of Determinative Bacteri
ology 9版(1994)および Microbiol. Immunol. 34, 99
(1990)により分類するとＴＮ−２８株はスフィンゴモナ
ス（Sphingomonas）属に、また、Bergey's Manual of D
eterminative Bacteriology 9版(1994)ならびに Int.
J.Syst. Bacteriol. 44, 499(1994)により分類すると
ＴＮ−３０株およびＴＮ−３株はブレブンジモナス（Br
evundimonas)属に属する細菌と同定された。
ystematic Bacteriology Vol.1(1984)および Bergey's
Manual of Determinative Bacteriology 9版(1994)によ
り分類するとＫＫ−５株およびＫＫ−９株はバークホル
デリア（Burkholderia）属に、ＴＮ−５１株はアシドボ
ラックス（Acidovorax）属に、ＴＮ−１３１株はシュー
ドモナス（Pseudomonas)属に、Bergey's Manual of Sys
tematic BacteriologyVol.2(1986)により分類するとＫ
Ｋ−３はアースロバクター（Arthrobacter）属に、Berg
ey's Manual of Systematic Bacteriology Vol.1(1984)
により分類するとＫＫ−６株はパラコッカス（Paracocc
us）属に、Bergey's Manual of Determinative Bacteri
ology 9版(1994)および Microbiol. Immunol. 34, 99
(1990)により分類するとＴＮ−２８株はスフィンゴモナ
ス（Sphingomonas）属に、また、Bergey's Manual of D
eterminative Bacteriology 9版(1994)ならびに Int.
J.Syst. Bacteriol. 44, 499(1994)により分類すると
ＴＮ−３０株およびＴＮ−３株はブレブンジモナス（Br
evundimonas)属に属する細菌と同定された。
【００２９】次に本発明の一般的実施態様について説明
する。本発明で使用される細菌の培養液には何ら特別の
制限がなく、資化しうる炭素源、窒素源、無機塩、更に
微量の有機栄養物などを適当に含有するものであれば合
成培地、天然培地のいずれでもよい。また、培養に当っ
ては培地へのエチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ジコハク
酸、エチレンジアミン−Ｎ−モノコハク酸、アスパラギ
ン酸、グルタミン酸、ヒスチジンなどのアミノ酸やフマ
ル酸等の添加は、目的とする活性の高い菌体が得られる
ことがあり好ましい。培養条件は菌体や培地により異な
るが、培地のｐＨは４〜１０、好ましくは６〜９の範
囲、培養温度は２０〜４５℃、好ましくは２５〜３５℃
の範囲で好気的に、活性が最大となるまで１〜１０日間
培養すればよい。
する。本発明で使用される細菌の培養液には何ら特別の
制限がなく、資化しうる炭素源、窒素源、無機塩、更に
微量の有機栄養物などを適当に含有するものであれば合
成培地、天然培地のいずれでもよい。また、培養に当っ
ては培地へのエチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ジコハク
酸、エチレンジアミン−Ｎ−モノコハク酸、アスパラギ
ン酸、グルタミン酸、ヒスチジンなどのアミノ酸やフマ
ル酸等の添加は、目的とする活性の高い菌体が得られる
ことがあり好ましい。培養条件は菌体や培地により異な
るが、培地のｐＨは４〜１０、好ましくは６〜９の範
囲、培養温度は２０〜４５℃、好ましくは２５〜３５℃
の範囲で好気的に、活性が最大となるまで１〜１０日間
培養すればよい。
【００３０】一般式〔２〕で示されるアミノ酸の生産反
応は、前記マグネシウム化合物を含有する水またはトリ
ス緩衝液、Ｇｏｏｄの緩衝液、ほう酸緩衝液などの緩衝
液中で、一般式〔１〕で示されるアミノ基を有する化合
物とフマール酸の混合物に前記菌体または該菌体処理物
（乾燥菌体、菌体の破砕物、粗・精製酵素、固定化菌体
・酵素など）を接触させることにより行われるが、菌体
培養液に、一般式〔１〕で示されるアミノ基を有する化
合物とフマール酸を直接添加しても行うことができる。
応は、前記マグネシウム化合物を含有する水またはトリ
ス緩衝液、Ｇｏｏｄの緩衝液、ほう酸緩衝液などの緩衝
液中で、一般式〔１〕で示されるアミノ基を有する化合
物とフマール酸の混合物に前記菌体または該菌体処理物
（乾燥菌体、菌体の破砕物、粗・精製酵素、固定化菌体
・酵素など）を接触させることにより行われるが、菌体
培養液に、一般式〔１〕で示されるアミノ基を有する化
合物とフマール酸を直接添加しても行うことができる。
【００３１】反応は、通常、５〜６０℃、好ましくは１
０〜４５℃の範囲、ｐＨ４〜１１、好ましくはｐＨ６〜
１０の範囲で行う。反応で用いる一般式〔１〕で示され
るアミノ基を有する化合物とフマール酸の濃度は反応温
度やｐＨにより異なるが、いずれも０．１重量％から飽
和濃度の範囲である。反応液中のマグネシウムイオン濃
度は０．１ｍＭ〜飽和濃度、また細菌などの使用量は基
質に対する乾燥菌体換算で、通常、０．０１〜５重量％
である。
０〜４５℃の範囲、ｐＨ４〜１１、好ましくはｐＨ６〜
１０の範囲で行う。反応で用いる一般式〔１〕で示され
るアミノ基を有する化合物とフマール酸の濃度は反応温
度やｐＨにより異なるが、いずれも０．１重量％から飽
和濃度の範囲である。反応液中のマグネシウムイオン濃
度は０．１ｍＭ〜飽和濃度、また細菌などの使用量は基
質に対する乾燥菌体換算で、通常、０．０１〜５重量％
である。
【００３２】反応は回分、連続のいずれの方法でも行う
ことができる。反応終了液からのアミノ酸の採取は除
菌、濃縮、イオン交換樹脂による吸着、晶析などの公知
の手法を用いて行うことができる。
ことができる。反応終了液からのアミノ酸の採取は除
菌、濃縮、イオン交換樹脂による吸着、晶析などの公知
の手法を用いて行うことができる。
【００３３】
【実施例】次に、本発明を実施例により具体的に説明す
る。
る。
【００３４】実施例１ （１）培養 Hafnia alveiＡＴＣＣ９７６０株、Burkholderia sp.Ｋ
Ｋ−５株、同ＫＫ−９株、Acidovorax sp.ＴＮ−５１
株、Pseudomonas sp. ＴＮ−１３１株、Arthrobacter s
p.ＫＫ−３株、Paracoccus sp.ＫＫ−６株、Sphingomon
as sp.ＴＮ−２８株、Brevundimonas sp. ＴＮ−３０株
および同ＴＮ−３株を斜面培地から１白金耳取り、下記
の培地に接種し、３０℃、３日間好気的に振とう培養し
た。培地組成（ｐＨ７．５，１００ｍｌ）：
Ｋ−５株、同ＫＫ−９株、Acidovorax sp.ＴＮ−５１
株、Pseudomonas sp. ＴＮ−１３１株、Arthrobacter s
p.ＫＫ−３株、Paracoccus sp.ＫＫ−６株、Sphingomon
as sp.ＴＮ−２８株、Brevundimonas sp. ＴＮ−３０株
および同ＴＮ−３株を斜面培地から１白金耳取り、下記
の培地に接種し、３０℃、３日間好気的に振とう培養し
た。培地組成（ｐＨ７．５，１００ｍｌ）：
【００３５】 エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ジコハク酸 ０．２ｇ グルコース ０．２ｇ 酵母エキス ０．１ｇ ポリペプトン ０．０５ｇ 硫酸マグネシウム・７Ｈ2 Ｏ ０．１ｇ 硫酸ナトリウム ０．２８ｇ 燐酸緩衝液 ２５ｍＭ 金属塩混合物溶液＊ ０．５ｍｌ ＊金属塩混合物溶液（１００ｍｌ）； 塩化マグネシウム・６Ｈ2 Ｏ ８ｇ，塩 化カルシウム ０．８ｇ，硫酸マンガン・４Ｈ2 Ｏ ０．６ｇ，塩化第二鉄・６ Ｈ2 Ｏ ０．１２ｇ，硫酸亜鉛 ０．０６ｇ
【００３６】（２）菌体の取得 菌体培養液２０ｍｌを遠心管に取り１０，０００ｒｐ
ｍ、５℃、１５分間遠心し菌体を集めた後、５０ｍＭほ
う酸緩衝液ｐＨ８．０で２回洗浄した。
ｍ、５℃、１５分間遠心し菌体を集めた後、５０ｍＭほ
う酸緩衝液ｐＨ８．０で２回洗浄した。
【００３７】（３）反応 反応液は、２００ｍＭフマル酸と２００ｍＭエチレンジ
アミン、上記菌体を含み、６Ｎ水酸化ナトリウムによっ
てｐＨ８．０に調整したものを用い、同様の組成に１０
０ｍＭとなるようにマグネシウム塩を添加したものを、
３０℃、２４時間、振とうしながら反応させ比較した。
反応終了液中の生成物Ｓ，Ｓ−エチレンジアミン−Ｎ，
Ｎ’−ジコハク酸（Ｓ，Ｓ−ＥＤＤＳ）の定量は、菌体
を１５，０００ｒｐｍ、５℃で５分間遠心除去した後の
上清をWAKOSIL 5C8 （和光純薬）〔溶出液；１０ｍＭ
水酸化テトラ−ｎ−ブチルアンモニウムと０．４ｍＭ
ＣｕＳＯ4 を含む５０ｍＭ燐酸ｐＨ２〕および MCI GEL
CRS 10W（三菱化学）〔溶出液；１０ｍＭ ＣｕＳ
Ｏ4 〕による液体クロマトグラフィーで行った。また、
生成物の分離精製は、T, Nishikiori et al., J. Antib
iotics 37, 426, (1984)に記載のイオン交換樹脂を用い
る手法で行い、結晶を取得した後にＮＭＲとマススペク
トルによる分析で化学構造の確認を行った。
アミン、上記菌体を含み、６Ｎ水酸化ナトリウムによっ
てｐＨ８．０に調整したものを用い、同様の組成に１０
０ｍＭとなるようにマグネシウム塩を添加したものを、
３０℃、２４時間、振とうしながら反応させ比較した。
反応終了液中の生成物Ｓ，Ｓ−エチレンジアミン−Ｎ，
Ｎ’−ジコハク酸（Ｓ，Ｓ−ＥＤＤＳ）の定量は、菌体
を１５，０００ｒｐｍ、５℃で５分間遠心除去した後の
上清をWAKOSIL 5C8 （和光純薬）〔溶出液；１０ｍＭ
水酸化テトラ−ｎ−ブチルアンモニウムと０．４ｍＭ
ＣｕＳＯ4 を含む５０ｍＭ燐酸ｐＨ２〕および MCI GEL
CRS 10W（三菱化学）〔溶出液；１０ｍＭ ＣｕＳ
Ｏ4 〕による液体クロマトグラフィーで行った。また、
生成物の分離精製は、T, Nishikiori et al., J. Antib
iotics 37, 426, (1984)に記載のイオン交換樹脂を用い
る手法で行い、結晶を取得した後にＮＭＲとマススペク
トルによる分析で化学構造の確認を行った。
【００３８】（４）結果
【００３９】実施例２ （１）培養 Brevundimonas sp. ＴＮ−３株、Sphingomonas sp.ＴＮ
−２８株、Pseudomonas sp. ＴＮ−１３１株、を斜面培
地から１白金耳取り、実施例１記載の培地に接種し、３
０℃、４日間好気的に振とう培養した。
−２８株、Pseudomonas sp. ＴＮ−１３１株、を斜面培
地から１白金耳取り、実施例１記載の培地に接種し、３
０℃、４日間好気的に振とう培養した。
【００４０】（２）フマラーゼ等を除去した活性画分の
取得 菌体培養液２０ｍｌを遠心管に取り１０，０００ｒｐ
ｍ、５℃、１５分間遠心分離し菌体を集めた後、５０ｍ
Ｍリン酸緩衝液で２回洗浄した。得られた菌体に対し５
０Ｗ、５分間の超音波処理を行い、１０，０００ｒｐ
ｍ、２０分間の遠心分離により粗酵素液を得た。さら
に、６０％飽和硫安沈殿、透析による脱塩の後、５０ｍ
Ｍリン酸緩衝液で平衡化されたＤＥＡＥ−セファセル
〔ファルマシア〕に吸着させ、同緩衝液から、０．６Ｍ
食塩を含む同緩衝液までの直線勾配法で溶出させた。さ
らに、必要に応じ、同条件で、ＤＥＡＥ−セファセルの
代わりにＨＰＬＣ〔TSK-gel DEAE-5PW（東ソー）〕を用
い、フマラーゼ等のフマル酸減少活性をできる限り除去
した画分を得た。
取得 菌体培養液２０ｍｌを遠心管に取り１０，０００ｒｐ
ｍ、５℃、１５分間遠心分離し菌体を集めた後、５０ｍ
Ｍリン酸緩衝液で２回洗浄した。得られた菌体に対し５
０Ｗ、５分間の超音波処理を行い、１０，０００ｒｐ
ｍ、２０分間の遠心分離により粗酵素液を得た。さら
に、６０％飽和硫安沈殿、透析による脱塩の後、５０ｍ
Ｍリン酸緩衝液で平衡化されたＤＥＡＥ−セファセル
〔ファルマシア〕に吸着させ、同緩衝液から、０．６Ｍ
食塩を含む同緩衝液までの直線勾配法で溶出させた。さ
らに、必要に応じ、同条件で、ＤＥＡＥ−セファセルの
代わりにＨＰＬＣ〔TSK-gel DEAE-5PW（東ソー）〕を用
い、フマラーゼ等のフマル酸減少活性をできる限り除去
した画分を得た。
【００４１】（３）反応 反応液は、６８．４ｍＭフマル酸と３４．２ｍＭエチレ
ンジアミン、２００ｍＭほう酸緩衝液、１７．１ｍＭ硫
酸マグネシウム、上記活性画分を含み、６Ｎ水酸化ナト
リウムによってｐＨ８に調整したものを用い、同様の組
成で硫酸マグネシウムを含まないものと、３０℃、４〜
１０日間、Ｓ，Ｓ−ＥＤＤＳの生成がほぼ見られなくな
るまで反応させ比較した。また、６Ｎ水酸化ナトリウム
によりｐＨを８に保った。反応終了液中のＳ，Ｓ−ＥＤ
ＤＳは、実施例１と同様の方法で定量した。
ンジアミン、２００ｍＭほう酸緩衝液、１７．１ｍＭ硫
酸マグネシウム、上記活性画分を含み、６Ｎ水酸化ナト
リウムによってｐＨ８に調整したものを用い、同様の組
成で硫酸マグネシウムを含まないものと、３０℃、４〜
１０日間、Ｓ，Ｓ−ＥＤＤＳの生成がほぼ見られなくな
るまで反応させ比較した。また、６Ｎ水酸化ナトリウム
によりｐＨを８に保った。反応終了液中のＳ，Ｓ−ＥＤ
ＤＳは、実施例１と同様の方法で定量した。
【００４２】（４）結果
【００４３】参考例１ 次に、実施例２で得られたＳ，Ｓ−ＥＤＤＳ収量が、平
衡点における収量であることを確かめた。 （１）培養 Brevundimonas sp. ＴＮ−３株を実施例２記載と同様の
条件で培養した。 （２）フマラーゼ等を除去した活性画分の取得 実施例２と同様。
衡点における収量であることを確かめた。 （１）培養 Brevundimonas sp. ＴＮ−３株を実施例２記載と同様の
条件で培養した。 （２）フマラーゼ等を除去した活性画分の取得 実施例２と同様。
【００４４】（３）反応 反応液は、３４．２ｍＭＳ，Ｓ−ＥＤＤＳ、２００ｍＭ
ほう酸緩衝液、１７．１ｍＭ硫酸マグネシウム、上記活
性画分を含み、６Ｎ水酸化ナトリウムによってｐＨ８に
調整したものを用い、同様の組成で硫酸マグネシウムを
含まないものと、３０℃、４〜１０日間Ｓ，Ｓ−ＥＤＤ
Ｓの分解がほぼ見られなくなるまで反応させ比較した。
また、６Ｎ硫酸によりｐＨを８に保った。反応終了液中
のＳ，Ｓ−ＥＤＤＳは、実施例１と同様の方法で定量し
た。
ほう酸緩衝液、１７．１ｍＭ硫酸マグネシウム、上記活
性画分を含み、６Ｎ水酸化ナトリウムによってｐＨ８に
調整したものを用い、同様の組成で硫酸マグネシウムを
含まないものと、３０℃、４〜１０日間Ｓ，Ｓ−ＥＤＤ
Ｓの分解がほぼ見られなくなるまで反応させ比較した。
また、６Ｎ硫酸によりｐＨを８に保った。反応終了液中
のＳ，Ｓ−ＥＤＤＳは、実施例１と同様の方法で定量し
た。
【００４５】（４）結果
【００４６】実施例３ （１）培養 Brevundimonas sp. ＴＮ−３株を実施例２と同様の条件
で培養した。 （２）フマラーゼ等を除去した活性画分の取得 実施例２と同様。
で培養した。 （２）フマラーゼ等を除去した活性画分の取得 実施例２と同様。
【００４７】（３）反応 反応液は、６８．４ｍＭフマル酸と３４．２ｍＭエチレ
ンジアミン、２００ｍＭほう酸緩衝液、表４に記した濃
度の硫酸マグネシウム、上記活性画分を含み、、６Ｎ水
酸化ナトリウムによってｐＨ８に調整したものを用い、
３０℃、４〜１０日間、Ｓ，Ｓ−ＥＤＤＳの生成がほぼ
見られなくなるまで反応させ比較した。また、６Ｎ水酸
化ナトリウムによりｐＨを８に保った。反応終了液中の
Ｓ，Ｓ−ＥＤＤＳは、実施例１と同様の方法で定量し
た。
ンジアミン、２００ｍＭほう酸緩衝液、表４に記した濃
度の硫酸マグネシウム、上記活性画分を含み、、６Ｎ水
酸化ナトリウムによってｐＨ８に調整したものを用い、
３０℃、４〜１０日間、Ｓ，Ｓ−ＥＤＤＳの生成がほぼ
見られなくなるまで反応させ比較した。また、６Ｎ水酸
化ナトリウムによりｐＨを８に保った。反応終了液中の
Ｓ，Ｓ−ＥＤＤＳは、実施例１と同様の方法で定量し
た。
【００４８】（４）結果
【００４９】実施例４ （１）培養 実施例３と同様。 （２）フマラーゼ等を除去した活性画分の取得 実施例２と同様。
【００５０】（３）反応 反応液は、６８．４ｍＭフマル酸と３４．２ｍＭエチレ
ンジアミン、２００ｍＭほう酸緩衝液、５１．３ｍＭ硫
酸マグネシウム、上記活性画分を含み、、６Ｎ水酸化ナ
トリウムによってｐＨ８に調整したものを用い、同様の
組成で硫酸マグネシウムを含まないものと、２０、３
０、４０℃、４〜１０日間，Ｓ，Ｓ−ＥＤＤＳの生成が
ほぼ見られなくなるまで反応させ比較した。また、６Ｎ
水酸化ナトリウムによりｐＨを一定に保った。反応終了
液中のＳ，Ｓ−ＥＤＤＳは、実施例１と同様の方法で定
量した。
ンジアミン、２００ｍＭほう酸緩衝液、５１．３ｍＭ硫
酸マグネシウム、上記活性画分を含み、、６Ｎ水酸化ナ
トリウムによってｐＨ８に調整したものを用い、同様の
組成で硫酸マグネシウムを含まないものと、２０、３
０、４０℃、４〜１０日間，Ｓ，Ｓ−ＥＤＤＳの生成が
ほぼ見られなくなるまで反応させ比較した。また、６Ｎ
水酸化ナトリウムによりｐＨを一定に保った。反応終了
液中のＳ，Ｓ−ＥＤＤＳは、実施例１と同様の方法で定
量した。
【００５１】（４）結果
【００５２】実施例５ （１）培養 実施例３と同様。 （２）フマラーゼ等を除去した活性画分の取得 実施例２と同様。
【００５３】（３）反応 反応液は、６８．４ｍＭフマル酸と３４．２ｍＭエチレ
ンジアミン、２００ｍＭほう酸緩衝液、５１．３ｍＭ硫
酸マグネシウム、上記活性画分を含み、、６Ｎ水酸化ナ
トリウムによってｐＨ６、７、８、９に調整したものを
用い、同様の組成で硫酸マグネシウムを含まないもの
と、３０℃、４〜１０日間、Ｓ，Ｓ−ＥＤＤＳの生成が
ほぼ見られなくなるまで反応させ比較した。また、６Ｎ
水酸化ナトリウムによりｐＨを一定に保った。反応終了
液中のＳ，Ｓ−ＥＤＤＳは、実施例１と同様の方法で定
量した。
ンジアミン、２００ｍＭほう酸緩衝液、５１．３ｍＭ硫
酸マグネシウム、上記活性画分を含み、、６Ｎ水酸化ナ
トリウムによってｐＨ６、７、８、９に調整したものを
用い、同様の組成で硫酸マグネシウムを含まないもの
と、３０℃、４〜１０日間、Ｓ，Ｓ−ＥＤＤＳの生成が
ほぼ見られなくなるまで反応させ比較した。また、６Ｎ
水酸化ナトリウムによりｐＨを一定に保った。反応終了
液中のＳ，Ｓ−ＥＤＤＳは、実施例１と同様の方法で定
量した。
【００５４】（４）結果
【００５５】実施例６ （１）培養 実施例３と同様。 （２）フマラーゼ等を除去した活性画分の取得 実施例２と同様。
【００５６】（３）反応 反応液は、表７に記した濃度のフマル酸、エチレンジア
ミン、水酸化マグネシウム、上記活性画分を含み、６Ｎ
水酸化ナトリウムによってｐＨ８．５に調整したものを
用い、３０℃、１０〜３０日間、Ｓ，Ｓ−ＥＤＤＳの生
成がほぼ見られなくなるまで反応させ比較した。また、
６Ｎ水酸化ナトリウムによりｐＨを８．５に保った。反
応終了液中のＳ，Ｓ−ＥＤＤＳは、実施例１と同様の方
法で定量した。
ミン、水酸化マグネシウム、上記活性画分を含み、６Ｎ
水酸化ナトリウムによってｐＨ８．５に調整したものを
用い、３０℃、１０〜３０日間、Ｓ，Ｓ−ＥＤＤＳの生
成がほぼ見られなくなるまで反応させ比較した。また、
６Ｎ水酸化ナトリウムによりｐＨを８．５に保った。反
応終了液中のＳ，Ｓ−ＥＤＤＳは、実施例１と同様の方
法で定量した。
【００５７】（４）結果
【００５８】実施例７ （１）培養 Brevundimonas sp. ＴＮ−３株および Acidovorax sp.
ＴＮ−５１株を実施例１と同様の条件で培養した。 （２）菌体の取得 実施例１と同様。
ＴＮ−５１株を実施例１と同様の条件で培養した。 （２）菌体の取得 実施例１と同様。
【００５９】（３）反応 反応液は、２００ｍＭのフマル酸、２００ｍＭの１，３
−プロパンジアミン、１，２−プロパンジアミン、１，
３−シクロヘキシレンジアミンまたは１，３−フェニレ
ンジアミン、１００ｍＭの硫酸マグネシウムおよび上記
菌体を含み、６Ｎ水酸化ナトリウムによってｐＨ８．０
に調整したものを用い、同様の組成で硫酸マグネシウム
を含まないものと、３０℃、２４時間、振とうしながら
反応させ比較した。反応終了液中の生成物の定量および
化学構造の確認は実施例１と同様の方法で行った。
−プロパンジアミン、１，２−プロパンジアミン、１，
３−シクロヘキシレンジアミンまたは１，３−フェニレ
ンジアミン、１００ｍＭの硫酸マグネシウムおよび上記
菌体を含み、６Ｎ水酸化ナトリウムによってｐＨ８．０
に調整したものを用い、同様の組成で硫酸マグネシウム
を含まないものと、３０℃、２４時間、振とうしながら
反応させ比較した。反応終了液中の生成物の定量および
化学構造の確認は実施例１と同様の方法で行った。
【００６０】（４）結果
【００６１】
【発明の効果】フマル酸とアミノ基を有する化合物から
細菌の作用により光学活性アミノ酸を製造するに際し、
マグネシウムイオンを存在させることにより飛躍的に収
率を向上させることができ、工業的に有利な光学活性ア
ミノ酸の製造法を提供し得る。
細菌の作用により光学活性アミノ酸を製造するに際し、
マグネシウムイオンを存在させることにより飛躍的に収
率を向上させることができ、工業的に有利な光学活性ア
ミノ酸の製造法を提供し得る。
フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ (Ｃ１２Ｐ 13/04 (Ｃ１２Ｐ 13/04 Ｃ１２Ｒ 1:06） Ｃ１２Ｒ 1:06） 微生物の受託番号 ＦＥＲＭ ＢＰ−５４１７ 微生物の受託番号 ＦＥＲＭ ＢＰ−５８８６ 前置審査 (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C12P 13/00 - 13/24 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ)
Claims (5)
- 【請求項１】 微生物または該処理物の有するリアーゼ
の触媒作用により、下記一般式（１）で示されるアミノ
基を有する化合物とフマール酸の混合物を下記一般式
（２）で示される光学活性アミノ酸に変換する反応にお
いて、該反応系にマグネシウムイオンを存在させること
を特徴とする光学活性アミノ酸の製造法。 【化１】 〔式中、Ｒ1 およびＲ2 は、互いに同一でも異なってい
てもよく、それぞれ水素原子（但し、Ｒ1 とＲ2 は共に
水素原子であることはない）、アミノ基もしくはカルボ
キシル基で置換されたアルキル基、アミノ基で置換され
たシクロアルキル基またはアミノ基で置換されたアリー
ル基、Ｒ3 およびＲ4 はＲ1 とＲ2 と同一またはＲ1 と
Ｒ2 のアミノ基の少なくとも１個がその窒素原子を介し
てコハク酸のエチレン基の炭素原子と結合した構造を有
する基を表す〕 【化２】 〔式中、Ｒ1 およびＲ2 は、互いに同一でも異なってい
てもよく、それぞれ水素原子（但し、Ｒ1 とＲ2 は共に
水素原子であることはない）、アミノ基もしくはカルボ
キシル基で置換されたアルキル基、アミノ基で置換され
たシクロアルキル基またはアミノ基で置換されたアリー
ル基、Ｒ3 およびＲ4 はＲ1 とＲ2 と同一またはＲ1 と
Ｒ2 のアミノ基の少なくとも１個がその窒素原子を介し
てコハク酸のエチレン基の炭素原子と結合した構造を有
する基を表す〕 - 【請求項２】 Ｒ1 とＲ2 の少なくとも１つがアミノ基
で置換されたアルキル基、アミノ基で置換されたシクロ
アルキル基またはアミノ基で置換されたアリール基であ
る請求項１記載の光学活性アミノ酸の製造法。 - 【請求項３】 一般式（１）で示されるアミノ基を有す
る化合物が下記一般式（３）で示され、および一般式
（２）で示される光学活性アミノ酸が下記一般式（４）
で示される請求項１記載の光学活性アミノ酸の製造法。 【化３】 〔式中、Ｒ5 はアルキレン基、シクロアルキレン基また
はフェニレン基を表す〕 【化４】 〔式中、Ｒ5 はアルキレン基、シクロアルキレン基また
はフェニレン基を表す〕 - 【請求項４】 一般式（３）で示されるアミノ基を有す
る化合物が炭素数２〜４のアルキレンジアミンであり、
一般式（４）で示される光学活性アミノ酸が対応する
Ｓ，Ｓ−アルキレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ジコハク酸で
ある請求項３記載の光学活性アミノ酸の製造法。 - 【請求項５】 一般式（３）で示されるアミノ基を有す
る化合物がエチレンジアミンであり、一般式（４）で示
される光学活性アミノ酸がＳ，Ｓ−エチレンジアミン−
Ｎ，Ｎ’−ジコハク酸である請求項４記載の光学活性ア
ミノ酸の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12470097A JP3261336B2 (ja) | 1996-04-30 | 1997-04-30 | 光学活性アミノ酸の製造法 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13059496 | 1996-04-30 | ||
| JP8-130594 | 1996-04-30 | ||
| JP12470097A JP3261336B2 (ja) | 1996-04-30 | 1997-04-30 | 光学活性アミノ酸の製造法 |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2001235098A Division JP3359625B2 (ja) | 1996-04-30 | 2001-08-02 | 光学活性アミノ酸の製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH1052292A JPH1052292A (ja) | 1998-02-24 |
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Family
ID=26461326
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP12470097A Expired - Lifetime JP3261336B2 (ja) | 1996-04-30 | 1997-04-30 | 光学活性アミノ酸の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3261336B2 (ja) |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6136573A (en) * | 1998-04-17 | 2000-10-24 | Mitsubishi Rayon Co., Ltd. | Process for producing alkali metal [S,S]-ethylenediamine-n,n'-disuccinates |
| JP7362999B2 (ja) * | 2019-03-29 | 2023-10-18 | 三井化学株式会社 | 死菌化微生物の製造方法、ｓ，ｓ－エチレンジアミン－ｎ，ｎ’－ジコハク酸又はその塩の製造方法及び菌体液 |
-
1997
- 1997-04-30 JP JP12470097A patent/JP3261336B2/ja not_active Expired - Lifetime
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| JPH1052292A (ja) | 1998-02-24 |
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