JPH10114671A - 細胞賦活剤及びその応用 - Google Patents
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- JPH10114671A JPH10114671A JP8284572A JP28457296A JPH10114671A JP H10114671 A JPH10114671 A JP H10114671A JP 8284572 A JP8284572 A JP 8284572A JP 28457296 A JP28457296 A JP 28457296A JP H10114671 A JPH10114671 A JP H10114671A
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Abstract
応用法を提供すること。 【解決手段】 特定の香料原料植物の1種若しくは2種
以上から、水、低級アルコール及びポリオール系有機溶
媒の中から選ばれる1種若しくは2種以上の溶媒を用い
て抽出して得られる抽出物の蒸留残渣を有効成分として
含有する細胞賦活剤並びに当該細胞賦活剤を配合した細
胞賦活能を有する香料組成物、当該細胞賦活剤を配合し
た皮膚外用剤及び浴用剤。
Description
の応用に関し、詳しくは香料原料植物由来の細胞賦活剤
とその応用に関するものである。本発明の細胞賦活剤
は、特定の香料植物の抽出物の蒸留残渣を有効成分とす
るものであり、細胞に対して優れた賦活作用があり、し
かも極めて安全性が高い。この細胞賦活剤を、各種の外
用製剤類に配合して用いることによって、細胞増殖を活
性化し、皮膚の老化を防止したり、或いは肌質の改善や
創傷治癒といった美容的効果も期待できる。具体的に
は、ローション、クリーム、リンス、オイル、乳液、シ
ャンプー、ヘアートニック、ヘアーリキッド、パック、
ボディーソープ、浴用剤(形態は任意であり、例えば液
状、粉末状、顆粒状、固形状等のいずれであってもよ
い)等の外用製剤類への応用が挙げられる。また、この
ような外用剤の他に、歯磨きやマウスウォッシュ等の口
腔組成物に配合して用いることもできる。
ては、ホルモン類、ビタミン類、感光素、アラントイン
など単一成分のものや、プラセンタエキス、乳酸菌エキ
ス、シコンエキス、アロエエキス、ニンジンエキス等の
動物、植物、微生物由来のエキスなどがあり、その作用
も細胞増殖や分化促進といった角化調節、抗酸化、抗炎
症、創傷治癒、毛細血管拡張作用等、直接細胞を刺激す
るものや細胞の周囲の環境を整えることで細胞の活性を
促すものなど多岐にわたっている(フレグランスジャー
ナル、22卷、1号、38頁、1994年参照)。動植
物抽出物は古くから西洋生薬、漢方薬の民間薬として伝
承され、使い続けられてきている。その中から近代科学
の成果として数多くの有効成分が薬として使用されてい
る。また、化粧品の分野においても、動植物抽出成分の
種々の作用に注目し、スキンケアー製品、メイキャップ
製品に配合されている(フレグランスジャーナル、18
巻、2号、59頁、1990年参照)。本文献には、創
傷治癒促進作用を有する植物抽出物として、メリッサ
(しそ科)、ローズマリー(マンネンロウ)(しそ
科)、代謝促進作用を有する植物抽出物として、ホップ
(くわ科)等の香料用植物原料が開示されている。
となる植物は、古くから単に香りを楽しむためだけでな
く、疾病の治療にも用いられてきた。古代バビロニアで
治療に用いられた芳香樹脂や芳香植物は200種以上に
ものぼる。中国においても、動植物抽出物が医薬として
用いられた歴史は古く、現在でも中国生薬の中には香料
植物が多く含まれている。また、その抗菌作用のため
に、エジプトでのミイラの作成に利用された没薬は有名
である。このように、香料と薬は同じ起源を持ち、その
他の生理作用についても期待が持たれており、シラカ
バ、ハンノキ(カバノキ科)の皮膚老化防止化粧料(特
開平6−263627号公報参照)、クダモノトケイソ
ウ(とけいそう科)(特開平7−233044号公報参
照)等が具体的に開示されているし、ラベンダー植物の
植物体又はその培養細胞からの抽出物が細胞賦活特性及
び優れた紫外線吸収特性の両方を持っていることが報告
されている(特開昭64−83013号公報参照)。
胞増殖試験が重視され、例えばマウス由来の線維芽細胞
の増殖を1%仔牛血清含有 Eagle's MEM培地を用いて行
い、銅と蛋白質の錯塩を310nmの紫外線部吸光度で
測定することによって蛋白質の定量を行うItzhaki & Gi
llのミクロビューレット法(特開昭64−83013号
公報参照) 、細胞数の増加を計測する方法(特開平6−
128140号公報参照)、人上皮由来Hela細胞を血球
計測盤を用い、その細胞数の計測を行う方法(特開平6
−157280号公報参照) 、SV40トランスフォー
ムヒトケラチノサイトや人由来正常皮膚線維芽細胞 (CC
D-45SK ATCC NoCRL1506)を上記血球計測盤を用いて計測
する方法(特開平7−215836号公報、同7−23
3044号公報参照) 、人皮膚細胞をDubecco'sMEM培地
を用いて増殖させ、その細胞を固定染色して細胞コロニ
ーを計測する方法(特開平6−9366号公報参照) 等
が行われている。
T(3-(4,5-Dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyltetraz
olium bromide)還元法が着目されている。MTTは生細
胞に取り込まれると、ミトコンドリアに存在するNAD
Hによって還元的に解裂を受け、ブルーホルマザンに変
換されることが明らかにされた。これは、間接的である
が、ミトコンドリアの代謝活性、すなわち細胞のエネル
ギー代謝活性を反映している。このMTTの還元法を応
用した細胞賦活効果の評価について報告されている(日
本化粧品技術者会誌、27巻、2号、166頁、199
3年、特開平7−285844号公報参照) 。
活作用を有する物質や抽出物は、その効果が十分でない
ものが多く、そのため大量に配合しなければならなかっ
たり、また保存安定性が十分でなかったり、刺激性があ
るなど安全性の面で問題点が見られるものも多かった。
さらに、単一成分のものを使用する場合にも、コストが
高くなるとか、満足な効果が得られないという問題があ
った。本発明は、このような従来の問題点を解決し、天
然由来で優れた細胞賦活作用を有するものを開発するこ
とを目的とする。
題を解決すべく鋭意研究を重ねた結果、香料原料として
用いられている特定植物の抽出物の蒸留残渣が細胞賦活
作用を示すことを、MTTの還元法を応用した細胞賦活
試験で見出し、本発明を完成した。すなわち、本発明者
らは、天然香料の細胞賦活作用について研究を行った結
果、ヒヤシンス(Hyacinthus orientalis)(ゆり科) 、マ
リーゴールド(Tagetes erectra L.)、フレンチマリーゴ
ールド(Tagetes patula L.)(きく科) 、オスマンサス(O
smanthusfragrans)(もくせい科) 、ラブダナム又はシ
スタス(Cistus ladaniferus L.、Cistus cretics L.)
(はんにちばな科) 、バニラ(Vanilla planifolia Andr
ews又は Vanilla tahitiense Moore)(らん科) 、リア
トリス(Liatris odoratissima)(きく科) 、トンカ(Dip
teryx odorata or Coumarouna odorata Aubl.)(まめ
科) 、カモミル (Matricaria chamomilla)(きく科) 、
ミル(Commiphora abyssinica)(かんらん科) 、オリバナ
ム(Boswellia,Damara Orientalis)(かんらん科) 、コ
リアンダー(Coriandrum sativum)(せり科) 及びタイム
(Thymus vulgaris)(しそ科) より選ばれる1種若しくは
2種以上の植物から、特定の溶媒を用いて得られる抽出
物を減圧下で蒸留した残渣が細胞賦活作用を有すること
を見出し、かかる知見に基づいて本発明を完成するに至
った。
alis)(ゆり科) 、マリーゴールド(Tagetes erectra
L.)、フレンチマリーゴールド(Tagetes patula L.)(き
く科) 、オスマンサス(Osmanthus fragrans)(もくせい
科) 、ラブダナム又はシスタス(Cistus ladaniferus
L.、Cistus cretics L.)(はんにちばな科) 、バニラ(V
anilla planifolia Andrews 又は Vanilla tahitiense
Moore)(らん科) 、リアトリス(Liatris odoratissima)
(きく科) 、トンカ(Dipteryx odorata or Coumarouna
odorata Aubl.)(まめ科) 、カモミル (Matricaria cha
momilla)(きく科) 、ミル(Commiphora abyssinica)(か
んらん科) 、オリバナム(Boswellia,Damara Orientali
s)(かんらん科) 、コリアンダー(Coriandrum sativum)
(せり科) 及びタイム(Thymus vulgaris)(しそ科) より
選ばれる1種若しくは2種以上の植物から、水、低級ア
ルコール及びポリオール系有機溶媒の中から選ばれる1
種若しくは2種以上の溶媒を用いて抽出して得られる抽
出物の蒸留残渣を有効成分として含有する細胞賦活剤を
提供するものである。さらに、本発明は当該細胞賦活剤
を配合した細胞賦活能を有する香料組成物、当該細胞賦
活剤を配合した皮膚外用剤並びに当該細胞賦活剤を配合
した浴用剤に関する。
用いられる植物は、上記した特定のものであり、これら
を単独で、或いは2種以上を組み合わせて使用する。こ
れら植物は、いずれも香料原料として用いられているも
のである。当該植物からの抽出は、水、低級アルコール
及びポリオール系有機溶媒の中から選ばれる1種若しく
は2種以上の溶媒を用いて行う。ここで、低級アルコー
ルとしては、メタノール、エタノール等が好ましい。ま
た、ポリオール系有機溶媒の具体例としてエチレングリ
コール、プロピレングリコール等を挙げることができ
る。抽出は、上記の溶媒に植物を室温乃至50℃の温度
で浸漬又は穏やかに攪拌して抽出することにより行う。
抽出に要する時間は、通常30分乃至12時間程度であ
る。
れる。一般的に精油(オイル)とは、果実や果皮を圧搾
したり、花や葉、茎等を水蒸気蒸留することによって得
られるものである。アブソリュートとは、主に花を色々
な方法で抽出して得られたコンクリートをさらにアルコ
ール抽出し、濃縮することによって、ワックス分、蛋白
質、色素などを除去したものである。また、レジノイド
とは、根茎や地衣類、樹脂状分泌物(花や果実以外のも
の)を同様に抽出して濃縮したもので、通常は半固体状
で可溶性樹脂を含んでいる。
通常は1〜200mmHg、好ましくは1〜20mmH
gであり、浴温40〜80℃にて流出成分がなくなるま
で行う。その所要時間は、一般に30分〜2時間程度で
ある。蒸留は、常法の通し蒸留の他、簡単なクライセン
付き蒸留器を使用して行う。蒸留残渣は、そのまま又は
エタノール、プロピレングリコール等のアルコールやポ
リオール若しくはこれらの混合物で溶解、希釈して取り
出す。このようにして得た抽出物の蒸留残渣を利用する
ときは、前記の溶媒で希釈することが好ましく、特に元
の抽出物の濃度にして用いるとよい。
などにより適宜決定されるが、例えば香料組成物として
は0.1〜50重量%、好ましくは0.1〜20重量%
であり、化粧水、乳液、クリーム等に配合する場合は、
通常0.1〜5重量%含むものが多く、好ましくは0.
1〜2重量%である。また、ボディソープや浴用剤では
0.1〜10重量%、好ましくは1〜5重量%が適当で
ある。細胞賦活剤の配合の仕方は、通常香料に用いられ
る有機溶媒であるポリオールや低級アルコールの単独又
は混合液、その他の界面活性剤との混合液で希釈する
か、常用の香料素材と混合して配合すればよい。
明するが、本発明はこれらにによって限定されるもので
はない。 実施例1 各種抽出物の製造 モクセイ科モクセイ属の植物であるキンモクセイの花
を、石油エーテルないしはヘキサンで抽出し、減圧蒸留
で溶媒を回収してコンクリートを得た。得られたコンク
リートを10倍量のエタノールで加温抽出し、室温にて
一晩放置後、濾過により花を除去した。しかる後、さら
に4℃にて放置した後に沈殿を除き、これを減圧濃縮し
てコンクリートの20%のアブソリュート(オスマンサ
ス抽出物)を得た。その他の抽出物はラブダナムの場合
は、ラブダナムの葉、小枝を熱水抽出してラブダナムガ
ムを得て、これをベンゼンで抽出してレジノイドとし
た。シスタスオイルは、ラブダナムガムを水蒸気蒸留し
て得た。カモミルオイルは花を集めて乾燥し、これを水
蒸気蒸留して得たものを用いた。
物を実施例或いは比較例に用いた。 (1)実施例 ヒヤシンスアブソリュート (OMPAGNIE D ARGEVILLE
S.A. 社製) マリーゴールドアブソリュート (CAMILLI ALBERT & LAL
OUS 社製) シスタスオイル (日本サノファ社製) ラブダナムレジノイド (PIERRE CHAUVET社製) バニラアブソリュート (QUEST 社製) バニラレジノイド (ARCO (CHARABOT) ETAB
LISSEMENTS ARCO 社製) シスタスアブソリュート (GIVAUDAN社製) リアトリックスアブソリュート (ARCO (CHARABOT) ETAB
LISSEMENTS ARCO 社製) トンカレジノイド (V.MANE FILS 社製) カモミルブルー (ARCO (CHARABOT) ETABLI
SSEMENTS ARCO 社製) ミルレジノイド (CAMILLI ALBERT & LAL
OUS 社製) オリバヌムレジノイド (PIERRE CHAUVET社製) コリアンダーアブソリュート (PIERRE CHAUVET社製) タイムモロッコアブソリュート (日本サノファ社製)
REMY社製) ベンゾインアブソリュート (PIERRE CHAUVET社製) バイオレットアブソリュート (CAMILLI ALBERT & LAL
OUS 社製) オークモスアブソリュート (ARCO (CHARABOT) ETAB
LISSEMENTS ARCO 社製) ローズマリーアブソリュート (ARCO (CHARABOT) ETAB
LISSEMENTS ARCO 社製)
9gを仕込み、減圧度10mmHgで加温し浴温90℃
まで上昇させて2時間かけて留出させた。得られた留出
物は5g、残留物は4gであった。その他の抽出物につ
いても同様に処理して各抽出物の残留物を得た。なお、
残留物量の含有%は、蒸溜の仕方により変動し、例えば
マリーゴールドアブソリュートでは74%、シスタスア
ブソリュートでは14%である。
trazorium bromide)は水溶性の黄色色素で、生細胞に取
り込まれるとミトコンドリアの酵素(NADH)によっ
て還元的開裂を受け、水に不溶性のブルーホルマザンと
なる。生成するホルマザン量とNADH量はよく相関す
ることが知られているため、このホルマザンを可溶化し
てその吸光度を測定することによって、間接的に細胞の
エネルギー代謝活性を定量することが可能である。この
方法は、細胞毒性の測定に広く用いられている。この方
法で細胞賦活試験を行った。手順を以下に示す。
1 %牛胎児血清を含むダルベッコ変法イーグルMEM培
地(日水製薬製)に5×104 /mlになるように接種
した後、この培地を96ウェルマイクロプレートに20
0μl/ウェル入れ、CO2インキュベーター(5%C
O2 、37℃)内で培養した。この後、2〜3時間で細
胞はウェルの底面に接着する。次いで、24時間後、ウ
ェル内の培地を除去し、各試料がエタノールを溶剤とし
て2倍希釈法で2〜500ppmになるように調製した
培地をそれぞれウェルに添加した後に、試料存在下で4
8時間培養した。その後、再び培地を除去し、試料無添
加のMEM培地を180μl添加した後に、MTT(ナ
カライテスク製)を下記に示したリン酸緩衝液PBS(-)に
8mg/mlとなるように溶解して無菌濾過した溶液を
1穴あたり20μl添加した。2.5時間培養したの
ち、培地を除去し、イソプロパノールを添加して生成し
ているMTTホルマザンを溶解し、マイクロプレートリ
ーダー(BIO-RAD 製) でリファレンスを655nmとし
て595nmで吸光度を測定した。
ウェルとして、これよりも吸光度が高いウェルを細胞賦
活活性ありと判定した。なお、細胞賦活作用は、抽出物
の蒸留残渣をエタノールで希釈して元の抽出物と残渣濃
度が同一になるように調節した試料を用いて測定した。
また、蒸留の際の留出物には、本方法での細胞賦活作用
がなく、残留物に抽出物と同等の活性が残存しているこ
とを確認した。結果を第1表に示した。なお、比較例と
してバイオレットアブソリュート、オークモスアブソリ
ュート及びローズマリーアブソリュートの蒸留残渣につ
いても併せて示した。
培地(日水製薬製)にヒト由来正常皮膚線維芽細胞(NB
1RGB )を2×104 cell/mlとなるように接種し
た後、この培地を25cm2 ボトル(岩城硝子製)に各
5ml入れ、CO2 インキュベーター(5%CO2 、3
7℃)内で24時間培養した。次いで、培地を交換し、
各ボトルに各試料の添加濃度が最終的にそれぞれ第2表
のようになるようにエタノールに溶解して、そのエタノ
ール溶液を0.2%の濃度で添加し、さらに1週間培養
した。この場合、培養途中で培地交換を1回行い、1週
間培養後、トリプシン(DIFCO 製)により、細胞を剥離
し、コールターカウンター(Sysmex 製) で各ボトルの細
胞数を計測した。同時に、エタノールのみを添加して培
養したものを対照区として、同様の操作で培養、細胞計
測を行った。
を、培養後の対照区の細胞数を100としたときの相対
値で求め、その結果を第2表に併せて示した。なお、比
較例としてミモザアブソリュート、ベンゾインアブソリ
ュートの蒸留残渣についても併せて示した。なお、細胞
増殖促進作用は、抽出物の蒸留残渣をエタノールで希釈
して元の抽出物と残渣濃度が同一になるように調節した
試料を用いて測定した。また、蒸留の際の留出物には、
本方法での細胞賦活作用がなく、残留物に抽出物と同等
の活性が残存していることを確認した。第2表から、本
発明の植物抽出物の蒸留残渣は細胞の増殖を著しく促進
することがわかり、細胞賦活作用を有するものである。
より香料組成物を調製した。 1)ホワイトローズ様香料組成物 重量% ヒドロキシシトロネラール 0.25 α−アミルシンナミックアルデヒド 0.50 ガラクソリド 2.00 酢酸ベンジル 0.75 シトロネロール950 11.5 δーダマスコン 0.125 酢酸ジメチルベンジルカービニル 0.125 エタノール 95% 1.235 ゲラニオール ピュアー 12.5 酢酸ゲラニル 0.25 ヨノン SP 1.50 L−ローズオキシド 0.05 3,7-ジメチル-2,6- オクタジエナール 0.05 リナロール 1.00 酢酸リナリル 0.25 メチルオイゲノール 0.15 ムスクケトン 100% 1.00 エチレンブラシレート 93 2.00 ローズオイル ADJ MM-1942 3.75 フェニルエチルアルコール 5.00 クエン酸トリエチル 3.89 ムスクチンキ 1.50 イランイラン ブルボン 0.50 バニラレジノイド蒸留残渣希釈液 50.0
より皮膚外用剤、浴用剤を調製した。 1)化粧水 重量% 濃グリセリン 3.0 1.3-ブチレングリコール 2.0 モノラウリン酸ポリオキシエチレンソルビタン 1.0 エタノール 5.0 ミューゲ様香料組成物〔実施例4の2)〕 微 量 防腐剤 : 適 量 精製水 : 100%とする。
よる細胞賦活作用の有効濃度を調べた。以下に結果を示
す。 有効濃度(ppm) ホワイトローズ様香料組成物 8,16,31 ミューゲ様香料組成物 8, 16,31
られている特定植物の抽出物の蒸留残渣が細胞賦活作用
を有していることが明らかとなり、本品を有効成分とし
て含有する細胞賦活剤が提供される。この細胞賦活剤
は、老化によるシミ、タルミを防止、改善する効果を持
つものである。また、この賦活剤は、クリーム、ローシ
ョン、乳液、パック等の基礎化粧料、ファンデーショ
ン、リップスティック等のメイクアップ化粧料、ヘアク
リーム、ヘアローション、ヘアトニック、シャンプー、
リンス等の頭髪用化粧料、浴用剤、石鹸、ボディソー
プ、歯磨きやマウスウォッシュ等の口腔組成物などに配
合することができる。
alis)(ゆり科) 、マリーゴールド(Tagetes erectra
L.)、フレンチマリーゴールド(Tagetes patula L.)(き
く科) 、オスマンサス(Osmanthus fragrans)(もくせい
科) 、ラブダナム又はシスタス(Cistus ladaniferus
L.、Cistus cretics L.)(はんにちばな科) 、バニラ(V
anilla planifolia Andrews 又は Vanilla tahitiense
Moore)(らん科) 、リアトリス(Liatris odoratissima)
(きく科) 、トンカ(Dipteryx odorata or Coumarouna
odorata Aubl.)(まめ科) 、カモミル (Matricaria cha
momilla)(きく科) 、ミル(Commiphora abyssinica)(か
んらん科) 、オリバナム(Boswellia,Damara Orientali
s)(かんらん科) 、コリアンダー(Coriandrum sativum)
(せり科) 及びタイム(Thymus vulgaris)(しそ科) より
選ばれる1種若しくは2種以上の植物から、水、低級ア
ルコール、ポリオール系有機溶媒、石油エーテル及びヘ
キサンの中から選ばれる1種若しくは2種以上の溶媒を
用いて抽出して得られる抽出物の蒸留残渣を有効成分と
して含有する細胞賦活剤を提供するものである。さら
に、本発明は当該細胞賦活剤を配合した細胞賦活能を有
する香料組成物、当該細胞賦活剤を配合した皮膚外用剤
並びに当該細胞賦活剤を配合した浴用剤に関する。
用いられる植物は、上記した特定のものであり、これら
を単独で、或いは2種以上を組み合わせて使用する。こ
れら植物は、いずれも香料原料として用いられているも
のである。当該植物からの抽出は、水、低級アルコー
ル、ポリオール系有機溶媒、石油エーテル及びヘキサン
の中から選ばれる1種若しくは2種以上の溶媒を用いて
行う。ここで、低級アルコールとしては、メタノール、
エタノール等が好ましい。また、ポリオール系有機溶媒
の具体例としてエチレングリコール、プロピレングリコ
ール等を挙げることができる。抽出は、上記の溶媒に植
物を室温乃至50℃の温度で浸漬又は穏やかに攪拌して
抽出することにより行う。抽出に要する時間は、通常3
0分乃至12時間程度である。
Claims (4)
- 【請求項1】 ヒヤシンス(Hyacinthus orientalis)(ゆ
り科) 、マリーゴールド(Tagetes erectra L.)、フレン
チマリーゴールド(Tagetes patula L.)(きく科) 、オス
マンサス(Osmanthus fragrans)(もくせい科) 、ラブダ
ナム又はシスタス(Cistus ladaniferus L.、Cistus cre
tics L.)(はんにちばな科) 、バニラ(Vanilla planifo
lia Andrews 又は Vanilla tahitiense Moore)(らん
科) 、リアトリス(Liatris odoratissima)(きく科) 、
トンカ(Dipteryx odorata or Coumarouna odorata Aub
l.)(まめ科) 、カモミル (Matricaria chamomilla)
(きく科) 、ミル(Commiphora abyssinica)(かんらん
科) 、オリバナム(Boswellia,Damara Orientalis)(か
んらん科) 、コリアンダー(Coriandrum sativum)(せり
科) 及びタイム(Thymus vulgaris)(しそ科) より選ばれ
る1種若しくは2種以上の植物から、水、低級アルコー
ル及びポリオール系有機溶媒の中から選ばれる1種若し
くは2種以上の溶媒を用いて抽出して得られる抽出物の
蒸留残渣を有効成分として含有する細胞賦活剤。 - 【請求項2】 請求項1記載の細胞賦活剤を配合したこ
とを特徴とする細胞賦活能を有する香料組成物。 - 【請求項3】 請求項1記載の細胞賦活剤を配合したこ
とを特徴とする皮膚外用剤。 - 【請求項4】 請求項1記載の細胞賦活剤を配合したこ
とを特徴とする浴用剤。
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