JP2010530412A - 皮膚皺改善用キサントリゾールの使用 - Google Patents
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Abstract
で示されるキサントリゾール(xanthorrhizol)の新規使用に関するものである。本発明のクルクマ・キサントリーザの抽出物、またはキサントリゾールはコラーゲン分解酵素−1(MMP−1,マトリクス・メタロプロテイナーゼ−1;matrix metalloproteinase-1)の抑制能力、及び新生コラーゲン(タイプ−1・プロコラーゲン;type-1 procollagen)合成能力を有し、皺を改善させる効果を有する。従って、本発明のクルクマ・キサントリーザの抽出物またはキサントリゾールは、光老化で形成される皺の治療または予防に極めて有用に使用し得る。
Description
さらに、本発明は化学式1で示されるキサントリゾールの皮膚皺改善用製剤、コラーゲン合成誘導剤、またはコラーゲン合成抑制剤の製造のための使用を提供する。
さらに、本発明は化学式1で示されるキサントリゾールを、それらを必要とする個体に有効量を塗布または投与することを特徴とする皮膚皺改善方法、コラーゲン合成誘導方法、またはコラーゲン合成抑制方法を提供する。
さらに、本発明はクルクマ・キサントリーザ抽出物を有効成分として含有する皮膚皺改善用組成物を提供する。
さらに、本発明はクルクマ・キサントリーザ抽出物の皮膚皺改善用製剤、コラーゲン合成誘導剤、またはコラーゲン合成抑制剤の製造のための使用を提供する。
さらに、本発明はクルクマ・キサントリーザ抽出物を、それらを必要とする個体に有効量を塗布または投与することを特徴とする皮膚皺改善方法、コラーゲン合成誘導方法、またはコラーゲン合成抑制方法を提供する。
本発明はクルクマ・キサントリーザ(Curcuma xanthorrhiza)から単離及び精製されたキサントリゾール(xanthorrhizol)の新規な使用を提供する。
より具体的に、本発明の化粧料組成物は、本発明のクルクマ・キサントリーザ抽出物またはキサントリゾールを有効成分として含有し、皮膚学的に許容可能な賦形剤と共に、基礎化粧品(化粧水、クリーム、エッセンス、クレンジングフォーム及びクレンジングウォーターのような洗顔剤、パック、ボディオイル、マッサージクリーム)、色調化粧品(coloring cosmetics)(ファウンデーション、リップスティック、マスカラ、化粧下地(make-up base))、頭髪製品(シャンプー、リンス、ヘアコンディショナー、ヘアゲル)の形態で製造される。前記賦形剤としては、これらに限定されるものではないが、例えば、皮膚軟化剤、皮膚浸透増強剤、着色剤、着臭剤、乳化剤、増粘剤及び溶媒を含む。さらに、香料、色素、殺菌剤、酸化防止剤、防腐剤及び保湿剤等を含み、物性改善を目的に増粘剤、無機塩類、合成高分子物質等を含む。
ただし、下記実施例は本発明を例示するものであって、本発明の内容は下記実施例に限定されるものではない。
皮膚の皺改善効果を示す細胞増殖効果を試験するために、繊維芽細胞を使用してMTT試験法[3−(4,5−ジメチルチアゾール−2−イル)−2,5−ジフェニル テトラゾリウム ブロマイド還元方法;3-(4, 5-dimethylthiazol-2-yl)-2, 5-diphenyl tetrazolium bromide reduction method]を行った。
まず、ヒトの正常繊維芽細胞を96−ウェルプレート(96-well plate)の各ウェルに2×105cells/wellになるように分株して、10%牛胎児血清(FBS;fetal bovine serum)を含有したディエムイエム(DMEM)培地で37℃、5%CO2条件下で24時間かけて1次培養した。前記1次培養後、本発明の試料を各種濃度に処理し、培地を無血清培地(serum-free medium)に替えて48時間、2次培養した。前記2次培養後、MTT溶液100μlずつ培地に添加した後、4時間放置し、培地を除去した。各ウェルにジメチルスルホキシド(dimethyl sulfoxide)溶液100μlずつを添加して、20分間撹拌した後、マイクロプレートリーダー(microplate reader)により、540nmの吸光度を測定した。
前記実施例1の方法により、クルクマ・キサントリーザエタノール抽出物とキサントリゾールの細胞増殖効果を測定した。前記MTT試験での対照群は、試料を処理していない培地を使用し吸光度を測定し、比較群は、試料として皮膚皺改善効果があるものとして知られる緑茶抽出物(green tea extract)及びエピガロカテキンガレート(EGCG;epigallocatechin-3-gallate)を使用した。結果を下記表1に示す。
表1に示した通り、本発明のクルクマ・キサントリーザエタノール抽出物及びキサントリゾールは、比較群より細胞増殖効果が優れていることが確認できた。
繊維芽細胞を2×105cells/mlの濃度で60mmディッシュ(dish)に、約85%コンフルエンス(confluence)に達するまで培養する。紫外線(UV)照射前に、培地を除去した後、細胞をPBS(リン酸緩衝生理食塩水)で洗浄して、培地の血清成分を除去した後、20mJ/cm2の照射量で紫外線を照射した。繊維芽細胞に紫外線を照射した後、各試料を処理して48時間培養し、その培地を使用してマトリクス・メタロプロテイナーゼ−1(MMP−1)及びコラーゲンの発現程度を測定した。
マトリクス・メタロプロテイナーゼ−1(MMP−1)のコラーゲン生合成発現量を測定するために、ウェスタンブロット(western blot)法を利用し、繊維芽細胞が培養された培地内の総蛋白質量は、ブラッドフォード(Bradford)法により定量した。
抽出した蛋白質は、10%SDS−ポリアクリルアミドゲルに電気泳動させ、ニトロセルロース膜(nitrocellulose membrane)に移し取った。ニトロセルロース膜が、他の未知の蛋白質により汚染されないように、5%脱脂粉乳(skim milk)を使用して1時間常温で遮断(block)した。マトリクス・メタロプロテイナーゼ−1及びタイプ−1・プロコラーゲン(type-1 procollagen)の1次抗体をブロッキング溶液(blocking solution)に1:1000の比率で希釈して、2時間常温で膜と反応させた。1次抗体反応後膜を10分間ずつ3回、トリス緩衝食塩水(TBST;Tris-buffer Saline Tween 20)で振りながら洗浄した。マトリクス・メタロプロテイナーゼ−1(MMP−1)とコラーゲンの1次抗体を認知する2次抗体を5%脱脂粉乳に1:1000になるように希釈して1時間常温で膜と反応させ、1次抗体の時と同様に10分間ずつ3回、トリス緩衝食塩水(TBST;Tris-buffer Saline Tween 20)で振りながら洗浄した後、化学発光法(chemiluminescence)で分析した。
クルクマ・キサントリーザエタノール抽出物のマトリクス・メタロプロテイナーゼ−1(MMT−1)抑制活性とコラーゲン合成効果を測定するために、前記実施例2のウェスタンブロット法を使用した。その結果、細胞にクルクマ・キサントリーザエタノール抽出物を処理した場合、マトリクス・メタロプロテイナーゼ−1が濃度依存的に抑制され、コラーゲン合成もやはり濃度依存的に増加することを確認した。この分析結果を図1及び図2に示す。図1に示す通り、細胞にクルクマ・キサントリーザエタノール抽出物を0.01μg/mlの濃度で処理したとき16%、0.1μg/mlのとき28%、0.5μg/mlのとき78%のマトリクス・メタロプロテイナーゼ−1抑制効果を示し、さらに、図2に示す通り、細胞にクルクマ・キサントリーザエタノール抽出物を0.01μg/mlの濃度で処理したとき24%、0.01μg/mlのとき127%、0.5μg/mlのとき196%のコラーゲン合成促進効果を示した。
クルクマ・キサントリーザヘキサン抽出物のマトリクス・メタロプロテイナーゼ−1(MMT−1)抑制活性とコラーゲン合成効果を測定するために、前記実施例2のウェスタンブロット法を使用した。その結果、試験例2でクルクマ・キサントリーザエタノール抽出物を処理した時と類似した活性を示し、マトリクス・メタロプロテイナーゼ−1は、細胞にクルクマ・キサントリーザヘキサン抽出物を0.5μg/mlの濃度で処理した場合75%抑制され、コラーゲン合成活性は同一濃度で191%増加する結果を示した。
キサントリゾールのマトリクス・メタロプロテイナーゼ−1抑制活性と、コラーゲン活性効果を測定するために、前記実施例2のウェスタンブロット法を使用したその結果、キサントリゾールを細胞に処理した場合、マトリクス・メタロプロテイナーゼ−1(MMT−1)が濃度依存的に抑制され、コラーゲン合成もやはり濃度依存的に増加することを確認した。この結果を図3及び図4に示す。図3に示す通り、細胞にキサントリゾールを、0.001μMの濃度で処理したとき18%、0.01μMのとき68%、0.1μMのとき92%のマトリクス・メタロプロテイナーゼ−1抑制活性を示し、この時、同一濃度の0.1μMで比較した時、比較群のEGCGは72%のマトリクス・メタロプロテイナーゼ−1抑制活性を示し、キサントリゾール処理による活性が高いことを確認した。さらに、図4に示す通り、細胞にキサントリゾールを0.01μMの濃度で処理したとき57%、0.1μMにおいて86%のコラーゲン合成促進効果を示し、この時、同一濃度の0.1μMで比較した時、比較群のEGCGは65%のコラーゲン合成促進活性を示して、キサントリゾール処理による活性が高いことを確認した。従って、本発明のキサントリゾールは皺改善に効果があるものとして広く知られたEGCGより活性が高いものとして最終的に確認した。
クルクマ・キサントリーザエタノール抽出物を使用して、実施例3〜6の組成を有する化粧水を製造した。抽出物を10.0重量%、1.0重量%、0.1重量%、0.01重量%の4種の濃度にして、それぞれエタノールに溶解させ、エタノールで重量を調整して均一に混合した。
クルクマ・キサントリーザエタノール抽出物を使用して、実施例7〜10の組成を有するクリームを製造した。まず、表3に示す物質(1)〜(5)を75〜80℃で溶解させ、物質(6)〜(9)を同じ温度で溶解させた。物質(6)〜(9)を物質(1)〜(5)に乳化させ、粗抽出物を10.0重量%、1.0重量%、0.1重量%、0.01重量%の濃度でそれぞれ添加して再混合した後、最後に香料を添加して精製水で定量を合わせた。
キサントリゾールを使用して、実施例11〜14の組成を有する化粧水を製造した。キサントリゾールを5.0重量%、0.1重量%、0.01重量%、0.001重量%の4種の濃度にして、それぞれ水に溶解させてリン酸水溶液と混合した。エタノール、グリセリン、プロピレングリコールを混合して前記混合物に添加して混合しながら、香料、保存料を追加して水で重量を調整して均一に混和させた。
キサントリゾールを使用して、実施例15〜18の組成を有するクリームを製造した。まず、表5に示す物質(1)〜(5)は75〜80℃で溶解させ、物質(6)〜(9)を同じ温度で溶解させた。物質(6)〜(9)を物質(1)〜(5)に乳化させ、キサントリゾールを5.0重量%、0.1重量%、0.01重量%、0.001重量%の濃度でそれぞれ添加して再混合した後、最後に香料を添加して精製水で定量を合わせた。
ヌードマウス(hairless mouse)に紫外線20mJ/cm2を4週間毎日1回照射し、前記実施例3〜10のクルクマ・キサントリーザエタノール抽出物含有組成物を、それぞれ4週間毎日100mlずつ背部位に塗布した後、生検して組織学的にコラーゲンの形成を測定した。この時、新たに生成されるコラーゲン量の測定は、組織を免疫染色した後、これを画像分析を介して測定した。その結果を下記表6に示す。
前記表6に示した通り、クルクマ・キサントリーザエタノール抽出物の含量が、増加するほどコラーゲン合成量が増加し、化粧水よりクリームの方がさらに高い活性を示すことを確認できた。これは化粧水よりクリームの方が皮膚における残存力がより高いためと判断される。
ヌードマウス(hairless mouse)に紫外線20mJ/cm2を4週間毎日1回照射し、前記実施例11〜18のキサントリゾール含有組成物を、それぞれ4週間毎日100mlずつ背部位に塗布した後、生検して組織学的にコラーゲンの形成を測定した。この時、新たに生成されるコラーゲン量の測定は、組織を免疫染色した後、これを画像分析を介して測定した。その結果を下記表7に示す。
前記表7に示した通り、キサントリゾールの含量が、増加するほどコラーゲン合成量が増加され、化粧水よりクリームの方がさらに高い活性を示すことを確認できた。これは化粧水よりクリームの方が皮膚における残存力がより高いためと判断される。
Claims (14)
- 化学式1で示されるキサントリゾールの皮膚皺改善用製剤の製造のための使用。
- 化学式1で示されるキサントリゾールのコラーゲン合成誘導剤の製造のための使用。
- 化学式1で示されるキサントリゾールのコラーゲン分解抑制剤の製造のための使用。
- 化学式1で示されるキサントリゾールを、それらを必要とする個体に有効量を塗布または投与することを特徴とする皮膚皺改善方法。
- 化学式1で示されるキサントリゾールを、それらを必要とする個体に有効量を塗布または投与することを特徴とするコラーゲン合成誘導方法。
- 化学式1で示されるキサントリゾールを、それらを必要とする個体に有効量を塗布または投与することを特徴とするコラーゲン分解抑制方法。
- クルクマ・キサントリーザ(Curcuma xanthorrhiza)の抽出物を有効成分とする皮膚皺改善用組成物。
- クルクマ・キサントリーザ抽出物の皮膚皺改善用製剤の製造のための使用。
- クルクマ・キサントリーザ抽出物のコラーゲン合成誘導剤の製造のための使用。
- クルクマ・キサントリーザ抽出物のコラーゲン分解抑制剤の製造のための使用。
- クルクマ・キサントリーザ抽出物を、それらを必要とする個体に有効量を塗布または投与することを特徴とする皮膚皺改善方法。
- クルクマ・キサントリーザ抽出物を、それらを必要とする個体に有効量を塗布または投与することを特徴とするコラーゲン合成誘導方法。
- クルクマ・キサントリーザ抽出物を、それらを必要とする個体に有効量を塗布または投与することを特徴とするコラーゲン分解抑制方法。
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