JPH09224663A - ε−ポリ−Ｌ−リシン分解酵素とそれを用いた低重合度ε−ポリ−Ｌ−リシンの製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】ε−ポリ−Ｌ−リシンに特異性の高い加水分解
酵素を採取することを目的とし、その酵素を利用して低
重合度ε−ポリ−Ｌ−リシンを得ることを目的とした。 【解決手段】スフィンゴバクテリウム・マルチヴォラム
に属する微生物を培養して、培養液中よりε−ポリ−Ｌ
−リシン分解酵素を採取し、それを用いてε−ポリ−Ｌ
−リシンから重合度２〜１９の低重合度ε−ポリ−Ｌ−
リシンを得る。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明はスフィンゴバクテリ
ウム・マルチヴォラムに属する微生物、該微生物を培養
して、培養液中より得られるε−ポリ−Ｌ−リシン分解
酵素、この酵素の製造法、及びε−ポリ−Ｌ−リシン分
解酵素を利用した低重合度ε−ポリ−Ｌ−リシンの製造
法に関する。

【０００２】

【従来の技術】ε−ポリ−Ｌ−リシンはグラム陰性菌、
グラム陽性菌、真菌等、各種の菌株に対し静菌作用があ
り食品保存料として様々の食品の日持ち向上に利用され
ている。食品は多種多様なので、食品マトリックスの置
かれている環境によっては、ε−ポリ−Ｌ−リシンの通
常量の添加では効果が出ないことがある。そのときは大
量に添加する必要があるが、それによって食品の風味が
損なわれることが多い。特開平４−２８７６９３号公報
によれば、アスペルギルス(Aspergillus)属の中性プロ
テアーゼでε−ポリ−Ｌ−リシンを処理するとε−ポリ
−Ｌ−リシンが加水分解され、その加水分解物を食品に
添加した場合、無処理のε−ポリ−Ｌ−リシンを添加し
た場合と比較して、えぐ味が改善されるとしている。し
かし、アスペルギルス属の中性プロテアーゼは基質特異
性が広く、食品に直接添加された場合は食品成分由来の
蛋白に作用し、風味、触感が著しく変化する恐れがあ
る。そこで、ε−ポリ−Ｌ−リシンに特異的に作用する
分解酵素が求められていた。

【０００３】また、食品中のε−ポリ−Ｌ−リシンの量
を測定するさいは、従来からメチルオレンジ法、高速液
体クロマトグラフィー法等が用いられているが、食品成
分の除去が困難で煩雑であった。ε−ポリ−Ｌ−リシン
に特異的に作用する酵素があればそれを用いて食品から
容易にε−ポリ−Ｌ−リシンを定量できる測定系が開発
できることが期待された。また、ε−ポリ−Ｌ−リシン
を蛋白水溶液に添加するとゲル化するなどの作用があ
る。そのさい添加するε−ポリ−Ｌ−リシンの分子量に
よって、生成するゲルの物性が異なることが知られてい
る。蛋白に作用せず、ε−ポリ−Ｌ−リシンにのみ作用
する分解酵素が望まれていた。その他、低重合度ε−ポ
リ−Ｌ−リシンは未知の生理活性を有し、多方面の利用
が期待できる。これらの理由から、ε−ポリ−Ｌ−リシ
ンに基質特異性の高い加水分解酵素が望まれ、本発明者
らが鋭意努力した結果、クリセオバクテリウム・グルー
プ〓ｂに属する菌株がε−ポリ−Ｌ−リシンを分解する
ことを見いだし、ε−ポリ−Ｌ−リシン分解酵素を同定
した。（特願平７−１９１１８４号）しかし、この酵素
の分解形式はエンド型で、ε−ポリ−Ｌ−リシンの鎖を
ランダムに切るので、得られる低重合度ε−ポリ−Ｌ−
リシンの重合度の制御が困難であった。そこで分解形式
の異なるε−ポリ−Ｌ−リシン分解酵素が求められた。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】本発明者らはかかる課
題を解決するために、広く自然界よりε−ポリ−Ｌ−リ
シン分解酵素生産能を有する微生物を探索した。その結
果、新たに土壌より分離された菌（ＯＪ−10株）が、ε
−ポリ−Ｌ−リシン分解酵素を培養液中に生産すること
を見いだし、また、この酵素を用いて、低重合度ε−ポ
リ−Ｌ−リシンが製造できることを見出し本発明を完成
させた。すなわち、本発明の目的は、ε−ポリ−Ｌ−リ
シン加水分解酵素生産能を有する微生物、ε−ポリ−Ｌ
−リシン加水分解酵素および、その酵素を用いて低重合
度ε−ポリ−Ｌ−リシンを製造する方法を提供すること
にある。

【０００５】

【課題を解決するための手段】

（１）ε−ポリ−Ｌ−リシンをエキソ型に加水分解し、
低重合度ε−ポリ−Ｌ−リシンを生成させるε−ポリ−
Ｌ−リシン分解酵素。 （２）スフィンゴバクテリウム・マルチヴォラム(Sphin
gobacterium multivorum)に属する微生物を培養し、該
微生物中より採取して得られる前記（１）項記載のε−
ポリ−Ｌ−リシン分解酵素。 （３）スフィンゴバクテリウム・マルチヴォラムに属す
る微生物がスフィンゴバクテリウム・マルチヴォラム
ＯＪ−10株（ＦＥＲＭ Ｐ−１５３９８）である前記
（２）項記載のε−ポリ−Ｌ−リシン分解酵素。 （４）スフィンゴバクテリウム・マルチヴォラムに属す
る微生物を培養して、ε−ポリ−Ｌ−リシンを加水分解
し低重合度ε−ポリ−Ｌ−リシン及びＬ−リシを生成さ
せる酵素を培養液中より採取することを特徴としたε−
ポリ−Ｌ−リシン分解酵素の製造法。 （５）ε−ポリ−Ｌ−リシンを前記（１）〜（３）項の
いずれか１項記載の酵素で加水分解することを特徴とす
る低重合度ε−ポリ−Ｌ−リシンの製造法。 （６）重合度が２０以上のε−ポリ−Ｌ−リシンを前記
（１）項または（２）項のいずれか１項記載の酵素で加
水分解することを特徴とする重合度２〜１９であるε−
ポリ−Ｌ−リシンの製造法。 （７）ε−ポリ−Ｌ−リシン分解酵素生産能を有するス
フィンゴバクテリウム・マルチヴォラム ＯＪ−10株
（ＦＥＲＭ Ｐ−１５３９８）。

【０００６】本発明において用いられる菌株であるＯＪ
−10株の菌学的性状は以下のとおりである。 （培養所見）肉汁寒天平板で２４時間３０℃で培養した
コロニーの形態は、直径１mm以下の円形、全縁で、低い
凸状、灰色がかった白色、半透明、なめらかで光沢があ
る。グラム陰性の短かん菌で芽胞形成はない。カタラー
ゼ及びチトクロームオキシダーゼ活性が陽性で、グルコ
ースＯＦ試験の成績が酸化的で陰性である。また、本菌
株は３７℃で生育を示し、４１℃では生育が認められな
い。 （生化学的特徴）３０℃で４８時間生育した時、ＮＯ₃
還元，インドール産生、グルコースからの酸の産生、ア
ルギニン・ジヒドロラーゼ活性及びゼラチン加水分解が
陰性、ウレアーゼ、エスクリン加水分解、β−ガラクト
シダーゼ及び硝酸の産生が陽性、グルコース、マンノー
ス、Ｎ−アセチルグルコサミン及びマルトースの資化性
が陽性、マンニトール、グルコン酸、カプリン酸、アジ
ピン酸、リンゴ酸、クエン酸及びフェニル酢酸の資化性
が陰性を示す。３０℃で７日間生育した時、カゼイン、
スターチ、チロシン及びアラントイン加水分解が陰性、
運動性、シモンのクエン酸培地での生育、リジン脱炭酸
酵素活性、硝酸還元及び硫化水素発生が陰性、ＤＮＡ分
解酵素、β−キシロシダーゼ及びフェニルアラニンデア
ミナーゼ活性が陽性、ゼラチン加水分解活性が弱い陽性
を示す。これらの性状から、本菌株をスフィンゴバクテ
リウム・マルチヴォラム(Sphingobacterium multivoru
m)と同定した。本菌株は工業技術院生命工学工業技術研
究所にＦＥＲＭ Ｐ−１５３９８として寄託されてい
る。スフィンゴバクテリウム・マルチヴォラムが当該酵
素の活性を有していることは今までに明らかにされてい
ない。本菌株より生産されるε−ポリ−Ｌ−リシン分解
酵素の酵素学的および理化学的性質について記述する。

【０００７】１，作用：ε−ポリ−Ｌ−リシンをエキソ
型に加水分解して、ε結合の低重合度ε−ポリ−Ｌ−リ
シン（重合度ｎ＝２〜１９）及びＬ−リシンを生成す
る。 ２，基質特異性：ε−ポリ−Ｌ−リシンを分解し、低重
合度ε−ポリ−Ｌ−リシンを遊離するが、α−ポリ−Ｌ
−リシンには作用しない。 ３，分子量：高速液体クロマトグラフィー法、ＳＤＳ−
ポリアクリルアミド・ゲル電気泳動で測定した分子量は
それぞれ約１５４，０００、約８０，０００でホモダイ
マー構造をとる。 ４，温度の影響：至適反応温度は３７℃である。ｐＨ
９，１５分間の加熱では３５℃まで安定である。 ５，ｐＨの影響：至適反応ｐＨはｐＨ９．０である。４
℃、３日間の放置でｐＨ８〜１０で安定である。 ６，酵素活性測定法：１モル濃度のリン酸カリウム緩衝
液(ｐＨ７．５)を０．１ｍＬ、２．５mg/mLのε−ポリ
−Ｌ−リシン水溶液を０．４mL、生理食塩水０．４mL及
び酵素溶液を０．１mLを入れた試験管を３０℃で保温す
る。３０分後、高速液体クロマトグラフィーの展開溶媒
を１ｍＬ添加することで反応を停止する。遠心分離で沈
澱を除き、上清液の１０μＬを逆相高速液体クロマトグ
ラフィーに供する。展開溶媒はリン酸２水素１ナトリウ
ム１０ミリモル濃度 ＋ 過塩素酸ナトリウム ０．１
モル濃度 ＋ オクチルスルホン酸ナトリウム１０ミリ
モル濃度 ＋ アセトニトリル ３７．５％（ｖ／ｖ）
の組成のものを用い、毎分１ｍＬの流速で展開する。カ
ラムはＭ＆Ｓパック Ｃ−１８(4.6 x 150mm)を用い
る。２１５ｎｍの波長の紫外線でε−ポリ−Ｌ−リシン
の減少を測定する。 本条件下で酵素溶液１ｍＬ当たり１分間で１mgのε−ポ
リ−Ｌ−リシンを分解する酵素量を１Ｕとする。

【０００８】本発明の酵素はたとえば以下のようにして
製造される。スフィンゴバクテリウム・マルチヴォラム
ＯＪ−10株（ＦＥＲＭ Ｐ−１５３９８）を培養液で
好気的に培養する。この培養液は本菌が生育するに充分
な炭素源、窒素源、ビタミン類、ミネラル分が含まれて
いればいかなるものでも良いが、好ましくは肉エキス
１．５％（ｗ／ｖ），酵母エキス０．１％（ｗ／ｖ），
ショ糖１．０％（ｗ／ｖ），リン酸１水素２カリウム
０．３％（ｗ／ｖ），塩化ナトリウム０．２％（ｗ／
ｖ），硫酸マグネシウム７水塩０．０２％（ｗ／ｖ），
ｐＨ７．０の組成を持つ培養液を用いる。２５℃から３
３℃の温度で２日から５日間の期間培養し、遠心分離機
またはフィルターでろ集して菌体を採取する。採取した
菌体を生理食塩水で洗浄し、ｐＨが７付近の緩衝液に懸
濁し、菌体懸濁液を超音波破砕機または菌体破砕機にか
けて菌体を破砕する。緩衝液としては当該酵素を失活さ
せないものであればいずれのものでも良いが、好ましく
はリン酸カリウム緩衝液ｐＨ７．５が用いられる。菌体
破砕液をさらに遠心分離機にかけ細胞壁成分を取り除
く。得られた上清液に当該酵素が沈澱し始めない蛋白沈
澱剤の濃度まで蛋白沈澱剤を培養液に加える。生成した
沈澱を遠心分離機またはフィルターで除去する。沈澱を
除去した液にさらに蛋白沈澱剤を加え、当該酵素の大部
分が沈澱し終わるまで続ける。生成した沈澱を遠心分離
してまたはフィルターでろ過して取り出す。これが粗製
の当該酵素である。蛋白沈澱剤として、当該酵素を失活
しないものであればいかなるものでも用いられるが、好
ましくは硫酸アンモニウムを用い３０〜６０％飽和濃度
の画分を得る。粗製の当該酵素は、必要に応じて、さら
にカラムクロマトグラフィー等の手段で精製する。

【０００９】原料として用いられるε−ポリ−Ｌ−リシ
ンの重合度は特に制限がなく、いかなるものでも使用可
能であり、例えば和光純薬〓製のε−ポリ−Ｌ−リシン
塩酸塩、チッソ〓製の５０％（ｗ／ｗ）デキストリン粉
末、低級脂肪酸グリセライド製剤（商品名：ガードキー
プ）またはグリシン製剤（商品名：ガードロング）が用
いられる。低重合度ε−ポリ−Ｌ−リシンはたとえば以
下のようにして製造される。原料のε−ポリ−Ｌ−リシ
ン塩酸塩をｐＨ７．０〜８．０の緩衝液に溶かす。この
溶液に当該酵素の水溶液を加えて混合し、２５℃〜４０
℃で２〜１２時間保温する。低い重合度のものを得たい
ときは保温時間を長くして調節する。反応液を加熱する
か、有機溶媒または高速液体クロマトグラフィーの溶媒
を加えるかして反応を停止し、変性した当該酵素蛋白を
遠心分離機もしくはフィルターでろ過して取り除く。そ
の反応液を逆相液体クロマトグラフィーに供し、重合度
２〜１９のε−ポリ−Ｌ−リシンの画分を集める。カラ
ムはＯＤＳ逆相カラムを用いる。展開溶媒は低重合度ε
−ポリ−Ｌ−リシンが分離できるものであればいかなる
ものでも良いが、好ましくは Ａ液：リン酸２水素１ナトリウム１０ミリモル濃度＋過
塩素酸ナトリウム０．１モル濃度＋オクチルスルホン酸
ナトリウム１０ミリモル濃度の水溶液、Ｂ液：２倍濃度
のＡ液とアセトニトリルを液量で１対１に混合した液を
使用する。展開はＡ液とＢ液の混合液中において、展開
１分後にＢ液の濃度が５０％（Ｖ／Ｖ）から５５％（Ｖ
／Ｖ）まで、２５分後に５５％（Ｖ／Ｖ）から７０％
（ｖ／ｖ）、３５分後に７０％（Ｖ／Ｖ）から７５％
（Ｖ／Ｖ）に直線的に増加する濃度勾配に毎分１mLの流
速で溶出させる。２１５ｎｍの波長の紫外線でピークを
検出し、目的の重合度のε−ポリ−Ｌ−リシンが含まれ
た溶出液を得る。この溶出液を陽イオン交換樹脂にかけ
濃縮し、得られた濃縮液を凍結乾燥、真空乾燥あるいは
デキストリン等の多糖類を混ぜて噴霧乾燥する等の手段
で粉末状の低重合度のε−ポリ−Ｌ−リシンを得る。重
合度のいかんを問わないときは酵素反応停止後の液を液
体クロマトグラフィーをせず直接、イオン交換樹脂にか
けても良い。

【００１０】以下、実施例で本発明を説明する。本発明
は実施例にのみ限定するものではない。

【実施例】

ε−ポリ−Ｌ−リシン分解酵素活性の測定 ε−ポリ−Ｌ−リシン分解酵素活性の測定は以下の方法
を用いた。１モル濃度のリン酸カリウム緩衝液(ｐＨ
７．５)を０．１ｍＬ、２．５mg/mLのε−ポリ−Ｌ−リ
シン水溶液を０．４mL、生理食塩水０．４mL及び酵素溶
液を０．１mLを入れた試験管を３０℃で保温した。３０
分後、高速液体クロマトグラフィーの展開溶媒を１ｍＬ
添加することで反応を停止した。遠心分離で沈澱を除
き、上清液の１０μＬを逆相高速液体クロマトグラフィ
ーに供した。展開溶媒はリン酸２水素１ナトリウム１０
ミリモル濃度 ＋ 過塩素酸ナトリウム ０．１モル濃
度 ＋ オクチルスルホン酸ナトリウム１０ミリモル濃
度 ＋ アセトニトリル ３７．５％（ｖ／ｖ）の組成
の水溶液を用い、毎分１ｍＬの流速で展開した。カラム
はＭ＆Ｓパック Ｃ−１８(4.6 x 150mm)を用いた。溶
出液を２１５ｎｍの波長の紫外線で測定し、標準のε−
ポリ−Ｌ−リシンのピークと比較してε−ポリ−Ｌ−リ
シンの減少を測定した。本条件下で酵素溶液１ｍＬ当た
り１分間で１mgのε−ポリ−Ｌ−リシンを分解する酵素
量を１Ｕとした。

【００１１】実施例１ 肉エキス１．５％（ｗ／ｖ），酵母エキス０．１％（ｗ
／ｖ），ショ糖１．０％（ｗ／ｖ），リン酸１水素２カ
リウム０．３％（ｗ／ｖ），塩化ナトリウム０．２％
（ｗ／ｖ），硫酸マグネシウム７水塩０．０１％（ｗ／
ｖ），ｐＨ７．０の組成を持つ培養液１２Ｌにスフィン
ゴバクテリウム・マルチヴォラム ＯＪ−10株（ＦＥＲ
Ｍ Ｐ−１５３９８）を２８℃で２日間振とう培養し
た。得られた培養液から菌体を遠心分離にて採取し、得
られた菌体を生理食塩水で洗浄した。その菌体を０．０
１モル濃度のりん酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．０）３０
０mLに懸濁し、超音波破砕機で１０分間、１９ｋＨｚの
処理をした。得られた菌体破砕液を遠心分離機で２０分
間１０，０００rpmの処理をし、得られた上清２５０mL
中に３３Ｕ（２．３３g）の当該酵素活性を認めた。こ
の上清液に硫酸アンモニウムを加え、３０〜６０％硫酸
アンモニウム飽和濃度の粗製の当該酵素の画分１８ｕ
（６０４mg）を得た。

【００１２】上記の粗製の当該酵素を0.01モル濃度のリ
ン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．０）に溶かし同じ緩衝液
に平衡化したＣＭトヨパール（東ソー製）のカラム（５
０mL）に吸着させ、０．０５モル濃度のリン酸カリウム
緩衝液（ｐＨ７．０）で溶出した活性画分を０．０１モ
ル濃度のリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．０）で透析し
た。その画分１３．３Ｕ（４４．３mg）を０．０１モル
濃度の同じ緩衝液に２０％（Ｗ／Ｖ）硫酸アンモニウム
を加えた緩衝液で平衡化したフェニルセファローズ（フ
ァルマシア製）のカラム（１０mL）に吸着させ、これを
０．０１モル濃度の同じ組成の緩衝液に硫酸アンモニウ
ム５％（Ｗ／Ｖ）となるよう硫酸アンモニウムを添加し
た溶出液で溶出して活性画分１０．６Ｕ（７．８５mg）
を得た。この画分に硫酸アンモニウムを２０％（Ｗ／
Ｖ）になるように加え、同じ緩衝液に平衡化したブチル
トヨパール（東ソ−製）のカラム（３mL）に吸着させ、
０．０１モル濃度のリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．
０）に７．５％（Ｗ／Ｖ）硫酸アンモニウムで溶出した
活性画分を集めた。この画分を0.1モル濃度のリン酸カ
リウム緩衝液（ｐＨ７．０）＋５０％（ｖ／ｖ）グリセ
ロールで透析し、当該酵素の精製標品を得た。この精製
標品は８．３Ｕでたんぱく量１．１４mg、比活性が７．
３Ｕ／mg proteinであった。

【００１３】実施例２ 和光純薬製ε−ポリ−Ｌ−リシン塩酸塩（分子量2000〜
4000、重合度２０〜３５）１０mg／mL水溶液を１．０m
L、０．１モル濃度のリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．
５）０．２mL、イオン交換水０．６mLからなる反応液に
実施例１で作製した酵素４．０Ｕ／mLの水溶液０．２mL
を加えて混合し反応させた。その直後にこの反応液５０
μLを取り出し、この反応液にＡ液２５％（Ｖ／Ｖ）、
Ｂ液７５％（Ｖ／Ｖ）からなる展開溶媒５０μLを加え
遠心分離し、上清１０μLを逆相高速液体クロマトグラ
フィーに供した。カラムは化学品検査協会製Ｌ−カラム
（ＯＤＳ）(4.6 x 250mm)を用いた。展開はＡ液：リン
酸２水素１ナトリウム１０ミリモル濃度＋過塩素酸ナト
リウム０．１モル濃度＋オクチルスルホン酸ナトリウム
１０ミリモル濃度の水溶液、Ｂ液：２倍濃度のＡ液とア
セトニトリルを液量で１対１に混合した液を使用して、
Ａ液とＢ液の混合液中において、展開１分後にＢ液の濃
度が５０％（Ｖ／Ｖ）から５５％（Ｖ／Ｖ）まで、２５
分後に５５％（Ｖ／Ｖ）から７０％（Ｖ／Ｖ）、３５分
後に７０％（Ｖ／Ｖ）から７５％（Ｖ／Ｖ）に直線的に
増加する濃度勾配で最終的に７５％（Ｖ／Ｖ）で毎分１
mLの流速で溶出させた。溶出液を２１５ｎｍの波長の
紫外線で検出したところ、図１のクロマトグラムを得
た。次に、反応液の残りを３７℃で４時間反応させ、反
応液５０μLに同じ展開溶媒５０μLを加えて同様に遠心
分離し、上清１０μＬを同様に逆相高速液体クロマトグ
ラフィーに供し、図２のクロマトグラムを得た。重合度
２から２０以下の低重合度ε−ポリ−Ｌ−リシンとＬ−
リシンのピークが認められ、ε−ポリ−Ｌ−リシンの低
分子化が明らかにみられた。この反応液から凍結乾燥に
て０．２５mgの低重合度ε−ポリ−Ｌ−リシンが得られ
た。さらに、反応液を２０時間反応させ、反応液５０μ
Lを取り出し同様に逆相液体クロマトグラフィーに供し
たところ、図３のクロマトグラムを得た。この反応液５
０μLから凍結乾燥にて０．２３mgの重合度２〜１９の
ε−ポリ−Ｌ−リシンが得られた。低重合度のε−ポリ
−Ｌ−リシンの重合度は標準の低重合度ε−ポリ−Ｌ−
リシンのピークと比較して測定した。

【００１４】比較例１ 実施例２で用いたε−ポリ−Ｌ−リシンの代わりにシグ
マ社製α−ポリ−Ｌ−リシン臭酸塩（分子量4000〜15,0
00、重合度３５〜１３０）を用いて、実施例２に準拠し
て反応をおこない、反応０時間後と２４時間後との反応
産物を分析した。反応０時間後のクロマトグラムを図
４、２４時間後のクロマトグラムを図５で表した。反応
２４時間後でもクロマトグラムにほとんど変化がみられ
なかった。これは、この酵素がα−ポリ−Ｌ−リシンに
作用しないことを示す。

【００１５】実施例３ 実施例２に準拠して作製した反応液を３７℃で反応さ
せ、反応直後及び３０分毎に５０μＬサンプリングし、
直ちに実施例２に記載の展開溶媒を加えて反応を停止し
遠心分離した。上清５０μＬをジャーナル・オブ・バイ
オケミストリー２５５巻９７６頁記載の方法でリシン・
オキシダーゼの反応液に入れて反応させ、本願酵素反応
によって遊離されたＬ−リシンを定量した。その結果、
図６に示すようにＬーリジンの量が一定の割合で増加し
た。これは本願酵素の反応形式がエキソ型で、Ｌ−リシ
ンがε−ポリ−Ｌ−リシンの末端から遊離していること
を示す。

【００１６】比較例２ 先願のクリセオバクテリウム・グループ〓ｂに属する菌
株から得られたε−ポリ−Ｌ−リシン分解酵素を実施例
３と同量の０．８Ｕを実施例３に準拠して反応させ、リ
シン・オキシダーゼを用いて遊離したＬ−リシンを定量
した。その結果、実施例３と同量の酵素を入れているに
も関わらず図６に示すようにＬ−リシンの量はほとんど
増加しなかった。これは先願酵素の反応形式がエンド型
であることを示す。

【００１７】

【発明の効果】本願発明に関わるε−ポリ−Ｌ−リシン
分解酵素はε−ポリ−Ｌ−リシンに基質特異性が高く、
ε−ポリ−Ｌ−リシンを加水分解し低重合度ε−ポリ−
Ｌ−リシン及びＬ−リシンを生成する。この酵素は、蛋
白の共存下で蛋白を分解することなくε−ポリ−Ｌ−リ
シンを分解することができる。この性質によって、低重
合度ε−ポリ−Ｌ−リシンの食品工業を中心として多方
面の用途が開ける。

【図面の簡単な説明】

【図１】実施例２において、ε−ポリ−Ｌ−リシンを基
質とした反応での反応直後（０時間）の反応液の逆相ク
ロマトグラムである。

【図２】実施例２において、ε−ポリ−Ｌ−リシンを基
質とした反応での反応４時間後の反応液の逆相クロマト
グラムである。

【図３】実施例２において、ε−ポリ−Ｌ−リシンを基
質とした反応での反応２４時間後の反応液の逆相クロマ
トグラムである。

【図４】比較例１において、α−ポリ−Ｌ−リシンを基
質とした反応での反応直後（０時間）の反応液の逆相ク
ロマトグラムである。

【図５】比較例において、α−ポリ−Ｌ−リシンを基質
とした反応での反応２４時間後の反応液の逆相クロマト
グラムである。

【図６】ε−ポリ−Ｌ−リシン分解酵素反応中液のL-リ
シンの量の変化

Claims (7)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】ε−ポリ−Ｌ−リシンをエキソ型に加水分
   解し、低重合度ε−ポリ−Ｌ−リシンを生成させるε−
   ポリ−Ｌ−リシン分解酵素。
2. 【請求項２】スフィンゴバクテリウム・マルチヴォラム
   (Sphingobacterium multivorum)に属する微生物を培養
   し、該微生物中より採取して得られる請求項１記載のε
   −ポリ−Ｌ−リシン分解酵素。
3. 【請求項３】スフィンゴバクテリウム・マルチヴォラム
   に属する微生物がスフィンゴバクテリウム・マルチヴォ
   ラム ＯＪ−10株（ＦＥＲＭ Ｐ−１５３９８）である
   請求項２記載のε−ポリ−Ｌ−リシン分解酵素。
4. 【請求項４】スフィンゴバクテリウム・マルチヴォラム
   に属する微生物を培養して、ε−ポリ−Ｌ−リシンを加
   水分解し低重合度ε−ポリ−Ｌ−リシン及びＬ−リシを
   生成させる酵素を培養液中より採取することを特徴とし
   たε−ポリ−Ｌ−リシン分解酵素の製造法。
5. 【請求項５】ε−ポリ−Ｌ−リシンを請求項１〜３項の
   いずれか１項記載の酵素で加水分解することを特徴とす
   る低重合度ε−ポリ−Ｌ−リシンの製造法。
6. 【請求項６】重合度が２０以上のε−ポリ−Ｌ−リシン
   を請求項１または２項のいずれか１項記載の酵素で加水
   分解することを特徴とする重合度２〜１９であるε−ポ
   リ−Ｌ−リシンの製造法。
7. 【請求項７】ε−ポリ−Ｌ−リシン分解酵素生産能を有
   するスフィンゴバクテリウム・マルチヴォラム ＯＪ−
   10株（ＦＥＲＭ Ｐ−１５３９８）。