JPH09206073A - アルカリα−アミラーゼ、これを生産する微生物及び当該アルカリα−アミラーゼの製造法 - Google Patents
アルカリα−アミラーゼ、これを生産する微生物及び当該アルカリα−アミラーゼの製造法Info
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Abstract
(57)【要約】 （修正有）
【解決手段】 次の酵素学的性質を有するアルカリα−
アミラーゼＳ−１、これを生産する微生物及び当該アル
カリα−アミラーゼＳ−１の製造法。澱粉、アミロー
ス、アミロペクチン及びそれらの部分分解物のα−１，
４グルコシド結合を分解し、アミロースからはグルコー
ス（Ｇ１）、マルトース（Ｇ２）、マルトトリオース
（Ｇ３）及びマルトテトラオース（Ｇ４）を生成する。
但しプルランには作用しない。pH６．５〜１２．５の範
囲で作用し、至適pHは１０〜１１である。pH７〜１１．
５の範囲で極めて安定であり、pH７．５〜１１．５にお
いても、５０％以上の活性を維持する（５０℃、１５分
処理）。２０〜７０℃の範囲で作用し、最適作用温度は
６０℃である。５５℃以下で極めて安定である。 【効果】 高アルカリ性（pH１１〜１２）において極め
て安定であり、高温においても活性を維持する。
アミラーゼＳ−１、これを生産する微生物及び当該アル
カリα−アミラーゼＳ−１の製造法。澱粉、アミロー
ス、アミロペクチン及びそれらの部分分解物のα−１，
４グルコシド結合を分解し、アミロースからはグルコー
ス（Ｇ１）、マルトース（Ｇ２）、マルトトリオース
（Ｇ３）及びマルトテトラオース（Ｇ４）を生成する。
但しプルランには作用しない。pH６．５〜１２．５の範
囲で作用し、至適pHは１０〜１１である。pH７〜１１．
５の範囲で極めて安定であり、pH７．５〜１１．５にお
いても、５０％以上の活性を維持する（５０℃、１５分
処理）。２０〜７０℃の範囲で作用し、最適作用温度は
６０℃である。５５℃以下で極めて安定である。 【効果】 高アルカリ性（pH１１〜１２）において極め
て安定であり、高温においても活性を維持する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、洗浄剤配合成分と
して有用なアルカリα−アミラーゼ、これを生産する微
生物及び当該アルカリα−アミラーゼの製造法に関す
る。
して有用なアルカリα−アミラーゼ、これを生産する微
生物及び当該アルカリα−アミラーゼの製造法に関す
る。
【０００２】
【従来の技術】α−アミラーゼは、澱粉、アミロース、
アミロペクチン等の澱粉系多糖類の分子中のα−１，４
グルコシド結合のみを切断する酵素群の総称で、１８３
３年にPayenとPersozにより麦芽抽出液より初めて見出
されて以来、バチルス ズブチリス マーブーグ（Baci
llus subtilis Marburg）、バチルス ズブチリス（ナ
ットウ）（Bacillus subtilis (natto)）、バチルス
アミロリケファシエンス（Bacillus amyloliquefacien
s）、バチルス リケニフォルミス（Bacillus lichenif
ormis）、バチルス セレウス（Bacillus cereus）、バ
チルス サーキュランス（Bacillus circulans）、バチ
ルス マセランス（Bacillus macerans）、シュードモ
ナス シュツッツェリ（Pseudomonas stutzeri）、クレ
ブシェ アエロゲネス（Klebisiella aerogenes）等の
バチルス属を中心とする細菌、ストレプトマイセス グ
リセウス（Streptomyces griseus）等の放線菌、アスペ
ルギラス オリザエ（Aspergillus oryzae）等のカビ
類、イネ科及びマメ科植物の種子、ヒト及びブタ等の動
物の消化腺など多くの生物から結晶標品あるいは電気泳
動的に均一な標品として得られている。
アミロペクチン等の澱粉系多糖類の分子中のα−１，４
グルコシド結合のみを切断する酵素群の総称で、１８３
３年にPayenとPersozにより麦芽抽出液より初めて見出
されて以来、バチルス ズブチリス マーブーグ（Baci
llus subtilis Marburg）、バチルス ズブチリス（ナ
ットウ）（Bacillus subtilis (natto)）、バチルス
アミロリケファシエンス（Bacillus amyloliquefacien
s）、バチルス リケニフォルミス（Bacillus lichenif
ormis）、バチルス セレウス（Bacillus cereus）、バ
チルス サーキュランス（Bacillus circulans）、バチ
ルス マセランス（Bacillus macerans）、シュードモ
ナス シュツッツェリ（Pseudomonas stutzeri）、クレ
ブシェ アエロゲネス（Klebisiella aerogenes）等の
バチルス属を中心とする細菌、ストレプトマイセス グ
リセウス（Streptomyces griseus）等の放線菌、アスペ
ルギラス オリザエ（Aspergillus oryzae）等のカビ
類、イネ科及びマメ科植物の種子、ヒト及びブタ等の動
物の消化腺など多くの生物から結晶標品あるいは電気泳
動的に均一な標品として得られている。
【０００３】α−アミラーゼは昔から、醸造産業におい
て穀類やイモ類の液化や糖化に利用され、繊維産業にお
いて澱粉糊抜き剤として、医薬品産業において強力な消
化剤として利用され、食品産業において水飴の製造に利
用されるなど広く利用されてきた。最近、本発明者は斯
かるα−アミラーゼを枝切り酵素と共に食器洗剤及び衣
料用洗剤に配合することにより、主に澱粉汚れに対して
洗浄力が飛躍的に向上することを見出し、特許出願した
（特開平２−１３２１９１２号公報）。
て穀類やイモ類の液化や糖化に利用され、繊維産業にお
いて澱粉糊抜き剤として、医薬品産業において強力な消
化剤として利用され、食品産業において水飴の製造に利
用されるなど広く利用されてきた。最近、本発明者は斯
かるα−アミラーゼを枝切り酵素と共に食器洗剤及び衣
料用洗剤に配合することにより、主に澱粉汚れに対して
洗浄力が飛躍的に向上することを見出し、特許出願した
（特開平２−１３２１９１２号公報）。
【０００４】しかしながら、自然界において既に見出さ
れているα−アミラーゼのほとんどが、中性乃至酸性領
域において最大且つ安定な酵素活性を示す、いわゆる中
性もしくは酸性のα−アミラーゼに分類されるものであ
り、pHがアルカリ側にある界面活性剤含有液中では活性
が低下してしまうという問題点があった。これに対し、
アルカリ領域で最大活性を示すか、あるいはアルカリ耐
性をするα−アミラーゼ、いわゆるアルカリα−アミラ
ーゼ及びアルカリ耐性α−アミラーゼは、このような問
題点がなく、洗浄剤の配合成分として有効である。
れているα−アミラーゼのほとんどが、中性乃至酸性領
域において最大且つ安定な酵素活性を示す、いわゆる中
性もしくは酸性のα−アミラーゼに分類されるものであ
り、pHがアルカリ側にある界面活性剤含有液中では活性
が低下してしまうという問題点があった。これに対し、
アルカリ領域で最大活性を示すか、あるいはアルカリ耐
性をするα−アミラーゼ、いわゆるアルカリα−アミラ
ーゼ及びアルカリ耐性α−アミラーゼは、このような問
題点がなく、洗浄剤の配合成分として有効である。
【０００５】このようなアルカリα−アミラーゼ及びア
ルカリ耐性α−アミラーゼとしては、バチルスＡ−４０
−２株の生産する酵素〔Agric. Biol. Chem., 35, 1783
(1971)〕、バチルス ＮＲＲＬ Ｂ−３８８１株の生産
する酵素〔J. Bacteriol., 110, 992(1972)〕、ストレ
プトマイセス（Streptomyces）属ＫＳＭ−９の生産する
酵素（特開昭６１−２０９５８８号公報）、バチルスＨ
−１６７の生産する酵素（特開昭６２−２０８２７８号
公報）、バチルス アルカロサーモフィラス（Bacillus
alkalothermophilus）Ａ３−８株の生産する酵素（特
開平１−４９５８４号公報）及びナトロノコッカス（Na
tronococcus sp.）Ａｈ−３６株（特開平４−２１１３
６９号公報）が知られているのみである。
ルカリ耐性α−アミラーゼとしては、バチルスＡ−４０
−２株の生産する酵素〔Agric. Biol. Chem., 35, 1783
(1971)〕、バチルス ＮＲＲＬ Ｂ−３８８１株の生産
する酵素〔J. Bacteriol., 110, 992(1972)〕、ストレ
プトマイセス（Streptomyces）属ＫＳＭ−９の生産する
酵素（特開昭６１−２０９５８８号公報）、バチルスＨ
−１６７の生産する酵素（特開昭６２−２０８２７８号
公報）、バチルス アルカロサーモフィラス（Bacillus
alkalothermophilus）Ａ３−８株の生産する酵素（特
開平１−４９５８４号公報）及びナトロノコッカス（Na
tronococcus sp.）Ａｈ−３６株（特開平４−２１１３
６９号公報）が知られているのみである。
【０００６】ここでアルカリα−アミラーゼとは、至適
pHがアルカリ領域にあるものをいい、アルカリ耐性α−
アミラーゼとは、至適pHは中性から酸性領域にあるが、
アルカリ領域においても至適pHにおける活性に比較して
十分に活性を有し且つ安定性を保持するものをいう。ま
た、中性とはpH６〜８の範囲をいい、アルカリ性とはそ
れ以上の範囲をいう。
pHがアルカリ領域にあるものをいい、アルカリ耐性α−
アミラーゼとは、至適pHは中性から酸性領域にあるが、
アルカリ領域においても至適pHにおける活性に比較して
十分に活性を有し且つ安定性を保持するものをいう。ま
た、中性とはpH６〜８の範囲をいい、アルカリ性とはそ
れ以上の範囲をいう。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】一般に、食器及び衣類
の洗浄は中性から高アルカリ性の広範なpH条件下で行わ
れるため、高アルカリ性側に耐性を有し、且つ食器洗浄
機用並びに衣料洗浄用酵素としての機能を有するアルカ
リα−アミラーゼを生産する微生物を自然界から探索
し、取得することは極めて意義のあることである。
の洗浄は中性から高アルカリ性の広範なpH条件下で行わ
れるため、高アルカリ性側に耐性を有し、且つ食器洗浄
機用並びに衣料洗浄用酵素としての機能を有するアルカ
リα−アミラーゼを生産する微生物を自然界から探索
し、取得することは極めて意義のあることである。
【０００８】しかしながら、本発明者の知る限り、これ
らのアルカリ酵素のほとんどは、pH１１〜１２という高
アルカリ領域では安定性が悪く、５０℃で１５分間保温
した後はほとんど残存活性はなく、洗浄剤組成物として
使用するには適さないという問題があった。従って、pH
１１〜１２といった高アルカリに至適又は耐性を有し、
且つ洗剤成分に対して耐性を有するα−アミラーゼの開
発が望まれていた。
らのアルカリ酵素のほとんどは、pH１１〜１２という高
アルカリ領域では安定性が悪く、５０℃で１５分間保温
した後はほとんど残存活性はなく、洗浄剤組成物として
使用するには適さないという問題があった。従って、pH
１１〜１２といった高アルカリに至適又は耐性を有し、
且つ洗剤成分に対して耐性を有するα−アミラーゼの開
発が望まれていた。
【０００９】
【課題を解決するための手段】斯かる実情において、本
発明者は、高アルカリ耐性α−アミラーゼを生産する微
生物を自然界から求め、鋭意探索を続けてきたが、土壌
より採取した好アルカリ微生物が食器洗浄剤組成物並び
に衣料用洗浄剤組成物の添加成分として有効な、新規な
アルカリα−アミラーゼＳ−１を生産することを見出
し、本発明を完成した。
発明者は、高アルカリ耐性α−アミラーゼを生産する微
生物を自然界から求め、鋭意探索を続けてきたが、土壌
より採取した好アルカリ微生物が食器洗浄剤組成物並び
に衣料用洗浄剤組成物の添加成分として有効な、新規な
アルカリα−アミラーゼＳ−１を生産することを見出
し、本発明を完成した。
【００１０】すなわち、本発明は、次の酵素学的性質を
有するアルカリα−アミラーゼＳ−１、これを生産する
微生物及び当該アルカリα−アミラーゼＳ−１の製造法
を提供するものである。
有するアルカリα−アミラーゼＳ−１、これを生産する
微生物及び当該アルカリα−アミラーゼＳ−１の製造法
を提供するものである。
【００１１】１）作用 澱粉、アミロース、アミロペクチン及びそれらの部分分
解物のα−１，４グルコシド結合を分解し、アミロース
からはグルコース（Ｇ１）、マルトース（Ｇ２）、マル
トトリオース（Ｇ３）及びマルトテトラオース（Ｇ４）
を生成する。但しプルランには作用しない。 ２）作用pH及び至適pH pH６．５〜１２．５の範囲で作用し、至適pHは１０〜１
１である。 ３）pH安定性 pH７〜１１．５の範囲で極めて安定であり、pH７．５〜
１１．５においても、５０％以上の活性を維持する（５
０℃、１５分処理）。 ４）作用温度範囲及び最適温度 ２０〜７０℃の範囲で作用し、最適作用温度は６０℃で
ある。 ５）温度安定性 ５５℃以下で極めて安定である（pH９のグリシン−食塩
−水酸化ナトリウム緩衝液中、１５分間処理）。 ６）分子量 ソディウムドデシル硫酸ポリアクリルアミドゲル電気泳
動法による分子量は６０，０００±３，０００である。 ７）等電点 等電点電気泳動法により等電点は４．１付近にある。 ８）界面活性剤の影響 直鎖アルキルベンゼンスルホン酸ナトリウム、アルキル
硫酸エステルナトリウム、ポリオキシエチレンアルキル
硫酸エステルナトリウム、アルキルスルホン酸ナトリウ
ム、石鹸、ポリオキシエチレンアルキルエーテル等の界
面活性剤によってほとんど活性阻害を受けない。 ９）金属イオンの影響 Ｈｇ2+イオンによって阻害される。Ｃａ2+、Ｃｏ2+、Ｍ
ｎ2+及びＣｕ2+イオンによって活性が促進する。
解物のα−１，４グルコシド結合を分解し、アミロース
からはグルコース（Ｇ１）、マルトース（Ｇ２）、マル
トトリオース（Ｇ３）及びマルトテトラオース（Ｇ４）
を生成する。但しプルランには作用しない。 ２）作用pH及び至適pH pH６．５〜１２．５の範囲で作用し、至適pHは１０〜１
１である。 ３）pH安定性 pH７〜１１．５の範囲で極めて安定であり、pH７．５〜
１１．５においても、５０％以上の活性を維持する（５
０℃、１５分処理）。 ４）作用温度範囲及び最適温度 ２０〜７０℃の範囲で作用し、最適作用温度は６０℃で
ある。 ５）温度安定性 ５５℃以下で極めて安定である（pH９のグリシン−食塩
−水酸化ナトリウム緩衝液中、１５分間処理）。 ６）分子量 ソディウムドデシル硫酸ポリアクリルアミドゲル電気泳
動法による分子量は６０，０００±３，０００である。 ７）等電点 等電点電気泳動法により等電点は４．１付近にある。 ８）界面活性剤の影響 直鎖アルキルベンゼンスルホン酸ナトリウム、アルキル
硫酸エステルナトリウム、ポリオキシエチレンアルキル
硫酸エステルナトリウム、アルキルスルホン酸ナトリウ
ム、石鹸、ポリオキシエチレンアルキルエーテル等の界
面活性剤によってほとんど活性阻害を受けない。 ９）金属イオンの影響 Ｈｇ2+イオンによって阻害される。Ｃａ2+、Ｃｏ2+、Ｍ
ｎ2+及びＣｕ2+イオンによって活性が促進する。
【００１２】
【発明の実施の形態】本発明のアルカリα−アミラーゼ
Ｓ−１は、例えばバチルス（Bacillus）属に属するアミ
ラーゼ生産菌を培養し、その培養物から採取することに
より製造することができる。
Ｓ−１は、例えばバチルス（Bacillus）属に属するアミ
ラーゼ生産菌を培養し、その培養物から採取することに
より製造することができる。
【００１３】かかるバチルス属に属する本発明アミラー
ゼ生産菌としては、バチルス属に属し、上記の本発明ア
ミラーゼを生産する限り特に制限されないが、例えば次
の分類学的性質を示すＫＳＭ−ＳＡＡ１１１２株が挙げ
られる。
ゼ生産菌としては、バチルス属に属し、上記の本発明ア
ミラーゼを生産する限り特に制限されないが、例えば次
の分類学的性質を示すＫＳＭ−ＳＡＡ１１１２株が挙げ
られる。
【００１４】本発明のアミラーゼ生産菌の分類に用いら
れる培地を以下に示す。
れる培地を以下に示す。
【００１５】 使用培地の組成（重量％で表示） 培地１． ニュートリエントブロス ０．８ 寒天末（和光純薬社製） １．５ 培地２． ニュートリエントブロス ０．８ 培地３． ニュートリエントブロス ０．８ ゼラチン ２０．０ 寒天末（和光純薬社製） １．５ 培地４． バクトリトマスミルク １０．５ 培地５． ニュートリエントブロス ０．８ ＫＮＯ3 ０．１ 培地６． バクトペプトン ０．７ ＮａＣｌ ０．５ ブドウ糖 ０．５ 培地７． ＳＩＭ寒天培地（栄研化学社製） 指示量 培地８． ＴＳＩ寒天培地（栄研化学社製） 指示量 培地９． 酵母エキス ０．５ バクトペプトン １．５ Ｋ2ＨＰＯ4 ０．１ ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．０２ 可溶性澱粉 ２．０ 寒天末 １．５ 培地10． コーサー培地（栄研化学社製） 指示量 培地11． クリステンセン培地（栄研化学社製） 指示量 培地12．（１）酵母エキス ０．０５ Ｎａ2ＳＯ4 ０．１ ＫＨ2ＰＯ4 ０．１ ブドウ糖 １．０ （２）酵母エキス ０．０５ Ｎａ2ＳＯ4 ０．１ ＫＨ2ＰＯ4 ０．１ ブドウ糖 １．０ ＣａＣｌ2・２Ｈ2Ｏ ０．０５ ＭｎＳＯ4・４Ｈ2Ｏ ０．０１ ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．００１ ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．０２ 窒素源としては、硝酸ナトリウム、亜硝酸ナトリウム、
塩化アンモニウム及びリン酸アンモニウムをそれぞれ
０．２５％、０．２０２５％、０．１５８％、０．１９
５％となるように上記（１）及び（２）の培地に加えて
用いた。 培地13． キングＡ培地“栄研”（栄研化学社製） 指示量 培地14． キングＢ培地“栄研”（栄研化学社製） 指示量 培地15． 尿素培地“栄研”（栄研化学社製） 指示量 培地16． チトクローム・オキシダーゼ試験用濾紙（日水製薬社製） 培地17． ３％過酸化水素水 培地18． バクトペプトン ０．５ 酵母エキス ０．５ Ｋ2ＨＰＯ4 ０．１ ブドウ糖 １．０ ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．０２ 培地19． バクトペプトン ２．７ ＮａＣｌ ５．５ Ｋ2ＨＰＯ4 ０．１ ブドウ糖 １．０ ブロモチモールブルー ０．０６ 寒天末 １．５ 培地20． （ＮＨ4）2ＨＰＯ4 ０．１ ＫＣｌ ０．０２ ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．０２ 酵母エキス ０．０５ ブドウ糖 １．０ 培地21． カゼイン ０．５ 酵母エキス ０．５ ブドウ糖 １．０ Ｋ2ＨＰＯ4 ０．１ ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．０２ 寒天末 １．５
塩化アンモニウム及びリン酸アンモニウムをそれぞれ
０．２５％、０．２０２５％、０．１５８％、０．１９
５％となるように上記（１）及び（２）の培地に加えて
用いた。 培地13． キングＡ培地“栄研”（栄研化学社製） 指示量 培地14． キングＢ培地“栄研”（栄研化学社製） 指示量 培地15． 尿素培地“栄研”（栄研化学社製） 指示量 培地16． チトクローム・オキシダーゼ試験用濾紙（日水製薬社製） 培地17． ３％過酸化水素水 培地18． バクトペプトン ０．５ 酵母エキス ０．５ Ｋ2ＨＰＯ4 ０．１ ブドウ糖 １．０ ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．０２ 培地19． バクトペプトン ２．７ ＮａＣｌ ５．５ Ｋ2ＨＰＯ4 ０．１ ブドウ糖 １．０ ブロモチモールブルー ０．０６ 寒天末 １．５ 培地20． （ＮＨ4）2ＨＰＯ4 ０．１ ＫＣｌ ０．０２ ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．０２ 酵母エキス ０．０５ ブドウ糖 １．０ 培地21． カゼイン ０．５ 酵母エキス ０．５ ブドウ糖 １．０ Ｋ2ＨＰＯ4 ０．１ ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．０２ 寒天末 １．５
【００１６】ＫＳＭ−ＳＡＡ１１１２の分類学的性質を
以下に示す。
以下に示す。
【００１７】〔分類学的性質〕 （ａ）顕微鏡的観察結果：菌体は０．７〜１．２μｍ×
２．５〜８．０μｍの桿菌であり、菌体の一端に楕円形
の内生胞子（０．５〜１．０μｍ×０．８〜１．２μ
ｍ）を作る。周鞭毛を有し運動性がある。グラム染色は
陽性。抗酸性はない。 （ｂ）各種培地における生育状態： （１）肉汁寒天平板培養（培地１）；生育状態は良い。
集落の形状は円形であり、粘稠性がある。表面は粗造、
周縁は波状である。また、集落の色調は淡黄色である。 （２）肉汁寒天斜面培養（培地１）；生育する。 （３）肉汁液体培養（培地２）；生育する。 （４）肉汁ゼラチン穿刺培養（培地３）；生育状態は良
い。ゼラチンの液化が認められる。 （５）リトマスミルク培地（培地４）；変化しない。 （ｃ）生理学的性質： （１）硝酸塩の還元及び脱窒反応（培地５）；硝酸塩の
還元は陽性。脱窒反応は陰性。 （２）ＭＲテスト（培地６）；陰性。 （３）Ｖ−Ｐテスト（培地６）；陰性。 （４）インドールの生成（培地７）；陰性。 （５）硫化水素の生成（培地８）；陰性。 （６）澱粉の加水分解（培地９）；陽性。 （７）クエン酸の利用；コーサー培地（培地１０）で生
育し、陰性。クリステンセン培地（培地１１）では陽
性。 （８）無機窒素源の利用（培地１２）；硝酸塩、アンモ
ニウム塩、亜硝酸塩ともに利用する。 （９）色素の生成（培地１３、１４）；陰性。 （10）ウレアーゼ（培地１５）；陰性。 （11）オキシダーゼ（培地１６）；陽性。 （12）カタラーゼ（培地１７）；陽性。 （13）生育の範囲（培地１８）；生育の温度範囲は、１
０〜５５℃、生育最適温度範囲は３０〜４５℃である。
生育のpH範囲は、pH７．０〜１１．５、生育最適pHはpH
１０．５である。 （14）酵素に対する態度；好気的。 （15）Ｏ−Ｆテスト（培地１９）；陽性。 （16）糖の利用性（培地２０）；Ｌ−アラビノース、Ｄ
−キシロース、Ｄ−グルコース、Ｄ−マンノース、Ｄ−
フラクトース、Ｄ−ガラクトース、メリビオース、麦芽
糖、ショ糖、乳糖、トレハロース、Ｄ−ソルビット、Ｄ
−マンニット、グリセリン、澱粉、サリシン、Ｄ−リボ
ース及びデキストリンを利用する。 （17）食塩含有培地に於ける生育（培地１を改変）；食
塩濃度が５％では生育するが、７％では生育できない。 （18) カゼインの分解（培地２１）；陽性。
２．５〜８．０μｍの桿菌であり、菌体の一端に楕円形
の内生胞子（０．５〜１．０μｍ×０．８〜１．２μ
ｍ）を作る。周鞭毛を有し運動性がある。グラム染色は
陽性。抗酸性はない。 （ｂ）各種培地における生育状態： （１）肉汁寒天平板培養（培地１）；生育状態は良い。
集落の形状は円形であり、粘稠性がある。表面は粗造、
周縁は波状である。また、集落の色調は淡黄色である。 （２）肉汁寒天斜面培養（培地１）；生育する。 （３）肉汁液体培養（培地２）；生育する。 （４）肉汁ゼラチン穿刺培養（培地３）；生育状態は良
い。ゼラチンの液化が認められる。 （５）リトマスミルク培地（培地４）；変化しない。 （ｃ）生理学的性質： （１）硝酸塩の還元及び脱窒反応（培地５）；硝酸塩の
還元は陽性。脱窒反応は陰性。 （２）ＭＲテスト（培地６）；陰性。 （３）Ｖ−Ｐテスト（培地６）；陰性。 （４）インドールの生成（培地７）；陰性。 （５）硫化水素の生成（培地８）；陰性。 （６）澱粉の加水分解（培地９）；陽性。 （７）クエン酸の利用；コーサー培地（培地１０）で生
育し、陰性。クリステンセン培地（培地１１）では陽
性。 （８）無機窒素源の利用（培地１２）；硝酸塩、アンモ
ニウム塩、亜硝酸塩ともに利用する。 （９）色素の生成（培地１３、１４）；陰性。 （10）ウレアーゼ（培地１５）；陰性。 （11）オキシダーゼ（培地１６）；陽性。 （12）カタラーゼ（培地１７）；陽性。 （13）生育の範囲（培地１８）；生育の温度範囲は、１
０〜５５℃、生育最適温度範囲は３０〜４５℃である。
生育のpH範囲は、pH７．０〜１１．５、生育最適pHはpH
１０．５である。 （14）酵素に対する態度；好気的。 （15）Ｏ−Ｆテスト（培地１９）；陽性。 （16）糖の利用性（培地２０）；Ｌ−アラビノース、Ｄ
−キシロース、Ｄ−グルコース、Ｄ−マンノース、Ｄ−
フラクトース、Ｄ−ガラクトース、メリビオース、麦芽
糖、ショ糖、乳糖、トレハロース、Ｄ−ソルビット、Ｄ
−マンニット、グリセリン、澱粉、サリシン、Ｄ−リボ
ース及びデキストリンを利用する。 （17）食塩含有培地に於ける生育（培地１を改変）；食
塩濃度が５％では生育するが、７％では生育できない。 （18) カゼインの分解（培地２１）；陽性。
【００１８】以上の分類学的性質に関する検討に基づ
き、バージーズ・マニュアル・オブ・デタミネイティブ
・バクテリオロジー（Bergey's Mannual of Determinat
ive Bacteriology）第８版及びジーナス・バチルス（Th
e Genus Bacillus）を参照し、比較検討した結果、本菌
株は有胞子桿菌であるバチルス（Bacillus）属の一種で
あると認められる。しかし、本菌株は中性領域では生育
できず、専ら高アルカリ領域で良好な生育を示すことか
ら、最近、HorikoshiとAkiba（“Alkalophilic Microor
ganism”, Japan Scientific Society Press(Tokyo). 1
982年巻）の主張している、いわゆる好アルカリ性（Alk
alophilic）微生物に属し、暫定的に従来の中性で生育
するバチルス属細菌とは区別される。
き、バージーズ・マニュアル・オブ・デタミネイティブ
・バクテリオロジー（Bergey's Mannual of Determinat
ive Bacteriology）第８版及びジーナス・バチルス（Th
e Genus Bacillus）を参照し、比較検討した結果、本菌
株は有胞子桿菌であるバチルス（Bacillus）属の一種で
あると認められる。しかし、本菌株は中性領域では生育
できず、専ら高アルカリ領域で良好な生育を示すことか
ら、最近、HorikoshiとAkiba（“Alkalophilic Microor
ganism”, Japan Scientific Society Press(Tokyo). 1
982年巻）の主張している、いわゆる好アルカリ性（Alk
alophilic）微生物に属し、暫定的に従来の中性で生育
するバチルス属細菌とは区別される。
【００１９】従って、本菌株の分類学的性質は公知の好
アルカリ性バチルスのいずれとも一致しないので、これ
を新規菌株と判断してバチルス エスピー（Bacillus s
p.）ＫＳＭ−ＳＡＡ１１１２と命名し、ＦＥＲＭ Ｐ−
１５２００号として通産省工業技術院生命工学工業技術
研究所に寄託した。
アルカリ性バチルスのいずれとも一致しないので、これ
を新規菌株と判断してバチルス エスピー（Bacillus s
p.）ＫＳＭ−ＳＡＡ１１１２と命名し、ＦＥＲＭ Ｐ−
１５２００号として通産省工業技術院生命工学工業技術
研究所に寄託した。
【００２０】上記の菌株を用いて本発明のアルカリα−
アミラーゼＳ−１を得るには、培地に菌株を接種し、常
法に従って培養すればよい。
アミラーゼＳ−１を得るには、培地に菌株を接種し、常
法に従って培養すればよい。
【００２１】培養に用いる培地中には資化し得る炭素源
及び窒素源を適当量含有せしめておくことが好ましい。
この炭素源及び窒素源は特に制限されないが、例えば炭
素源としては、可溶性澱粉、不溶性澱粉、アミロペクチ
ン、グリコーゲン及びこれらの部分分解により生じた分
岐オリゴ糖に加え、資化し得る炭素源、例えばグルコー
ス、マルトース、アラビノース、キシロース、リボー
ス、マンノース、フラクトース、ガラクトース、麦芽
糖、ショ糖、乳糖、トレハロース、マンニット、ソルビ
ット、グリセリンや資化し得る有機酸、例えば酢酸など
が挙げられる。また、窒素源としては、コーングルテン
ミール、大豆粉、コーンスティープリカー、カザミノ
酸、酵母エキス、ファーマメディア、肉エキス、トリプ
トン、ソイトン、ハイプロ、アジパワー、ソイビーンミ
ール、綿実油粕、カルチベータ、アジプロン、ゼストな
どの有機窒素源及び硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウ
ム、リン酸アンモニウム、炭酸アンモニウム、硝酸ナト
リウム、酢酸アンモニウムなどの無機窒素源が挙げられ
る。更に、リン酸塩、亜鉛塩、コバルト塩、ナトリウム
塩、カリウム塩等の無機塩や、必要であれば、無機、有
機微量栄養源を培地中に適宜添加することもできる。
及び窒素源を適当量含有せしめておくことが好ましい。
この炭素源及び窒素源は特に制限されないが、例えば炭
素源としては、可溶性澱粉、不溶性澱粉、アミロペクチ
ン、グリコーゲン及びこれらの部分分解により生じた分
岐オリゴ糖に加え、資化し得る炭素源、例えばグルコー
ス、マルトース、アラビノース、キシロース、リボー
ス、マンノース、フラクトース、ガラクトース、麦芽
糖、ショ糖、乳糖、トレハロース、マンニット、ソルビ
ット、グリセリンや資化し得る有機酸、例えば酢酸など
が挙げられる。また、窒素源としては、コーングルテン
ミール、大豆粉、コーンスティープリカー、カザミノ
酸、酵母エキス、ファーマメディア、肉エキス、トリプ
トン、ソイトン、ハイプロ、アジパワー、ソイビーンミ
ール、綿実油粕、カルチベータ、アジプロン、ゼストな
どの有機窒素源及び硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウ
ム、リン酸アンモニウム、炭酸アンモニウム、硝酸ナト
リウム、酢酸アンモニウムなどの無機窒素源が挙げられ
る。更に、リン酸塩、亜鉛塩、コバルト塩、ナトリウム
塩、カリウム塩等の無機塩や、必要であれば、無機、有
機微量栄養源を培地中に適宜添加することもできる。
【００２２】培養温度は２０〜５０℃、特に３０〜４０
℃が好ましく、pHは７〜１２、特に９〜１１が好まし
く、この条件下において通常１〜３日間で培養が完了す
る。
℃が好ましく、pHは７〜１２、特に９〜１１が好まし
く、この条件下において通常１〜３日間で培養が完了す
る。
【００２３】斯くして得られた培養物中からの目的物質
であるアルカリα−アミラーゼＳ−１の採取及び精製は
一般の酵素の採取及び精製の手段に準じて行うことがで
きる。すなわち、遠心分離又は濾過等の通常の固体分離
手段により菌体を培養液から除去し、粗酵素液を得るこ
とができる。この粗酵素液は、そのまま使用することが
できるが、必要に応じて、塩析法、沈殿法、限外濾過法
などの分離手段により粗酵素を得、更に公知の方法によ
り精製結晶化することにより精製酵素として使用するこ
とも可能である。
であるアルカリα−アミラーゼＳ−１の採取及び精製は
一般の酵素の採取及び精製の手段に準じて行うことがで
きる。すなわち、遠心分離又は濾過等の通常の固体分離
手段により菌体を培養液から除去し、粗酵素液を得るこ
とができる。この粗酵素液は、そのまま使用することが
できるが、必要に応じて、塩析法、沈殿法、限外濾過法
などの分離手段により粗酵素を得、更に公知の方法によ
り精製結晶化することにより精製酵素として使用するこ
とも可能である。
【００２４】本発明のアルカリα−アミラーゼＳ−１の
精製法の一例について説明する。アルカリ性バチルス属
細菌ＫＳＭ−ＳＡＡ１１１２株を１．０％可溶性澱粉、
０．２％ トリプトン、０．１％ 酵母エキス、０．０
３％ ＫＨ2ＰＯ4、０．０２％ ＣａＣｌ2・２Ｈ2Ｏ、
０．１％（ＮＨ4）2ＳＯ4、０．００１％ ＦｅＳＯ4・
７Ｈ2Ｏ、０．０００１％ ＭｎＣｌ2・４Ｈ2Ｏ、０．
０２％ ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ及び０．５％炭酸ナトリウ
ムを含む培地で３０℃にて３日間好気的に振盪培養し、
得られる培養液から菌体を除き、上清液を得る。次いで
該上清液に１０mMトリス塩酸緩衝液（pH８．０）で平衡
化したＤＥＡＥ−セルロース粉末を加え、上清中のα−
アミラーゼを完全にＤＥＡＥ−セルロースに吸着させ
る。次いで、１０mMトリス塩酸緩衝液（pH８．０）で樹
脂を洗浄した後、１Ｍの食塩を含む１０mMトリス塩酸緩
衝液（pH８．０）で酵素を溶出する。更に、１０mMトリ
ス塩酸緩衝液（pH８．０）に対して透析、濃縮後、同緩
衝液で平衡化したＤＥＡＥ−トヨパール６５０Ｓ（トー
ソー社製）に吸着させ、１０mMトリス塩酸緩衝液（pH
８．０）を用いて０〜１Ｍの食塩の濃度勾配により溶出
する。活性画分を１０mMトリス塩酸緩衝液（pH８．０）
にて透析後、０．１Ｍ食塩を含む１０mMトリス塩酸緩衝
液（pH８．０）で平衡化したセファクリルＳ−２００カ
ラムに吸着後、同緩衝液で溶出する。斯くして得られる
精製酵素はポリアクリルアミドゲル電気泳動（ゲル濃度
１０％）及びソディウムドデシル硫酸（ＳＤＳ）電気泳
動で単一のバンドを与え、活性収率は約０．６％であっ
た。
精製法の一例について説明する。アルカリ性バチルス属
細菌ＫＳＭ−ＳＡＡ１１１２株を１．０％可溶性澱粉、
０．２％ トリプトン、０．１％ 酵母エキス、０．０
３％ ＫＨ2ＰＯ4、０．０２％ ＣａＣｌ2・２Ｈ2Ｏ、
０．１％（ＮＨ4）2ＳＯ4、０．００１％ ＦｅＳＯ4・
７Ｈ2Ｏ、０．０００１％ ＭｎＣｌ2・４Ｈ2Ｏ、０．
０２％ ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ及び０．５％炭酸ナトリウ
ムを含む培地で３０℃にて３日間好気的に振盪培養し、
得られる培養液から菌体を除き、上清液を得る。次いで
該上清液に１０mMトリス塩酸緩衝液（pH８．０）で平衡
化したＤＥＡＥ−セルロース粉末を加え、上清中のα−
アミラーゼを完全にＤＥＡＥ−セルロースに吸着させ
る。次いで、１０mMトリス塩酸緩衝液（pH８．０）で樹
脂を洗浄した後、１Ｍの食塩を含む１０mMトリス塩酸緩
衝液（pH８．０）で酵素を溶出する。更に、１０mMトリ
ス塩酸緩衝液（pH８．０）に対して透析、濃縮後、同緩
衝液で平衡化したＤＥＡＥ−トヨパール６５０Ｓ（トー
ソー社製）に吸着させ、１０mMトリス塩酸緩衝液（pH
８．０）を用いて０〜１Ｍの食塩の濃度勾配により溶出
する。活性画分を１０mMトリス塩酸緩衝液（pH８．０）
にて透析後、０．１Ｍ食塩を含む１０mMトリス塩酸緩衝
液（pH８．０）で平衡化したセファクリルＳ−２００カ
ラムに吸着後、同緩衝液で溶出する。斯くして得られる
精製酵素はポリアクリルアミドゲル電気泳動（ゲル濃度
１０％）及びソディウムドデシル硫酸（ＳＤＳ）電気泳
動で単一のバンドを与え、活性収率は約０．６％であっ
た。
【００２５】斯くして得られる本アルカリα−アミラー
ゼＳ−１の酵素学的諸性質について、以下に説明する。
尚、酵素活性の測定は次の緩衝液を用い、以下の方法に
従って行った。
ゼＳ−１の酵素学的諸性質について、以下に説明する。
尚、酵素活性の測定は次の緩衝液を用い、以下の方法に
従って行った。
【００２６】pH６〜８ トリス塩酸緩衝液 pH８〜１１ グリシン−食塩−水酸化ナトリウム緩
衝液 pH１１〜１３ 炭酸緩衝液
衝液 pH１１〜１３ 炭酸緩衝液
【００２７】〔酵素活性測定法〕各種緩衝液（４０mM）
に可溶性澱粉（反応系における最終濃度は０．５％）を
溶解させた基質溶液０．９mlに、酵素液０．１mlを加
え、５０℃で３０分間反応させた。反応後、３，５−ジ
ニトロサリチル酸（３，５−dinitorosalicylic acid(D
NS)）法にて、還元糖の定量を行った。すなわち、反応
液１．０mlにＤＮＳ試薬１．０mlを加え、５分間、１０
０℃で加熱発色させ、冷却後、４．０mlの脱イオン水を
加えて希釈し、波長５３５nmで比色定量した。酵素の力
価は、１分間に１μmol のグルコースに相当する還元糖
を生成する酵素量を１単位（Ｕ）とした。
に可溶性澱粉（反応系における最終濃度は０．５％）を
溶解させた基質溶液０．９mlに、酵素液０．１mlを加
え、５０℃で３０分間反応させた。反応後、３，５−ジ
ニトロサリチル酸（３，５−dinitorosalicylic acid(D
NS)）法にて、還元糖の定量を行った。すなわち、反応
液１．０mlにＤＮＳ試薬１．０mlを加え、５分間、１０
０℃で加熱発色させ、冷却後、４．０mlの脱イオン水を
加えて希釈し、波長５３５nmで比色定量した。酵素の力
価は、１分間に１μmol のグルコースに相当する還元糖
を生成する酵素量を１単位（Ｕ）とした。
【００２８】〔酵素化学的諸性質〕 （１）作用：澱粉、アミロース、アミロペクチン及びそ
れらの部分分解物のα−１，４グルコシド結合を分解す
る。但しプルランには作用しない。種々の基質に対する
作用を表１に示す。
れらの部分分解物のα−１，４グルコシド結合を分解す
る。但しプルランには作用しない。種々の基質に対する
作用を表１に示す。
【００２９】
【表１】
【００３０】（２）作用pH及び至適pH：pH６．５〜１
２．５の範囲で作用し、至適pHは１０．０〜１１．０で
ある（図１）。 （３）pH安定性：pH７．０〜１１．５まで極めて安定で
あり、pH７．５〜１１．５においても約５０％以上の活
性を維持する（図２）。 （４）作用温度範囲及び最適温度：２０〜７０℃の広範
囲で作用し、最適作用温度は６０℃である。 （５）温度安定性：本酵素についてpH９．０の条件で温
度を変化させ、各温度で１５分処理することにより失活
の条件を調べたところ、５５℃までは極めて安定であっ
た（図４）。 （６）分子量：ソディウムドデシル硫酸ポリアクリルア
ミドゲル電気泳動法により測定した分子量は６０，００
０±３，０００である（図５）。 （７）等電点：等電点電気泳動法により測定した等電点
は４．１付近である。
２．５の範囲で作用し、至適pHは１０．０〜１１．０で
ある（図１）。 （３）pH安定性：pH７．０〜１１．５まで極めて安定で
あり、pH７．５〜１１．５においても約５０％以上の活
性を維持する（図２）。 （４）作用温度範囲及び最適温度：２０〜７０℃の広範
囲で作用し、最適作用温度は６０℃である。 （５）温度安定性：本酵素についてpH９．０の条件で温
度を変化させ、各温度で１５分処理することにより失活
の条件を調べたところ、５５℃までは極めて安定であっ
た（図４）。 （６）分子量：ソディウムドデシル硫酸ポリアクリルア
ミドゲル電気泳動法により測定した分子量は６０，００
０±３，０００である（図５）。 （７）等電点：等電点電気泳動法により測定した等電点
は４．１付近である。
【００３１】（８）金属塩の影響：表２に示す各種金属
塩を反応系に共存させて５０℃で１５分間処理し、その
影響を調べたところ、Ｋ+、Ｎａ+、Ｃａ2+、Ｍｇ2+、Ｍ
ｎ2+、Ｂａ2+、Ｆｅ2+、Ｆｅ3+及びＡｌ3+イオンに対し
て極めて安定であった。Ｈｇ2+イオンによって阻害され
るが、Ｃａ2+、Ｃｕ2+、Ｃｏ2+及びＭｎ2+イオンによっ
て約１５〜５０％活性が促進されることが認められた。
塩を反応系に共存させて５０℃で１５分間処理し、その
影響を調べたところ、Ｋ+、Ｎａ+、Ｃａ2+、Ｍｇ2+、Ｍ
ｎ2+、Ｂａ2+、Ｆｅ2+、Ｆｅ3+及びＡｌ3+イオンに対し
て極めて安定であった。Ｈｇ2+イオンによって阻害され
るが、Ｃａ2+、Ｃｕ2+、Ｃｏ2+及びＭｎ2+イオンによっ
て約１５〜５０％活性が促進されることが認められた。
【００３２】
【表２】
【００３３】（９）界面活性剤の影響：線状アルキルベ
ンゼンスルホン酸ナトリウム、アルキル硫酸エステルナ
トリウム塩、ポリオキシエチレンアルキル硫酸エステル
ナトリウム塩、α−オレフィンスルホン酸ナトリウム、
α−スルホン化脂肪酸エステルナトリウム、アルキルス
ルホン酸ナトリウム、ＳＤＳ、石鹸及びソフタノール等
の各種界面活性剤０．０５％溶液で、５０℃、１５分処
理してもほとんど活性阻害を受けない。
ンゼンスルホン酸ナトリウム、アルキル硫酸エステルナ
トリウム塩、ポリオキシエチレンアルキル硫酸エステル
ナトリウム塩、α−オレフィンスルホン酸ナトリウム、
α−スルホン化脂肪酸エステルナトリウム、アルキルス
ルホン酸ナトリウム、ＳＤＳ、石鹸及びソフタノール等
の各種界面活性剤０．０５％溶液で、５０℃、１５分処
理してもほとんど活性阻害を受けない。
【００３４】
【発明の効果】本発明のアルカリα−アミラーゼＳ−１
は、従来のα−アミラーゼに比較して高アルカリ性（pH
１１〜１２）において極めて安定である。また、至適温
度も６０℃であり、熱安定性も５５℃まで極めて安定で
ある。更に、界面活性剤等の洗浄剤配合成分によっても
ほとんど阻害を受けない。従って、本酵素は衣料用洗
剤、食器用洗剤及び糊抜き剤等に配合することにより有
利に使用することができるものであり、工業的に極めて
大きな意義を有するものである。
は、従来のα−アミラーゼに比較して高アルカリ性（pH
１１〜１２）において極めて安定である。また、至適温
度も６０℃であり、熱安定性も５５℃まで極めて安定で
ある。更に、界面活性剤等の洗浄剤配合成分によっても
ほとんど阻害を受けない。従って、本酵素は衣料用洗
剤、食器用洗剤及び糊抜き剤等に配合することにより有
利に使用することができるものであり、工業的に極めて
大きな意義を有するものである。
【００３５】
【実施例】以下に実施例を挙げて本発明を更に説明する
が、本発明はこれらの実施例に限定されるものではな
い。
が、本発明はこれらの実施例に限定されるものではな
い。
【００３６】実施例１ 薬匙一杯の土壌（約０．５ｇ）を滅菌生理食塩水に懸濁
し、８０℃で１５分間熱処理した。この熱処理液の上清
を適当に希釈して、分離用寒天培地（培地Ａ）に塗布し
た。次いで、これを５０℃で３日間培養し、集落を形成
させた。集落の周に澱粉溶解に基づく透明帯を形成する
ものを選出し、α−アミラーゼ生産菌を取得した。更
に、取得菌を培地Ｂの液体培地に接種し、３０℃で３日
間振盪培養した。培養後、遠心分離した上清液について
α−アミラーゼ活性をpH１０にて測定し、アルカリα−
アミラーゼ生産菌をスクリーニングし、アルカリα−ア
ミラーゼＳ−１生産菌バチルス エスピーＫＳＭ−ＳＡ
Ａ１１１２（ＦＥＲＭ Ｐ−１５２００）を取得した。
し、８０℃で１５分間熱処理した。この熱処理液の上清
を適当に希釈して、分離用寒天培地（培地Ａ）に塗布し
た。次いで、これを５０℃で３日間培養し、集落を形成
させた。集落の周に澱粉溶解に基づく透明帯を形成する
ものを選出し、α−アミラーゼ生産菌を取得した。更
に、取得菌を培地Ｂの液体培地に接種し、３０℃で３日
間振盪培養した。培養後、遠心分離した上清液について
α−アミラーゼ活性をpH１０にて測定し、アルカリα−
アミラーゼ生産菌をスクリーニングし、アルカリα−ア
ミラーゼＳ−１生産菌バチルス エスピーＫＳＭ−ＳＡ
Ａ１１１２（ＦＥＲＭ Ｐ−１５２００）を取得した。
【００３７】
【表３】 培地Ａ（pH１０） （成分） （配合量） 澱粉 ０．８％ 着色澱粉 ０．２ トリプトン ０．２ 酵母エキス ０．１ ＫＨ2ＰＯ4 ０．０３ （ＮＨ4）2ＳＯ4 ０．１ ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．０２ ＣａＣｌ2・２Ｈ2Ｏ ０．０２ ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．００１ ＭｎＣｌ2・４Ｈ2Ｏ ０．０００１ 寒天 １．５ Ｎａ2ＣＯ3 ２．０ イオン交換水 バランス
【００３８】
【表４】 培地Ｂ（pH１０） （成分） （配合量） 澱粉 ０．８％ 着色澱粉 ０．２ トリプトン ０．２ 酵母エキス ０．１ ＫＨ2ＰＯ4 ０．０３ （ＮＨ4）2ＳＯ4 ０．１ ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．０２ ＣａＣｌ2・２Ｈ2Ｏ ０．０２ ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．００１ ＭｎＣｌ2・４Ｈ2Ｏ ０．０００１ Ｎａ2ＣＯ3 ２．０ イオン交換水 バランス
【００３９】実施例２ アルカリα−アミラーゼＳ−１生産菌バチルス エスピ
ーＫＳＭ−ＳＡＡ１１１２（ＦＥＲＭ Ｐ−１５２０
０）を実施例１と同様の液体培地Ｂに接種し、３０℃で
３日間振盪培養した。培養後、菌体を遠心分離して除
き、粗α−アミラーゼ酵素液とした。更に、通常の方法
に従って、エタノール乾燥粉末とし、表５に示す粗酵素
標品を得た。
ーＫＳＭ−ＳＡＡ１１１２（ＦＥＲＭ Ｐ−１５２０
０）を実施例１と同様の液体培地Ｂに接種し、３０℃で
３日間振盪培養した。培養後、菌体を遠心分離して除
き、粗α−アミラーゼ酵素液とした。更に、通常の方法
に従って、エタノール乾燥粉末とし、表５に示す粗酵素
標品を得た。
【００４０】
【表５】
【００４１】実施例３ 実施例１と同様の液体培地Ｂにおいて、アルカリα−ア
ミラーゼＳ−１生産菌バチルス エスピーＫＳＭ−ＳＡ
Ａ１１１２（ＦＥＲＭ Ｐ−１５２００）を接種し、３
０℃で２〜３日間振盪培養した。遠心分離上清について
α−アミラーゼ活性を測定した結果、培養液１Ｌ当た
り、４５９Ｕの活性を有していた。
ミラーゼＳ−１生産菌バチルス エスピーＫＳＭ−ＳＡ
Ａ１１１２（ＦＥＲＭ Ｐ−１５２００）を接種し、３
０℃で２〜３日間振盪培養した。遠心分離上清について
α−アミラーゼ活性を測定した結果、培養液１Ｌ当た
り、４５９Ｕの活性を有していた。
【００４２】実施例４ 実施例２で得られた粗酵素液について、（１）ＤＥＡＥ
セルロース吸着、（２）ＤＥＡＥトヨパール（トーソー
社製）クロマトグラフィー、（３）セファクリル（ファ
ルマシア社製）クロマトグラフィーをすることによって
精製を行い、アルカリα−アミラーゼＳ−１を得た。得
られたアルカリα−アミラーゼＳ−１についてデービス
（Davis D. J. ANN. N. Y. Acad. Sci., 121, 404(196
4)）の方法に従ってポリアクリルアミド電気泳動を行っ
た結果、単一のバンドを与えることを確認した（図
５）。
セルロース吸着、（２）ＤＥＡＥトヨパール（トーソー
社製）クロマトグラフィー、（３）セファクリル（ファ
ルマシア社製）クロマトグラフィーをすることによって
精製を行い、アルカリα−アミラーゼＳ−１を得た。得
られたアルカリα−アミラーゼＳ−１についてデービス
（Davis D. J. ANN. N. Y. Acad. Sci., 121, 404(196
4)）の方法に従ってポリアクリルアミド電気泳動を行っ
た結果、単一のバンドを与えることを確認した（図
５）。
【００４３】実施例５ 実施例４で得られたアルカリα−アミラーゼＳ−１につ
いて、常法に従いポリアクリルアミドＳＤＳ電気泳動を
行った（図６）。この結果から、本酵素の分子量は６
０，０００±３，０００であった。
いて、常法に従いポリアクリルアミドＳＤＳ電気泳動を
行った（図６）。この結果から、本酵素の分子量は６
０，０００±３，０００であった。
【図１】本発明のアルカリα−アミラーゼＳ−１の反応
pHと相対活性との関係を示す図である。
pHと相対活性との関係を示す図である。
【図２】本発明のアルカリα−アミラーゼＳ−１の処理
pHと残存活性との関係を示す図である。
pHと残存活性との関係を示す図である。
【図３】本発明のアルカリα−アミラーゼＳ−１の反応
温度と相対活性との関係を示す図である。
温度と相対活性との関係を示す図である。
【図４】本発明のアルカリα−アミラーゼＳ−１の処理
温度と残存活性との関係を示す図である。
温度と残存活性との関係を示す図である。
【図５】本発明のアルカリα−アミラーゼＳ−１のポリ
アクリルアミド電気泳動の結果を示す図である。
アクリルアミド電気泳動の結果を示す図である。
【図６】本発明のアルカリα−アミラーゼＳ−１のＳＤ
Ｓポリアクリルアミド電気泳動の結果を示す図である。
Ｓポリアクリルアミド電気泳動の結果を示す図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:07） (72)発明者 荒 勝俊 茨城県鹿島郡神栖町東深芝20 花王株式会 社研究所内 (72)発明者 川合 修次 栃木県芳賀郡市貝町赤羽2606 花王株式会 社研究所内 (72)発明者 伊藤 進 栃木県芳賀郡市貝町赤羽2606 花王株式会 社研究所内
Claims (4)
- 【請求項１】 次の酵素学的性質を有するアルカリα−
アミラーゼＳ−１。 １）作用 澱粉、アミロース、アミロペクチン及びそれらの部分分
解物のα−１，４グルコシド結合を分解し、アミロース
からはグルコース（Ｇ１）、マルトース（Ｇ２）、マル
トトリオース（Ｇ３）及びマルトテトラオース（Ｇ４）
を生成する。但しプルランには作用しない。 ２）作用pH及び至適pH pH６．５〜１２．５の範囲で作用し、至適pHは１０〜１
１である。 ３）pH安定性 pH７〜１１．５の範囲で極めて安定であり、pH７．５〜
１１．５においても、５０％以上の活性を維持する（５
０℃、１５分処理）。 ４）作用温度範囲及び最適温度 ２０〜７０℃の範囲で作用し、最適作用温度は６０℃で
ある。 ５）温度安定性 ５５℃以下で極めて安定である（pH９のグリシン−食塩
−水酸化ナトリウム緩衝液中、１５分間処理）。 ６）分子量 ソディウムドデシル硫酸ポリアクリルアミドゲル電気泳
動法による分子量は６０，０００±３，０００である。 ７）等電点 等電点電気泳動法により等電点は４．１付近にある。 ８）界面活性剤の影響 直鎖アルキルベンゼンスルホン酸ナトリウム、アルキル
硫酸エステルナトリウム、ポリオキシエチレンアルキル
硫酸エステルナトリウム、アルキルスルホン酸ナトリウ
ム、石鹸、ポリオキシエチレンアルキルエーテル等の界
面活性剤によってほとんど活性阻害を受けない。 ９）金属イオンの影響 Ｈｇ2+イオンによって阻害される。Ｃａ2+、Ｃｏ2+、Ｍ
ｎ2+及びＣｕ2+イオンによって活性が促進する。 - 【請求項２】 バチルス属に属し、請求項１記載のアル
カリα−アミラーゼＳ−１を生産する微生物。 - 【請求項３】 バチルス エスピー（Bacillus sp.）Ｋ
ＳＭ−ＳＡＡ１１１２と命名され、ＦＥＲＭ Ｐ−１５
２００号として寄託された請求項２記載の微生物。 - 【請求項４】 請求項２又は３記載の微生物を培養し、
その培養物からアルカリα−アミラーゼＳ−１を採取す
ることを特徴とする請求項１記載のアルカリα−アミラ
ーゼＳ−１の製造法。
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-
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