JPH08504799A - インターフェロンを含有する治療用組合せ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 この発明は、治療用の組合せ、より詳しくはヒトインターフェロンの使用を包含する組合せ治療に関する。この治療には、ヒトインターフェロンとフリーラジカルスカベンジヤーまたはそれらの前駆体もしくは誘発物質との組合せを用いる、ヒトインターフェロンを用いる治療に敏感な症状の治療が含まれる。

Description

【発明の詳細な説明】 インターフェロンを含有する治療用組合せ この発明は治療用の組合せ、特にはヒトインターフェロンの使用を包含する組 合せ治療に関する。 ウイルス感染に対する動物の最初の、かつ局所的な応答は、リンホカイン、イ ンターフェロンを産生することである。インターフェロンは、最初は単一の分子 であると考えられていたが、現在では蛋白質の巨大な集合であると認識されてお り、進化の面では古く、動物界に広く分布している。限られた交差反応性が多少 あるものの、インターフェロンは通常種特異的である。当初白血球、線維芽細胞 および免疫インターフェロンとして知られ、現在はそれぞれインターフェロンα 、βおよびγと呼ばれる３つの型のインターフェロンの特徴付けがなされている 。 ヒトインターフェロンは多くの異なるタイプの細胞によって産生され、このタ イプのインターフェロンは、ＨＰＬＣによって、各々異なる遺伝子によってコー ドされる30を越えるザブタイプに分解されている。ヒトインターフェロン−βは 、一般に、単一の物質で線維芽細胞によって産生されていると考えられている。 ヒトインターフェロン−γもまた、抗原に晒される際のＴ−リンパ球のヘルパー 誘発サブセットにより、またはヒト白血球、Ｔ−リンパ球、もしくはＴ−リンパ 芽球様細胞をマイトジェンに晒すことにより産生される単一の物質である。 ヒトインターフェロン−αは、ナマルワ［Namalwa］ヒト リンパ芽球様細胞株をセンダイウイルス［Sendai virus］で刺激してインターフ ェロン−αの少なくとも21種類のサブタイプの天然混合物を産生させ、次いで、 クロマトグラフィーによって純度約95％、約100ｘ1O⁶ＩＵ／ｍｇ蛋白の特異活性 まで精製することにより、商業的な規模で製造される。ヒトインターフェロンα −ＮＩと同定されるこの生成物は、ＷＥＬＬＦＥＲＯＮ（ウェルカム・ファンデ ーション・リミテッド［We11come Foundation Limited］の登録商標）の名の下 に市販されている。天然ヒトインターフェロン−βは、通常新生児組織に由来す る、二倍体線維芽細胞から誘導され、その産生は、例えば、合成二重鎖ＲＮＡを 加えることにより誘発される。ヒトインターフェロン−γは、スタフィロコッカ ス・エンテロトキシンＡ［Staphylococcus enterotoxin A]のようなマイトジェ ンをインデューザとして用いて、バフィコートから作製することができる。 ヒトインターフェロン−α、−βおよび−γはまた組換えＤＮＡ技術を用いて 産生させることもできるが、細菌細胞中で関連遺伝子の発現によって産生される 場合には、組換えインターフェロンは天然分子と同じ三次構造を有してはいない 可能性がある。同様に、細菌細胞内で産生されたインターフェロンはグリコシル 化されていないが、これはイン・ビトロでの試験ではこの分子の生物学的活性に 影響を与えるようには見えず、代わりにコンホメーションおよび抗原性に影響を 与え、かつ体内での分布に影響を与える可能性がある。この組換えヒトインター フェロンは、天然ヒトインターフェロンと、 好ましくは、90％を越えるアミノ酸相同性を、より好ましくは95％の相同性を、 さらに好ましくは97％の相同性を、さらに好ましくは98％の相同性を、さらに好 ましくは99％の相同性を、最も好ましくは100％の相同性を有している。組換え ヒトインターフェロンは市販されており、インターフェロンα−２ａ（ＲＯＦＥ ＲＯＮ−ロッシュ［Roche］）およびインターフェロンγ−２ａ（ＩＮＴＲＯＮ −シェリング［Schering］）がその例である。これらの分子は、23位の一つのア ミノ酸残基で異なる（ＲＯＦＥＲＯＮにおいてはリジン、ＩＮＴＲＯＮにおいて はアルギニン）。 ヒトインターフェロンは肝炎の治療に数年間用いられている。1970年代中期に おける最初の試行では、献血液からの血漿の生成の後に残されたバフィコート細 胞から産生されたヒト白血球インターフェロンが用いられが、これでは必然的に 利用可能な量が限られていた。1980年代初期、製造技術の進歩により、慢性Ｂ型 肝炎の治療に天然および組換え両ヒトインターフェロン−αが使用されるように なった。多くの場合、この治療は成功であるとみなすことができるが、ヒトイン ターフェロン−α単独での治療に対する応答率は、ウイルスマーカーの持続的な 減少で判断すると、一般に50％未満であると考えられる。ひとインターフェロン −βおよび−δもまた慢性Ｂ型肝炎における使用について調査されたが、いまだ 確立された治療にはなっていない。 ３種類のタイプの全てのインターフェロンはまた、インターフェロン−βの低 い能力がこの型のインターフェロンでの 作用を制限しているにもかかわらず、慢性Ｃ型肝炎の治療において調査されてい る。上で言及されるα−インターフェロン（インターフェロンα−２ａ、インタ ーフェロンα−２ｂおよびリンパ芽様インターフェロン）を用いて非常に広範な 試行が行なわれており、結果は患者の約40％に完全な応答が起こるという励みに なるものである。しかしながら、治療の６ヶ月後に約50％の再発率が観察され、 その結果、長期的に利益を受けるのは20ないし25％の患者のみであろう。 肝炎の治療におけるインターフェロンの使用を完全に見直すためには、Eddles tonおよびDixonによる“肝臓の慢性ウイルス感染の治療におけるインターフェロ ン［Interferons in the Treatment of Chronic Virus Infection of the Liver ］”(Pennine Press，1990)という書籍を参照することができる。 加えて、インターフェロンは、肝炎以外のウイルス性疾患、自己免疫を含む免 疫系に関る不調、並びに直腸ガン、乳ガン、大腸ガン、カポジ肉腫、グリオーム および悪性の血液病学的状態を含む様々な種類のガンを包含する他の多くの状態 の治療に用いることが提唱されている。 慢性のウイルス感染が感染臓器において酸化的なストレス［oxidative stress ］を引き起こすことを示唆する幾つかの証拠が、特にＨＩＶにおいて、存在する 。ウイルスによる酸化的ストレスの誘発は、免疫複合体による貪食細胞の活性化 、前炎症性［proinflammatory］サイトカイン（ＴＮＦα、ＩＬ6）によるフリー ラジカル形成およびウイルス表面糖タ ンパクと細胞膜との直接相互作用による反応性酸素種の生成を含む様々な機構に よるものであり得る。 細胞もしくは臓器全体のレベルで、フリーラジカルスカベンジャーとして作用 する多くの物質が知られている。例えば、還元されたグルタチオンは、フリーラ ジカルに対する解毒反応を含む様々な代謝機能に関連している哺乳動物細胞のほ とんどに広く分布して存在する非蛋白チオールである。グルタチオンは酸化的ス トレスに対する主たる細胞内防御機構であり、フリーラジカル形成を増加させる 因子は結果として細胞内グルタチオンの蓄積の消耗を招く。グルタチオンはまた 、リンパ球の活性および増殖、Ｔ細胞の細胞毒性並びにマクロファージーリンパ 球相互作用の調節において重要な免疫調節の役割を果たす。 Ｎ-アセチルシステインは、粘液溶解性の角膜外傷治療剤、およびアセトアミ ノフェン中毒に対する解毒剤として、長年知られている。この化合物は、比較的 穏やかな還元効果を有しており、ムコ蛋白質のジスルフィド結合を開裂すること により粘液溶解性として作用するものと考えられている。幾つかの慢性のウイル ス性疾患、特にＨＩＶ感染において、還元されたグルタチオンのレベルが低下し うるという報告が多くなされている。Ｎ-アセチルシステインはグルタチオンの 前駆体、したがって誘発物質であり、ＨＩＶ感染の場合に用いられる治療薬とし て提唱されている。 ＥＰ-Ａ-0 268 017（シータス［Cetus］）は、リンホカインもしくはサイトト キシンとフリーラジカル生成によって引 き起こされる哺乳動物ホストに対する生物学的損傷を治療するためのフリーラジ カルスカベンジャーもしくは代謝阻害剤との組合せに関する。この明細書は、お まけでリンホカインとしてのインターフェロンに言及し、生物学的損傷の可能性 のある原因として感染を論じているが、本質的にはガンの治療の間に生成しうる フリーラジカルに関するものである。この明細書に掲載される生物学的データは 全てガンに関するものであり、主にネズミ線維肉腫におけるＴＮＦαの投与に関 するものである。 この発明は、ヒトインターフェロンを用いる治療への、フリーラジカルスカベ ンジャーまたはそれらの前駆体もしくは誘発物質の補助剤としての使用に関する 。 したがって一面によると、この発明は、インターフェロンを用いる治療に敏感 な疾患に罹患した患者の治療方法であって、この患者に有効量のヒトインターフ ェロンを投与することを包含し、かつヒトインターフェロン投与の全てもしくは 一部の期間にフリーラジカルスカベンジャーまたはそれらの前駆体もしくは誘発 物質をも投与する方法を提供する。 他の面によると、この発明は、ヒトインターフェロン投与の全てもしくは一部 の期間にフリーラジカルスカベンジャーまたはそれらの前駆体もしくは誘発物質 をも投与する方法による、インターフェロンを用いる治療に敏感な疾患の治療に 用いられる医薬の製造へのヒトインターフェロンの使用が提供される。 さらなる面によると、この発明は、ヒトインターフェロン の投与を包含し、ヒトインターフェロン投与の全てもしくは一部の期間にフリー ラジカルスカベンジャーまたはそれらの前駆体もしくは誘発物質をも投与する方 法による、インターフェロンを用いる治療に敏感な疾患の治療のための医薬の製 造へのフリーラジカルスカベンジャーまたはそれらの前駆体もしくは誘発物質の 使用を提供する。 インターフェロンを用いる治療に敏感な疾患は、ヒトインターフェロンが有効 な治療であるとして確立されつつあり、もしくは提唱されているいかなる疾患で あってもよい。この疾患には、ウイルス性肝炎、ヒトパピローマウイルス、サイ トメガロウイルスおよびＨＩＶによって引き起こされる疾患のようなウイルス感 染、結核のような非ウイルス感染、並びに喘息のような疾患が含まれる。 この発明は、特に、肝炎の治療におけるヒトインターフェロンの使用に適用す ることができる。既に示されているように、そのような治療が多くの場合多大な 利益をもたらすものであるとしても、応答率は比較的低く、Ｃ型肝炎の場合には かなりの率で再発する。したがって、ヒトインターフェロンを用いる肝炎の治療 において、これらの問題を解消するための改良が大変必要とされている。 この発明と共に用いられるヒトインターフェロンの例には、前述のものが含ま れる。 他の面によると、この発明は、ヒトインターフェロンを投与することによるウ イルス性肝炎感染の治療方法であって、ヒトインターフェロン投与の全てもしく は一部の期間にフリ ーラジカルスカベンジャーまたはそれらの前駆体もしくは誘発物質をも投与する 方法を提供する。 さらなる面によると、この発明は、ヒトインターフェロン投与の全てもしくは 一部の期間にフリーラジカルスカベンジャーまたはそれらの前駆体もしくは誘発 物質をも投与する方法による、ウイルス性肝炎感染の治療に用いられる医薬の製 造へのヒトインターフェロンの使用が提供される。 さらに別の面によると、この発明は、ヒトインターフェロンの投与を包含し、 ヒトインターフェロン投与の全てもしくは一部の期間にフリーラジカルスカベン ジャーまたはそれらの前駆体もしくは誘発物質をも投与する方法による、ウイル ス性肝炎感染の治療のための医薬の製造へのフリーラジカルスカベンジャーまた はそれらの前駆体もしくは誘発物質の使用を提供する。 さらなる面によると、この発明は、インターフェロンを用いる治療に敏感な疾 患の治療に用いられる、ヒトインターフェロンとフリーラジカルスカベンジャー またはそれらの前駆体もしくは誘発物質との、相乗作用的組み合わせ［synergis tic combination］としても知られる増強された組合せ［potentiated combinati on］を提供する。この発明の増強された組合せの活性成分は、同時に投与しても 、あるいは別々の製剤として連続的に投与しても、あるいは単一の組合せ製剤と して投与してもよい。連続的に投与する場合には、第２の活性成分の投与の遅れ は、活性成分の組合せの増強された治療効果の利益を失うようなものであるべき ではな い。この発明は、すべての形態のウイルス性肝炎、すなわち、現在、それぞれＡ 、Ｂ、Ｃ、ＤおよびＥ型肝炎と名付けられて認識されている５つのタイプの治療 に適用することができる。 Ａ型肝炎は、糞−口経路によって伝染し、40日未満の潜伏期を伴う急性ウイル ス感染である。このウイルスは、ピコルナウイルス［picornavirus］科の一員で あり、27ｎｍのエンベロープで覆われていない球状粒子である。このウイルスの ゲノムは配列決定がなされており、約7480塩基を有する一本鎖ＲＮＡを含む。 Ｂ型肝炎は、全世界で20億を越えると見積られるキャリアを擁する、普遍的か つ重篤なウイルス性疾患である。これが血清肝炎として知られていたとき、この 疾患は、輸血、ヒト血漿画分の注射または針が未消毒のシリンジの使用の２ない し３ヶ月後の症状の出現に基づいて診断した。Ｂ型肝炎の血清マーカーを認識す ることにより、ウイルスの伝染における皮膚浸透および、特に、血液の重要性が 確証された。疾患の急性期に続いて、成人患者の多くはおよそ数週間以内に自然 に回復するが、一部は多くの月日の後もウイルスが除去されず、慢性のキャリア に移行する。Ｂ型肝炎ウイルスはヘパドナウイルス［hepadna virus］科に属し ており、そのゲノムはＤＮＡの小さく、不完全な二重鎖環状片からなっている。 このゲノムは、そのＤＮＡをＲＮＡに複製し、次いで逆転写酵素を用いてＲＮＡ をＤＮＡに再複製することにより増殖する。 非Ａ非Ｂ型肝炎は、ますます重大となる国際的な健康問題として認識されつつ あろ。慢性の輸血後非Ａ非Ｂ肝炎の症例の少なくとも80％は、現在Ｃ型肝炎とし て同定されているウイルスによるものであることが示されており、このウイルス は、恐らく、血液製剤をＢ型肝炎についてスクリーニングしている臨床環境にお ける輸血後肝炎の事実上全ての症例の原因である。急性Ｃ型肝炎感染のおよそ半 数は数ケ月にわたる期間で自然治癒するが、残りは慢性となり、全てではないと してもその多くの場合は、硬変および肝細胞カルシノーマの可能性を伴う活動性 慢性肝炎が引き続き起こる。Ｃ型肝炎ウイルスゲノムの構造は近年明らかになっ ており、フラビウイルス［flavivirus］との類似性を有する一本鎖ＲＮＡウイル スとして特徴付けられている。 Ｄ型肝炎ウイルスは、Ｂ型肝炎の特定の患者において新規抗原が同定されたこ とに続いて、1977年に最初に認められた。このウイルスは、増殖のためにＢ型肝 炎（もしくは密接に関連するヘパドナウイルス）をヘルパーウイルスとして必要 とする。その増殖が、血清中においてヘルパーウイルスよりも高い力価に到達す ることができるほど十分に能率的であるにも拘わらずである。Ｄ型肝炎ゲノムは 、共有結合的に接近した環状ＲＮＡからなり、植物中に見出される特定の環状ウ イロイドまたはウイルス様因子との幾らかの構造類似性を有している。Ｄ型肝炎 感染は攻撃性の肝疾患と関連付けられ、持続的な慢性肝炎を有する患者よりも重 篤な疾患（活動性慢性肝炎または硬変）を有する患者にしばしば見出される。 Ｅ型肝炎はＡ型肝炎を引き起こすウイルスに関連し（Reyes et al.，Science 247，1335-1339 (1990)）、慢性期がない急性型の肝炎を生じる。このウイルス は腸、水系感染、通常は糞／口経路によって伝染する。これは特にインド亜大陸 で蔓延しており、妊婦の高い致死率を産み出している。 この発明はまた、非生殖性のいぼ、若年性喉頭パピローマ、尖圭コンジローム に応答し得る因子であり、頚部ガンに関連するヒトパピローマウイルスの治療に 適用することができる。この発明はまた、ヒトサイトメガロウイルスおよびＨＩ Ｖによって引き起こされるもののような他のウイルス感染の治療に適用すること もできる。この発明はまた、結核のような非ウイルス感染および喘息のような症 状の治療に用いることもできる。 この発明に従って用いられるヒトインターフェロンは、上で言及される３つの タイプ、すなわち、インターフェロン−α、インターフェロン−βまたはインタ ーフェロン−γのいずれであってもよい。一般に、ヒトインターフェロンは、イ ンターフェロン−αもしくはインターフェロン−γである。 好ましくは、ヒトインターフェロンはヒトインターフェロン−αであり、より好 ましくは、培養液中のヒト細胞株に由来するヒトインタフェロン−αまたは組換 えヒトインターフェロン−αである。好ましい態様の一つによると、ヒトインタ ーフェロンは組換えインターフェロンα-２ａまたはインターフェロンα-２ｂ、 例えばロフェロン［ROFERON］およびイントロンの商品名で市販されている製品 の一つである。他の特 に好ましい態様によると、ヒトインターフェロンはヒトリンパ芽球様インターフ ェロン（インターフェロンαＮ１）、例えばウェルフェロン［WELLFERON］の商 品名でザ・ウェルカム・ファウンデーション・リミテッドによって市販されてい る製品である。 「ヒトインターフェロン」という用語は、その配列がヒト由来で決定された野 生型インターフェロン、および対応する野生型配列の活性を実質的に保持し、対 応する野生型配列と80％を越える配列相同性を有するそれらの対立形質、変種ま たは変異体をも含むことを意図している。 ヒトインターフェロンは、問題となる症状、例えば肝炎、の治療に単独で用い られる場合と同様にして、この発明のよる投与のために処方することができる。 したがって、このインターフェロンは一般に、非経口的に、例えば注射により、 好ましくは皮下注射により投与される。このインターフェロンは、好ましくは、 水性調製品または、注射用に適当な担体、例えば水、で戻すことを目的とする凍 結乾燥製品として処方される。この処方はまた、適当な担体、希釈剤または安定 化剤、例えば、ヒト血清アルブミンのような他のヒト蛋白質を含んでいてもよい 。 ヒトインターフェロンは、一般に、問題となる製品について確立されている治 療プロトコルに従って投与される。例えば、ヒトインターフェロンは、リンパ芽 球様であろうと組換体であろうと、１日当りインターフェロン１ないし10メガユ ニットの投与量で投与することができる。この投与量は、１週当 り３日以上、好ましくは１週当り３回投与することができる。 好ましい投与量範囲は、１週当り３日以上、好ましくは１週当り３回、１日当り インターフェロン２ないし６メガユニットであり、インターフェロンの特定の投 与量は、１週当り３日以上、好ましくは１週当り３回、１日当り５メガユニット 、最も好ましくは３メガユニットである。肝炎の治療においては、インターフェ ロン投与の期間は通常数週間、例えば12ないし30週間、特には約24週間であるが 、幾らかの場合には１年以上までのより長い期間の治療を割り当てることもでき る。 ここで用いられる場合には、「フリーラジカルスカベンジャーまたはそれらの 前駆体もしくは誘発物質」という用語は、ホストへの投与の際に、ホスト体内の フリーラジカル（酸化的ストレスとも呼ばれる）のレベルを減少させることが可 能な物質を意味する。この物質は、フリーラジカルを直接除去することにより、 あるいは、ホスト生体内にフリーラジカルに対する除去効果を有する物質の生成 を、直接の生物学的前駆体として、もしくは他の方法で誘発することにより、フ リーラジカルのレベルの減少をもたらすことができる。あるいは、この物質は、 フリーラジカルの生成を導くプロセスにおいて阻害効果を及ぼすことにより、フ リーラジカルのレベルを減少させてもよい。 好ましいフリーラジカルスカベンジャーまたはそれらの前駆体もしくは誘発物 質には、グルタチオンおよび、天然アミノ酸であるシステインの誘導体のような それらの前駆体が含まれる。グルタチオンの特に好ましい前駆体の一つがＮ-ア セチルシステインである。上に示されるように、Ｎ-アセチルシステインは既に 粘液溶解性という確立された医薬用途を有しており、この化合物の医薬調製品を 購入することができる。他のフリーラジカルスカベンジャーまたはそれらの前駆 体もしくは誘発物質には、ビタミンＡ、ビタミンＣ（アスコルビン酸）、ビタミ ンＥ、尿酸、ブチオニンスルホキシム、ジエチルマレエートメトロニダゾール、 スーパーオキサイドディスムターゼおよびメチオニンが含まれる。フリーラジカ ルの生成を阻害する物質には、アロブリノールのようなキサンチンオキシダーゼ の阻害剤が含まれる。 フリーラジカルスカベンジャーまたはそれらの前駆体もしくは誘発物質は、ホ スト生体にないにおいて、フリーラジカルの生成を減少させ、および／またはフ リーラジカル生成（酸化的ストレス）の効果を軽減することができるような形態 および投与量で投与されるべきである。投与は、その物質の性質により、都合の よい経路、例えば、経口もしくは非経口により行なうことができる。可能な場合 には、経口投与が好ましい。 Ｎ-アセチルシステインは、錠剤または顆粒の形態で、あるいは液状調製品、 例えばシロップとして、経口投与のために処方されることが好ましい。Ｎ-アセ チルシステインの適切な投与量は、１日当り４回まで投与される投与量当り200 ｍｇないし４ｇの範囲、例えば、１日当り４回の投与で400ないし8OOｍｇ、好ま しくは１日当り４回の投与で600ｍｇである。 この発明に従って提供される、例えばウイルス性肝炎に対 する治療は、ヒトインターフェロンとフリーラジカルスカベンジャーまたはそれ らの前駆体もしくは誘発物質とを組合せた投与からなるが、２種類の医薬は一般 に別々の調製品として投与される。しかしながら、特定の状況においては、２種 類の成分を組合せた調製品として投与することに利益があり、この発明はそのよ うな組合せた調製品をも包含する。 したがって、さらなる面によると、この発明は、ヒトインターフェロンをフリ ーラジカルスカベンジャーまたはそれらの前駆体もしくは誘発物質と一緒に含む 医薬組成物を提供する。 一般に、このような組合せ調製品は、非経口投与、例えば注射を意図する形態 にある。このような組合せ調製品は、液状形態または、凍結乾燥されたヒトイン ターフェロンを含み、液体形態に戻すのに適した固体形態で提供することができ る。 ２種類の医薬を別々の投与に適した形態で一緒に提供することもまた適当であ る。他の面によると、この発明は、ヒトインターフェロンとフリーラジカルスカ ベンジャーまたはそれらの前駆体もしくは誘発物質とを、別々に投与するための 関連付けにおいて包含する一対のパックを提供する。 この発明は、Ｂ型肝炎またはＣ型肝炎の治療に特に適用可能である。上に示さ れるように、ヒトインターフェロン、特に組換えもしくはリンパ芽球様インター フェロン−αの投与は、既にＢ型肝炎の確立された治療である。加えて、多くの 試行が、同様の治療がＣ型肝炎の治療においてもかなり有益であることを示して いる。この発明によると、インターフェ ロンを用いる肝炎、特にＢ型肝炎もしくはＣ型肝炎に罹患した患者の治療が、本 質的には確立されたプロトコルに従い、これにヒトインターフェロンを用いる治 療の期間の全てもしくは一部の期間でのフリーラジカルスカベンジャーまたはそ れらの前駆体もしくは誘発物質を用いる治療を加えて、行なわれる。 血清アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）レベルは、肝機能障害の高 感度マーカーである。Ｂ型肝炎およびＣ型肝炎感染は、両者共、ＡＬＴレベルの 上昇で特徴付けられ、疾患の進行は一般に血清ＡＬＴの測定によって監視される 。上に示されるように、Ｂ型肝炎またはＣ型肝炎を患う患者の約50％もしくはそ れ以下のみが、ウイルスマーカーの有意の除去またはＡＬＴレベルの低下によっ て示されるとおり、ヒトインターフェロン−αを用いる治療に応答する。 Ｂ型肝炎またはＣ型肝炎に特に適用可能であり、Ｃ型肝炎に最も適用可能なこ の発明の一態様によると、ヒトインターフェロン、特にはヒトインターフェロン −αを用いる治療が、数週間、例えば12ないし30週間、特には24週間の期間にわ たる通常の方法で行なわれる。血清ＡＬＴレベルの有意の減少によって示される 、このヒトインターフェロンを用いる治療の初期過程に応答することができなか った患者には、ヒトインターフェロンを用い、さらにフリーラジカルスカベンジ ャーまたはそれらの前駆体もしくは誘発物質、好ましくはグルタチオンまたはそ れらの前駆体もしくは誘発物質、最も好ましくはＮ-アセチルシステインを用い る治療を加えて、治療 が継続される。ヒトインターフェロンおよびフリーラジカルスカベンジャーまた はそれらの前駆体もしくは誘発物質を用いる治療は、さらに数週間、例えば12な いし30週間、特には約24週間継続することができる。この発明の好ましい態様に よると、この治療プロトコルは、ヒトリンパ芽球様インターフェロン（ヒトイン ターフェロンα-Ｎ１）を川いるＣ型肝炎の治療に適用される。 同様に上に示されるように、Ｂ型肝炎またはＣ型肝炎を患う特定の患者は、ヒ トインターフェロン、特にはヒトインターフェロン−αを用いる治療に最初は応 答するが、続いて再発してしまうことがある。このような患者もまた、上に概説 される、ヒトインターフェロンとフリーラジカルスカベンジャーまたはそれらの 前駆体もしくは誘発物質とを用いる治療の組合せ過程から利益を受ける。 ヒトインターフェロンおよびフリーラジカルスカベンジャーまたはそれらの前 駆体もしくは誘発物質の投与量が、患者並びに患者が被っている正確な状態によ って変化することは理解されるべきである。最後に、この治療は付添い医師の制 御の下「で、付添い医師の責任において行なわれる。 この発明を以下の予備研究によってさらに説明するが、これらは、いかなる意 味においても、この発明の範囲を限定するものとみなされるべきではない。実施例 １．導入 Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）は、輸血後および散発性非Ａ 非Ｂ型肝炎のほとんどの場合の原因である。感染の慢性化はごく当り前のことで あり、慢性肝炎、硬変および、最終的には、悪性の変性となる。幾つかの制御さ れた研究により、α−インターフェロン（ＩＦＮ）が慢性Ｃ型肝炎（ＣＨＣ）の 治療に有用であるものの、平均応答率が50％であり、ＩＦＮ停止後の再発頻度が 30−40％に達することが示されている。したがって、ＩＦＮ停止後も正常なトラ ンスアミナーゼレベルを持続するＣＨＣ患者の割合は、処置を施した全ての症例 のうち、わずかに約20−40％だけである。還元されたグルタチオン（ＧＳＨ）は 、様々な細胞機能に関連付けられる、動物細胞における重要な酸化防止剤であり 、ＧＨＳの枯渇がＡＩＤＳのような幾つかの慢性ウイルス性疾患において病原的 な役割を果たすであろうことが示唆されている。この研究においては、治療の４ 週間後にＩＦＮ治療に応答することができなかったＣＨＣ患者に由来する血漿お よび末梢単球細胞（ＰＢＭＣ）においてＧＳＨレベルを測定した。チオールの前 駆体であるＮ-アセチルシステインの効果もまた、ＧＨＳレベル並びにＩＦＮ治 療に対する臨床的およびウイルス学的応答について評価した。 ２．患者および方法 ２．１ 患者 組織学的および血清学的基準によりＣＨＣに罹患していると診断され、うち２ 名は硬変と関連付けられた14名の患者（男性13名および女性１名、平均年齢51歳 、範囲27−71歳）に研究に参加してもらった。全ての患者はα−リンパ芽球様 インターフェロン(Wellferon)を用いる治療を最少期間の４ケ月（１週当り15±1 .6ＭＵ、１週当り９−21ＭＵの範囲）施されている；全ての患者は研究に参加し たときに異常なＡＬＴ値（約30ＩＵ／Ｌ）を示した。ＩＦＮに応答するほとんど のＣＨＣ患者は、治療の最初の３ヶ月以内にトランスアミナーゼレベルを正常化 させ、治療の４ヶ月後にも高いＡＬＴ値を維持ずる患者はＩＦＮに応答しない者 であると考えることができる。この研究における患者には、以前受けていたもの と本質的に同じであるが、毎日８時間毎に6OOｍｇのＮ−アセチルシステイン（ ＮＡＣ）を経口投与することを加えたＩＦＮ処方を続けた。３つの症例において インターフェロンの量がわずかに減少したが（ＮＡＣ前15±1.8ＭＵ／週対ＮＡ Ｃ後11.5±1.3ＭＵ／週）、経口ＮＡＣ投与を加えた後にインターフェロン投与 量が増加した患者はいなかった。 加えて、最近慢性Ｃ型肝炎に罹患していると診断され、いまだ抗ウイルス治療 を受けていない10名の患者（男性８名および女性２名、平均年齢32歳、範囲24− 63歳）に、同じ量の経口ＮＡＣをインターフェロンを用いることなく１ヶ月にわ たって摂取させた。26名の健常被験者（男性14名および女性12名、平均年齢43歳 、範囲25ないし79歳）を対照群とした。全ての患者からはインフォームド・コン セント［lnformed consent］を書面で受けており、この研究は地区倫理委員会の 承認を受けた。 ２．２ ＰＢＭＣおよび血漿におけるＧＨＳ測定 ＰＢＭＣ（Ｌ−ＧＳＨ）および血小板の少ない血漿（Ｐ− ＧＳＨ）中のＧＨＳの同時測定のための血液試料を各患者から得た。リンホプレ ップ［Lymphoprep］（Nycomed Pharma AS，Oslo，Norway）を用いる遠心により ＰＢＭＣを単離し、５回洗浄した。単離した細胞を20％過塩素酸（最終濃度２％ ）で殺し、遠心（４℃で1200ｇｘ10分間）した後、上清を使用時まで-40℃で保 存した。血小板の少ない血漿に20％過塩素酸を加え（最終濃度２％）、遠心の後 、上清をＧＨＳ測定まで-40℃で保持した。 保存試料を解凍し、Brigellus et al.，Biochem．Pharmacol.，32，2529-2534 (1983)によって記述され、Ferrer et al.，Biochem．J.，264，531-534 (1990) によって改変された酵素法に従ってＧＳＨを測定した。ＧＳＨ−Ｓ−トランスフ ェラーゼの存在下において、ＧＳＨを１-クロロ-２,４-ジニトロベンゼン（ＣＤ ＮＢ）(SIGMA)と結合させ、この複合体の340ｎｍでの吸光度をパーキン・エルマ ー・ラムダ２［Perkin-Elmer Lambda 2］分光光度計を用いて測定した。 9.6ｘ1O³のモル吸光係数を用いてＧＳＨの絶対値を得た。 ２．３ ＲＮＡの抽出およびＲＴ−ＰＣＲ 血清中のＨＣＶ−ＲＮＡについての、並びにＰＢＭＣ中のＨＣＶ−ＲＮＡの陽 性もしくは陰性のいずれかの標準についての逆転写ポリメラーゼチェインリアク ション（ＲＴ−ＰＣＲ）を、本質的にはRuiz et el.，Hepatology，16，637-643 (1992)およびCheng et al.，J．Hepatol.，in press(1992)に記述される通りに 行なった。Kwoks and Higuchi,Nature，339，237-238 (1989)によって推奨され る、汚染の 危険性を減少させる手順を厳密に適用した。陽性および陰性対照において、全て の抽出および反応を同時に行なった。ＰＢＭＣの最終洗浄からのアリコートも含 まれ、これらの試料においてＰＣＲは常に陰性であった。 ２．４ 統計分析 全てのデータは、平均±平均の標準誤差（ＳＥＭ）として表わす。一対の、も しくは対を形成しない［impaired］データの比較は、マン・ウィットニーとウィ ルコクソンのテスト［Mann Whitney and Wilcoxon tests］を用いて行なった。 ３．図面 結果を添付の図面を参照して記述する。これらの図面において： 図１は、この研究に参加した14名の患者についての、ＡＬＴレベルに対するＩＦ Ｎ（-４ないし０ヶ月）およびＩＦＮ＋ＮＡＣ（０ないし６ヶ月）の効果を示し 、 図２は、ＩＦＮおよびＩＦＮ＋ＮＡＣを用いる治療の間の、ＰＢＭＣにおけるＨ ＣＶ−ＲＮＡの陽性および陰性標準の検出を示し、 図３は、ＩＦＮを用いる治療にＮＡＣを加える前と後両者の、１：10の血清希釈 での血清におけるＨＣＶ−ＲＮＡの検出を示し、 図４は、ＩＦＮ治療にＮＡＣを導入した後11ケ月まで追跡したときの、図１に示 される患者集団と同じ集団についての平均ＡＬＴレベルを示す。 ４．結果 研究に参加した14名の患者の平均血清ＡＬＴを以下の表に示す。この表はまた 、Ｌ−ＧＳＨおよびＰ−ＧＳＨをも示す。 対照群に対するＬ−ＧＳＨIおよびＰ−ＧＳＨの値は以下の通りである。 Ｌ−ＧＳＨ 3.43±O.89 ｎＭｏｌ⁶細胞 Ｐ−ＧＳＨ 18.1±4.08 ｎＭ 坑ウイルス治療を受けていない慢性Ｃ型肝炎患者では、血漿中（O.63±O.07ｌ Ｍ）およびＰＢＭＣ中（1.02±O.09ｎＭｏｌ／10⁶細胞）のＧＳＨレベルが、健 常対照（それぞれ、18.1±4.O8ｌＭおよび3.43±O.89ｎＭｏｌ／10⁶細胞、Ｐ＜O .01）と比較して非常に低下しているようにみえる。１ケ月の間ＮＡＣを投与す ることにより、ＰＢＭＣ中のＧＳＨのレベルが上昇したが（2.22±O.38ｎＭｏｌ ／10⁶細胞、Ｐ＜ O.05）、血漿中のＧＳＨは大して変化しなかった（O.99±O.22ｌＭ、n.s.）。加 えて、血清ＡＬＴのレベル（128±32ＩＵ／Ｌ対ＮＡＣを用いる治療の１ケ月後1 10±29ＩＵ／Ｌ）も大して変化しなかった。 インターフェロンに応答しない患者でも、ＰＢＭＣ中(1.45±O.27ｎＭｏｌ／1 0⁶細胞）および血漿中（O.77±O.21ｌＭ）のＧＳＨレベルが、対照値(Ｐ＜O.01) と比較して非常に低下しているようにみえる。この患者では、3.4ヶ月にわたっ てインターフェロンと共にＮＡＣを投与した結果、単球細胞中（3.32±O.18ｎＭ ｏｌ／10⁶細胞、Ｐ＜O.05）および血漿中(2.40±O.2Oｌｍ、Ｐ＜0.05)において ＧＳＨが非常に増加した。 図１および上記表は、研究に参加した患者（インターフェロンに応答しない患 者）では、４ヶ月のＩＦＮ治療の間ＡＬＴレベルは大きく変化しなかった（139 ±24対124±17ＩＵ／Ｌ、n.s.）ことを示している。しかしながら、経口ＮＡＣ を加えた結果、ＡＬＴが急速に、大きく減少した；組合せ治療のわずか１ヶ月後 であっても、ＡＬＴ値は大きく減少した（87±９ＩＵ／Ｌ、Ｐ＜O.05）。さらに 、５-６ケ月の期間にわたってＩＦＮとＮＡＣとを連続的に投与することにより 、全ての症例においてＡＬＴ値がさらに減少し（37±4ＩＵ／Ｌ）、症例の41％ が正常値に、残りはほぼ正常値（１症例における56ＩＵ／Ｌが最大）に達した。 ＩＦＮ処方にＮＡＣを加えることにより、以前にはＩＦＮ治療に対する非応答者 として分類されていた患者の症例において、ＩＦＮに対する応答が 明らかに改善される。 ＩＦＮとＮＡＣとの組合せによるＡＬＴレベルの減少には、ウイルスの増殖に 対する共働効果が付随する。ＩＦＮに対する非応答者として分類された９名の患 者の症例において、治療にＮＡＣを加える前後で、ＨＣＶのゲノム鎖（陽性ＲＮ Ａ鎖）およびこのウイルスの複製可能な中間物（陰性ＲＮＡ鎖）の両者の存在に ついてＰＢＭＣを試験した。図２に示されるように、患者がＩＦＮのみで治療さ れる場合には、複製可能な中間物は３名の患者(33％)で検出されたのに対して、 ゲノム鎖は７症例(77％)で検出することができた。しかしながら、ＩＦＮおよび ＮＡＣを用いる組合せ治療を４-６ヶ月施した後には、陽性鎖はわずか２例(22％ )で検出されたにすぎず、陰性ＨＣＶ−ＲＮＡ鎖はいずれの症例においても検出 することはできなかった。 ＩＦＮ処方にＮＡＣを加えることにはまた、血清中のＨＣＶ−ＲＮＡのレベル の減少が付随する。図３に示されるように、治療にＮＡＣを加えた後には、ＨＣ Ｖ検出のために血清の濃度を増加させることが必要であった。したがって、ＮＡ Ｃを加える前には、１：10の血清希釈を用いて症例の100％でＨＣＶ−ＲＮＡを 検出することができたが、治療にＮＡＣを加えた後には、同じ血清希釈を用いて 患者のわずか70％だけでウイルスが検出された。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １． ヒトインターフェロンおよびフリーラジカルスカベンジャーまたはそれら の前駆体もしくは誘発物質を含有する増強された組合せ。 ２． ヒトインターフェロンがヒトインターフェロン−αである請求の範囲第１ 項に記載の組合せ。 ３． ヒトインターフェロン−αが組換体である請求の範囲第２項記載の組合せ 。 ４． ヒトインターフェロン−αが天然のものである請求の範囲第２項記載の組 合せ。 ５． 天然ヒトインターフェロン−αがヒトリンパ芽球様インターフェロンであ る請求の範囲第４項記載の使用。 ６． フリーラジカルスカベンジャーまたはそれらの前駆体もしくは誘発物質が 、グルタチオンまたはそれらの前駆体もしくは誘発物質である請求の範囲第１項 ないし第５項のいずれかに記載の組合せ。 ７． フリーラジカルスカベンジャーまたはそれらの前駆体もしくは誘発物質が 、Ｎ-アセチルシステインである請求の範囲第１項ないし第５項のいずれかに記 載の組合せ。 ８． インターフェロンを用いる治療に敏感な症状の治療に用いられる請求の範 囲第１項ないし第７項のいずれかに記載の組合せ。 ９． 症状がＢ型肝炎またはＣ型肝炎感染である請求の範囲第８項に記載の組合 せ。 10． ヒトインターフェロンを用いる治療に敏感な症状に罹 患した患者の治療に用いられる医薬の製造へのヒトインターフェロンの使用であ って、前記ヒトインターフェロンを用いる治療がヒトインターフェロンを用いる 治療の間にフリーラジカルスカベンジャーまたはそれらの前駆体もしくは誘発物 質をも投与する方法によるものである使用。 11． ヒトインターフェロンを用いる治療に敏感な症状に罹患した患者の治療の ための医薬の製造へのフリーラジカルスカベンジャーまたはそれらの前駆体もし くは誘発物質の使用であって、前記ヒトインターフェロンを用いる治療がヒトイ ンターフェロンおよびフリーラジカルスカベンジャーまたはそれらの前駆体もし くは誘発物質を用いる治療を包含する方法によるものである使用。 12． ヒトインターフェロンがヒトインターフェロン−αである請求の範囲第10 項ないし第11項のいずれかに記載の使用。 13． ヒトインターフェロン−αが組換体である請求の範囲第12項記載の使用。 14． ヒトインターフェロン−αが天然のものである請求の範囲第12項記載の使 用。 15． 天然ヒトインターフェロン−αがヒトリンパ芽球様インターフェロンであ る請求の範囲第14項記載の使用。 16． フリーラジカルスカベンジャーまたはそれらの前駆体もしくは誘発物質が 、グルタチオンまたはそれらの前駆体もしくは誘発物質である請求の範囲第10項 ないし第15項のいずれかに記載の使用。 17． フリーラジカルスカベンジャーまたはそれらの前駆体 もしくは誘発物質が、Ｎ-アセチルシステインである請求の範囲第10項ないし第1 5項のいずれかに記載の使用。 18． 症状がＢ型肝炎またはＣ型肝炎感染である請求の範囲第10項ないし第17項 のいずれかに記載の使用。 19． ヒトインターフェロンを用いる治療に敏感な症状に罹患した患者の治療に 用いられる医薬の製造へのヒトインターフェロンの使用であって、該患者はヒト インターフェロンを用いる治療に応答することができなかった患者であり、前記 ヒトインターフェロンを用いる治療がヒトインターフェロンを用いる治療の間に フリーラジカルスカベンジャーまたはそれらの前駆体もしくは誘発物質をも投与 する方法によるものである使用。 20． ヒトインターフェロンを用いる治療に敏感な症状に罹患した患者の治療の ための医薬の製造へのフリーラジカルスカベンジャーまたはそれらの前駆体もし くは誘発物質の使用であって、該患者はヒトインターフェロンを用いる治療に応 答することができなかった患者であり、前記ヒトインターフェロンを用いる治療 がヒトインターフェロンおよびフリーラジカルスカベンジャーまたはそれらの前 駆体もしくは誘発物質を用いる治療を包含する方法によるものである使用。 21． 患者が従前にヒトインターフェロンを用いる治療に応答していた請求の範 囲第19項および第20項のいずれかに記載の使用。 22． ヒトインターフェロンがヒトインターフェロン−αである請求の範囲第19 項ないし第21項のいずれかに記載の使用。 23． ヒトインターフェロン−αが組換体である請求の範囲第22項記載の使用。 24． ヒトインターフェロン−αが天然のものである請求の範囲第22項記載の使 用。 25． 天然ヒトインターフェロン−αがヒトリンパ芽球様インターフェロンであ る請求の範囲第24項記載の使用。 26． フリーラジカルスカベンジャーまたはそれらの前駆体もしくは誘発物質が 、グルタチオンまたはそれらの前駆体もしくは誘発物質である請求の範囲第19項 ないし第25項のいずれかに記載の使用。 27． フリーラジカルスカベンジャーまたはそれらの前駆体もしくは誘発物質が 、Ｎ-アセチルシステインである請求の範囲第19項ないし第25項のいずれかに記 載の使用。 28． 症状がＢ型肝炎またはＣ型肝炎感染である請求の範囲第19項ないし第27項 のいずれかに記載の使用。 29． 請求の範囲第１項ないし第７項に記載される組み合わせおよび薬学的に許 容し得る担体を含有ずる医薬製剤。 30． 請求の範囲第１項ないし第７項のいずれかに記載の組合せを生成するため に、投与されることが要求される成分を関連付けて包含する一対のパック。 31． ヒトインターフェロンを用いる治療に敏感な症状に罹患した患者の治療方 法であって、該患者に治療上有効な量のヒトインターフェロンおよびフリーラジ カルスカベンジャーまたはそれらの前駆体もしくは誘発物質を投与することを包 含する方法。 32． ヒトインターフェロンがヒトインターフェロン−αである請求の範囲第31 項に記載の方法。 33． ヒトインターフェロン−αが組換体である請求の範囲第32項記載の方法。 34． ヒトインターフェロン−αが天然のものである請求の範囲第32項記載の方 法。 35． 天然ヒトインターフェロン−αがヒトリンパ芽球様インターフェロンであ る請求の範囲第34項記載の方法。 36． フリーラジカルスカベンジャーまたはそれらの前駆体もしくは誘発物質が 、グルタチオンまたはそれらの前駆体もしくは誘発物質である請求の範囲第31項 ないし第35項のいずれかに記載の方法。 37． フリーラジカルスカベンジャーまたはそれらの前駆体もしくは誘発物質が 、Ｎ-アセチルシステインである請求の範囲第31項ないし第35項のいずれかに記 載の方法。 38． 症状がＢ型肝炎またはＣ型肝炎感染である請求の範囲第31項ないし第37項 のいずれかに記載の方法。 39． ヒトインターフェロンを用いる治療に敏感な症状に罹患した患者の治療方 法であって、該患者はヒトインターフェロンを用いる治療に応答することができ なかった患者であり、ヒトインターフェロンおよびフリーラジカルスカベンジャ ーまたはそれらの前駆体もしくは誘発物質の有効量を用いる患者の治療を包含す る方法。 40． 患者が従前にヒトインターフェロンを用いる治療に応答していた請求の範 囲第39項に記載の方法。 41． 症状がＢ型肝炎またはＣ型肝炎感染である請求の範囲第39項および第40項 のいずれかに記載の方法。