JPH08295635A - 胎盤血流量改善剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】 ヒト由来アンチトロンビン−III を有効成分
とする胎盤血流量改善剤。 【効果】 ヒト由来アンチトロンビン−III は、哺乳動
物における胎盤血流量の増加作用を有し、特に血流量低
下に起因する子宮胎児発育遅延等に対して改善作用を有
する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、ヒト由来アンチトロン
ビン−III （以下、単にＡＴ−III という）を有効成分
とする胎盤血流量改善剤に関する。

【０００２】

【従来技術・発明が解決しようとする課題】ＡＴ−III
は血漿中に存在するα₂ グロブリンに属する糖蛋白質の
一種で、その分子量は６５，０００〜６８，０００であ
り、血液凝固系のプロテアーゼ阻害活性を有し、トロン
ビンの凝固活性を強く阻害する。また、トロンビンに対
する阻害作用のみならず、その他の凝固因子、例えば活
性化Ｘ因子、活性化IX因子などに対する阻害作用をも有
している。その他、プラスミンやトリプシンに対する阻
害作用があることも報告されている。これらの阻害作用
は、一般にヘパリンの共存下でより速やかに進行するこ
とが知られている。このような薬理作用を有するＡＴ−
III は、凝固異常亢進の補正、具体的には汎発性血管内
凝固症候群（ＤＩＣ）の治療を目的として用いられてい
る。ところで、子宮内胎児発育遅延（ＩＵＧＲ）、妊娠
中毒症等においては、胎盤の血流量の低下がこれらの疾
患に関与していると考えられ、胎児への悪影響が懸念さ
れる。しかしながら、従来低下した胎盤の血流量を増加
させ改善する薬剤および方法は見出されてなかった。し
たがって胎児を保護する方策としては、母体からの胎児
の切離し、すなわち帝王切開が行われてきた。

【０００３】本発明は、ＡＴ−III の従来知られていな
かった作用を利用した新規な薬剤を提供することを目的
とする。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記目的
を達成すべく鋭意研究を重ねた結果、ＡＴ−III に胎盤
血流量の改善作用があることを見出し、本発明を完成す
るに至った。

【０００５】即ち、本発明はＡＴ−III を有効成分とす
る胎盤血流量改善剤に関する。

【０００６】本発明で使用されるＡＴ−III は、ヒト由
来のもので、医薬として使用できる程度に精製されたも
のであれば特に制限されるものではなく、例えばヒトの
全血、血漿、血清または凝固した血液から圧搾された血
清等から精製することができる。使用される血液として
は、特にＨＢ_S 抗原、抗ＨＩＶ抗体に陰性であり、ＧＴ
Ｐが正常値の２倍以下であるものが好ましい。

【０００７】ＡＴ−III を調製するための出発原料とし
ては、例えば血漿のコーン分画法における画分IV−１、
画分IV、上清I または上清II＋III が使用される。ＡＴ
−III の精製法としては、例えば特開昭４８−３５０１
７号明細書、特公昭５９−７６９３号明細書に開示の方
法等が例示される。また、ＡＴ−III は細胞培養法（例
えば、特表昭５７−５００７６８号公報参照）、遺伝子
工学法（例えば、特開昭５８−１６２５２９号公報参
照）などにより調製されるものであってもよい。また、
市販のＡＴ−III 製剤（例えば商品名：ノイアート／
（株）ミドリ十字等）を用いることもできる。

【０００８】本発明の胎盤血流量改善剤の有効成分であ
るＡＴ−III は、ヒト、イヌ、ウシ、ウマ、マウス、ラ
ット等の哺乳動物における胎盤血流量の低下に対して改
善作用を有し、胎盤血流量低下に起因する疾患、例え
ば、子宮内胎児発育遅延（ＩＵＧＲ）の治療に有効であ
る。本発明の胎盤血流量改善剤は、ヒト由来のＡＴ−II
I を有効成分とするため安全性が高い。

【０００９】本発明の胎盤血流量改善剤は、胎盤におけ
る血流量増加作用を有し、それにより胎児へ供給する血
流量を正常化できる薬剤である。

【００１０】本発明の胎盤血流量改善剤は、本発明の目
的に反しない限り通常医薬品に用いられる薬理的に許容
される添加剤（例えば、担体、賦形剤、希釈剤等）、安
定化剤または製薬上必要な成分を配合していてもよい。
添加剤、安定化剤としては、糖類、例えばブドウ糖、果
糖等の単糖類、ショ糖、乳糖、麦芽糖等の二糖類、マン
ニトール、ソルビトール等の糖アルコール；クエン酸、
リンゴ酸、酒石酸などの有機酸またはその塩（例えばナ
トリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩）；グリシン、
アスパラギン酸、グルタミン酸等のアミノ酸またはその
塩（例えば、ナトリウム塩等）；ポリエチレングリコー
ル、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレン共重合
体、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル等の
界面活性剤；ヘパリン、アルブミン等が挙げられる。

【００１１】本発明の胎盤血流量改善剤は、ＡＴ−III
と上記成分とを適宜混合し、粉末、顆粒、錠剤、カプセ
ル剤、シロップ剤、注射剤等の態様に調製されて、経口
的または非経口的に投与される。好ましくは、静脈内投
与の態様である。本発明の胎盤血流量改善剤は、特にＡ
Ｔ−III を薬理的に許容される添加剤とともに凍結乾燥
品として調製しておき、用時溶解して使用する態様の製
剤とすることが好ましい。かかる製剤は、使用時に注射
用蒸溜水や滅菌精製水等によって約１〜１００ＡＴ−II
I 単位／ｍｌ溶液として、より好ましくは生理的に等張
な塩濃度および生理的に好ましいｐＨ値（ｐＨ６〜８）
に調整される。

【００１２】投与量は症状、体重、性別、動物種等によ
って適宜選択すればよく、一般的にヒトの成人に対して
は、ＡＴ−III として通常１〜１０００単位／ｋｇ体重
／日、好ましくは１０〜５００単位／ｋｇ体重／日を１
日１〜数回に分けて投与する。例えば、静脈内投与の場
合１０〜１００単位／ｋｇ体重／日の投与量で投与する
ことが好ましい。本明細書において、ＡＴ−III の力価
は、１単位が正常人血漿１ｍｌ中に含まれるＡＴ−III
量に相当する。

【００１３】

【実験例・実施例】以下、本発明を詳細に説明するため
実験例および実施例を挙げるが、本発明はこれらによっ
て何ら限定されるものではない。

【００１４】実験例１ （１）実験方法 妊娠１６−２０日齢のWister系ラットに、ペントバルビ
タール麻酔（４０ｍｇ／ｋｇ）を施し、左心室内および
右大腿動脈にカテーテルを挿入した。以上の手術操作終
了後、少なくとも１時間放置した後に以下に示す実験を
行った。ＡＴ−III （ミドリ十字製）または生理食塩液
は、下記表１に示した所定量を尾静脈内にｂｏｌｕｓ投
与した後、所定の投与速度でＡＴ−III または生理食塩
液の投与開始時から２時間５分まで持続投与した。

【００１５】

【表１】

【００１６】ＡＴ−III または生理食塩水投与終了直
後、⁵⁷Ｃｏで標識された放射性マイクロスフェアー（直
径１５．５±０．１μｍ）約１００，０００個を含む生
理食塩水を左心室より注入した。このマクロスフェアー
溶液は、０．０１％Ｔｗｅｅｎ８０を含む生理食塩水
０．５ｍｌに、上記マクロスフェアーを超音波処理して
均一に分散させた分散液である。対照血液となる動脈血
の採取は、マイクロスフェアー溶液を注入する５秒前よ
り０．４５８ｍｌ／ｍｉｎの速さで１分間かけて、右大
腿動脈より行った。対照血液の採取後直ちに開胸し、生
理食塩液２５０ｍｌを用いて灌流した。血管内の残留血
液を可能なかぎり除去した後、胎盤を摘出し、表面の水
分を除去した後その重量を測定した。

【００１７】（２）胎盤血流量の測定 注入したマイクロスフィアー溶液、対照血液および組織
試料中の⁵⁷Ｃｏの放射活性（ＣＰＭ (counts per minut
e)）をγカウンターにより測定し、次式により臓器血流
量を算出した。 臓器血流量＝臓器の放射活性（ＣＰＭ）／対照血液の放
射活性（ＣＰＭ）×０．４５８（ｍｌ／ｍｉｎ）／臓器
重量（ｇ） 対照群およびＡＴ−III 投与群について、それぞれの胎
盤血流量の測定結果（ｎ＝７）の平均値を図１のグラフ
に示す。対照群と比べてＡＴ−III 投与群は、著しく血
流量が増加していた。

【００１８】実験例２ （１）実験方法 実験例１と同様に手術した動物に、まず線溶系を抑制す
るためにプラスミン阻害剤トラネキサム酸２００ｍｇ／
ｋｇを静脈内投与した。その後、生理食塩液に溶解した
¹²⁵ Ｉ- フィブリノーゲン０．５μＣｉを静脈内投与し
た。その後ＡＴ−III （ミドリ十字製）または生理食塩
液を、下記表２に示した所定量で尾静脈内にｂｏｌｕｓ
投与し、その後、所定の投与速度で持続投与した。

【００１９】

【表２】

【００２０】ＡＴ−III または生理食塩液の投与開始の
５分後に、ウサギ脳由来トロンボプラスチン（トロンボ
プラスチン・Ｃ、国際試薬製）を９ｍｌ／ｋｇ／ｈの投
与速度で左心室内に挿入したカテーテルを介して１時間
注入した。ウサギ脳由来トロンボプラスチンは０．４８
ｍｌ／ｍｌに調製して用いた。ＡＴ−III または生理食
塩液の投与は、組織トロンボプラスチン投与終了後１時
間まで、すなわちＡＴ−III または生理食塩液の投与開
始時から２時間５分まで行った。ＡＴ−III または生理
食塩液の投与終了直後、実験例１と同様に⁵⁷Ｃｏで標識
された放射性マイクロスフェアーを注入した。その後、
実験例１と同様に対照血液となる動脈血の採取および胎
盤の摘出を行った。 （２）胎盤血流量の測定 注入したマイクロスフィアー溶液、対照血液および組織
試料中の¹²⁵ Ｉおよび ⁵⁷Ｃｏの放射活性をγカウンター
により測定し、実験例１と同様にして胎盤血流量を算出
した。その結果を実験例１の結果と併せて図１のグラフ
に示す。ＡＴ−III 投与群は対照群と比べて著しく血流
量が増加していた。

【００２１】実験例３ 急性毒性（ＬＤ₅₀）はマウス、ラットの雌雄による差は
なく、静脈内投与、経口投与とも１５０００単位／ｋｇ
体重以上、皮下投与では２００００単位／ｋｇ体重以上
であった。また、サル（雄）では静脈内投与で６０００
単位／ｋｇ体重以上であった。

【００２２】実施例１ コーンの冷アルコール分画法で得られた画分IV−１のペ
ースト１０ｋｇを生理食塩水１００リットルに懸濁し、
硫酸バリウムを５（ｗ／ｖ）％になるように加え、室温
で３０分間攪拌し、微量に存在するプロトロンビンを硫
酸バリウムに吸着させて除去した。この上清液をｐＨ
６．５に調整し、ポリエチレングリコール＃４０００を
１３（ｗ／ｖ）％になるように加え、生じた沈殿を遠心
分離して除き、さらにポリエチレングリコール＃４００
０を３０（ｗ／ｖ）％になるように加え、さらに生じた
沈殿を遠心分離して回収した。この沈殿を冷生理食塩水
約２０リットルに溶解し、予め生理食塩水で調製された
ヘパリンセファロースを充填したカラムへ注入し、ＡＴ
−III をカラムに吸着させた。このカラムを０．４Ｍの
塩化ナトリウム溶液で洗浄して不純蛋白を除いたのち、
２．０Ｍの塩化ナトリウム溶液をカラムに流して溶出し
てくる部分を回収した。このＡＴ−III の水溶液にクエ
ン酸ナトリウムを０．６Ｍの濃度に加え、ｐＨ７．８に
調整した後６０℃で１０時間の加熱処理を施し、続いて
０．９％塩化ナトリウム溶液に対し１夜透析を行いつつ
濃縮してＡＴ−III の１（ｗ／ｖ）％水溶液を得、必要
に応じて濾過または遠心分離を行って透明な液とした。
このＡＴ−III の１（ｗ／ｖ）％水溶液にマンニトール
２（ｗ／ｖ）％とクエン酸ナトリウム０．２（ｗ／ｖ）
％を加え、塩化ナトリウムが０．５％になるように少量
の冷蒸溜水で希釈し、１Ｎの水酸化ナトリウムでｐＨ
７．６に調整した後、滅菌したミリポアフィルターで除
菌濾過し、５００単位ずつ分注し、凍結乾燥を行って乾
燥製剤とした。

【００２３】実施例２ １バイアル中、 ＡＴ−III ５００単位 マンニトール ２００ｍｇ 塩化ナトリウム ５０ｍｇ クエン酸ナトリウム ５２ｍｇ よりなる凍結乾燥品を用時２０ｍｌの注射用蒸溜水に溶
解して、静注用製剤とした。

【００２４】

【発明の効果】ＡＴ−III は、哺乳動物における胎盤血
流量の増加作用を有し、特に血流量低下に起因する子宮
胎児発育遅延（ＩＵＧＲ）等に対して改善作用を有す
る。本発明の胎盤血流量改善剤によれば、胎盤の血流量
を増加させることにより疾患における胎児の保護が可能
となり、母体中での胎児の正常発育が可能となる。さら
に、本発明の胎盤血流量改善剤はヒト由来のＡＴ−III
を有効成分とするため、母体および胎児への安全性が高
い。従って、本発明の胎盤血流量改善剤は胎児発育遅延
（ＩＵＧＲ）等の有用かつ安全な治療剤として用いるこ
とができる。

【図面の簡単な説明】

【図１】実験例１および実験例２において測定した胎盤
血流量を示すグラフである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 内田 武 大阪府枚方市招提大谷２丁目25番１号 株 式会社ミドリ十字中央研究所内 (72)発明者 渡辺 正弘 大阪府枚方市招提大谷２丁目25番１号 株 式会社ミドリ十字中央研究所内

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 ヒト由来アンチトロンビン−III を有効
   成分とする胎盤血流量改善剤。