JPH09501946A - 急性心筋梗塞中の心筋傷害の低減方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 外因性Ｃ１−エステラーゼインヒビターを単独で、または他の薬剤と組み合わせて、急性心筋梗塞の患者または急性心筋梗塞の危険性のある患者に投与することを含んで成る、急性心筋梗塞の治療的または予防的処置法。この処置は炎症反応を抑制し、より詳細には急性心筋梗塞の経過中に生じる補体系を活性化する。Ｃ１−エステラーゼインヒビターは血漿または他の生体物質から精製したＣ１−エステラーゼインヒビター、あるいは組換えＣ１−エステラーゼインヒビターまたはそれに由来する変更体、あるいはＣ１−エステラーゼインヒビターに類似する特異性を有する他のインヒビターの組換え構築物であることができる。

Description

【発明の詳細な説明】 急性心筋梗塞中の心筋傷害の低減方法発明の分野 本発明は免疫学／心臓病学／生化学の分野に属し、そして急性心筋梗塞中の心 筋細胞傷害の低減方法をより詳細に開示する。発明の背景 心筋の機械的機能不全は、急性心筋梗塞（ＡＭＩ）の患者の病院での死亡例を 導くものの１つである。Friedberg C.K.,1968,Circulation 39 suppl.IV:252。 そのような機能不全の亢進の重要な決定因子は、危険にさらされた心筋中の壊死 組織の量である。Pace D.L.ら、1971,New Eng J Med 285:133。動物を対象とし た実験では、冠状動脈管の閉塞後約３０分で不可逆的な心筋細胞傷害が始まり、 そして数時間進行することが示された。Maroko P.R.ら、1973,Ann Int.Med 79:7 20。しかし、冠状動脈閉塞の６時間も後になされた介入でも、非処置対照動物と 比較して、約３５％までＡＭＩ後の梗塞サイズを減少できる。Libby P.ら、1973 ,J.Clin Invest 52:599。心電計の研究でも、ヒトの実質的な心筋組織量は冠状 動脈管の閉塞後数時間、またはさらに数日後でも不可逆的な傷害を受けないこと が示され、すなわちこれはほとんどの患者が病院に入れたであろう時間である。 Reid P.R.ら、1974，New Engl.J.Med 290:123。ＡＭＩの後期に生じる心筋壊死 を減少させることにより梗塞サイズを最小にするための多くの実験的および臨床 的研究がなされて来た。Maroko P.R.ら、1973、Ann.Int.Med．79:720。 心筋細胞傷害の後期は、好中性の顆粒球（好中球）の浸潤を特徴とする後発性 の急性炎症反応がもたらされるようである。Entmam M.L.ら、1 991,EASEB J.5:2529。まず初めに、ＡＭＩ中の心筋細胞傷害を媒介する炎症反応 の重要性は、コルチコステロイドが炎症サイズを２０から３５％まで減少できた ことを表す動物実験で認識された。Libby P.ら、1973、J.Clin.Invest 52:559;M aclean Dら、1987,J.Clin.Invest 61:541。しかし、心筋壊死を最小にするため のメチルプレドニゾロンのＡＭＩへの臨床的投与は、この処置が主に瘢痕形成お よび治癒を妨害し、そして患者に動脈瘤および心室壁の破裂を起こすことがある ために成功しなかった。Roberts R.ら、1976、Circularation 53 Suppl.1:204。 同様な結果がラットを対象とした長期実験で観察された。Maclean Dら、1978,J. Clin.Invest 61:541。これらの失望する結果は、ＡＭＩ後の炎症反応を弱めるこ とにより梗塞サイズを減少させることを試みる臨床的実験をさらに進めることを 後退させることになった。 ＡＭＩの経過中に起こる炎症反応は、幾つかの重要な出来事を含んで成る：化 学走性因子の局所的生成、好中球の浸潤および活性化、好中球の心筋単球への付 着を増強させるためのサイトカインの局所的生成（腫瘍壊死因子-αおよびイン ターロイキン-６）、ならびに補体系の局所的活性化。Entman M.L.ら、1991,FAS EB J .5:2529。 ＡＭＩにおいて補体活性化の役割は、初めにHillおよびWardにより提唱され、 彼らは梗塞した心筋中に生成した補体活性化生成物が好中球浸潤の原因であると いう証拠を提供した。Hill J.H.ら、1970 J.Exp.Med.131:885。後の研究で、動 物および患者の両方を対象として示されたように、ＡＭＩ患者で活性化補体成分 の血清レベルが上昇し、数種の補体成分はＡＭＩの経過中に梗塞領域に局在する ようになることが示された。Pinckard R.N,ら、1975,J.Clin.Invest.56:740;Lan glois P.F.ら、198 8,Atherosclerosis 70:95；ヤスダ M.ら、1990,Circulation 81:156；Pinckard R.N,ら、1980,J.Clin.Invest.66:1050；McManus L.M.ら、1983,Lab Invest.48:4 36；Schafer H.ら、1986,J.Immunol.137:145；Hugo Fら、1990,Clin.Exp.Immuno l .81:132。 さらに多くの研究で、アナフィラトキシンおよびＴＣＣのような補体活性化成 分は、好中球に依存する、および依存しない機構で、例えばトロンボキサンＡ２ およびペプチドロイコトリエンＬＴＣ４およびＬＴＤ４の局所生成、ヒスタミン の放出、細胞膜破裂ならびに冠状動脈循環中の好中球の活性化とそれに続く毛細 管の閉鎖、毒性の酸素ラジカルの放出ならびにタンパク質溶解酵素の放出により 、心筋に悪い影響を及ぼすかもしれないことが実証された。これらの機構は血管 収縮、微小循環を傷つけ、冠状動脈潅流圧の上昇を導き、そして虚血、収縮性の 心筋不全、頻脈を生じ、そして房心室伝導を傷つけることになる場合がある。De l Balzo U.ら、1984,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 82:886；Mertin S.E.ら、1988,Ci rc .Res.63:483；Ito B.R.ら、1989，Circ.Res.65:1220；Del Bazzo Uら、1989,C irc.Res .65:847；Ito B.R.ら、1990，Circ.Res.66:596；Stahl G.L.ら、1990,Ci rc.Res .66:1103；Engler R.L.ら、1991,FASEB J.5:2983；Homeister J.W.ら、19 92,Circ.Res.71:309。 観察されたＡＭＩ中の補体活性化の分子機構は明らかではないが、放出された ミトコンドリア性構成物（おそらくは膜）が、活性化を誘導するとよく言われて きた。Pinckard R.N.ら、1973,J.Immunol.110:1376；Pinckard R.N.ら、1975,J. Clin.Invest 56:740；Giclas P.C.ら、1979,J.Immunol.122:146；Storrs S.B.ら 、1981,J.Biol.Chem 256:10924；Rossen R.D.ら、1988,Circ.Res.62:572；Kagiy ama A.ら、1989,Circ.Res. 64 :607。しかし、これらのほとんどの研究が冠状動脈管の永久的閉塞による虚血 後というよりは、虚血性心筋の再潅流後の補体活性化を扱っていることに注目す べきである。心筋に対する補体活性化生成物の有害な影響は、動物モデルにおい て、冠状動脈管の永久的閉塞前または直後の補体消費(depletion)が有意に心筋 壊死の量を減少させる、という観察により実証された。Maroko P.R.ら、1978,J. Clin.Invest .61:661；Maclean D.ら、1978,J.Clin.Invest.61:541：Pinckard R. N.ら、1980,J.Clin.Invest.66:1050；Crawford H.R.ら、1988,Circulation 78:1 449。冠状動脈管の永久的閉塞後の心筋傷害に対する補体阻害の効果を調査した これらのいずれの研究も、補体カスケードの真のインヒビター使用せず、すべて のこれらの研究は、系を血管内で活性化し、そして消費させる薬剤であるコブラ 毒因子(Cobra Venom Factor)を使用して行われた。しかしこの補体阻害／消費法 は、成人性呼吸困難の発生のような血管内補体活性化の本来の危険性を考慮する と、臨床的状況で使用することはできない。Goldsrein IM、1992,IN:Gallin J1 、Goldsrein IM、Snyderman R(編集)：炎症：基本的原理および臨床的関連（Inf lammation:Basic Principles and Clinical Correlates )、ニューヨーク、ラベ ン出版(Raven Press)、第63頁；Craddock P.R.ら、1977,New Eng.J.Med.296:769 ；Stimler N.F.ら、1980,Am J.Pathol 100:327；Hosea S.F.ら、1980,J.Clin.In vest .66:375；Ward P.A.ら、1985,J.Clin.Invest.76:517。 上記の考察は、冠状動脈管の永久的閉鎖中の補体系の活性化を扱っている。し かし今、ＡＭＩ患者を血栓崩壊療法または冠状動脈血管形成術で治療して、危険 にさらされた心筋に再潅流させることが一般的に受け入れられている。この治療 が閉塞後すぐに施されるほど、虚血性心筋を 救う効果が上がる。臨床的研究では、処置が６０−７５分遅れると、血栓崩壊療 法の効果の半分以上が失われることを示している。Hermers WThら、1992,Lancet 340:1297。しかし、９０％より多くのＡＭＩ患者が冠状動脈の閉塞後７５分以 内に病院に到着せず、したがって血栓崩壊療法の利点を享受することは難しい。 虚血性心筋の再潅流自体が、補体および好中球の活性化ならびに酸素ラジカル の生成により引き起こされる炎症反応（虚血性再潅流傷害としても知られている ）を誘導し得る、という証拠は豊富にある。Rossen R.D.ら、1985,Circ.Res.57: 119；Rossen R.D.ら、1988,Circ.Res.62:572；Dreyer W.J.,1989,Circ.Res.65:1 751；Dreyer W.J.ら、1992,Circ.Res.71:1518；Lucchesi BRら、1989,J.Mol.Cel l.Cardiol 21:1271;Engler Rら、1989,Circulation 79:1137。この虚血性−再潅 流傷害が心臓組織に傷害を与え、循環系再生の利点を制限するかもしれない。He rdson PBら、1965,Am J.Pathol.46:356。したがってＡＭＩにおいて再潅流療法 は“もろ刃の刀”と見なされ、ＡＭＩの発生後遅くとも２時間以後は適用しない ほうがよいと考えられる。 現在までＡＭＩ患者における臨床研究で、梗塞した心筋の再潅流による補体活 性化を示すものはない。しかし、虚血性心筋の再潅流を受けたラットでは、組換 え可溶化状態のヒト補体レセプター１型での治療により心筋梗塞サイズがかなり 減少したことを示したので、これらの患者での補体の阻害は利点となるかもしれ ない。Weisman H.F.ら、1990,Science 249:146。 現在まで、冠状動脈管の永久的閉塞後に心筋梗塞のサイズに影響を及ぼす補体 インヒビター（すなわち、活性化により消耗されるというより は［活性化］補体タンパク質を阻害するタンパク質または物質）の有利な効果を 記載している文献の報告は無い。本発明は活性化された補体第一成分の天然に存 在するインヒビターを投与することにより、心筋梗塞のサイズを低減させる方法 を記載する。発明の要約 セリン−プロテイナーゼインヒビターＣ１−エステラーゼインヒビターが、冠 状動脈管の閉塞後、遅くとも２時間に投与されたとき、心筋梗塞のサイズを低減 させることを見いだした。 したがって本発明はＡＭＩの治療的または予防的処置法を意図し、この方法は 外因性のＣ１−エステラーゼインヒビターを単独または他の薬剤と組み合わせて 、急性心筋梗塞の患者に、または急性心筋梗塞の危険がある患者に投与すること を含んで成る。 この処置は、患者が危険にさらされた心筋に血流を再生するための内科的また は外科的治療を受けているか、いないかとは独立して投与することができる。特 に、本発明はＡＭＩの発生と入院との間の時間が経過したために再潅流療法を受 けることができない（またはもはやできない）患者にも適用できる。したがって 本発明は、冠状動脈管の閉塞後、遅くとも２時間に処置されたとき、心筋組織障 害を減少させるのに効果的であるので、これらの患者（９０％より多く、または すべてのＡＭＩ患者）を処置するための別の方法を提供する。 Ｃ１−エステラーゼインヒビターは、ヒト血漿または他の任意の生物起源、組 換えＣ１−エステラーゼインヒビター、あるいはそれから生じる突然変異体、あ るいは活性化状態の補体の第一成分に特異性をもつ組換えプロテイナーゼインヒ ビターを例示することができる。 Ｃ１−エステラーゼインヒビターと組み合わせて投与することができる他の薬 剤の例は、心筋への血流を向上させることができる物質、例えば組織プラスミノ ーゲンアクチベーター、ウロキナーゼおよびストレプトキナーゼ、ならびに抗炎 症特性を有する物質、例えば酸素ラジカルスカベンジャーおよびサイトカイン拮 抗薬がある。 本発明は以下の本発明の記載を考慮後に、より完全に理解されるであろう。図の簡単な説明 血漿−由来ヒトＣ１−エステラーゼインヒビターのＡＭＩの心筋障害に対する 投与効果を、左前方下行冠状動脈(LAD)の永久結紮を受けたイヌについて実験し た。閉塞後４８時間に、動物を屠殺し、そして心臓を摘出した。虚血性心筋を約 １グラムの小片に切った。心筋障害を、各心筋組織小片中の残存α-ヒドロキシ ブチル酸デヒドロゲナーゼ(HBDH)活性を測定することにより評価した。１５分お よび４８時間での各心筋小片中の血流を、閉塞１５分および４８時間後に静脈内 に標識顕微鏡を注入し、そして小片の放射性活性を計数することにより測定した 。結果を％で表し、１００％は正常な心筋で観察された値である。示した結果は 閉塞２および８時間後にＣ１−エステラーゼインヒビターを受容した４匹のイヌ （処置）、ならびにＣ１−エステラーゼインヒビターを受容しなかった４匹のイ ヌ（対照）について得た。 図１は、初期に同程度の虚血(15分での流れ)について、Ｃ１−エステラーゼイ ンヒビターで処置した動物の心臓は、対照よりも約５０％未満の筋肉酵素を損失 したことを表す。 図２は、心外膜組織試料で得た結果を表したことを除き、図１と同じ である。 図３は連続したＬＡＤ結紮にもかかわらず、初めの４８時間中の梗塞領域中へ の血流の回復と平行して、Ｃ１−エステラーゼインヒビターで処置した動物の約 ５０％が心筋酵素消費の減少を表す。 図４は、心外膜組織試料で得た結果を表したことを除き、図３と同じである。発明の詳細な説明 本発明は炎症反応の抑制法、より詳細には補体系の活性化の抑制法を提供し、 これは急性心筋梗塞の経過中に起こる。好適なインヒビターは、血漿から精製さ れたＣ１−エステラーゼインヒビターまたは組換えＣ１−エステラーゼインヒビ ターあるいはそれから派生する組換え変更体、あるいはＣ１−エステラーゼイン ヒビターに類似する特異性を有する他のインヒビターの組換え構造体を含んでも よいＣ１−エステラーゼインヒビターである。 本発明を実現するために、使用した材料および方法のさまざまな観点を考察し ている数名の患者の記録および科学記事を以下に述べる。すべての文献が引用に より本明細書に編入されるものとする。 本発明の基本は、血栓崩壊治療のような内科的処置が閉塞した冠状動脈管を再 開するために施されようがされまいが、補体の活性化がＡＭＩ中に実質的な心筋 傷害を引き起こすという認識、ならびにこの活性化の阻害がこの心筋傷害を減ら す、または防ぐという認識である。ＡＭＩにかかっている患者中の補体活性化を 阻害するための好適な方法は、血漿由来−Ｃ１−エステラーゼインヒビターを投 与することであるが、本発明はいかようにもそのように狭義に構成されているも のではない。補体 の第一成分の活性を抑制することによる、ほとんどすべての補体活性化の阻害法 が本発明の範囲に入ることを意図する。 さらに明らかに本発明を定義するために、本発明を３つの章に記載する。第１ 章は、本明細書に使用する特定の用語の定義を含んでいる。これらの定義は、一 般的に当該技術分野での使用と一致している。第２章は、本発明の範囲に入ると 考える様々なＣ１−エステラーゼインヒビター分子をより詳細に記載する。第３ 章はＡＭＩ患者に外因性Ｃ１−エステラーゼインヒビターを投与する方法を記載 する。Ｉ．定義 本明細書に使用する“補体系”という句は１組のタンパク質を言い、そのほと んどが不活性な前駆タンパク質として血中を循環し、因子としても知られている 。系の活性化中に、１つの因子が引き続き１つの因子を限定タンパク質分解によ り活性化し、そしてこれが続く。この活性化過程はカスケードに似ており、した がって補体系も１つの主要な血漿カスケード系であると考えられ、そして他方は 凝固、フィブリン分解および接触系である。補体系の生理学的役割は、侵襲する 微生物に対して生体を防御することである。このシステムは古典的および別の経 路の２つの経路を介して活性化されることができ、両方が共通の末端経路を活性 化することができる。Cooper N.R.,1985,Adv.Immunol.37:151；Muller-Eberhard H.J.ら、1980,Adv.Immunol.29:1；Muller-Eberhard H.J.ら、1992,In:Gallin J I,Goldstein IM,Snyderman R(編集)：炎症：基本的原理および臨床的関連(Infla mmation:Basic Principles and Clinical Correlates )、ニューヨーク、ラベン 出版、第33頁。アナフィラトキシンとしても知られている、多くの生物的に活性 なペプチドは、補体の活性 化中に生成される。Vogt W.,1986,Complement 3:177。アナフィラトキシン、特 にＣ３ａおよびＣ５ａは好中球に化学走性があり、これらの細胞を凝集、活性化 そして脱顆粒させることができる。Vogt W.,1986,Complement 3:177；Goldstein IM,1992,In；Gallin JI,Goldstein IM,Snyderman R(編集)：炎症：基本的原理 および臨床的関連 (Inflammation:Basic Principles and Clinical Correlates) 、ニューヨーク、ラベン出版、第63頁。さらにアナフィラトキシンは脈管透過性 を増大させ、内皮細胞への好中球の付着を刺激し、血小板を活性化し、そして脈 管活性エイコサノイド、トロンボキサンＡ２ならびにＬＴＣ４、ＬＴＤ４および ＬＴＥ４のようなペプチドロイコトリエンの生成を誘導することができる。また 、共通経路の活性化の際に形成されるいわゆるターミナル補体複合体(terminal complement complexes:TCC)は、細胞を殺す能力のような重要な効果を有する。M uller-Eberhard H.J.,1986,Ann.Rev.Immunol.4:503。この補体の古典的経路の活 性化は、５つのタンパク質（１つのＣ１ｑ、２つのＣ１ｒ、そして２つのＣ１ｓ タンパク質）の巨大分子複合体から成る第一成分の活性化に始まる。Ｃ１複合体 のＣ１ｑタンパク質は、例えば免疫複合体のようなアクチベーターに結合し、両 方のＣ１ｒおよび両方のＣ１ｓ副成分の活性化を引き起こす。Cooper N.R.,1985 ,Adv.Immnol.37:151。活性化中、Ｃ１ｒおよびＣ１ｓタンパク質は単一ペプチド −鎖不活性タンパク質から二−鎖活性セリンプロテイナーゼに転換される。Coop er N.R.,1985,Adv.Immnol.37:151。活性化Ｃ１複合体は次に、補体因子Ｃ３を活 性化できる補体Ｃ４およびＣ２因子を活性化する。数種の血漿タンパク質（注目 すべきものはＣ１−エステラーゼインヒビター、Ｃ４−結合タンパク質およびセ リン−プロテイナーゼ因 子１）は、補体のこの古典的な経路の活性化を阻害できる。Muller-Eberhard H. J.,1992,In：Gallin JI,Goldstein IM,Snyderman R(編集)：炎症：基本的原理お よび臨床的関連 (Inflammation:Basic Principles and Clinical Correlates)、 ニューヨーク、ラベン出版、第33頁；Cooper N.R.,1985,Adv.Immnol.37:151。 本明細書に使用する“接触系”という句は１組のタンパク質を言い、これは不 活性な前駆タンパク質として血中を循環し、凝固またはカリクレイン−キニン系 の接触系としても知られている。Colman R.W.,1984,J.Clin.Invest.73:1249；Ka plan A.P.ら、1987、Blood 70:1；Kozin F.,ら、1992、In；Gallin JI,Goldstei n IM,Snyderman R(編集)：炎症：基本的原理および臨床的関連(Inflammation:Ba sic Principles and Clinical Correlates )、ニューヨーク、ラベン出版、第103 頁。接触系はまた、主要血漿カスケード系にも属し、そしてそれを通して凝固系 が活性化される２つの経路の１つと考えられることが多く、もう１方はいわゆる 凝固の非本質的経路である。接触系の生理学的役割は正確には知られていないが 、この系が炎症状態で活性化状態になりうることが知られている。Colman R.W., 1984,J.Clin．Invest.73:1249；Kaplan A.P.ら、1987、Blood 70:1；Kozin F.,ら 、1992、In；Gallin JI,Goldstein IM,Snyderman R(編集)：炎症：基本的原理お よび臨床的関連 (Inflammation:Basic Principles and Clinical Correlates)、 ニューヨーク、ラベン出版、第103頁。接触系の活性化はヘグマン因子としても 知られている第XII因子のアクチベーターへの結合から始まる。続いて、結合し た第XII因子は活性化状態になることができ、この工程中に一本鎖不活性状態か ら二本鎖活性セリンプロテイナーゼに転換する。Trans G.ら、1987,Sem Thromb Hemost 13:1。活性化した第XII因子は次にプレカリクレインを（これはそのコフ ィクターと一緒に高分子量キニノーゲンがアクチベーターに結合し）、活性セリ ンプロテイナーゼカリクレインに活性化する。次にカリクレインは結合を活性化 することができるが、活性化第XII因子（相互活性化）、および／または第XI因 子を未だに活性化せず、これは次に第IX因子を活性化し凝固の活性化を開始する 。Cochrane C.G.ら、1982,Adv.Immunol 33:290；Colman R.W.,1984,J.Clin．Inv est .73:1249；Kaplan A.P.ら、1987、Blood 70:1；Kozin F.,ら、1992、In；Gall in JI,Goldstein IM,Snyderman R(編集)：炎症：基本的原理および臨床的関連(I nflammation:Basic Principles and Clinical Correlates )、ニューヨーク、ラ ベン出版、第103頁。接触系の活性化は、古典的な補体経路も阻害する同じタン パク質、Ｃ１−エステラーゼインヒビターにより制御される。接触系の活性化中 、ブラディキニン、カリクレインおよび活性化第XII因子のような数種の生物学 的活性成分が形成され、これらは好中球の活性化および脱顆粒を増大させ、脈管 透過性を増大し、管脈張力を減少させることができる。Colman R.W.,1984,J.Cli n．Invest .73:1249；Kozin F.,ら、1992、In；Gallin JI,Goldstein IM,Snyderm an R(編集)：炎症：基本的原理および臨床的関連(Inflammation:Basic Principl es and Clinical Correlates )、ニューヨーク、ラベン出版、第103頁。 本明細書で使用する“Ｃ１−エステラーゼインヒビター”という句は、血中に 存在し、かつ補体の古典的経路および接触系の主要インヒビターであるタンパク 質を言う。Ｃ１−エステラーゼインヒビターは、補体の第一成分の活性状態およ び活性化第XII因子を阻害でき、そしてこれはカリクレインの主要なインヒビタ ーでもある。Schapira Mら、1985,Compl ement 2:111；Davis A.E.,1988,Ann,Rev.Immunol 6:595；Sim R.B.ら、1979,FEB S Lett .97:111；De Agostini A.ら、1984,J.Clin.Invest.73:1542；Pixley R.A. ら、1985，J.Biol.Chem.260:1723；Schapira Mら、J.Clin.Invest.69:462；Van der Graaf F.ら、1983,J.Clin.Invest.71:149；Harpel P.C.ら、1975,J.Clin.In vest .55:593。さらに、Ｃ１−エステラーゼインヒビターは活性化第XI因子、組 織型プラスミノーゲンアクチベーターおよびプラスミンを阻害できる。Meijers J.C.M.ら、1988,Biochemistry 27:959；Harpel P.C.ら、1975、J.Clin.Invest.5 5 :149；Booth N.A.ら、1987,Blood 69;1600。 Ｃ１−エステラーゼインヒビターは、これらのプロテイナーゼと安定な複合体 を形成することによりプロテイナーゼを阻害し、これらは迅速に循環から除かれ る。De Smet B.J.G.L.ら、1993,Blood 81:56。Ｃ１−エステラーゼインヒビター をコードする完全長のゲノムおよびｃＤＮＡはクローン化された。Bock S.C.ら 、1986,Biochemistry 25:4292：Carter P.E.ら、1988,Eur.J.Biochem.173:163。 機能的組換えＣ１−エステラーゼインヒビタータンパク質は、COS細胞中で発現 し、血漿タンパク質に類似するようであった。Eldering E.ら、1988,J.Biol.Che m 263:11776。さらに、反応中心のＰ１およびＰ３および／またはＰ５位にアミ ノ酸の突然変異を持つ組換えＣ１−エステラーゼインヒビターの幾つかの変更体 は、同じ系で発現した。Eldering E.ら、1988,J.Biol.Chem 263:11776；Elderin g E.ら、1993,J.Biol.Chem 267:7013：Eldering E.ら、1993,J.Clin.Invest.91: 1035;シータス社(Cetus Corp)の特許、米国特許第617920号明細書。さらに、遺 伝性の血管性水腫の患者から単離した変更体の中には、同じ系でクローン化され 、そして発現したものもあっ た。Davis A.ら、Nature Genetics 1:354。 Ｃ１−エステラーゼインヒビターは、セリンプロテイナーゼインヒビターとし て共に知られている同種タンパク質のスーパーファミリーに属し、セルピンとも 呼ばれる。Travis J.ら、1983,Ann.Rev.Biochem 52:655；Carrel R.W.ら、1985, Trends Bioch Sci 10：20。セルピンは類似する阻害機能を共有し、それは阻害 されるプロテイナーゼと安定な二分子複合体を形成することが特徴である。これ らの複合体では、プロテイナーゼの活性部位がいわゆるセルピンの反応中心に結 合し、したがって不活性となっている。Travis J.ら、1983,Ann.Rev.Biochem 52 :655。 セルピンはある種のプロテイナーゼに特異性を有し、そしてこの特異性は一部 反応中心のアミノ酸配列による。多くの研究で、例えば部位−特異的突然変異誘 発法によりインヒビターの反応中心および／または他の部分のアミノ酸配列を変 化させることで、セルピンの特異性を変化させることが可能であることが示され た。Owen M.C.ら、1983,New Eng J.Med 309:694；Carrel R.W.ら、1985,Trends Bioch Sci 10:20；Courtney M.ら、1985,Nature 313:77；George P.M.ら、Blood 73:49；Rubin H.ら、1990,J.Biol.Chem 265:1199；Holmes W.E.ら、1987,Bioch emistry 26:5133。活性化Ｃ１への特異性を持つＣ１−エステラーゼインヒビタ −以外のセルピンの組換え変異体は記載されていないが、そのようなインヒビタ ーも構築できることを予想するのは妥当である。 本明細書で使用する“急性心筋梗塞（“ＡＭ”）”という句は、心筋組織の壊 死により引き起こされる通常の臨床的症状を言う。この状態は当該技術分野でよ く知られており、そして多くの場合は前胸部の疼痛の発生、特徴的な心電計の変 化、ならびにクレアチニンホスホキナーゼ およびα-ヒドロキシブチル酸デヒドロゲナーゼのような壊死心臓組織から放出 される細胞内酵素の血漿レベルの上昇が特徴である。ＡＭＩは高血圧、循環機能 不全、肺水腫および不整脈に合併しうる。限定するわけではないがほとんどの場 合、ＡＭＩは管脈傷害および冠状動脈管の血栓から生じ、そして後にこれらの管 脈を閉塞させ、危機にさらされた心筋への血流障害をもたらす。Fuster Vら、19 92,New Eng J Med 326:242および310。ほとんどの場合、冠状動脈管の閉塞は病 歴、細胞内心筋酵素の血漿レベルの経過および心電計の変化から予想することが できる。II．Ｃ１−エステラーゼインヒビターの調製 血漿または精製調製物中のＣ１−エステラーゼインヒビター活性は、発色およ びエステル分解アッセイを含む数種のアッセイで測定でき、そのアッセイでは活 性Ｃ１ｓによる基質の転換の阻害を監視する。これらのアッセイは当該技術分野 で周知である。また固体−相結合活性Ｃ１ｓに結合するＣ１−エステラーゼイン ヒビターの結合をアッセイするラジオイムノアッセイも、機能的Ｃ１−エステラ ーゼインヒビターのレベルを測定するのに使用できる。Nuijens J.H.ら、1989,J .Clin.Invest 84;443。機能的Ｃ１−エステラーゼインヒビターのレベルは様々 な方法で発現できる。ここでミリリットルあたりの単位（U/ml）とは、１U/mlが プールした正常血漿中に存在するＣ１−エステラーゼインヒビター濃度で使用さ れる場合で、それは１mlの血漿あたり約270μgである。Nuijens J.H.ら、1989,J .Clin.Invest 84;443。 以下の状態のＣ１−エステラーゼインヒビターの分子の応用も本発明の範囲に 入るものとする：ヒトまたは動物あるいは他の任意の生物起源から精製された天 然のＣ１−エステラーゼインヒビター、またはそれに 由来する断片であり、生物活性を保持するもの；ヒトまたは動物の組換え天然Ｃ １−エステラーゼインヒビター、あるいはそれに由来する変異体または断片であ り、生物活性を保持するもの；あるいは補体の第一成分の活性化状態を阻害する ように工作された組換えインヒビター。 Ｃ１−エステラーゼインヒビター調製物を、医薬的に許容できる賦形剤に溶解 し、そして本発明の好適態様では静脈注射する。そのような賦形剤は当該技術分 野で周知であり、例えば水、塩水、デキストロース溶液、リンガー溶液および少 量のヒト血清アルブミンを含有する溶液を含む。もちろん、危機にさらされた心 筋中にこのインヒビターの十分な濃度を与えるために、Ｃ１−エステラーゼイン ヒビターのほとんどすべての投与法を本発明の範囲に含むことを意図するものと 考える。III．Ｃ１−エステラーゼインヒビターでの急性心筋梗塞の処置 本明細書に記載するＣ１−エステラーゼインヒビター調製物を単独または組み 合わせて、ＡＭＩにかかっている宿主生物、またはこの症状を発生する危険性の ある宿主生物の処置するために使用できる。 本発明の好適な態様では、冠状動脈管の閉塞後、最初の２４時間中に危機にさ らされた心筋中に十分量のＣ１−エステラーゼインヒビターを与えるために、Ｃ １−エステラーゼインヒビターはＡＭＩ患者に静脈注射により投与される。ほと んどの場合、これは機能的Ｃ１−エステラーゼインヒビターの血清レベルが2−2 .5U/mlになるまで、Ｃ１−エステラーゼインヒビターを投与することにより行う ことができる。ほとんどの患者について、体重kgあたり30−40UのＣ１−エステ ラーゼインヒビターを、例えば患者が病院に来た時と６時間後の各々２回に投与 することでこの血漿レベルに達するだろう。細胞内心臓酵素または心電計の変 化の経過により表されるような心筋組織の壊死が進行している臨床的および生化 学的症例の場合には、さらにＣ１−エステラーゼインヒビターを与えることがで きる。Ｃ１−エステラーゼインヒビター療法は、ＡＭＩの発生と病院への入院の 間に時間が経過したために、すでに再潅流療法を受けることができない患者に施 すことができる。 補体系の活性化は、永久的な冠状動脈管の閉鎖による心筋組織傷害のためだけ でなく、冠状動脈血管形成術または血栓崩壊剤の処置後の虚血性組織の再潅流に より引き起こされた心筋組織傷害のためにも、貢献する。したがって、ＡＭＩ患 者を、冠状動脈管を再度開くための内科的または外科的処置を受けているか、い ないかとは無関係にＣ１−エステラーゼインヒビターで処置できる。典型的には 、患者はＡＭＩのために病院に入院している。適当な場合には患者は血栓崩壊療 法または急性の経皮的トランスルミナル(transluminal)冠状動脈血管形成術を受 けることができ、この手法は当該技術分野で周知であり、そして同時にＣ１−エ ステラーゼインヒビターを体重1kgあたり30−40Uの投与量で静脈注射することが できる。この後に、その6時間後に同様濃度のＣ１−エステラーゼインヒビター の第二投与を行うことかできる。本発明の別の態様ではＣ１−エステラーゼイン ヒビター投与療法を、血管形成術または血栓崩壊療法を受けていないＡＭＩ患者 に行うことができる。典型的にはそのような患者に入院時にＣ１−エステラーゼ インヒビターを体重1kgあたり30−40Uの投与量で静脈注射することができ、その 6時間後にこの投与をくり返すことができる。 冠状動脈管の部分的閉塞患者は、経皮的トランスルミナル(transluminal)冠状 動脈血管形成術のような医学的治療を受けることができ、こ れは冠状動脈管の一時的完全閉塞が付随する。危機にさらされた心筋の再潅流は 、心筋脈管の機能に影響を与え得る炎症反応を伴うことがある。本発明の範囲に はこのような患者にＣ１−エステラーゼインヒビターを体重1kgあたり30−40Uの 投与量で一回静脈注射することにより、予防的処置を施すことを意図している。 出願人は発明の意図するところを記載してきたが、以下の実施例は本発明を説 明するものである。実施例は本発明を説明し、制限するものではない。実施例１ 本発明の好適態様では、治療用組成物はVoogelaar E.F.ら、1974,Vox Sang.26 :118に従い調製した血漿-由来Ｃ１−エステラーゼインヒビターを有効成分とし て含む。この調製物のウイルス安全性は、Ｂ型肝炎−免疫グロブリンの添加およ び最終容器中の凍結乾燥調製物の加熱処理により保証されている。Brummelhuis H.G.J.ら、1983,Vox Sang. 45:205、Tersmetteら、1986,Vox Sang.51：239。Ｃ １−エステラーゼインヒビターは以下の精製工程を含む方法に従い、ヒト血漿、 放血ビタミンＫ−依存性凝固因子から調製する：１）出発血漿を滅菌蒸留水で1 −10希釈した；２）希釈血漿をDEAE-Sephadex A50(ファルマシア ファインケミ カルズ:Pharmacia Fine Chemicals：ウプサラ、スウェーデン)と、2g/kgの濃度 で60分間、8−10℃でインキューベーションする；３）DEAE-Sephadexを回収し、 そして150mMのクエン酸ナトリウム、pH7.0で洗浄し、そして10mMのクエン酸三ナ トリウム、2Mの塩化ナトリウム、pH7.0で溶出し、；４）硫酸アンモニウムを溶 出液に加えて、最終濃度50％とし、重量／重量；５）13,000rpmでの遠心後、硫 酸アンモニウムを上清に加え て最終濃度65％とし、重量／重量；６）沈殿を遠心により回収し、そして10mMの クエン酸三ナトリウム、pH7.0に溶解し;７）硫酸アンモニウムを除去するために ダイアフィルトレーションを行い、そして溶液濃度を40−50mg/mlのタンパク質 濃度に濃縮し；８）Ｂ型肝炎免疫グロブリンを加え(0−4IU/ml)、溶液を0.22μm フィルターに通し、容器に分割し、そして凍結乾燥し；９）凍結乾燥生成物を60 ℃で72時間加熱処理する。 本発明の好適態様では、Ｃ１−エステラーゼインヒビターは静脈注射で投与さ れる。非経口的投与には、凍結乾燥加熱処理Ｃ１−エステラーゼインヒビターを 注射用水に溶解する。機能的Ｃ１−エステラーゼインヒビターの投与用調製物中 の最終濃度は、約50U/mlであることができる。実施例２ ＡＭＩに動物モデルを使用することは当該技術分野でよく知られている。研究 者によく使用されるモデルは、左前方下行冠状動脈（LAD）を閉塞したイヌにＡ ＭＩを誘発することである。ＡＭＩの治療的処置としてＣ１−エステラーゼイン ヒビターを投与する有用性は、このモデルを使用して説明される。このモデルの 実験的詳細はいたるところに与えられている。Hermens W.Thら、1990,Circulati on 81:549。 適当な前投薬および麻酔後に、いずれかの性別のMongrelドッグに開胸を行っ た。次にすでに第一対角枝の遠位に切開したLADのまわりに係蹄(Mersilene;3メ ートル)を置き、2cm外側に引くことによりLADの完全な結紮を引き起こすように ポリエチレンチューブを取り付けた。さらに、カテーテル(Tygon 5 50 HL1)を微 小球注入のために左心房の心耳を通して挿入し、血液試料を採取し、そして薬剤 を投与した。胸部を閉じ、そしてイヌを回復させた。１週間後、イヌに適当な投 薬を行った後LAD をポリエチレンチューブの外2cmの係蹄を引っ張ることにより閉塞させた。閉塞 を心電計および実験の最後で閉塞のサイズを診察することにより確認した。様々 な時間間隔で、種々のアイソトープで標識した3−5×10⁶のトレーサミクロスフ ェア(ニューイングランド ヌクレアー社：New England Nuclear Corp;直径15μ m)を注射することにより、局部的心筋流を測定した。40時間後、動物をペンタバ ルビタールナトリウムを過剰投与することにより屠殺した。心臓を摘出し、すす いで、さらなる工程に供した。右心室を取り出し、左を基部から頂に1−2cm厚の ５薄片に切断した。これらの薄片を全部で108片に切断した。各片の重量を測定 した。組織の各片中の細胞内酵素α−ヒドロキシブチル酸デヒドロゲナーゼなら びにトレーサーミクロスフェアの放射活性を測定した。閉塞後の障害局所心筋流 と心筋細胞傷害との間の関係は、各片中の閉塞１５分後に注入したミクロスフェ アの活性を残存β−ヒドロキシブチレートに対してプロットすることにより視覚 化することができる。LADの永久的閉塞を受けた非処置のイヌでは、閉塞15分後 の局所心筋流と48時間後の心筋細胞傷害に直線的関係が存在する（図１および２ 、左図）。この関連性は、LADの永久的閉塞を受け、そして閉塞2および8時間後 にＣ１−エステラーゼインヒビターを体重kgあたり35Uの投与量で静脈注射して 処置したイヌでは変化する。これらの後者の動物では、閉塞15分後の局所心筋流 に基づき予想されるよりも有意に多い残存β−ヒドロキシブチレート活性が特に 心臓内の組織片のような心筋組織片に見いだされ（図１および２、右図）、Ｃ１ −エステラーゼインヒビターのイヌへの投与がLADの永久的閉塞後の心筋細胞傷 害を有意に減少させることを説明している。同様に、LADの永久的閉塞を受けた 非処置の動物では、閉塞15 分後と48時間後と間の局所心筋流に直線的関連性がある（図３および４、左図） 。永久的なLADの閉塞を受けたイヌのＣ１−エステラーゼインヒビター処置は、 閉塞15分後の局所心筋流に基づき予想されるよりも良好な48時間後の流れを伴い （(図３および４、左図)、これはＣ１−エステラーゼインヒビターの治療が危機 にさらされた心筋中の局所的血流を部分的に再生できることを示している。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．外因性Ｃ１−エステラーゼインヒビターを単独で、または他の薬剤と組み合 わせて、急性心筋梗塞の患者または急性心筋梗塞の危険性のある患者に投与する ことを含んで成る、急性心筋梗塞の治療的または予防的処置法。 ２．上記Ｃ１−エステラーゼインヒビターが心筋細胞傷害を減少するのに十分な 量で投与される、請求の範囲第１項に記載の方法。 ３．上記Ｃ１−エステラーゼインヒビターが、通常体重ｋｇあたり３０−４０Ｕ の範囲の量で静脈注射される、請求の範囲第１項に記載の方法。 ４．上記Ｃ１−エステラーゼインヒビターが、ヒト血漿から精製されたＣ１−エ ステラーゼインヒビターである、請求の範囲第１項に記載の方法。 ５．上記Ｃ１−エステラーゼインヒビターがヒト血漿から精製され、その後Ｃ１ −エステラーゼインヒビター活性を維持して化学的または他の操作により修飾さ れたＣ１−エステラーゼインヒビターである、請求の範囲第１項に記載の方法。 ６．上記Ｃ１−エステラーゼインヒビターが、動物血漿から精製されたＣ１−エ ステラーゼインヒビターである、請求の範囲第１項に記載の方法。 ７．上記Ｃ１−エステラーゼインヒビターが動物血漿から精製され、その後Ｃ１ −エステラーゼインヒビター活性を維持して化学的または他の操作により修飾さ れたＣ１−エステラーゼインヒビターである、請求の範囲第１項に記載の方法。 ８．上記Ｃ１−エステラーゼインヒビターが、血漿以外のヒト生体物質 から精製されたＣ１−エステラーゼインヒビターである、請求の範囲第１項に記 載の方法。 ９．上記Ｃ１−エステラーゼインヒビターが血漿以外のヒト生体物質から精製さ れ、その後Ｃ１−エステラーゼインヒビター活性を維持して化学的または他の操 作により修飾されたＣ１−エステラーゼインヒビターである、請求の範囲第１項 に記載の方法。 １０．上記Ｃ１−エステラーゼインヒビターが、血漿以外の動物生体物質から精 製されたＣ１−エステラーゼインヒビターである、請求の範囲第１項に記載の方 法。 １１．上記Ｃ１−エステラーゼインヒビターが血漿以外の動物生体物質から精製 され、その後Ｃ１−エステラーゼインヒビター活性を維持して化学的または他の 操作により修飾されたＣ１−エステラーゼインヒビターである、請求の範囲第１ 項に記載の方法。 １２．上記Ｃ１−エステラーゼインヒビターが組換えＣ１−エステラーゼインヒ ビターである、請求の範囲第１項に記載の方法。 １３．上記Ｃ１−エステラーゼインヒビターがＣ１−エステラーゼインヒビター 活性を維持して化学的または他の操作により修飾された組換えＣ１−エステラー ゼインヒビターである、請求の範囲第１項に記載の方法。 １４．上記Ｃ１−エステラーゼインヒビターがＣ１−エステラーゼインヒビター 活性がすでに維持されている、組換えＣ１−エステラーゼインヒビターの変異体 である、請求の範囲第１項に記載の方法。 １５．上記Ｃ１−エステラーゼインヒビターが、Ｃ１−エステラーゼインヒビタ ー活性を維持して化学的または他の操作により修飾された組換 えＣ１−エステラーゼインヒビターの変更体である、請求の範囲第１項に記載の 方法。 １６．上記Ｃ１−エステラーゼインヒビターがＣ１−エステラーゼインヒビター 活性を生じるように突然変異させた、Ｃ１−エステラーゼインヒビター以外の組 換えプロテイナーゼインヒビターである、請求の範囲第１項に記載の方法。 １７．上記Ｃ１−エステラーゼインヒビターがＣ１−エステラーゼインヒビター 活性を生じるように突然変異され、そしてＣ１−エステラーゼインヒビター活性 を維持して化学的または他の操作により修飾された、Ｃ１−エステラーゼインヒ ビター以外の組換えプロテイナーゼインヒビターである、請求の範囲第１項に記 載の方法。 １８．上記Ｃ１−エステラーゼインヒビターが、組織プラスミノーゲンアクチベ ーター、ウロキナーゼまたはストレプトキナーゼのような心筋への血流を向上さ せる物質と組み合わせて投与される、請求の範囲第１項に記載の方法。 １９．上記Ｃ１−エステラーゼインヒビターが、酸素ラジカルスカベンジャーま たはサイトカイン拮抗薬のような抗炎症性を有する物質と組み合わせて投与され る、請求の範囲第１項に記載の方法。 ２０．急性心筋梗塞の予防的または治療的処置に使用するための医薬組成物を調 製するために、Ｃ１−エステラーゼインヒビターの単独、または他の薬剤と組み 合わせた使用。 ２１．Ｃ１−エステラーゼインヒビター、医薬的に許容できるキャリアー、およ び心筋への血流を向上させることができる物質または抗炎症性を有する物質のい ずれか、あるいはその両方を含んで成る医薬組成物。