JP3113787B2 - 脳梗塞予防治療剤 - Google Patents
脳梗塞予防治療剤Info
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- JP3113787B2 JP3113787B2 JP06340208A JP34020894A JP3113787B2 JP 3113787 B2 JP3113787 B2 JP 3113787B2 JP 06340208 A JP06340208 A JP 06340208A JP 34020894 A JP34020894 A JP 34020894A JP 3113787 B2 JP3113787 B2 JP 3113787B2
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- Japan
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- apc
- cerebral infarction
- cerebral
- blood
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は活性化プロテインＣ(以
下、ＡＰＣと称することがある)を有効成分として含有
する脳梗塞予防、治療用製剤に関するものである。
下、ＡＰＣと称することがある)を有効成分として含有
する脳梗塞予防、治療用製剤に関するものである。
【０００２】
【従来の技術並びに発明が解決しようとする課題】脳出
血、脳梗塞あるいはクモ膜下出血等の脳血管疾患は、Ｃ
Ｔスキャナーの普及、ＭＲＩの使用等による鑑別診断が
進み死亡率は減少しているものの、これらの疾患が関与
するわが国の年間推定死亡数は約１２万人と世界的にみ
ても高いレベルにある。また、致死的脳卒中の減少と共
に後遺症を伴う患者数が増加していることから、これか
らの治療は生命予後のみではなく、機能予後を考慮する
必要があり、特に急性期の治療の重要性が叫ばれてい
る。
血、脳梗塞あるいはクモ膜下出血等の脳血管疾患は、Ｃ
Ｔスキャナーの普及、ＭＲＩの使用等による鑑別診断が
進み死亡率は減少しているものの、これらの疾患が関与
するわが国の年間推定死亡数は約１２万人と世界的にみ
ても高いレベルにある。また、致死的脳卒中の減少と共
に後遺症を伴う患者数が増加していることから、これか
らの治療は生命予後のみではなく、機能予後を考慮する
必要があり、特に急性期の治療の重要性が叫ばれてい
る。
【０００３】脳梗塞は、脳血栓と脳塞栓に大きく分ける
ことができる。脳血栓の形成は、脳底動脈、Ｗｉｌｌｉ
ｓ輪あるいはその分枝の高度の動脈硬化を基盤とする。
一般に動脈内面が内皮細胞より被覆されている限り血小
板の付着はまれで、血小板とフィブリンを主体とする白
色血栓の形成は通常観られない。しかし、高血圧あるい
は血液の乱(渦)流による内皮細胞の障害、内皮下組織の
露出、動脈壁トロンボプラスチン活性の亢進、フィブリ
ン融解能の低下などが直接の誘引となり、血小板の付着
・凝集が生じると、フィブリンや血球なども参加して血
栓は成長する。動脈内腔を閉塞すれば脳血栓症となり、
また壁在血栓の一部が崩壊し、小片となって末梢の小動
脈を閉塞すれば一過性脳虚血性発作(transient ischemi
c attack,ＴＩＡ)の一因となる。
ことができる。脳血栓の形成は、脳底動脈、Ｗｉｌｌｉ
ｓ輪あるいはその分枝の高度の動脈硬化を基盤とする。
一般に動脈内面が内皮細胞より被覆されている限り血小
板の付着はまれで、血小板とフィブリンを主体とする白
色血栓の形成は通常観られない。しかし、高血圧あるい
は血液の乱(渦)流による内皮細胞の障害、内皮下組織の
露出、動脈壁トロンボプラスチン活性の亢進、フィブリ
ン融解能の低下などが直接の誘引となり、血小板の付着
・凝集が生じると、フィブリンや血球なども参加して血
栓は成長する。動脈内腔を閉塞すれば脳血栓症となり、
また壁在血栓の一部が崩壊し、小片となって末梢の小動
脈を閉塞すれば一過性脳虚血性発作(transient ischemi
c attack,ＴＩＡ)の一因となる。
【０００４】一方、脳塞栓は、脳以外の血管内に形成さ
れた血栓が血流により運ばれて、脳血管を栓塞するもの
で、血栓源としてはリウマチ性心疾患、不整脈、心筋
症、僧帽弁逸脱症などの心疾患由来が多い。最近は、生
活習慣の欧米化に伴い血栓源として虚血性心疾患や頭蓋
外動脈病変の増加が観られている。
れた血栓が血流により運ばれて、脳血管を栓塞するもの
で、血栓源としてはリウマチ性心疾患、不整脈、心筋
症、僧帽弁逸脱症などの心疾患由来が多い。最近は、生
活習慣の欧米化に伴い血栓源として虚血性心疾患や頭蓋
外動脈病変の増加が観られている。
【０００５】現在、脳梗塞の治療方法としては、おおま
かに、血栓形成に第一義的に関与する血小板凝集を阻止
する方法(アスピリン、ジピリダモール、チクロピジン
など、抗血小板薬)、その凝集を進展させ、血栓をより
強固なものとするフィブリン形成を抑制する方法(ヘパ
リン、ワーファリン、など抗凝血薬)、さらに一旦形成
された血栓、特にフィブリンを溶解し血行再開を図ろう
とする血栓溶解療法(ウロキナーゼ、ストレプトキナー
ゼ、組織プラスミノーゲンアクチベータなど血栓溶解
薬)が実施されている。しかし、いずれも出血傾向をき
たすため、その投与は慎重になされなければならない。
加えて、これらの療法は梗塞によって生じた虚血性の炎
症病変に対しては何等効果はなく、実際の臨床効果も充
分なものではない。
かに、血栓形成に第一義的に関与する血小板凝集を阻止
する方法(アスピリン、ジピリダモール、チクロピジン
など、抗血小板薬)、その凝集を進展させ、血栓をより
強固なものとするフィブリン形成を抑制する方法(ヘパ
リン、ワーファリン、など抗凝血薬)、さらに一旦形成
された血栓、特にフィブリンを溶解し血行再開を図ろう
とする血栓溶解療法(ウロキナーゼ、ストレプトキナー
ゼ、組織プラスミノーゲンアクチベータなど血栓溶解
薬)が実施されている。しかし、いずれも出血傾向をき
たすため、その投与は慎重になされなければならない。
加えて、これらの療法は梗塞によって生じた虚血性の炎
症病変に対しては何等効果はなく、実際の臨床効果も充
分なものではない。
【０００６】そこで、本発明者らは脳梗塞予防、治療剤
を開発すべく鋭意研究した結果、ＡＰＣが脳梗塞の予
防、治療剤として、人間その他の動物に適応できること
をみいだし、この発見に基づいて本発明を完成するに至
った。本願発明においては、従来、脳梗塞の治療に対し
て試みられることのなかったＡＰＣを用い、実際に疾患
モデル動物での生体内投与によってＡＰＣの脳梗塞予
防、治療薬としての効果を確認した点に大きな特徴を有
する。
を開発すべく鋭意研究した結果、ＡＰＣが脳梗塞の予
防、治療剤として、人間その他の動物に適応できること
をみいだし、この発見に基づいて本発明を完成するに至
った。本願発明においては、従来、脳梗塞の治療に対し
て試みられることのなかったＡＰＣを用い、実際に疾患
モデル動物での生体内投与によってＡＰＣの脳梗塞予
防、治療薬としての効果を確認した点に大きな特徴を有
する。
【０００７】ＡＰＣは、２本鎖からなる分子量６２,０
００の抗凝固作用を有するセリンプロテアーゼである。
このＡＰＣは通常その前駆体であるプロテインＣ(以
下、ＰＣと称することがある)として血中に存在する
が、いったん凝固系が作動すると生じたトロンビンによ
り限定分解を受け、酵素活性を発現する。ＡＰＣは、細
胞膜リン脂質に結合した血液凝固系の活性化された第VI
II因子(ＦVIIIa)及び第Ｖ因子(ＦＶa)を選択的に限定分
解、失活させ、強力な抗凝固作用を発揮する(Biochemis
try,16, p.5824-5831(1977)、J.Biol.Chem.，258, p.19
14-1920(1982))。また、血管内皮細胞、あるいは血小板
由来の組織プラスミノーケ゛ン・アクチベータ・インヒビ
ター(ＰＡＩ)が、ＡＰＣで中和されることにより、相対
的にプラスミノーゲン・アクチベータ(ｔ-ＰＡ)が増加す
ることが指摘され、ＡＰＣは線溶系にも深く関与してい
ることが示唆されている(Proc.Natl.Acad.Sci.USA,82,
p.1121-1125(1985))。ＡＰＣには上述のように抗凝固作
用、ＰＡＩ中和作用の保有が知られているが、下記実施
例で示すように、脳血管障害に対する作用、血管透過性
抑制作用、浮腫抑制作用の保有も明らかになった。
００の抗凝固作用を有するセリンプロテアーゼである。
このＡＰＣは通常その前駆体であるプロテインＣ(以
下、ＰＣと称することがある)として血中に存在する
が、いったん凝固系が作動すると生じたトロンビンによ
り限定分解を受け、酵素活性を発現する。ＡＰＣは、細
胞膜リン脂質に結合した血液凝固系の活性化された第VI
II因子(ＦVIIIa)及び第Ｖ因子(ＦＶa)を選択的に限定分
解、失活させ、強力な抗凝固作用を発揮する(Biochemis
try,16, p.5824-5831(1977)、J.Biol.Chem.，258, p.19
14-1920(1982))。また、血管内皮細胞、あるいは血小板
由来の組織プラスミノーケ゛ン・アクチベータ・インヒビ
ター(ＰＡＩ)が、ＡＰＣで中和されることにより、相対
的にプラスミノーゲン・アクチベータ(ｔ-ＰＡ)が増加す
ることが指摘され、ＡＰＣは線溶系にも深く関与してい
ることが示唆されている(Proc.Natl.Acad.Sci.USA,82,
p.1121-1125(1985))。ＡＰＣには上述のように抗凝固作
用、ＰＡＩ中和作用の保有が知られているが、下記実施
例で示すように、脳血管障害に対する作用、血管透過性
抑制作用、浮腫抑制作用の保有も明らかになった。
【０００８】本発明に使用されるＡＰＣを製造する方法
は特に限定されていないが、例えばヒト血液より分離し
た、あるいは遺伝子組換え技術により得たＰＣを活性化
する方法、ヒト血液よりＡＰＣを分離する方法、あるい
は遺伝子組換え技術により直接ＡＰＣを調製する方法な
どによって製造することができる。ＰＣからＡＰＣへの
活性化の方法には特に制約はなく、例えばヒトやウシな
どの血液より分離したトロンビンにより活性化する方
法、あるいは蛇毒により活性化する方法などにより実施
できる。
は特に限定されていないが、例えばヒト血液より分離し
た、あるいは遺伝子組換え技術により得たＰＣを活性化
する方法、ヒト血液よりＡＰＣを分離する方法、あるい
は遺伝子組換え技術により直接ＡＰＣを調製する方法な
どによって製造することができる。ＰＣからＡＰＣへの
活性化の方法には特に制約はなく、例えばヒトやウシな
どの血液より分離したトロンビンにより活性化する方
法、あるいは蛇毒により活性化する方法などにより実施
できる。
【０００９】血液由来のＡＰＣの製法としては、以下の
方法が挙げられる。例えば、ヒト血漿から抗ＰＣ抗体を
用いたアフィニテイークロマトグラフィーにより精製さ
れたＰＣを、ヒトトロンビンで活性化した後、陽イオン
クロマトグラフィーを用いて精製する方法(Blood, 63,
p.115-121(1984))、あるいはKisielによる、ヒト血漿か
らクエン酸Ｂａ吸着・溶出、硫酸アンモニュウム画分
化、ＤＥＡＥ-セファデックスカラムクロマトグラフィ
ー、デキストラン硫酸アガロースクロマトグラフィー及
びポリアクリルアミドゲル電気泳動の工程により精製し
て得られたＰＣを活性化してＡＰＣとする方法(J.Clin.
Invest.,64,p.761-769(1979))、あるいは市販のＰＣを
含有する血液凝固製剤をTayer等の方法(J.Clin.Inves
t.,79,p.918-925(1987))で活性化してＡＰＣとする方法
などがある。また、遺伝子組換え技術を用いてＡＰＣを
調製する方法としては、例えば特開昭６１-２０５４８
７号、特開昭６２-１１１６９０号、特開平２-２３３８
号あるいは特開昭６４-８５０８４号などに記載された
方法などがある。
方法が挙げられる。例えば、ヒト血漿から抗ＰＣ抗体を
用いたアフィニテイークロマトグラフィーにより精製さ
れたＰＣを、ヒトトロンビンで活性化した後、陽イオン
クロマトグラフィーを用いて精製する方法(Blood, 63,
p.115-121(1984))、あるいはKisielによる、ヒト血漿か
らクエン酸Ｂａ吸着・溶出、硫酸アンモニュウム画分
化、ＤＥＡＥ-セファデックスカラムクロマトグラフィ
ー、デキストラン硫酸アガロースクロマトグラフィー及
びポリアクリルアミドゲル電気泳動の工程により精製し
て得られたＰＣを活性化してＡＰＣとする方法(J.Clin.
Invest.,64,p.761-769(1979))、あるいは市販のＰＣを
含有する血液凝固製剤をTayer等の方法(J.Clin.Inves
t.,79,p.918-925(1987))で活性化してＡＰＣとする方法
などがある。また、遺伝子組換え技術を用いてＡＰＣを
調製する方法としては、例えば特開昭６１-２０５４８
７号、特開昭６２-１１１６９０号、特開平２-２３３８
号あるいは特開昭６４-８５０８４号などに記載された
方法などがある。
【００１０】上述の方法で調製されたＡＰＣの活性を最
大限に維持するために、本発明のＡＰＣは新鮮である
か、４℃で保存する場合には保存後約５日以内のものが
好ましい。あるいは、本発明のＡＰＣは好適な安定化剤
と共に凍結乾燥して保存することができるし、さらに
は、ＡＰＣ溶液を凍結し保存することも可能である。本
発明では、かかる有効成分としてのＡＰＣと公知の適当
な賦形剤を組み合わせ、公知の方法で本発明の脳梗塞治
療用製剤とすることができる。ＡＰＣの有効投与量は、
例えば投与対象者の年齢、症状及び重症度などにより変
動するものであり、最終的には医師もしくは獣医師の意
図により変動するものである。ＡＰＣの有効投与量は、
例えば一般に成人一日当り５,０００〜５０,０００Ｕで
あり、望ましくは１０,０００〜３０,０００Ｕを１〜２
回に分けて投与するのがよい。投与方法は単回大量(ボ
ラス)あるいは点滴の静脈内投与が最適である。なお、
ここで言う１Ｕとは、正常ヒト血漿の活性化部分トロン
ボプラスチン時間(ＡＰＴＴ)を２倍に延長する量を意味
するものである。
大限に維持するために、本発明のＡＰＣは新鮮である
か、４℃で保存する場合には保存後約５日以内のものが
好ましい。あるいは、本発明のＡＰＣは好適な安定化剤
と共に凍結乾燥して保存することができるし、さらに
は、ＡＰＣ溶液を凍結し保存することも可能である。本
発明では、かかる有効成分としてのＡＰＣと公知の適当
な賦形剤を組み合わせ、公知の方法で本発明の脳梗塞治
療用製剤とすることができる。ＡＰＣの有効投与量は、
例えば投与対象者の年齢、症状及び重症度などにより変
動するものであり、最終的には医師もしくは獣医師の意
図により変動するものである。ＡＰＣの有効投与量は、
例えば一般に成人一日当り５,０００〜５０,０００Ｕで
あり、望ましくは１０,０００〜３０,０００Ｕを１〜２
回に分けて投与するのがよい。投与方法は単回大量(ボ
ラス)あるいは点滴の静脈内投与が最適である。なお、
ここで言う１Ｕとは、正常ヒト血漿の活性化部分トロン
ボプラスチン時間(ＡＰＴＴ)を２倍に延長する量を意味
するものである。
【００１１】脳梗塞治療薬としてＡＰＣを使用する場
合、ＡＰＣを単独で投与することもできるし、ｔ-ＰＡ
などの線溶療法薬との併用投与も効果を増大させるため
の有効な手段として期待できる。本件発明のＡＰＣ含有
製剤は、患者が脳梗塞発作を起こした直後から投与され
ることが最も効果的である。ＡＰＣの特徴の一つとして
出血傾向をきたさないことから、脳出血をきたし易い脳
塞栓患者にも安心して投与できる。
合、ＡＰＣを単独で投与することもできるし、ｔ-ＰＡ
などの線溶療法薬との併用投与も効果を増大させるため
の有効な手段として期待できる。本件発明のＡＰＣ含有
製剤は、患者が脳梗塞発作を起こした直後から投与され
ることが最も効果的である。ＡＰＣの特徴の一つとして
出血傾向をきたさないことから、脳出血をきたし易い脳
塞栓患者にも安心して投与できる。
【００１２】今回の実施例に使用した血液由来のＡＰＣ
は、マウスでの単回静脈内投与毒性試験、反復静脈内投
与毒性試験、一般薬理試験(ビーグル犬を用いた呼吸循
環器系に及ぼす影響)、ウイルス不活化試験などにより
その安全性が確認されている。さらに汎発性血管内血液
凝固症候群(ＤＩＣ)を適応症とした臨床試験も実施され
ておりヒトでの安全性も確認されている。
は、マウスでの単回静脈内投与毒性試験、反復静脈内投
与毒性試験、一般薬理試験(ビーグル犬を用いた呼吸循
環器系に及ぼす影響)、ウイルス不活化試験などにより
その安全性が確認されている。さらに汎発性血管内血液
凝固症候群(ＤＩＣ)を適応症とした臨床試験も実施され
ておりヒトでの安全性も確認されている。
【００１３】以下、実施例に沿って本発明をさらに詳細
に説明するが、これら実施例は本発明の範囲を限定する
ものではない。
に説明するが、これら実施例は本発明の範囲を限定する
ものではない。
【００１４】
【実施例】ＡＰＣ投与による脳梗塞化軽減、脳浮腫軽
減、脳梗塞巣縮小、脳梗塞に伴う神経症状の軽減効果が
以下の実施例により確認できた。
減、脳梗塞巣縮小、脳梗塞に伴う神経症状の軽減効果が
以下の実施例により確認できた。
【００１５】実施例 １ 本実験は、一過性脳虚血発作から脳梗塞(特に血栓性脳
梗塞)への移行を想定したモデルとして、また脳虚血時
における遊離脂肪酸(主にアラキドン酸)による血管内皮
細胞障害を反映するモデルとして確立されている方法(N
EUROLOGY,26,p.297-304(1976)、Microbiol Immunol.,22,
p.89-101(1978)、Folia pharmacol.Japon.,92,p.193-200
(1988))を参考にして実施されたものであり、脳血栓モ
デルとして最適な評価系と考えられる。
梗塞)への移行を想定したモデルとして、また脳虚血時
における遊離脂肪酸(主にアラキドン酸)による血管内皮
細胞障害を反映するモデルとして確立されている方法(N
EUROLOGY,26,p.297-304(1976)、Microbiol Immunol.,22,
p.89-101(1978)、Folia pharmacol.Japon.,92,p.193-200
(1988))を参考にして実施されたものであり、脳血栓モ
デルとして最適な評価系と考えられる。
【００１６】ウサギ(日本白色種、雄、体重:２.０〜２.
５ｋｇ)を背位に固定し、頸部を切開、左外頸動脈より
外頸・内頸動脈分岐部までポリエチレンカニュ−レを逆
行性に挿入した。ＡＰＣ(血液由来のＡＰＣ:陰イオン交
換処理及びイムノアフィニテイークロマトグラフィーの
方法を用いて血漿から精製したＰＣをトロンビンで活性
化して得た)２０００Ｕ／ｋｇをウサギ耳静脈内に投与
し５分後、このカニューレを介してアラキドン酸(Ｓｉ
ｇｍａ社製)２.５ｍｇ／ｍｌ、０.４ｍｌを内頸動脈に
一定の速度で注入し、２４時間後の行動(斜頸、転倒)、
死亡率を観察した。また脱血、致死後脳を摘出し、視交
叉を基点として冠状切片を作製して、ＴＴＣ染色、ホル
マリン固定後、梗塞巣の解析を行なった。またアラキド
ン酸注入５分後に２％エバンスブルー溶液を１ｍｌ／ｋ
ｇ注入し、アラキドン酸注入１時間後に脱血致死させ、
脳を摘出した。脳の左・右半球を分離して湿重量測定、
エバンスブル−定量により評価した。ＴＴＣ染色および
組織学的観察では注入側(左)半球の視床下部を中心に視
床、大脳皮質などに梗塞巣、壊死巣が観られた。なかに
は脳軟化に至る例も観られた。
５ｋｇ)を背位に固定し、頸部を切開、左外頸動脈より
外頸・内頸動脈分岐部までポリエチレンカニュ−レを逆
行性に挿入した。ＡＰＣ(血液由来のＡＰＣ:陰イオン交
換処理及びイムノアフィニテイークロマトグラフィーの
方法を用いて血漿から精製したＰＣをトロンビンで活性
化して得た)２０００Ｕ／ｋｇをウサギ耳静脈内に投与
し５分後、このカニューレを介してアラキドン酸(Ｓｉ
ｇｍａ社製)２.５ｍｇ／ｍｌ、０.４ｍｌを内頸動脈に
一定の速度で注入し、２４時間後の行動(斜頸、転倒)、
死亡率を観察した。また脱血、致死後脳を摘出し、視交
叉を基点として冠状切片を作製して、ＴＴＣ染色、ホル
マリン固定後、梗塞巣の解析を行なった。またアラキド
ン酸注入５分後に２％エバンスブルー溶液を１ｍｌ／ｋ
ｇ注入し、アラキドン酸注入１時間後に脱血致死させ、
脳を摘出した。脳の左・右半球を分離して湿重量測定、
エバンスブル−定量により評価した。ＴＴＣ染色および
組織学的観察では注入側(左)半球の視床下部を中心に視
床、大脳皮質などに梗塞巣、壊死巣が観られた。なかに
は脳軟化に至る例も観られた。
【００１７】
【表１】 行動:斜頸、転倒の強さの程度を４段階で表した。
【００１８】
【表２】 a: p＜0.05 対 対照群(Student's t-test) b: p＜0.02 対 APC 群(Student's t-test) c: p＜0.05 対 APC 群(Welch test)
【００１９】
【表３】 a: p＜0.05 対 対照群(Welch t-test) 浮腫率(％)＝(左(梗塞巣)W−右W)×１／右W×１００
W:湿重量
W:湿重量
【００２０】表１、２、３いずれにおいても、ＡＰＣの
前投与により脳梗塞化軽減、脳血管透過性亢進の抑制効
果、それに伴う脳浮腫の軽減効果が確認できた。このこ
とは、ＡＰＣの脳梗塞における脳血管障害防止、浮腫、
梗塞発生の抑制に関する有用性を示すものである。
前投与により脳梗塞化軽減、脳血管透過性亢進の抑制効
果、それに伴う脳浮腫の軽減効果が確認できた。このこ
とは、ＡＰＣの脳梗塞における脳血管障害防止、浮腫、
梗塞発生の抑制に関する有用性を示すものである。
【００２１】実施例 ２ 本実験は、主として、虚血後の脳微小循環障害を反映す
るモデルとして確立されている方法(STROKE,10,p.267-2
72(1979)、薬理と治療，14,p.25-32(1986))を参考にし
て実施されたものであり、虚血後の微小循環障害による
梗塞巣の拡大を反映したモデルとして最適な評価系と考
えられる。
るモデルとして確立されている方法(STROKE,10,p.267-2
72(1979)、薬理と治療，14,p.25-32(1986))を参考にし
て実施されたものであり、虚血後の微小循環障害による
梗塞巣の拡大を反映したモデルとして最適な評価系と考
えられる。
【００２２】ラット(ウイスター系、雄、体重:２５０〜
３５０ｇ)をペントバルビタールで麻酔下、背位に固定
し、頸部を切開、両側椎骨動脈を第一頸椎の alar form
inaで電気凝固切断した。２４時間後、両側頸動脈にク
リップを掛けて血流を遮断し４血管を閉塞した。３０分
後に両側のクリップを外し、血流を再開させた。血流再
開５分後に開胸して、左心室から墨汁１０ｍｌを４分間
で灌流した。その後、脳を採取しホルマリン固定後、冠
状断に切断して、墨汁で灌流されていない領域(非灌流
領域)の割合を画像解析により算出した。
３５０ｇ)をペントバルビタールで麻酔下、背位に固定
し、頸部を切開、両側椎骨動脈を第一頸椎の alar form
inaで電気凝固切断した。２４時間後、両側頸動脈にク
リップを掛けて血流を遮断し４血管を閉塞した。３０分
後に両側のクリップを外し、血流を再開させた。血流再
開５分後に開胸して、左心室から墨汁１０ｍｌを４分間
で灌流した。その後、脳を採取しホルマリン固定後、冠
状断に切断して、墨汁で灌流されていない領域(非灌流
領域)の割合を画像解析により算出した。
【００２３】ＡＰＣ(血液由来のＡＰＣ:陰イオン交換処
理及びイムノアフィニテイークロマトグラフィーの方法
を用いて血漿から精製したＰＣをトロンビンで活性化し
て得た)２,５００〜８,０００Ｕ／ｋｇをラット大腿静
脈内に両側頸動脈閉塞５分前に投与した。
理及びイムノアフィニテイークロマトグラフィーの方法
を用いて血漿から精製したＰＣをトロンビンで活性化し
て得た)２,５００〜８,０００Ｕ／ｋｇをラット大腿静
脈内に両側頸動脈閉塞５分前に投与した。
【００２４】
【表４】
【００２５】表４において、ＡＰＣを前投与することに
より、非灌流領域の減少が確認できた。このことは、Ａ
ＰＣの脳梗塞における脳梗塞化軽減、脳梗塞巣縮小にお
ける有用性を示すものであると考えられる。
より、非灌流領域の減少が確認できた。このことは、Ａ
ＰＣの脳梗塞における脳梗塞化軽減、脳梗塞巣縮小にお
ける有用性を示すものであると考えられる。
【００２６】実施例 ３ 本実験は、脳梗塞の典型的なモデルとして確立されてい
る方法(脳卒中、8,p.1-8(1986)、基礎と臨床、25,p.183
-191(1991))を参考にして実施されたものであり、脳梗
塞にともなう神経症状(片麻痺)のモデルとして最適な評
価系と考えられる。
る方法(脳卒中、8,p.1-8(1986)、基礎と臨床、25,p.183
-191(1991))を参考にして実施されたものであり、脳梗
塞にともなう神経症状(片麻痺)のモデルとして最適な評
価系と考えられる。
【００２７】ラット(ウイスターＳＴ系、雄、体重:２５
０〜３５０ｇ)をペントバルビタールで麻酔下、背位に
固定し、頸部を切開、右内頸動脈から糸付き栓子(直径
０.２５mm，長さ７mm)を挿入し、中大脳動脈起始部を栓
子の側面で閉塞した。２時間閉塞後、栓子を抜去して再
灌流させた。再灌流開始２時間後、神経症状を表５に記
載のスコアに基づいて観察した後、１８時間後に再度神
経症状を観察してその改善度を評価した。ＡＰＣ(血液
由来のＡＰＣ:陰イオン交換処理及びイムノアフィニテ
イークロマトグラフィーの方法を用いて血漿から精製し
たＰＣをトロンビンで活性化して得た)８,０００Ｕ／ｋ
ｇをラット尾静脈内に３回(再灌流直前、再灌流開始
２、６時間後)投与した。
０〜３５０ｇ)をペントバルビタールで麻酔下、背位に
固定し、頸部を切開、右内頸動脈から糸付き栓子(直径
０.２５mm，長さ７mm)を挿入し、中大脳動脈起始部を栓
子の側面で閉塞した。２時間閉塞後、栓子を抜去して再
灌流させた。再灌流開始２時間後、神経症状を表５に記
載のスコアに基づいて観察した後、１８時間後に再度神
経症状を観察してその改善度を評価した。ＡＰＣ(血液
由来のＡＰＣ:陰イオン交換処理及びイムノアフィニテ
イークロマトグラフィーの方法を用いて血漿から精製し
たＰＣをトロンビンで活性化して得た)８,０００Ｕ／ｋ
ｇをラット尾静脈内に３回(再灌流直前、再灌流開始
２、６時間後)投与した。
【００２８】
【表５】
【００２９】
【表６】
【００３０】表６において、ＡＰＣを投与することによ
り、脳梗塞特有の神経症状(片麻痺など)を緩和すること
が確認できた。このことは、ＡＰＣの脳梗塞における機
能予後改善における有用性を示すものであると考えられ
る。
り、脳梗塞特有の神経症状(片麻痺など)を緩和すること
が確認できた。このことは、ＡＰＣの脳梗塞における機
能予後改善における有用性を示すものであると考えられ
る。
フロントページの続き (72)発明者 津元 兼二 熊本県菊池郡菊陽町津久礼3943−５ (72)発明者 溝上 寛 熊本県菊池郡合志町幾久富1647−151 (56)参考文献 国際血栓止血学会誌 第69巻 第６号 （1993年６月30日）、第724頁 (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) A61K 38/46 A61P 9/10 C12N 9/64 ＣＡＰＬＵＳ（ＳＴＮ)
Claims (1)
- 【請求項１】 活性化プロテインＣを含有する脳梗塞予
防、治療剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP06340208A JP3113787B2 (ja) | 1993-12-28 | 1994-12-28 | 脳梗塞予防治療剤 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5-350154 | 1993-12-28 | ||
| JP35015493 | 1993-12-28 | ||
| JP06340208A JP3113787B2 (ja) | 1993-12-28 | 1994-12-28 | 脳梗塞予防治療剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07233087A JPH07233087A (ja) | 1995-09-05 |
| JP3113787B2 true JP3113787B2 (ja) | 2000-12-04 |
Family
ID=26576641
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP06340208A Expired - Lifetime JP3113787B2 (ja) | 1993-12-28 | 1994-12-28 | 脳梗塞予防治療剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3113787B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH07171779A (ja) * | 1994-09-27 | 1995-07-11 | Kawasaki Heavy Ind Ltd | 走行装置付工業用ロボットの芯出し方法 |
-
1994
- 1994-12-28 JP JP06340208A patent/JP3113787B2/ja not_active Expired - Lifetime
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 国際血栓止血学会誌 第６９巻 第６号（１９９３年６月３０日）、第７２４頁 |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH07171779A (ja) * | 1994-09-27 | 1995-07-11 | Kawasaki Heavy Ind Ltd | 走行装置付工業用ロボットの芯出し方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH07233087A (ja) | 1995-09-05 |
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