JPH08231413A

JPH08231413A - 臓器障害に基づく疾患の予防・治療剤

Info

Publication number: JPH08231413A
Application number: JP7216022A
Authority: JP
Inventors: Michio Ogawa; 川道雄小; Yasuo Yamaguchi; 口康雄山; Yasuo Takahashi; 橋靖雄高
Original assignee: Mochida Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Mochida Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1994-12-29
Filing date: 1995-08-24
Publication date: 1996-09-10

Abstract

(57)【要約】【課題】臓器障害に基づく疾患および虚血再潅流障害に
基づく疾患等を予防または治療する効果があり、生体内
で安定で持続的な効果が認められ、ヒトに対する毒性を
示さない医薬の提供。【解決手段】トロンボモジュリン様蛋白質を有効成分と
して含有することを特徴とする臓器障害に基づく疾患の
予防・治療剤、肝臓・心臓または腎臓などの虚血再潅流
障害に基づく疾患、アレルギー性接触皮膚炎または関節
リウマチの予防・治療剤、臓器保存剤またはインターロ
イキン−８産生抑制剤。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明はトロンボモジュリン
（以下、ＴＭと略す）様蛋白質を含有することを特徴と
する臓器障害に基づく疾患の予防・治療剤、虚血再灌流
障害に基づく疾患、アレルギー性接触皮膚炎または関節
リウマチ等の予防・治療剤、臓器保存剤、ならびにイン
ターロイキン−８（以下、ＩＬ−８と略す）産生抑制剤
に関する。

【０００２】

【従来技術】種々の侵襲により、好中球を初めとする免
疫担当細胞が活性化され、サイトカインなど液性因子が
血液中、組織中に放出された結果、全身性の炎症反応を
起こしている状態は全身性炎症反応症候群（Ｓｙｓｔｅ
ｍｉｃｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｒｅｓｐｏｎｓｅ
ｓｙｎｄｒｏｍｅ：以下、ＳＩＲＳと略す）と呼ばれ
る。ＳＩＲＳにおいては、種々の臓器障害を伴う場合が
多く、臓器障害が重篤な場合には多臓器機能不全症候群
（ＭＯＤＳ）に移行する場合もある（若林ら、臨床検
査、３８巻、３４９−３５２頁、１９９４年）。臓器が
障害を受ける過程には、種々の要因が関与するとされる
が、侵襲に際して局所で産生されたＩＬ−１などによ
り、マクロファージなどで産生されるＩＬ−８の作用に
よる好中球の浸潤、集積が重要な役割を果たすといわれ
ており、最近注目を集めている。

【０００３】ＩＬ−８は、好中球遊走能、好中球活性化
能のみならず、単球の血管内皮細胞への付着の増強作
用、リンパ球の遊走作用など、多様な生物活性を有する
ことが知られている。その作用の多様性から、ＩＬ−８
は、例えば、虚血再灌流障害に基づく疾患、尋常性乾
癬、アレルギー性接触皮膚炎、腎炎、肝炎、関節リウマ
チ、尿路感染症、慢性気管支喘息、悪性黒色腫の転移な
ど、様々な疾患への関与が示唆されている（松島綱治ら
感染・炎症・免疫、２４巻、９−１７頁、１９９４
年）。

【０００４】上述した中で、虚血再灌流障害は、ほとん
どすべての組織あるいは臓器において認められ、種々の
疾患に関与している。また、臓器保存時やその移植の際
にも問題となる。とりわけ、肝臓、心臓または腎臓にお
ける梗塞、外科手術または移植などに伴う虚血再灌流障
害のうち、各臓器における組織障害（例えば細胞壊死な
ど）、および、各臓器における機能障害（例えば心臓に
おける不整脈など）は、重篤な場合には個体を死に至ら
しめるものであり、社会的に大きな問題となっている。
臓器障害または虚血再灌流障害においては、ＩＬ−８
は、早期から晩期にわたって産生・分泌されることが知
られている。また、肝虚血再灌流２４時間後に好中球が
著しく増加し、好中球の中和抗体が虚血再灌流障害を改
善すること（ジェシケ，エイチ．等（Ｊａｅｓｃｈｋ
ｅ，Ｈ．ｅｔａｌ．），エフ・エー・エス・イー・ビ
ー・ジャーナル（ＦＡＳＥＢＪｏｕｒｎａｌ）、４
巻、３３５５−３３５９頁、１９９０年）、および、肺
虚血再灌流３時間後にＩＬ−８、好中球およびマクロフ
ァージが著しく増加し、ＩＬ−８の中和抗体が、虚血再
灌流障害を改善することが報告されている（セキド，エ
ヌ．等（Ｓｅｋｉｄｏ，Ｎ．ｅｔａｌ．），ネイチャ
ー（Ｎａｔｕｒｅ）、３６５巻、６５４−６５７頁、１
９９３年）。以上のような事実から、好中球およびＩＬ
−８は、臓器障害および虚血再灌流障害の早期から晩期
にわたって、重要な役割を果たしていることが示唆され
る。

【０００５】アレルギー性接触皮膚炎は、外部からの接
触物が皮膚から吸収され、IV型アレルギーにより接触部
位に湿疹をきたすものであり、リンパ球浸潤が認められ
ている。関節リウマチは、関節滑膜の慢性炎症疾患であ
り、炎症性細胞の浸潤と滑膜細胞の増殖が特徴的であ
り、関節液中にＩＬ−８が高濃度で検出される。非ステ
ロイド系抗炎症薬が用いられるが、関節破壊の進展を十
分には抑えられないことがわかっている。従って、例え
ば、ＩＬ−８の産生を抑制する、代謝を促進する、ある
いは産生細胞からの放出を抑制する等の機序により局所
または全身のＩＬ−８の上昇を抑制することにより、上
記のような疾患における組織障害または機能障害に基づ
く疾患の予防または治療が可能であると考えられる。

【０００６】一方、ＴＭは、１９８１年にエスモンらに
より血管内皮細胞表面上に存在する抗凝固物質として発
見され、その後１９８７年に鈴木らによりその全一次構
造が明らかにされた糖蛋白質であり、トロンビンと結合
してトロンビンの凝固促進作用を抑制するとともにトロ
ンビンによるプロテインＣ活性化を著しく促進させる。
ＴＭ様蛋白質は、効率よく凝固系を抑制することから、
播種性血管内凝固症候群（以下、ＤＩＣと略す）、各種
血栓症等の予防や治療に有用であることが示唆されてい
る。また、特開平６−１５７３３２号公報においては、
ヒトＴＭ様蛋白質が、血管再建術後の遠隔期の血管再狭
窄を含む血流不全および動脈硬化治療薬として有効であ
ることが開示されている。

【０００７】しかしながら、ＴＭ様蛋白質が、臓器障害
に基づく疾患の予防・治療作用を有することおよびＩＬ
−８産生抑制作用を有することについてはこれまで全く
知られていなかった。先行技術としては、ヘパリンがウ
サギ心臓の虚血再灌流障害に対する保護効果を有するこ
と（フリードリッヒス，ジー．エス．等（Ｆｒｉｅｄｒ
ｉｃｈｓ，Ｇ．Ｓ．ｅｔａｌ．），サーキュレーショ
ンリサーチ（ＣｉｒｃｕｒａｔｉｏｎＲｅｓｅａｒ
ｃｈ）、７５巻、７０１−７１０頁、１９９４年）、お
よび、活性化されたプロテインＣ（ＡＰＣ）が、ブタ心
臓の虚血再灌流障害の改善傾向を有すること（スノー，
ティー．アール．等（Ｓｎｏｗ，Ｔ．Ｒ．ｅｔａ
ｌ．），サーキュレーション（Ｃｉｒｃｕｒａｔｉｏ
ｎ）、８４巻、２９３−２９９頁、１９９１年）が報告
されているが、いずれも医薬品としては満足な結果が得
られていない。

【０００８】

【発明が解決しようとする課題】臓器障害に基づく疾患
に対して用いられている薬物は、対症療法が中心となっ
ており、組織または臓器の障害に基づく疾患を予防また
は根治的に治療するような薬物は得られていない。ま
た、虚血再灌流障害に基づく疾患に関しては、上市され
ている薬物は、血栓溶解または循環改善を主体とするも
のであり、障害を直接予防または治療するような薬物は
得られていない。また、種々の組織または臓器に対して
広く有効な予防・治療薬も得られていない。

【０００９】このような現状から、広く種々の組織また
は臓器において障害に基づく疾患を予防または治療する
効果があり、生体内で安定で持続的な効果が認められ、
ヒトに対する毒性を示さない医薬品が望まれているが、
これらを満足するものは得られていないのが現状であ
る。

【００１０】

【課題を解決するための手段】臓器障害には、ＩＬ−８
の関与が示唆されるので、ＩＬ−８に着目して鋭意研究
を重ねた結果、全く意外なことに、ＴＭ様蛋白質が、Ｉ
Ｌ−８産生抑制作用および臓器障害に基づく疾患の予防
・治療作用を有することを見いだし、本発明を完成し
た。

【００１１】以下に本発明を詳細に説明する。本発明の
第一の態様は、トロンボモジュリン様蛋白質を有効成分
として含有することを特徴とする臓器障害に基づく疾患
の予防・治療剤である。本発明の第二の態様は、トロン
ボモジュリン様蛋白質を有効成分として含有することを
特徴とする虚血再灌流障害に基づく疾患、アレルギー性
接触皮膚炎または関節リウマチの予防・治療剤であり、
特に、肝臓、心臓、腎臓、肺、脾臓または膵臓における
虚血再灌流障害に基づく疾患の予防・治療剤である。ま
た、外科手術または移植に伴う虚血再灌流障害、および
血栓溶解療法または血管再建術後の虚血再灌流障害に基
づく疾患の予防・治療剤である。本発明の第三の態様
は、トロンボモジュリン様蛋白質を有効成分として含有
することを特徴とする臓器保存剤である。本発明の第四
の態様は、トロンボモジュリン様蛋白質を有効成分とし
て含有することを特徴とするＩＬ−８産生抑制剤であ
る。

【００１２】本明細書において、「臓器障害に基づく疾
患」の語は、例えば肝不全、腎不全などの各種臓器不全
のみならず、これらの疾患に付随する黄疸、血中ＧＰＴ
・ＧＯＴ・ＬＤＨ等の上昇、疲労・倦怠感、食欲不振、
意識障害、興奮、昏睡、腹水、糸球体濾過量の低下、浮
腫、蛋白尿、乏尿、高カリウム血症、代謝性アシドーシ
ス、血中クレアチニン・尿素窒素量等の上昇などの症状
も含んでいる。また、ＳＩＲＳに伴うＭＯＤＳも含んで
いる。「虚血再灌流障害」の語は、梗塞や外科手術、移
植、血栓溶解療法あるいは血管再建術など種々の原因に
より局所の血流が全くなくなった（虚血）後に再び血流
が戻った（再灌流）際に起きる組織損傷や臓器または組
織の機能障害であり、「虚血再灌流障害に基づく疾患」
の語は、肝臓、心臓、腎臓、肺、脾臓、膵臓などにおい
て認められ、例えば、肝不全、再灌流不整脈、腎不全な
どを含み、これらの疾患に付随する病態も含んでいる。
また、「ＴＭ様蛋白質」の語は、ＴＭおよびＴＭの生物
学的もしくは免疫学的活性に必要な一部分のアミノ酸配
列を有するペプチドまたはそれらの類似物を意味する。
すなわち、本発明に用いるＴＭ様蛋白質は、トロンビン
と結合してトロンビンの凝固促進作用を抑制するととも
にトロンビンによるプロテインＣ活性化を著しく促進さ
せる蛋白性物質をすべて含む。従って、天然型あるいは
遺伝子工学的に産生されたいずれでも良く、遺伝子工学
手法により得られる改変型あるいはキメラ型であっても
よい。医薬品とする場合、好ましくはヒト由来のＴＭ様
蛋白質が望まれる。また、ヒト由来のＴＭは膜結合性で
あり、完全長のアミノ酸配列を持つものは水に対する溶
解性が低い。このため、本発明においては完全長のアミ
ノ酸配列を持たず、溶解性の高いＴＭ様蛋白質（以下、
可溶性ＴＭ様蛋白質と略す）、例えば天然型のヒト尿由
来の可溶性ＴＭ様蛋白質もしくは遺伝子組換えヒト可溶
性ＴＭ様蛋白質がさらに好ましい。なお、遺伝子組換え
技術等を利用して産生された、ＴＭのアミノ酸配列の部
分構造を有する様々なＴＭ様蛋白質も、臓器障害に基づ
く疾患の予防・治療剤、虚血再灌流障害に基づく疾患、
アレルギー性接触皮膚炎または関節リウマチの予防・治
療剤、臓器保存剤あるいはＩＬ−８産生抑制剤として本
発明の効果を有するものは、本発明に含まれる。

【００１３】このようなＴＭ様蛋白質は、天然型につい
ては、例えば、特開昭６０−１９９８１９号公報に開示
されているヒト胎盤由来のＴＭ、ヒト尿由来の可溶性Ｔ
Ｍ様蛋白質として、特開平３−８６９００号公報に開示
されている非還元状態での分子量が５５，０００〜５
８，０００および６０，０００〜６５，０００の可溶性
ＴＭ様蛋白質および特開平３−２１８３９９号公報に開
示されている非還元状態での分子量が７２，０００±
３，０００および７９，０００±３，０００の可溶性Ｔ
Ｍ様蛋白質が挙げられる。遺伝子組換え型については、
例えば、遺伝子組換えヒト可溶性ＴＭ様蛋白質として、
特開平１−６２１９号公報に開示されている少なくとも
アミノ末端から３４５−４６２番目のアミノ酸配列を含
む可溶性ＴＭ様蛋白質およびＷＯ９２／００３２５号公
報に開示されている少なくともアミノ末端から４−４４
６番目のアミノ酸配列を含む可溶性ＴＭ様蛋白質が挙げ
られる。また、特表平４−５０５５５４号公報に開示さ
れているヒト組織プラスミノーゲンアクチベーター等の
アミノ酸配列の一部を含んでいてもよい可溶性ＴＭ様蛋
白質、ＷＯ９１／０４２７６号公報に開示されているコ
ンドロイチン及び／又はコンドロイチン硫酸を含む糖鎖
を有する可溶性ＴＭ様蛋白質および特開平６−２７９４
９７号公報に開示されているウシＴＭ由来の酸性アミノ
酸配列を含む配列を付加した可溶性ＴＭ様蛋白質が挙げ
られる。

【００１４】本発明に用いるＴＭ様蛋白質は、肝虚血再
灌流モデルラットにおいて、血清ＩＬ−８上昇抑制作用
を示す。また、同モデルにおいて、臨床においても肝障
害の指標として用いられるグルタミン酸オキザロ酢酸ト
ランスアミナーゼ（以下、ＧＯＴと略す）、グルタミン
酸ピルビン酸トランスアミナーゼ（以下、ＧＰＴと略
す）および乳酸脱水素酵素（以下、ＬＤＨと略す）等の
上昇抑制作用を示す。また、腎虚血再灌流モデルラット
において、血清クレアチニンおよび血清尿素窒素量の上
昇抑制作用および尿量の増加抑制作用を示し、心虚血再
灌流モデルラットにおいて、血清ＩＬ−８上昇抑制作用
を示す。これらのＴＭ様蛋白質の作用は、動物実験にお
いて各種臓器で確認されているので、ＴＭ様蛋白質が虚
血再灌流障害に基づく臓器の機能障害の改善にｉｎｖ
ｉｖｏで有効な効果を有することがわかる。ＴＭ様蛋白
質は、現在臨床開発中のＤＩＣ治療薬であり、ヘパリン
に付随するような出血傾向などの副作用も少なく、医薬
品として安全性が高いことが期待されている（保坂義隆
ら、第56回日本血液学会抄録集第 791題1994年）。ま
た、ＴＭ様蛋白質は生体内半減期が長く、医薬品として
好ましい体内動態を示すことが確認されている。

【００１５】本発明に用いるＴＭ様蛋白質は、臓器障害
に基づく疾患に対する予防・治療作用、虚血再灌流障害
に基づく疾患の予防・治療作用、臓器保存剤としての作
用ならびにＩＬ−８産生抑制作用を有する。従って、種
々の臓器障害に基づく疾患、例えば、肝不全、腎不全な
ど、肝臓、腎臓などの損傷や機能障害を直接予防・治療
する目的で使用することができ、また、これらの疾患に
付随する黄疸、血中ＧＰＴ・ＧＯＴ・ＬＤＨ等の上昇、
疲労・倦怠感、食欲不振、意識障害、興奮、昏睡、腹
水、糸球体濾過量の低下、浮腫、蛋白尿、乏尿、高カリ
ウム血症、代謝性アシドーシス、血中クレアチニン・尿
素窒素量等の上昇などを予防、治療または改善する目的
で使用することができる。また、肝臓、心臓、腎臓、
肺、脾臓、小腸、大腸、胃、膵臓、脳、筋肉、皮膚など
において認められる虚血再灌流障害に基づく疾患、例え
ば、肝不全、再灌流不整脈、腎不全、壊死性腸炎などで
各臓器の損傷や機能障害を直接予防・治療する目的で用
いることができる。また、外科手術や移植に伴う虚血再
灌流の際に、術前・術後に投与することにより、上記の
臓器または組織の障害を予防または治療し、移植後の上
記の臓器または組織の生着率を改善する効果および機能
を維持する効果が期待される。さらに組織損傷または壊
死性梗塞巣の形成・拡大等に対する阻止効果、上記の臓
器または組織の機能障害の改善効果が期待される。ま
た、血栓溶解療法あるいは血管再建術後の虚血再灌流障
害に基づく疾患の予防・治療剤として用いることができ
る。また、上記の組織または臓器を移植する際の保存液
中に添加する、臓器の灌流液中に添加する等の方法によ
り、移植時における臓器保存剤として用いることができ
る。さらに、ＩＬ−８の関与する種々の疾患、例えば、
上述した虚血再灌流障害に基づく疾患、アレルギー性接
触皮膚炎または関節リウマチなどの予防・治療剤として
用いることができる。さらには、ＳＩＲＳに伴うＭＯＤ
Ｓの予防・治療剤としても用いることができる。

【００１６】本発明に用いるＴＭ様蛋白質は、ＩＬ−８
の産生抑制作用を有するので、臓器障害および虚血再灌
流障害において、急性期のみならず、慢性的な障害をも
抑制する。従って、本発明に用いるＴＭ様蛋白質は、こ
れらに基づく疾患および付随する病態について予防、治
療または改善することが期待され、医薬品としては非常
に好ましい特性を有すると考えられる。

【００１７】本発明に用いるＴＭ様蛋白質は、肝臓にお
いては、移植などの外科的手術時、あるいはショックお
よび循環不全などによる肝血流量（血液供給）の減少あ
るいは遮断の際の虚血再灌流障害において、肝不全や組
織障害ならびに肝機能低下に対する予防、治療または改
善作用が期待される。また、心臓においては、心筋梗塞
に対する血栓溶解療法、経皮的冠動脈内血栓溶解療法
（ＰＴＣＲ）や経皮的冠動脈内腔拡張術（ＰＴＣＡ）後
の再灌流の結果、細胞内カルシウムイオンの過負荷等に
起因する不可逆的な細胞死や致死的な不整脈に対する予
防、治療または改善作用が期待される。また、腎臓にお
いては、術後、または腎移植等に起因する虚血再灌流に
よる腎不全や糸球体固有細胞（内皮細胞、上皮細胞、メ
サンギウム細胞）、メサンギウム基質、基底膜の細胞外
基質または尿細管上皮細胞などの障害に対する予防、治
療または改善作用が期待される。

【００１８】本発明の製剤は有効成分としてＴＭ様蛋白
質を含有していれば良く、公知のいかなる製剤学的製造
法により製造することができる。当該ＴＭ様蛋白質は、
薬剤として一般的に用いられる適当な担体または、媒
体、例えば滅菌水や生理食塩水、植物油、鉱油、高級ア
ルコール、高級脂肪酸、無害性有機溶媒等、さらには必
要に応じて賦形剤、着色剤、乳化剤、懸濁剤、界面活性
剤、溶解補助剤、吸着防止剤、安定化剤、保存剤、保湿
剤、酸化防止剤、緩衝剤、等張化剤、無痛化剤等と適宜
組合わせて、生体に効果的に投与するのに適した注射
剤、経鼻吸収剤、経口剤等の医薬用製剤、好ましくは注
射剤に調製することができ、これらの具体例のいくつか
については公知である。注射剤の製剤としては、例えば
凍結乾燥品や、注射用水剤、あるいは浸透圧ポンプに封
入した形等で提供できる。

【００１９】本発明の製剤は、例えば静脈内注射、皮下
注射、筋肉内注射、経口投与等の方法によって、例え
ば、ＴＭ様蛋白質量として一日約０．０１〜１０００μ
ｇ／ｋｇ、さらに好ましくは、０．１〜１００μｇ／ｋ
ｇとなる量を投与したり、浸透圧ポンプ等に封入し生体
に留置することにより連続的に投与することができる。
さらに、臓器または組織移植時の保存液中に、例えば、
ヒトＴＭ様蛋白質濃度を約０．００１〜１０００μｇ／
ｍｌ、さらに好ましくは、０．０１〜１００μｇ／ｍｌ
の濃度で添加することもできる。

【００２０】（取得例）以下にＴＭ様蛋白質の取得例を
挙げて、本発明をより具体的に説明するが、本発明に用
いるＴＭ様蛋白質はこれらに限定されるものではない。

【００２１】（可溶性ＴＭ様蛋白質の取得例）ヒト尿中可溶性ＴＭ様蛋白質の製造特開平３−２１８３９９号公報に記載された方法に準じ
て調製した。すなわち、原尿１００Ｌをアクリル繊維で
濾過して尿中のウロキナーゼを吸着除去し、通過尿を限
外濾過膜を使用して脱塩濃縮した。次いで、ＤＥＡＥセ
ルロース（ワットマン社製）カラム、ＤＩＰ−トロンビ
ン−アガロースクロマトグラフィーおよびセファクリル
Ｓ−３００（ファルマシアファインケミカル社製）カラ
ムを用いて順次精製し、活性画分を採取した（以下、Ｕ
ＴＭ０と略す）。この画分は一晩蒸留水に対して透析し
た後凍結乾燥した。

【００２２】（実験例）以下に本発明を詳細に説明する
ために実験例により効果を具体的に説明するが、本発明
はこれらによって、なんら限定されるものではない。

【００２３】（実験例１：ＴＭ様蛋白質による肝虚血再
灌流モデルラットに対する効果）実験には、前述の取得
例で製造したヒト尿由来可溶性ＴＭ（ＵＴＭ０）を用い
た。１群４匹の雄性ウィスター系ラットをエーテル麻酔
下に開腹し、門脈をクリッピングにて遮断した。３０分
後クリップをはずし血液を再灌流した。薬物は門脈遮断
直前に、６００μｇ／ｋｇの用量で、単回急速静脈内投
与を行った。対照群には生理食塩水を投与し、同様に処
置した。門脈遮断３時間後に、エーテル麻酔下、腹部大
動脈より全採血し血清を得た。また、肝を摘出し、一部
は液体窒素にて凍結し、また一部はホルマリン固定し
た。ラットにおいては、サイトカイン誘発好中球遊走因
子（Ｃｙｔｏｋｉｎｅ−ＩｎｄｕｃｅｄＮｅｕｔｒｏ
ｐｈｉｌＣｈｅｍｏａｔｔｒａｃｔａｎｔ：以下、ＣＩ
ＮＣと略す）が好中球遊走因子として分離されており、
ヒトＩＬ−８に相当するサイトカインとされている（末
松誠らメディカルイムノロジー（Ｍｅｄｉｃａｌ
Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）、２５巻、５０９−５１３頁、
１９９３年）。血清中のＣＩＮＣ濃度はＥＬＩＳＡ法に
より測定した。肝組織中のＣＩＮＣｍＲＮＡレベルはノ
ーザンブロット法により測定し、また、肝の組織学的な
観察を実施した。他に、ＧＯＴ、ＧＰＴおよびＬＤＨ等
を測定した。結果を図１〜４に示す。

【００２４】図１から明らかなように、ＵＴＭ０はラッ
ト肝虚血再灌流に伴う血清ＣＩＮＣ上昇を抑制した。そ
の作用は強力かつ持続的であった。また、ＵＴＭ０は、
肝組織中のＣＩＮＣｍＲＮＡの上昇を顕著に抑制した。
図２から明らかなように、ＵＴＭ０はラット肝虚血再灌
流に伴う血清ＧＯＴの上昇を顕著に抑制した。図３から
明らかなように、ＵＴＭ０はラット肝虚血再灌流に伴う
血清ＧＰＴの上昇を顕著に抑制した。図４から明らかな
ように、ＵＴＭ０はラット肝虚血再灌流に伴う血清ＬＤ
Ｈの上昇を顕著に抑制した。

【００２５】これらの指標は臓器障害の指標であり、臨
床においても肝障害の指標として用いられているので、
以上の結果からＵＴＭ０等のＴＭ様蛋白質は、虚血再灌
流に伴う臓器障害に基づく疾患の予防・治療作用を有す
る好ましい薬物であると考えられる。

【００２６】（実験例２：ＴＭ様蛋白質による腎虚血再
灌流モデルラットに対する効果）実験には、前述の取得
例で製造したヒト尿由来可溶性ＴＭ（ＵＴＭ０）を用い
た。１群４〜５匹の雄性ウィスタ−系ラットをペントバ
ルビタ−ル麻酔下にて右側腹部を切開して、右腎を摘出
した。ラットを背位に固定し、腹部を切開し、腎動静脈
をクリッピングにて遮断した。６０分後クリップをはず
し血液を再灌流した。薬物は腎動静脈遮断直前に、６０
０μｇ／ｋｇの用量で、単回急速静脈内投与を行った。
対照群にはリン酸緩衝生理食塩水（以下、ＰＢＳと略
す）を投与し、同様に処置した。また、偽手術群は腎動
脈クリッピング以外のすべての処置を行い、ＰＢＳを投
与した。２日後、エ−テル麻酔下、腹部大静脈より全採
血し血清を得て、血清クレアチニン量および血清尿素窒
素量を測定した。他に、２日後までの尿量を測定した。
結果を図５〜７に示す。

【００２７】図５から明らかなように、ＵＴＭ０はラッ
ト腎虚血再灌流に伴う血清クレアチニンの上昇を抑制し
た。図６から明らかなように、ＵＴＭ０はラット腎虚血
再灌流に伴う血清尿素窒素量の上昇を抑制した。図７か
ら明らかなように、ＵＴＭ０はラット腎虚血再灌流に伴
う尿量の増加を抑制した。

【００２８】（実験例３：ＴＭ様蛋白質による心虚血再
灌流モデルラットに対する効果）実験には、前述の取得
例で製造したヒト尿由来可溶性ＴＭ様蛋白質（ＵＴＭ
０）を用いた。１群６匹の雄性ウィスタ−系ラットをペ
ントバルビタ−ル麻酔下にて開胸し、左冠動脈を結紮し
遮断した。２０分後、結紮を解除し血液を再灌流した。
薬物は冠動脈遮断直前に、２０００μｇ／ｋｇの用量で
単回急速静脈内投与し、その後２００分間、４０００μ
ｇ／ｋｇの用量で持続静脈内投与した。対照群にはＰＢ
Ｓを投与し、同様に処置した。再灌流３時間後に、頚静
脈より採血し血清を得て、ＣＩＮＣ濃度をＥＬＩＳＡ法
により測定した。結果を図８に示す。

【００２９】図８から明らかなように、ＵＴＭ０はラッ
ト心虚血再灌流に伴う血清ＣＩＮＣの上昇を顕著に抑制
した。

【００３０】上述したように、ＩＬ−８は、種々の臓器
障害に基づく疾患および、虚血再灌流障害に基づく疾
患、アレルギー性接触皮膚炎または関節リウマチなどへ
の関与が示唆される。従って、本願に用いるＴＭ様蛋白
質は、虚血再灌流に伴う組織障害または機能障害に有効
であるのみならず、上記のような種々の疾患に対して広
く有効な予防・治療薬となることが期待される。

【００３１】また、ＵＴＭ０は、心虚血再灌流モデルラ
ットおよび腎虚血再灌流モデルマウスにおいても良好な
成績を示し、ＵＴＭ０以外のＴＭ様蛋白質についても同
様の作用を示す。なお、ヒト尿由来可溶性ＴＭ様蛋白質
のマウスにおける急性毒性試験結果は、特開平３−２１
８３９９号公報に開示されており、ＴＭ様蛋白質は安全
であることが確認されている。

【００３２】

【実施例】以下に実施例を挙げて、本発明をより具体的
に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではな
い。

【００３３】（実施例１）ＵＴＭ０５ｍｇ精製ゼラチン５０ｍｇリン酸ナトリウム３４．８ｍｇ塩化ナトリウム８１．８ｍｇマンニトール２５ｍｇ上記成分を注射用蒸留水１０ｍｌに溶解し、無菌濾過し
たあとに１．０ｍｌずつ無菌バイアルに分注し、凍結乾
燥して注射用製剤を調製した。

【００３４】（実施例２）ＵＴＭ０５ｍｇアルブミン２０ｍｇリン酸ナトリウム３４．８ｍｇ塩化ナトリウム８１．８ｍｇマンニトール２５ｍｇ上記成分を注射用蒸留水１０ｍｌに溶解し、無菌濾過し
たあとに１．０ｍｌずつ無菌バイアルに分注し、凍結乾
燥して注射用製剤を調製した。

【００３５】

【発明の効果】本発明のＴＭ様蛋白質を有効成分とする
予防・治療剤は、臓器障害に基づく疾患に対する予防・
治療作用と、ＩＬ−８産生抑制作用を併有する。従っ
て、種々の臓器障害に基づく疾患、たとえば、肝臓、心
臓、腎臓、肺、脾臓または膵臓などにおける虚血再灌流
障害に基づく疾患の予防・治療剤として用いることがで
きる。また、外科手術または移植に伴う虚血再灌流障
害、および血栓溶解療法あるいは血管再建術後の虚血再
灌流障害に基づく疾患の予防・治療剤として用いること
ができる。また、上記の組織または臓器の移植時におけ
る臓器保存剤としても用いることができる。さらには、
ＩＬ−８の関与する種々の疾患、例えば、虚血再灌流障
害に基づく疾患、アレルギー性接触皮膚炎または関節リ
ウマチなどに伴う組織障害の予防・治療剤として用いる
ことができる。なお、本発明に用いるＴＭ様蛋白質は、
安全性、効果の持続性等の観点から、ＩＬ−８の関与す
る種々の疾患に対し、公知の薬物に比較し、より優れた
効果を有している。

【図面の簡単な説明】

【図１】図１は、本発明に用いるＴＭ様蛋白質（ＵＴ
Ｍ０）のラット肝虚血再灌流に伴う血清ＣＩＮＣ上昇を
抑制する効果を示すグラフである。

【図２】図２は、本発明に用いるＴＭ様蛋白質（ＵＴ
Ｍ０）のラット肝虚血再灌流に伴う血清ＧＯＴの上昇を
抑制する効果示すグラフである。

【図３】図３は、本発明に用いるＴＭ様蛋白質（ＵＴ
Ｍ０）のラット肝虚血再灌流に伴う血清ＧＰＴの上昇を
抑制する効果を示すグラフである。

【図４】図４は、本発明に用いるＴＭ様蛋白質（ＵＴ
Ｍ０）のラット肝虚血再灌流に伴う血清ＬＤＨの上昇を
抑制する効果を示すグラフである。

【図５】図５は、本発明に用いるＴＭ様蛋白質（ＵＴ
Ｍ０）のラット腎虚血再灌流に伴う血清クレアチニンの
上昇を抑制する効果を示すグラフである。

【図６】図６は、本発明に用いるＴＭ様蛋白質（ＵＴ
Ｍ０）のラット腎虚血再灌流に伴う血清尿素窒素量の上
昇を抑制する効果示すグラフである。

【図７】図７は、本発明に用いるＴＭ様蛋白質（ＵＴ
Ｍ０）のラット腎虚血再灌流に伴う尿量の増加を抑制す
る効果を示すグラフである。

【図８】図８は、本発明に用いるＴＭ様蛋白質（ＵＴ
Ｍ０）のラット心虚血再灌流に伴う血清ＣＩＮＣの上昇
を抑制する効果を示すグラフである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所Ｃ０７Ｋ 14/47 Ａ６１Ｋ 37/02 ＡＥＤ

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】トロンボモジュリン様蛋白質を有効成分と
して含有することを特徴とする臓器障害に基づく疾患の
予防・治療剤。
【請求項２】トロンボモジュリン様蛋白質を有効成分と
して含有することを特徴とする虚血再灌流障害に基づく
疾患、アレルギー性接触皮膚炎または関節リウマチの予
防・治療剤。
【請求項３】トロンボモジュリン様蛋白質を有効成分と
して含有することを特徴とする請求項２に記載の虚血再
灌流障害に基づく疾患の予防・治療剤。
【請求項４】前記虚血再灌流障害が、肝臓、心臓、腎
臓、肺、脾臓または膵臓の虚血再灌流障害である請求項
３に記載の虚血再灌流障害に基づく疾患の予防・治療
剤。
【請求項５】前記虚血再灌流障害が、肝臓、心臓または
腎臓の虚血再灌流障害である請求項３に記載の虚血再灌
流障害に基づく疾患の予防・治療剤。
【請求項６】前記虚血再灌流障害が、外科手術または移
植に伴う虚血再灌流障害である請求項３に記載の虚血再
灌流障害に基づく疾患の予防・治療剤。
【請求項７】前記虚血再灌流障害が、血栓溶解療法また
は血管再建術後の虚血再灌流障害である請求項３に記載
の虚血再灌流障害に基づく疾患の予防・治療剤。
【請求項８】トロンボモジュリン様蛋白質を有効成分と
して含有することを特徴とする請求項２に記載の関節リ
ウマチの予防・治療剤。
【請求項９】トロンボモジュリン様蛋白質を有効成分と
して含有することを特徴とする臓器保存剤。
【請求項１０】トロンボモジュリン様蛋白質を有効成分
として含有することを特徴とするインターロイキン−８
産生抑制剤。