JPH0495031A

JPH0495031A - 血栓溶解活性増強剤

Info

Publication number: JPH0495031A
Application number: JP2210636A
Authority: JP
Inventors: Kenji Okajima; 研二岡嶋
Original assignee: Green Cross Corp Japan
Current assignee: Mitsubishi Tanabe Pharma Corp
Priority date: 1990-08-08
Filing date: 1990-08-08
Publication date: 1992-03-27

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕本発明は、アルブミンを有効成分とする血栓熔解活性増
強剤に関する。

〔従来技術・発明が解決しようとする課題〕現在、ウロ
キナーゼやストレプトキナーゼ等が、血栓溶解剤として
、脳血栓症、末梢動・静脈閉塞症、急性心筋梗塞等の血
栓、閉塞性疾患の治療に広く使用されるようになってい
る。しかし、これらの薬剤は、フィブリンに対する親和
性が低く、フィブリンの存在に関係なくプラスミノーゲ
ンを活性化するので、副作用として、循環フィブリノー
ゲンの減少や一次線溶活性の上昇による出血傾向が指摘
されてきた。このような理由から、より安全でしかもよ
り効果的な血栓溶解剤が待望されているのが実情である
。

本発明の目的は、より安全、且つ効果的な血栓溶解活性
増強剤を提供することである。

〔課題を解決するための手段］本発明者らは、上記目的を達成するために鋭意研究を重
ねた結果、アルブミンが内因性または外来性のプラスミ
ノーゲンアクチベーター（以下、ｒＰ、Ｊという）の血
栓溶解活性を上昇させることを見出して本発明を完成し
た。

即ち、本発明はアルブミンを有効成分とする血栓溶解活
性増強剤である。

アルブミンは血漿中に最も多く含まれる血漿蛋白であり
、臨床上も各種の疾患（熱傷、ネフローゼ、肝硬変、出
血性ショック等）に用いられている０本発明において使
用されるアルブミンとしては、特に血清アルブミンが好
ましいが、その由来には特に制限はなく、例えばヒト、
ウシ、ウマ、ヤギ、ヒツジ、ニワトリ由来のもの等が使
用され、さらに好適にはヒト由来のものが使用される。

本発明で使用されるヒト血清アルブミンは、その由来に
は特に制限はなく、血漿由来、細胞由来あるいは遺伝子
工学により得られるもののいずれでもよく、分子量６９
　、０００、等電点４．９のものが好ましい。

本発明において、外来性ＰＡとしては、組織型ブラスミ
ノーゲンアクチベーター（以下ｒｔ−ＰＡＪという）お
よびウロキナーゼ（以下ｒＵＫ、という）のいずれを使
用してもよい。

ｔ−ＰＡは、組織中に存在し血液中に分泌されるが、そ
の由来としてはメラノーマ細胞、子宮、血管内皮細胞等
が知られている。

ｔ−ＰＡはフィブリン親和性が高く、プラスミノーゲン
の活性化において、フィブリンが存在する場合と存在し
ない場合とでは、その活性化速度は著しく異なり、ミカ
エリス定数で前者は後者の１／１００程度となる。ｔ−
ＰＡは、フィブリノーゲン−フィブリン変換に際して、
フィブリンに吸着され、フィブリン表面で阻害因子等か
らの影響を受けずに効率的にプラスミノーゲン−プラス
ミン変換を行い、フィブリン分解を行う［ＣＪＩｕｆＬ
。

Ｔｉ５ｓｕｅ−Ｔｙｐｅ　Ｐｌａｓ＋＊ｉｎｏｇｅｎ　
Ａｃｔｉｖａｔｏｒ（ｔ−ＰＡ）：Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇ
ｉｃａｌ　ａｎｄ　Ｃ１１ｎｉｃａｌ　Ａｓｐｅｃｔｓ
、Ｖｏｌ、ＩＭｅｃｈａｎｉｓｍｓ　ｏｆ　Ａｃｔｉｏ
ｎ　ｏｆ　ｔ−ＰＡ、ＰＰ、４７〜７９（１９８８）Ｃ
ＲＣＰｒｅｓｓ発行〕。

本発明において使用されるｔ−ＰＡには、特に制限はな
い。例えば、その精製法についも特に制限はなく、従来
より提案されている精製法を採用すればよい、また、そ
の由来にも特に制限はなく、例えば、組繊細胞、それら
の培養、あるいは遺伝子操作等に由来するｔ−ＰＡが使
用される。さらに、酵素学的にいう前駆体型であるか、
活性化型であるかも特に制限はなく、両者とも本発明に
おけるｔ　、−Ｐ　Ａとして使用し得る。本発明で使用
するｔ−ＰＡとしては、分子量的７２，０００、クリン
グル構造２個を有し、抗ＵＫ抗体により活性を失活しな
いものが例示される。

ＵＫは、人尿より得られるプラスミノーゲンアクチヘー
ターで、各種血栓症や梗塞性疾患の治療および制癌側と
の併用療法等に広く臨床使用されており、優れた治療効
果をもたらしている。

本発明において使用されるＵＫには、特に制限はない。

その精製法について特に制限はなく、従来より提案され
ている精製法を採用すればよい。

また、その由来にも特に制限はなく、例えば、人尿、腎
細胞の培養液由来のもの、あるいは遺伝子操作等に由来
するＵＫが使用される。更に、酵素学的にいう前駆体型
であるか、活性化型であるかも特に制限されず、両者と
も本発明におけるＵＫとして使用しえる０本発明で使用
するＵＫとしては、低分子型（約３万）、高分子型（約
５，４万）、−本鎖構造または二本鎖構造を有するもの
が例示される。

本発明の血栓熔解活性増強剤は、ヒトをはじめとしてウ
シ、ウマ、ラット、マウス等の哺乳動物に対して有効で
あり、アルブミンのみでも内因性ＰＡに対して優れた血
栓溶解活性増強作用を有し、かつＰＡとの併用時におい
ても、ＰＡの血栓溶解作用を顕著に増強させる。

本発明の血栓溶解活性増強剤は、アルブミン単独で、ま
たは担体（例えば、注射用蒸留水、生理食塩液、ブドウ
糖注射液等）、安定化剤（例えば、アセチルトリプトフ
ァンナトリウム、カプリル酸ナトリウム等）、その他の
添加剤等とともに、通常、注射側、点滴剤等として製剤
化される。当該製剤には、さらにＰＡを配合させてもよ
い。

当該血栓溶解活性増強剤の投与量は、患者の体重、性別
、症状等により異なるが、成人１回当たり、アルブミン
０．５〜１２０ｇ程度である。本発明の血栓溶解活性増
強剤をＰＡと併用する場合においても、アルブミンの投
与量は前記と同様である。

当該血栓溶解活性増強剤の投与ルートとしては、例えば
、静注、点滴静注、冠動脈的投与等が挙げられる。

本発明の血栓溶解活性増強剤は、脳血栓症、末梢動・静
脈閉塞症、急性心筋梗塞、ネフローゼ症候群による血栓
症、肺塞栓症、多臓器障害症等の血栓、閉塞性疾患の治
療に使用することができる。

本発明においては、アルブミンの単独投与でも血栓溶解
療法に有用であるが、充分な治療効果を得るためにはＰ
Ａと併用することが好ましい。

本発明で使用するＰＡの投与量は、例えばｔ−ＰＡの場
合、患者の体重、性別、症状等により異なるが、成人１
回当たり１０〜２００■程度、好ましくは３０〜１００
■度であり、またＵＫの場合、成人１回当たり、１万〜
２０００万国際ＵＫ単位（ｒＵ）程度、好ましくは６万
〜１０００万ＩＵ程度である。特にＵＫの場合、６万〜
１００万ＩＵ程度、Ｐｒｏ−Ｕ　Ｋの場合、６０万〜１
０００万ＩＵ程度が好ましい。

ＰＡの投与ルートとしては、例えば、静注、点滴静注、
冠動脈的投与等が挙げられる。

アルブミンとＰＡとを併用する場合、両者が体内にある
状態で投与すれば、両者の投与経路には特に制限はない
０両者は同時に投与してもよく、各々を別々に投与して
もよい。

なお、上記の如き投与量におけるアルブミンおよびＰＡ
の投与が安全であることは、他の用途において既に立証
されている。

〔実験例・実施例〕

本発明をより詳細に説明するために、以−下に実験例お
よび実施例を挙げて説明するが、本発明はこれらによっ
て何ら限定されるものではない。

実験例１無アルブミン血症ラットおよび正常ラットにおける血栓
形成モデルの血栓溶解におけるアルブミンの影響：アルブミンとネフローゼ症候群における血栓症との因果
関係を解明するために、先天的にアルブミンを欠損する
無アルブミン血症ラット（ＮａｇａｓｅＡｎａｌｕｂｕ
ｍｉｎｅｗｉｃ　Ｒａｔ：　Ｎ　Ａ　Ｒ）および正常ラ
ット（Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｒｅｙ　Ｒａｔ：　Ｓ　
Ｄ　Ｒ）を用いて実験的に血栓をつくり、血栓溶解にお
けるアルプミ′ンの影響について比較検討した。このＮ
ＡＲは、ネフローゼ症候群における病理学的症状と同じ
ような血栓症を呈する。

方法：雌ＮＡＲおよびＳＤＲ（体重＝２２０〜２４０ｇ
）にベンドパルビタール４０■／ｋｇ体重を腹腔内投与
した。腹壁上に小さな中央線切開を施行した後、交編の
末端部分を注意深く引き出し澄明な暖かい台の上に広げ
た。解剖用顕微鏡下で、内径約３００μｍの腸間膜動脈
を囲む脂肪および結合組織を注意深く除去した。本調製
品を、カラービデオ記録システム（モデルＧＰ　　５Ｊ
、日立社製）を装備した生物学用三接眼顕微鏡上に固定
した。

顕微鏡の倍率は１００倍であった。腸間膜動脈の表面は
、３７℃、生理食塩液でｌｄ／分の速度で連続還流した
。

血栓はミクロマニピュレーターを用いて、ガラス・マイ
クロピペット（直径１０μｍ）を挿入することで誘発さ
せた。ガラス・マイクロピペット（以下ｒＧＭｃＪとい
う。）はプーラ−（モデルＰＤ−５、ナリシゲ社製）で
作製し、その内側は生理食塩液で満たした。ＧＭＣの先
は、血管口径の１／３であった。血栓の最大直径は、録
音再生画面のイメージを追跡することで測定した。

さらに、ＮＡＲの血栓形成モデルに２０％アルブミン（
０，２ｄ／ｋｇ）を投与した場合の血栓熔解について、
ＳＤＲの血栓形成モデルにおけるアルブミン無投与の場
合の血栓溶解と比較検討した。

結果：　ＧＭＣをＮＡＲとＳＤＲの両ラットの小腸間膜
動脈に挿入後、約４０秒で血栓が生成し始めた。血栓は
挿入部位で生成し、ＧＭＣのまわりで徐々に大きくなっ
た。

ＳＤＲにおいて、その後血栓は徐々に大きくなり、挿入
４分後にＧＭＣと血管壁から離脱し血液循環へ流れ去っ
た。血栓は挿入７分後、ＧＭＣの表面上に再び生成した
。２番目の血栓もまた、生成５〜６分後に血液循環へ流
れ去った。血栓は離脱３０〜４０秒以内に繰り返し生成
し、ＧＭＣからの血栓離脱に必要な時間は、約３〜４分
であった。一方、ＮＡＲで生成した血栓は、挿入４分経
過してもＧＭＣに結合したままで、血管口径をふさいで
しまうほどに太き（なり、ついに挿入１２〜１３分後に
ＧＭＣから離脱した。血栓の最大直径は、離脱前にはＳ
ＤＲのそれよりも約４倍大きかった。

また、ＮＡＲにアルブミンを投与することによって血栓
溶解は促進され、ＳＤＲとＭ伯した血栓溶解の様相を呈
した。

以上の結果から、血栓能はＳＤＲよりもＮＡＲにおいて
より高いことが示された。これは、無アルブミン血症を
呈するＮＡＲでの低血栓溶解活性によるものである。さ
らに、ＮＡＲにアルブミンを投与することによって、血
栓溶解が促進されることから、アルブミンには血栓溶解
活性増強作用があることが示された。

なお、二つの動物群間には、何ら著明な差異が認められ
なかった。このことは、血栓を溶解させる活性は、二群
間で異なっていないということである。

実験例２家兎肺塞栓モデルの血栓溶解におけるアルブミン投与の
影響：家兎肺塞栓モデルの血栓溶解におけるアルブミン投与の
影響を解析し、アルブミンの血栓溶解における作用・効
果を検討した。

方法、　＋ｚｓｌ−標識フイブリンを均一微細化し、家
兎に２％Ｎａｌ液１ｄを静注後、１１５１〜ワイフリン
サスペンジテンを靜注し、その５分後に１％ヒトアルブ
ミン（、Ｍ／ｋｇ）を静脈内に投与した。

薬物投与後１２０分まで経時的に採血し血清を採取した
。検体中の１２ゝＩ−Ｆ　Ｄ　Ｐの放射活性を測定し、
ｉｎ　ｖｉν０の血栓溶解活性とした。なお、対照には
薬物無投与群を設けた。

その結果、第１図に示した如く、＋′Ｉ−フィブリン投
与投与２俊ブミンＣ３ｄ１ｋｇ）投与群の方が、フィブリン溶解は
約１．８倍元進していた。

実験例３ｔ−ＰＡ活性に及ぼすラット血清アルブミンおよびヒト
血清アルブミンの影響：ｔ−ＰＡ活性に及ぼすアルブミンの影響を検討した。

方法：ラット血清アルブミンおよびヒト血清アルブミン
（分画■）は、シグマ・ケミカル社（Ｓｔ。

Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）から購入した。ｔ−ＰＡおよびプラ
スミノーゲンはスタブ（仏）社から入手した，その他の
使用した試薬は、分析用の純度のものであっｔ−ＰＡ活
性は［Ｔｈｒｏｍｂ　Ｈａｅｍｏｓｔａｓ　４Ｂ　２６
６−２６９（１９８２）　）に述べられた方法で測定し
た，プラスミン生成は４０５ｎ　ｍで分光光度的に決定
した６反応混合物には、０．０２　１　Ｕ／ａｌ　ｔ　
−　Ｐ　Ａ，　０．０５Ｕ／ｄプラスミノ−ケン、７５
μｇ／ｄフィブリン、０．４ｍＭＣＢ５　（プラスミン
に対する合成基質）１０．６５、５（１ｍＭリン酸緩衝
液（ｐＨ７．５）そして、各種濃度のラットおよびヒト
血清アルブミンが含まれ、最終容積が１．０−であった
。

ｔ−ＰＡ活性に対する血清アルブミンの影響を解析する
と、ラット血清アルブミン０．　５　ｍ　Ｍ存在下では
ｔ−ＰＡ活性が約２０倍上昇した．ヒト血清アルブミン
０．　５　ｍ　Ｍ存在下ではｔ−ＰＡ活性が約１５倍上
昇した。

以上の結果より、アルブミンはｔ−ＰＡ活性を上昇させ
ることが示された．このことは、アルブミンが、ｔ−Ｐ
Ａとプラスミノーゲンとの間の相互作用を促進させるこ
とによってｔ−ＰＡ活性を上昇させることを示すもので
ある。

上記実験例１〜３より、血栓症症例（例えば、ネフロー
ゼ症候群における血栓症等）でのアルブミン投与もしく
は冠動脈内のＬ−ＰＡによる血栓溶解療法にアルブミン
を併用することが有用であることが示唆された。

実施例１（注射剤の処方例）（１）人血清アルブミン　　　　　　　　　５．　０　
ｇ（２）アセチルトリプトファンナトリウム　　　　　　　　　　　１０７．３■（３）
　　カプリル酸ナトリウム　　　　　　　６　６．　５
　［ＡＬＴ　（ＧＰＴ）値でスクリーニングした健康人
血漿のみを用いて、Ｃｏｈｎの低温エタノール分画法に
より分離精製して得られた純度９６％以上の人血清アル
ブミン画分をアルブミン濃度２５ＵＶχに調整し、肝炎
ウィルス不活化のため６０”Ｃ１１０時間の加熱処理を
施し、１瓶２０ｄの注射剤とした。

（作用・効果〕本発明の血栓溶解活性増強剤は、内因性ＰＡの血栓溶解
活性を上昇させるので、血栓溶解療法においてより安全
でしかもより効果的であり、さらにＰＡを併用すること
により、ＰＡ活性を増大させ、血栓溶解作用を増強させ
る。

従って、脳血栓症、末梢動・静脈閉塞症、急性心筋梗塞
、ネフローゼ症候群による血栓症、肺塞栓症、多臓器障
害症等の症状に対して極めて有用である。

【図面の簡単な説明】

第１図は、家兎肺塞栓モデルにおける１％アルブミン投
与と無投与における血栓溶解率を示した図である。フィフ゛リソ殺与ｆ奪Ｂ告聞　ｏす）

Claims

【特許請求の範囲】

アルブミンを有効成分とする血栓溶解活性増強剤。