JPH089546B2 - 抗血栓医薬組成物 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 （発明の分野） 本発明は抗血栓医薬組成物、さらに詳しくは公知の抗
血栓剤を相乗的に組み合わせてなる該医薬組成物、該医
薬組成物の製法および該医薬組成物の使用に関する。

（発明の背景） プラスミノゲンアクチベーターと呼ばれるある種の酵
素はヒトまたは動物への静脈内投与後にイン・ビボ（in
vivo）において血栓崩壊活性を発揮できることが知ら
れている。その活性は血液成分であるプラスミノゲンの
活性化に基づくものであって、血管中にフィブリン含有
血塊が存在する場合、これによって連鎖反応が起こり、
最終的にかかる血塊の溶解または分解をもたらすもので
ある。全体的な活性化のメカニズムはかなり複雑で、使
用されたプラスミノゲンアクチベーターのタイプにより
広範な差異を示しうる。

２つのタイプのプラスミノゲンアクチベーター、すな
わち組織タイプ・プラスミノゲンアクチベーター（ｔ−
PA）およびウロキナーゼタイプ・プラスミノゲンアクチ
ベーター（ｕ−PA）について区別がされるべきであり、
後者についてはさらに２本鎖形（ウロキナーゼと称す
る）と１本鎖形（scu−PAと称する）に区別することが
できる。これら３つのプラスミノゲンアクチベーターの
活性メカニズムは相互に異なる。

組織タイプのプラスミノゲンアクチベーター（ｔ−P
A）はパルスミノゲンの活性化を起こさせることができ
るが、フィブリンの存在下にほぼ限られている。これは
活性化が主として血塊付近で起こって血塊を溶解せしめ
るが、一方循環血液中ではプラスミノゲンの活性化は実
質的に起こらないことを意味する。かかるプラスミノゲ
ンアクチベーターはウロキナーゼタイプのプラスミノゲ
ンアクチベーターに対する抗血清と反応しない。

２本鎖形のｕ−PA（ウロキナーゼと称する）はフィブ
リンの存在下および非存在下の両方において血液中のプ
ラスミノゲンの効果的な活性化を誘発させる。これは血
塊を溶解することができるばかりでなく、循環血液中の
フィブリン分解システムの活性化が起こってフィブリノ
ゲンの分解および出血を惹起せしめることを意味する。

１本鎖形のｕ−PA（scu−PAと称する）はプラスミノ
ゲンを効果的に活性化できるが、フィブリン含有血塊の
存在下だけである。ｔ−PAの場合と同様に、循環血液中
のフィブリン分解システムの活性化は起こらないが、活
性化のメカニズムは異なっており、かつscu−PAはｔ−P
Aとは免疫学的に無関係である。

これら３つのプラスミノゲンアクチベーターのうち、
ウロキナーゼはすでに長年臨床医療に使用されている
が、副作用がそのハンディキャップとして経験されてい
る。他の２つのプラスミノゲンアクチベーターはまだ臨
床的実験段階ではあるが、ｔ−PAについては既に相当な
進歩を見ている。

本発明者が更に研究を進めたところ、ｔ−PAとscu−P
Aまたはｔ−PAとウロキナーゼは、実質的に同時にヒト
または動物に投与すると、イン・ビボで相乗的な作用、
すなわち該薬剤を別々に投与した場合の活性よりも高い
血栓崩壊活性を示すことが判明するに至った。これは同
等またはより高い血栓崩壊活性がこれまでよりもより少
量の用量で得ることができること、したがって高価な薬
剤の節約につながることを意味する。さらに、これは主
としてウロキナーゼについて起こる副作用（血中におけ
るフィブリン分解システムの活性化およびフィブリノゲ
ンの分解）を大巾にまたは完全に回避できることを意味
する。

（発明の詳説） 本発明はこれらの知見に基づくものである。一つの態
様において、本発明は活性成分としての組織タイプ・プ
ラスミノゲンアクチベーター（ｔ−PA）と、ウロキナー
ゼタイプ・プラスミノゲンアクチベーター（ｕ−PA）を
相乗的作用を示すように組み合わせてなる抗血栓医薬組
成物を提供する。かかる組み合わせはｔ−PAと、scu−P
Aおよびウロキナーゼの少なくともいずれか一方との組
み合わせであってよい。

別の態様において、本発明は組織タイプ・プラスミノ
ゲンアクチベーター（ｔ−PA）とウロキナーゼタイブ・
プラスミノゲンアクチベーター（ｕ−PA）を医薬上許容
される賦形剤中で混合することを特徴とする抗血栓作用
を有する医薬組成物の製法を提供する。得られる組成物
は任意の形とすることができるが、１つの静脈内注入液
の形または複数の注入液の組み合わせの形が好ましい。

用いられる組織タイプ・プラスミノゲンアクチベータ
ーは任意の適当の供給源から得られるいずれか通常タイ
プのｔ−PAとすることができ、たとえばメラノーマ・セ
ルラインの調整培地から回収されたもの、形質転換した
細菌または細胞から誘導されたものなどが適当である。

用いられるウロキナーゼは通常尿から得られ、市販さ
れているものであってよい。

使用されるscu−PAは主として組織培養液、尿、血し
ょう等の供給源から得られるが、調整細胞培養液または
形質転換細菌の培養培地から得られるものが好ましい。

いくつかの方法がプラスミノゲンアクチベーターを含
む培地からその単離および精製に使用できる。かかる方
法には通常多工程のクロマトグラフィーが包含される。

２つのタイプのプラスミノゲンアクチベーター（ｔ−
PAおよびｕ−PA）は任意の適当な方法で混合することが
できる。２成分系の組み合わせとして提供することもで
きるが、両方のプラスミノゲンアクチベーターが共通の
賦形剤中に相互に混合されている１成分系として提供す
るのが好ましい。賦形剤は通常のものか、または本発明
の目的に適当ないずれの媒体とすることもできる。

本発明の組成物において、ｔ−PA:u−PAの重量比は広
範に変化させることができ、例えば一般的には1:10〜1
0:1とすることができる。1:2〜2:1の重量比が好ましく
使用される。

プラスミノゲンアクチベーターを組み合わせてなる医
薬組成物はヒトまたは動物への投与に適当な任意の形態
とすることができるが、良好な結果を与える点で１つの
静脈内注入液形または複数の注入液の組み合わせ形が好
まいし。かかる注入液または他の組成物形は例えば約0.
2mg/mlのプラスミノゲンアクチベーターを含むことがで
きるが、一般的には濃度範囲0.05〜10mg/mlが可能であ
る。さらに、該組成物が使用前に上記範囲に希釈される
なら、100％までもの高濃度のプラスミノゲンアクチベ
ーターを含む組成物として提供することができる。

該医薬組成物を血栓症患者に投与する場合に使用され
るｔ−PAおよびｕ−PAの用量は、両薬剤の相乗的作用に
より各薬剤を別々に投与する場合に必要な用量よりも著
しく低い。一般的には、かかる用量はｔ−PAおよびｕ−
PAを別々に使用した場合の有効用量の５〜30％、好まし
くは10〜20％とすることができる。

（実施例） つぎに、実施例を挙げて本発明をさらに詳しく説明す
るが、これらに制限されるものではない。

実施例１ この実施例は実験的に血栓を起こしたウサギに対する
いくつかのプラスミノゲンアクチベーターおよびその組
み合わせについての効果を証明する。

麻酔したホワイト・ラビット（ニュージーランド・タ
イプ、体重2.4±3.0kg）の外けい静脈を4cmの長さにわ
たって切開した。静脈のセグメントをバスキュラー・ク
ランプを用いて離し、その容量を測定した。0.1mlのト
ロンビン溶液（1ml当たり100NIH−単位）を空のセグメ
ント中に導入し、ついで放射性ヨウ素でラベルしたヒト
・フィブリノゲン10〜20μを混合した新鮮な血液を導
入した。血液の量は血管セグメントの所定容量に相当す
る。血管中に形成した血塊をバスキュラー・クランプを
はずす前に30分間エージングさせた。ついで、血管セグ
メント中の放射能の量を測定した。

その後直ちに、いくつかの血栓崩壊剤、すなわちｔ−
PA、ウロキナーゼ、scu−PAおよびそれらの組み合わせ
をウサギの辺縁耳静脈を介し注入投与した。このため
に、十分な量の薬剤を生理学的食塩溶液で希釈して20ml
の最終容量にした。注入は４時間続けた。30分後、血栓
を含む血管セグメントを両端で縫合し、はずし、ついで
残存放射能を測定した。血栓崩壊の程度を当初の放射能
と血管セグメント中の残存放射能との差異の割合として
算出した。

実験終了時点においてはずした血管セグメント中の放
射能と循環血液中の放射能を加えて残存同位体を計算
し、得られた値を血管セグメント中の当初の放射能の割
合として示した。甲状腺および肺の放射能は無視できる
ほどの量だった。

血栓崩壊剤の注入の間および該期間の前後に、いくつ
かの血液試料を放射能、フィブリノゲン含量、d₂−抗プ
ラスミン含量、およびｔ−PAおよびscu−PA含量の測定
のために採取した。

実験モデルについてのより詳細はディ・コレンら、ジ
ャナール・オブ・クリニカル・イベスティゲーション
（D.Collen et al.,J.Clin.Invest.）73巻1983年368〜3
76頁参照。これらの実験に用いたｔ−PAはデイ・シイ・
リジケンら、ジャナール・オブ・バイオロジカル・ケミ
ストリ（D.C.Rijken et al.,J.Biol.Chem.）256巻1981
年7035〜7041頁およびディ・コレンら、トランボシス・
アンド・ハーモスタテイス（D.Collen et al.,Thromb.H
aemost.）48巻1982年294〜296頁に記載のように、メラ
ノーマ・セルラインの調整細胞培地から得た。ウロキナ
ーゼは市販のもので、scu−PAはデイ・シイ・スタンプ
ら、トロンボシス・アンド・ハーモスタテイス（D.C.St
ump et al.,Thromb.Haemost.）54巻1985年122頁に記載
のように、肺ほう腺ガンの調整培地から得た。

この実験の結果を第１表に示すが、該表中、報告した
値は３つのテスト法によるものである。溶媒だけ与えた
対照群の平均血栓崩壊度は９±１％であった。

該表から明らかなごとく、血栓崩壊はｔ−PA、ウロキ
ナーゼまたはscu−PAの全身的な注入によって行なわ
れ、その程度は用量に依存する。さらに、血栓崩壊用量
でのウロキナーゼの投与は広範なフィブリノゲンの分解
を伴うことが示された。

ｔ−PAおよびscu−PAの同時投与はごく低用量での血
栓崩壊度に匹敵する効果をもたらした。また、ｔ−PAお
よびウロキナーゼの同時投与は血栓崩壊の相乗的な効果
を示したが、ウロキナーゼとscu−PAの間では相乗的な
効果は全く示さなかった。混合注入液は全身的なフィブ
リノゲンの分解を全く誘発させなかった。

これは、イン・ビボにおける血栓崩壊性に関する明白
な相乗作用がｔ−PAとscu−PAの間、およびｔ−PAとウ
ロキナーゼの間に存在することを示すものである。これ
らの薬剤を、各々単独での血栓崩壊用量のわずか10〜20
％用量で組み合わせることにより、同等またはより大き
い血栓崩壊効果を誘発させた。相乗的作用はｔ−PA:u−
PAの重量比1:10〜10:1で観察され、最も効果的には重量
比1:2〜2:1で観察された。

実施例２ この実施例は急性心筋梗塞および冠動脈閉塞を患うヒ
ト患者におけるプラスミノゲンアクチベーターの相乗的
な組み合わせによる血栓崩壊効果を証明するものであ
る。

全ての患者において、右および左冠動脈の選択的写真
撮影を右上腕動脈から行った。ついで、ｔ−PAとｕ−PA
（scu−PAまたはウロキナーゼ）の組み合わせを生理学
的食塩水で希釈して最終容量100mlにし、これを静脈内
注入により60分間を要して投与した。閉塞した冠動脈の
写真撮影を15分間隔または再かん流の兆候が生じた場合
に繰り返し行った。血液試料をクエン酸塩で採取し、直
ちにフィブリノゲンについて分析した。結果を第２表に
示すが、該表中、３欄および４欄の見出しは以下のこと
を意味する。

時間（１）：症状の発生と注入開始の間隔 時間（２）：注入開始から再かんの間隔 再かん流は３つの心臓サイクル期間内に当初の閉塞に
対し末梢の冠動脈を完全に満たすことを意味する。

第１の実験において、ｔ−PA10mgとウロキナーゼ3000
00IUの組み合わせ体を４人の急性冠動脈閉塞患者に投与
した（第２表、Ａ参照）。４人のうち３人は、再かん流
が46、50および53分後に各々得られた。４番目の患者は
この注入に対し応答せず、また冠動脈内ストレプトキナ
ーゼに耐性を示した。患者は該注入に関し全く余病を併
発しなかった。ｔ−PAとウロキナーゼの組み合わせ投与
は、フィブリノゲンレベルが変化にしないことによって
示されるようにいずれの患者における全身的溶解状態を
も誘発しなかった。

第２の実験において、ｔ−PA10mgとscu−PA10mgの組
み合わせを１時間にわたり急性冠動脈閉塞症の患者７人
に静脈内投与した（第２表、Ｂ参照）。安定な感動脈の
かん流は５人の患者において得られ、一時的なかん流が
１人の患者（番号４）において得られる一方、残りの患
者（番号５）は注入に応答しなかった。また該組み合わ
せ注入はフィブリノゲン分解を全く誘発させなかった。

第２表から明らかなように、ｔ−PAとｕ−PAのヒト患
者への組み合わせ投与が各薬剤単独での一般的な使用の
場合よりも著しく低い用量で効果的な血栓崩壊度を誘発
できることが判明した。

フロントページの続き (56)参考文献 特開 昭57−28009（ＪＰ，Ａ) 特開 昭59−42321（ＪＰ，Ａ) 特開 昭60−51119（ＪＰ，Ａ) 特開 昭59−139323（ＪＰ，Ａ)

Claims (8)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】必須成分である組織タイプ・プラスミノゲ
   ンアクチベーター（ｔ−PA）とウロキナーゼタイプ・プ
   ラスミノゲンアクチベーター（ｕ−PA）をそれらが相乗
   的に抗血栓作用を発揮するような割合と量で使用するこ
   とを特徴とする、医薬製剤。
2. 【請求項２】必須成分が組織タイプ・プラスミノゲンア
   クチベーター（ｔ−PA）と１本鎖形のウロキナーゼタイ
   プ・プラスミノゲンアクチベーター（scu−PA）である
   特許請求の範囲第１項記載の製剤。
3. 【請求項３】必須成分が組織タイプ・プラスミノゲンア
   クチベーター（ｔ−PA）と２本鎖形のウロキナーゼタイ
   プ・プラスミノゲンアクチベーター（ウロキナーゼ）で
   ある特許請求の範囲第１項記載の製剤。
4. 【請求項４】ｔ−PAとｕ−PAを1:10〜10:1（重量比）の
   割合で使用する特許請求の範囲第１〜３項の１つに記載
   の製剤。
5. 【請求項５】ｔ−PA:u−PAの重量比が1:2〜2:1である特
   許請求の範囲第４項記載の製剤。
6. 【請求項６】１つの静脈内注入液の形または複数の注入
   液の組合わせの形である特許請求の範囲第１〜５項の１
   つに記載の製剤。
7. 【請求項７】ｔ−PAとｕ−PAを同時に使用する特許請求
   の範囲第１〜６項記載の製剤。
8. 【請求項８】ｔ−PAとｕ−PAを別々に使用する特許請求
   の範囲第１〜６項記載の製剤。