JPH09110718A

JPH09110718A - 虚血再灌流肝障害治療剤

Info

Publication number: JPH09110718A
Application number: JP7266829A
Authority: JP
Inventors: Kenji Okajima; 研二岡嶋; Shigeki Kushimoto; 成樹久志本
Original assignee: Green Cross Corp Japan; Green Cross Corp Korea
Current assignee: Mitsubishi Tanabe Pharma Corp; GC Biopharma Corp
Priority date: 1995-10-16
Filing date: 1995-10-16
Publication date: 1997-04-28

Abstract

(57)【要約】【解決手段】ヒト由来アンチトロンビン−III を有効
成分とすることを特徴とする虚血再灌流肝障害治療剤。【効果】ヒト由来アンチトロンビン−III は、虚血再
灌流肝障害を受けた哺乳動物に対して、胆汁排泄量の低
下やＧＰＴ等の肝酵素の漏出を軽減する効果を有し、虚
血再灌流肝障害治療剤として有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、ヒト由来アンチト
ロンビン−III （以下、単にＡＴ−III という）を有効
成分とする虚血再灌流肝障害治療剤に関する。

【０００２】

【従来技術・発明が解決しようとする課題】ＡＴ−III
は血漿中に存在するα₂グロブリンに属する糖蛋白質の
一種で、その分子量は６５，０００〜６８，０００であ
り、プロテアーゼ阻害活性を有し、トロンビンの凝固活
性を強く阻害する。また、トロンビンに対する阻害作用
のみならず、その他の凝固因子、例えば活性化Ｘ因子、
活性化ＩＸ因子などに対する阻害作用をも有している。
その他、プラスミンやトリプシンに対する阻害作用があ
ることも報告されている。これらの阻害作用は、一般に
ヘパリンの共存下でより速やかに進行することが知られ
ている。このような薬理作用を有するＡＴ−III は、凝
固異常亢進の補正、具体的には汎発性血管異常症（ＤＩ
Ｃ）の治療を目的として用いられるものである。

【０００３】本発明は、ＡＴ−III の従来知られていな
かった作用を利用した薬剤を提供することを目的とす
る。つまり、当該ＡＴ−III を他の医薬用途に使用する
ことを意図するものである。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記目的
を達成すべく鋭意研究を重ねた結果、ＡＴ−III に虚血
再灌流肝障害の治療に有効であることを見出し、本発明
を完成した。

【０００５】即ち、本発明はＡＴ−III を有効成分とす
る虚血再灌流肝障害治療剤である。

【０００６】本発明で使用されるＡＴ−III は、ヒト由
来のもので、医薬として使用できる程度に精製されたも
のであれば特に制限されるものではなく、例えばヒトの
全血、血漿、血清または凝固した血液から圧搾された血
清等から精製することができる。使用される血液として
は、特にＨＢｓ抗原、抗ＨＩＶ抗体に陰性であるものが
好ましい。

【０００７】ＡＴ−III を調製するための出発原料とし
ては、例えばコーンの冷エタノール法で得られる画分IV
−１，画分IV，上清Ｉ，上清II＋III （ＥＰ公開５５１
０８４）等が使用される。ＡＴ−III の精製法として
は、例えば特開昭４８−３５０１７号明細書、特公昭５
９−７６９３号明細書に開示の方法、疎水性クロマト
（特開平１−２７５６００号）、陰イオン交換体処理
（特開平２−４７１７号）等が例示される。また、ＡＴ
−III は細胞培養法（例えば、特表昭５７−５００７６
８号公報参照）、遺伝子工学法（例えば、特開昭５８−
１６２５２９号公報参照）などにより調製されるもので
あってもよい。また、市販のＡＴ−III 製剤（例えば商
品名：ノイアート、（株）ミドリ十字製等）を用いるこ
ともできる。

【０００８】虚血再灌流肝障害とは、出血性ショックや
腹部手術等の肝血流障害後に発生する肝機能障害であ
り、このような虚血再灌流肝障害を受けた哺乳動物に対
して、ＡＴ−III は、胆汁排泄量の低下やＧＰＴ（グル
タミン酸−ピルビン酸トランスアミナーゼ）等の肝酵素
の漏出を軽減する効果を有することが判明した。

【０００９】本発明の虚血再灌流肝障害治療剤において
は、その使用は薬効成分としてＡＴ−III 単独で効果を
発揮し得るものと思われる。

【００１０】また、本発明の虚血再灌流肝障害治療剤
は、本発明の目的に反しない限り通常医薬品に用いられ
る薬理的に許容される添加剤（例えば、担体、賦形剤、
希釈剤等）、安定化剤または製薬上必要な成分を配合し
ていてもよい。添加剤・安定化剤としては、糖類，すな
わちブドウ糖，果糖等の単糖類、ショ糖，乳糖，麦芽糖
などの二糖類、マンニトール，ソルビトール等の糖アル
コール；クエン酸，リンゴ酸，酒石酸等の有機酸または
その塩（例えば、ナトリウム塩等）；グリシン，アスパ
ラギン酸，グルタミン酸等のアミノ酸またはその塩（例
えば、ナトリウム塩等）；ポリエチレングリコール，プ
ルロニック，トウィーン等の界面活性剤；ヘパリン，ア
ルブミンなどが挙げられる。

【００１１】本発明製剤は、ＡＴ−III と上記成分とを
適宜混合し、粉末、顆粒、錠剤、カプセル剤、シロップ
剤、注射剤等の態様に調製され、経口的または非経口的
に投与される。好ましくは、静脈投与の態様である。本
製剤は、液状製剤の態様でもよいが、とりわけＡＴ−II
I を薬理的に許容される添加剤とともに凍結乾燥品とし
て調製しておき、用時溶解して使用する態様の製剤とす
ることが好ましい。かかる製剤は、使用時に注射用蒸留
水や滅菌精製水等によって約１〜１００ＡＴ−III 単位
／ｍｌ溶液として、より好ましくは生理的に等張な塩濃
度および生理的に好ましいｐＨ値（ｐＨ６〜８）に調整
される。

【００１２】投与量は症状、体重、性別、動物種等によ
って適宜選択すればよく、一般的にヒトの成人に対して
は、通常１〜１０００単位／ｋｇ体重／日、好ましくは
１０〜５００単位／ｋｇ体重／日を１日１〜数回に分け
て投与する。本明細書において、ＡＴ−III の力価は、
１単位が正常人血漿１ｍｌ中に含まれるＡＴ−III 量に
相当する。

【００１３】

【実験例・実施例】以下、本発明を詳細に説明するため
実験例および実施例を挙げるが、本発明はこれらによっ
て何ら限定されるものではない。

【００１４】実験例１（１）実験方法ラットの腹部を切り開き、肝左葉のみを選択的に６０分
間虚血した後、血流を再開させて虚血再灌流肝障害のモ
デルを作成した。被験薬として、ＡＴ−III （商品名：
ノイアート、（株）ミドリ十字製）１２５単位／ｋｇ体
重を使用し、上記のラットの虚血再灌流肝障害モデルに
血流再開直後静脈内へ投与した。このＡＴ−III 投与群
の０〜１時間後、１〜２時間後および２〜３時間後の各
ラットの胆汁量および擬似手術群（ｓｈａｍ）、ＡＴ−
III 非投与群の胆汁量をそれぞれ測定した。ここで擬似
手術群とは、ラットの腹部を切り開いたのみで、肝左葉
を虚血させなかったラット群をいう。その結果を図１〜
図３に示す。図１〜図３において、Ｐは統計学的危険率
を示す。また、血流再開後１２時間後のＡＴ−III 投与
群とＡＴ−III 非投与群の血中ＧＰＴ量を比較した。そ
の結果を図４に示す。ここでｎは供試ラット数を示す。
胆汁量は、総胆管にチューブを挿入し、胆汁を採取する
ことによってその総量を測定した。また血中ＧＰＴ値
は、トランスアミナーゼＣIIテストワコー（和光純薬
（株）製）を用いて測定した。

【００１５】（２）結果図１〜図３から明らかなように、ＡＴ−III 非投与群で
は時間の経過と共に胆汁量の減少が見られたが、ＡＴ−
III 投与群では、血流再開後２〜３時間の間の胆汁量の
減少が有意に阻止された。さらに図４より血流再開後１
２時間後において、血中ＧＰＴ量がＡＴ−III 投与によ
り有意に低下していたことから、肝障害治療効果が認め
られた。

【００１６】実施例１コーンの冷アルコール分画法で得られた画分IV−１のペ
ースト１０ｋｇを生理食塩水１００リットルに懸濁し、
硫酸バリウムを５（ｗ／ｖ）％になるように加え、室温
で３０分間撹拌し、微量に存在するプロトロンビンを硫
酸バリウムに吸着させて除去した。この上清液をｐＨ
６．５に調整し、ポリエチレングリコール＃４０００を
１３（ｗ／ｖ）％になるように加え、生じた沈澱を遠心
分離して除き、さらにポリエチレングリコール＃４００
０を３０（ｗ／ｖ）％になるように加え、さらに生じた
沈澱を遠心分離して回収した。この沈澱を冷生理食塩水
約２０リットルに溶解し、予め生理食塩水で調製された
ヘパリンセファロースを充填したカラムへ注入し、ＡＴ
−III をカラムに吸着させた。このカラムを０．４Ｍの
塩化ナトリウム溶液で洗浄して不純蛋白を除いたのち、
２．０Ｍの塩化ナトリウム溶液をカラムに流して溶出し
てくる部分を回収した。このＡＴ−III の水溶液にクエ
ン酸ナトリウムを０．６Ｍの濃度に加え、ｐＨ７．８に
調整した後６０℃で１０時間の加熱処理を施し、続いて
０．９％塩化ナトリウム溶液に対し１夜透析を行いつつ
濃縮してＡＴ−III の１（ｗ／ｖ）％水溶液を得、必要
に応じて濾過または遠心分離を行って透明な液とした。
このＡＴ−III の１（ｗ／ｖ）％水溶液にマンニトール
２（ｗ／ｖ）％とクエン酸ナトリウム０．２（ｗ／ｖ）
％を加え、塩化ナトリウムが０．５％になるように少量
の冷蒸留水で希釈し、１Ｎの水酸化ナトリウムでｐＨ
７．６に調整した後、滅菌したミリポアフィルターで除
菌濾過し、５００単位づつ分注し、凍結乾燥を行って乾
燥製剤とした。

【００１７】実施例２１バイアル中、ＡＴ−III ５００単位マンニトール２００ｍｇ塩化ナトリウム５０ｍｇクエン酸ナトリウム５２ｍｇよりなる凍結乾燥品を用時２０ｍｌの注射用蒸留水に溶
解して、静注用製剤とした。

【００１８】

【発明の効果】以上の説明で明らかなように、虚血再灌
流肝障害を受けた哺乳動物に対して、ＡＴ−III は、胆
汁排泄量の低下やＧＰＴ等の肝酵素の漏出を軽減する効
果を有し、虚血再灌流肝障害治療剤として有用である。

【図面の簡単な説明】

【図１】実験例１における血流再開後０〜１時間後のラ
ットの胆汁量を示すグラフである。

【図２】実験例１における血流再開後１〜２時間後のラ
ットの胆汁量を示すグラフである。

【図３】実験例１における血流再開後２〜３時間後のラ
ットの胆汁量を示すグラフである。

【図４】実験例１における血流再開後１２時間後の血中
ＧＰＴ量を示すグラフである。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】ヒト由来アンチトロンビン−III を有効
成分とすることを特徴とする虚血再灌流肝障害治療剤。