JPH082818B2 - Ｆｒ−９００４７８物質およびその誘導体ならびにそれらの製造法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） この発明は、降圧作用および抗血小板凝集作用を有す
る新規なFR−900478物質およびその誘導体ならびにそれ
らの製造法に関するものであり、医療の分野で利用され
る。

（発明の構成） この発明は下記構造式（Ｉ） を有するFR−900478物質およびその誘導体ならびにそれ
らの製造法に関するものである。

FR−900478物質の理化学的性質は次の通りである。

分子式:C₂₀H₃₄O₃ 元素分析値： C,74.37％:H,10.87％ （理論値:C,74.49％;H,10.63％） 分子量： FDMS,m/z323（Ｍ＋１） 融点： 108℃ 比旋光度 ▲［α］²³ _D▼＝−96.2゜（Ｃ＝1.05,CHCl₃） 紫外線吸収スペクトル： 赤外線吸収スペクトル： ¹H−核磁気共鳴スペクトル δ（ppm,CDCl₃）:5.81（1H,d,J＝5.6Hz）,4.25（3H,
m）,2.32（1H,d,J＝5.6Hz）,2.23（1H,d,J＝3.6Hz）,2.
12（1H,m）,1.96（1H,m）,1.8〜1.5（5H,m）,1.4〜1.05
（6H,m）,1.0〜0.85（12H）¹³ C−核磁気共鳴スペクトル： δ（ppm,CDCl₃）:136.5,128.5,75.5,72.7,67.6,51.3,4
5.1,44.3,40.3,35.9,34.6,33.1,29.7,28.9,28.6,27.3,2
4.8,21.5,20.6,15.5 溶剤に対する溶解性 易溶：メタノール、酢酸エチル、クロロホルム 不溶：水 呈色反応： 陽性：硫酸セリウム反応、リンモリブデン酸反応 陰性：ニンヒドリン反応、ドラーゲンドルフ反応、塩化
第二鉄反応、モーリッシュ反応 塩基性、酸性、中性の区別 中性 物質の色および状態 無色柱状結晶 FR−900478物質の化学構造については、上記のFR−90
0478物質の理化学的性質およびFR−900478物質をジョー
ンズ酸化（Jones′ Oxidation）して得られる誘導体（F
R−900478物質と名づける）をＸ線回折した結果を総合
して決定した。即ちFR−105766物質はＸ線回折により下
記式（II） を有することが判明し、その結果、FR−900478物質の化
学構造は上記構造式（Ｉ）で表わされることが判明し
た。

FR−900478物質の化学名は（1R,4S,4aS,5S,8R,8aS,9
R,12R）−３−ヒドロキシメチル−12−イソプロピル−
8,9−ジメチル−1,4,4a,5,6,7,8,8a−オクタヒドロ−1,
5−ブタノナフタレン−4,8a−ジオール［（1R,4S,4aS,5
S,8R,8aS,9R,12R）−３−hydroxymethyl−12−isopropy
l−8,9−dimethyl−1,4,4a,5,6,7,8,8a−octahydro−1,
5−butanonaphthalene−4,8a−diol］である。

この発明のFR−900478物質は、例えばヴィルガリア属
に属するFR−900478物質生産菌を倍地に培養し、得られ
る培養物からFR−900478物質を単離することにより製造
することができる。

この発明で使用するFR−900478物質生産菌のうち、こ
の発明者らが熊本県阿蘇郡阿蘇町で採取した土壌試料か
ら新たに分離採取した菌株（Ｆ−5408株と番号を付す）
は、ポテトデキストロース寒天をはじめとする種々の培
地上で有性生殖器官を形成せず、単生の分生子柄と分生
子を生ずる。この無性生殖器官の形態的特徴から、本菌
株は不完全菌類ヴィルガリア属（Virgaria Nees）に所
属すると思われる。以下に本菌株の形態的、培養的及び
生理的性質を示す。

（１）形態的性質 ポテト・デキストロース寒天をはじめとする種々の培
地上でのＦ−5408株の分生形成様式は全分芽型（holobl
astic）であり、分生子柄の伸長は仮軸型（sympodial）
である。分生子柄は、薄い茶色から茶色で先端部に向け
て淡色となり、滑面、隔壁をもち、単生である。それら
は培地表面または気中菌糸からの分枝として立ち上が
り、長さ55〜100μ、幅２〜3.5μであり、分枝しない
か、隔壁下部から不規則に分枝し、主軸に平行またはや
や散開気味に伸長する。分枝は通常一カ所につきそれぞ
れ１本または２本で、長さ30〜70μ、さらに数回分枝を
繰り返し、最終的に頂端に長さ10〜15μの分生子形成部
をもつ。分生子形成部からは、単一の分生子が形成部の
伸長に伴って次々と分芽し、分生子の脱落後には、明瞭
な痕跡が形成部に残る。分生子は滑面、茶色から褐色、
腎臓形からアーモンド形で基部に脱落痕の突起をもち、
長さ４〜５μ、幅３〜3.5μ、一細胞である。栄養菌糸
は、隔壁をもち、無色、滑面で分枝する。菌糸細胞は円
筒形、樽形、紐形で長さ８〜23μ、幅１〜５μである。
厚膜胞子は形成されない。

（２）培養上での特徴 麦芽エキス寒天上での集落は抑制的に生育し、25℃、
２週間培養後、直径1.5cmに拡がる。集落表面は盛り上
がり、厚くややかさぶた状、気菌糸が立ち上がり、集落
全体は円形に近い。色調は白色から淡い赤茶の上に灰色
の部分が多数点在する。分生子構造は豊富に形成され
る。裏面はにぶい黄色である。ポテト・デキストロース
寒天上での生育は、同一条件で麦芽エキス寒天上よりわ
ずかに遅れる。集落表面は盛り上がりが厚く、白または
暗いオリーブ灰の上に灰味オリーブの部分が点在する。
分生子は非常に豊富である。裏面は淡い黄茶である。

（３）生理的性質 Ｆ−5408株は４〜32℃の範囲で生育可能で、最適生育
温度は24〜28℃である（東洋科学産業株式会社製振盪温
度勾配培養装置TN−３を用いてポテト・デキストロース
寒天上で測定した）。また生育pH範囲はpH4−10、最適
生育pHはpH5−６である（麦芽エキス・酵母エキス液状
培地で25℃、７日間振盪による）。

ヴィルガリア属は１属１種であるので、Ｆ−5408株と
ヴィルガリア・ニグラ・リンク・ネース・エクス・エフ
・グレイ［Virgaria nigra（Link）Nees ex S.F.Gray］
との比較を行った。その結果、本菌株はエム・ビー・エ
リス［M.B.Ellis,Dematiaceus Hyphomycetes.,212,C.M.
I.,Kew（1971）、松島［I.Matsushima,Icones Microfun
gorum A Matsushima Lectorum,163,（1975）］らの記載
とほとんど一致した。従ってＦ−5408株を、ヴィルガリ
ア・ニグラ（Virgaria nigra）の一菌株と同定し、ヴィ
ルガリア・ニグラ Ｆ−5408（Virgaria nigra F−540
8）と命名した。

このヴィルガリア・ニグラ Ｆ−5408株は工業技術院
微生物工業技術研究所に微工研菌寄第8753号として昭和
61年４月26日に寄託されている。

この発明で使用FR−900478物質生菌は、例えばＸ線、
紫外線等の照射処理、例えばナイトロジエン・マスター
ド、アザセリン、亜硝酸、２−アミノプリン、Ｎ−メチ
ル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニン（NTG）等の
変異誘起剤による処理、ファージ接触、形質転換、形質
導入、接合等の通常用いられる菌種変異処理方法によ
り、FR−900478物質の生産能を高めることができる。

ヴィルガリア属に属するFR−900478物質生産菌を培地
に培養することにより行われるFR−900478物質の生産は
原則的には一般微生物の培養方法に準ずるが、通常は液
体培地による深部培養法が有利である。培養に用いられ
る培地としては、ヴィルガリア属に属するFR−900478物
質生産菌が利用する栄養源を含有する培地であればよ
い。すなわち、合成培地、半合成培地あるいは天然培地
が用いられ、培地組成は炭素源としては、例えばグルコ
ース、スクロース、でん粉、可溶性でん粉等が用いら
れ、窒素源として、例えばグルテンミール、コーンミー
ル、綿実粉、大豆粉、コーンスチープリカー、乾燥酵
母、酵母エキス、尿素、りん酸アンモニウム等が用いら
れる。このほか、例えばりん酸水素二ナトリウム、りん
酸二水素カリウム、塩化マグネシウム、硫酸マグネシウ
ム、炭酸カルシウム等の無機縁も必要に応じて培地に添
加される。

培養温度は25〜30℃前後が適当であり、培養容量の増
大に従って適宜種培養を行なうと好結果が得られること
が多い。本培養の培養時間は50〜300時間位が適当であ
り、培地が濃厚になるのに従って、培養時間をさらに延
長してもよい。

以上述べた培養条件は使用生産菌株の特性に応じてそ
れぞれに最適の条件を選択して適用される。

次に、培養により生成したFR−900478物質は通常、菌
体内に蓄積されることが多いので、一般には遠心分離、
ろ過等の手段により培地から採取した菌体からこの分野
で通常に用いられる手段により単離される。すなわち、
液性変換、例えば陰イオン交換樹脂、陽イオン交換樹
脂、非イオン性吸着樹脂等の樹脂による処理、例えば活
性炭、けい酸、シリカゲル、アルミナ、セルロース等の
吸着剤による処理、結晶化、再結晶などの手段を任意の
順序に組み合わせまたは反復して適用することにより単
離することができる。

さらに、この発明の目的化合物のうち、上述の式（I
I）で表わされるFR−105766物質ならびに下記式（III）
および式（IV）で表わされるFR−105765物質およびFR−
105767物質は、FR−900478物質を常法によりジョーンズ
酸化することによって得ることができる。

また、下記式（Ｖ） （式中、▲Ｒ² _a▼は保護されたヒドロキシ、▲Ｒ³ _a▼は
保護されたヒドロキシメチルを意味する） で表わされる化合物は、FR−900478物質の３位のヒドロ
キシメチル基におけるヒドロキシ基および４位のヒドロ
キシ基へ常法によりとヒドロキシ保護基を導入すること
により得ることができる。

その際、導入するヒドロキシ保護基の種類、反応試剤
などの条件によって、３位のヒドロキシメチル基のヒド
ロキシ基および４位のヒドロキシ基の片方のみにヒドロ
キシ保護基が導入される場合もあり、また、かくして得
られた化合物に再度別のヒドロキシ保護基が導入される
場合もある。さらに、３位のヒドロキシメチル基のヒド
ロキシ基および４位のヒドロキシ基の双方にヒドロキシ
保護基が導入された化合物を、常法によりヒドロキシ保
護基の脱離反応に付すことによって片方のヒドロキシ基
のみにヒドロキシ保護基が導入された化合物を得ること
もできる。

そして、これらの方法によって得られる化合物もまた
この発明の範囲に含まれる。

好適な保護されたヒドロキシ基としては、アセトキ
シ、プロピオニルオキシ、ブチリルオキシ、イソブチリ
ルオキシ、ｔ−ブチリルオキシなどの低級アリカノイル
オキシ、ｔ−ブチルジメチルシリルオキシなどの低級ア
ルキルシリルオキシ、ベンゾイルオキシなどのアロイル
オキシなどが挙げられる。

（発明の効果） この発明のFR−900478物質およびその誘導体は、下記
の試験結果から明らかなように血圧降下作用および抗血
小板凝集作用を有し、医薬として有用である。

（１）自然発症高血圧ラットによる無麻酔下における血
圧への作用 （ａ）試験法 SHR系ラット（雄）（13〜14週令、体重260〜310g）の
腹部大動脈にカニューレを挿入し、無麻酔下、観血的に
血圧を測定した。薬剤は経口投与した。

（２）抗血小板凝集作用： （ａ）試験方法 ヒト多血小板血漿（以下PRPと記す）懸濁液（血小板
数:3×10⁵個／μｌ）に所定量の試験化合物を加え撹拌
しながら、血小板凝集剤の濃度がエピネフリンの場合は
５μＭ、PAF［血小板活性化因子（platelet activating
factor）］の場合は1.5μＭになるように加えた。血小
板凝集を濁度法により、凝集中のPRPの光透過度の変化
を記録することにより測定した。

FR−900478物質の活性をIC₅₀値、すなわち血小板凝集
を50％阻止するのに必要な濃度として表わした。

（ｂ）試験結果 PRPを用いた場合につき、血小板凝集剤としてエピネ
フリンおよびPAFのそれぞれを用いた場合のIC₅₀値を表
２に示す。

FR−900478物質およびその誘導体は経口用あるいは非
経口用に適した有機もしくは無機の固体状または液状の
慣用担体と混合して、慣用の医薬製剤、例えばカプセル
剤、錠剤もしくは顆粒剤のような固形製剤または液剤も
しくは乳剤のような液状製剤の形で使用され得る。

なお、上記製造中には、安定化剤、湿潤剤、乳化剤等
の慣用の添加剤が適宜含まれていてもよい。

FR−900478物質およびその誘導体の投与量は患者の年
令、体重、症状等にもよるが通常一回約0.1mgないし100
0mgの範囲で投与される。

［実施例］ 以下実施例によりこの発明を説明する。

実施例１ FR−900478物質の製造 でん粉１％、可溶性でん粉１％、グルコース１％、コ
ーンスチープリカー0.5％、乾燥酵母0.5％、綿実粉0.5
％および炭酸カルシウム0.2％の組成の培地を250ml容フ
ラスコ35本に80mlずつ分注し、120℃で30分滅菌した。
各培地にヴィルガリア・ニグラＦ−5408株の斜面培養物
を１白金耳ずつ接種し、25℃で３日間振とう培養した。
別にグルコース３％、コーンスチープリカー１％、綿実
粉0.5％、グルテンミール0.5％、大豆粉0.5％、乾燥酵
母0.5％および炭酸カルシウム0.2％の組成の培地20ず
つを30容ジャーファーメンター７基に注入し120℃で3
0分滅菌した後、上記培養物を接種し、25℃で４日間培
養した。

培養終了後、培養物にけい藻土を添加し濾過し菌体を
集めた。得られた菌体にアセトン40を加え撹拌し、活
性物質を抽出した。菌体抽出液を濾過し、濾液を減圧下
に濃縮して、1.5の水溶液とした。これをpH7.0とし、
３の酢酸エチルで活性物質を抽出した。溶媒層を濃縮
し、シリカゲル60（メルク社製）500mlと混合し、あら
かじめヘキサンでパックしたシリカゲル60カラムクラマ
トグラフィーに付した。活性物質をヘキサン−酢酸エチ
ル（1:2）で溶出した。これを濃縮し、ローバーカラム
（Lichroprep Si 60サイズＢ、メルク社製）に添加し、
クロロホルム−メタノール（30:1）の混合溶媒で溶出し
た。活性画分を濃縮し再びローバーカラムに加え、ヘキ
サン−酢酸エチル（1:1）の混合溶媒で溶出した。活性
画分を濃縮乾固し、得られた油状物をヘプタン−酢酸エ
チルを用いて結晶化し、FR−900478物質の無色柱状結晶
445mgを得た。融点108℃。

実施例２ FR−105765物質、FR−105766物質およびFR−
105767物質の製造 FR−900478物質100mgをアセトン（2ml）に溶解し、０℃
に冷却下、ジョーンズ試薬（C_rO₃−H₂SO₄−H₂O）を３滴
滴下した。混合物を０℃で１時間撹拌した後、氷水に注
いだ。酢酸エチルで抽出し、水洗後、硫酸マグネシウム
上で乾燥した。酢酸エチルを減圧下留去し、残渣をシリ
カゲル分取薄層クロマトグラフィー（展開溶媒30％酢酸
エチル−クロロホルム）で精製し、FR−105765物質（54
mg）、FR−105766物質（5mg）及びFR−105767物質（5m
g）を得た。

FR−105765物質：¹ H−NMR（270MHz,CDCl₃）δ:6.89（1H,d,J＝6.2Hz）,4.
31（2H,s）,2.67（1H,d,J＝6.2Hz）,2.48（1H,d,J＝3.9
Hz）,2.36〜1.20（15H,m）,1.20〜0.85（12H,m）¹³ C−NMR（67.8MHz,CDCl₃）δ:202.9（ｓ）,146.4
（ｄ）,138.4（ｓ）,76.2（ｓ）,62.3（ｔ）,56.7
（ｄ）,44.8（ｄ）,42.5（ｄ）,41.3（ｄ）,36.1
（ｄ）,34.6（ｄ）,32.2（ｄ）,30.0（ｔ）,28.7
（ｔ）,28.6（ｔ）,26.0（ｔ）,23.8（ｑ）,21.9
（ｑ）,20.8（ｑ）,13.9（ｑ） IR（CHCl₃,cm^-1）:3450,2895,2870,1655,1460,1380,110
0,1020 EIMS m/z320（m⁺）． FR105766物質：¹ HNMR（400MHz,CDCl₃）δ:10.16（1H,s）,7.81（1H,d,J
＝6.5Hz）,2.84（1H,d,J＝6.5Hz）,2.56（1H,d,J＝3.9H
z）,2.35〜2.20（2H,m）,2.10〜1.97（2H,m）,1.77（1
H,m）,1.65〜1.10（9H,m）,1.07（3H,d,J＝6.4Hz）,1.0
5（3H,d,J＝6.3Hz）,0.94（3H,d,J＝6.3Hz）,0.92（3H,
d,J＝6.8Hz） EIMS:m/z318（m⁺）． FR105767物質：¹ HNMR（400MHz,CDCl₃）δ:9.50（1H,s）,7.01（1H,d,J
＝5.9Hz）,4.63（1H,s）,2.69（1H,d,J＝5.9Hz）,2.22
（1H,d,J＝3.4Hz）,2.15（1H,m）,2.03〜1.93（2H,m）,
1.78〜1.53（4H,m）,1.49〜1.06（8H,m）,1.05（3H,d,J
＝6.8Hz）,1.04（3H,d,J＝6.8Hz）,1.01（3H,d,J＝6.8H
z）,0.90（3H,d,J＝6.8Hz） EIMS:m/z320（m⁺） 実施例３ FR−102100物質の製造 FR900478物質30mgをピリジン（1ml）に溶解し、さら
に無水酢酸（0.5ml）を加えた。混合物を１時間室温で
撹拌後、一夜放置した。減圧下、過剰の無水酢酸及びピ
リジンを留去した。残渣をシリカゲル分取薄層クロマト
グラフィー（展開溶媒20％酢酸エチル−クロロホルム）
で精製し、FR102100物質（37.8mg）を得た。¹ HNMR（400MHz,CDCl₃）δ:6.14（1H,d,J＝6Hz）,5.48
（1H,s）,4.65（1H,d,J＝12Hz）,4.57（1H,d,J＝12H
z）,2,44（1H,d,J＝6Hz）,2.17（1H,m）,2.10（3H,s）,
2.05（1H）,2.04（3H,s）,1.98〜1.85（3H,m）,1.80（1
H,m）,1.65（1H,m）,1.53〜1.48（2H,m）,1.40（1H,
m）,1.35（1H,m）,1.28〜1.0（4H,m）,0.99（3H,d,J＝
6.8Hz）,0.98（3H,d,J＝6.8Hz）,0.95（3H,d,J＝6.8H
z）,0.94（3H,d,J＝6.8Hz） EIMS:m/z406（M⁺） 実施例４ FR−77828物質の製造 FR900478物質322mgをジメチルホルムアミド（10ml）
に溶解し、その上にイミダゾール（170mg）及びTert−
ブチルジメチルシリルクロリド（180mg）を加えた。混
合物を室温下終夜撹拌した後ジメチルホルムアミドを減
圧下留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフ
ィーにて精製し、クロロホルムで流出するフラクション
よりFR77828物質（365mg）を得た。¹ HNMR（200MHz,CDCl₃）δ:5.82（1H,d,J＝6Hz）,4.37
（1H,d,J＝12Hz）,4.24（1H,d,J＝12Hz）,4.20（1H,
s）,3.94（1H,br）,3.03（1H,br）,2.41（1H,d,J＝6H
z）,2.21（1H,d,J＝4Hz）,2.18〜1.0（13H,m）,1.0（3
H,d,J＝7Hz）,0.97（6H,d,J＝7Hz）,0.92（9H,s）,0.90
（3H,d,J＝7Hz）,0.12（6H,s） FABMS:m/z418（M⁺−H₂O）． 実施例５ FR−77827物質の製造 FR−77827物質（14mg）をピリジン（1ml）に溶解し、
その上へ塩化ベンゾイル（18.6μ）及びＮ−ジメチル
アミノピリジン（2mg）を加えた。混合物を１時間室温
で撹拌した後、終夜室温で放置した。ピリジンを減圧下
留去した後、残渣を分取薄層クロマトグラフィー（展開
溶媒30％ヘキサン−クロロホルム）で精製しFR−77827
物質（15mg）を得た。¹ HNMR（400MHz,CDCl₃）δ:8.04（2H,d,J＝8Hz）,7.58
（1H,t,J＝8Hz）,7.46（2H,t,J＝8Hz）,6.18（1H,d,J＝
6Hz）,5.71（1H,s）,4.21（2H,s）,2.52（1H,d,J＝6H
z）,2.24〜2.17（2H,m）,2.07〜1.86（3H,m）,1.70（1
H,m）,1.62〜1.18（9H,m）,1.04（6H,d,J＝7Hz）,1.00
（3H,d,J＝7Hz）,0.98（3H,d,J＝7Hz）,0.90（9H,s）,
0.06（3H,s）,0.04（3H,s） FABMS:m/z563（Ｍ＋Na）⁺. IR（CDCl₃）:3600,2940,2860,1705,1600cm^-1 実施例６ FR−79786物質の製造 FR−77827物質（60mg）をテトラヒドロフラン（2ml）
に溶解し、さらにテトラｎ−ブチルアンモニウムフルオ
ライド（0.5ml）を加えた。混合物を１時間加熱還流し
た後、溶媒を減圧下留去した。

残渣をシリカゲル分取薄層クロマトグラフィー（展開溶
媒、酢酸エチル：ヘキサン1:2）で精製しFR−79786物質
（40mg）を得た。¹ HNMR（200MHz,CDCl₃）δ:8.05（1H,d,J＝8Hz）,7.59
（1H,t,J＝8Hz）,7.43（2H,t,J＝8Hz）,6.12（1H,d,J＝
6Hz）,5.85（1H,s）,4.20（1H,d,J＝12Hz）,4.12（1H,
d,J＝12Hz）,2.58〜2.36（2H,m）,2.34〜2.15（2H,m）,
2.10〜1.20（13H,m）,1.10〜0.87（12H） FABMS:m/z427（Ｍ＋Ｈ）⁺.

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 31/045 ＡＣＢ 9455−4Ｃ (Ｃ１２Ｐ 7/02 Ｃ１２Ｒ 1:645） (Ｃ１２Ｐ 7/24 Ｃ１２Ｒ 1:645） (72)発明者 向阪 正信 茨城県新治郡桜村千現１−４−１ キャピ タル光永303 審査官 鈴木 恵理子

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】一般式 （式中、R¹は水素、R²はヒドロキシまたは保護されたヒ
   ドロキシ、またはR¹とR²が一緒になってオキソを表わ
   し、R³はヒドロキシメチル、保護されたヒドロキシメチ
   ルまたはホルミルを意味する） で示される化合物。
2. 【請求項２】式 で示される特許請求の範囲第１項に記載の化合物。
3. 【請求項３】ヴィルガリア属に属するFR−900478物質生
   産菌を培地に培養し、その培養物からFR−900478物質を
   単離することを特徴とする 式 で示されるFR−900478物質の製造法。