JPH08224094A

JPH08224094A - 生物学的に活性のカルジオジラチン断片の製造法

Info

Publication number: JPH08224094A
Application number: JP7260453A
Authority: JP
Inventors: Wolf-Georg Forssmann; フオルスマン，ヴオルフ−ゲオルク
Original assignee: BORUFUUGEORUKU FUORUSUMAN
Current assignee: BORUFUUGEORUKU FUORUSUMAN
Priority date: 1983-12-24
Filing date: 1995-10-06
Publication date: 1996-09-03
Also published as: US4782044A; JPH0772146A; JPS61500848A; WO1985002850A1; US4751284A; JPH0822876B2; DE3486154D1; ATE89829T1; EP0167575A1; EP0167575B1; EP0167575B2; DE3346953A1; US4895932A; DE3346953C2

Abstract

(57)【要約】【課題】カルジオジラチンの血管拡張作用と同様の作
用を示す生物学的に活性のカルジオジラチン断片を製造
する方法。【解決手段】生物学的に活性のカルジオジラチン断片
を製造する方法において、カルジオジラチンをアルギニ
ン特異性タンパク質分解酵素、即ちアルギニン特異性エ
ンドペプチダーゼで処理する。【効果】心筋それ自体のイオン向性に対する効果もし
くは血管平滑筋に対する影響、ならびに発汗に対する影
響を示す生物学的に活性のカルジオジラチン断片を簡単
に製造する方法。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、生物学的に活性の
カルジオジラチン（Cardiodilatin）断片を製造する方
法に関する。

【０００２】

【従来の技術】電子顕微鏡検査から、豚の右心房が２種
類の異なる細胞型を有し、その中の１つが形態学内分泌
細胞（分泌顆粒）を有することは、知られていた。しか
し、右心房の形態学及び組織化学的検査によって、心房
の筋内分泌細胞（Aurikel）中の既に公知の型であるよ
うなホルモン物質は、全く測定することができなかっ
た。これに対して、心臓神経中の多数の公知の神経ペプ
チドホルモンは確認された。

【０００３】ところで、心房抽出液は、既に記載した利
尿活性［ジェイ・ピー・マリー（J.P. Marie），エイッ
チ・ギレモント（H. Guillemont）、ピー・ワイ・ハッ
ト(P. Y. Hatt）、“パトル・ビオル（Pathol. Bio
l.）”、第２４巻（１９７６年）第５４９頁〜第５５４
頁、参照］とともに、意外なことに、心筋それ自体のイ
オン向性に対する効果ないしは血管平滑筋に対する影
響、ならびに発汗に対する影響を示すことが見い出され
た。更に、この生物学的作用は、新規ペプチドホルモン
によって惹起され、この新規ペプチドホルモンは、その
作用に関連して、殊に高血圧症の診断及び治療の点で大
きい臨床的及び治療的な重要性を生じることが見い出さ
れた。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】従って、前記したよう
な課題が課された。

【０００５】

【課題を解決するための手段】生物学的に活性のカルジ
オジラチン断片を製造する本発明による方法は、カルジ
オジラチンをアルギニン特異性タンパク質分解酵素で処
理することによって特徴付けられる。

【０００６】本発明方法によれば、アルギニン特性蛋白
質分解酵素での分解によって形成された、カルジオジラ
チンのＮ−末端で短縮された断片が得られ、この場合こ
の断片は、緩和された形であっても基幹分子と同様の生
物学的作用を定量的に有している。

【０００７】

【発明の実施の形態】本発明方法の実施形式によれば、
アミノ酸配列 Asp - Pro - Ser - Asp - Arg- Ser - Al
a を有し、この場合 Pro - Ser は Ser - Ser によって
代えられていてもよい断片が得られる。

【０００８】新規ペプチドホルモンカルジオジラチン
は、アミノ酸残基１２６個からなり、その組成が：Asp
／ Asn １４個、Thr ３個、Ser １５個、Glu ／ Gln １
２個、Pro １０個、Gly １２個、Ala １０個、Val ７
個、Met ４個、Ile １個、Leu １５個、Tyr２個、Phe
３個、Lys ４個、His ２個、Arg １０個、Trp ２個であ
り、Ｎ−末端側７１個のアミノ酸配列が：Asn − Pro
− Val − Tyr − Gly − Ser − Val − Ser − Asn
− Ala − Asp − Leu − Met − Asp − Phe − Lys
− Asn − Leu − Leu − Asp − His− Leu − Glu −
Asp − Lys − Met − Pro − Leu − Glu − Asp −
Glu− Ala − Met − Pro − Pro − Gln − Val − Le
u − Ser − Glu − Gln −Asp − Glu − Val − Leu
− Ser − Glu − Gln − Asn − Glu − Glu − Val
− Gly − Ala − Pro − Leu − Pro − Leu − Leu
− Glu − Glu − Val− Pro − Pro − Trp − Thr −
Gly − Glu − Val − Asn − Proであり、等電点Ｉ．
Ｐ．６〜６．５及び分子量約１３０００ダルトンであ
る。

【０００９】更に、また断片、殊にＣ−末端断片及びペ
プチドホルモンカルジオジラチンのペプチド鎖の２個の
Met 残基の間に存在する断片は、部分的に緩和された
形であってもカルジオジラチンの生物活性を示すことが
見い出された。

【００１０】従って、カルジオジラチンは、ペプチドホ
ルモンカルジオジラチンのペプチド鎖の２個の Met 残
基の間に存在する断片、例えばアミノ酸配列 Asp − Ph
e −Lys − Asn − Leu − Leu − Asp − His − Leu
− Glu − Asp − Lys − Hse を有する断片（１）又は
アミノ酸配列 Pro − Leu − Glu − Asp − Glu −Ala
− Hse を有する断片（２）及びＮ−末端断片 Asn −
Pro − Val − Tyr− Gly − Ser − Val − Ser − As
n − Ala − Asp − Leu − Hse ならびに記載したホモ
セリン−ペプチドを簡略化したカルジオジラチン−１２
６のそれぞれのＣ−末端残留主体配列を有する。この断
片は、部分的なブロムシアン分解によって得られ、この
場合カルジオジラチンのＮ−末端短縮により、それぞれ
Ｃ−末端でホモセリン（ Hse ）で終結する分解した断
片が導かれる。

【００１１】更に、一連のカルジオジラチン断片は、合
成によりメリフィールド（Merrifield）−合成によって
得られたか又は特異的に分解する蛋白酵素を用いてのカ
ルジオジラチンの分解によって得られ、かつ検出され
た。この場合、メリフィールド（Merrifield）−合成
は、Ｃ−末端から始まりアミノ酸鎖がそれぞれ２個だけ
のアミノ酸で延長され、離脱され、検出され、かつ同じ
原理により他の２個だけのアミノ酸で延長されるように
実施された。この方法は、それが得られた、さらに下に
詳細に定義された断片に必要とされるような程度に屡々
繰り返された。

【００１２】得られた断片は、重要な生物活性を示し、
しかもそれは抗体を形成するのに適当であり、この抗体
は、全部のカルジオジラチンを確認する能力を有し、従
ってカルジオジラチンを検出するために免疫検定の範囲
内で使用することもできる。適当なのは、ＲＩＡ（同位
元素標識免疫定量法）の多数の公知の実施形式ならびに
ＥＩＡ（酵素免疫検定）の多数の公知の実施形式であ
る。更に、若干の断片、殊にアミノ酸３９〜１２６個を
包含する断片及び相当する、Ｎ−末端でアミノ酸７個ま
でを延長した断片は、カルジオジラチンの血管拡張作用
を同様に示すことが判明した。

【００１３】カルジオジラチンが有しているＨＰＬＣ−
データによって特徴づけられる断片は、次のとおりであ
る：アミノ酸位置１〜７を包含する断片：Asn − Pro − Va
l − Tyr − Gly − Ser − Val 、ならびにその構造変
種 Met （位置３）、 Asn （位置５）及び Ala （位置
６）、また双方とも配列 Lys−Lys をＮ−末端で延長す
る；例えば Lys −Lys − Asn − Pro − Val − Tyr−
Gly − Ser − Val（図２、図３、図４（参考図）参
照）。

【００１４】断片８〜１９：Ser − Asn − Ala − Asp
− Leu − Met − Asp − Phe − Lys − Asn − Leu
− Leu（図５（参考図）参照）。

【００１５】断片２３〜２８：Glu − Asp − Lys − M
et − Pro − Leu ならびにその構造変種 Glu （位置２
４）（図６（参考図）参照）。

【００１６】断片２９〜３７：Glu − Asp − Glu − A
la − Met − Pro − Pro − Gln − Val 、ならびにそ
の Val （位置３２及び３３）及び Glu （位置３７）を
有する変種。

【００１７】断片３８〜４４：Leu − Ser − Glu − G
ln − Asp − Glu − Glu 、ならびにその Pro （位置
４１）、 Asn （位置４２）を有する変種（図７（参考
図））。

【００１８】断片６３〜７０：Asp − Pro − Ser − G
ln − Arg − Asp − Gly − Gly 、ならびにその Ser
（位置６３）、 Ala （位置６５）を有する変種（図８
（参考図））。

【００１９】断片７３〜７９：Gly − Arg − Gly − P
ro − Trp − Asp − Pro 、ならびにその Phe（位置７
７）、 Ser （位置７９）を有する変種。

【００２０】断片７８〜８４：Asp − Pro − Ser − A
sp − Arg − Ser − Ala 、ならびにその Ser （位置
７９）を有する変種（図９、本発明方法による）。

【００２１】断片８６〜９２：Leu − Lys − Ser − L
ys − Leu − Arg − Ala 。

【００２２】断片９６〜１０４：Gly − Pro − Arg −
Ser −Leu − Arg − Arg − Ser − Ser 、ならびに
その Ala （位置９６）を有する変種（図１０（参考
図））。

【００２３】断片１０８〜１１４：付加的な Tyr（位置
１０７）、Tyr − Gly − Arg − Met − Asp − Arg
−Ile を有するもの、ならびにその環式形

【００２４】

【化１】

【００２５】（図１１（参考図））。

【００２６】断片１１７〜１２６：Ser − Gly − Leu
− Gly − Cys − Asn − Ser − Phe − Arg − Tyr
及びその二量体ジスルフィド。

【００２７】断片１２０〜１２６：Gly − Cys − Asn
− Ser − Phe − Arg − Tyr 及びその二量体ジスルフ
ィド。

【００２８】断片３９〜１２６：Ser − Glu − Gln −
Asn − Glu − Glu − Val − Gly − Ala − Pro −
Leu − Pro − Leu − Leu − Glu − Glu − Val − P
ro − Pro − Trp − Thr− Gly − Glu − Val − Asp
− Pro − Ser − Gln − Arg − Asp − Gly− Gly
− Ala − Leu − Gly − Arg − Gly − Pro − Trp
− Asp − Pro −Ser − Asp − Arg − Ser − Ala −
Leu − Leu − Lys − Ser − Lys − Leu − Arg −
Ala − Leu − Leu − Ala − Gly − Pro − Arg − S
er − Leu− Arg − Arg − Ser − Ser − Cys − Phe
− Gly − Gly − Arg − Met− Asp − Arg − Ile
− Gly − Ala − Gln − Ser − Gly − Leu − Gly
−Cys − Asn − Ser − Phe − Arg − Tyr、ならびに
その位置３９〜６５の Ser − Glu − Pro − Asn − G
lu − Glu − Ala − Gly − Ala − Ala − Leu− Ser
− Pro − Leu − Pro − Glu − Val − Pro − Pro
− Trp − Thr −Gly − Glu − Val − Ser − Pro −
Ala の範囲内の構造変種。

【００２９】配列７〜１２６中に同一的に含有されてい
る１つの断片が絶えず生成されるように断片３９〜１２
６を完全なカルジオジラチンの配列７〜３８の１種類又
はそれ以上のアミノ酸によってＮ−末端で延長する場合
には、同様に完全なカルジオジラチンの血管拡張作用を
示す断片が得られる。

【００３０】カルジオジラチンは、心房抽出液を出発物
質として使用しかつ水星溶剤で抽出可能な材料を常用の
生化学的精製法により、活性画分を平滑筋に対する弛緩
作用によって測定するような試験の使用下に分別するこ
とにより得られる。有利には、例えば豚の心房の心房抽
出液からのペプチドホルモンカルジオジラチンの精製が
行なわれる［ファウ・ムット（V.Mutt）、“アルキーフ
・ケミ（Arkiv Kemi）”、第１５巻、第６９頁〜第７４
頁（１９５９年）］。有利には、カルジオジラチンは、
煮沸した心房物質を希酸で抽出することにより得られ
る。希酸としては、なかんずくカルボン酸が適当である
が、鉱酸を使用することもできる。好ましくは、酢酸
が、殊に有利に０．１〜０．３モルの濃度で使用され
る。

【００３１】他の精製は、酸抽出液をアルギン酸で吸着
し、ペプチドを希鉱酸で再びアルゲン酸から溶離し、溶
離液を塩沈殿に付し、この場合形成された沈殿物を溶解
し、かつ再びエタノールで沈殿させるように行なうこと
ができる。次に、エタノール沈殿物は溶解されかつカル
ボキシメチルセルロースによりクロマトグラフィー処理
される。こうして得られた物質は、一般に製薬学的又は
分析的目的のために十分に純粋である。上記の、塩沈殿
によって得られた沈殿物は、選択的に直接に脱塩しかつ
ゲルクロマトグラフィーによって、特にセファデックス
（Ｓｅｐｈａｄｅｘ^（Ｒ））Ｇ２５で精製することもで
きる。

【００３２】精製は、逆相シリカゲルでの高圧−液体−
クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）（勾配溶離：アセトニ
トリルに対して水中の０．１％のトリフルオル酢酸、０
〜６０％）及び活性画分の分離により可能である。

【００３３】好ましくは、逆相シリカゲルでのＨＰＬＣ
にイオン交換カラムでのＨＰＬＣは前接され及び／又は
逆相シリカゲルでのＨＰＬＣは１回又は数回、特に２回
繰り返される。

【００３４】合成により得られるか又はＮ−末端メチオ
ニン基もしくはアルギニン基での分離によって得られる
Ｎ−末端断片は、担体蛋白質との接合後にカイウサギ又
はマウス（ＢＡＬＢ／Ｃマウス）のような他の動物種へ
の投与の際に抗体形成を生じさせる、すなわちハプテン
の性質をも示す。この抗体は、特異性配位子としてアフ
ィニティクロマトグラフィーで濃縮（単離）のため及び
ペプチドホルモンカルジオジラチンの検出のために使用
することができる。従って、Ｎ−末端断片−抗体を特異
性配位子として用いるアフィニティクロマトグラフィー
は、ペプチドホルモンを濃縮（単離）するためのもう１
つの適当な方法であり、この方法によりカルジオジラチ
ンは、多くの場合既に十分に純粋な形で得ることができ
る。アフィニティクロマトグラフィーは、前記のクロマ
トグラフィー法の１つと一緒にペプチドホルモンを単離
するために使用することもできるが、それは、クロマト
グラフィー法の１つにそれに適した１種類又はそれ以上
の方法による他の精製を接続することができ；適当な方
法は、例えば電気泳動法、沈殿法、吸着−クロマトグラ
フィー法、イオン交換−クロマトグラフィー法、アフィ
ニティークロマトグラフィー法、等電性フォーカシング
法、又は１種類又はそれ以上の同一又は異なる前記方法
の組合せである。

【００３５】ペプチド鎖の２個の Met 残基の間に存在
する断片は、カルジオジラチンから自体公知の方法で適
当なヒドラーゼを用いる分解によって得ることができる
が、しかし例えばアミノ酸配列（１）及び（２）を有す
る上記断片又はＮ−末端断片のような断片は、合成法
で、例えば溶液中に混合した無水物を用いるメリフィー
ルド（Merrifield）の方法又は合成法のような自体公知
のペプチド合成によって得ることもできる。

【００３６】臓器浴中での腎動脈（カイウサギ）、腹大
動脈（カイウサギ、ラット）及び腸間膜動脈下位（カイ
ウサギ）に対する弛緩効果は、ペプチドの作用に対する
鑑別生物検査の場合に利用され、この場合アドレナリン
−前処理後に収縮した血管筋肉条片は、カルジオジラチ
ンの添加後に明らかな弛緩を示す。腎動脈からの筋肉条
片のこの弛緩は、臓器浴１０ｍｌ当り約１０ｎｇ〜１０
０ｎｇの僅かな用量の際に検出可能である。試験筋肉と
しての腹大動脈の条片の場合には、約１０倍の高い用量
で検出可能な弛緩が判明し、カイウサギの腸間膜動脈下
位では活性は殆ど観察されなかった。

【００３７】この生物学的作用は、ペプチドホルモンカ
ルジオジラチン及び、見い出されたように、その断片、
殊に Met −残基の後又は Met −残基の間にあり、かつ
部分的ブロムシアン分離後に得ることができるＣ−末端
が大いに臨床的（診断的）及び治療的に重要性を、実際
に殊に次の点で有することを示す：１．特定の血管床の鑑別血管拡張、２．高血圧症の診断、３．高血圧症の治療、４．ホルモンの放出による心房拡張を診断する方法、及
び５．前記ペプチドホルモンを代替物として、人工心臓を
移植した患者に使用すること、６．詳細には、ペプチドが影響を及ぼす、血液容量及び
血液−電解液の同期的制御が推測されること、７．殊に発汗の障害を伴なう皮膚疾病、８．心臓脈管性ショック、９．腎臓及び副腎皮質の疾病、 10．殊に運動障害による消化管の疾病。

【００３８】従って、このための医薬は、新規ペプチド
ホルモンカルジオジラチン及び／又はその本発明方法に
よる有効な断片を含有し、上記の診断法及び治療法で使
用される。この医薬は、例えば錠剤、坐薬、施糖衣錠、
溶液等のように経口又は非経口投与に常用の使用形で、
場合によっては常用の、薬理学的に認容性の担持剤及び
／又は希釈剤と一緒に存在することができる。カルジオ
ジラチンの量は、単位用量当り特に１０〜１０００ｎｇ
である。

【００３９】次の例につき発明を詳説する。

【００４０】

【実施例】

実施例１常用の電子顕微鏡法の使用下で、豚の心臓の右心房にお
いて筋内分泌細胞（内分泌顆粒）の最高の密度を有する
ような個所を測定した。この細胞を主に心房の薄壁個所
で見い出した。この豚の内分泌顆粒は、その大きさの分
布（２３０及び５０ｎｍ）及び電子密度に関連してヒト
の内分泌顆粒と比較可能であり；この顆粒の数は、断面
積１μｍ²当り顆粒約０．０２〜０．０４である。

【００４１】この右心房の上記組織を２００００頭の豚
の心臓から取り出し、公知方法により抽出した［ブイ・
マット（V. Mutt）、“アルキーフ・ケミ（Arkiv Kem
i）”第１５巻、第６９頁〜第７４頁（１９５９年）、
エス・アイ・セッド（S. I. Said）及びブイ・マット
（V. Mutt）、“ヨーロッピアン・ジャーナル・オブ・
バイオケミストリー（Eur. J. Biochem.）”第２８巻、
第１９９頁〜第２０４頁(１９７２年）、ブイ・マット
・（V. Mutt）、“グート・ホルモンズ（Gut Hormone
s）”、第２１頁〜第２７頁、エス・アール・ブルーム
（S. R. Bloom）（編者）エジンバラ−ロンドン−ニュ
ーヨーク：チャーチル・リビングストン（Edinburgh-Lo
ndon-New York :Churchill Livingstone）、１９７８
年、参照］。

【００４２】実施例２このために豚の心房４０ｋｇを煮沸し、０．２モルの酢
酸で抽出した。この濾液をアルギン酸で吸着し、アルゲ
ン酸をエタノールで洗浄し、引続き０．２モルの塩酸で
溶離した。次に、ペプチドを含有する溶離液にペプチド
が沈殿するまで塩を添加し、沈殿物を遠心分離する。こ
の沈殿物を再び燐酸塩緩衝液ｐＨ７に溶解し、エタノー
ルの添加によって再び沈殿物を生じさせる。この沈殿物
を再び燐酸塩緩衝液ｐＨ６．４に溶解し、カルボキシメ
チルセルロース上に塗布した。カラムは、先に、０．０
３モルのＮａＯＨ、０．０２５モルのＨ₃ＰＯ₄、チオジ
クリコール０．５％を含有する緩衝液ｐＨ６．４で平衡
にさせた。同じ緩衝液を用いての溶離後、０．０３モル
のＮａＯＨ、０．０２５モルのＨ₃ＰＯ₄及び０．２モル
のＮａＣｌを含有する緩衝液ｐＨ６．４でさらに溶離を
行なった。この場合には、最も活性の画分が溶離され
た。

【００４３】塩含有緩衝液で溶離した画分をイオン交換
カラム［エル・ケイ・ビー（ＬＫＢ）社のティー・エス
・ケイ（ＴＳＫ）−カルボキシメチルセルロース］上に
与え、０．０３モルの燐酸ナトリウム緩衝液ｐＨ６．４
及び０〜０．５モルの塩化ナトリウム勾配で溶離する。
活性画分を捕集し、架橋デキストランゲルのカラム［セ
ファデックス・ジー・２５（Sephadex Ｇ２５^(R)）］に
より脱塩し、かつ逆相を有する分取高圧液体クロマトグ
ラフィー（ＨＰＬＣ）に、特にオルガノゲンＣ₁₈−５μ
（Organogen Ｃ₁₈−５μ^(R)）の使用下で与える。

【００４４】カラム：ウォータースＣ₁₈−μボンダパッ
ク（Bondapak）、４×２５０ｎｍ。

【００４５】勾配溶離：アセトニトリルに対して水中の
トリフルオル酢酸０．１％、４５分間で０〜６０％。

【００４６】ペプチドカルジオジラチンは、アセトニト
リル４５％でＨＰＬＣ−カラムから流出し、かつ２４．
１分間の保持時間を示す。

【００４７】図１（参考図）は、このＨＰＬＣの線図を
示す。

【００４８】得られた活性画分をその後になお２回同じ
ＨＰＬＣに与えた。

【００４９】等電点Ｉ．Ｐ．を６〜６．５で測定した。

【００５０】ペプチドは、アミノ酸分析で次の組成を示
す：Asp ／ Asn １４個、Thr ３個、Ser １５個、Glu
／ Gln １２個、Pro １０個、Gly １２個、Ala １０
個、Val ７個、Met ４個、Ile １個、Leu １５個、Tyr
２個、Phe ３個、Lys ４個、His ２個、Arg １０個、Tr
p ２個。

【００５１】アミノ酸配列をＮ−末端から自動化された
エドマン分解法によって次のように測定した：Asn − P
ro − Val − Tyr − Gly − Ser − Val − Ser − As
n − Ala − Asp − Leu − Met − Asp − Phe − Lys
− Asn − Leu − Leu − Asp − His− Leu − Glu
− Asp − Lys − Met − Pro − Leu − Glu − Asp
− Glu− Ala − Met − Pro − Pro − Gln − Val −
Leu − Ser − Glu − Gln −Asp − Glu − Val − L
eu − Ser − Glu − Gln − Asn − Glu − Glu − Va
l − Gly − Ala − Pro − Leu − Pro − Leu − Leu
− Glu − Glu − Val− Pro − Pro − Trp − Thr
− Gly − Glu − Val − Asn − Pro ：（全部の配列
は、配列分析によりアミノ酸残基１２６個を包含す
る）。

【００５２】分子量は、アミノ酸組成により約１３００
０ダルトンを算出した。

【００５３】精製方法の種々の段階には、下記の生物検
査による生物学的試験を実施し、この場合には、精製の
程度が進むにつれて特異的活性の上昇を示した。

【００５４】生物検査の実施：生物検査を血管平滑筋で
実施し、この場合には、臓器浴中で試験すべき画分の作
用下に弛緩を測定した。

【図面の簡単な説明】

【図１】ペプチドカルジオジラチンの分取高圧液体クロ
マトグラフィーによる分析結果を示す線図である。

【図２】ペプチドカルジオジラチンのアミノ酸位置１〜
７を包含する断片の分取高圧液体クロマトグラフィーに
よる分析結果を示す線図である。

【図３】ペプチドカルジオジラチンのアミノ酸位置１〜
７を包含する断片 Lys - Lys -(1 - 7)の分取高圧液体
クロマトグラフィーによる分析結果を示す線図である。

【図４】ペプチドカルジオジラチンのアミノ酸位置１〜
７を包含する断片の構造変種Met（位置３）、Asn（位置
５）、Ala（位置６）の分取高圧液体クロマトグラフィ
ーによる分析結果を示す線図である。

【図５】ペプチドカルジオジラチンのアミノ酸位置８〜
１９を包含する断片の分取高圧液体クロマトグラフィー
による分析結果を示す線図である。

【図６】ペプチドカルジオジラチンのアミノ酸位置２３
〜２８を包含する断片の分取高圧液体クロマトグラフィ
ーによる分析結果を示す線図である。

【図７】ペプチドカルジオジラチンのアミノ酸位置３８
〜４４を包含する断片の分取高圧液体クロマトグラフィ
ーによる分析結果を示す線図である。

【図８】ペプチドカルジオジラチンのアミノ酸位置６３
〜７０を包含する断片の分取高圧液体クロマトグラフィ
ーによる分析結果を示す線図である。

【図９】ペプチドカルジオジラチンのアミノ酸位置７８
〜８４を包含する断片の分取高圧液体クロマトグラフィ
ーによる分析結果を示す線図である。

【図１０】ペプチドカルジオジラチンのアミノ酸位置９
６〜１０４を包含する断片の分取高圧液体クロマトグラ
フィーによる分析結果を示す線図である。

【図１１】ペプチドカルジオジラチンのアミノ酸位置１
０８〜１１４を包含する断片の分取高圧液体クロマトグ
ラフィーによる分析結果を示す線図である。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】生物学的に活性のカルジオジラチン断片
を製造する方法において、カルジオジラチンをアルギニ
ン特異性タンパク質分解酵素で処理することを特徴とす
る、生物学的に活性のカルジオジラチン断片の製造法。
【請求項２】アミノ酸配列 Asp - Pro - Ser - Asp -
Arg - Ser - Alaを有し、この場合 Pro - Ser は Ser
- Ser によって代えられていてもよい断片を得る、請求
項１記載の方法。