JPH08196268A - 乳酸菌増殖促進物質 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 ヒトに有益な腸内細菌であるビフィドバクテ
リウム属およびラクトバチルス属に属する細菌の増殖を
促進し、有益菌が優勢な腸内フローラを形成する乳酸菌
増殖促進物質を提供する。 【構成】 カカオ豆および／またはカカオ豆の外皮であ
るカカオハスクの溶媒抽出残渣または該残渣の水抽出物
を有効成分とする。 【効果】 本発明乳酸菌増殖促進物質はビフィドバクテ
リウム属およびラクトバチルス属に属する細菌に対して
選択的に増殖を促進する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明はヒトに有益な腸内細菌で
あるビフィドバクテリウム属およびラクトバチルス属に
属する細菌の増殖を促進し、有益菌が優勢な腸内フロー
ラを形成する物質に関する。

【０００２】

【従来の技術】ヒトの腸内には数多くの細菌が常在し、
複雑な腸内フローラを形成している。

【０００３】この腸内フローラを構成する細菌のうち、
ビフィドバクテリウム属、ラクトバチルス属等の乳酸菌
は、ビタミンの合成、外来病原菌の感染防御、免疫機能
の増強等、ヒトに有益な働きをすることが知られてい
る。

【０００４】一方、クロストリジウム・パーフリンゲン
ス等はアンモニア、インドール等の腐敗産物や細菌毒素
を産生し、大腸ガン、動脈硬化、高血圧、肝臓障害、老
化等の原因となる。ヒトが健康を維持して行くために
は、腸内フローラをビフィズス菌に代表される有益菌が
優勢な状態に維持することが重要である。

【０００５】このような観点から、これまでに腸内有益
菌の代表であるビフィズス菌を増殖させる物質が数多く
見出されている。例えば、ジャガイモ乾燥物（特開平６
−２１７７３３号公報）、コーヒーノキ属植物の葉の抽
出物（特開平６−１２５７７１号公報）、夕顔果実から
抽出したシラップ状物質（特開平２−１３５０８８号公
報）、ウコギ科植物の溶媒抽出物（特開平２−２４９４
８２号公報）、大豆の脂溶性成分抽出残渣のアルコール
類水溶液抽出物（特開昭６２−１５５０８２号公報、特
開昭６０−６６９７８号公報）および大麦蛋白質含有物
質の酵素分解物（特開昭６１−２８２０７０号公報）等
が挙げられる。

【０００６】しかしながら、これらの物質は効果が不十
分であったり、乳酸菌以外の所望外の細菌類の増殖も促
進してしまう等の問題がある。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】従って、本発明の課題
は乳酸菌に対して選択的に増殖促進を行い、有益菌が優
勢な腸内フローラを形成する物質を提供することであ
る。

【０００８】

【課題を解決するための手段】本発明者等は、種々研究
の結果、カカオ豆、特にその外皮であるカカオハスク
に、ビフィドバクテリウム属およびラクトバチルス属に
属する乳酸菌を増殖させる物質が含まれていることを見
出し、さらにその物質を乳酸菌に選択的に効果を示す増
殖促進剤として抽出することに成功して本発明を完成し
た。これまでカカオ豆に乳酸菌の増殖を促進させる物質
が含まれていることは全く知られておらず、本発明者等
により初めて見出されたものである。

【０００９】即ち、本発明はカカオ豆および／またはカ
カオハスクの溶媒抽出残渣または該残渣の水抽出物を有
効成分とする乳酸菌増殖促進物質である。

【００１０】カカオ豆はその全体を利用することができ
るが、本発明の実際において、カカオ豆の外皮であるカ
カオハスクを使用するのが従来不要物として扱われてい
たものの有効利用の見地からも望ましい。これらカカオ
豆およびカカオハスクは生のものの他に、加熱したもの
を用いることができる。

【００１１】このカカオおよび／またはカカオハスクを
水と相溶性のある有機溶媒で抽出後に得られる残渣また
は該残渣を水で抽出し、次いで水分を留去して本発明の
目的物である水抽出物を得る。

【００１２】抽出に用いる水と相溶性のある溶媒として
は、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノー
ル、アセトン等の有機溶媒、酢酸エチル、酢酸メチル等
のこれらの誘導体、これらの２種以上の化合物、例えば
アセトンアルコールおよびこれらの２種以上の混合物等
の極性溶媒が挙げられる。ヘキサン、エーテル等の非極
性有機溶媒や水では、本発明の目的物である乳酸菌増殖
促進物質が殆ど得られない。

【００１３】本発明の目的物は前記水と相溶性のある有
機溶媒での抽出残渣に大部分が含まれており、カカオお
よび／またはカカオハスクを有機溶媒で抽出して得る抽
出物はカカオ豆特有の強い匂いを有しているが、乳酸菌
増殖促進効果は殆ど認められない。

【００１４】有機溶媒で抽出後の残渣を水で抽出するこ
とにより得られる水抽出物は、乳酸菌に対して強い増殖
促進効果を示すが、他の腸内細菌に対しては殆ど増殖促
進効果を示さない性質を備えている。また、カカオおよ
びカカオハスクに含まれている芳香物質は、有機溶媒で
抽出されているので、得られる水抽出物は褐色で無臭の
微粉末である。

【００１５】さらに本発明において、前記のようにして
得られる水抽出物から限外濾過膜等の分離手段を用いて
分子量１００００以下の画分を採取し、これを有効成分
としてもよい。即ち、前記水抽出物の分子量１００００
以下の画分には強い乳酸菌増殖促進効果が認められる
が、、反面分子量１００００を越える画分ではそれが非
常に弱くなることが確認されている。

【００１６】以下に、本発明の実施例を挙げて説明す
る。

【００１７】

【実施例】実施例１ １６０℃で１時間加熱したカカオハスク１０００ｇにエ
タノール２４００ｇを加え、７８℃にて１時間還流抽出
した。このように処理した液を遠心分離により抽出液と
残渣とに分離し、得られた残渣に水６１００ｇを加え、
４０℃にて３０分加温抽出して水抽出液を調製した。得
られた水抽出液から水分を留去して褐色で無臭の水抽出
物微粉末１００ｇを得た。この粉末を１０倍量の水に溶
解し、ｐＨを測定した結果、ｐＨは５．２であった。

【００１８】実施例２ エタノールの代わりにアセトンを用いる以外は、実施例
１と同様にして褐色で無臭の水抽出物微粉末１１２ｇを
調製した。この粉末を１０倍量の水に溶解し、ｐＨを測
定した結果、ｐＨは５．２であった。

【００１９】実施例３ 加熱していない生のカカオハスクを用いる以外は、実施
例１と同様にして褐色で無臭の水抽出物微粉末１０７ｇ
を調製した。この粉末を１０倍量の水に溶解し、ｐＨを
測定した結果、ｐＨは５．１であった。

【００２０】実施例４ １６０℃で１時間加熱したカカオ１０００ｇを用いる以
外は、実施例１と同様にして褐色で無臭の水抽出物微粉
末１３３ｇを調製した。この粉末を１０倍量の水に溶解
し、ｐＨを測定した結果、ｐＨは５．１であった。

【００２１】実施例５ 加熱していない生のカカオ１０００ｇを用いる以外は、
実施例１と同様にして褐色で無臭の水抽出物微粉末１２
５ｇを調製した。この粉末を１０倍量の水に溶解し、ｐ
Ｈを測定した結果、ｐＨは５．２であった。

【００２２】比較例１ 実施例１において、遠心分離により得られた抽出液から
エタノールを留去して褐色でカカオ豆特有の強い匂いを
有するエタノール抽出物微粉末４８ｇを得た。この粉末
を１０倍量の水に溶解し、ｐＨを測定した結果、ｐＨは
３．７であった。

【００２３】比較例２ １６０℃で１時間加熱したカカオハスク１０００ｇに水
６１００ｇを加え、４０℃にて３０分加温抽出して水抽
出液を調製した。得られた水抽出液から水分を留去して
褐色でカカオ豆特有の強い匂いを有する水抽出物微粉末
１２０ｇを得た。この粉末を１０倍量の水に溶解し、ｐ
Ｈを測定した結果、ｐＨは４．７であった。

【００２４】比較例３ １６０℃で１時間加熱したカカオハスク１０００ｇにヘ
キサン２４００ｇを加え、６０℃にて１時間還流抽出
後、ヘキサン抽出残渣に水６１００ｇを加え、４０℃に
て３０分加温抽出して水抽出液を調製した。得られた水
抽出液から水分を留去して褐色で無臭の水抽出物微粉末
１２７ｇを得た。この粉末を１０倍量の水に溶解し、ｐ
Ｈを測定した結果、ｐＨは４．７であった。

【００２５】試験例１ 実施例１〜３と比較例１〜３の６つの試料の、乳酸菌と
他の腸内細菌の増殖に与える影響を調べた。

【００２６】試験菌株をブリックスリバーブロスで３７
℃にて４８時間前培養後、生理食塩水で菌体を洗浄して
６ｍｌの生理食塩水に懸濁した。この菌懸濁液２０μｌ
を、被験物質が０．６％の濃度となるように添加した６
ｍｌの表１に示す組成の試験培地に接種し、３７℃にて
４８時間嫌気的に培養後、、培養液のｐＨを測定して菌
の増殖を調べた。増殖促進効果は被験物質を添加しない
培地に菌を接種して同様に培養したものを対象とし、対
照と比べてｐＨが０．１〜０．５低下した場合に「弱い
効果あり」；（＋）、０．６〜１．０低下した場合に
「効果あり」；＋、１．１〜１．５低下した場合に「強
い効果あり」；＋＋と判定した。

【００２７】

【表１】

【００２８】結果を表２に示すが、実施例１〜３の水抽
出物はビフィドバクテリウム属およびラクトバチルス属
に属する多くの細菌の増殖を促進したが、他の腸内細菌
に対してはユーバクテリウム属の１株を除いて増殖を促
進することはなかった。

【００２９】

【表２】

【００３０】このことから、実施例１の水抽出物は腸内
細菌のうち有用菌であるビフィドバクテリウム属および
ラクトバチルス属に属する乳酸菌を選択的に増殖させる
効果を有することが示された。

【００３１】これに対して比較例１のエタノール抽出
物、比較例２および３の水抽出物は乳酸菌の増殖促進効
果は殆ど認められなかった。この原因としてカカオハス
クには乳酸菌に対する増殖促進物質の他に、増殖阻害物
質も含まれており、これらの物質が水と相溶性のある有
機溶媒で抽出することにより取り除かれるのではないか
と考えられる。

【００３２】試験例２ 本発明の乳酸菌増殖促進物質の酸および消化酵素に対す
る安定性を調べるために以下の試験を行った。なお、試
験の概要を図１に示す。

【００３３】実施例１の水抽出物の５０％（ｗ／ｗ）水
溶液に濃塩酸を加えてｐＨ２．０に調整し、３７℃で１
時間放置した（酸処理物）。その後酸処理物を２つに分
け、一部は１ｇあたりペプシン（Ｄｉｆｉｃｏ社製、製
品番号０１５１−１７）０．０４ｍｇを加えて３７℃で
１時間反応させた（ペプシン処理物）。残りのものは、
ＮａＯＨでｐＨ７．０に調整後、さらに２つに分けてそ
れぞれ１ｇあたりアミラーゼ（Ｓｉｇｍａ社製、製品番
号Ａ−０５２１）１．４ｍｇ、リパーゼ（Ｓｉｇｍａ社
製、製品番号Ｌ−３１２６）１．７ｍｇを加え、て３７
℃で１時間反応させた（アミラーゼ処理物、リパーゼ処
理物）。

【００３４】上記４つの処理物と対照として実施例１の
水抽出物を加えた５つの試料の乳酸菌増殖促進効果を試
験例１と同様の方法で調べた。

【００３５】結果を表３に示すが、酸処理物および消化
酵素処理物の乳酸菌増殖促進効果は対照と全く同じであ
った。

【００３６】

【表３】

【００３７】このことから、本発明の乳酸菌増殖促進物
質は乳酸菌の生息場所である大腸まで活性を維持したま
ま到達するものと考えられる。

【００３８】試験例３ 年齢２２〜３３歳の健康な成人男女８名を被試者として
実施例１の水抽出物０．８ｇを朝、昼、夕食後連続１４
日間経口摂取させた。この間、摂取開始直前（０日
目）、摂取開始１週間後（７日目）、摂取開始２週間後
（１４日目）、摂取終了後２週間目（２８日目））に各
人の糞便を採取し、光岡の方法（光岡知足著「腸内菌の
世界」、叢業社、東京、ｐ５３〜６５）に従い、腸内菌
叢の検索を行った。

【００３９】８名平均の腸内菌叢の変化を図２に示す
が、有益菌であるＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｌ
ａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓは摂取開始１〜２週間目に増
加し、有害菌であるＣｌｏｓｔｏｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒ
ｆｒｉｎｇｅｎｓ、Ｃ．ｄｉｆｉｃｉｌｅは減少した。

【００４０】この結果、総菌数に占めるＢｉｆｉｄｏｂ
ａｃｔｅｒｉｕｍの割合は４９．５％（摂取開始直前）
から６２．５％（摂取２週間後）と増加した。

【００４１】また、各被験者の摂取開始直前と摂取２週
間後のＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍの菌数の変化を
図３に示すが、１名を除く７名に菌数の増加が認められ
た。

【００４２】このように、本発明の乳酸菌増殖促進物質
は腸内有用菌であるＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属
およびＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属細菌を増加させ、
有害菌であるＣｌｏｓｔｏｒｉｄｉｕｍ属細菌を減少さ
せる腸内菌叢改善効果を有することが示された。

【００４３】試験例４ 実施例１の水抽出物を分画分子量１００００の限外濾過
膜を用いて、分子量１００００以下の低分子画分と１０
０００を越える高分子画分に分けて各画分の乳酸菌の増
殖に与える影響について調べた。試験は試験例１の方法
で行った。

【００４４】その結果を表４に示すが、低分子画分は全
ての乳酸菌の増殖を促進したのに対して高分子画分は２
株のみが効果を示し、その程度は非常に弱いものであっ
た。

【００４５】

【表４】

【００４６】このことから、実施例１の水抽出物に含ま
れる乳酸菌増殖促進因子は分子量１万未満の低分子物質
であると推定される。

【００４７】

【発明の効果】本発明の効果を挙げれば以下の通りであ
る。 １）本発明の乳酸菌増殖促進物質を摂取することによ
り、ビフィドバクテリウム属およびラクトバチルス属に
属する細菌を選択的に増殖させ、有益菌が優勢な腸内フ
ローラを形成することができる。 ２）粗抽出物として１日２．４ｇ程度の摂取で腸内の有
益菌を増やすことができる。 ３）本物質はカカオ豆特有の匂いがなく、無臭であるた
め各種食品に添加することができる。 ４）従来廃棄されていたカカオハスクから抽出するため
安価に生産することができる。 ５）本物質は酸、消化酵素に安定であるため、活性を失
うことなく有益菌の生息場所である大腸まで到達する。 ６）発酵乳の製造の際、本増殖促進物質を添加すること
により発酵期間の短縮、発酵操作の簡略化等の効果が得
られる。

【図面の簡単な説明】

【図１】カカオハスク水抽出物の酸、消化酵素処理方法
を示す処理系統図である。

【図２】カカオハスク水抽出物の摂取による腸内菌叢の
変化を示す特性線図である。

【図３】被験者８名のビフィズス菌数の変化を示す特性
線図である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 (Ｃ１２Ｎ 1/38 Ｃ１２Ｒ 1:245） (72)発明者 久保 直樹 埼玉県浦和市沼影１−15−13 ロッテしら さぎハウス (72)発明者 伊藤 雅範 埼玉県三郷市さつき平１−２−１−803 (72)発明者 上脇 達也 埼玉県浦和市白鍬94−１−407

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 カカオ豆および／またはカカオ豆の外皮
   であるカカオハスクの溶媒抽出残渣または該残渣の水抽
   出物を有効成分とする乳酸菌増殖促進物質。
2. 【請求項２】 溶媒が水と相溶性のある有機溶媒である
   請求項１に記載の乳酸菌増殖促進物質。
3. 【請求項３】 水抽出物のうち分子量１００００以下の
   成分を有効成分とする請求項１または２に記載の乳酸菌
   増殖促進物質。
4. 【請求項４】 増殖する乳酸菌がビフィドバクテリウム
   属またはラクトバチルス属の菌である請求項１〜３のい
   ずれかに記載の乳酸菌増殖促進物質。