JPH0515366A

JPH0515366A - 乳酸菌およびビフイズス菌の増殖促進剤

Info

Publication number: JPH0515366A
Application number: JP19700191A
Authority: JP
Inventors: Seiichi Shimamura; 誠一島村; Norio Ishibashi; 憲雄石橋; Hiroshi Miyagawa; 博宮川; Fumiaki Abe; 文明阿部; Ikuko Kirihara; 郁子桐原
Original assignee: Morinaga Milk Industry Co Ltd
Current assignee: Morinaga Milk Industry Co Ltd
Priority date: 1991-07-11
Filing date: 1991-07-11
Publication date: 1993-01-26

Abstract

(57)【要約】【目的】乳酸菌、ビフィズス菌の増殖を促進する物質
を提供する。【構成】酒粕の水抽出物および／または蛋白分解酵素
処理酒粕の水抽出物を有効成分とする。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、乳酸菌およびビフィズ
ス菌の増殖促進剤に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】乳酸菌は、食品の風味、組織、栄養価の
改善または保存性付与等の目的から古くからチ−ズ、ヨ
−グルト、発酵バタ−等の乳製品、発酵ソ−セ−ジ、発
酵サラミ・ソ−セ−ジ等の畜肉製品、最近ではパンのス
タ−タ−としても利用されている。また、日本の伝統食
品であるみそ、しょうゆ、漬物等の製造においても乳酸
菌は重要な役割を果たしている。食品のみならず飼料用
サイレ−ジを調製するためのスタ−タ−としても乳酸菌
は広く使用されている。さらに乳酸菌の生理的効果とし
て、生きた乳酸菌の接種による腸内菌叢の改善効果また
は整腸作用等が明らかとなり、医薬品として乳酸菌製剤
も開発されている。

【０００３】一方、ビヒドバクテリウム属に属する微生
物（ビフィズス菌）は、腸内の有用細菌であり、下痢
症、便秘症、感染症等の予防、治療、腸内有害細菌の増
殖抑制等、その有用性が臨床的に明らかにされつつあ
り、ビフィズス菌入りミルク、ビフィズス菌入り調製粉
乳、ビフィズス菌入りヨ−グルト、医薬用整腸剤等に使
用されている。

【０００４】このように乳酸菌、ビフィズス菌の用途は
多岐にわたっており、乳酸菌、ビフィズス菌を培養し、
または乳酸菌、ビフィズス菌を用いて原料を発酵させる
にあたり、乳酸菌、ビフィズス菌の増殖を促進して菌濃
度を高め、または培養時間、発酵時間を短縮することは
極めて大きい意義を有する。

【０００５】乳酸菌に対して増殖促進効果を有する物質
としては、メバロン酸、ストレポゲニン、コ−ンスティ
−プリカ−因子、オロチン酸、パンテチン、アデニル酸
等のアデニン塩基を有する物質、およびイノシン酸等の
ヒポキサンチン塩基を有する物質が知られている。一
方、ビフィズス菌に対して増殖促進効果を有する物質と
しては、Ｎ−アセチルグルコサミン含有糖類、酵母エキ
ス、カゼイン分解物、ニンジン抽出液等が知られてお
り、また増殖促進剤に関する特許出願もなされている。

【０００６】また乳酸菌、ビフィズス菌に対する増殖促
進効果とは関係のない「ヨ−グルト様発酵食品の製造方
法」（特開昭６３−５９８３７号公報）も知られてい
る。この発明は、酒粕もしくは酒粕と乳成分を主体とし
て調整した培地に乳酸菌を接種し、発酵せしめるヨ−グ
ルト様発酵食品の製造方法であり、通常のヨ−グルトの
原料である動物性蛋白質に代えて、固形分の３０％が植
物性蛋白質である酒粕を主原料としてヨ−グルト様発酵
食品の製造を行うものである。すなわち、この発明にお
いて乳酸菌は、ヨ−グルトの製造と同様、発酵原料であ
る酒粕に酸味と芳香を付与するためのスタ−タ−として
使用されているにすぎず、酒粕に乳酸菌およびビフィズ
ス菌に対して顕著な増殖促進効果があることは開示され
ていない。またこの発明において酒粕は、蛋白源として
使用され、従って酒粕は、抽出物ではなく、全部が原料
として用いられている。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】乳酸菌、ビフィズス菌
に対して増殖促進効果を有する上記の公知物質は、ある
ものは高価であり、あるものは調製が困難であり、また
あるものはそれが持つ特異な味、匂いが製品に移行して
好ましくない味、匂いを付与する等の問題があった。こ
のため調製または入手が容易で、増殖促進の効果が大き
く、かつ添加しても好ましくない影響を及ぼさない増殖
促進剤が待望されていた。

【０００８】上記の公知技術に鑑みて、本発明の発明者
らは、乳酸菌およびビフィズス菌の増殖促進に効果のあ
る物質について研究を行った結果、酒粕の水抽出物に効
果があることを認め、更に酒粕の水抽出物を得る際に蛋
白分解酵素を用いて酒粕を処理することによって効果が
より増大することを発見し、本発明を完成した。

【０００９】本発明は、産業上極めて有用な乳酸菌、ビ
フィズス菌の増殖を促進する物質を提供することを課題
としている。

【００１０】

【課題を解決するための手段】上記の課題を解決する本
発明は、酒粕の水抽出物および／または蛋白分解酵素処
理した酒粕の水抽出物を有効成分として含有することを
特徴とする乳酸菌およびビフィズス菌の増殖促進剤、で
ある。

【００１１】以下、本発明についてさらに詳しく説明す
る。

【００１２】本発明において酒粕は、清酒製造において
副製する清酒粕、みりん製造において副製するみりん粕
であり、一般に市販されているものを使用することがで
きる。酒粕から増殖効果を有する有効成分を水で抽出す
る場合、酒粕を固形分換算で約１０％（重量。以下特に
断りのない限り同じ）の濃度で水に懸濁することが望ま
しく、抽出温度は６０〜１３０℃、抽出時間は１〜１２
０分が望ましい。抽出液は必要があれば８０〜９０℃で
２０分程度の殺菌を行い、のち濾過、または遠心分離等
適宜の固液分離方法によって水不溶物を除去し、増殖効
果を含有する有効成分を水溶液として回収する。水溶液
はそのまま、濃縮、または凍結乾燥等適宜の方法によっ
て粉末とし、増殖促進剤として乳酸菌、ビフィズス菌の
培地、または発酵原料に添加する。添加量は発酵原料に
対して、粉末換算で０．０５％以上が望ましく、１％程
度で最も良い効果を得ることができる。

【００１３】酒粕に蛋白分解酵素を作用せしめる場合、
酒粕の水懸濁液を予め加熱殺菌するのが望ましい。使用
する蛋白分解酵素は特に制限はなく、エンド型またはエ
キソ型のペプチダ−ゼを、単用または任意に併用するこ
とができる。具体的にはパパイン、トリプシン、ペプシ
ン、パンクレアチン、または微生物由来の蛋白分解酵素
等が用いられ、これらは市販品を使用することができ
る。蛋白分解酵素を作用させる反応条件は、使用する酵
素の最適条件に設定することが望ましく、一般的にはｐ
Ｈ４〜９、温度３０〜６０℃の範囲で、ケルダ−ル法で
測定した窒素量で酒粕からの抽出率（酒粕の全窒素量に
対する水溶性区分の窒素量の割合。以下「窒素抽出率」
と記載する）が少なくとも３０％に達するまで反応させ
ることが、増殖効果増大の点から望ましい。

【００１４】蛋白分解酵素処理を終了した酒粕の水懸濁
液は、温度８０〜９０℃に２０分程度加熱し、酵素を失
活させ、濾過、または遠心分離等適宜の固液分離方法に
よって水不溶物を除去し、増殖効果を含有する有効成分
を水溶液として回収する。水溶液はそのまま、濃縮、ま
たは凍結乾燥等適宜の方法によって粉末となし、増殖促
進剤として乳酸菌、ビフィズス菌の培地、または発酵原
料に添加する。添加量は培地または発酵原料に対して、
粉末換算で０．０５％以上が望ましく、１％程度で最も
良い効果を得ることができる。

【００１５】本発明の増殖促進剤を添加した場合、乳酸
菌、ビフィズス菌の培養、または発酵の条件は変更する
必要はないが、一定量の菌濃度となることを目的とする
場合には増殖促進剤無添加の場合よりも短い時間で培
養、発酵を終了することができる。

【００１６】本発明の増殖促進剤の適量（例えば培地に
対して粉末として０．５％）を培地に添加し、増殖促進
効果を培養一定時間後の菌量の増加でみるときは、乳成
分を含まない培地を用いた場合には、乳酸菌、ビフィズ
ス菌のいずれも２倍以上の増殖促進効果を示す。また還
元脱脂乳を培地とした場合、還元脱脂乳培地で良好な増
殖を示す乳酸菌（ラクトバシラス・ブルガリカスおよび
ストレプトカッカス・サ−モフィルス）でも、添加しな
い場合に比して、１．６〜１．７倍の増殖促進効果を示
し、同培地では増殖の良好な他の乳酸菌にあっては４倍
以上の増殖促進効果を示す。還元脱脂乳培地では増殖の
悪いビフィズス菌も、４倍以上の増殖促進効果を示す。
酒粕の水抽出物よりも酒粕を蛋白分解酵素を用いて処理
した水抽出物が、同一添加量で比較すると乳酸菌、ビフ
ィズス菌に対する増殖促進効果が大きい。

【００１７】一定菌濃度の培養物を得たい場合、本発明
の増殖促進剤を添加することによって、添加しない場合
に比して短時間でこれを得ることができる。

【００１８】次に試験例をしめして本発明を詳細に説明
する。試験例１酒粕の水抽出物および蛋白分解酵素処理酒粕の水抽出物
について乳酸菌およびビフィズス菌に対する増殖促進効
果を試験した。 (1) 試料の調製 a)酒粕の水抽出物の調製：市販の清酒粕５００ｇに水道
水２０００ｍｌを加え、均一に混合し、８０℃で３０分
間加熱処理し、４０℃に冷却し、遠心分離機で水不溶の
残渣を除去し、上清液を凍結乾燥し、酒粕の水抽出物の
粉末（以下「酒粕水抽出粉末」と略記することがある）
約１４０ｇを得た。

【００１９】b)蛋白分解酵素処理した酒粕水抽出物の調
製：市販の清酒粕５００ｇに水道水２０００ｍｌを加
え、均一に混合し、８０℃で３０分間加熱殺菌し、４０
℃に冷却し、市販の蛋白分解酵素プロテア−ゼＭ（天野
製薬社製）を２．５ｇ加え、４０℃で５時間酵素処理を
行った。窒素抽出率は４５％であった。次いで８０℃で
２０分間加熱して酵素を失活させ、遠心分離機で水不溶
の残渣を除去し、上清液を凍結乾燥し、蛋白分解酵素処
理した酒粕水抽出物の粉末（以下「酒粕処理粉末」と略
記することがある）約１８０ｇを得た。 (2) 供試菌株 a)乳酸菌ラクトバシラス・アシドフィルス（Lactobacillus acid
ophilus ATCC-4356）ラクトバシラス・カゼイ（Lactoba
cillus casei ATCC-393）ラクトバシラス・ブルガリカ
ス（Lactobacillus bulgaricus ATCC-11842 ）ストレプ
トカッカス・サ−モフィルス（Streptococcus thermoph
ilus ATCC-19258 ）ストレプトカッカス・サリバリウス
（Streptococcus salivariusATCC-9758）リューコノス
トック・クレモリス（Leuconostoc cremoris ATCC-1925
4 ） b)ビフィズス菌ビフィドバクテリウム・ビフィダム（Bifidobacterium
bifidum ATCC-15696）ビフィドバクテリウム・インファ
ンチス（Bifidobacterium infantis ATCC-15697 ）ビフ
ィドバクテリウム・ブレーベ（Bifidobacterium breve
ATCC-15700）ビフィドバクテリウム・ロングム（Bifido
bacterium longum ATCC-15707 ）ビフィドバクテリウム
・シュードロングム（Bifidobacterium pseudolong ATC
C-25526 ）ビフィドバクテリウム・アニマリス（Bifido
bacterium animalis ATCC-25527 ） (3) 試験方法 1)供試菌株の前培養液の調製 a)乳酸菌の前培養液の調製ラクトバシラス・アシドフィルス、ラクトバシラス・カ
ゼイ、ラクトバシラス・ブルガリカスの保存スラントか
らそれぞれ１白金耳をとり、ＭＲＳ寒天培地（ディフコ
社製）に塗抹し、３５℃で１６時間嫌気的に培養した。
一方ストレプトカッカス・サーモフィルス、ストレプト
カッカス・サリバリウス、リューコノストック・クレモ
リスも同様に各々の保存スラントからそれぞれ１白金耳
をとり、ＧＡＭ寒天培地（日水製薬社製）に塗抹し、ス
トレプトカッカス・サーモフィルス、ストレプトカッカ
ス・サリバリウスは３５℃で、、リューコノストック・
クレモリスは３０℃で１６時間嫌気的に培養した。次い
で寒天培地上に生育したコロニーを白金耳でかきとり、
滅菌生理食塩水に、分光光度計で測定した濁度を２．０
（波長６６０ｎｍ、石英セル、光路長１０ｍｍ）に調整
して懸濁し、乳酸菌の前培養液を調製した。

【００２０】b)ビフィズス菌の前培養液の調製上記各ビフィズス菌の保存スラントから各々１白金耳を
とり、これをＧＡＭ寒天培地（日本製薬社製）に塗抹
し、３５℃で１６時間嫌気的に培養した。ＧＡＭ寒天培
地上に生育したコロニーを白金耳でかきとり、滅菌生理
食塩水に、分光光度計で測定した濁度を２．０（波長６
６０ｎｍ、石英セル、光路長１０ｍｍ）に調整して懸濁
し、ビフィズス菌の前培養液を調製した。

【００２１】2)増殖促進効果の試験 2-1) 乳成分を含まない培地の場合 a)試験培地：酵母エキス０．５％、肉エキス０．５％、
グルコース２％、リン酸一カリウム０．１％、リン酸二
カリウム０．１％、無水酢酸ナトリウム０．２％、シス
チン０．０５％、ツィーン８０（Ｔｗｅｅｎ８０）０．
０５％、精製水（イオン交換水）９６．５％からなる液
体培地に、前記(1)a) の酒粕水抽出粉末または前記(1)
b) の酒粕処理粉末をそれぞれ０．５％の濃度で添加
し、１０％水酸化ナトリウム水溶液で培地のｐＨを６．
８に調整し、試験管に１０ｍｌづつ分注した。これを１
１５℃で１５分間高圧滅菌して、２種類の試験培地「Ｗ
ａ」（酒粕水抽出粉末含有）および試験培地「Ｗｂ」
（酒粕処理粉末含有）を調製した。

【００２２】b)対照培地：酒粕水抽出粉末または酒粕処
理粉末を添加していないことを除き、上記試験培地と同
一の組成および方法により調製した。

【００２３】c)培養と濁度測定：上記の試験培地Ｗａお
よび試験培地Ｗｂを各２本組とし、２本に前記(3) 1)の
a)およびb)で調製した供試菌の前培養液を０．５ｍｌづ
つ接種し、２本組のうちの１本は直ちに分光光度計を用
い、波長６６０ｎｍ、石英セル、光路長１０ｍｍで濁度
を測定した。２本組のうちの他の１本は、リューコノス
トック・クレモリスは３０℃で、残りの１１株は３５℃
でそれぞれ１６時間、特別な嫌気的条件とすることなく
通常のフラン器内で培養し、培養後の濁度を上記と同条
件で測定した。

【００２４】2-2) 乳成分主体の培地の場合 a)試験培地：１０％還元脱脂乳培地に、前記(1)a) の酒
粕水抽出粉末または前記(1)b) の酒粕処理粉末を濃度が
０．５％となるように添加し、試験管に１０ｍｌづつ分
注した。これを１１５℃で１５分間高圧滅菌して、２種
類の試験培地「Ｌａ」（酒粕水抽出粉末含有）および試
験培地「Ｌｂ」（酒粕処理粉末含有）を調製した。

【００２５】b)対照培地：１０％還元脱脂乳培地を試験
管に１０ｍｌづつ分注し、これを１１５℃で１５分間高
圧滅菌して、対照培地を調製した。

【００２６】c)培養と酸度測定：上記の試験培地Ｌａお
よび試験培地Ｌｂを各２本組とし、２本に前記(3) 1)の
a)およびb)で調製した供試菌の前培養液を０．５ｍｌづ
つ接種した後、２本組のうちの１本は直ちに常法により
１／１０規定水酸化ナトリウム溶液で酸度を測定した。
２本組のうちの他の１本は、リューコノストック・クレ
モリスは３０℃で、残りの１１株は３５℃でそれぞれ１
６時間、特別な嫌気的条件とすることなく通常のフラン
器内で培養し、培養後の酸度を上記と同条件で測定し
た。 (4) 比較方法 1)乳成分を含まない培地の場合上記の培養前後の培地の濁度の測定結果から次式により
それぞれの供試株について増殖促進効果を算出した。

【００２７】増殖促進効果（倍）＝（ＷＴ₁₆−ＷＴ₀）
／（ＷＣ₁₆−ＷＣ₀）ここでＷＴ₁₆は16時間培養後の試験培地の濁度、ＷＴ₀
は菌接種直後、培養前の試験培地の濁度、ＷＣ₁₆は16時
間培養後の対照培地の濁度、ＷＣ₀は菌接種直後、培養
前の対照培地の濁度を示す。

【００２８】2)乳成分主体の培地の場合乳酸菌およびビフィズス菌は酸（乳酸、酢酸）を生成し
てエネルギーを獲得し、増殖する性質を有しているの
で、上記の培養前後の培地の酸度（乳酸％として表す）
の測定結果から次式によりそれぞれの供試株について増
殖促進効果を算出した。なお酸度の測定は、公定法（昭
和２６年１２月２７日厚生省令第５２号、「乳及び乳製
品の成分規格等に関する省令」、別表の二（七）（１）
５の乳及び乳製品の酸度の測定法）によった。

【００２９】増殖促進効果（倍）＝（ＬＴ₁₆−ＬＴ₀）
／（ＬＣ₁₆−ＬＣ₀）ここでＬＴ₁₆は16時間培養後の試験培地の酸度（％）、
ＬＴ₀は菌接種直後、培養前の試験培地の酸度（％）、
ＬＣ₁₆は16時間培養後の対照培地の酸度（％）、ＬＣ₀
は菌接種直後、培養前の対照培地の酸度（％）を示す。 (5) 試験結果乳成分を含まない培地による結果を表１に、乳成分主体
の培地による結果を表２に示す。

【００３０】

【表１】表１から明らかなように、酒粕水抽出粉末を０．５％添
加した試験培地Ｗａでは、乳酸菌に対しては２．４〜
３．５倍の、またビフィズス菌に対しては２．４〜２．
６倍の増殖促進効果があることが確認された。一方、酒
粕処理粉末を０．５％添加した試験培地Ｗｂでは、乳酸
菌およびビフィズス菌のいずれに対しても３倍以上の増
殖促進効果があることが確認され、さらに酒粕水抽出粉
末と比較して酒粕処理粉末の方が優れた増殖促進効果を
有することが明らかとなった。

【００３１】

【表２】表２から明らかなように、酒粕水抽出粉末を０．５％添
加した試験培地Ｌａでは、１０％還元脱脂乳培地で良好
な増殖を示す乳酸菌ラクトバシラス・ブルガリカスおよ
びストレプトカッカス・サーモフィルスに対しても１．
３〜１．４倍の増殖促進効果を示し、１０％還元脱脂乳
培地では増殖の弱い他の４株の乳酸菌にあってはいずれ
も３倍以上の増殖促進効果を示すことが確認された。ま
たビフィズス菌に対しては３倍以上の増殖促進効果があ
ることが確認された。一方、酒粕処理粉末を０．５％添
加した試験培地Ｌｂでは、１０％還元脱脂乳培地で良好
な増殖を示す乳酸菌ラクトバシラス・ブルガリカスおよ
びストレプトカッカス・サーモフィルスに対しても１．
６〜１．７倍の増殖促進効果を示し、１０％還元脱脂乳
培地では増殖の弱い他の４株の乳酸菌にあってはいずれ
も４倍以上の増殖促進効果を示すことが認められた。ま
たビフィズス菌に対しては４倍以上の増殖促進効果があ
ることが確認された。乳成分主体の培地の場合でも酒粕
水抽出粉末と比較して酒粕処理粉末の方が優れた増殖促
進効果を有することが明らかになった。試験例２乳酸菌およびビフィズス菌の増殖に及ぼす酒粕水抽出粉
末、および酒粕処理粉末の添加量の影響を試験した。 (1) 試料の調製試験例１と同一の方法により調製した。 (2) 供試菌株試験例１と同一の方法により調製した。 (3) 試験方法試験例１の(3)2)2-1)a) 試験培地ＷａあるいはＷｂの酒
粕水抽出粉末または酒粕処理粉末の濃度を表３、および
表４に記載した濃度に調整し、(3)2)2-2)a) 試験培地Ｌ
ａまたはＬｂ中の酒粕水抽出粉末または酒粕処理粉末の
濃度を表５、および表６に記載した濃度に調整したこと
以外は、試験例１(3) 試験方法と同一の方法により試験
を行った。 (4) 比較方法試験例１の(4) と同一の方法によりそれぞれの増殖促進
効果（倍）を算出した。 (5) 試験結果乳成分を含まない培地による結果は表３および表４に、
乳成分主体の培地による結果は表５および表６に示すと
おりであった。

【００３２】

【表３】

【００３３】

【表４】

【００３４】

【表５】

【００３５】

【表６】表３から明らかなように、乳成分を含まない培地への酒
粕水抽出粉末の添加は、乳酸菌、ビフィズス菌に対して
０．０５％の添加で増殖促進効果を呈することが認めら
れた。また増殖促進効果は添加量の増加とともに増大
し、１％の添加で最大の効果が得られることも確認され
た。

【００３６】表４から明らかなように、乳成分を含まな
い培地への酒粕処理粉末の添加は、乳酸菌、ビフィズス
菌に対して０．０２５％の添加ですでに増殖促進効果を
呈することが認められる。また増殖促進効果は添加量の
増加とともに増大し、１％の添加で最大の効果が得られ
ることも確認された。

【００３７】表５から明らかなように、乳成分主体の培
地への酒粕水抽出粉末の添加は、乳酸菌、ビフィズス菌
に対して０．０５％の添加で増殖促進効果を呈すること
が認められる。また増殖促進効果は添加量の増加ととも
に増大し、１％の添加で最大の効果が得られることも確
認された。

【００３８】表６から明らかなように、乳成分主体の培
地への酒粕処理粉末の添加は、乳酸菌、ビフィズス菌に
対して０．０２５％の添加ですでに増殖促進効果を呈す
ることが認められる。また増殖促進効果は添加量の増加
とともに増大し、１％の添加で最大の効果が得られるこ
とも確認された。

【００３９】みりん粕水抽出物の粉末および蛋白分解酵
素処理したみりん粕水抽出物の粉末について上記試験例
と同様の試験を行い、乳酸菌、ビフィズス菌に対して
０．０２５％の添加ですでに増殖促進効果を呈すること
を確認した。

【００４０】次に実施例を示し、本発明をより詳細に説
明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものでは
ない。

【００４１】

【実施例】

実施例１市販の清酒粕５００ｇに水道水２０００ｍｌを加え、均
一に混合し、オートクレーブで１２１℃、５分間加熱処
理した。これを４０℃に冷却し、遠心分離機で水不溶の
残渣を除去し、上清液を凍結乾燥し、清酒粕水抽出物の
粉末（増殖促進剤）約１４５ｇを得た。

【００４２】酵母エキス０．５％、肉エキス０．５％、
グルコース２％、リン酸一カリウム０．１％、リン酸二
カリウム０．１％、無水酢酸ナトリウム０．２％、シス
チン０．０５％、ツィーン８０（Ｔｗｅｅｎ８０）０．
０５％、精製水（イオン交換水）９６．５％からなる水
溶液を調製し、この水溶液に１％の濃度で上記の清酒粕
水抽出物粉末を添加し、１０％水酸化ナトリウム水溶液
でｐＨを６．８に調整し、オートクレーブで１１５℃、
１５分間加熱滅菌し、増殖促進剤添加培地を調製した。
一方、清酒粕水抽出物粉末を添加しない他は上記と同じ
組成、および条件で調製した無添加培地を調製した。

【００４３】上記増殖促進剤添加培地および無添加培地
１０００ｍｌに試験例１(3) 1) b)の条件で調製したビ
フィドバクテリウム・ロングムの前培養液１０ｍｌを接
種し、３５℃で１６時間培養した。培養液を試験例(4)
1)に記載した方法で濁度を測定し、比較した結果、上記
増殖促進剤添加培地の培養液の菌濃度は無添加の場合に
比して３．０倍であった。実施例２みりん粕３００ｇに水道水１８００ｍｌを加え、均一に
混合し、８０℃で３０分間加熱殺菌した。これを４０℃
に冷却し、遠心分離機で水不溶の残渣を除去し、上清液
を凍結乾燥し、みりん粕水抽出物の粉末（増殖促進剤）
約１００ｇを得た。

【００４４】１０％還元脱脂乳培地を調製し、この還元
脱脂乳培地に１％の濃度で上記のみりん粕水抽出物粉末
を添加し、オートクレーブで１１５℃、１５分間加熱滅
菌し、増殖促進剤添加培地を準備した。一方みりん粕水
抽出物粉末を添加しない他は上記と同じ組成、および条
件で調製した無添加培地を調製した。

【００４５】上記増殖促進剤添加培地および無添加培地
１０００ｍｌに試験例１(3) 1) a)の条件で調製したラ
クトバシラス・アシドフィルスの前培養液１０ｍｌを接
種し、３５℃で１６時間培養した。培養液を試験例(4)
2)に記載した方法で酸度を測定し、比較した結果、上記
増殖促進剤添加培地の培養液の菌濃度は無添加の場合に
比して４．０倍であった。実施例３市販の清酒粕５００ｇに水道水２０００ｍｌを加え、均
一に混合し、１０％水酸化ナトリウム水溶液でｐＨを
８．０に調整した。次いで８０℃で３０分間加熱殺菌し
た。これを４０℃に冷却し、市販の蛋白分解酵素パンク
レアチン（天野製薬社製）を５ｇ加え、４０℃で２時間
酵素反応を行った。窒素抽出率４０％。次いで８０℃で
２０分間加熱して酵素を失活させ、遠心分離機で水不溶
の残渣を除去し、上清液を凍結乾燥し、蛋白分解酵素処
理した清酒粕水抽出物の粉末（増殖促進剤）約１９０ｇ
を得た。

【００４６】１０％還元脱脂乳培地を調製し、この還元
脱脂乳培地に１％の濃度で上記の蛋白分解酵素処理した
清酒粕水抽出物の粉末を添加し、オートクレーブで１１
５℃、１５分間加熱滅菌し、増殖促進剤添加培地を準備
した。一方蛋白分解酵素処理した清酒粕水抽出物の粉末
を添加しない他は上記と同じ組成、および条件で調製し
た無添加培地を調製した。

【００４７】上記増殖促進剤添加培地および無添加培地
１０００ｍｌに試験例１(3) 1)b)の条件で調製したビフ
ィドバクテリウム・ブレーベの前培養液１０ｍｌを接種
し、３５℃で２０時間培養した。培養液を試験例(4) 2)
に記載した方法で酸度を測定し、比較した結果、上記増
殖促進剤添加培地の培養液の菌濃度は無添加の場合に比
して５．５倍であった。実施例４みりん粕３００ｇに水道水１８００ｍｌを加え、均一に
混合し、１０％塩酸水溶液でｐＨを４．０に調整した。
次いで８０℃で３０分間加熱殺菌した。これを４０℃に
冷却し、市販の蛋白分解酵素豚ペプシン（和光純薬社
製）を３ｇ加え、４０℃で３時間酵素反応を行った。窒
素抽出率５０％。次いで８０℃で２０分間加熱して酵素
を失活させ、遠心分離機で水不溶の残渣を除去し、上清
液を凍結乾燥し、蛋白分解酵素処理したみりん粕水抽出
物の粉末（増殖促進剤）約１１０ｇを得た。

【００４８】実施例１の清酒粕水抽出物粉末のかわりに
上記蛋白分解酵素処理したみりん粕水抽出物の粉末を用
い、ビフィドバクテリウム・ロングムのかわりに試験例
１(3) 1) a) の条件で調製したリューコノストック・ク
レモリスを接種し、３０℃で１６時間培養したほかは、
実施例１と同様にして増殖促進効果を比較した結果、上
記増殖促進剤添加培地の培養液の菌濃度は無添加の場合
に比して４．６倍であった。

【００４９】

【発明の効果】本発明によって奏せられる効果は次のと
おりである。

【００５０】(1) 乳成分を含まない培地において、乳酸
菌またはビフィズス菌の増殖を促進する物質を提供す
る。

【００５１】(2) 乳成分主体の培地において、乳酸菌ま
たはビフィズス菌の増殖を促進する物質を提供する。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所Ｃ１２Ｒ 1:01） (Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:225） (Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:46）

Claims

【特許請求の範囲】【請求項１】酒粕の水抽出物および／または蛋白分解
酵素処理した酒粕の水抽出物を有効成分として含有する
ことを特徴とする乳酸菌およびビフィズス菌の増殖促進
剤。