RU2605626C2 - Способ получения бактериального препарата с пробиотической активностью - Google Patents

Способ получения бактериального препарата с пробиотической активностью Download PDF

Info

Publication number
RU2605626C2
RU2605626C2 RU2015115871/10A RU2015115871A RU2605626C2 RU 2605626 C2 RU2605626 C2 RU 2605626C2 RU 2015115871/10 A RU2015115871/10 A RU 2015115871/10A RU 2015115871 A RU2015115871 A RU 2015115871A RU 2605626 C2 RU2605626 C2 RU 2605626C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
sodium
glucose
probiotic
bacterial preparation
ascorbic acid
Prior art date
Application number
RU2015115871/10A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2015115871A (ru
Inventor
Любовь Сергеевна Дышлюк
Станислав Алексеевич Сухих
Ирина Сергеевна Милентьева
Александр Юрьевич Просеков
Оксана Васильевна Козлова
Михаил Владимирович Шишин
Original Assignee
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Кемеровский технологический институт пищевой промышленности (университет)"
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Кемеровский технологический институт пищевой промышленности (университет)" filed Critical Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Кемеровский технологический институт пищевой промышленности (университет)"
Priority to RU2015115871/10A priority Critical patent/RU2605626C2/ru
Publication of RU2015115871A publication Critical patent/RU2015115871A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2605626C2 publication Critical patent/RU2605626C2/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A61K35/741—Probiotics
    • A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A61K35/741—Probiotics
    • A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
    • A61K35/745—Bifidobacteria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A61K35/741—Probiotics
    • A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
    • A61K35/747—Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis

Abstract

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для создания функциональных продуктов питания. Способ получения бактериального препарата с пробиотической активностью на основе представителей нормальной кишечной микрофлоры человека, включающий выделение бифидобактерий и лактобактерий из фекалий человека, культивирование их на жидкой питательной среде в анаэробных условиях при температуре 37°C с последующим центрифугированием и выделением бактериального препарата. Используют фекалии взрослого здорового субъекта, который в течение 3 месяцев перед выделением не принимает ни антибиотические, ни пробиотические препараты, из фекалий дополнительно выделяют стрептококки и энтерококки. Культивирование осуществляют на среде, содержащей (г/л): дрожжевой экстракт - 5,0; папаиновый перевар соевой муки - 10,0; натрия гидрофосфат - 1,0; Твин-80 - 0,2; аммония цитрат - 1,0; цистеина гидрохлорид - 0,5; магния хлорид - 0,5; кислота аскорбиновая - 0,5; глюкоза - 10,0; мясной экстракт - 20,0; марганца сульфат - 0,05; натрия азид - 0,2. Либо культивирование может быть осуществлено на среде, содержащей (г/л): протеозопептон - 15,0; папаиновый перевар соевой муки - 10,0; натрия гидрофосфат - 1,5; Твин-80 - 1,0; аммония цитрат - 2,0; цистеина гидрохлорид - 1,0; магния хлорид - 0,5; кислота аскорбиновая - 0,2; натрия хлорид - 2,5; глюкоза - 10,0; мясной экстракт - 10,0; натрия азид - 0,2. Либо культивирование может быть осуществлено на среде, содержащей (г/л): дрожжевой экстракт - 10,0; панкреатический гидролизат казеина - 20,0; натрия гидрофосфат - 2,5; Твин-80 - 0,7; лактоза - 5,0; аммония цитрат - 0,5; цистеина гидрохлорид - 1,0; магния хлорид - 1,0; кислота аскорбиновая - 0,1; натрия ацетат - 0,2; натрия хлорид - 3,0; глюкоза - 5,0; мясной экстракт - 15,0; марганца сульфат - 0,1; натрия азид - 0,2. Культивирование осуществляют до достижения концентрации микроорганизмов 1,0·108 КОЕ/мл. Способ позволяет получить пробиотический препарат с антагонистическими свойствами по отношению к патогенным и условно-патогенным микроорганизмам, а также антиоксидантной, гепатопротекторной и противоопухолевой активностями. 2 табл., 3 пр.

Description

Изобретение относится к микробиологии и биотехнологии, в частности изобретение касается бактериального препарата с пробиотической активностью, и может быть использовано для создания функциональных продуктов питания для онкологических больных в период реабилитации.
Пробиотики - это живые физиологически функциональные пищевые ингредиенты в виде полезных для человека (непатогенных и нетоксикогенных) живых микроорганизмов, обеспечивающие при систематическом употреблении человеком в пищу непосредственно в виде препаратов или биологически активных добавок (БАД) к пище либо в составе пищевых продуктов благоприятное воздействие на организм человека в результате нормализации состава и/или повышения биологической активности нормальной микрофлоры кишечника (Бондаренко, В.М. Пробиотики и механизмы их лечебного действия / В.М. Бондаренко, Р.П. Чупринина, Ж.И. Аладышева, Т.В. Мацулевич // Эксперим. и клин. Гастроэнтерол. - 2004. - №3. - С. 83-87).
Систематическое использование пробиотиков в питании повышает колонизационную резистентность кишечника, усиливает иммунитет, предотвращает развитие аллергических осложнений, оказывает гипохолестеринемический, противоопухолевый и другие положительные эффекты на человека. Исходя из этого, создание продуктов функционального питания на основе пробиотических штаммов микроорганизмов, обладающих специфическим позитивным действием на организм человека, рассматривают как стратегическое направление альтернативной медицины, направленное на поддержание и восстановление здоровья человека (Янковский, Д.С. Состав и функции микробиоценозов различных биотопов человека // Здоровье женщины. - 2003. - №4(16). - С. 145-158).
Пробиотики являются неотъемлемой частью диеты онкологических больных. Цитостатическая и лучевая терапия, применяемая у больных онкологическими заболеваниями, имеющая небольшой порог между лечебным и токсическим дозами, приводит к повреждению гастроинтестинального тракта, его слизистых оболочек, являющихся наиболее чувствительными к повреждающему воздействию, поскольку являются активно пролиферирующими тканями организма, а также к нарушению в микробной флоре кишечника, также являющейся быстро пролиферирующим сообществом. Происходит гибель нормальной кишечной микрофлоры, расширяется спектр потенциально-патогенных микроорганизмов, изменяется видовой и количественный состав. Все это усиливает повреждение гастроинтестинального тракта и печени, что диктует необходимость поиска и включения в комплекс реабилитационных мероприятий препаратов, направленных на восстановление нормального микробиоценоза кишечника, что может быть достигнуто включением в рацион питания продуктов, обогащенных пробиотиками.
В настоящее время известно большое число пробиотических препаратов для профилактики и лечения желудочно-кишечных заболеваний человека и животных. Такой препарат, как правило, содержит клетки бактерий, остатки культуральной жидкости, жиры, белки, лактозу, камедь и другие добавки. Технология их получения включает в себя, как правило, подготовку раствора или взвеси биомассы микроорганизмов, введение в нее специальных добавок, сублимационное высушивание и получение готового продукта. Условия процесса и состав композиций определяются особенностями используемых микроорганизмов и характером поставленной задачи.
Так, известны препарат и способ его получения (RU, патент 2080795, опубл. 10.06.1997). Данный препарат содержит живые клетки Lactobacillus acidophilus, желатин, сахарозу, обезжиренное молоко, воду, остатки культуральной жидкости. Способ его получения предусматривает культивирование бактерий Lactobacillus acidophilus в жидкой питательной среде, введение защитной среды, содержащей желатин, сахарозу, обезжиренное молоко, замораживание при температуре -30-(-)35°C в течение 18-12 часов, сублимационную сушку в течение 45-52 часов.
Недостатком препарата является относительно невысокая эффективность, ограниченная область применения, а также невозможность длительного хранения.
В настоящее время одним из перспективных направлений для обеспечения оздоровляющего воздействия на ЖКТ является применение препаратов, содержащих несколько штаммов микроорганизмов, обладающих синергетическим действием.
Известен препарат (RU, патент 2160992, опубл. 27.12.2000), содержащий жизнеспособные клетки 2-х симбиотических штаммов Lactobacillus acidophilus, остатки культуральной жидкости и вспомогательные вещества - желатин, сахарозу, обезжиренное молоко. Способ его получения предусматривает культивирование бактерий в жидкой питательной среде, введение защитной среды, содержащей желатин, сахарозу и обезжиренное молоко, замораживание при температуре минус 25-30°C в течение 2-3 часов и сублимационную сушку в течение 45-48 часов.
Недостатком препарата является его недостаточная эффективность в отношении повышения резистентности организма к неблагоприятным условиям внешней среды, недостаточная термоустойчивость.
Известен (RU, патент 2471864, опубл. 10.01.2013) пробиотический препарат против вирусных и бактериальных инфекций «токсиспорин», содержащий смесь биомассы штаммов бактерий Bacillus subtilis ВКПМ В-3679 и Bacillus licheniformis ВКПМ - 4161 в споровой форме с титром не менее 109 спор/г, и глауконит. Оптимальное содержание спор бактерий Bacillussubtilis в их смеси со спорами Bacillus licheniformis составляет 50%. Препарат получают раздельным культивированием вышеоговоренных бактерий в глюкозо-мелассной среде при рН - 6,8-7,0, получают смесь спор в количестве 0,1-1 мас. % от массы препарата и смешивают ее с глауконитом до содержания КОЕ не менее 109 спор/г. Для приготовления препарата используют штамм бактерий Bacillus licheniformis ВКПМ В-4161.
Недостатком известного способа можно признать относительно узкий спектр воздействия на организм.
Известен (ЕР, патент 2848681, опубл. 18.03.2015) способ получения бактериального препарата с пробиотической активностью, согласно которому проводят выделение бифидобактерий и лактобактерий из фекалий человека, культивирование их на жидкой питательной среде в анаэробных условиях при температуре 37°C с последующим центрифугированием и выделением бактериального препарата.
Указанный источник информации принят в качестве ближайшего аналога.
Недостатком известного способа следует признать недостаточную пробиотическую активность, обусловленную низкой концентрацией микроорганизмов в готовом продукте.
Техническая задача, решаемая использованием разработанного способа, состоит в расширении ассортимента пробиотических препаратов.
Технический результат, достигаемый при реализации разработанного способа, состоит в получении пробиотического препарата с выраженными антагонистическими свойствами по отношению к патогенным и условно-патогенным микроорганизмам, а также антиоксидантной, гепатопротекторной и противоопухолевой активностью.
Для достижения указанного технического результата предложено использовать разработанный способ получения бактериального препарата с пробиотической активностью, согласно которому проводят выделение бифидобактерий и лактобактерий из фекалий человека, культивирование их на жидкой питательной среде в анаэробных условиях при температуре 37°C с последующим центрифугированием и выделением бактериального препарата, причем используют фекалии взрослого здорового субъекта, который в течение 3 месяцев перед выделением не принимает ни антибиотические, ни пробиотические препараты, из фекалий дополнительно выделяют стрептококки и энтерококки, культивирование осуществляют до достижения концентрации микроорганизмов 1,0·108 КОЕ/мл, либо на среде 1, содержащей (г/л): дрожжевой экстракт - 5,0; папаиновый перевар соевой муки - 10,0; натрия гидрофосфат - 1,0; Твин-80 - 0,2; аммония цитрат - 1,0; цистеина гидрохлорид - 0,5; магния хлорид - 0,5; кислота аскорбиновая - 0,5; глюкоза - 10,0; мясной экстракт - 20,0; марганца сульфат - 0,05; натрия азид - 0,2, либо на среде 2, содержащей (г/л): протеозопептон - 15,0; папаиновый перевар соевой муки - 10,0; натрия гидрофосфат - 1,5; Твин-80 - 1,0; аммония цитрат - 2,0; цистеина гидрохлорид - 1,0; магния хлорид - 0,5; кислота аскорбиновая - 0,2; натрия хлорид - 2,5; глюкоза - 10,0; мясной экстракт - 10,0; натрия азид - 0,2, либо на среде 3, содержащей (г/л): дрожжевой экстракт - 10,0; панкреатический гидролизат казеина - 20,0; натрия гидрофосфат - 2,5; Твин-80 - 0,7; лактоза - 5,0; аммония цитрат - 0,5; цистеина гидрохлорид - 1,0; магния хлорид - 1,0; кислота аскорбиновая - 0,1; натрия ацетат - 0,2; натрия хлорид - 3,0; глюкоза - 5,0; мясной экстракт - 15,0; марганца сульфат - 0,1; натрия азид - 0,2.
Разработанный способ реализуют следующим образом.
Источником выделения пробиотических бактерий являются фекалии взрослого здорового субъекта, который в течение 3 месяцев перед выделением не принимает ни антибиотические, ни пробиотические препараты. Критерием включения для здоровых лиц является отсутствие острых заболеваний, очагов гнойно-воспалительных инфекций, сахарного диабета, онкопатологии, первичного и вторичного иммунодефицита.
Подготовку содержимого кишечника проводят следующим образом: 1 г фекалий вносят в 9 мл стерильного изотонического раствора хлорида натрия (NaCl) и тщательно суспендируют путем встряхивания в течение 20-30 минут. Затем отстаивают и через 1 час из надосадочной жидкости готовят разведения в изотоническом растворе хлорида натрия 102, 103, 104, 105. Из разведений 103, 104, 105 делают посев бактериологической петлей на питательные среды.
Для первичного выделения бактерий используют бифидум-среду, среду МРС, селективный агар для стрептококков, среду Сланец-Бартли для энтерококков. Культивирование бактерий осуществляют на агаризованных питательных средах в анаэробном режиме при температуре 37°C в течение 24,0 часов. С суммарных газонов на чашках Петри с видимым ростом микроорганизмов проводят истощающие рассевы. Выделенные микроорганизмы культивируют в жидких питательных средах в анаэробном режиме при температуре 37°C в течение 1,20-24,0 часов до достижения концентрации микроорганизмов 1,0·108 КОЕ/мл.
По окончании культивирования биомассу отделяют от культуральной жидкости центрифугированием при 8000 об/мин в течение 20 минут.
Культуры микроорганизмов, выделенных из желудочно-кишечного тракта человека, хранятся в сублимационно-высушенном состоянии в ампулах при температуре 4±2°C не менее 24 месяцев. Параметры сублимационной сушки бактериального препарата: температура замораживания в защитной среде, содержащей 5% глицерина, -25°C при продолжительности 90 минут; температура сушки 30°C; продолжительность сушки 6 часов; тепловая нагрузка 5,45 кВт/м2; остаточное давление 0,6-0,8 кПа; толщина слоя сушки 2 мм.
Изобретение иллюстрируется следующими примерами.
Пример 1
1 г фекалий вносят в 9 мл стерильного изотонического раствора хлорида натрия (NaCl) и тщательно суспендируют путем встряхивания в течение 20-30 минут. Затем отстаивают и через 1 час из надосадочной жидкости готовят разведения в изотоническом растворе хлорида натрия 102, 103, 104, 105. Из разведений 103, 104, 105 делают посев бактериологической петлей на питательную среду.
Бактерии культивируют в анаэробном режиме при температуре 37°C в течение 1,20-24,0 часов до достижения концентрации микроорганизмов 1,0·108 КОЕ/мл в жидкой питательной среде состава (г/л): дрожжевой экстракт - 5,0; папаиновый перевар соевой муки - 10,0; натрия гидрофосфат - 1,0; Твин-80 - 0,2; аммония цитрат - 1,0; цистеина гидрохлорид - 0,5; магния хлорид - 0,5; кислота аскорбиновая - 0,5; глюкоза - 10,0; мясной экстракт - 20,0; марганца сульфат - 0,05; натрия азид - 0,2; pH среды - 6,8±0,2.
По окончании культивирования биомассу отделяют от культуральной жидкости центрифугированием при 8000 об/мин в течение 20 минут.
Пробиотические бактерии подвергают сублимационной сушке при следующих параметрах: температура замораживания в защитной среде, содержащей 5% глицерина, -25°C при продолжительности 90 минут; температура сушки 30°C; продолжительность сушки 6 часов; тепловая нагрузка 5,45 кВт/м2; остаточное давление 0,6-0,8 кПа; толщина слоя сушки 2 мм.
Сублимационно-высушенный бактериальный препарат хранят в ампулах при температуре 4±2°C не менее 24 месяцев.
Для полученного бактериального препарата определяли ингибиторную активность в отношении широкого круга грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов диффузионным методом на твердой питательной среде (таблица 1).
Для предлагаемого бактериального препарата с пробиотической активностью в экспериментах in vitro установлена антиоксидантная, гепатопротекторная, противоопухолевая активность.
Антиоксидантные свойства бактериального препарата изучали в соответствии с методом, описанным Cao, et al (1995) путем определения степени защиты от окисления β-фикоэритрином по измерению относительной флуоресценции при 595 нм и при 535 нм в течение 70-минутного периода.
Гепатопротекторные свойства бактериального препарата оценивали по его ингибирующему эффекту на образование β-глюкуронидазы тест-штаммом Е. coli HGU-3.
Противоопухолевые свойства бактериального препарата тестировали in vitro на раковых клеточных линиях: лимфомы Беркитта ЛБР2, рака предстательной железы человека DU 145, рака молочной железы человека MDAMB-231 и MCF7, гепатоцеллюлярной карциномы HepG2, рака головного мозга U-87, рака поджелудочной железы человека PANC-1.
Количество живых раковых клеток по окончании периода инкубации с бактериальным препаратом определяли с помощью МТТ-колориметрического метода, основанного на способности дегидрогеназ живых клеток восстанавливать 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолийбромид (МТТ) до фиолетовых кристаллов формазана, растворимых в диметилсульфоксиде.
Результаты определения антиоксидантной активности бактериального препарата представлены на фиг. 1.
Результаты определения гепатопротекторной активности бактериального препарата представлены на фиг. 2.
Результаты определения противоопухолевой активности бактериального препарата представлены в таблице 2.
Пример 2
1 г фекалий вносят в 9 мл стерильного изотонического раствора хлорида натрия (NaCl) и тщательно суспендируют путем встряхивания в течение 20-30 минут. Затем отстаивают и через 1 час из надосадочной жидкости готовят разведения в изотоническом растворе хлорида натрия 102, 103, 104, 105. Из разведений 103, 104, 105 делают посев бактериологической петлей на питательную среду.
Бактерии культивируют в анаэробном режиме при температуре 37°C в течение 1,20-24,0 часов до достижения концентрации микроорганизмов 1,0·108 КОЕ/мл в жидкой питательной среде состава (г/л): протеозопептон - 15,0; папаиновый перевар соевой муки - 10,0; натрия гидрофосфат - 1,5; Твин-80 - 1,0; аммония цитрат - 2,0; цистеина гидрохлорид - 1,0; магния хлорид - 0,5; кислота аскорбиновая - 0,2; натрия хлорид - 2,5; глюкоза - 10,0; мясной экстракт - 10,0; натрия азид - 0,2; рН среды - 7,0±0,2.
По окончании культивирования биомассу отделяют от культуральной жидкости центрифугированием при 8000 об/мин в течение 20 минут.
Пробиотические бактерии подвергают сублимационной сушке при параметрах, указанных в примере 1. Сублимационно-высушенный бактериальный препарат хранят в ампулах при температуре 4±2°C не менее 24 месяцев.
Для полученного бактериального препарата определяли ингибиторную активность в отношении широкого круга грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов диффузионным методом на твердой питательной среде (таблица 1).
Для предлагаемого бактериального препарата с пробиотической активностью в экспериментах in vitro установлена антиоксидантная, гепатопротекторная, противоопухолевая активность.
Результаты определения антиоксидантной активности бактериального препарата представлены на фиг. 1.
Результаты определения гепатопротекторной активности бактериального препарата представлены на фиг. 2.
Результаты определения противоопухолевой активности бактериального препарата представлены в таблице 2.
Пример 3
1 г фекалий вносят в 9 мл стерильного изотонического раствора хлорида натрия (NaCl) и тщательно суспендируют путем встряхивания в течение 20-30 минут. Затем отстаивают и через 1 час из надосадочной жидкости готовят разведения в изотоническом растворе хлорида натрия 102, 103, 104, 105. Из разведений 103, 104, 105 делают посев бактериологической петлей на питательную среду.
Бактерии культивируют в анаэробном режиме при температуре 37°C в течение 1,20-24,0 часов до достижения концентрации микроорганизмов 1,0·108 КОЕ/мл в жидкой питательной среде состава (г/л): дрожжевой экстракт - 10,0; панкреатический гидролизат казеина - 20,0; натрия гидрофосфат - 2,5; Твин-80 - 0,7; лактоза - 5,0; аммония цитрат - 0,5; цистеина гидрохлорид - 1,0; магния хлорид - 1,0; кислота аскорбиновая - 0,1; натрия ацетат - 0,2; натрия хлорид - 3,0; глюкоза - 5,0; мясной экстракт - 15,0; марганца сульфат - 0,1; натрия азид - 0,2; pH среды - 7,0±0,2.
По окончании культивирования биомассу отделяют от культуральной жидкости центрифугированием при 8000 об/мин в течение 20 минут.
Пробиотические бактерии подвергают сублимационной сушке при параметрах, указанных в примере 1. Сублимационно-высушенный бактериальный препарат хранят в ампулах при температуре 4±2°C не менее 24 месяцев.
Для полученного бактериального препарата определяли ингибиторную активность в отношении широкого круга грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов диффузионным методом на твердой питательной среде (таблица 1).
Для предлагаемого бактериального препарата с пробиотической активностью в экспериментах in vitro установлена антиоксидантная, гепатопротекторная, противоопухолевая активность.
Результаты определения антиоксидантной активности бактериального препарата представлены на фиг. 1.
Результаты определения гепатопротекторной активности бактериального препарата представлены на фиг. 2.
Результаты определения противоопухолевой активности бактериального препарата представлены в таблице 2.
Фиг. 1 позволяет сделать вывод о том, что бактериальные препараты с пробиотической активностью, полученные по трем описанным примерам, характеризуются выраженными антиоксидантными свойствами (величина тролокс-эквивалента/109 клеток находится в диапазоне от 1346 до 2728). При этом максимальная антиоксидантная активность обнаружена у бактериального препарата по примеру 2 (2728).
Из фиг. 2 следует, что бактериальные препараты с пробиотической активностью, полученные по трем описанным примерам, проявляют гепатопротекторные свойства (ингибирующий эффект на образование β-глюкуронидазы Е. coli HGU-3 составляет от 75,0 до 83,0%). Наиболее ярко гепатопротекторные свойства проявляются у бактериального препарата по примеру 3 (83,0%).
Из таблицы 2 следует, что бактериальные препараты с пробиотической активностью, полученные по трем описанным примерам, характеризуются противоопухолевой активностью по отношению к тестируемым клеточным линиям, однако наиболее выраженные противоопухолевые свойства характерны для бактериального препарата по примеру 1. Бактериальный препарат по примеру 1 в концентрации 107 КОЕ/мл наибольшую активность проявляет в отношении клеточных линий гепатоцеллюлярной карциномы HepG2 (выживаемость 16,4%) и рака молочной железы человека MDAMB-231 (выживаемость 19,6%).
Таким образом, заявляемый способ получения бактериального препарата с пробиотической активностью позволяет получить продукт с выраженными антагонистическими свойствами по отношению к широкому кругу патогенных и условно-патогенных микроорганизмов, а также антиоксидантной, гепатопротекторной и противоопухолевой активностью.
Предлагаемый бактериальный препарат с пробиотической активностью может быть использован для создания функциональных продуктов питания для онкологических больных в период реабилитации.
Figure 00000001
Figure 00000002

Claims (1)

  1. Способ получения бактериального препарата с пробиотической активностью на основе представителей нормальной кишечной микрофлоры человека, включающий выделение бифидобактерий и лактобактерий из фекалий человека, культивирование их на жидкой питательной среде в анаэробных условиях при температуре 37°C с последующим центрифугированием и выделением бактериального препарата, отличающийся тем, что используют фекалии взрослого здорового субъекта, который в течение 3 месяцев перед выделением не принимает ни антибиотические, ни пробиотические препараты, из фекалий дополнительно выделяют стрептококки и энтерококки, культивирование осуществляют до достижения концентрации микроорганизмов 1,0·108 КОЕ/мл, а культивирование осуществляют либо на среде 1, содержащей (г/л): дрожжевой экстракт - 5,0; папаиновый перевар соевой муки - 10,0; натрия гидрофосфат - 1,0; Твин-80 - 0,2; аммония цитрат - 1,0; цистеина гидрохлорид - 0,5; магния хлорид - 0,5; кислота аскорбиновая - 0,5; глюкоза - 10,0; мясной экстракт - 20,0; марганца сульфат - 0,05; натрия азид - 0,2, либо на среде 2, содержащей (г/л): протеозопептон - 15,0; папаиновый перевар соевой муки - 10,0; натрия гидрофосфат - 1,5; Твин-80 - 1,0; аммония цитрат - 2,0; цистеина гидрохлорид - 1,0; магния хлорид - 0,5; кислота аскорбиновая - 0,2; натрия хлорид - 2,5; глюкоза - 10,0; мясной экстракт - 10,0; натрия азид - 0,2, либо на среде 3, содержащей (г/л): дрожжевой экстракт - 10,0; панкреатический гидролизат казеина - 20,0; натрия гидрофосфат - 2,5; Твин-80 - 0,7; лактоза - 5,0; аммония цитрат - 0,5; цистеина гидрохлорид - 1,0; магния хлорид - 1,0; кислота аскорбиновая - 0,1; натрия ацетат - 0,2; натрия хлорид - 3,0; глюкоза - 5,0; мясной экстракт - 15,0; марганца сульфат - 0,1; натрия азид - 0,2.
RU2015115871/10A 2015-04-28 2015-04-28 Способ получения бактериального препарата с пробиотической активностью RU2605626C2 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2015115871/10A RU2605626C2 (ru) 2015-04-28 2015-04-28 Способ получения бактериального препарата с пробиотической активностью

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2015115871/10A RU2605626C2 (ru) 2015-04-28 2015-04-28 Способ получения бактериального препарата с пробиотической активностью

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2015115871A RU2015115871A (ru) 2016-11-20
RU2605626C2 true RU2605626C2 (ru) 2016-12-27

Family

ID=57759560

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2015115871/10A RU2605626C2 (ru) 2015-04-28 2015-04-28 Способ получения бактериального препарата с пробиотической активностью

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2605626C2 (ru)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2743696C1 (ru) * 2020-03-03 2021-02-24 федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Кемеровский государственный университет" (КемГУ) Способ производства капсулированной формы антимикробного препарата для терапии заболеваний желудочно-кишечного тракта
RU2771136C1 (ru) * 2021-02-08 2022-04-26 Общество с ограниченной ответственностью "Микробные нутриенты иммунокорректоры" Штамм Meyerozyma (Pichia) guilliermondii (варианты), используемый для изготовления пре-, про- и аутопробиотических препаратов и продуктов для человека и животных, лечебно-профилактическое средство на его основе и способ его получения (варианты)
RU2773131C2 (ru) * 2020-03-03 2022-05-30 федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Кемеровский государственный университет" (КемГУ) Способ получения бактериоцинсодержащей композиции

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2432392C1 (ru) * 2010-08-26 2011-10-27 Общество с ограниченной ответственностью "Национальная биотехнологическая компания" СПОСОБ ПРОИЗВОДСТВА ПРОБИОТИЧЕСКОГО ПРЕПАРАТА НА ОСНОВЕ СПОРООБРАЗУЮЩИХ ШТАММОВ Bac. subtilis И Bac. licheniformis
RU2471864C1 (ru) * 2011-12-13 2013-01-10 ОБЩЕСТВО С ОГРАНИЧЕННОЙ ОТВЕТСТВЕННОСТЬЮ "БИО Агат Групп" Пробиотический препарат против вирусных и бактериальных инфекций "токсиспорин", способ его получения, штамм бактерий bacillus licheniformis, используемый в качестве компонента пробиотического препарата
EP2848681A1 (en) * 2009-03-10 2015-03-18 Hero AG Isolation, identification and characterization of strains with probiotic activity from the faeces of babies fed exclusively with breast milk

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2848681A1 (en) * 2009-03-10 2015-03-18 Hero AG Isolation, identification and characterization of strains with probiotic activity from the faeces of babies fed exclusively with breast milk
RU2432392C1 (ru) * 2010-08-26 2011-10-27 Общество с ограниченной ответственностью "Национальная биотехнологическая компания" СПОСОБ ПРОИЗВОДСТВА ПРОБИОТИЧЕСКОГО ПРЕПАРАТА НА ОСНОВЕ СПОРООБРАЗУЮЩИХ ШТАММОВ Bac. subtilis И Bac. licheniformis
RU2471864C1 (ru) * 2011-12-13 2013-01-10 ОБЩЕСТВО С ОГРАНИЧЕННОЙ ОТВЕТСТВЕННОСТЬЮ "БИО Агат Групп" Пробиотический препарат против вирусных и бактериальных инфекций "токсиспорин", способ его получения, штамм бактерий bacillus licheniformis, используемый в качестве компонента пробиотического препарата

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
СОЛОВЬЕВА И.В. и др. Изучение биологических свойств новых штаммов рода Lactobacillus // Вестник Нижегородского Университета им. Н.И.Лобачевского, 2010, Т. 2, N 2, стр. 462-468. ШЕНДЕРОВ Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание. Том I: Микрофлора человека и животных и ее функции. М.: Издательство ГРАНТЪ, 1998, с. 20-27. *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2743696C1 (ru) * 2020-03-03 2021-02-24 федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Кемеровский государственный университет" (КемГУ) Способ производства капсулированной формы антимикробного препарата для терапии заболеваний желудочно-кишечного тракта
RU2773131C2 (ru) * 2020-03-03 2022-05-30 федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Кемеровский государственный университет" (КемГУ) Способ получения бактериоцинсодержащей композиции
RU2771136C1 (ru) * 2021-02-08 2022-04-26 Общество с ограниченной ответственностью "Микробные нутриенты иммунокорректоры" Штамм Meyerozyma (Pichia) guilliermondii (варианты), используемый для изготовления пре-, про- и аутопробиотических препаратов и продуктов для человека и животных, лечебно-профилактическое средство на его основе и способ его получения (варианты)

Also Published As

Publication number Publication date
RU2015115871A (ru) 2016-11-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US7927584B2 (en) Lactic bacteria useful as probiotics
HU228050B1 (en) Strain of bacteria of the species lactobacillus paracasei subsp. paracasei, composition thereof for use in food and product containing said strain
CN101171019A (zh) 免疫功能调节剂
JP2005529960A (ja) プロバイオティクス、プロピオニバクテリウム・イエンセニー７０２
KR102052056B1 (ko) 항균 활성을 나타내는 락토바실러스 플란타룸 균주 및 이의 용도
CN103409334B (zh) 抑制阴道炎病原菌之乳酸杆菌及其用途
Araújo et al. Probiotics in dairy fermented products
KR20180070485A (ko) 안정성이 증진된 유산균 및 이의 제조방법
RU2303058C2 (ru) Средство для лечения кишечных инфекций, осложненных дисбактериозом "биобаланс-к"
TW201902499A (zh) 用於類鐸受體２活性化之組成物
Lokhande et al. A systematic study of probiotics-an update review
Pato et al. Antibiotic resistance and antibacterial activity of dadih originated Lactobacillus casei subsp. casei R-68 against food borne pathogens
Soares et al. Sporeforming probiotic bacteria: Characteristics, health benefits, and technological aspects for their applications in foods and beverages
KR102052047B1 (ko) 항균 활성을 나타내는 페디오코커스 펜토사세우스 균주 및 이의 용도
RU2605626C2 (ru) Способ получения бактериального препарата с пробиотической активностью
CN116077415B (zh) 一种用于调节皮肤微生态平衡的三元益生因子组合物
JPH07265064A (ja) 腸内細菌叢改善組成物
Wadoum et al. In vitro antimicrobial characterization of Lactobacillus Isolates towards their use as probiotic alternatives to antibiotic growth promoters
JPH0515366A (ja) 乳酸菌およびビフイズス菌の増殖促進剤
RU2273662C2 (ru) Консорциум микроорганизмов пробиотического действия
EP2076139A1 (en) Probiotic strain lactobacillus delbrueckii subsp . bulgaricus
CN107083342A (zh) 一种益生菌共生体、培养方法及应用
KR102004204B1 (ko) 안정성이 증진된 유산균 및 이의 제조방법
Shweta et al. In vitro studies on anti-inflammatory, antioxidant and antihyperglycemic activities of potential probiotic Pediococcus acidilactici NCDC 252
AU2021106840A4 (en) Utilization of Lactobacillus rhamnosus ARJD granules for anti-colon cancer and against different bowel disorders

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20170429

NF4A Reinstatement of patent

Effective date: 20190320