CN116077415B - 一种用于调节皮肤微生态平衡的三元益生因子组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明属于化妆品技术领域，具体涉及一种用于调节皮肤微生态平衡的三元益生因子组合物及其制备方法和用途。所述三元益生因子包含益生元、益生素和后生元。所述三元益生因子组合物以益生菌为原料，以益生元作为益生菌的营养来源通过生物发酵技术制备而成。本发明还涉及三元益生因子组合物在制备用于调节皮肤微生态平衡的化妆品中的用途。所述化妆品具有净化、舒缓、调理、修复和抗敏的功效，所述化妆品用于皮肤日常护理、敏感肌护理、痤疮皮肤护理、除臭护理、婴幼儿皮肤护理或头皮护理。

Description

一种用于调节皮肤微生态平衡的三元益生因子组合物
技术领域
本发明属于化妆品技术领域，具体涉及一种用于调节皮肤微生态平衡的三元益生因子组合物及其制备方法和用途。
背景技术
近年来，越来越多的人认识到人体菌群的重要性。人体的体表皮肤和与外界相通的口腔、上呼吸道、肠道、泌尿生殖道等粘膜及其腔道寄居着不同种类和数量的微生物，寄生物在正常情况下与宿主相安无事、互相适应，而且各种微生物之间也相互制约而保持一个彼此共存的状态。人体的消化道、上呼吸道、皮肤、尿道、外生殖器、眼结膜与外耳道，都存在微生态菌群。
皮肤是人体最大的器官，被数十亿种微生物(细菌、酵母、真菌、病毒等)定殖，这些微生物统称为“皮肤微生物群”。在这些微生物菌群中可以分成常居菌群和暂居菌群。常居菌群由共生细菌组成，即由于寄主而存活，而不会造成任何损害。暂居菌群主要由无害的真菌、病毒和细菌组成，被称为腐生菌。该菌群不是永久的，具体取决于所进行的活动和周围条件的变化以及个体在这些条件下的暴露程度。这些微生物是生命必不可少的。在正常情况下，即当卫生状况良好时且当皮肤的常居菌群、免疫应答和屏障功能完好无损时，常居微生物和暂居微生物不会引起疾病或功能障碍。皮肤微生物群因此能够充当屏障并保护其宿主。当皮肤微生物群失衡后，肌底屏障功能会遭到破坏，丧失，导致有害菌的生长，使皮肤易出现出油、长痘、粉刺等疾病。
但是，目前流行的护肤品和化妆品的使用会破坏皮肤微生物群的平衡。如粉底的应用会特别通过干扰细菌多样性来干扰皮肤微生物群的平衡。护肤品在皮肤上的隐形化妆膜可以暂时改变皮肤的水脂平衡和产生脱皮，会破坏皮肤微生物群的平衡。
此前，益生菌制剂是常见的用于感染性肠炎、或有外来细菌式侵袭导致肠内菌群失衡的治疗方法。据Transparency Market Research研究显示，美国的益生菌、益生元和其他消化酸类产品市场达到了$68.8billion，在2022年甚至能达到$83.5billion。另外，将益生菌制剂直接用于皮肤，以改善皮肤微生物群的概念已经提出了很长时间，但是已成功在市场上销售且非常有效的相关产品还比较少见。
因此，有必要开发一种促进微生生态平衡的包含益生菌复合物，以促进皮肤微生物群的平衡的尽快恢复，促进肌底屏障功能的尽快恢复。
本发明人以“世界长寿之乡·中国人瑞圣地”巴马瑶族自治县筛选出的多种益生菌为基础，融合现代生物发酵技术，以益生元作为益生菌的营养来源，共同促进皮肤有益菌群的增殖，改善并维持皮肤的健康，以平衡为主，调节为辅，助力构建健康皮肤微生态防护墙，成功开发出了一种用于调节皮肤微生态平衡的三元益生因子组合物。
发明内容
本发明克服了现有技术的不足，提供了一种用于调节皮肤微生态平衡的三元益生因子组合物及其制备方法和用途。本发明所述三元益生因子组合物具有较强的保湿作用，促进皮肤的水脂平衡，修复皮肤微生物群的平衡，促进肌底屏障功能的尽快恢复，避免皮肤疾病的出现，能够快速缓解肌肤问题，保护皮肤。
具体地，通过以下几个方面的技术方案实现了本发明：
在第一个方面中，本发明提供了一种用于调节皮肤微生态平衡的三元益生因子组合物，所述三元益生因子包含益生元、益生素和后生元。
作为可选的方式，在上述三元益生因子组合物中，所述益生元包含以下一种或多种：乳糖、蔗糖、低聚果糖、低聚半乳糖或低聚麦芽糖；所述益生素包含以下一种或多种：乳酸、乙酸、短链脂肪酸、γ-氨基丁酸、维生素、细菌素(例如，双歧杆菌素、嗜酸菌素等)或者多肽分子；所述后生元包含以下一种或多种：细胞壁碎片成分、乳胞外多糖或肽聚糖。
作为可选的方式，在上述三元益生因子组合物中，所述三元益生因子组合物以益生菌为原料，以益生元作为益生菌的营养来源通过生物发酵技术制备而成。
作为可选的方式，在上述三元益生因子组合物中，所述益生菌选自以下一种或多种：嗜酸乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌或乳双岐杆菌；所述益生元选自以下一种或多种：乳糖、蔗糖、低聚果糖、低聚半乳糖或低聚麦芽糖。
作为可选的方式，在上述三元益生因子组合物中，所有益生菌由以下益生菌组成：嗜酸乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌和乳双岐杆菌。
优选地，所述益生元选自低聚果糖和低聚半乳糖。
更优选地，低聚果糖和低聚半乳糖的重量比为1：1。
作为可选的方式，在上述三元益生因子组合物中，所述嗜酸乳杆菌分离自广西巴马县健康成年男性，所述鼠李糖乳杆菌分离自广西巴马县对无血糖家族史的青壮年，所述干酪乳杆菌分离自广西巴马县无家族遗传病史的哺乳期婴儿，所述植物乳杆菌分离自广西巴马县糯米发酵食品，所述乳双岐杆菌分离自新疆伊犁州牧民自制发酵酸奶。
作为可选的方式，在上述三元益生因子组合物中，所述益生菌的供应商是山东中科嘉亿生物工程有限公司。
所述植物乳酸杆菌是植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)JYLP-326，菌种保藏编号CGMCC NO.18038，保藏日期：2019年6月27日，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏单位的地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，参见CN110791451A；
所述鼠李糖乳杆菌是鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)JYLR-005，菌种保藏编号CGMCC NO.16103，保藏日期：2018年7月12日，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏单位的地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，参见CN109055278A。
所述干酪乳杆菌是干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)21，菌种保藏编号CGMCCNO.21373，保藏日期：2020年12月14日，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏单位的地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，参见CN2625983A。
所述乳双歧杆菌是乳双歧杆菌(Bifidobacterium lactis)JYBR-390，菌种保藏编号CGMCC NO.18093，保藏日期：2019年7月8日，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏单位的地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，参见CN113969253A。
所述嗜酸乳杆菌是嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)JYLA-191，菌种保藏编号CGMCC NO.21371，保藏日期：2020年12月14日，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏单位的地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，参见CN112592874A。
作为可选的方式，在上述三元益生因子组合物中，所有益生菌由以下益生菌组成：嗜酸乳杆菌JYLA-191、鼠李糖乳杆菌JYLR-005、干酪乳杆菌21、植物乳杆菌JYLP-326和乳双岐杆菌JYBR-390。
作为可选的方式，在上述三元益生因子组合物中，所述三元益生因子组合物的制备方法包括以下步骤：
(1)复苏嗜酸乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌和乳双岐杆菌；
(2)配制MRS培养基进行种子液培养18-22h；
(3)按照1：10比例将步骤(2)制备得到的种子培养液接种至发酵罐，进行乳酸菌高密度培养20-24h；
(4)离心过滤，取菌体；
(5)配制益生元培养液，按照以重量百分比计3-8％加入菌体，进行培养20-24h；
(6)70℃灭活菌体；
(7)加入酶将步骤(6)制备得到的菌体酶解溶胞；
(8)离心过滤，去除不溶物质；
(9)浓缩至合适浓度；
(10)复配多元醇、防腐剂，获得所述三元益生因子组合物。优选地，所述三元益生因子组合物的制备方法包括以下步骤：
(1)复苏嗜酸乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌和乳双岐杆菌，上述五种益生菌的重量比为1：1：1：1：1；
(2)配制MRS培养基进行种子液培养18-22h；
(3)按照1：10比例将步骤(2)制备得到的种子培养液接种至发酵罐，进行乳酸菌高密度培养20-24h；
(4)4000rpm离心5min，离心过滤，取菌体；
(5)配制益生元培养液，按照以重量百分比计3-8％加入菌体，进行培养20-24h，所述益生元培养液中以重量百分比计含1％低聚果糖和1％低聚半乳糖，所述益生元培养液的溶剂是水；
(6)70℃灭活菌体；
(7)加入溶菌酶将步骤(6)制备得到的菌体酶解溶胞；
(8)4000rpm离心5min，离心过滤，去除不溶物质；
(9)浓缩至以重量百分比计总糖>5％；
(10)复配适量甘油、1,2-己二醇和对羟基苯乙酮，获得所述三元益生因子组合物。
在第二个方面中，本发明提供了上述第一个方面所述的三元益生因子组合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)复苏嗜酸乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌和乳双岐杆菌；
(2)配制MRS培养基进行种子液培养18-22h；
(3)按照1：10比例将步骤(2)制备得到的种子培养液接种至发酵罐，进行乳酸菌高密度培养20-24h；
(4)离心过滤，取菌体；
(5)配制益生元培养液，按照以重量百分比计3-8％加入菌体，进行培养20-24h；
(6)70℃灭活菌体；
(7)加入酶将步骤(6)制备得到的菌体酶解溶胞；
(8)离心过滤，去除不溶物质；
(9)浓缩至合适浓度；
(10)复配多元醇、防腐剂，获得所述三元益生因子组合物。优选地，所述三元益生因子组合物的制备方法包括以下步骤：
(1)复苏嗜酸乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌和乳双岐杆菌，上述五种益生菌菌的重量比为1：1：1：1：1；
(2)配制MRS培养基进行种子液培养18-22h；
(3)按照1：10比例将步骤(2)制备得到的种子培养液接种至发酵罐，进行乳酸菌高密度培养20-24h；
(4)4000rpm离心5min，离心过滤，取菌体；
(5)配制益生元培养液，按照以重量百分比计3-8％加入菌体，进行培养20-24h，所述益生元培养液中以重量百分比计含1％低聚果糖和1％低聚半乳糖，所述益生元培养液的溶剂是水；
(6)70℃灭活菌体；
(7)加入溶菌酶将步骤(6)制备得到的菌体酶解溶胞；
(8)4000rpm离心5min，离心过滤，去除不溶物质；
(9)浓缩至以重量百分比计总糖>5％；
(10)复配适量甘油、1,2-己二醇和对羟基苯乙酮，获得所述三元益生因子组合物。
在第三个方面中，本发明提供了上述第一个方面所述的三元益生因子组合物或者采用上述第二个方面所述的制备方法制备得到的三元益生因子组合物在制备用于调节皮肤微生态平衡的化妆品中的用途。
作为可选的方式，在上述用途中，所述化妆品具有净化、舒缓、调理、修复和抗敏的功效。
优选地，所述净化功效为维持皮肤微生态平衡；所述舒缓功效为舒缓过敏反应；所述调理功效为促进表皮葡萄球菌增殖和抑制有害菌(例如，铜绿假单胞菌和痤疮丙酸杆菌)定植；所述修复功效为修护皮肤受损屏障。
作为可选的方式，在上述用途中，所述化妆品用于皮肤日常护理、敏感肌护理、痤疮皮肤护理、除臭护理、婴幼儿皮肤护理或头皮护理。
作为可选的方式，在上述用途中，所述化妆品是爽肤水、乳液、精华、面霜或面膜。
作为可选的方式，在上述用途中，以重量百分比计，所述三元益生因子组合物在所述化妆品中的用量为1％-10％。
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一赘述。
本发明相对于现有技术，具有以下有益效果：
(1)本发明人以“世界长寿之乡·中国人瑞圣地”巴马瑶族自治县筛选出的多种益生菌为基础，融合现代生物发酵技术，以益生元作为益生菌的营养来源，共同促进皮肤有益菌群的增殖，改善并维持皮肤的健康，以平衡为主，调节为辅，助力构建健康皮肤微生态防护墙，成功开发出了一种用于调节皮肤微生态平衡的三元益生因子组合物。
(2)本发明所述三元益生因子组合物具有较强的保湿作用，促进皮肤的水脂平衡，修复皮肤微生物群的平衡，促进肌底屏障功能的尽快恢复，避免皮肤疾病的出现，能够快速缓解肌肤问题，保护皮肤。
(3)本发明所述三元益生因子组合物长期使用不会产生耐药性，无任何副作用，十分安全可靠。
附图说明：
图1：表皮葡萄球菌增殖实验流程示意图。
图2：效果实施例4中组胺致敏反应后的实验区域测试结果。
图3：效果实施例4中样品组本发明三元益生因子组合物(实施例1)舒缓1h后的实验区域测试结果。
具体实施方式
下面参照具体的实施例对本发明做进一步说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用于解释本发明，并不用于限定本发明的范围。
实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道购买得到的常规产品。
下面实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为市售产品。
制备实施例：
实施例1：
一种用于调节皮肤微生态平衡的三元益生因子组合物，所述三元益生因子组合物以益生菌为原料，以益生元作为益生菌的营养来源通过生物发酵技术制备而成，所述三元益生因子组合物的制备方法包括以下步骤：
(1)复苏嗜酸乳杆菌JYLA-191、鼠李糖乳杆菌JYLR-005、干酪乳杆菌21、植物乳杆菌JYLP-326和乳双岐杆菌JYBR-390，上述五种益生菌的重量比为1：1：1：1：1；
(2)配制MRS培养基进行种子液培养20h；
(3)按照1：10比例将步骤(2)制备得到的种子培养液接种至发酵罐，进行乳酸菌高密度培养24h；
(4)4000rpm离心5min，离心过滤，取菌体；
(5)配制益生元培养液，按照以重量百分比计5％加入菌体，进行培养24h，所述益生元培养液中以重量百分比计含1％低聚果糖和1％低聚半乳糖，所述益生元培养液的溶剂是水；
(6)70℃灭活菌体；
(7)加入溶菌酶将步骤(6)制备得到的菌体酶解溶胞；
(8)4000rpm离心5min，离心过滤，去除不溶物质；
(9)浓缩至以重量百分比计总糖>5％；
(10)复配适量甘油、1,2-己二醇和对羟基苯乙酮，获得所述三元益生因子组合物。
对比例1：
一种益生因子组合物，所述益生因子组合物以益生菌为原料，以益生元作为益生菌的营养来源通过生物发酵技术制备而成，所述益生因子组合物的制备方法包括以下步骤：
(1)复苏嗜酸乳杆菌JYLA-191、鼠李糖乳杆菌JYLR-005和干酪乳杆菌21，上述三种益生菌的重量比为2：2：1；
(2)配制MRS培养基进行种子液培养20h；
(3)按照1：10比例将步骤(2)制备得到的种子培养液接种至发酵罐，进行乳酸菌高密度培养24h；
(4)4000rpm离心5min，离心过滤，取菌体；
(5)配制益生元培养液，按照以重量百分比计5％加入菌体，进行培养24h，所述益生元培养液中以重量百分比计含1％低聚果糖和1％低聚半乳糖，所述益生元培养液的溶剂是水；
(6)70℃灭活菌体；
(7)加入溶菌酶将步骤(6)制备得到的菌体酶解溶胞；
(8)4000rpm离心5min，离心过滤，去除不溶物质；
(9)浓缩至以重量百分比计总糖>5％；
(10)复配适量甘油、1,2-己二醇和对羟基苯乙酮，获得所述三元益生因子组合物。
对比例2：
一种益生因子组合物，所述益生因子组合物以益生菌为原料，以益生元作为益生菌的营养来源通过生物发酵技术制备而成，所述益生因子组合物的制备方法包括以下步骤：
(1)复苏嗜酸乳杆菌(ATCC4356)、鼠李糖乳杆菌(ATCC53103)、干酪乳杆菌(ATCC393)、植物乳杆菌(ATCC8014)和乳双岐杆菌(TACC29521)，上述五种益生菌的重量比为1：1：1：1：1；
(2)配制MRS培养基进行种子液培养20h；
(3)按照1：10比例将步骤(2)制备得到的种子培养液接种至发酵罐，进行乳酸菌高密度培养24h；
(4)4000rpm离心5min，离心过滤，取菌体；
(5)配制益生元培养液，按照以重量百分比计5％加入菌体，进行培养24h，所述益生元培养液中以重量百分比计含1％低聚果糖和1％低聚半乳糖，所述益生元培养液的溶剂是水；
(6)70℃灭活菌体；
(7)加入溶菌酶将步骤(6)制备得到的菌体酶解溶胞；
(8)4000rpm离心5min，离心过滤，去除不溶物质；
(9)浓缩至以重量百分比计总糖>5％；
(10)复配适量甘油、1,2-己二醇和对羟基苯乙酮，获得所述三元益生因子组合物。
对比例3：
一种益生因子组合物，所述益生因子组合物以益生菌为原料，以益生元作为益生菌的营养来源通过生物发酵技术制备而成，所述益生因子组合物的制备方法包括以下步骤：
(1)复苏嗜酸乳杆菌JYLA-191、鼠李糖乳杆菌JYLR-005、干酪乳杆菌21、植物乳杆菌JYLP-326和乳双岐杆菌JYBR-390，上述五种益生菌的重量比为1：1：1：1：1；
(2)配制MRS培养基进行种子液培养20h；
(3)按照1：10比例将步骤(2)制备得到的种子培养液接种至发酵罐，进行乳酸菌高密度培养24h；
(4)4000rpm离心5min，离心过滤，取菌体；
(5)配制益生元培养液，按照以重量百分比计5％加入菌体，进行培养24h，所述益生元培养液中以重量百分比计含2％低聚麦芽糖，所述益生元培养液的溶剂是水；
(6)70℃灭活菌体；
(7)加入溶菌酶将步骤(6)制备得到的菌体酶解溶胞；
(8)4000rpm离心5min，离心过滤，去除不溶物质；
(9)浓缩至以重量百分比计总糖>5％；
(10)复配适量甘油、1,2-己二醇和对羟基苯乙酮，获得所述三元益生因子组合物。
对比例4：
一种益生因子组合物，所述益生因子组合物以益生菌为原料，以益生元作为益生菌的营养来源通过生物发酵技术制备而成，所述益生因子组合物的制备方法包括以下步骤：
(1)复苏嗜酸乳杆菌JYLA-191、鼠李糖乳杆菌JYLR-005、干酪乳杆菌21、植物乳杆菌JYLP-326和乳双岐杆菌JYBR-390，上述五种益生菌的重量比为1：1：1：1：1；
(2)配制MRS培养基进行种子液培养20h；
(3)按照1：10比例将步骤(2)制备得到的种子培养液接种至发酵罐，进行乳酸菌高密度培养24h；
(4)4000rpm离心5min，离心过滤，取菌体；
(5)配制MRS培养液，按照以重量百分比计5％加入菌体，进行培养24h；
(6)70℃灭活菌体；
(7)加入溶菌酶酶将步骤(6)制备得到的菌体酶解溶胞；
(8)4000rpm离心5min，离心过滤，去除不溶物质；
(9)浓缩至以重量百分比计总糖>5％；
(10)复配适量甘油、1,2-己二醇和对羟基苯乙酮，获得所述三元益生因子组合物。
效果实施例：
效果实施例1：本发明三元益生因子组合物对表皮葡萄球菌增殖情况的影响
表皮葡萄球菌能抑制金黄色葡萄球菌的辅助基因调节因子(SA agr)活性，降低金黄色葡萄球菌在皮肤表面定殖。表皮葡萄球菌可产生较广谱的细菌素，对葡萄球菌属外的其他菌丛如棒状杆菌、链球菌、肺炎链球菌、奈瑟氏菌属甚至芽胞杆菌和梭菌都有杀菌作用，从而抑制有害菌的滋生，保护宿主皮肤及其健康。表皮葡萄球菌还可减轻感染后炎症、促进抗菌肽(AMP)表达和促进调节性T细胞活性，抑制常规CD4+T细胞发育。表皮葡萄球菌细胞壁成分通过结合TLR2减轻炎症，限制组织损伤并促进伤口愈合。
1.菌悬液的制备
取一支表皮葡萄球菌(购自海博生物技术有限公司，CMCC26069)斜面菌株，用3mLPBS少量多次冲洗斜面菌苔于100mL试剂瓶中，取适量洗出来的菌液到9mL PBS中，用麦氏比浊管调整为0.5个麦氏单位，其菌悬液浓度大致为1×105-9×105cfu/g。(要求浓度为：取0.1mL滴于5.0mL对照样液(PBS)内，回收菌数为1×104-9×104cfu/mL)
2.操作步骤
(1)将试验样品用无菌标准硬水稀释至规定的浓度(1:10)；
(2)吸取试验菌悬液0.1mL加入到含5mL稀释后样品的试管中(①)，迅速混匀，并立即计时；
(3)作用20min后，取试验菌与样品混合液1mL，加入到含9mL经灭菌的PBS试管中(②)，充分混匀；再吸取上述样液1mL到含9mL经灭菌的PBS试管中(③)，充分摇匀；
(4)吸取比浊后的菌悬液1mL到含9mL经灭菌的PBS试管中(107)，依次稀释成106、105、104、103；
(5)吸取上述样液稀释液①②③；比浊稀释液103、104、105各1mL，置于灭菌平皿内，每个样液或稀释液接种三个灭菌平皿。用凉至40℃-45℃的营养琼脂基础培养基15mL作倾注，转动平皿，使其充分均匀，琼脂凝固后翻转平皿，37℃培养1-2天后，做活菌菌落计数；
(6)实验重复3次，求其平均值；
另外：培养1个(1:10)样液、1个PBS溶液、1个标准硬水溶液，作为参考。
3.计算公式
增殖率(％)按以下公式计算。
增殖率％＝(A-B)/A*100
式中：
A┈┈试验样品平均菌落数；
B┈┈对照样品平均菌落数
4.实验结果
本发明三元益生因子组合物对表皮葡萄球菌增殖情况的影响实验结果如表1所示。
表1：本发明三元益生因子组合物对表皮葡萄球菌增殖情况的影响
组别 增殖率(％)
实施例1 41.18
对比例1 35.27
对比例2 24.18
对比例3 30.51
对比例4 20.36
实验结果表明，与对比例组相比，实施例组能够显著促进表皮葡萄球菌的增殖。此外，从对比例1-2组的实验结果可以看出，益生菌的种类和配比对本发明三元益生因子组合物促进表皮葡萄球菌的效果具有显著影响。另外，从对比例3-4组的实验结果可以看出，作为益生菌的营养来源的益生元的种类以及是否以益生元作为培养液进行生物发酵的步骤对于本发明三元益生因子组合物促进表皮葡萄球菌的效果也具有非常显著的影响。
效果实施例2：本发明三元益生因子组合物对透明质酸酶活性的影响
细胞间基质中透明质酸(HA)在维持皮肤水分和弹性、创伤愈合和血管形成、过敏反应等过程中起主要的作用。抑制透明质酸酶的活性可使透明质酸不被分解，维持正常的生理功能，有助于舒缓过敏反应、修复皮肤损伤、延缓皮肤衰老。
透明质酸酶(Hyaluronidase,HAase)可降解透明质酸，研究表明透明质酸酶与炎症、过敏有强相关性，当肌肤存在内热症状，如炎症时，会伴随透明质酸酶活性的升高。抗敏实验采用透明质酸酶体外抑制实验检测受试液抑制透明质酸酶活性效果，以验证本发明抗过敏、抗刺激性效果。实验测试采用10.0％浓度的待测物进行测试。其结果如表2所示。
表2：本发明三元益生因子组合物对透明质酸酶活性的影响
组别 透明质酸酶抑制率(％)
实施例1 91.36
对比例1 83.92
对比例2 60.45
对比例3 71.15
对比例4 54.83
实验结果表明，与对比例组相比，实施例组对透明质酸具有显著更强的抑制作用。此外，从对比例1-2组的实验结果可以看出，益生菌的种类和配比对本发明三元益生因子组合物抑制透明质酸酶的效果具有显著影响。另外，从对比例3-4组的实验结果可以看出，作为益生菌的营养来源的益生元的种类以及是否以益生元作为培养液进行生物发酵的步骤对于本发明三元益生因子组合物抑制透明质酸酶的效果也具有非常显著的影响。
效果实施例3：本发明三元益生因子组合物对皮肤保湿度影响的测试
使用皮肤水份测试仪Corneometer CM 825(Courage Khazaka公司，德国)测试24名志愿者(每组4名)的皮肤保水度。在受试者左、右前臂屈侧标记4cm×4cm的试验区域，分别涂抹各样品。涂抹量为3.0mg/cm2，轻轻按摩至样品吸收。使用皮肤水分测定仪测定涂抹前及涂抹后4小时的皮肤水分含量，按照下式计算皮肤含水量增加率，将使用各样品的志愿者的皮肤含水量增加率取平均值，即为该样品的平均皮肤含水量增加率。
皮肤含水量增加率(％)＝(涂抹后测定值-涂抹前基础值)/涂抹前基础值x100％
实验采用添加以重量百分比计5％待测物(实施例1以及对比例1-4)和95％常规面霜基质的面霜进行，并且设置面霜基质对照组。实验结果如表3所示。
表3：本发明三元益生因子组合物对皮肤保湿度的影响
组别 皮肤含水量增加率(％)
实施例1 49.21
对比例1 40.57
对比例2 20.14
对比例3 34.15
对比例4 15.98
面霜基质 8.02
从表3中的数据可以看出，单独使用用于制备面霜的常规化妆品基础成分的皮肤保湿效果较差，4小时时，面霜基质组志愿者的平均皮肤含水量增加率仅为80.2％。
实验结果表明，与对比例组相比，实施例组能够显著增加受试者的皮肤含水量。此外，从对比例1-2组的实验结果可以看出，益生菌的种类和配比对本发明三元益生因子组合物增加志愿者皮肤含水量的效果具有显著影响。另外，从对比例3-4组的实验结果可以看出，作为益生菌的营养来源的益生元的种类以及是否以益生元作为培养液进行生物发酵的步骤对于本发明三元益生因子组合物增加志愿者皮肤含水量的效果也具有非常显著的影响。
效果实施例4：本发明三元益生因子组合物对组胺刺激的舒缓作用1.检测仪器：
皮肤敏感度测试仪Tivi700。
2.实验方法：
(1)使用5％盐酸组胺溶液刺激志愿者手臂内侧(标识区域：3*3cm)，志愿者出现红肿痒的过敏反应，记录。
(2)在标识区域划分样品组与空白组，在样品组涂抹20μL 5％本发明三元益生因子组合物(实施例1)；空白组涂抹20μL去离子水，1h后记录。
3.实验结果：
实验结果如表4，以及图2和图3所示。实验结果表明，与空白组对比，样品组的Tivi值明显下降，具有显著性差异，说明5％本发明三元益生因子组合物(实施例1)具有皮肤舒缓功效。
表4：本发明三元益生因子组合物对皮肤Tivi值的影响
对照组 样品组
ROI1(0min) 78.03 82.2
ROI1(60min) 84.82 71.45
变化值 -8.70％ 15.05％
ROI2(0min) 63.07 62.61
ROI2(60min) 55.82 53.83
变化值 11.49％ 14.02％
ROI3(0min) 71.73 89.63
ROI3(60min) 63.6 61.31
变化值 11.33％ 31.06％
综上所述，本发明所述三元益生因子组合物具有较强的保湿作用，促进皮肤的水脂平衡，修复皮肤微生物群的平衡，促进肌底屏障功能的尽快恢复，避免皮肤疾病的出现，能够快速缓解肌肤问题，保护皮肤。
显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。

Claims (5)

1.一种用于调节皮肤微生态平衡的三元益生因子组合物，其特征在于：所述三元益生因子组合物以益生菌为原料，以益生元作为益生菌的营养来源通过生物发酵技术制备而成，所述三元益生因子组合物的制备方法包括以下步骤：
（1）复苏嗜酸乳杆菌JYLA-191、鼠李糖乳杆菌JYLR-005、干酪乳杆菌21、植物乳杆菌JYLP-326和乳双岐杆菌JYBR-390，上述五种益生菌的重量比为1：1：1：1：1，所述嗜酸乳杆菌JYLA-191菌种保藏编号CGMCC NO. 21371，所述鼠李糖乳杆菌JYLR-005菌种保藏编号CGMCCNO. 16103，所述干酪乳杆菌21菌种保藏编号CGMCC NO. 21373，所述植物乳杆菌JYLP-326菌种保藏编号CGMCC NO. 18038，所述乳双岐杆菌JYBR-390菌种保藏编号CGMCC NO.18093；
（2）配制MRS培养基进行种子液培养20 h；
（3）按照1：10比例将步骤（2）制备得到的种子培养液接种至发酵罐，进行乳酸菌高密度培养24 h；
（4）4000 rpm离心5 min，离心过滤，取菌体；
（5）配制益生元培养液，按照以重量百分比计5%加入菌体，进行培养24 h，所述益生元培养液中以重量百分比计含1%低聚果糖和1%低聚半乳糖，所述益生元培养液的溶剂是水；
（6）70℃灭活菌体；
（7）加入溶菌酶将步骤（6）制备得到的菌体酶解溶胞；
（8）4000 rpm离心5 min，离心过滤，去除不溶物质；
（9）浓缩至以重量百分比计总糖>5%；
（10）复配适量甘油、1,2-己二醇和对羟基苯乙酮，获得所述三元益生因子组合物。
2.权利要求1所述的三元益生因子组合物的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
（1）复苏嗜酸乳杆菌JYLA-191、鼠李糖乳杆菌JYLR-005、干酪乳杆菌21、植物乳杆菌JYLP-326和乳双岐杆菌JYBR-390，上述五种益生菌的重量比为1：1：1：1：1；
（2）配制MRS培养基进行种子液培养20 h；
（3）按照1：10比例将步骤（2）制备得到的种子培养液接种至发酵罐，进行乳酸菌高密度培养24 h；
（4）4000 rpm离心5 min，离心过滤，取菌体；
（5）配制益生元培养液，按照以重量百分比计5%加入菌体，进行培养24 h，所述益生元培养液中以重量百分比计含1%低聚果糖和1%低聚半乳糖，所述益生元培养液的溶剂是水；
（6）70℃灭活菌体；
（7）加入溶菌酶将步骤（6）制备得到的菌体酶解溶胞；
（8）4000 rpm离心5 min，离心过滤，去除不溶物质；
（9）浓缩至以重量百分比计总糖>5%；
（10）复配适量甘油、1,2-己二醇和对羟基苯乙酮，获得所述三元益生因子组合物。
3.权利要求1所述的三元益生因子组合物或者采用权利要求2所述的制备方法制备得到的三元益生因子组合物在制备用于调节皮肤微生态平衡的化妆品中的用途。
4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于：所述化妆品具有净化、舒缓、调理、修复和抗敏的功效，所述化妆品用于皮肤日常护理、敏感肌护理、痤疮皮肤护理、除臭护理、婴幼儿皮肤护理或头皮护理。
5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于：所述化妆品是爽肤水、乳液、精华、面霜或面膜，以重量百分比计，所述三元益生因子组合物在所述化妆品中的用量为1%-10%。
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