JPH08182657A - 凝集試験用プレート及びその製造方法 - Google Patents
凝集試験用プレート及びその製造方法Info
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- JPH08182657A JPH08182657A JP6328789A JP32878994A JPH08182657A JP H08182657 A JPH08182657 A JP H08182657A JP 6328789 A JP6328789 A JP 6328789A JP 32878994 A JP32878994 A JP 32878994A JP H08182657 A JPH08182657 A JP H08182657A
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Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54366—Apparatus specially adapted for solid-phase testing
Abstract
(57)【要約】
【目的】 凝集像と非凝集像とを明確に判定でき、感度
が良好な凝集試験用プレート及びその製造方法を提供す
ること。 【構成】 複数の穴を有するプレートの各穴の表面にプ
ロテインＡ及び／又はプロテインＧを付着させたことを
特徴とする凝集試験用プレート及び複数の穴を有するプ
レートの各穴にプロテインＡ及び／又はプロテインＧ含
有溶液を入れ、その溶液を捨てた後、プレートを乾燥さ
せることを特徴とする凝集試験用プレートの製造方法。
が良好な凝集試験用プレート及びその製造方法を提供す
ること。 【構成】 複数の穴を有するプレートの各穴の表面にプ
ロテインＡ及び／又はプロテインＧを付着させたことを
特徴とする凝集試験用プレート及び複数の穴を有するプ
レートの各穴にプロテインＡ及び／又はプロテインＧ含
有溶液を入れ、その溶液を捨てた後、プレートを乾燥さ
せることを特徴とする凝集試験用プレートの製造方法。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、抗原抗体反応に基づく
凝集反応によって診断を行う際に使用する凝集試験用プ
レート及びその製造方法に関する。
凝集反応によって診断を行う際に使用する凝集試験用プ
レート及びその製造方法に関する。
【０００２】
【従来技術及びその問題点】検体（血清、体液など）に
含まれている特定の抗体量を測定する方法として、抗原
を固定したゼラチン、カオリン、合成ポリマーなどの凝
集性複合体粒子を用いた凝集反応法が従来から使用され
ている。このような凝集反応の判定には複数の穴を有す
るプレートが使用され、検体の希釈列が作製される。判
定は、凝集反応が起こると（陽性）、穴の壁に凝集物が
一様に広がったマット状の凝集像が形成されるが、凝集
が起こらない場合（陰性）、凝集物は穴の壁をすべり落
ちて穴の底に円形ボタン状に集合することで行われる。
しかしながら、陽性・陰性の判定が明確でない像（中間
的な像）が生じたり、プレートの穴の形状によって使用
できなかったり、感度が他の測定方法に比べて低いなど
の問題点がある。
含まれている特定の抗体量を測定する方法として、抗原
を固定したゼラチン、カオリン、合成ポリマーなどの凝
集性複合体粒子を用いた凝集反応法が従来から使用され
ている。このような凝集反応の判定には複数の穴を有す
るプレートが使用され、検体の希釈列が作製される。判
定は、凝集反応が起こると（陽性）、穴の壁に凝集物が
一様に広がったマット状の凝集像が形成されるが、凝集
が起こらない場合（陰性）、凝集物は穴の壁をすべり落
ちて穴の底に円形ボタン状に集合することで行われる。
しかしながら、陽性・陰性の判定が明確でない像（中間
的な像）が生じたり、プレートの穴の形状によって使用
できなかったり、感度が他の測定方法に比べて低いなど
の問題点がある。
【０００３】
【発明の目的】本発明は、凝集像と非凝集像とを明確に
判定でき、感度が良好な凝集試験用プレート及びその製
造方法を提供することを目的とする。
判定でき、感度が良好な凝集試験用プレート及びその製
造方法を提供することを目的とする。
【０００４】
【発明の概要】本発明は、プロテインＡ及び／又はプロ
テインＧをプレートの穴の表面に容易に付着させること
ができ、微量のプロテインＡ及び／又はプロテインＧを
付着させておくだけで、凝集反応の陽性・陰性の判定を
極めて鮮明に行い得る凝集像が得られることを見出し、
この知見に基づいて完成されたものである。
テインＧをプレートの穴の表面に容易に付着させること
ができ、微量のプロテインＡ及び／又はプロテインＧを
付着させておくだけで、凝集反応の陽性・陰性の判定を
極めて鮮明に行い得る凝集像が得られることを見出し、
この知見に基づいて完成されたものである。
【０００５】すなわち、本発明の凝集試験用プレート
は、複数の穴を有するプレートの各穴の表面にプロテイ
ンＡ及び／又はプロテインＧを付着させたことを特徴と
する。また、本発明の凝集試験用プレートの製造方法
は、複数の穴を有するプレートの各穴に少量のプロテイ
ンＡ及び／又はプロテインＧ含有溶液を入れ、その溶液
を捨てた後、プレートを乾燥させることを特徴とする。
は、複数の穴を有するプレートの各穴の表面にプロテイ
ンＡ及び／又はプロテインＧを付着させたことを特徴と
する。また、本発明の凝集試験用プレートの製造方法
は、複数の穴を有するプレートの各穴に少量のプロテイ
ンＡ及び／又はプロテインＧ含有溶液を入れ、その溶液
を捨てた後、プレートを乾燥させることを特徴とする。
【０００６】本発明において、プレートとしては特に制
限はなく、Ｕ型プレート、Ｖ型プレートなど、各種のも
のを使用することができる。また、その材質としては、
ポリスチレン、ポリプロピレン、ポリ塩化ビニルなどが
使用される。
限はなく、Ｕ型プレート、Ｖ型プレートなど、各種のも
のを使用することができる。また、その材質としては、
ポリスチレン、ポリプロピレン、ポリ塩化ビニルなどが
使用される。
【０００７】本発明の凝集試験用プレートは、穴の表面
にプロテインＡ及び／又はプロテインＧを付着させたも
のであるが、その付着量は微量でよく、各穴に少量のプ
ロテインＡ及び／又はプロテインＧ含有溶液を入れ、そ
の溶液を捨てたときに、穴の表面に付着して残留する量
で充分である。穴に入れるプロテインＡ及び／又はプロ
テインＧ含有溶液の量は、通常、Ｖ型プレートの場合、
穴のＶ形部分、Ｕ型プレートの場合、下部の湾曲部分を
満たす程度の量であればよく、さらに具体的には穴の容
量が０．３ｍｌである場合、プロテインＡ及び／又はプ
ロテインＧ含有溶液の注入量は０．０５ｍｌ程度で充分
である。
にプロテインＡ及び／又はプロテインＧを付着させたも
のであるが、その付着量は微量でよく、各穴に少量のプ
ロテインＡ及び／又はプロテインＧ含有溶液を入れ、そ
の溶液を捨てたときに、穴の表面に付着して残留する量
で充分である。穴に入れるプロテインＡ及び／又はプロ
テインＧ含有溶液の量は、通常、Ｖ型プレートの場合、
穴のＶ形部分、Ｕ型プレートの場合、下部の湾曲部分を
満たす程度の量であればよく、さらに具体的には穴の容
量が０．３ｍｌである場合、プロテインＡ及び／又はプ
ロテインＧ含有溶液の注入量は０．０５ｍｌ程度で充分
である。
【０００８】使用するプロテインＡ及び／又はプロテイ
ンＧ含有溶液は、水、生理的塩類溶液（ＰＢＳ他）、生
理食塩水などを溶媒とする溶液であり、その濃度には特
に制限はないが、プロテインＡ及び／又はプロテインＧ
を１．０×１０-6ｍｇ／ｍｌ以上の濃度で含むのが好ま
しく、１．０×１０-3〜１．０×１０-1ｍｇ／ｍｌの濃
度で含むのがより一層好ましい（上記濃度は、溶液がプ
ロテインＡ及びプロテインＧを含有する場合には、両者
の合計量の濃度である）。
ンＧ含有溶液は、水、生理的塩類溶液（ＰＢＳ他）、生
理食塩水などを溶媒とする溶液であり、その濃度には特
に制限はないが、プロテインＡ及び／又はプロテインＧ
を１．０×１０-6ｍｇ／ｍｌ以上の濃度で含むのが好ま
しく、１．０×１０-3〜１．０×１０-1ｍｇ／ｍｌの濃
度で含むのがより一層好ましい（上記濃度は、溶液がプ
ロテインＡ及びプロテインＧを含有する場合には、両者
の合計量の濃度である）。
【０００９】プレートの穴にプロテインＡ及び／又はプ
ロテインＧ含有溶液を入れ、一般には、数分以上そのま
ま静置してプロテインＡ及び／又はプロテインＧを穴の
表面に確実に付着させた後、その溶液を捨てるのが好ま
しいが、その静置時間はプロテインＡ及び／又はプロテ
インＧの濃度（それぞれの濃度あるいは両者の合計の濃
度）によって左右され、プロテインＡ及び／又はプロテ
インＧの濃度が高い（１．０×１０-3ｍｇ／ｍｌ以上）
場合には、ほとんど静置時間を設けなくてもよい。ま
た、プロテインＡ及び／又はプロテインＧ含有溶液をプ
レートの各穴に入れ、その溶液を捨てた後、水、生理的
塩類溶液、生理食塩水などで洗浄することにより、穴に
充分に固着せず、遊離しているプロテインＡ及び／又は
プロテインＧを除去した後、乾燥し、凝集試験用プレー
トとして使用するのが好ましい。
ロテインＧ含有溶液を入れ、一般には、数分以上そのま
ま静置してプロテインＡ及び／又はプロテインＧを穴の
表面に確実に付着させた後、その溶液を捨てるのが好ま
しいが、その静置時間はプロテインＡ及び／又はプロテ
インＧの濃度（それぞれの濃度あるいは両者の合計の濃
度）によって左右され、プロテインＡ及び／又はプロテ
インＧの濃度が高い（１．０×１０-3ｍｇ／ｍｌ以上）
場合には、ほとんど静置時間を設けなくてもよい。ま
た、プロテインＡ及び／又はプロテインＧ含有溶液をプ
レートの各穴に入れ、その溶液を捨てた後、水、生理的
塩類溶液、生理食塩水などで洗浄することにより、穴に
充分に固着せず、遊離しているプロテインＡ及び／又は
プロテインＧを除去した後、乾燥し、凝集試験用プレー
トとして使用するのが好ましい。
【００１０】本発明においては、上記のように、プレー
トの穴に入れたプロテインＡ及び／又はプロテインＧ含
有溶液を捨てた後、プレートを乾燥させる。乾燥は自然
乾燥でよいが、加温して水分の蒸発を促進することもで
きる。
トの穴に入れたプロテインＡ及び／又はプロテインＧ含
有溶液を捨てた後、プレートを乾燥させる。乾燥は自然
乾燥でよいが、加温して水分の蒸発を促進することもで
きる。
【００１１】こうして得られた凝集試験用プレートは、
各穴の表面に一様にプロテインＡ及び／又はプロテイン
Ｇが付着しており、室温で長期間保存しても安定であ
り、例えば、４〜２５℃で７日以上保管した後も効果に
変化はなかった。
各穴の表面に一様にプロテインＡ及び／又はプロテイン
Ｇが付着しており、室温で長期間保存しても安定であ
り、例えば、４〜２５℃で７日以上保管した後も効果に
変化はなかった。
【００１２】プロテインＡ及びプロテインＧは、ヒトの
免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）のＦｃフラグメントと特異
的に結合するため、本発明のプレートの穴に抗体を含む
検体を入れると、そのＦｃフラグメントと穴の表面に一
様に付着しているプロテインＡ及び／又はプロテインＧ
とが特異的に結合し、その後、注入される抗原と上記抗
体とが反応し、穴の壁にまで広がったマット状の凝集像
を形成する。このため、陽性・陰性の判定を明確に行う
ことが可能になる。
免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）のＦｃフラグメントと特異
的に結合するため、本発明のプレートの穴に抗体を含む
検体を入れると、そのＦｃフラグメントと穴の表面に一
様に付着しているプロテインＡ及び／又はプロテインＧ
とが特異的に結合し、その後、注入される抗原と上記抗
体とが反応し、穴の壁にまで広がったマット状の凝集像
を形成する。このため、陽性・陰性の判定を明確に行う
ことが可能になる。
【００１３】抗原としては、操作性、再現性などの点か
ら、抗原をセラミックス−ポリマー複合体、ラテック
ス、ゼラチン、カオリンなどに固定した凝集性複合体粒
子として使用するのが好ましい。抗原をセラミックス−
ポリマー複合体に固定した凝集性複合体粒子としては、
例えば、ポリマー粒子の表面がリン酸カルシウム系化合
物で被覆されており、前記ポリマー粒子が染色されてい
るか、又は全体が染色されている粒状ポリマー複合体に
抗原を吸着させ、固定化し、未吸着部位をブロッキング
剤で処理したもの（特願平５−２４９５０６号参照）な
どが挙げられる。この粒状ポリマー複合体としては、ポ
リマー粒子にリン酸カルシウム系化合物粒子を物理的に
衝突させることによりポリマー粒子表面をリン酸カルシ
ウム系化合物で被覆することによって製造されたものが
好ましい。
ら、抗原をセラミックス−ポリマー複合体、ラテック
ス、ゼラチン、カオリンなどに固定した凝集性複合体粒
子として使用するのが好ましい。抗原をセラミックス−
ポリマー複合体に固定した凝集性複合体粒子としては、
例えば、ポリマー粒子の表面がリン酸カルシウム系化合
物で被覆されており、前記ポリマー粒子が染色されてい
るか、又は全体が染色されている粒状ポリマー複合体に
抗原を吸着させ、固定化し、未吸着部位をブロッキング
剤で処理したもの（特願平５−２４９５０６号参照）な
どが挙げられる。この粒状ポリマー複合体としては、ポ
リマー粒子にリン酸カルシウム系化合物粒子を物理的に
衝突させることによりポリマー粒子表面をリン酸カルシ
ウム系化合物で被覆することによって製造されたものが
好ましい。
【００１４】
【発明の実施例】次に、実施例に基づいて本発明をさら
に詳述するが、本発明はこれによって制限されるもので
はない。
に詳述するが、本発明はこれによって制限されるもので
はない。
【００１５】参考例１（抗原固定凝集性複合体粒子の製
造） （１）粒状ポリマー複合体の製造 アントラキノン系分散染料である商品名 MITSUI ML Col
ors ML red VF-２（三井東圧染料（株）製）で染色した
平均粒径５μｍ、密度１．０３ｇ／ｃｍ3 のナイロンビ
ーズ５０ｇとＣａ／Ｐ比１．６７、平均粒径５μｍ、比
表面積４５ｍ2／ｇ、みかけ密度１．８ｇ／ｃｍ3 、細
孔径６００Åのハイドロキシアパタイト粒子７．５ｇを
奈良ハイブリダイゼーションシステムＮＨＳ−１（奈良
機械製作所製、定格動力５．５ｋｗ、定格電流２３Ａ）
に入れ、これを８０００回転／分で３２〜５０℃で５分
間稼動させて、ナイロンビーズ表面をハイドロキシアパ
タイトで被覆した。得られた複合体粒子は、平均粒径
５．８μｍ、密度１．１３ｇ／ｃｍ3 、細孔径６００Å
であった。
造） （１）粒状ポリマー複合体の製造 アントラキノン系分散染料である商品名 MITSUI ML Col
ors ML red VF-２（三井東圧染料（株）製）で染色した
平均粒径５μｍ、密度１．０３ｇ／ｃｍ3 のナイロンビ
ーズ５０ｇとＣａ／Ｐ比１．６７、平均粒径５μｍ、比
表面積４５ｍ2／ｇ、みかけ密度１．８ｇ／ｃｍ3 、細
孔径６００Åのハイドロキシアパタイト粒子７．５ｇを
奈良ハイブリダイゼーションシステムＮＨＳ−１（奈良
機械製作所製、定格動力５．５ｋｗ、定格電流２３Ａ）
に入れ、これを８０００回転／分で３２〜５０℃で５分
間稼動させて、ナイロンビーズ表面をハイドロキシアパ
タイトで被覆した。得られた複合体粒子は、平均粒径
５．８μｍ、密度１．１３ｇ／ｃｍ3 、細孔径６００Å
であった。
【００１６】（２）抗原固定凝集性複合体粒子の製造 この複合体粒子０．１ｇに２０００ titerのＡ型インフ
ルエンザウイルス浮遊液１０ｍｌを加え、よく攪拌した
後、遠心処理して過剰なウイルスを取り除き、さらに
０．１％グルタールアルデヒド溶液１０ｍｌを加え、複
合体粒子に吸着したウイルスを固定化し、カゼインを含
む商品名ブロックエース（雪印乳業（株）製）５ｍｌを
加え、よく攪拌した後、遠心処理し、過剰なブロックエ
ースを除去し、ＰＢＳ２０ｍｌを加えた。
ルエンザウイルス浮遊液１０ｍｌを加え、よく攪拌した
後、遠心処理して過剰なウイルスを取り除き、さらに
０．１％グルタールアルデヒド溶液１０ｍｌを加え、複
合体粒子に吸着したウイルスを固定化し、カゼインを含
む商品名ブロックエース（雪印乳業（株）製）５ｍｌを
加え、よく攪拌した後、遠心処理し、過剰なブロックエ
ースを除去し、ＰＢＳ２０ｍｌを加えた。
【００１７】参考例２（抗原固定凝集性複合体粒子の製
造） （１）粒状ポリマー複合体の製造 アントラキノン系分散染料である商品名 MITSUI ML Col
ors ML blue VF（三井東圧染料（株）製）で染色した平
均粒径５μｍ、密度１．０３ｇ／ｃｍ3 のナイロンビー
ズ５０ｇとＣａ／Ｐ比１．６７、平均粒径５μｍ、比表
面積４５ｍ2 ／ｇ、みかけ密度１．８ｇ／ｃｍ3 、細孔
径６００Åのハイドロキシアパタイト粒子７．５ｇを奈
良ハイブリダイゼーションシステムＮＨＳ−１（奈良機
械製作所製、定格動力５．５ｋｗ、定格電流２３Ａ）に
入れ、これを８０００回転／分で３２〜５０℃で５分間
稼動させて、ナイロンビーズ表面をハイドロキシアパタ
イトで被覆した。得られた複合体粒子は、平均粒径５．
８μｍ、密度１．１３ｇ／ｃｍ3 、細孔径６００Åであ
った。
造） （１）粒状ポリマー複合体の製造 アントラキノン系分散染料である商品名 MITSUI ML Col
ors ML blue VF（三井東圧染料（株）製）で染色した平
均粒径５μｍ、密度１．０３ｇ／ｃｍ3 のナイロンビー
ズ５０ｇとＣａ／Ｐ比１．６７、平均粒径５μｍ、比表
面積４５ｍ2 ／ｇ、みかけ密度１．８ｇ／ｃｍ3 、細孔
径６００Åのハイドロキシアパタイト粒子７．５ｇを奈
良ハイブリダイゼーションシステムＮＨＳ−１（奈良機
械製作所製、定格動力５．５ｋｗ、定格電流２３Ａ）に
入れ、これを８０００回転／分で３２〜５０℃で５分間
稼動させて、ナイロンビーズ表面をハイドロキシアパタ
イトで被覆した。得られた複合体粒子は、平均粒径５．
８μｍ、密度１．１３ｇ／ｃｍ3 、細孔径６００Åであ
った。
【００１８】（２）抗原固定凝集性複合体粒子の製造 この複合体粒子０．１ｇに４０００ titerの日本脳炎ウ
イルス浮遊液１０ｍｌを加え、よく攪拌した後、遠心処
理して過剰なウイルスを取り除き、さらに０．１％グル
タールアルデヒド溶液１０ｍｌを加え、複合体粒子に吸
着したウイルスを固定化し、カゼインを含む商品名ブロ
ックエース（雪印乳業（株）製）５ｍｌを加え、よく攪
拌した後、遠心処理し、過剰なブロックエースを除去
し、ＰＢＳ２０ｍｌを加えた。
イルス浮遊液１０ｍｌを加え、よく攪拌した後、遠心処
理して過剰なウイルスを取り除き、さらに０．１％グル
タールアルデヒド溶液１０ｍｌを加え、複合体粒子に吸
着したウイルスを固定化し、カゼインを含む商品名ブロ
ックエース（雪印乳業（株）製）５ｍｌを加え、よく攪
拌した後、遠心処理し、過剰なブロックエースを除去
し、ＰＢＳ２０ｍｌを加えた。
【００１９】実施例１ （１）凝集試験用プレートの製造 ９６個の穴（容量０．３ｍｌ）を有するＵ型ポリスチレ
ンプレートの各穴に、濃度１．０×１０-6ｍｇ／ｍｌの
プロテインＡを含むＰＢＳ溶液０．０５ｍｌを入れ、２
０時間後、その溶液を捨て、プレートの各穴にＰＢＳ
０．０５ｍｌを入れ、その液を捨てて遊離していたプロ
テインＡを除去し、プレートを乾燥してプロテインＡ付
着プレートを得た。また、１．０×１０-5ｍｇ／ｍｌ、
１．０×１０-4ｍｇ／ｍｌ、１．０×１０-3ｍｇ／ｍ
ｌ、１．０×１０-2ｍｇ／ｍｌ、１．０×１０-1ｍｇ／
ｍｌ、１．０ｍｇ／ｍｌのプロテインＡを含むＰＢＳ溶
液を用いて上記と同様の操作を行い、それぞれのプロテ
インＡ付着プレートを得た。
ンプレートの各穴に、濃度１．０×１０-6ｍｇ／ｍｌの
プロテインＡを含むＰＢＳ溶液０．０５ｍｌを入れ、２
０時間後、その溶液を捨て、プレートの各穴にＰＢＳ
０．０５ｍｌを入れ、その液を捨てて遊離していたプロ
テインＡを除去し、プレートを乾燥してプロテインＡ付
着プレートを得た。また、１．０×１０-5ｍｇ／ｍｌ、
１．０×１０-4ｍｇ／ｍｌ、１．０×１０-3ｍｇ／ｍ
ｌ、１．０×１０-2ｍｇ／ｍｌ、１．０×１０-1ｍｇ／
ｍｌ、１．０ｍｇ／ｍｌのプロテインＡを含むＰＢＳ溶
液を用いて上記と同様の操作を行い、それぞれのプロテ
インＡ付着プレートを得た。
【００２０】（２）凝集試験 上記（１）で得た各プロテインＡ付着プレート上で、参
考例１で用いたインフルエンザウイルスに対するウサギ
抗血清、他のウイルスに対するウサギ抗血清及びウイル
スに全く感染させていないウサギ血清のそれぞれをＰＢ
Ｓに加えて０．０５ｍｌ／穴になるように倍々に希釈し
３０分後、参考例１の（２）で得たインフルエンザウイ
ルス抗原固定凝集性複合体粒子液０．０５ｍｌを各穴に
加えた結果、全てのプロテインＡ付着プレートにおい
て、他のウイルスに対するウサギ抗血清及びウイルスに
全く感染させていないウサギ血清では、全て凝集像が認
められず、インフルエンザウイルスに対するウサギ抗血
清では３２０００倍に希釈しても明確な凝集像が見ら
れ、６４０００倍希釈以上では凝集像は認められなかっ
た。
考例１で用いたインフルエンザウイルスに対するウサギ
抗血清、他のウイルスに対するウサギ抗血清及びウイル
スに全く感染させていないウサギ血清のそれぞれをＰＢ
Ｓに加えて０．０５ｍｌ／穴になるように倍々に希釈し
３０分後、参考例１の（２）で得たインフルエンザウイ
ルス抗原固定凝集性複合体粒子液０．０５ｍｌを各穴に
加えた結果、全てのプロテインＡ付着プレートにおい
て、他のウイルスに対するウサギ抗血清及びウイルスに
全く感染させていないウサギ血清では、全て凝集像が認
められず、インフルエンザウイルスに対するウサギ抗血
清では３２０００倍に希釈しても明確な凝集像が見ら
れ、６４０００倍希釈以上では凝集像は認められなかっ
た。
【００２１】実施例２ （１）凝集試験用プレートの製造 ９６個の穴（容量０．３ｍｌ）を有するＵ型ポリプロピ
レンプレート、９６個の穴（容量０．３ｍｌ）を有する
Ｖ型ポリスチレンプレート及び９６個の穴（容量０．２
ｍｌ）を有するＵ型ポリ塩化ビニルプレートの各穴に、
濃度１．０×１０-3ｍｇ／ｍｌのプロテインＡを含むＰ
ＢＳ溶液０．０５ｍｌを入れ、６０分後、その溶液を捨
て、プレートの各穴にＰＢＳ０．０５ｍｌを入れ、その
液を捨てて遊離していたプロテインＡを除去し、プレー
トを乾燥してプロテインＡ付着プレートを得た。
レンプレート、９６個の穴（容量０．３ｍｌ）を有する
Ｖ型ポリスチレンプレート及び９６個の穴（容量０．２
ｍｌ）を有するＵ型ポリ塩化ビニルプレートの各穴に、
濃度１．０×１０-3ｍｇ／ｍｌのプロテインＡを含むＰ
ＢＳ溶液０．０５ｍｌを入れ、６０分後、その溶液を捨
て、プレートの各穴にＰＢＳ０．０５ｍｌを入れ、その
液を捨てて遊離していたプロテインＡを除去し、プレー
トを乾燥してプロテインＡ付着プレートを得た。
【００２２】（２）凝集試験 上記（１）で得た各プロテインＡ付着プレートを用いて
実施例１の（２）と同じ操作を行ったところ、実施例１
と同じ結果を得た。
実施例１の（２）と同じ操作を行ったところ、実施例１
と同じ結果を得た。
【００２３】実施例３ （１）凝集試験用プレートの製造 ９６個の穴（容量０．３ｍｌ）を有するＶ型ポリスチレ
ンプレートの各穴に、濃度１．０×１０-3ｍｇ／ｍｌの
プロテインＡを含むＰＢＳ溶液０．０５ｍｌを入れ、１
分後、その溶液を捨て、プレートの各穴にＰＢＳ０．０
５ｍｌを入れ、その液を捨てて遊離していたプロテイン
Ａを除去し、プレートを乾燥してプロテインＡ付着プレ
ートを得た。また、処理時間を１０分、３０分、１時
間、３時間及び２０時間に変えた以外は全く同様にして
プロテインＡ付着プレートを得た。
ンプレートの各穴に、濃度１．０×１０-3ｍｇ／ｍｌの
プロテインＡを含むＰＢＳ溶液０．０５ｍｌを入れ、１
分後、その溶液を捨て、プレートの各穴にＰＢＳ０．０
５ｍｌを入れ、その液を捨てて遊離していたプロテイン
Ａを除去し、プレートを乾燥してプロテインＡ付着プレ
ートを得た。また、処理時間を１０分、３０分、１時
間、３時間及び２０時間に変えた以外は全く同様にして
プロテインＡ付着プレートを得た。
【００２４】（２）凝集試験 上記（１）で得た各プロテインＡ付着プレート上で、参
考例２で用いた日本脳炎ウイルスに対するウサギ抗血
清、他のウイルスに対するウサギ抗血清及びウイルスに
全く感染させていないウサギ血清のそれぞれをＰＢＳに
加え、０．０５ｍｌ／穴になるように倍々に希釈し、３
０分後、参考例２の（２）で得た日本脳炎ウイルス抗原
固定凝集性複合体粒子液０．０５ｍｌを各穴に加えた結
果、全てのプロテインＡ付着プレートにおいて、他のウ
イルスに対するウサギ抗血清及びウイルスに全く感染さ
せていないウサギ血清では、全て凝集像は認められず、
日本脳炎ウイルスに対するウサギ抗血清では、８０００
倍に希釈しても明確な凝集像が見られ、１６０００倍希
釈では凝集像は認められなかった。
考例２で用いた日本脳炎ウイルスに対するウサギ抗血
清、他のウイルスに対するウサギ抗血清及びウイルスに
全く感染させていないウサギ血清のそれぞれをＰＢＳに
加え、０．０５ｍｌ／穴になるように倍々に希釈し、３
０分後、参考例２の（２）で得た日本脳炎ウイルス抗原
固定凝集性複合体粒子液０．０５ｍｌを各穴に加えた結
果、全てのプロテインＡ付着プレートにおいて、他のウ
イルスに対するウサギ抗血清及びウイルスに全く感染さ
せていないウサギ血清では、全て凝集像は認められず、
日本脳炎ウイルスに対するウサギ抗血清では、８０００
倍に希釈しても明確な凝集像が見られ、１６０００倍希
釈では凝集像は認められなかった。
【００２５】実施例４ （１）凝集試験用プレートの製造 ９６個の穴（容量０．２ｍｌ）を有するＵ型ポリ塩化ビ
ニルプレート２枚の各穴に、濃度１．０×１０-3ｍｇ／
ｍｌのプロテインＡを含むＰＢＳ溶液０．０５ｍｌを入
れ、１０分後、その溶液を捨て、プレートの各穴にＰＢ
Ｓ０．０５ｍｌを入れ、その液を捨てて遊離していたプ
ロテインＡを除去し、プレートを乾燥してプロテインＡ
付着プレートを得た。一方のプレートを４℃で、他方の
プレートを２５℃でそれぞれ７日間保管した。
ニルプレート２枚の各穴に、濃度１．０×１０-3ｍｇ／
ｍｌのプロテインＡを含むＰＢＳ溶液０．０５ｍｌを入
れ、１０分後、その溶液を捨て、プレートの各穴にＰＢ
Ｓ０．０５ｍｌを入れ、その液を捨てて遊離していたプ
ロテインＡを除去し、プレートを乾燥してプロテインＡ
付着プレートを得た。一方のプレートを４℃で、他方の
プレートを２５℃でそれぞれ７日間保管した。
【００２６】（２）凝集試験 上記（１）で得られ、４℃及び２５℃で７日間保管した
プロテインＡ付着プレートを用いて実施例３の（２）と
同じ操作を行ったところ、４℃及び２５℃で７日間保管
したプレートは、ともに実施例３と同じ結果を生じた。
プロテインＡ付着プレートを用いて実施例３の（２）と
同じ操作を行ったところ、４℃及び２５℃で７日間保管
したプレートは、ともに実施例３と同じ結果を生じた。
【００２７】実施例５ （１）凝集試験用プレートの製造 ９６個の穴（容量０．３ｍｌ）を有するＶ型ポリ塩化ス
チレンプレートの各穴に、濃度１．０×１０-6ｍｇ／ｍ
ｌのプロテインＧを含むＰＢＳ溶液０．０５ｍｌを入
れ、９時間後、その溶液を捨て、プレートの各穴にＰＢ
Ｓ０．０５ｍｌを入れ、その液を捨てて遊離していたプ
ロテインＧを除去し、プレートを乾燥してプロテインＧ
付着プレートを得た。
チレンプレートの各穴に、濃度１．０×１０-6ｍｇ／ｍ
ｌのプロテインＧを含むＰＢＳ溶液０．０５ｍｌを入
れ、９時間後、その溶液を捨て、プレートの各穴にＰＢ
Ｓ０．０５ｍｌを入れ、その液を捨てて遊離していたプ
ロテインＧを除去し、プレートを乾燥してプロテインＧ
付着プレートを得た。
【００２８】（２）凝集試験 （１）で得たプロテインＧ付着プレート上で、参考例２
で用いた日本脳炎ウイルスに対するウサギ抗血清、他の
ウイルスに対するウサギ抗血清及びウイルスに全く感染
させていないウサギ血清をそれぞれＰＢＳに加えて０．
０５ｍｌ／穴になるように倍々に希釈し、３０分後、参
考例１の日本脳炎ウイルス抗原固定凝集性複合体粒子液
０．０５ｍｌを各穴に加えた結果、全てのプロテインＧ
付着プレートで、他のウイルスに対するウサギ抗血清及
びウイルスに全く感染させていないウサギ血清では、全
て凝集像は認められず、日本脳炎ウイルスに対するウサ
ギ抗血清では８０００倍に希釈しても明確な凝集像が見
られ、１６０００倍希釈では凝集像が認められなかっ
た。
で用いた日本脳炎ウイルスに対するウサギ抗血清、他の
ウイルスに対するウサギ抗血清及びウイルスに全く感染
させていないウサギ血清をそれぞれＰＢＳに加えて０．
０５ｍｌ／穴になるように倍々に希釈し、３０分後、参
考例１の日本脳炎ウイルス抗原固定凝集性複合体粒子液
０．０５ｍｌを各穴に加えた結果、全てのプロテインＧ
付着プレートで、他のウイルスに対するウサギ抗血清及
びウイルスに全く感染させていないウサギ血清では、全
て凝集像は認められず、日本脳炎ウイルスに対するウサ
ギ抗血清では８０００倍に希釈しても明確な凝集像が見
られ、１６０００倍希釈では凝集像が認められなかっ
た。
【００２９】実施例６ （１）凝集試験用プレートの製造 ９６個の穴（容量０．２ｍｌ）を有するＵ型ポリ塩化ビ
ニルプレート２枚の各穴に、濃度１．０×１０-5ｍｇ／
ｍｌのプロテインＡ及び濃度１．０×１０-5ｍｇ／ｍｌ
のプロテインＧを含むＰＢＳ溶液０．０５ｍｌを入れ、
１０分後、その溶液を捨て、プレートの各穴にＰＢＳ
０．０５ｍｌを入れ、その液を捨てて遊離していたプロ
テインＡ及びプロテインＧを除去し、プレートを乾燥し
てプロテインＡ・プロテインＧ付着プレートを得た。
ニルプレート２枚の各穴に、濃度１．０×１０-5ｍｇ／
ｍｌのプロテインＡ及び濃度１．０×１０-5ｍｇ／ｍｌ
のプロテインＧを含むＰＢＳ溶液０．０５ｍｌを入れ、
１０分後、その溶液を捨て、プレートの各穴にＰＢＳ
０．０５ｍｌを入れ、その液を捨てて遊離していたプロ
テインＡ及びプロテインＧを除去し、プレートを乾燥し
てプロテインＡ・プロテインＧ付着プレートを得た。
【００３０】（２）凝集試験 上記（１）で得られ、４℃及び２５℃で７日間保管した
プロテインＡ・プロテインＧ付着プレートを用いて実施
例３の（２）と同じ操作を行ったところ、４℃及び２５
℃で７日間保管したプレートは、ともに実施例３と同じ
結果を生じた。
プロテインＡ・プロテインＧ付着プレートを用いて実施
例３の（２）と同じ操作を行ったところ、４℃及び２５
℃で７日間保管したプレートは、ともに実施例３と同じ
結果を生じた。
【００３１】比較例１ ９６個の穴（容量０．３ｍｌ）を有するＶ型ポリスチレ
ンプレートを用いて、参考例１で用いたインフルエンザ
ウイルスに対するウサギ抗血清、他のウイルスに対する
ウサギ抗血清及びウイルスに全く感染させていないウサ
ギ血清のそれぞれをＰＢＳに加えて０．０５ｍｌ／穴に
なるように倍々に希釈し３０分後、参考例１の（２）で
得たインフルエンザウイルス抗原固定凝集性複合体粒子
液０．０５ｍｌを各穴に加えた結果、他のウイルスに対
するウサギ抗血清及びウイルスに全く感染させていない
ウサギ血清では、全て凝集像が認められず、インフルエ
ンザウイルスに対するウサギ抗血清では４０００倍希釈
まで明確な凝集像が見られたが、８０００倍から３２０
００倍希釈では凝集像とも非凝集像とも判定できない中
間像が認められ、６４０００倍希釈以上では凝集像は認
められなかった。
ンプレートを用いて、参考例１で用いたインフルエンザ
ウイルスに対するウサギ抗血清、他のウイルスに対する
ウサギ抗血清及びウイルスに全く感染させていないウサ
ギ血清のそれぞれをＰＢＳに加えて０．０５ｍｌ／穴に
なるように倍々に希釈し３０分後、参考例１の（２）で
得たインフルエンザウイルス抗原固定凝集性複合体粒子
液０．０５ｍｌを各穴に加えた結果、他のウイルスに対
するウサギ抗血清及びウイルスに全く感染させていない
ウサギ血清では、全て凝集像が認められず、インフルエ
ンザウイルスに対するウサギ抗血清では４０００倍希釈
まで明確な凝集像が見られたが、８０００倍から３２０
００倍希釈では凝集像とも非凝集像とも判定できない中
間像が認められ、６４０００倍希釈以上では凝集像は認
められなかった。
【００３２】比較例２ （１）凝集試験用プレートの製造 ９６個の穴（容量０．３ｍｌ）を有するＶ型ポリスチレ
ンプレートの各穴に、濃度１．０×１０-7ｍｇ／ｍｌの
プロテインＡを含むＰＢＳ溶液０．０５ｍｌを入れ、２
０時間後、その溶液を捨て、プレートの各穴にＰＢＳ
０．０５ｍｌを入れ、その液を捨てて遊離していたプロ
テインＡを除去し、プレートを乾燥してプロテインＡ付
着プレートを得た。
ンプレートの各穴に、濃度１．０×１０-7ｍｇ／ｍｌの
プロテインＡを含むＰＢＳ溶液０．０５ｍｌを入れ、２
０時間後、その溶液を捨て、プレートの各穴にＰＢＳ
０．０５ｍｌを入れ、その液を捨てて遊離していたプロ
テインＡを除去し、プレートを乾燥してプロテインＡ付
着プレートを得た。
【００３３】（２）凝集試験 上記（１）で得た各プロテインＡ付着プレート上で、参
考例２で用いた日本脳炎ウイルスに対するウサギ抗血
清、他のウイルスに対するウサギ抗血清及びウイルスに
全く感染させていないウサギ血清のそれぞれをＰＢＳに
加え、０．０５ｍｌ／穴になるように倍々に希釈し、３
０分後、参考例２の（２）で得た日本脳炎ウイルス抗原
固定凝集性複合体粒子液０．０５ｍｌを各穴に加えた結
果、全てのプロテイン付着プレートにおいて、他のウイ
ルスに対するウサギ抗血清及びウイルスに全く感染させ
ていないウサギ血清では、全て凝集像は認められず、日
本脳炎ウイルスに対するウサギ抗血清では、５００倍希
釈までは明確な凝集像が見られたが、２０００倍から４
０００倍希釈では凝集像とも非凝集像とも判定できない
中間像が認められ、８０００倍希釈以上では凝集像は認
められなかった。
考例２で用いた日本脳炎ウイルスに対するウサギ抗血
清、他のウイルスに対するウサギ抗血清及びウイルスに
全く感染させていないウサギ血清のそれぞれをＰＢＳに
加え、０．０５ｍｌ／穴になるように倍々に希釈し、３
０分後、参考例２の（２）で得た日本脳炎ウイルス抗原
固定凝集性複合体粒子液０．０５ｍｌを各穴に加えた結
果、全てのプロテイン付着プレートにおいて、他のウイ
ルスに対するウサギ抗血清及びウイルスに全く感染させ
ていないウサギ血清では、全て凝集像は認められず、日
本脳炎ウイルスに対するウサギ抗血清では、５００倍希
釈までは明確な凝集像が見られたが、２０００倍から４
０００倍希釈では凝集像とも非凝集像とも判定できない
中間像が認められ、８０００倍希釈以上では凝集像は認
められなかった。
【００３４】
【発明の効果】本発明によれば、抗原抗体反応に基づく
凝集反応によって診断を行う際に凝集像と非凝集像とを
明確に判定でき、感度が良好な凝集試験用プレートを簡
単な操作で製造することができる。また、本発明の凝集
試験用プレートは、保存安定性に優れ、室温で長期間保
存しても充分な効果を保有する。
凝集反応によって診断を行う際に凝集像と非凝集像とを
明確に判定でき、感度が良好な凝集試験用プレートを簡
単な操作で製造することができる。また、本発明の凝集
試験用プレートは、保存安定性に優れ、室温で長期間保
存しても充分な効果を保有する。
─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【提出日】平成７年１２月１５日
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２７
【補正方法】変更
【補正内容】
【００２７】実施例５ （１）凝集試験用プレートの製造 ９６個の穴（容量０．３ｍｌ）を有するＶ型ポリスチレ
ンプレートの各穴に、濃度１．０×１０-6ｍｇ／ｍｌの
プロテインＧを含むＰＢＳ溶液０．０５ｍｌを入れ、９
時間後、その溶液を捨て、プレートの各穴にＰＢＳ０．
０５ｍｌを入れ、その液を捨てて遊離していたプロテイ
ンＧを除去し、プレートを乾燥してプロテインＧ付着プ
レートを得た。
ンプレートの各穴に、濃度１．０×１０-6ｍｇ／ｍｌの
プロテインＧを含むＰＢＳ溶液０．０５ｍｌを入れ、９
時間後、その溶液を捨て、プレートの各穴にＰＢＳ０．
０５ｍｌを入れ、その液を捨てて遊離していたプロテイ
ンＧを除去し、プレートを乾燥してプロテインＧ付着プ
レートを得た。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２８
【補正方法】変更
【補正内容】
【００２８】（２）凝集試験 （１）で得たプロテインＧ付着プレート上で、参考例２
で用いた日本脳炎ウイルスに対するウサギ抗血清、他の
ウイルスに対するウサギ抗血清及びウイルスに全く感染
させていないウサギ血清をそれぞれＰＢＳに加えて０．
０５ｍｌ／穴になるように倍々に希釈し、３０分後、参
考例２の日本脳炎ウイルス抗原固定凝集性複合体粒子液
０．０５ｍｌを各穴に加えた結果、全てのプロテインＧ
付着プレートで、他のウイルスに対するウサギ抗血清及
びウイルスに全く感染させていないウサギ血清では、全
て凝集像は認められず、日本脳炎ウイルスに対するウサ
ギ抗血清では８０００倍に希釈しても明確な凝集像が見
られ、１６０００倍希釈では凝集像が認められなかっ
た。
で用いた日本脳炎ウイルスに対するウサギ抗血清、他の
ウイルスに対するウサギ抗血清及びウイルスに全く感染
させていないウサギ血清をそれぞれＰＢＳに加えて０．
０５ｍｌ／穴になるように倍々に希釈し、３０分後、参
考例２の日本脳炎ウイルス抗原固定凝集性複合体粒子液
０．０５ｍｌを各穴に加えた結果、全てのプロテインＧ
付着プレートで、他のウイルスに対するウサギ抗血清及
びウイルスに全く感染させていないウサギ血清では、全
て凝集像は認められず、日本脳炎ウイルスに対するウサ
ギ抗血清では８０００倍に希釈しても明確な凝集像が見
られ、１６０００倍希釈では凝集像が認められなかっ
た。
フロントページの続き (72)発明者 小川 哲朗 東京都板橋区前野町２丁目36番９号 旭光 学工業株式会社内 (72)発明者 見藤 歩 東京都板橋区前野町２丁目36番９号 旭光 学工業株式会社内 (72)発明者 北野 忠彦 東京都八王子市横川町954−30 (72)発明者 中山 幹男 千葉県習志野市鷺沼台３−11−25
Claims (4)
- 【請求項１】 複数の穴を有するプレートの各穴の表面
にプロテインＡ及び／又はプロテインＧを付着させたこ
とを特徴とする凝集試験用プレート。 - 【請求項２】 複数の穴を有するプレートの各穴に少量
のプロテインＡ及び／又はプロテインＧ含有溶液を入
れ、その溶液を捨てた後、プレートを乾燥させることを
特徴とする凝集試験用プレートの製造方法。 - 【請求項３】 プロテインＡ及び／又はプロテインＧ含
有溶液がプロテインＡ及び／又はプロテインＧを合計で
１．０×１０-6ｍｇ／ｍｌ以上の濃度で含む溶液である
請求項２記載の凝集試験用プレートの製造方法。 - 【請求項４】 各穴に少量のプロテインＡ溶液を入れ、
数分以上そのまま静置した後、その溶液を捨てる請求項
２又は３記載の凝集試験用プレートの製造方法。
Priority Applications (3)
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|---|---|---|---|
| JP6328789A JPH08182657A (ja) | 1994-12-28 | 1994-12-28 | 凝集試験用プレート及びその製造方法 |
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| JP6328789A JPH08182657A (ja) | 1994-12-28 | 1994-12-28 | 凝集試験用プレート及びその製造方法 |
Publications (1)
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Family Applications (1)
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| JP6328789A Pending JPH08182657A (ja) | 1994-12-28 | 1994-12-28 | 凝集試験用プレート及びその製造方法 |
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