JPS6229746B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は免疫反応に基づいて抗原又は抗体と検
体とを水性溶媒中で混合し、その凝集反応を追跡
して抗原や抗体を定量的に測定する凝集試験にお
いて、抗原又は抗体と検体を混合させる際に用い
る水性溶媒に関するものである。 抗原抗体反応やある種の動植物菌体又はウイル
ス由来の凝集物質と生体蛋白質や赤血球との免疫
反応に基づく凝集反応を追跡することにより、そ
れらの一方か又は両者を定量的に測定する方法
は、赤血球凝集反応（PHA法）、逆受身赤血球凝
集反応（RPHA法）、細菌の凝集反応、又はラテ
ツクス凝集反応などとして広く臨床検査の分野で
利用されている。 例えばPHA法について説明すると、精製した
HB_S抗原を凝集試験用担体ととしてヒツジ赤血球
に感作させてHB_S抗原感作ヒツジ赤血球を得、こ
のものと血液検体とを水性溶媒中で混合した時に
水性溶媒中で凝集反応がみられるか否かによつて
検体中にHB_S抗体が存在していたか否かを判定で
きる。また凝集反応がみられた場合は、その検体
を段階的に希釈して凝集反応が観察できなくなる
までの希釈倍数を求めることにより、その検体中
に含まれていたHB_S抗体を定量的に測定すること
ができる。次にRPHA法では精製したHB_S抗体を
凝集試験用担体として哺乳動物の赤血球に感作し
てHB_S抗体感作赤血球を製し、このものと検体と
を水性溶媒中で混合した時に凝集反応がみられる
か否かによつて、検体中にHB_S抗原が含まれてい
るか否かを検知することができる。さにらある種
のウイルスと鳥類の赤血球とはウイルスの有する
凝集素の作用により赤血球を水性溶媒中で凝集す
る。この水性溶媒中での凝集反応の有無を調べ凝
の強弱によつてウイルスの濃度を定量的にぬ測定
することができる。 これら多くの水性溶媒中での凝集反応を利用し
た凝集試験は、簡便でかつ測定感度も高いので各
種抗原や抗体の検査に広く利用されている。しか
しこれら水性溶媒中での凝集試験に共通した欠点
は、リポプロテインやフイブリノゲン又は部分変
性をうけた蛋白質などの疑似反応物質が混在する
検体においては、非特異的な凝集反応が起つて半
判定を誤りやすいことである。このような検体を
測定する場合には、これらの疑似反応物の影響が
出てこない程度にまで予め希釈した後に測定を行
うか、もしくは程当な認試験法を用いて水性溶媒
中での凝集反応の真偽を確かめる必要がある。 そこでこれらの水性溶媒中での非特異的凝集反
応を少くする方法として、測定に用いる水性溶媒
の中の少量の動物蛋白や可溶性赤血球膜成分を加
えることにより、ある程度改善されることが既に
知られている。しかしなお多くの非特異反応が残
るのでさらに良い改善方法の出現が待望されてい
た。また非特異反応を消去する別の方法として検
体中のこれらの疑似反応物質を予めカオリンや血
球などに吸着させて除去することも止むを得ず行
われているが、多数の検体を同時にかつ短時間に
処理するにはあまりにも煩雑であつた。 本発明の目的は凝集試験における非特異反応を
渉消去し、極めて検出特異性の優れた凝集試験用
水性溶媒を提供せんとするにある。 発明者等は永町免疫反応に基づく凝集試験にお
いて、その非特異反応を消去するため試険方法の
改良研究を続け、測定系に少量の塩酸グアニジン
又はヨウ化塩又はチオシアン酸塩を加えること及
びこれらの化合物とEDTAを併用することによ
り、測定特異性が懸著に改善されることを見出
し、この新知見に基づいて本発明を完成した。 本発明は免疫反応に基づく凝集試験において、
その水性溶媒に塩酸グアニジン又はヨウ化塩又は
チオシアン酸塩を非特異反応を消去するに十分な
量、たとえば0.005〜1.0Mの濃度に加えるのであ
る。又本発明は凝集試験用水性溶媒にこれらの化
合物を、たとえば0.005〜1.0Mの濃度で加えると
共に、エチレンジアミン４酢酸塩（EDTA）、を
たとえば0.005〜1.0Mの濃度に加えて２価金属イ
オンとキレート剤を併用するのである。 水性溶媒としては公知のあらゆる凝集試験用水
性溶媒を利用でき、例えば水、生理食塩水、各種
緩衝液（リン酸緩衝液、トリス塩酸緩衝液、ホウ
酸緩衝液、グリシン緩衝液）、アルブミン溶液、
デキストラン溶液、正常ヒト及び動物血清溶液、
合成高分子物質の溶液、界面活性剤含有水溶液お
よびこれらの組み合せからなる溶液がある。水性
溶媒の好適なPHは約4.0〜9.0であり、緩衝液でPH
を調整することが好ましい。水性溶媒に含まれる
塩の濃度は比較的低濃度であることが好ましく、
より好ましくは生理的等張な溶液である。なおこ
の水性溶媒に前記公知の非特異的凝集反応阻止物
質（動物蛋白や可溶性赤血球報成分）を混合して
もよい。 本発明に係る水性溶媒を用いる凝集試験用担体
は特に限定されるものではなく、例示すればラテ
ツクス樹脂類、ゴム類、無機吸着剤及び動物（例
えばヒツジ、モルモツト、Ｏ型の人、ニワトリな
ど）の赤血球をホルマリン、グルタルアルデヒド
などで固定したものである。担体の大きさは約20
μ以下が好ましく５〜15μ程度の粒状のものが特
に好ましい。このよう粒状担体に抗原又は抗体を
感作させる処理は公知の方法に準じて行う。 本発明に係る水性溶媒を使用した凝集試験の効
果を説明すための実験を行つた。まずモルモツト
に精製HB_S抗原を免疫してHB_S抗血清を、この抗
血清を硫安分画法とイオン交換クロマトグラフイ
ー法とで処理して精製HB_S抗体を得この精製HB_S
抗体をグルタルアルデヒドにより固定されたヒツ
ジ赤血球に感作してHB_S抗体感作ヒツジ赤血球を
得る。 他方0.1Mトリス塩酸緩衝液（PH7.5）に正常動
物血清およびヒツジ赤血球膜成分とを加えて
RPHA法用の公知の水性溶媒を調製し、この水性
溶媒に第１表に示す如く塩酸グアニジン
（NH₂C：NHNH₂・HCl）、ヨウ化塩（NaI）、チオ
シアン酸塩（KSCN）を単独に及びNaIとエチレ
ンジアミン４酢酸３ナトリウム塩（EDTA−
3Na）の両方を加えて本発明に係る水性溶媒を調
製し、コントロールとして無添加のものを用意し
た。 従来方法による確認試験の結果非特異凝集を起
こすことが知られている、クエン酸塩加人血漿の
３検体（表中No.1、No.2及びNo.3）をRPHA法に
従い、この３種類の溶媒を用いてマイクロプレー
ト上でそれぞれ２倍数希釈を行い、この希釈列に
上記HB_S抗体感作ヒツジ赤血球を混合した。別に
HB_S抗原が陽性の検体（No.4）を同様に処理しし
て試験した。混合液量は検体希釈液25μ、HB_S
抗体感ヒツジ赤血球25μであり、室温で２時間
後の凝集の強さ（凝集度）を４、３、２、１で評
価し、非凝集を評価０として第１表の成績を得
た。

【表】 第１表から判るように塩酸グアニジン、ヨウ化
塩、チオシアン酸塩を加えた水性溶媒では１：16
〜１：32の非特異凝集が１：１〜１：８に抑制さ
れており、NaIとEDTAを併用した水性溶媒では
単独の場合よりもその非特異凝集がさらに抑制さ
れている。また陽性検体（検体No.4）ではいず
れを添加した場合も陽性となり、これらの添加か
陽性検体に影響しないことを示している。 本発明によるときは免疫反応に基づく抗原又は
抗体と検体との凝集試験において、非特異凝集を
著るしく抑制しうる水性溶媒を得ることができ、
各種抗原や抗体の測定に利用されている凝集試験
を簡素化すると共に検出非特異性を顕著に高めう
る効果を有す。 実施例 １ 塩酸グアニジン10ｇと健康家兎血清２ml及び血
球泥２mlから得た血球膜粒子をPH7.6の0.1Mリン
酸緩衝液２mlに浮遊させたものとを混合し、この
混合液にPH7.6の0.1Mリン酸緩衝液を加えて凝集
試験用水性溶媒200mlを調製する。 実施例 ２ チオシアン酸カルシウム2.0●ｇ及びエチレン
ジアミン４酢酸３ナトリウム塩5.0ｇと、健康家
兎血清２ml及び血球泥２mlから得た血球膜粒子を
PH7.6の0.1Mリン酸緩衝液２mlに浮遊させたもの
とを混合し、この混合液にPH7.6の0.1Mリン酸緩
衝液を加えて凝集試験用水性溶媒200mlを調製す
る。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 免疫反応に基づいて抗原又は抗体と検体とを
   水性溶媒中で混合し、その凝集反応を追跡して抗
   原や抗体を測定する凝集試験用水性溶媒であつ
   て、塩酸グアニジン、ヨウ化塩及びチオシアン酸
   塩から選ばれる少なくとも一種の化合物を凝集反
   応における非特異反応を消去するに十分な量を含
   ませることを特徴とする凝集試験用水性溶媒。 ２ エチレンジアミン４酢酸塩を併用することを
   特徴とする特許請求の範囲第１項記載の凝集試験
   用水性溶媒。