JPS638426B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は免疫反応に基づいて抗原又は抗体を感
作した赤血球と検体とを水性溶媒中で混合し、そ
の凝集反応を追跡して各種抗原や抗体を定量的に
測定する凝集試験において、抗原又は抗体と検体
を混合させる際に用いる水性溶媒に関するもので
ある。 抗原抗体反応やある種の動植物菌体又はウイル
ス由来の凝集物質と、生体蛋白質や赤血球との免
疫反応に基づく凝集反応を追跡することにより、
それらの一方か又は両者を定量的に測定する方法
は、赤血球凝集反応（PHA法）、逆受身赤血球凝
集反応（RPHA法）、細菌の凝集反応、又はラテ
ツクス凝集反応などとして広く臨床検査の分野で
利用されている。 例えばPHA法について説明すると、精製した
HBs抗原を凝集試験用担体としてヒツジ赤血球
に感作させてHBs抗原感作ヒツジ赤血球を得、
このものと血液検体とを水性溶媒中で混合した時
に凝集反応がみられるか否かによつて検体中に
HBs抗体が存在していたか否かを判定できる。 また凝集反応がみられた場合は、その検体を段
階的に希釈して凝集反応が観察できなくなるまで
の希釈倍数を求めることによりその検体に含まれ
ていたHBs抗体を定量的に測定することができ
る。次にRPHA法では、精製したHBs抗体を凝
集試験用担体として哺乳動物の赤血球に感作して
HBs抗体感作赤血球を製し、このものと検体と
を水性溶媒中で混合した時に凝集反応がみられる
か否かによつて、検体中にHBs抗原が含まれて
いるか否かを検知することができる。さらにある
種のウイルスと鳥類の赤血球とはウイルスの有す
る凝集素の作用により赤血球を水性溶媒中で凝集
させる。この水性溶媒中での凝集反応の有無を調
べ、凝集の強弱によつてウイルスの濃度を定量的
に測定することができる。 水性溶媒中での凝集反応を利用した凝集試験は
簡便でかつ測定感度も高いので各種抗原や坑体の
検査に広く利用されている。特に、抗原又は抗体
を感作した赤血球を使用する凝集反応において
は、抗原又は抗体の感作量が少ない場合でも高い
試験感度を示すものであるので、当該赤血球を担
体とする試験方法は特に好ましいものである。し
かしこの方法における水性溶媒中での凝集反応の
欠点は、リポプロテインやフイブリノゲン又は部
分変性をうけた蛋白質などの凝似反応物質が混在
する検体においては、非特異的な凝集反応が起つ
て判定を誤りやすいことである。このような検体
を測定する場合には、これらの凝似反応物の影響
が出てこない程度にまで予め希釈した後に測定を
行うか、もしくは適当な確認試験法を用いて水性
溶媒中での凝集反応の真偽を確かめる必要があ
る。蛋白質である赤血球を担体とする場合には、
疑似反応が特に問題とされる。 そこでこれらの水性溶媒中での非特異的凝集反
応を少くする方法としては、測定に用いる水性溶
媒の中に少量の動物蛋白や可溶性赤血球膜成分を
加えることによりある程度改善されることが既に
知られている。しかしなお多くの非特異反応が残
るのでさらに良い改善方法の出現が待望されてい
た。また非特異反応を消去する別の方法として検
体中のこれらの疑似反応物質を予めカオリンや血
球などに吸着させて除去することも止むを得ず行
われているが、多数の検体を同時にかつ短時間に
処理するにはあまりにも煩雑であつた。 本発明の目的は抗原又は抗体感作赤血球を使用
する凝集試験における非特異反応を消去し、極め
て検出特異性の優れた凝集試験用水性溶媒を提供
せんとするにある。 発明者等は永年免疫反応に基づく凝集試験にお
いて、その非特異反応を消去するため試験方法の
改良研究を続け、上記試験において測定系に少量
のエチレンジアミン４酢酸塩を加えることによ
り、測定特異性が顕著に改善されることを見出
し、この新知見に基づいて本発明を完成した。 本発明は免疫反応に基づいて抗原又は抗体（但
し、抗原又は抗体は赤血球に担体されている）と
検体とを水性溶媒中で混合し、その凝集反応を追
跡して抗原や抗体を測定する凝集試験において使
用される水性溶媒であつて、エチレンジアミン４
酢酸塩を0.01〜0.1Mの濃度において含むことを
特徴とする凝集試験用水性溶媒に関するものであ
る。 水性溶媒としては、公知のあらゆる凝集試験用
水性溶媒を利用でき、例えば水、生理食塩水、各
種緩衝液（リン酸緩衝液、トリス塩酸緩衝液、ホ
ウ酸緩衝液、グリシン緩衝液）、アルブミン溶液、
デキストラン溶液、正常ヒト及び動物血清溶液、
合成高分子物質の溶液、界面活性剤含有水溶液お
よびこれらの組み合せからなる溶液がある。水性
溶媒の好適なPHは約6.5〜9.0であり、緩衝液でPH
を調整することが好ましい。水性溶媒に含まれる
塩の濃度は比較的低濃度であることが好ましく、
より好ましくは生理的等張な溶液である。なおこ
の水性溶媒に前記公知の非特異的凝集反応阻止物
質（動物蛋白や可溶性赤血球膜成分）を混合して
もよい。 本発明に係る水性溶媒を用いる凝集試験用担体
は動物（例えばヒツジ、モルモツト、Ｏ型の人、
ニワトリなど）の赤血球をホルマリン、グルタル
アルデヒドなどで固定したものである。担体の大
きさは約20μ以下が好ましく５〜15μ程度の粒状
のものが特に好ましい。このような粒状担体に抗
原又は抗体を感作させる処理は公知の方法に準じ
て行う。 本発明に係る水性溶媒を使用した凝集試験の効
果を証明するための実験を行こなつた。まずモル
モツトに精製HBs抗原を免疫してHBs抗血清を
得、この抗血清を硫安分画法とイオン交換クマト
グラフイー法とで処理して精製HBs抗体を得、
この精製HBs抗体をグルタルアルデヒドにより
固定されたヒツジ赤血球に感作してHBs抗体感
作ヒツジ赤血球を得る。 他方0.1Mリン酸緩衝液（PH7.5）に正常動物血
清及びヒツジ赤血球膜成分とを加えたRPHA法
用の既知溶媒を調製し、この水性溶媒に第１表に
示す如くエチレンジアミン４酢酸塩（EDTA−
3Na）を加えて本発明に係る水性溶媒を調製し、
コントロールとして無添加のものを用意した。 従来方法による確認試験の結果非特異凝集を起
こすことが知られている。クエン酸塩加人血漿の
３検体（表中１のNo.１、No.２及びNo.３）を
RPHA法に従い、この３種類の溶媒を用いてマ
イクロプレート上でそれぞれ２倍数希釈を行い、
この希釈列に上記HBs抗体感作ヒツジ赤血球を
混合した。別にHBs抗原が陽性の検体（No.４）
を同様に処理して試験した。なお混合液量は検体
希釈液25μ、HBs抗体感作ヒツジ赤血球25μ
であり室温で２時間後の凝集の強さ（凝集度）を
４、３、２、１で評価とし、非凝集を評価０とし
て第１表の成積を得た。

【表】 第１表から判るようにEDTA−3Naを加えた
水性溶媒では１：16〜１：32の非特異凝集が１：
１〜１：８で抑制されている。また陽性検体（検
体No.４）ではこれを添加しても陽性となり、陽性
検体に影響しないことを示している。 本発明によるときは免疫反応に基づく抗原又は
抗体と検体との凝集試験において、非特異凝集を
著るしく抑制しうる水性溶媒を得ることができ、
各種抗原や抗体の測定に利用されている凝集試験
を簡素化すると共に検出非特異性を顕著に高めう
る効果を有す。 実施例 １ エチレンジアミン４酢酸３ナトリウム塩4.0ｇ
及び20％ウシ血清アルブミン10mlにPH7.6の0.1M
リン酸緩衝液を加えて凝集試験用水性溶媒200ml
を調製する。 実施例 ２ エチレンジアミン４酢酸３ナトリウム塩8.0ｇ
と20％ウシ血清アルブミン10mlにPH7.6の0.1Mリ
ン酸緩衝液を加えて凝集試験用水性溶媒200mlを
調製する。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ 免疫反応に基づいて抗原又は抗体（但し、抗
   原又は抗体は赤血球に担持されている）と検体と
   を水性溶媒中で混合し、その凝集反応を追跡して
   抗原や抗体を測定する凝集試験において使用され
   る水性溶媒であつて、エチレンジアミン４酢酸塩
   を0.01〜0.1Mの濃度において含むことを特徴と
   する凝集試験用水性溶媒。