JP2000258419A - 免疫測定試薬及び免疫測定法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 （修正有） 【課題】 検体中の抗体又は抗原とそれに対応する抗原
又は抗体を感作した不溶性担体粒子との抗原抗体反応に
おいて、測定感度を低下させることなく非特異反応を抑
制できる免疫測定試薬及び免疫測定法を提供する。 【解決手段】 検体中の抗体又は抗原と抗原抗体反応を
生じる抗原又は抗体を感作した不溶性担体粒子及び塩化
カリウムからなる免疫測定試薬、検体中の抗体と抗原抗
体反応を生じる抗原を感作した不溶性担体粒子及び塩化
カリウムからなる免疫測定試薬、検体中の抗体又は抗原
及びこれと抗原抗体反応を生じる抗原又は抗体を感作し
た不溶性担体粒子とを混合して反応させ、混合溶液中の
抗原抗体反応により生じる不溶性担体粒子の凝集を検出
又は測定する免疫測定法において、該抗原抗体反応の溶
液中に塩化カリウムを存在させることを特徴とする免疫
測定法。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、抗原又は抗体を感
作した不溶性担体粒子からなる免疫測定試薬及び免疫測
定法に関する。特に、トレポネーマ・パリダム等の感染
症病原体に由来する抗原に対する抗体の免疫測定試薬及
び免疫測定法に関する。

【０００２】

【従来の技術】近年、医療分野において、血液や尿な
ど、様々な物質が含まれる検体中の特定の物質を検出す
るために、感度や特異性に優れる抗原及び抗体にもとづ
く抗原抗体反応を利用した測定法が開発され広く用いら
れている。例えば、抗体又は抗原を不溶性担体粒子に担
持（以下、感作という）させ、これを測定試薬として、
この測定試薬と検体中の抗原又は抗体とを混合して反応
させ、混合溶液中で抗原抗体反応により生じる不溶性担
体粒子の凝集の度合いを検出又は測定する粒子凝集にも
とづく免疫測定法が広く用いられている。上記粒子凝集
にもとづく免疫測定法としては、赤血球凝集反応法、ラ
テックス凝集法が挙げられる。

【０００３】上記粒子凝集にもとづく免疫測定の中で
は、不溶性担体粒子の粒径、比重、表面官能基等の性質
を自由にコントロールできることからポリスチレン等の
ラテックス粒子用いるラテックス凝集法用の測定試薬及
びそれを用いる測定法が広く用いられている。上記粒子
凝集にもとづく免疫測定法は、蛍光抗体法や酵素免疫測
定法などの他の免疫測定法に比較して、構成試薬が少な
く、煩雑な洗浄操作等も必要とせずに測定操作が簡単
で、しかも、測定時間が短くて済むという優れた特徴を
有する点から、数多くの様々な抗原や抗体を測定対象項
目とした免疫測定試薬が開発されている。

【０００４】測定対象項目としては、例えば、トレポネ
ーマ・パリダム（梅毒）、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、エイズ
等の感染性病原体に対する抗体が挙げられ、これらの測
定対象項目は輸血等の緊急検査項目、感染症診断のスク
リーニング項目として重視され、検査頻度の高いものと
なっている。また、これら感染性病原体に対する抗体の
測定は、測定の簡便性、迅速性、測定感度や再現性など
測定精度の向上が求められるだけでなく、偽陽性の原因
となり、誤診につながる非特異反応がない測定の特異性
向上も強く求められている。

【０００５】従来、測定の特異性向上のために非特異反
応を抑える試みとして、例えば、反応試薬中にウシ血清
アルブミン（ＢＳＡ）やウマ血清アルブミン（ＨＳＡ）
などを添加して非特異反応を抑える手法が報告（特開昭
５８−１４４７４８号公報、特開平３−９４１６号公
報）されているが、完全に非特異反応を抑えることは困
難である。一方、測定感度や再現性など測定精度の向上
させる試みとして、例えば、ポリエチレングリコール
（ＰＥＧ）などの水溶性高分子化合物を添加する方法が
報告（特開昭５８−４７２５６号公報、特開平２−２５
７０６３号公報）されているが、測定感度の上昇と共に
非特異反応も増加するなどの問題がある。また、塩化ナ
トリウムを加えて非特異反応を抑える方法も報告（特開
平８−１０５８９７号公報）されているが、この方法は
非特異反応を抑える反面、測定感度の低下も同時に引き
起こすという問題を有している。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】請求項１〜５に記載の
発明は、検体中の抗体又は抗原とそれに対応する抗原又
は抗体を感作した不溶性担体粒子との抗原抗体反応にお
いて、測定感度を低下させることなく非特異反応を抑制
できる免疫測定試薬を提供するものである。請求項６〜
９に記載の発明は、検体中の抗体又は抗原とそれに対応
する抗原又は抗体を感作した不溶性担体粒子との抗原抗
体反応において、測定感度を低下させることなく非特異
反応を抑制できる免疫測定法を提供するものである。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明は、以下の（１）
〜（９）に関する。 （１）検体中の抗体又は抗原と抗原抗体反応を生じる抗
原又は抗体を感作した不溶性担体粒子及び塩化カリウム
からなる免疫測定試薬。 （２）検体中の抗体と抗原抗体反応を生じる抗原を感作
した不溶性担体粒子及び塩化カリウムからなる免疫測定
試薬。 （３）塩化カリウムの濃度が、検体中の抗体又は抗原及
びそれに対応する抗原又は抗体を感作した不溶性担体粒
子との反応時の最終濃度として０．００５〜０．５モル
／Ｌの範囲であるように調製されてなる上記（１）又は
（２）記載の免疫測定試薬。 （４）検体中の抗体と抗原抗体反応を生じる抗原が感染
症病原体に由来する抗原である上記（３）記載の免疫測
定試薬。 （５）検体中の抗体と抗原抗体反応を生じる抗原がトレ
ポネーマ・パリダムに由来する抗原である上記（３）記
載の免疫測定試薬。

【０００８】（６）検体中の抗体又は抗原及びこれと抗
原抗体反応を生じる抗原又は抗体を感作した不溶性担体
粒子とを混合して反応させ、混合溶液中の抗原抗体反応
により生じる不溶性担体粒子の凝集を検出又は測定する
免疫測定法において、該抗原抗体反応の溶液中に塩化カ
リウムを存在させることを特徴とする免疫測定法。 （７）検体中の抗体及びこれと抗原抗体反応を生じる抗
原を感作した不溶性担体粒子とを混合して反応させ、混
合溶液中の抗原抗体反応により生じる不溶性担体粒子の
凝集を検出又は測定する免疫測定法において、該抗原抗
体反応の溶液中に塩化カリウムを存在させることを特徴
とする免疫測定法。 （８）塩化カリウムの濃度が、検体中の抗体又は抗原及
びそれに対応する抗原又は抗体を感作した不溶性担体粒
子との反応時の最終濃度として０．００５〜０．５モル
／Ｌの範囲であることを特徴とする上記（６）又は
（７）記載の免疫測定法。 （９）検体中の抗体と抗原抗体反応を生じる抗原がトレ
ポネーマ・パリダムに由来する抗原である上記（６）〜
（８）のいずれかに記載の免疫測定法。

【０００９】

【発明の実施の形態】本発明の免疫測定試薬は、検体中
の抗体又は抗原と抗原抗体反応を生じる抗原又は抗体を
感作した不溶性担体粒子及び塩化カリウムからなる。本
発明の免疫測定試薬において、塩化カリウムは、感度が
低下することなく、非特異反応が抑制されればいかなる
濃度でもよいが、検体中の抗体又は抗原及びそれに対応
する抗原又は抗体を感作した不溶性担体粒子との反応時
の最終濃度として塩化カリウムの濃度が、０．００５〜
０．５モル／Ｌの範囲であることが好ましく、より好ま
しくは０．０１〜０．５モル／Ｌの範囲であり、さらに
好ましくは、０．０４〜０．４モル／Ｌの範囲である。
０．００５モル／Ｌ未満であると、非特異反応が抑制で
きない傾向となり、０．５モル／Ｌを超えると感度が低
下する傾向となる。

【００１０】本発明の免疫測定試薬の構成として、抗原
又は抗体を感作した不溶性担体粒子及び塩化カリウム
は、適当な緩衝液に分散及び溶解することが好ましい。
この場合、前記抗原又は抗体を感作した不溶性担体粒子
及び塩化カリウムは、同一の緩衝液に分散及び溶解して
１液のラテックス試薬として使用しても、各々、別個の
緩衝液に分散又は溶解させてラテックス試薬と塩化カリ
ウム溶液の試薬として２試薬として使用してもよい。

【００１１】ここで、上記抗原又は抗体を感作した不溶
性担体粒子や塩化カリウムを分散又は溶解するための緩
衝液としては、一般に、生化学分野で使用される緩衝液
を利用することができ、このような緩衝液としては、例
えば、リン酸緩衝液、グリシン緩衝液、トリス緩衝液、
グッド緩衝液等が挙げられる。なお、上記緩衝液として
は、本発明の効果を阻害しない範囲で塩化ナトリウム等
の塩を添加することもできる。上記緩衝液のpHとして
は、pH５．０〜１１．０が好ましく、より好ましくはpH
６．０〜１０．０、さらに好ましくはpH６．５〜９．０
である。

【００１２】本発明の抗原又は抗体を感作した不溶性担
体粒子において、使用する不溶性担体粒子としては、抗
原又は抗体を感作させることができるものであれば特に
制限されないが、例えば、セルロース、アガロース、デ
キストラン等の天然高分子、ポリスチレン、スチレン−
メタクリル酸の共重合体、スチレン−ブタジエンの共重
合体のような有機合成高分子のラテックスやシリカ、ア
ルミナのような無機酸化物及び金コロイドのような金属
等が挙げられる。これらの中では、不溶性担体粒子の粒
径、比重、表面官能基等の性質を自由にコントロールで
きることからポリスチレン等のラテックス粒子が好まし
い。

【００１３】使用する不溶性担体粒子の平均粒径は、
０．０１〜１０μｍの範囲が好ましく、０．０５〜５μ
ｍの範囲がより好ましい。担体の粒径が小さすぎると、
検出感度が低下する傾向となり、担体の粒径が大きすぎ
ると、抗原（タンパク質）分子の結合可能な表面積（結
合部位）が少なくなり、これに伴い測定可能な濃度範囲
が狭くなる傾向となる。また、これらの不溶性担体粒子
を分散させる媒体として、又、不溶性担体粒子に抗原又
は抗体を感作させる際に用いる媒体としては、前記生化
学分野で一般に使用される緩衝液を利用することができ
る。

【００１４】本発明において検体中の抗体又は抗原、即
ち、測定対象項目としては、抗原抗体反応を利用して測
定可能であれば特に制限されない。例えば、抗原として
は、ペプチド、蛋白質、リポ蛋白質、リン脂質、リポ多
糖、核酸などが挙げられ、具体的には、リウマチ様因
子、Ｃ反応性蛋白質、フィブリノーゲン、α−フェトプ
ロテイン、アポリポ蛋白（ＡＩ、ＡII、Ｂ、ＣII、ＣII
I、Ｅ等）、コラーゲンなどが挙げられる。抗体として
は、各種抗原に対する抗体であり、例えば、抗ストレプ
トリジンＯ抗体、梅毒抗体、クラミジア抗体（クラミジ
ア・トラコマティス、クラミジア・ニューモニエ、クラ
ミジア・シタシ等）、風疹抗体、ＨＢｓ抗体、ＨＢｃ抗
体、ＨＢｅ抗体、ＨＣＶ抗体、ＨＴＬＶ（Ｉ、II、III
等）抗体等の各種感染性病原体に対する抗体、ミルク抗
原、卵白抗原、大豆抗原等の食物抗原に対する抗体、ダ
ニ、ハウスダスト等のアレルゲンに対する抗体などが挙
げられる。これらの中では、血清中の梅毒抗体、クラミ
ジア抗体、検査頻度の高いスクリーニング項目、輸血検
査等における緊急検査項目が好ましい項目として挙げら
れる。

【００１５】上記のような検体中の抗体又は抗原におい
て、それと抗原抗体反応を生じる抗原又は抗体を不溶性
担体粒子に感作する。本発明において、検体中の物質が
抗原の場合、不溶性担体粒子の感作に使用する抗体は、
ポリクローナル抗体であってもモノクローナル抗体であ
ってもよく、免疫グロブリン又はその断片（Ｆ(ａｂ′)
₂、Ｆａｂ、Ｆｃ等）或いはそれらの混合物であっても
よい。

【００１６】また、検体中の物質が感染性病原体に由来
する抗原に対する抗体の場合、不溶性担体粒子の感作に
使用する抗原としては、感染性病原体、その外膜成分及
び感染性病原体の産生する外毒素等由来の抽出成分及び
精製物などが挙げられ、特異性の点から精製物であるこ
とが好ましく、さらに測定感度を向上でき、測定範囲を
広くできる点からそれらの混合物であることがより好ま
しい。例えば、検体中の物質がトレポネーマ・パリダム
（梅毒）に対する抗体の場合、感作に使用する抗原は、
トレポネーマ・パリダム由来の菌体抗原であってもよい
が、特異性の観点から抽出した抗原であることが好まし
く、精製した１５ｋＤａ、１７ｋＤａ、３７ｋＤａ、４
７ｋＤａ等の外膜由来の特異抗原又はそれらの混合物で
あることがさらに好ましい。

【００１７】本発明において、抗原を不溶性担体粒子に
感作する方法は、通常行われるように、物理的に吸着さ
せてもよく、化学的に結合させてもよく、さらに、両方
を併用してもよい。感作する抗原又は抗体の量は不溶性
担体粒子の粒径や使用濃度により大きく異なるが、測定
範囲を広くするためには、通常は感作できる最大量（不
溶性担体粒子の表面の結合可能な部位を完全に覆う飽和
量）で感作されるのが好ましい。しかし、測定範囲が問
題にならない場合は、最大量より少ない量で感作でき
る。不溶性担体粒子に抗原を感作した後は、通常、不溶
性担体粒子上の未感作部分をアルブミン、グロブリン、
カゼイン、ゼラチン等で被覆するが、飽和量で感作した
場合には不必要なこともある。

【００１８】抗原又は抗体を物理的に不溶性担体粒子に
感作させる方法としては、例えば、抗原又は抗体を含有
する溶液と不溶性担体粒子とを接触させることで感作で
きる。感作時には攪拌や振とうを行ってもよく、静置し
ておいてもよい。感作時の温度は、抗原又は抗体を変性
させない観点から、４〜４０℃であることが好ましい。
感作時の時間は、３０分間以上であればよく、３０分間
〜４８時間であることが好ましい。

【００１９】また、抗原又は抗体を化学的に不溶性担体
粒子に結合させる方法としては、例えば、抗原又は抗
体、表面にカルボキシル基を有する不溶性担体粒子及び
カルボジイミドを混合して放置する方法又は前記抗原又
は抗体、表面にアミノ基を有する不溶性担体粒子及びグ
ルタルアルデヒドを混合して放置する方法等が挙げられ
る。抗原又は抗体を感作した不溶性担体粒子を分散させ
る媒体としては、前記生化学分野で一般に使用される緩
衝液を利用することができる。さらに、上記緩衝液中
に、必要に応じ、ショ糖等の糖類、ウシ血清アルブミン
（ＢＳＡ）等の蛋白を適宜添加することができる。な
お、前述の如く本発明の免疫測定試薬の構成として、抗
原又は抗体を感作した不溶性担体粒子及び塩化カリウム
は、同一の媒体である緩衝液に分散及び溶解して１液の
ラテックス試薬として使用しても、各々、別個の媒体に
分散又は溶解させてラテックス試薬と塩化カリウム溶液
の試薬として２試薬として使用してもよい。

【００２０】また、本発明の免疫測定試薬において、抗
原又は抗体を感作した不溶性担体粒子及び塩化カリウム
以外の成分として、抗原抗体反応における凝集反応の反
応性を調節するため、凝集反応を促進する物質や凝集反
応を抑制する物質を添加し溶解させることができる。

【００２１】使用される凝集反応を促進する物質として
は、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、デキ
ストラン、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）等が挙げら
れる。これらの重量平均分子量としては、１，０００以
上のものが好ましく、１，０００〜５００，０００の範
囲内であることがより好ましい。選択されるＰＥＧの重
量平均分子量が、１，０００未満であると、十分な測定
感度が得られず、その使用濃度を高くすることによりあ
る程度測定感度を向上できるが、それに伴い目的の抗原
抗体反応以外の不溶性担体粒子の非特異的な凝集反応が
生じる傾向となり、ＰＥＧが重量平均分子量５００，０
００を超えると溶液の粘度が高くなることに起因し、抗
原抗体反応や測定時に気泡等が生じ易く、測定値の異常
値が発生したり、測定値の再現性が低下する傾向とな
る。さらに、試薬製造時に溶液のろ過工程の処理時間が
長くなり、フィルターの目詰まりを起こし易くなり、製
造効率が低下する傾向となる。上記凝集反応を促進する
物質は最終反応液の濃度で０．１〜５．０重量％の範囲
で存在させるのが好ましい。これらの凝集反応を促進す
る物質は一種又は二種以上組み合わせ使用できる。

【００２２】凝集反応を抑制する物質としては、トリア
ルキルアミン、その塩類、第４級アンモニウム塩及び糖
類などが挙げられる。トリアルキルアミンとしては、ト
リエチルアミン等、トリアルキルアミンの塩類としては
トリエチルアミンの塩酸塩等、第４級アンモニウム塩と
しては、塩化コリン、臭化コリン、塩化アセチルコリ
ン、臭化アセチルコリン、塩酸ベタイン等、糖類として
はショ糖等がある。上記凝集反応を抑制する物質は、最
終反応液中の濃度で０〜３Ｍの範囲で存在させることが
好ましい。濃度が高すぎると測定感度が低下し、測定試
薬の粘度増加とともに測定値の再現性が低下する傾向と
なる。これらの凝集反応を抑制する物質は一種又は二種
以上組み合わせ使用できる。また、感作した抗原と試料
中の抗体との反応性が低い場合には、このような凝集反
応を抑制する物質を入れることなく測定を行うことがで
きる。なお、凝集反応を促進する物質及び抑制する物質
とを組み合わせ使用することにより粒子凝集反応の反応
性を微調節することもできる。

【００２３】上記、反応を促進する物質や反応を抑制す
る物質は、本発明の塩化カリウムと同様に、抗原又は抗
体を感作した不溶性担体粒子と同一の媒体である緩衝液
に分散及び溶解して１液のラテックス試薬として使用し
ても、抗原又は抗体を感作した不溶性担体粒子を分散し
た試薬とは別個の緩衝液に溶解させた試薬として２試薬
として使用してもよい。

【００２４】以下、上記本発明の免疫測定試薬を用いた
免疫測定法について説明する。本発明において、検体と
しては、検体中の抗体又は抗原を含有するものであれば
これらに制限されるものではない。例えば、ヒトの各種
液体成分、既知濃度の標準液等が挙げられるが、検体提
供者の臨床像が反映される点から、ヒト血液、ヒト涙、
ヒト咽頭ぬぐい液又はヒト尿等が好ましく、これらの中
では、ヒト血液がより好ましく、ヒト血清がさらに好ま
しい。

【００２５】本発明の免疫測定法は、検体中の検体中の
抗体又は抗原及びこれと抗原抗体反応を生じる抗原又は
抗体を感作した不溶性担体粒子とを混合して反応させ、
混合溶液中の抗原抗体反応により生じる不溶性担体粒子
の凝集を検出又は測定する免疫測定法において、該抗原
抗体反応の溶液中に塩化カリウムを存在させることを特
徴とするものである。

【００２６】即ち、測定対象の抗体又は抗原を含む検体
の一定量と前記本発明の抗原又は抗体を感作した不溶性
担体粒子及び塩化カリウムからなる免疫測定試薬の一定
量とを混合する。その結果、測定対象である抗体又は抗
原が存在する場合は、その抗体又は抗原分子が抗原又は
抗体を感作させた不溶性担体粒子の架橋剤として作用
し、不溶性担体粒子の凝集が生じる。本発明の免疫測定
法としては、最終的にこの不溶性担体粒子の凝集を測定
する。上記不溶性担体粒子の凝集を測定する方法として
は、例えば、凝集像を目視によって観察し判定する方法
或いは凝集の程度や凝集の変化を光学的に測定する方法
などが挙げられる。

【００２７】より具体的には、凝集像を目視によって観
察し判定する方法としては、抗原又は抗体を感作した不
溶性担体粒子及び塩化カリウムからなる免疫測定試薬と
検体とをマイクロプレート中或いは判定板上で混合し、
一定時間後の凝集像を目視によって観察し判定する方法
が挙げられる。また、凝集の程度や凝集の変化を光学的
に測定する方法としては、抗原又は抗体を感作した不溶
性担体粒子及び塩化カリウムからなる免疫測定試薬を検
体とを混合し、濁りやその変化、粒度分布やその変化と
して、光学的強度を測定する方法などが挙げられる。な
お、本発明において、「光学強度」とは、吸光度又は散
乱光強度を意味する。光学的に測定する場合の測定装置
としては、汎用の分光光度計、分光生化学自動分析装
置、専用装置、粒子計数装置等が挙げられ使用できる。

【００２８】少数の検体を緊急で検査する場合、また、
測定装置がない施設において、測定の迅速性と操作の簡
便性を重視する場合には、目視判定による測定ができ
る。しかし、目視判定のような主観性を排除し、測定結
果の客観性や再現性を重視する場合には、光学的な測定
が好ましい。

【００２９】汎用の分光光度計、分光生化学自動分析装
置、専用装置を用いる方法として、具体的には、反応混
合物に光を照射して、粒子の凝集に起因する濁りの変化
を、吸光度又は散乱光強度等の光学的強度の変化（変化
速度、一定時間あたりの変化量等を含む）を測定する。
測定する光の波長は、特に制限されないが、感度、測定
範囲等の面から４００〜１２００nmが好ましい。測定波
長が４００nm以下では媒体分散液自体の光学的強度が大
きくなり、測定範囲が狭くなる。測定は１波長で行って
も良いし、２波長で行っても良い。測定波長を２波長
（主波長及び副波長）に設定すると、セルの汚れや迷光
及び電気的ノイズ等による測定値の変動が少なくなり、
測定精度が向上する。２波長に設定する場合にも、測定
波長は４００〜１２００nmに範囲から選択される２波長
が好ましく、特に選択される２波長の差は１００〜５０
０nmの範囲にあることが好ましい。２波長の差が１００
nm以下であると感度が低くなり、５００nmを超えると２
波長測定の効果が得られにくくなる傾向となる。また、
感度の面から、散乱光強度よりも、吸光度を測定するこ
とが好ましい。なお、光学的強度の測定は、反応開始後
の光学的強度の変化量又は変化速度を、１回又は２回以
上の点での測定により求めることができる。

【００３０】さらに、光学的な粒子計数装置を用いる方
法（カウンティングイムノアッセイ法）によっても測定
できる。これは、抗原抗体反応による個々のラテックス
凝集をシースフロー中でレーザー光の散乱強度として検
出解析することにより、未凝集ラテックス数と凝集ラテ
ックス数を直接カウントすることができ、微量のタンパ
ク質も高感度に測定できる。

【００３１】

【実施例】以下、実施例により本発明を説明する。 実施例１ １．ＴＰ抗原感作ラテックス試薬の調製 抗原抗体反応を生じる抗原として、トレポネーマ・パリ
ダム由来の抽出抗原（以下ＴＰ抗原と略す）をミツバ貿
易株式会社（本社：東京都新宿区四谷）から購入した。
ＴＰ抗原を５ml、１００ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液
（pH７．８）を３ml及び１０（Ｗ／Ｖ）％ポリスチレン
ラテックス粒子（粒径０．４μｍ、日本合成ゴム(株)
製）を２ml、蓋付きポリプロピレン容器内で混合し、２
５℃で１時間、往復振とう（６０往復／分）した。次
に、１２、０００×ｇで１０分間遠心分離し、上清を捨
て、沈殿に１％（Ｗ／Ｖ）ＢＳＡを５０ml加えた後、再
懸濁した。この操作を２回繰り返して、未感作のＴＰ抗
原を除去した。最後にラテックス粒子の濃度が０．０５
％になるように１％（Ｗ／Ｖ）ＢＳＡを加え、ＴＰ抗原
感作ラテックス試薬（Ｒ２と略す）を得た。

【００３２】２．塩化カリウム含有試薬の調製 ウシ血清アルブミン（以下、ＢＳＡと略す）を１００ｍ
Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（pH７．８）に溶解し１％
（Ｗ／Ｖ）ＢＳＡ溶液を調製した。次いで、平均分子量
２０，０００のＰＥＧを３．５％（Ｗ／Ｖ）、塩化カリ
ウムを０．１Ｍになるように上記１％ＢＳＡ溶液に溶解
して、塩化カリウム含有試薬を得た（Ｒ１−１と略
す）。

【００３３】３．測定方法 測定は日立７１５０型全自動分析装置（日立製作所製）
を用い、測定条件は以下のように設定した。 検体量：２０μｌ Ｒ１容量：１２０μｌ Ｒ２容量：１２０μｌ 波長：７００nm 測定温度：３７℃ Ｒ１としてここではＲ１−Ａを用いた。測定方法は、測
定開始後、６０秒目と３００秒目における測定波長７０
０nmでの吸光度の変化量（以下ΔＯＤ７００と略す）を
測定した。検体は、梅毒陰性血清を５種類、梅毒陽性血
清を５種類用いた。

【００３４】実施例２ １． ＴＰ抗原感作ラテックス試薬の調製 実施例１と同様に行った。 ２．塩化カリウム含有試薬の調製 ？ＢＳＡを１００ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（pH７．
８）に溶解し１％（Ｗ／Ｖ）ＢＳＡ溶液を調製した。次
いで、平均分子量２０，０００のＰＥＧを３．５％（Ｗ
／Ｖ）、塩化カリウムを０．３Ｍになるように上記１％
ＢＳＡ溶液に溶解して、塩化カリウム含有試薬を得た
（Ｒ１−２と略す）。 ３．測定方法 Ｒ１−１の代わりにＲ１−２を用いた他は実施例１と同
様に行った。

【００３５】実施例３ １．ＴＰ抗原感作ラテックス試薬の調製 実施例１と同様に行った。 ２．塩化カリウム含有試薬の調製 ＢＳＡを１００ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（pH７．
８）に溶解し１％（Ｗ／Ｖ）ＢＳＡ溶液を調製した。次
いで、平均分子量２０，０００のＰＥＧを３．５％（Ｗ
／Ｖ）、塩化カリウムを０．５Ｍになるように上記１％
ＢＳＡ溶液に溶解して、塩化カリウム含有試薬を得た
（Ｒ１−３と略す）。 ３．測定方法 Ｒ１−１の代わりにＲ１−３を用いた他は実施例１と同
様に行った。

【００３６】実施例４ １．ＴＰ抗原感作ラテックス試薬の調製 実施例１と同様に行った。 ２．塩化カリウム含有試薬の調製 ＢＳＡを１００ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（pH７．
８）に溶解し１％（Ｗ／Ｖ）ＢＳＡ溶液を調製した。次
いで、平均分子量２０，０００のＰＥＧを３．５％（Ｗ
／Ｖ）、塩化カリウムを０．７Ｍになるように上記１％
ＢＳＡ溶液に溶解して、塩化カリウム含有試薬を得た
（Ｒ１−４と略す）。 ３．測定方法 Ｒ１−１の代わりにＲ１−４を用いた他は実施例１と同
様に行った。

【００３７】比較例１ １．ＴＰ抗原感作ラテックス試薬の調製 実施例１と同様に行った。 ２．塩化カリウム無添加試薬の調製 ＢＳＡを１００ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（pH７．
８）に溶解し１％（Ｗ／Ｖ）ＢＳＡ溶液を調製した。次
いで、平均分子量２０，０００のＰＥＧを３．５％（Ｗ
／Ｖ）になるように、上記１％ＢＳＡ溶液に溶解し、塩
化カリウム無添加試薬を得た（Ｒ１−Ｃ１と略す）。 ３．測定方法 Ｒ１−１の代わりにＲ１−Ｃ１を用いた他は実施例１と
同様に行った。

【００３８】比較例２ １．ＴＰ抗原感作ラテックス試薬の調製 実施例１と同様に行った。 ２．塩化ナトリウム含有試薬の調製 ＢＳＡを１００ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（pH７．
８）に溶解し１％（Ｗ／Ｖ）ＢＳＡ溶液を調製した。次
いで、平均分子量２０，０００のＰＥＧを３．５％（Ｗ
／Ｖ）、塩化ナトリウムを０．１Ｍになるように上記１
％ＢＳＡ溶液に溶解して、塩化ナトリウム含有試薬を得
た（Ｒ１−Ｃ２と略す）。 ３．測定方法 Ｒ１−１の代わりにＲ１−Ｃ２を用いた他は実施例１と
同様に行った。

【００３９】比較例３ １．ＴＰ抗原感作ラテックス試薬の調製 実施例１と同様に行った。 ２．塩化ナトリウム含有試薬の調製 ＢＳＡを１００ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（pH７．
８）に溶解し１％（Ｗ／Ｖ）ＢＳＡ溶液を調製した。次
いで、平均分子量２０，０００のＰＥＧを３．５％（Ｗ
／Ｖ）、塩化ナトリウムを０．３Ｍになるように上記１
％ＢＳＡ溶液に溶解して、塩化ナトリウム含有試薬を得
た（Ｒ１−Ｃ３と略す）。 ３．測定方法 Ｒ１−１の代わりにＲ１−Ｃ３を用いた他は実施例１と
同様に行った。

【００４０】比較例４ １．ＴＰ抗原感作ラテックス試薬の調製 実施例１と同様に行った。 ２．塩化ナトリウム含有試薬の調製 ＢＳＡを１００ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（pH７．
８）に溶解し１％（Ｗ／Ｖ）ＢＳＡ溶液を調製した。次
いで、平均分子量２０，０００のＰＥＧを３．５％（Ｗ
／Ｖ）、塩化ナトリウムを０．５Ｍになるように上記１
％ＢＳＡ溶液に溶解して、塩化ナトリウム含有試薬を得
た（Ｒ１−Ｃ４と略す）。 ３．測定方法 Ｒ１−１の代わりにＲ１−Ｃ４を用いた他は実施例１と
同様に行った。

【００４１】比較例５ １．ＴＰ抗原感作ラテックス試薬の調製 実施例１と同様に行った。 ２．塩化ナトリウム含有試薬の調製 ＢＳＡを１００ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（pH７．
８）に溶解し１％（Ｗ／Ｖ）ＢＳＡ溶液を調製した。次
いで、平均分子量２０，０００のＰＥＧを３．５％（Ｗ
／Ｖ）、塩化ナトリウムを０．７Ｍになるように上記１
％ＢＳＡ溶液に溶解して、塩化ナトリウム含有試薬を得
た（Ｒ１−Ｃ５と略す）。 ３．測定方法 Ｒ１−１の代わりにＲ１−Ｃ５を用いた他は実施例１と
同様に行った。

【００４２】以上の結果を表１にまとめた。なお、吸光
度の変化量の値は、ΔＯＤ７００を１０，０００倍を乗
じた値で示した。

【００４３】

【表１】

【００４４】表から明らかなように、比較例１では陰性
血清でも凝集するような非特異反応例が４例存在し、比
較例２〜５では非特異反応例は減少したが、同時に測定
感度の低下が認められた。一方、実施例１〜４では感度
が低下することなく、非特異反応を抑制でき、陰性と陽
性の判別を正確に行うことができた。

【００４５】

【発明の効果】請求項１〜５のいずれかに記載の免疫測
定試薬は、検体中の抗体又は抗原とそれに対応する抗原
又は抗体を感作した不溶性担体粒子との抗原抗体反応に
おいて、塩化カリウムを存在させることで、測定感度が
低下することなく、非特異反応を抑えることができる。
請求項６〜９のいずれかに記載の免疫測定法は、検体中
の抗体又は抗原とそれに対応する抗原又は抗体を感作し
た不溶性担体粒子との抗原抗体反応において、測定感度
が低下することなく、非特異反応を抑えることができ
る。

Claims (9)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 検体中の抗体又は抗原と抗原抗体反応を
   生じる抗原又は抗体を感作した不溶性担体粒子及び塩化
   カリウムからなる免疫測定試薬。
2. 【請求項２】 検体中の抗体と抗原抗体反応を生じる抗
   原を感作した不溶性担体粒子及び塩化カリウムからなる
   免疫測定試薬。
3. 【請求項３】 塩化カリウムの濃度が、検体中の抗体又
   は抗原及びそれに対応する抗原又は抗体を感作した不溶
   性担体粒子との反応時の最終濃度として０．００５〜
   ０．５モル／Ｌの範囲であるように調製されてなる請求
   項１又は２記載の免疫測定試薬。
4. 【請求項４】 検体中の抗体と抗原抗体反応を生じる抗
   原が感染症病原体に由来する抗原である請求項３記載の
   免疫測定試薬。
5. 【請求項５】 検体中の抗体と抗原抗体反応を生じる抗
   原がトレポネーマ・パリダムに由来する抗原である請求
   項３記載の免疫測定試薬。
6. 【請求項６】 検体中の抗体又は抗原及びこれと抗原抗
   体反応を生じる抗原又は抗体を感作した不溶性担体粒子
   とを混合して反応させ、混合溶液中の抗原抗体反応によ
   り生じる不溶性担体粒子の凝集を検出又は測定する免疫
   測定法において、該抗原抗体反応の溶液中に塩化カリウ
   ムを存在させることを特徴とする免疫測定法。
7. 【請求項７】 検体中の抗体及びこれと抗原抗体反応を
   生じる抗原を感作した不溶性担体粒子とを混合して反応
   させ、混合溶液中の抗原抗体反応により生じる不溶性担
   体粒子の凝集を検出又は測定する免疫測定法において、
   該抗原抗体反応の溶液中に塩化カリウムを存在させるこ
   とを特徴とする免疫測定法。
8. 【請求項８】 塩化カリウムの濃度が、検体中の抗体又
   は抗原及びそれに対応する抗原又は抗体を感作した不溶
   性担体粒子との反応時の最終濃度として０．００５〜
   ０．５モル／Ｌの範囲であることを特徴とする請求項６
   又は７記載の免疫測定法。
9. 【請求項９】 検体中の抗体と抗原抗体反応を生じる抗
   原がトレポネーマ・パリダムに由来する抗原である請求
   項６〜８のいずれかに記載の免疫測定法。