JPH08131195A - リポ蛋白分画中のコレステロールの定量方法 - Google Patents
リポ蛋白分画中のコレステロールの定量方法Info
- Publication number
- JPH08131195A JPH08131195A JP31883594A JP31883594A JPH08131195A JP H08131195 A JPH08131195 A JP H08131195A JP 31883594 A JP31883594 A JP 31883594A JP 31883594 A JP31883594 A JP 31883594A JP H08131195 A JPH08131195 A JP H08131195A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cholesterol
- lipoprotein
- fraction
- dehydrogenase
- reaction
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Abstract
(57)【要約】
【構成】 血清中のリポ蛋白の特定分画以外のリポ蛋白
分画をデキストラン硫酸などの凝集剤により凝集させ、
該凝集を除去あるいは溶解することなく、コレステロー
ル脱水素酵素を反応させて、反応初速度（吸光度の増加
速度）を測定する。 【効果】 凝集法において必要とされていた遠心分離の
操作が不要となるので、多数の検体を短時間で処理でき
るようになり、臨床検査の日常業務において自動分析装
置を用いた測定が可能となる。また、検体を扱う上で、
検体に直接手を触れる機会が著しく減少するので、ウイ
ルス感染の危険性も減少できる。さらに、検体量を微量
にすることができるので、採血量に制限がある場合でも
測定が可能となる。
分画をデキストラン硫酸などの凝集剤により凝集させ、
該凝集を除去あるいは溶解することなく、コレステロー
ル脱水素酵素を反応させて、反応初速度（吸光度の増加
速度）を測定する。 【効果】 凝集法において必要とされていた遠心分離の
操作が不要となるので、多数の検体を短時間で処理でき
るようになり、臨床検査の日常業務において自動分析装
置を用いた測定が可能となる。また、検体を扱う上で、
検体に直接手を触れる機会が著しく減少するので、ウイ
ルス感染の危険性も減少できる。さらに、検体量を微量
にすることができるので、採血量に制限がある場合でも
測定が可能となる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、主として臨床検査の分
野での使用を目的とし、血清中のリポ蛋白の特定分画中
のコレステロールを定量すること、特に自動分析装置で
直接定量することに関する。
野での使用を目的とし、血清中のリポ蛋白の特定分画中
のコレステロールを定量すること、特に自動分析装置で
直接定量することに関する。
【０００２】
【発明の背景】臨床検査において動脈硬化性疾患と関連
性の深い診断的指標として、従来からコレステロールが
知られており、血清中のリポ蛋白分画のうちで高比重リ
ポ蛋白（ＨＤＬ）分画中のものが注目されている（渡辺
富久子他，臨床病理，２８，５９〜６２，１９８０）。
一方、一般の検査値が正常であっても冠動脈硬化症を発
症した症例が多いことから、近年では低比重リポ蛋白
（ＬＤＬ）やレムナント様リポ蛋白（ＲＬＰ）分画が注
目されるようになった（中嶋克行，動脈効果，２０，７
９〜８８，１９９２）。
性の深い診断的指標として、従来からコレステロールが
知られており、血清中のリポ蛋白分画のうちで高比重リ
ポ蛋白（ＨＤＬ）分画中のものが注目されている（渡辺
富久子他，臨床病理，２８，５９〜６２，１９８０）。
一方、一般の検査値が正常であっても冠動脈硬化症を発
症した症例が多いことから、近年では低比重リポ蛋白
（ＬＤＬ）やレムナント様リポ蛋白（ＲＬＰ）分画が注
目されるようになった（中嶋克行，動脈効果，２０，７
９〜８８，１９９２）。
【０００３】
【従来の技術】従来、リポ蛋白分画中のコレステロール
を定量するにはリポ蛋白を超遠心、電気泳動、ゲル濾
過、凝集などの方法で分画した後、測定すべき分画中の
コレステロールを公知の方法で定量していた。
を定量するにはリポ蛋白を超遠心、電気泳動、ゲル濾
過、凝集などの方法で分画した後、測定すべき分画中の
コレステロールを公知の方法で定量していた。
【０００４】しかるに、このような方法は臨床検査の分
野では種々の問題があった。即ち、超遠心法、電気泳動
法、ゲル濾過法などは操作が煩雑で長時間かかり、熟練
を要するなど臨床検査の日常業務には不適当とされてい
る。また凝集法は、凝集を形成後、遠心分離操作で上清
を分取するので、短時間に多数の検体を取り扱うことが
できず、自動分析装置を用いて測定することが困難であ
る。更に、検体に直接手を触れる機会が多いためウイル
ス感染の危険性も無視できない。
野では種々の問題があった。即ち、超遠心法、電気泳動
法、ゲル濾過法などは操作が煩雑で長時間かかり、熟練
を要するなど臨床検査の日常業務には不適当とされてい
る。また凝集法は、凝集を形成後、遠心分離操作で上清
を分取するので、短時間に多数の検体を取り扱うことが
できず、自動分析装置を用いて測定することが困難であ
る。更に、検体に直接手を触れる機会が多いためウイル
ス感染の危険性も無視できない。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、この
ような従来の方法を改良し、血清中のリポ蛋白の特定分
画中のコレステロールの測定が臨床検査の日常業務とし
て自動分析装置で直接実施できる方法を提供し、もって
臨床検査の分野に寄与することにある。
ような従来の方法を改良し、血清中のリポ蛋白の特定分
画中のコレステロールの測定が臨床検査の日常業務とし
て自動分析装置で直接実施できる方法を提供し、もって
臨床検査の分野に寄与することにある。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明者らが鋭意研究し
た結果、前述の凝集法が自動分析装置での測定に適応で
きないのは、凝集により生じた濁りが呈色反応に影響し
てブランク値を上昇させるためであることに着目した。
た結果、前述の凝集法が自動分析装置での測定に適応で
きないのは、凝集により生じた濁りが呈色反応に影響し
てブランク値を上昇させるためであることに着目した。
【０００７】従来のコレステロールの定量法は、コレス
テロールエステラーゼとコレステロールオキシダーゼを
用いて生じた過酸化水素を、色素形成による呈色として
終点測定するものである（C.C.Allain,L.S.Poon,et al:
Clin.Chem.20,470,1974)。従って、濁りの影響を避ける
ために、遠心分離して凝集物を除去したり、場合によっ
ては凝集を溶解することが必要であった。
テロールエステラーゼとコレステロールオキシダーゼを
用いて生じた過酸化水素を、色素形成による呈色として
終点測定するものである（C.C.Allain,L.S.Poon,et al:
Clin.Chem.20,470,1974)。従って、濁りの影響を避ける
ために、遠心分離して凝集物を除去したり、場合によっ
ては凝集を溶解することが必要であった。
【０００８】そこで本発明者らは更に研究を重ねた結
果、コレステロールの定量にコレステロールエステラー
ゼと共にコレステロール脱水素酵素を用いて、反応初速
度を測定することにより、濁りの影響を受けることなく
コレステロールを定量できることを見い出し、本発明を
完成するに至った。
果、コレステロールの定量にコレステロールエステラー
ゼと共にコレステロール脱水素酵素を用いて、反応初速
度を測定することにより、濁りの影響を受けることなく
コレステロールを定量できることを見い出し、本発明を
完成するに至った。
【０００９】即ち、本発明は、血清中のリポ蛋白の特定
分画を分離するために、特定分画以外のリポ蛋白分画を
凝集させ、該凝集を除去あるいは溶解することなく、コ
レステロール脱水素酵素を反応させ、反応初速度を測定
することを特徴とするリポ蛋白分画中のコレステロール
の定量方法である。
分画を分離するために、特定分画以外のリポ蛋白分画を
凝集させ、該凝集を除去あるいは溶解することなく、コ
レステロール脱水素酵素を反応させ、反応初速度を測定
することを特徴とするリポ蛋白分画中のコレステロール
の定量方法である。
【００１０】本発明で血清中のリポ蛋白の特定分画を抽
出するために、特定分画以外のリポ蛋白の分画を凝集さ
せる方法としては、本発明の目的を達成できる公知の方
法は全て用いることができる。例えばＨＤＬ分画中のコ
レステロールを定量するために、ＨＤＬ分画以外のリポ
蛋白の分画を凝集させるには、デキストラン硫酸、ヘパ
リン、ＰＥＧ（ポリエチレングリコール）、リンタング
ステン酸、ＢＳＡ（ウシ血清アルブミン）、ショ糖（シ
ュークロース；Ｓｕｃｒｏｓｅ）及びこれらの塩などの
化合物を単独または複数用いるか、更にこれら化合物に
Ｍｇ++、Ｍｎ++、Ｃａ++、Ｌｉ++などの二価の金属を組
み合わせたものを凝集剤として使用することができる。
特に、ＨＤＬ分画以外のリポ蛋白の分画を凝集させる凝
集剤としては、ＰＥＧ、リンタングステン酸及びＭｇ++
を含み、さらにＢＳＡ及び／又はショ糖を含む組み合わ
せが好ましい。例えば、５〜２０％（ｗ／ｖ）のＰＥ
Ｇ、０．４〜２％（ｗ／ｖ）のリンタングステン酸及び
１〜１０ｍＭのＭｇ++を含み、さらに０．１〜５％（ｗ
／ｖ）のＢＳＡ及び／又は１〜５％（ｗ／ｖ）のショ糖
を含む凝集剤が例示される。
出するために、特定分画以外のリポ蛋白の分画を凝集さ
せる方法としては、本発明の目的を達成できる公知の方
法は全て用いることができる。例えばＨＤＬ分画中のコ
レステロールを定量するために、ＨＤＬ分画以外のリポ
蛋白の分画を凝集させるには、デキストラン硫酸、ヘパ
リン、ＰＥＧ（ポリエチレングリコール）、リンタング
ステン酸、ＢＳＡ（ウシ血清アルブミン）、ショ糖（シ
ュークロース；Ｓｕｃｒｏｓｅ）及びこれらの塩などの
化合物を単独または複数用いるか、更にこれら化合物に
Ｍｇ++、Ｍｎ++、Ｃａ++、Ｌｉ++などの二価の金属を組
み合わせたものを凝集剤として使用することができる。
特に、ＨＤＬ分画以外のリポ蛋白の分画を凝集させる凝
集剤としては、ＰＥＧ、リンタングステン酸及びＭｇ++
を含み、さらにＢＳＡ及び／又はショ糖を含む組み合わ
せが好ましい。例えば、５〜２０％（ｗ／ｖ）のＰＥ
Ｇ、０．４〜２％（ｗ／ｖ）のリンタングステン酸及び
１〜１０ｍＭのＭｇ++を含み、さらに０．１〜５％（ｗ
／ｖ）のＢＳＡ及び／又は１〜５％（ｗ／ｖ）のショ糖
を含む凝集剤が例示される。
【００１１】また、同じ目的でアポＢ、アポＣ、β−リ
ポ蛋白などに対する抗体を用いることもできる。これら
抗体は単独又は複数を使用することができ、更に上記の
如き凝集剤に加えることもできる。
ポ蛋白などに対する抗体を用いることもできる。これら
抗体は単独又は複数を使用することができ、更に上記の
如き凝集剤に加えることもできる。
【００１２】このようにして凝集剤、抗体を血清検体に
加えることによって、測定すべき特定分画以外のリポ蛋
白分画は凝集して濁りを生じる。ここにコレステロール
エステラーゼと共にコレステロール脱水素酵素を直接反
応させると、反応初速度として測定ができ、リポ蛋白の
特定分画中のコレステロールが定量できる。
加えることによって、測定すべき特定分画以外のリポ蛋
白分画は凝集して濁りを生じる。ここにコレステロール
エステラーゼと共にコレステロール脱水素酵素を直接反
応させると、反応初速度として測定ができ、リポ蛋白の
特定分画中のコレステロールが定量できる。
【００１３】本発明でコレステロールエステラーゼの反
応は下記で表される。
応は下記で表される。
【００１４】
【化１】
【００１５】コレステロールエステラーゼの濃度は、
０．０１〜１００Ｕ／ｍｌ、好ましくは０．５〜５０Ｕ
／ｍｌであるが、その量は検体の種類などにより適宜決
定することができる。コレステロールエステラーゼ（Ｃ
Ｅ）については、リポプロテインリパーゼ（ＬＰＬ）活
性を含むものが好ましい。
０．０１〜１００Ｕ／ｍｌ、好ましくは０．５〜５０Ｕ
／ｍｌであるが、その量は検体の種類などにより適宜決
定することができる。コレステロールエステラーゼ（Ｃ
Ｅ）については、リポプロテインリパーゼ（ＬＰＬ）活
性を含むものが好ましい。
【００１６】更に、コレステロール脱水素酵素の反応は
下記で表される。
下記で表される。
【００１７】
【化２】
【００１８】ここで補酵素としては、ニコチンアミドア
デニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）、チオニコチンアミド
アデニンジヌクレオチド（チオＮＡＤ）、ニコチンアミ
ドアデニンジヌクレオチドフォスフェート（ＮＡＤ
Ｐ）、チオニコチンアミドアデニンジヌクレオチドフォ
スフェート（チオＮＡＤＰ）、アセチルピリジンアデニ
ンジヌクレオチド、アセチルピリジンアデニンジヌクレ
オチドフォスフェート、ニコチンアミドヒポキサンチン
ジヌクレオチド、ニコチンアミドヒポキサンチンジヌク
レオチドフォスフェート、チオニコチンアミドヒポキサ
ンチンジヌクレオチド、チオニコチンアミドヒポキサン
チンジヌクレオチドフォスフェートなどがある。
デニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）、チオニコチンアミド
アデニンジヌクレオチド（チオＮＡＤ）、ニコチンアミ
ドアデニンジヌクレオチドフォスフェート（ＮＡＤ
Ｐ）、チオニコチンアミドアデニンジヌクレオチドフォ
スフェート（チオＮＡＤＰ）、アセチルピリジンアデニ
ンジヌクレオチド、アセチルピリジンアデニンジヌクレ
オチドフォスフェート、ニコチンアミドヒポキサンチン
ジヌクレオチド、ニコチンアミドヒポキサンチンジヌク
レオチドフォスフェート、チオニコチンアミドヒポキサ
ンチンジヌクレオチド、チオニコチンアミドヒポキサン
チンジヌクレオチドフォスフェートなどがある。
【００１９】本発明におけるコレステロール脱水素酵素
としては、コレステロールを基質にして可逆反応により
Δ４−コレステノンを生成する酵素であればいずれも好
適に用いられ、例えば、ＮＡＤ依存性コレステロール脱
水素酵素、ＮＡＤＰ依存性コレステロール脱水素酵素な
ど公知のものが挙げられる。
としては、コレステロールを基質にして可逆反応により
Δ４−コレステノンを生成する酵素であればいずれも好
適に用いられ、例えば、ＮＡＤ依存性コレステロール脱
水素酵素、ＮＡＤＰ依存性コレステロール脱水素酵素な
ど公知のものが挙げられる。
【００２０】酸化型補酵素の濃度は、０．０２〜１００
ｍＭ、好ましくは０．０５〜３０ｍＭであり、コレステ
ロール脱水素酵素の濃度は、０．０５〜１００Ｕ／ｍ
ｌ、好ましくは１〜５０Ｕ／ｍｌであるが、検体の種類
などに応じて適宜決定される。
ｍＭ、好ましくは０．０５〜３０ｍＭであり、コレステ
ロール脱水素酵素の濃度は、０．０５〜１００Ｕ／ｍ
ｌ、好ましくは１〜５０Ｕ／ｍｌであるが、検体の種類
などに応じて適宜決定される。
【００２１】本発明における反応初速度は、酸化型補酵
素が還元型に変換されるときの紫外領域における吸光度
の増加速度として測定することができる。即ち、反応開
始一定時間経過後の２点間の数〜数十分間における、使
用する補酵素の吸収波長に基づく吸光度の変化、例え
ば、ＮＡＤやＮＡＤＰでは波長３４０ｎｍの吸光度、チ
オＮＡＤやチオＮＡＤＰでは波長４１５ｎｍの吸光度の
変化を測定する。
素が還元型に変換されるときの紫外領域における吸光度
の増加速度として測定することができる。即ち、反応開
始一定時間経過後の２点間の数〜数十分間における、使
用する補酵素の吸収波長に基づく吸光度の変化、例え
ば、ＮＡＤやＮＡＤＰでは波長３４０ｎｍの吸光度、チ
オＮＡＤやチオＮＡＤＰでは波長４１５ｎｍの吸光度の
変化を測定する。
【００２２】本発明方法では、コレステロール脱水素酵
素の反応に補酵素のサイクリング反応を組み合わせるこ
とにより、更に測定感度を増大させることができる。
素の反応に補酵素のサイクリング反応を組み合わせるこ
とにより、更に測定感度を増大させることができる。
【００２３】本発明におけるサイクリング反応は、自体
公知の反応であり、公知の報告（特開平３−２２４４９
８号公報など）が利用でき、サイクリング反応で組み合
わせた補酵素の変化量を反応初速度として測定する。補
酵素としては、上述のものが使用できるが、組み合わせ
る際には、それぞれ測定条件（吸収波長など）の異なる
ものを選ぶことにより検出が容易となる。例えば、ＮＡ
ＤとチオＮＡＤとの組合せを選んだ場合、それぞれの還
元型の極大吸収の波長が異なるので、上述のようにいず
れかの波長で反応初速度を測ることにより、コレステロ
ールの定量ができる。
公知の反応であり、公知の報告（特開平３−２２４４９
８号公報など）が利用でき、サイクリング反応で組み合
わせた補酵素の変化量を反応初速度として測定する。補
酵素としては、上述のものが使用できるが、組み合わせ
る際には、それぞれ測定条件（吸収波長など）の異なる
ものを選ぶことにより検出が容易となる。例えば、ＮＡ
ＤとチオＮＡＤとの組合せを選んだ場合、それぞれの還
元型の極大吸収の波長が異なるので、上述のようにいず
れかの波長で反応初速度を測ることにより、コレステロ
ールの定量ができる。
【００２４】サイクリング反応を組み合わせる場合のコ
レステロール脱水素酵素の反応は、下記に示される。
レステロール脱水素酵素の反応は、下記に示される。
【００２５】
【化３】
【００２６】酸化型補酵素（ａ）及び還元型補酵素
（ｂ）の濃度は、それぞれ０．０２〜１００ｍＭ、好ま
しくは０．０５〜３０ｍＭであり、コレステロール脱水
素酵素の濃度は、０．０５〜１００Ｕ／ｍｌ、好ましく
は１〜５０Ｕ／ｍｌであるが、検体の種類などに応じて
適宜決定される。
（ｂ）の濃度は、それぞれ０．０２〜１００ｍＭ、好ま
しくは０．０５〜３０ｍＭであり、コレステロール脱水
素酵素の濃度は、０．０５〜１００Ｕ／ｍｌ、好ましく
は１〜５０Ｕ／ｍｌであるが、検体の種類などに応じて
適宜決定される。
【００２７】本発明では、下記に示すように他の脱水素
酵素（Ａ）を組み合わせることができる。
酵素（Ａ）を組み合わせることができる。
【００２８】
【化４】
【００２９】脱水素酵素（Ａ）は、酸化型補酵素（ｂ）
及びコレステロールに作用せず、補酵素（ａ）を還元型
に変換させる脱水素酵素であり、還元型補酵素（ａ）を
再生するために添加される。脱水素酵素（Ａ）を用いる
ことによって、還元型補酵素（ａ）の添加量を少なくす
ることが可能となり、還元型補酵素（ａ）を添加せず
に、あるいは補酵素（ａ）の酸化型と還元型との混合物
を添加することによって、反応が進行する。
及びコレステロールに作用せず、補酵素（ａ）を還元型
に変換させる脱水素酵素であり、還元型補酵素（ａ）を
再生するために添加される。脱水素酵素（Ａ）を用いる
ことによって、還元型補酵素（ａ）の添加量を少なくす
ることが可能となり、還元型補酵素（ａ）を添加せず
に、あるいは補酵素（ａ）の酸化型と還元型との混合物
を添加することによって、反応が進行する。
【００３０】脱水素酵素（Ａ）及びその基質としては、
例えば酸化型補酵素（ａ）がＮＡＤ類の酸化型である場
合、アルコールデヒドロゲナーゼとエタノール又はアセ
トアルデヒド、グリセロールデヒドロゲナーゼとグリセ
ロール又はジヒドロキシアセトン、グリセロール−３−
リン酸デヒドロゲナーゼとＬ−グリセロール−３−リン
酸又はジヒドロキシアセトンリン酸、リンゴ酸デヒドロ
ゲナーゼとＬ−リンゴ酸又はオキザロ酢酸、グリセロア
ルデヒドリン酸デヒドロゲナーゼとＤ−グリセロアルデ
ヒドリン酸とリン酸又は１，３−ジフォスフォ−Ｄ−グ
リセリン酸、酸化型補酵素（ａ）がチオＮＡＤＰ類又は
ＮＡＤＰ類の酸化型である場合、グルコース−６−リン
酸デヒドロゲナーゼとグルコース−６−リン酸又はグル
コノラクトン−６−リン酸、イソクエン酸デヒドロゲナ
ーゼとイソクエン酸、グリオキシル酸デヒドロゲナーゼ
とＣｏＡとグリオキシル酸、フォスフォグルコン酸デヒ
ドロゲナーゼと６−フォスフォ−Ｄ−グリコン酸、グリ
セロアルデヒドリン酸デヒドロゲナーゼとＤ−グリセロ
アルデヒド−３−リン酸とリン酸又は１，３−ジフォス
フォ−Ｄ−グリセリン酸、ベンズアルデヒドデヒドロゲ
ナーゼとベンズアルデヒドなどを用いることができる。
例えば酸化型補酵素（ａ）がＮＡＤ類の酸化型である場
合、アルコールデヒドロゲナーゼとエタノール又はアセ
トアルデヒド、グリセロールデヒドロゲナーゼとグリセ
ロール又はジヒドロキシアセトン、グリセロール−３−
リン酸デヒドロゲナーゼとＬ−グリセロール−３−リン
酸又はジヒドロキシアセトンリン酸、リンゴ酸デヒドロ
ゲナーゼとＬ−リンゴ酸又はオキザロ酢酸、グリセロア
ルデヒドリン酸デヒドロゲナーゼとＤ−グリセロアルデ
ヒドリン酸とリン酸又は１，３−ジフォスフォ−Ｄ−グ
リセリン酸、酸化型補酵素（ａ）がチオＮＡＤＰ類又は
ＮＡＤＰ類の酸化型である場合、グルコース−６−リン
酸デヒドロゲナーゼとグルコース−６−リン酸又はグル
コノラクトン−６−リン酸、イソクエン酸デヒドロゲナ
ーゼとイソクエン酸、グリオキシル酸デヒドロゲナーゼ
とＣｏＡとグリオキシル酸、フォスフォグルコン酸デヒ
ドロゲナーゼと６−フォスフォ−Ｄ−グリコン酸、グリ
セロアルデヒドリン酸デヒドロゲナーゼとＤ−グリセロ
アルデヒド−３−リン酸とリン酸又は１，３−ジフォス
フォ−Ｄ−グリセリン酸、ベンズアルデヒドデヒドロゲ
ナーゼとベンズアルデヒドなどを用いることができる。
【００３１】脱水素酵素（Ａ）の濃度は、酸化型補酵素
（ａ）に対するＫｍ値（ｍＭ単位）の２０倍量（Ｕ／ｍ
ｌ単位）以上、好ましくは１〜１００Ｕ／ｍｌである。
また、脱水素酵素（Ａ）の基質の濃度は、０．０５〜２
０ｍＭが好ましい。脱水素酵素（Ａ）を用いた場合、還
元型補酵素（ｂ）の生成量を測定することによって、コ
レステロールの定量を行うことができる。
（ａ）に対するＫｍ値（ｍＭ単位）の２０倍量（Ｕ／ｍ
ｌ単位）以上、好ましくは１〜１００Ｕ／ｍｌである。
また、脱水素酵素（Ａ）の基質の濃度は、０．０５〜２
０ｍＭが好ましい。脱水素酵素（Ａ）を用いた場合、還
元型補酵素（ｂ）の生成量を測定することによって、コ
レステロールの定量を行うことができる。
【００３２】本発明方法では、コレステロール脱水素酵
素の反応に、下記に示すような反応式のテトラゾリウム
塩を還元する反応を組み合わせ、生成するフォルマザン
の量を、その吸光度の増加を反応初速度として測定する
ことによって、定量することができるので、更に測定感
度を増大させることができる。
素の反応に、下記に示すような反応式のテトラゾリウム
塩を還元する反応を組み合わせ、生成するフォルマザン
の量を、その吸光度の増加を反応初速度として測定する
ことによって、定量することができるので、更に測定感
度を増大させることができる。
【００３３】
【化５】
【００３４】テトラゾリウム塩としては、ＩＮＴ〔３−
（ｐ−ヨードフェニル）−２−（ニトロフェニル）−５
−フェニル−２Ｈ テトラゾリウム クロライド〕、Ｍ
ＴＴ〔３−（４，５−ジメチル−２−チアゾリル）−
２，５−ジフェニル−２Ｈ テトラゾリウム ブロマイ
ド〕、Ｎｅｏ−ＴＢ〔３，３’−（１，１’−ビフェニ
ル−４，４’−ジイル）−ビス（２，５−ジフェニル−
２Ｈ テトラゾリウムクロライド）〕、Ｎｉｔｒｏ−Ｔ
Ｂ「３，３’−〔３，３’−ジメトキシ−（１，１’−
ビフェニル）−４，４’−ジイル〕−ビス〔２−（ｐ−
ニトロフェニル）−５−フェニル−２Ｈ テトラゾリウ
ム クロライド）」、ＴＮＴＢ「３，３’−〔３，３’
−ジメトキシ−（１，１’−ビフェニル）−４，４’−
ジイル〕−ビス〔２，５−ビス（ｐ−ニトロフェニル）
−２Ｈ テトラゾリウム クロライド〕」、ＴＢ「３，
３’−〔３，３’−ジメトキシ−（１，１’−ビフェニ
ル）−４，４’−ジイル〕−ビス（２，５−ジフェニル
−２Ｈ テトラゾリウムクロライド）」、ＮＴＢ「３，
３’−（３，３’−ジメトキシ−４，４’−ビフェニレ
ン）−ビス〔２−（ｐ−ニトロフェニル）−５−フェニ
ル−２Ｈ テトラゾリウム クロライド〕」などを例示
することができる。これらのうち例えばＩＮＴを用いた
場合、波長４９０ｎｍでの吸光度の増加を反応初速度と
して測定することができる。
（ｐ−ヨードフェニル）−２−（ニトロフェニル）−５
−フェニル−２Ｈ テトラゾリウム クロライド〕、Ｍ
ＴＴ〔３−（４，５−ジメチル−２−チアゾリル）−
２，５−ジフェニル−２Ｈ テトラゾリウム ブロマイ
ド〕、Ｎｅｏ−ＴＢ〔３，３’−（１，１’−ビフェニ
ル−４，４’−ジイル）−ビス（２，５−ジフェニル−
２Ｈ テトラゾリウムクロライド）〕、Ｎｉｔｒｏ−Ｔ
Ｂ「３，３’−〔３，３’−ジメトキシ−（１，１’−
ビフェニル）−４，４’−ジイル〕−ビス〔２−（ｐ−
ニトロフェニル）−５−フェニル−２Ｈ テトラゾリウ
ム クロライド）」、ＴＮＴＢ「３，３’−〔３，３’
−ジメトキシ−（１，１’−ビフェニル）−４，４’−
ジイル〕−ビス〔２，５−ビス（ｐ−ニトロフェニル）
−２Ｈ テトラゾリウム クロライド〕」、ＴＢ「３，
３’−〔３，３’−ジメトキシ−（１，１’−ビフェニ
ル）−４，４’−ジイル〕−ビス（２，５−ジフェニル
−２Ｈ テトラゾリウムクロライド）」、ＮＴＢ「３，
３’−（３，３’−ジメトキシ−４，４’−ビフェニレ
ン）−ビス〔２−（ｐ−ニトロフェニル）−５−フェニ
ル−２Ｈ テトラゾリウム クロライド〕」などを例示
することができる。これらのうち例えばＩＮＴを用いた
場合、波長４９０ｎｍでの吸光度の増加を反応初速度と
して測定することができる。
【００３５】ダイアフォラーゼの濃度は、０．０５〜１
００Ｕ／ｍｌ、好ましくは１〜５０Ｕ／ｍｌであり、テ
トラゾリウム塩の濃度は、０．０２〜１００ｍＭ、好ま
しくは０．０５〜３０ｍＭであるが、検体の種類などに
応じて適宜決定される。
００Ｕ／ｍｌ、好ましくは１〜５０Ｕ／ｍｌであり、テ
トラゾリウム塩の濃度は、０．０２〜１００ｍＭ、好ま
しくは０．０５〜３０ｍＭであるが、検体の種類などに
応じて適宜決定される。
【００３６】なお、テトラゾリウム塩に代えて、水溶性
テトラゾリウム化合物（特公平４−１３３５１号公報参
照）、水溶性ジテトラゾリウム化合物（特公平４−１３
３５２号公報参照）などを使用することができる。ま
た、ダイアフォラーゼに代えて、メルドラブルー（９−
ジメチルアミノベンゾ−α−フェナゾキソニウム クロ
ライド）、ＰＭＳ（フェナジンメトスルフェート）、１
−メトキシＰＭＳ（１−メトキシ−５−メチルフェナジ
ニウム メチルスルフェート）などの電子キャリヤーを
用いることもできる。
テトラゾリウム化合物（特公平４−１３３５１号公報参
照）、水溶性ジテトラゾリウム化合物（特公平４−１３
３５２号公報参照）などを使用することができる。ま
た、ダイアフォラーゼに代えて、メルドラブルー（９−
ジメチルアミノベンゾ−α−フェナゾキソニウム クロ
ライド）、ＰＭＳ（フェナジンメトスルフェート）、１
−メトキシＰＭＳ（１−メトキシ−５−メチルフェナジ
ニウム メチルスルフェート）などの電子キャリヤーを
用いることもできる。
【００３７】さらに、サイクリング反応とテトラゾリウ
ム塩の還元反応とを組み合わせることも好ましい。例え
ば、下記の反応式に示されるように、コレステロール脱
水素酵素に補酵素ＮＡＤを反応させた場合、生成したＮ
ＡＤＨ（還元型ＮＡＤ）を公知のＮＡＤＨキナーゼを用
いてリン酸化し、生成したＮＡＤＰＨ（還元型ＮＡＤ
Ｐ）をＧ−６−ＰＤＨ（グルコース−６−リン酸デヒド
ロゲナーゼ）を用いたＮＡＤＰＨのサイクリング反応に
付して、フォルマザンの生成速度を測定する方法（特開
平４−２５２２００号公報参照）でコレステロールを定
量することもできる。
ム塩の還元反応とを組み合わせることも好ましい。例え
ば、下記の反応式に示されるように、コレステロール脱
水素酵素に補酵素ＮＡＤを反応させた場合、生成したＮ
ＡＤＨ（還元型ＮＡＤ）を公知のＮＡＤＨキナーゼを用
いてリン酸化し、生成したＮＡＤＰＨ（還元型ＮＡＤ
Ｐ）をＧ−６−ＰＤＨ（グルコース−６−リン酸デヒド
ロゲナーゼ）を用いたＮＡＤＰＨのサイクリング反応に
付して、フォルマザンの生成速度を測定する方法（特開
平４−２５２２００号公報参照）でコレステロールを定
量することもできる。
【００３８】
【化６】
【００３９】このように、本発明方法にサイクリング反
応及び／又はテトラゾリウム塩の還元反応を組み合わせ
ることにより、コレステロールの測定感度を増大させる
ことが可能となり、その結果、微量の検体でもそのリポ
蛋白中の特定分画中のコレステロールを定量することが
できる。
応及び／又はテトラゾリウム塩の還元反応を組み合わせ
ることにより、コレステロールの測定感度を増大させる
ことが可能となり、その結果、微量の検体でもそのリポ
蛋白中の特定分画中のコレステロールを定量することが
できる。
【００４０】検体が微量であれば、反応初速度を測定す
る際の初期吸光度を低くすることができるので、実質的
な測定範囲を拡大することができる。さらに、検体が微
量でも良いということ自体が、小児や老人など採血量に
制限がある場合にも有利である。
る際の初期吸光度を低くすることができるので、実質的
な測定範囲を拡大することができる。さらに、検体が微
量でも良いということ自体が、小児や老人など採血量に
制限がある場合にも有利である。
【００４１】
【発明の効果】本発明方法によれば、血清中のリポ蛋白
の特定分画を分離するために、特定分画以外のリポ蛋白
分画を凝集させ、その際に生じた濁りをそのままの状態
にして、直接その特定分画中のコレステロールを定量す
ることができる。その結果、従来、凝集法において必要
とされていた遠心分離の操作が不要となるので、多数の
検体を短時間で処理できるようになり、臨床検査の日常
業務において自動分析装置を用いた測定が可能となる。
の特定分画を分離するために、特定分画以外のリポ蛋白
分画を凝集させ、その際に生じた濁りをそのままの状態
にして、直接その特定分画中のコレステロールを定量す
ることができる。その結果、従来、凝集法において必要
とされていた遠心分離の操作が不要となるので、多数の
検体を短時間で処理できるようになり、臨床検査の日常
業務において自動分析装置を用いた測定が可能となる。
【００４２】また、検体を扱う上で、検体に直接手を触
れる機会が著しく減少するので、ウイルス感染の危険性
も減少できる。さらに、検体量を微量にすることができ
るので、小児や老人など採血量に制限がある場合でも測
定が可能となる。従って、本発明方法は、臨床検査の分
野において極めて有用であり、臨床検査の日常業務にお
ける作業効率の向上に貢献することができる。
れる機会が著しく減少するので、ウイルス感染の危険性
も減少できる。さらに、検体量を微量にすることができ
るので、小児や老人など採血量に制限がある場合でも測
定が可能となる。従って、本発明方法は、臨床検査の分
野において極めて有用であり、臨床検査の日常業務にお
ける作業効率の向上に貢献することができる。
【００４３】
【実施例】本発明をより詳細に説明するために実施例及
び比較例を挙げるが、本発明はこれらにより何ら限定さ
れるものではない。
び比較例を挙げるが、本発明はこれらにより何ら限定さ
れるものではない。
【００４４】〔実施例１〕血清５μｌと、５０ｍＭのＢ
ＥＳ〔Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）−２−ア
ミノエタンスルホン酸〕−ＢｉｓＴｒｉｓ〔ビス（２−
ヒドロキシエチル）イミノ−トリス（ヒドロキシメチ
ル）メタン〕緩衝液（ｐＨ７．０）中に、５ｍＭのＭｇ
Ｃｌ2 ，１２％（ｗ／ｖ）のポリエチレングリコール
（ＰＥＧ−４０００），１％（ｗ／ｖ）のＢＳＡ，０．
５％（ｗ／ｖ）リンタングステン酸ナトリウム，１．０
ｍＭのＮＡＤ及び０．１ｍＭのＮＴＢを含む第１試薬２
５０μｌとを混和して５分間加温後、２５ｍＭのＴｒｉ
ｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８．５）中に１２％（ｗ／ｖ）
のＰＥＧ−４０００，２．５Ｕ／ｍｌのＣＥ，１３．５
Ｕ／ｍｌのＣｈＤＨ（コレステロールデヒドロゲナー
ゼ），１％（ｗ／ｖ）のＢＳＡ及び２．５Ｕ／ｍｌのダ
イアフォラーゼを含む第２試薬１００μｌを添加して、
残存するＨＤＬコレステロール濃度（ｍｇ／ｄｌ）を５
４０ｎｍにおける吸光度量を測定することによって求め
た。
ＥＳ〔Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）−２−ア
ミノエタンスルホン酸〕−ＢｉｓＴｒｉｓ〔ビス（２−
ヒドロキシエチル）イミノ−トリス（ヒドロキシメチ
ル）メタン〕緩衝液（ｐＨ７．０）中に、５ｍＭのＭｇ
Ｃｌ2 ，１２％（ｗ／ｖ）のポリエチレングリコール
（ＰＥＧ−４０００），１％（ｗ／ｖ）のＢＳＡ，０．
５％（ｗ／ｖ）リンタングステン酸ナトリウム，１．０
ｍＭのＮＡＤ及び０．１ｍＭのＮＴＢを含む第１試薬２
５０μｌとを混和して５分間加温後、２５ｍＭのＴｒｉ
ｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８．５）中に１２％（ｗ／ｖ）
のＰＥＧ−４０００，２．５Ｕ／ｍｌのＣＥ，１３．５
Ｕ／ｍｌのＣｈＤＨ（コレステロールデヒドロゲナー
ゼ），１％（ｗ／ｖ）のＢＳＡ及び２．５Ｕ／ｍｌのダ
イアフォラーゼを含む第２試薬１００μｌを添加して、
残存するＨＤＬコレステロール濃度（ｍｇ／ｄｌ）を５
４０ｎｍにおける吸光度量を測定することによって求め
た。
【００４５】既知の血清を参考にして、ヒト血清１０例
を測定した結果と、従来の方法〔ポリエチレングリコー
ルによる沈殿法（製品名「ＨＤＬ−コレス（ＰＧ）」，
国際試薬社製）〕とを比較し、その結果を表１に示す。
を測定した結果と、従来の方法〔ポリエチレングリコー
ルによる沈殿法（製品名「ＨＤＬ−コレス（ＰＧ）」，
国際試薬社製）〕とを比較し、その結果を表１に示す。
【００４６】
【表１】
【００４７】 ｙ＝０．９５５ｘ＋１４．２６ Ｒ＝０．９５６ ｘ：従来法による値（単位：ｍｇ／ｄｌ） ｙ：実施例１による値（単位：ｍｇ／ｄｌ） Ｒ：相関係数
【００４８】〔実施例２〕血清５μｌと、５０ｍＭのＢ
ＥＳ−ＢｉｓＴｒｉｓ緩衝液（ｐＨ７．０）中に５ｍＭ
のＭｇＣｌ2 ，１２％（ｗ／ｖ）のＰＥＧ−４０００，
１％（ｗ／ｖ）のＢＳＡ，０．５％（ｗ／ｖ）リンタン
グステン酸ナトリウム，１．０ｍＭのＮＡＤ及び０．１
ｍＭのＮＴＢを含む第１試薬２５０μｌとを混和して５
分間加温後、２５ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ
８．５）中に１２％（ｗ／ｖ）のＰＥＧ−４０００，
３．５Ｕ／ｍｌのＣＥ，１．０Ｕ／ｍｌのＣｈＤＨ，
２．５Ｕ／ｍｌのダイアフォラーゼ，２．５Ｕ／ｍｌの
ＮＡＤＨキナーゼ及び２．５Ｕ／ｍｌのＧ−６−ＰＤＨ
を含む第２試薬１００μｌを添加して、残存するＨＤＬ
コレステロール濃度（ｍｇ／ｄｌ）を５４０ｎｍにおけ
る吸光度量を測定することによって求めた。
ＥＳ−ＢｉｓＴｒｉｓ緩衝液（ｐＨ７．０）中に５ｍＭ
のＭｇＣｌ2 ，１２％（ｗ／ｖ）のＰＥＧ−４０００，
１％（ｗ／ｖ）のＢＳＡ，０．５％（ｗ／ｖ）リンタン
グステン酸ナトリウム，１．０ｍＭのＮＡＤ及び０．１
ｍＭのＮＴＢを含む第１試薬２５０μｌとを混和して５
分間加温後、２５ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ
８．５）中に１２％（ｗ／ｖ）のＰＥＧ−４０００，
３．５Ｕ／ｍｌのＣＥ，１．０Ｕ／ｍｌのＣｈＤＨ，
２．５Ｕ／ｍｌのダイアフォラーゼ，２．５Ｕ／ｍｌの
ＮＡＤＨキナーゼ及び２．５Ｕ／ｍｌのＧ−６−ＰＤＨ
を含む第２試薬１００μｌを添加して、残存するＨＤＬ
コレステロール濃度（ｍｇ／ｄｌ）を５４０ｎｍにおけ
る吸光度量を測定することによって求めた。
【００４９】既知の血清を参考にして、ヒト血清１０例
を測定した結果と、実施例１における従来法とを比較
し、その結果を表２に示す。
を測定した結果と、実施例１における従来法とを比較
し、その結果を表２に示す。
【００５０】
【表２】
【００５１】 ｙ＝０．７７４ｘ＋１９．９４ Ｒ＝０．９７８ ｘ：従来法による値（単位：ｍｇ／ｄｌ） ｙ：実施例２による値（単位：ｍｇ／ｄｌ） Ｒ：相関係数
【００５２】〔実施例３〕血清５μｌと、５０ｍＭのＢ
ＥＳ−ＢｉｓＴｒｉｓ緩衝液（ｐＨ７．０）中に５ｍＭ
のＭｇＣｌ2 ，１２％（ｗ／ｖ）のＰＥＧ−４０００，
１％（ｗ／ｖ）のＢＳＡ，０．５％（ｗ／ｖ）リンタン
グステン酸ナトリウム及び１．２５ｍＭのチオＮＡＤを
含む第１試薬２５０μｌとを混和して５分間加温後、２
５ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８．５）中に１
２％（ｗ／ｖ）のＰＥＧ−４０００，２．５Ｕ／ｍｌの
ＣＥ，１Ｕ／ｍｌのＣｈＤＨ，１％（ｗ／ｖ）のＢＳＡ
及び３．５ｍＭのＮＡＤＨを含む第２試薬１００μｌを
添加して、残存するＨＤＬコレステロール濃度（ｍｇ／
ｄｌ）を４０５ｎｍにおける吸光度量を測定することに
よって求めた。
ＥＳ−ＢｉｓＴｒｉｓ緩衝液（ｐＨ７．０）中に５ｍＭ
のＭｇＣｌ2 ，１２％（ｗ／ｖ）のＰＥＧ−４０００，
１％（ｗ／ｖ）のＢＳＡ，０．５％（ｗ／ｖ）リンタン
グステン酸ナトリウム及び１．２５ｍＭのチオＮＡＤを
含む第１試薬２５０μｌとを混和して５分間加温後、２
５ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８．５）中に１
２％（ｗ／ｖ）のＰＥＧ−４０００，２．５Ｕ／ｍｌの
ＣＥ，１Ｕ／ｍｌのＣｈＤＨ，１％（ｗ／ｖ）のＢＳＡ
及び３．５ｍＭのＮＡＤＨを含む第２試薬１００μｌを
添加して、残存するＨＤＬコレステロール濃度（ｍｇ／
ｄｌ）を４０５ｎｍにおける吸光度量を測定することに
よって求めた。
【００５３】既知の血清を参考にして、ヒト血清１５例
を測定した結果と、実施例１における従来法とを比較
し、その結果を表３に示す。
を測定した結果と、実施例１における従来法とを比較
し、その結果を表３に示す。
【００５４】
【表３】
【００５５】 ｙ＝０．８６５ｘ＋１５．８１ Ｒ＝０．９４１ ｘ：従来法による値（単位：ｍｇ／ｄｌ） ｙ：実施例３による値（単位：ｍｇ／ｄｌ） Ｒ：相関係数
【００５６】〔実施例４〕血清３μｌと、５０ｍＭのＢ
ＥＳ−ＢｉｓＴｒｉｓ緩衝液（ｐＨ７．０）中に５ｍＭ
のＭｇＣｌ2 ，１５％（ｗ／ｖ）のＰＥＧ−４０００，
１％（ｗ／ｖ）のＢＳＡ，０．５％（ｗ／ｖ）リンタン
グステン酸ナトリウム，０．７％（ｗ／ｖ）のショ糖及
び１．２５ｍＭのチオＮＡＤを含む第１試薬２５０μｌ
とを混和して５分間加温後、２５ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣ
ｌ緩衝液（ｐＨ８．５）中に、１％（ｗ／ｖ）のＢＳ
Ａ，０．７％（ｗ／ｖ）のショ糖，４０Ｕ／ｍｌのＣＥ
（ＬＰＬ活性を含むもの），２０Ｕ／ｍｌのＣｈＤＨ及
び３．５ｍＭのＮＡＤＨを含む第２試薬１００μｌを添
加して、残存するＨＤＬコレステロール濃度（ｍｇ／ｄ
ｌ）を４０５ｎｍにおける吸光度量を測定することによ
って求めた。
ＥＳ−ＢｉｓＴｒｉｓ緩衝液（ｐＨ７．０）中に５ｍＭ
のＭｇＣｌ2 ，１５％（ｗ／ｖ）のＰＥＧ−４０００，
１％（ｗ／ｖ）のＢＳＡ，０．５％（ｗ／ｖ）リンタン
グステン酸ナトリウム，０．７％（ｗ／ｖ）のショ糖及
び１．２５ｍＭのチオＮＡＤを含む第１試薬２５０μｌ
とを混和して５分間加温後、２５ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣ
ｌ緩衝液（ｐＨ８．５）中に、１％（ｗ／ｖ）のＢＳ
Ａ，０．７％（ｗ／ｖ）のショ糖，４０Ｕ／ｍｌのＣＥ
（ＬＰＬ活性を含むもの），２０Ｕ／ｍｌのＣｈＤＨ及
び３．５ｍＭのＮＡＤＨを含む第２試薬１００μｌを添
加して、残存するＨＤＬコレステロール濃度（ｍｇ／ｄ
ｌ）を４０５ｎｍにおける吸光度量を測定することによ
って求めた。
【００５７】既知の血清を参考にして、ヒト血清１５例
を測定した結果と、実施例１における従来法とを比較
し、その結果を表４に示す。
を測定した結果と、実施例１における従来法とを比較
し、その結果を表４に示す。
【００５８】
【表４】
【００５９】 ｙ＝０．９５６ｘ＋１．８６７ Ｒ＝０．９９２ ｘ：従来法による値（単位：ｍｇ／ｄｌ） ｙ：実施例４による値（単位：ｍｇ／ｄｌ） Ｒ：相関係数
【００６０】以上の実施例１〜４の結果から、本発明方
法は従来の方法と相関関係が良好であり、リポ蛋白のＨ
ＤＬ分画中のコレステロールを精度良く定量できること
が分かる。
法は従来の方法と相関関係が良好であり、リポ蛋白のＨ
ＤＬ分画中のコレステロールを精度良く定量できること
が分かる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 岸 浩司 神戸市西区室谷１丁目１−２ 国際試薬株 式会社研究開発センター内
Claims (3)
- 【請求項１】 血清中のリポ蛋白の特定分画以外のリポ
蛋白分画を凝集させ、該凝集を除去あるいは溶解するこ
となく、コレステロール脱水素酵素を反応させて、反応
初速度を測定することを特徴とするリポ蛋白分画中のコ
レステロールの定量方法。 - 【請求項２】 サイクリング反応を組み合わせることを
特徴とする請求項１記載の方法。 - 【請求項３】 テトラゾリウム塩の還元反応を組み合わ
せることを特徴とする請求項１記載の方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP31883594A JP3614485B2 (ja) | 1994-09-12 | 1994-12-21 | リポ蛋白分画中のコレステロールの定量方法 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6-217716 | 1994-09-12 | ||
| JP21771694 | 1994-09-12 | ||
| JP31883594A JP3614485B2 (ja) | 1994-09-12 | 1994-12-21 | リポ蛋白分画中のコレステロールの定量方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08131195A true JPH08131195A (ja) | 1996-05-28 |
| JP3614485B2 JP3614485B2 (ja) | 2005-01-26 |
Family
ID=26522173
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP31883594A Expired - Fee Related JP3614485B2 (ja) | 1994-09-12 | 1994-12-21 | リポ蛋白分画中のコレステロールの定量方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3614485B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001094619A1 (fr) | 2000-06-07 | 2001-12-13 | International Reagents Corporation | Methode d'analyse de composants dans des echantillons biologiques |
-
1994
- 1994-12-21 JP JP31883594A patent/JP3614485B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001094619A1 (fr) | 2000-06-07 | 2001-12-13 | International Reagents Corporation | Methode d'analyse de composants dans des echantillons biologiques |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3614485B2 (ja) | 2005-01-26 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2600065B2 (ja) | 高密度リポ蛋白中のコレステロールの定量法 | |
| EP1312922B1 (en) | Stabilized tetrazolium reagent compositions with nitrite and methods for using the same | |
| JP3091230B2 (ja) | 低密度リポ蛋白中または超低密度リポ蛋白中のコレステロールの定量法 | |
| JP5112861B2 (ja) | 高密度リポ蛋白中のコレステロールの測定方法 | |
| EP1715060A1 (en) | Method, reagent, and kit for determining cholesterol in very-low-density lipoprotein remnant (vldl remnant) | |
| JPH09299A (ja) | 高比重リポ蛋白分画中のコレステロールの定量方法及び定量用試薬キット | |
| JP5864858B2 (ja) | 低密度リポ蛋白中のコレステロールの測定方法、測定用試薬及び測定用キット | |
| MXPA02009469A (es) | Reactivos y metodos para detectar un cofactor reducido. | |
| JP3107474B2 (ja) | リポ蛋白分画中の成分の定量方法 | |
| JPH08116996A (ja) | 血清または血漿中のｈｄｌ−コレステロールを測定する方法 | |
| JP3677452B2 (ja) | リポ蛋白質に含有されるトリグリセリドの測定のための手続および診断用製品 | |
| JP2000116400A (ja) | リポ蛋白中のコレステロールの定量法 | |
| JP5017614B2 (ja) | 試料中の測定対象物質の測定方法及び測定試薬、非特異的発色を抑制する方法、並びに非特異的発色抑制剤 | |
| JP3614485B2 (ja) | リポ蛋白分画中のコレステロールの定量方法 | |
| EP2687606B1 (en) | Method for measuring cholesterol in hdl subfraction, and reagents and kit therefor | |
| JPH03502281A (ja) | 溶液状態のビリルビンの測定方法 | |
| JPH01128797A (ja) | 酵素活性の定量法 | |
| WO2006030866A1 (ja) | 尿酸の定量方法 | |
| JPH07280812A (ja) | リポ蛋白分画中の成分の定量方法 | |
| JP2994831B2 (ja) | コレステロールの定量法および定量用試薬 | |
| JPH0698031B2 (ja) | Ｌｄ−１アイソザイムの測定法および試薬 | |
| JP3981190B2 (ja) | コレステロールの定量方法及び定量用試薬 | |
| JP2000262299A (ja) | グルコースデヒドロゲナーゼによるグルコースの定量方法およびグルコース定量用試薬 | |
| JPS61225000A (ja) | ３α―ヒドロキシステロイドの定量法及びこれに用いる試薬 | |
| JP3614472B2 (ja) | コレステロールの定量方法及び定量用試薬 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20040706 |
|
| A521 | Written amendment |
Effective date: 20040902 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20041001 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20041027 |
|
| R150 | Certificate of patent (=grant) or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313111 |
|
| R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20071112 Year of fee payment: 3 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Year of fee payment: 6 Free format text: PAYMENT UNTIL: 20101112 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20131112 Year of fee payment: 9 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |