JPH0771480B2

JPH0771480B2 - 新規微生物

Info

Publication number: JPH0771480B2
Application number: JP4122687A
Authority: JP
Inventors: 美光今井; 賢一鈴木; 繁宮崎; 成正角田
Original assignee: Yamanouchi Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Yamanouchi Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1985-11-18
Filing date: 1992-04-16
Publication date: 1995-08-02
Anticipated expiration: 2010-08-02
Also published as: JPH06189747A

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明はミクロモノスポラ属に属
し，抗生物質ＹＳ−０２９３０Ｋ−Ｄ及び／又はＹＳ−
０２９３０Ｋ−Ｅ及び／又はＹＳ−０２９３０Ｋ−
Ｈ生産能を有する新規微生物に関する。

【０００２】

【従来の技術】本発明によって生産される抗生物質は下
記の一般式で式示されるマクロライド系の抗生物質であ
る。

【０００３】

【化１】

【０００４】（式中，Ｒは水素原子又はホルミル基を，
点線はこの間が二重結合又は式

【０００５】

【化２】

【０００６】で示される結合を意味する。）ＹＳ−０２
９３０Ｋ−Ｄ物質はＲがホルミル基で，点線が二重結合
の化合物であり，ＹＳ−０２９３０Ｋ−Ｅ物質はＲがホ
ルミル基で，点線が式

【０００７】

【化３】

【０００８】で示される結合の化合物であり，ＹＳ−０
２９３０Ｋ−Ｈ物質はＲが水素原子で，点線が二重結合
で示される結合の化合物である。（以下それぞれ単にＤ
物質，Ｅ物質，およびＨ物質という）。

【０００９】従来，Ｄ物質は特開昭５７−２８１００号
公報に，Ｅ物質は特開昭５９−３３２９８号公報におよ
びＨ物質は特開昭５８−９６０９６号公報にそれぞれ示
された発明に包含され，いずれも公知の物質である。上
記の公報によればＤ物質は３，２３−Ｏ−メトキシメチ
ル（又はテトラヒドロフラニル）マイカミノシルタイ
ロノライドジエチルアセタールを原料として，その
４’位のヒドロキシ基を脱離させた後，３，２３位のヒ
ドロキシ基の保護基，１８位のアルデヒド基の保護基を
脱離させる化学的合成法により製造されている。また，
Ｅ物質は，４’−デオキシマイカミノシルタイロノ
ライドジエチルアセタールを過酸で処理し，次いでトリ
フェニルホスフィンで処理して１２，１３位をエポキシ
化し，次いでアルデヒドの保護基を脱離させる方法によ
り，Ｈ物質は，４’−デオキシマイカミノシルタイ
ロノライドにクロロトリス（トリフェニルホスフィン）
ロジウムを作用させる方法により化学的に合成されてい
る。

【００１０】

【発明が解決しようとする課題】しかしながら，化学的
合成法によらず，発酵法によって前記Ｄ，Ｅ及びＨ物質
を生産することについては従来全く知られていない。本
発明の目的の一つは，これらＤ物質及び／又はＥ物質及
び／又はＨ物質を生産する微生物を提供することにあ
る。

【００１１】

【課題を解決するための手段】本発明者らは，薬理作用
物質を生産する微生物を探索した結果，土壌から常法に
よつて分離した微生物がその菌学的性質より判断してミ
クロモノスポラ属に属する新種の放線菌であることをつ
きとめ，その放線菌が抗生物質Ｄ，Ｅ及びＨ物質を産生
することを知見して，本発明を完成するに至った。

【００１２】すなわち，本発明はミクロモノスポラ属に
属し，抗生物質Ｄ物質及び／又はＥ物質及び／又はＨ物
質の生産する微生物に関する。

【００１３】（微生物）本発明のミクロモノスポラ属に
属し，抗生物質Ｄ物質及び／又はＥ物質及び／又はＨ物
質生産能を有する微生物としては具体的には例えばミク
ロモノスポラエスピー (Micromonspora sp.) ＹＳ−０
２９３０Ｋ株を挙げることができる。ＹＳ−０２９３
０Ｋ株の菌学的性質は以下の通りである。

【００１４】１．形態学的性質本菌は，一般に使用されている種々の寒天培地上で真性
気菌糸を形成しない。胞子形成の良好な培地に生育した
菌糸をかきとり，顕微鏡下で観察すると，胞子は基生菌
糸から分枝した胞子柄（０．２〜０．８μｍ）の頂点に
１個（まれに２個）着生し，菌糸全体にくまなく形成さ
れる。ルードマン（Luedemann）らの分類［アンチミク
ロバイアル・エイジェンツ・アンド・ケモセラピー
(Antimicrob. Ag. Chemoth.)1964,47〜52(1965)]によれ
ば，胞子柄の分枝方式はモノポジアルタイプ (Monopodi
al type) に属する。電子顕微鏡的には，胞子は球状
（直径約０．８〜１．２μｍ）で，表面は平滑である。
液体培地で培養すると，菌糸はほとんど分枝せず，長く
伸長し，菌糸間に球状の構造（長径８〜１０μｍ）が観
察される。電顕的観察により，これらの構造は菌糸の融
合により生じたものであると判断された。

【００１５】２．各培地における生育状態各種寒天培地上の生育状態は以下に示すととおりであ
る。特に記載しない限り，２８℃で２１日間培養し，常
法に従って観察したものである。色調の記載は色の標準
（日本色彩研究所）によった。

【００１６】

【表１】

【００１７】（注）Ｇ：生育及び集落表面の菌叢色Ｒ：裏面の色相Ｓ：可溶性色素３．生理的性質

【００１８】

【表２】

【００１９】（注）生育温度は各温度（５．１０．１
５．２０．２５．２８．３０．３３．３７．４０．４
５．５０℃）で７〜２１日までの観察結果ミルクに対す
る作用は３７℃で３〜２１日までの観察結果，それ以外
は特に指摘のない限り２８℃で２週間後の観察結果を示
す。４．各炭素源の資化性（プリドハム・ゴドリーブ寒天培
地上，２８℃培養）

【００２０】

【表３】

【００２１】５．細胞壁組成の分析リチェバリアー (Lechevalier) らの方法［リチェバリ
アー，エムピー等；ダイエッツ，エ−ＰＰ２２７−２２
８等，アクチノマイセテ・タキソノミー・エスアイエ
ムスペシャルパブリケーション (Lechevalier,M.P.
et al;PP227-228 in Dietz, A. et al ed., Actinomyce
te Taxonony.SIM Special publication)No.6,1980年]
に従い，本菌株の細胞壁成分及び全菌体の酸加水分解物
の分析を行った結果，特徴的なアミノ酸として，メソジ
アミピメリン酸，３−ヒドロキシジアミノピメリン酸，
及びグリシンを含み，糖成分としてキシロースとアラビ
ノースを含有することが確認された。

【００２２】以上の菌学的性質をまとめると，ＹＳ−０
２９３０Ｋ株は，各種寒天培地上で，真性の気菌糸を
形成せず，基生菌糸より生じた胞子柄 (Monopodial typ
e)に胞子を単一（まれに２個）形成する。液体培養にお
いて，菌糸は，ほとんど分枝せず，長く伸長し，菌糸が
融合して球状の構造が形成される。細胞壁，及び全細胞
酸加水分解物の分析によりメソジアミノピメリン酸とグ
リシンを有し，また糖として，キシロースとアラビノー
スの存在が確認された。

【００２３】以上の性質から，本菌株はミクロモノスポ
ラ (Micromonospora) 属に属する放線菌であると判断さ
れる。本菌株に類似の既知菌株をバーギィーズ・マニュ
アル・オブ・デターミネィティブ・バクテリオロジー第
８版，1974年(Bergey's Manual of Determinative Bact
eriology 8th Edition(1974)) ，および種々の文献など
により検すると，胞子が球状でその表面が平滑であり，
寒天培地での生育の色調がオレンジ〜黄茶を呈する菌と
して，ミクロモノスポラカルセア (Micromonospora c
halcea)，ミクロモノスポラハロフィティカ (Micromo
nospora halophytica) およびミクロモノスポラカル
ボナセア (Micromonospora carbonaceae)があげられ
る。しかし，Ｍ．カルセアは後記表４のように，炭素源
として，α−メリビオース，ラフィノース，Ｌ−アラビ
ノース，Ｄ−グルコース，Ｄ−ガラクトース，スター
チ，シュクロース，Ｄ−キシロースを資化できるのに対
し，ＹＳ−０２９３０Ｋ株は，Ｌ−アラビノース，Ｄ−
グルコース，シュクロース，スターチを資化するが，上
記のそれ以外の糖を資化できない（α−メリビオースは
わずかに資化する）。また，ＹＳ−０２９３０Ｋ株は
Ｍ．カルセアにみられる様なセルロース分解能はない。

【００２４】また，Ｍ．ハロフィティカは，後記表１の
様に炭素源として，Ｌ−アラビノース，Ｄ−ガラクトー
ス，Ｄ−グルコース，Ｄ−フラクトース，Ｄ−マンノー
ス，α−メリビオース，ラフィノース，スターチ，シュ
クロース，Ｄ−キシロースを資化し，ＹＳ−０２９３０
Ｋ株とは，炭素源の利用性の点で大きく異なる。ま
た，Ｍ．ハロフィティカは硝酸塩の還元性（陽性），セ
ルロースの分解能（陽性）においてもＹＳ−０２９３０
Ｋ株と性質を異にする。

【００２５】次にミクロモノスポラカルボナセアは胞
子が球状で表面は平滑であり液体培養において，枝分れ
のない長い菌糸を形成し，また寒天培地上の生育の色調
はオレンジ〜黄茶〜黒でＹＳ−０２９３０Ｋ株と類似
している。しかし糖の利用性に関しては，表１の様にＹ
Ｓ−０２９３０Ｋ株とはＤ−キシロース，Ｄ−フラクト
ース，α−メリビオースの利用性が異なり，また，硝酸
塩の還元能においても性質を異にする。また，胞子柄の
着生様式がＭ．カルボナセアではシンポジアルタイプ(S
ympodial type)であるのに対し，ＹＳ−０２９３０Ｋ株
ではモノポジアルタイプ (Monopodial type) であり異
なる。

【００２６】炭素源の利用性の比較（プリダム及びゴッ
トリーブ；ジャーナル・オブ・バクテリオロジー (J.Bc
teriol).,56,107,1948 の方法による）

【００２７】

【表４】

【００２８】さらにその他の菌種としてマクロライト゛
抗生物質生産性の報告をされているMicromonospora属の
菌種には，ミクロモノスポラロザリア (Micromonos
pora rosaria)ミクロモノスポラメガロミシア (Mic
romonospora megalomiciae)ミクロモノスポライノ
シトラ (Micromonospora inositola) ミクロモノスポ
ラカルセアバリエタスイズメンシス (Micromonospo
ra chalcea var izumensis) があるがはワインレッド
カラーの可溶性色素を生産し，胞子表面が特徴的なとげ
状構造を呈する。はチロシン寒天培地で良く生育し，
メラニン色素の生産が認められる。はグルコース・ア
スパラギン寒天上に生育しない。また，イノシトールを
唯一の炭素源として利用する。はＭ．カルセアの項で
記した様に，炭素源の利用性がＹＳ−０２９３０株と比
べて良好で，特にα−メリビオース，ラフィノースの利
用性が特徴的である。以上の点から，上記４菌種もＹＳ
−０２９３０Ｋ株とは明らかに異なっている。以上の様
に，すでに報告されたミクロモノスポラ属の菌でＹＳ−
０２９３０Ｋと一致する菌種はみあたらず，新菌種であ
ると判断される。よって本菌株をミクロモノスポラエ
スピー (Micromonospora sp.) ＹＳ−０２９３０Ｋ株と
命名した。本菌株は通産産業省工業技術院微生物工業技
術研究所に微工研条寄第１０７６号として寄託されてい
る。

【００２９】本発明に係る微生物は，上記菌学的性質に
おける特徴の他，抗生物質Ｄ物質及び／又はＥ物質及び
／又はＨ物質を生産する点でも特徴づけられる。本発明
に用いられる菌株は，他の放線菌にも見られるごとく，
人工的にまた自然に変異をおこしやすいが，本発明にい
うＹＳ−０２９３０Ｋ株は天然から分離された放線菌，
あるいはこれを紫外線，Ｘ線，化学薬剤などで人工的に
変異させた菌株及びそれらの自然変異株をも包含するも
のである。

【００３０】本発明の新菌種に属する微生物は天然の
土壌（沖縄県伊是名島にて採取した上壌）より分離し
て取得したものであるが、前記微生物工業技術研究所に
寄託した菌株の凍結乾燥品を復元することによって容易
に取得することができる。本発明者等は、本発明の新規
微生物、即ち抗生物質ＹＳ−０２９３０Ｋ−Ｄ及び／又
はＹＳ−０２９３０Ｋ−Ｅ及び／又はＹＳ−０２９３０
Ｋ−Ｈ生産能を有するミクロモノスポラエスピーＹ
Ｓ−０２９３０Ｋ株、これを人工的に変異させた菌株及
びそれらの自然変異株を包含する新菌種の菌種名を、ミ
クロモノスポライゼナエンシス（Ｍｉｃｒｏｍｏｎｏ
ｓｐｏｒａｉｚｅｎａｅｎｓｉｓ）と命名した。

【００３１】（培養法）本発明に係る微生物の培養は，
その微生物が利用する栄養源を含有する培地を用いて行
われる。培地は合成，半合成，又は天然の，個体又は液
体培地のいずれを用いてもよいが，通常天然の栄養源を
含む液体培地が好適である。培地に添加する栄養源とし
ては，炭素源としては同化可能な炭素化合物であればよ
く，例えばアラビノース，シュクロース，スターチ，グ
ルコース，ブドウ糖，澱粉，デキストリン，ヤシ油，大
豆油，α−メリビオース等が単独または組み合わせて用
いられる。さらに，アルコール類，有機酸なども用いう
る場合がある。無機及び有機窒素源としては，塩化アン
モン，硝酸ソーダ，硫酸アンモン，硝酸アンモン，尿素
などが，有機窒素源としては，ペプトン，酵母エキス，
乾燥酵母，肉エキス，グルテンミール，コーンスチープ
リカー，大豆粉，魚粉，落花生粉，綿実粕，カザミノ酸
や各種アミノ酸（例えばグルタミン酸，アラニン，リジ
ン等）などが単独又は組み合せて用いられる。

【００３２】また，培地には必要に応じナトリウム，カ
リウム，マグネシウム，カルシウム，亜鉛，鉄，コバル
トなどの金属の硫酸塩，硝酸塩，塩化物，炭酸塩，リン
酸塩などを添加することができる。培養は好気的条件下
に行なうのがよく，靜置，振盪，通気撹拌培養のいずれ
も可能であるが，振盪あるいは通気撹拌培養が有利であ
る。培養温度はおよそ２５〜３３℃の範囲内が好まし
く，殊に約２７〜２９℃が有利である。また，培地のｐ
Ｈは約５．５〜８．５の中性付近に保持するのが好適で
ある。培養期間は培地の組成，温度等の培養条件によっ
て異なるが，通常約２日〜１４日程度であり，上記Ｄ，
Ｅ及びＨ物質が最高力価に達する時期を見計らって適当
な時期に培養を終了する。

【００３３】このようにして培養された培養物中に蓄積
された抗生物質を単離精製するには，通常用いられる単
離精製手段を適用すればよい。ミクロモノスポラエス
ピーＹＳ−０２９３０Ｋ株を実施例に記載の培養条件下
で培養すると，培養液中に少なくとも２種類の抗菌活性
物質が蓄積される。

【００３４】抗菌活性物質の単離，精製は培養物を遠心
分離又は濾過して，菌体を除去した後，適当な溶剤に対
する溶解性及び溶解度の差，溶液からの析出性及び析出
速度の差，種々の吸着剤に対する吸着親和性の差，２種
の液相間における分配の差などを利用する方法を適用し
て行なうのが好ましい。これらの方法は必要に応じて単
独に用いられ，あるいは任意の順序に組合せ，また反覆
して適用できる。

【００３５】ＹＳ−０２９３０Ｋ株の培養による生産物
のうち，Ｄ物質とＥ物質はその混合物のメタノール溶液
をメルク社製シリカゲル６０Ｆ_２５４薄層プレート上で
クロロホルム：メタノール：２８％アンモニア水（４
０：１０：０．２）を展開溶媒とする薄層クロマトグラ
フィーを行なうと，Ｒｆ値０．５８と０．６２のスポッ
トに分かれ，この性質を利用することにより容易に単離
することができる。前者のスポットから単離された精製
品がＤ物質であり，後者のスポットから単離された精製
品がＥ物質である。

【００３６】また，Ｈ物質は，上記メタノール溶媒の代
わりにクロロホルム−メタノール２８％アンモニア水の
混液を用い，これをシリカゲル薄層プレート（例えば，
メルク社製シリガゲル６０Ｆ_２５４）上で，上記混液
（混合比１６０：４０：０．５）を展開溶媒とする薄層
クロマトグラフィーを行うことによりＲｆ値０．６２の
スポットから単離することができる。

【００３７】（生産物）このようにして得られた抗生物
質Ｄ物質，Ｅ物質及びＨ物質の理化学的性質は以下のと
おりである。（Ａ）Ｄ物質の理化学的性質（１）紫外線吸収スペクトル：λ_ｍａｘ．２８３ｎｍ
（ＭｅＯＨ）（２）赤外線吸収スペクトル：本物質の臭化カリウム錠
剤法による赤外線吸収スペクトルを第１図に示す。（３）核磁気共鳴スペクトル：本物質の重クロロホルム
中での１００ＭＨｚの核磁気共鳴スペクトルを第２図に
示す。（４）質量分析：ＥＩ−ＭＳにのよる主なフラグメント
・ピーク１５８，４０７および５８１（Ｍ^＋）ＴＭＳ誘導体のＥＩ−ＭＳによるピーク７９７（Ｍ^＋）（５）外観：無色粉末（６）塩基性・中性・酸性の区別：塩基性物質（７）薄層クロマトグラフィーのＲｆ値：シリカゲル６
０Ｆ₂₅₄（メルク社製）を使用検出：ＵＶ₂₅₄ｎｍ

【００３８】

【表５】

【００３９】（Ｂ）Ｅ物質の理化学的性質（１）紫外線吸収スペクトル：λ_ｍａｘ．２４０ｎｍ
（ＭｅＯＨ）（２）質量分析：ＥＩ−ＭＳによる主なフラグメント・
ピーク１５８，４２３および５９７（Ｍ^＋）ＴＭＳ誘導体のＥＩ−ＭＳによるピーク８１３（Ｍ^＋）（３）外観：無色粉末（４）塩基性・中性・酸性の区別：塩基性物質（５）溶解性：メタノール，エタノール，アセトン酢酸
エチルおよびクロロホルムに可溶（６）薄層クロマトグラフィーのＲｆ値：シリカゲル６
０Ｆ_２５４（メルク社製）使用検出：ＵＶ₂₅₄ｎｍ

【００４０】

【表６】

【００４１】（Ｃ）Ｈ物質の理化学的性質（１）紫外線吸収スペクトル：λ_ｍａｘ．２８３ｎｍ
（ＭｅＯＨ）（２）赤外線吸収スペクトル：本物質の臭化カリウム錠
剤法による赤外線吸収スペクトルを第３図に示す。（３）核磁気共鳴スペクトル：本物質の重クロロホルム
中での１００ＭＨｚの核磁気共鳴スペクトルを第４図に
示す。（４）質量分析：ＥＩ−ＭＳによるフラグメント・ピー
ク１５８，１７４，３７９および５５３（Ｍ^＋）（５）分子量および分子式：５５３（Ｃ₃₀Ｈ₅₁ＮＯ₈）（６）外観：無色粉末（７）塩基性・中性・酸性の区別：塩基性物質（８）薄層クロマトグラフィーのＲｆ値：シリカゲル６
０Ｆ_２５４（メルク社製）を使用検出：ＵＶ_２５４ｎｍ

【００４２】

【表７】

【００４３】上記，Ｄ物質，Ｅ物質及びＨ物質はいずれ
もグラム陽性菌，グラム陰性菌及びマイコプラズマなど
の病原菌に対し抗菌活性を有する。以上の理化学的性質
や生物活性などから，本発明の発酵法によって得られる
生産物は，Ｄ物質が式

【００４４】

【化４】

【００４５】で示される物質，物質Ｅが式

【００４６】

【化５】

【００４７】で示される物質，Ｈ物質が式

【００４８】

【化６】

【００４９】で示される物質であると同定された。

【００５０】

【発明の効果】前記の如く，本発明の微生物によつて提
供される上記抗生物質Ｄ物質，Ｅ物質及びＨ物質は従来
のマクロライド抗生物質に比し，グラム陽性菌，グラム
陰性菌及びマイコプラズマなどの病原菌に対し優れた抗
菌活性を有し，これらの細菌感染症の予防，治療に有用
な物質である。本発明は，従来発酵生産物の化学修飾で
しか製造することができなかった有用な抗生物質Ｄ物
質，及びＥ物質Ｈ物質を，直接発酵法で生産することを
可能にした点で産業上顕著な効果を奏する。

【００５１】

【実施例】以下に実施例を掲記し本発明を更に詳細に説
明する。実施例１．白色デキストリン２．０％，グルコース０．
５％，ポリペプトン０．５％，酵母エキス０．５％，ブ
レイン・ハート・インフュジョン０．５２％，コーン・
スティープ・リカー０．５％，肉エキス０．３％，炭酸
カルシウム０．２％を含む培地（ｐＨ８．０）を作製
し，これを５００ｍｌ三角フラスコに各６０ｍｌずつ分
注し，１２０℃で２０分間滅菌したものにベネット寒天
培地上に生育させたミクロモノスポラ・エスピーＹＳ
−０２９３０Ｋ株の菌糸をかき取って接種し，２７℃で
７２時間振盪培養を行ない種培養液とする。つぎにポテ
ト・スターチ３．０％，大豆粉１．５％，コーン・ステ
ィープ・リカー０．５％，酵母エキス０．２％，硫酸マ
グネシウム・７水塩０．０５％，塩化ナトリウム０．３
％，塩化コバルト・６水塩０．００２％，アデカノール
（旭電化製）０．０３％を加えた培地２５ｌ（ｐＨ７．
１）を含む３０ｌ容のステンレス製発酵槽に種培養液を
３．０％の割合で植菌した。通気量２５ｌ／分・撹拌９
５〜１５０回転／分，温度２８．０〜２８．５℃で７２
時間培養を続けるとバチルス・サブチリスＡＴＣＣ６６
３３株に対する抗菌性は最大となる。このようにして得
られた培養液にラジオライト＃６００（昭和化学工業
製）を加えて撹拌の後，濾過すると濾液２０ｌが得られ
る。

【００５２】この濾液に０．１規定の水酸化ナトリウム
を加えてｐＨ８．５に調製した後，２０ｌの酢酸エチル
を加えてよく撹拌する。酢酸エチル層を分離した後，こ
れにｐＨ３に調製した塩酸水５ｌを加えよく撹拌する。
ｐＨ３塩酸水層を分離した後，重曹を添加してｐＨ８．
５に調製した後，酢酸エチル５ｌを加えよく撹拌する。
酢酸エチル層を分離して，これに無水硫酸ナトリウムを
加えて脱水する。つぎに無水硫酸ナトリウムを濾別した
後，酢酸エチル層を減圧濃縮すると淡黄色物質が２００
ｍｇ得られる。

【００５３】実施例２．実施例１で得られた淡黄色物質
２００ｍｇに少量のメタノールを加え溶解させた後，メ
ルク社製シリカゲル６０Ｆ_２５４薄層プレートに帯状に
塗布してクロロホルム：メタノール：２８％アンモニア
水（４０：１０：０．２）を展開溶剤とする薄層クロマ
トグラフィーを行ない，Ｒｆ値０．５８を示し，バチリ
ス・サブチリスＡＴＣＣ６６３３株に抗菌活性を示す部
分をかき取り，かき取ったシリカゲル粉末をカラムにつ
め，クロロホルム：メタノール：２８％アンモニア水
（４０：１０：０．２）で抗菌活性物質を溶離させた
後，減圧濃縮すると無色粉末として純粋な抗生物質ＹＳ
−０２９３０Ｋ−Ｄ物質が１５ｍｇ得られた。

【００５４】実施例３．実施例１で得られた淡黄色物質
２００ｍｇに少量のメタノールを加え溶解させた後，メ
ルク社製シリカゲル６０Ｆ_２５４薄層プレートに帯状に
塗布してクロロホルム：メタノール：２８％アンモニア
水（４０：１０：０．２）を展開溶剤とする薄層クロマ
トグラフィーを行ない，Ｒｆ値０．６２を示し，バチル
ス・サブチリスＡＴＣＣ６６３３株に抗菌活性を示す部
分をかき取り，かき取ったシリカゲル粉末をカラムにつ
め，クロロホルム：メタノール：２８％アンモニア水
（４０：４０：０．２）で抗菌活性物質を溶離させた
後，減圧濃縮すると無色粉末として純粋な抗生物質ＹＳ
−０２９３０Ｋ−Ｅ物質が１０ｍｇ得られた。

【００５５】実施例４．白色デキストリン２．０％，グ
リコース０．５％，ポリペプトン０．５％，酵母エキス
０．５％，ブレイン・ハート・インフュジョン０．５２
％，コーン・スティープ・リカー０．５％，肉エキス
０．３％，炭酸カルシウム０．２％を含む培地（ｐＨ
８．０）を作製し，これを５００ｍｌ三角フラスコに各
６０ｍｌずつ分注し，１２０℃で２０分間滅菌したもの
にベネット寒天培地上に生育させたミクロモノスポラ・
エスピーＹＳ−０２９３０Ｋ株の菌糸をかき取って接種
し，２７℃で７２時間振盪培養を行ない種培養液とす
る。

【００５６】つぎにポテト・スターチ３．０％，大豆粉
１．５％，コーン・スティーブ・リカー０．５％，酵母
エキス０．２％，硫酸マグネシウム・７水塩０．０５
％，塩化ナトリウム０．３％，塩化コバルト・６水塩
０．００２％，アデカノール（旭電化製）０．０３％を
加えた培地１００ｌ（ｐＨ７．１）を含む１５０ｌ容の
ステンレス製発酵槽に種培養液を３．０％の割合で植菌
した。通気量１００ｌ／分・撹拌９５〜１５０回転／
分，温度２８．０〜２８．５℃で７２時間培養を続ける
とバチルス・サブチリスＡＴＣＣ６６３３株に対する抗
菌活性は最大となる。このようにして得られた培養液に
ラジオライト＃６００（昭和化学工業製）を加えて撹拌
の後，濾過すると濾液８５ｌが得られる。この濾液に
０．１規定の水酸化ナトリウムを加えてｐＨ８．５に調
製した後，８５ｌの酢酸エチルを加えよく撹拌する。酢
酵エチル層を分離した後，これにｐＨ３に調製した塩酸
水１０ｌを加えよく撹拌する。ｐＨ３塩酸水層を分離し
た後，重曹を添加してｐＨ８．５に調製した後，酢酸エ
チル１０ｌを加えよく撹拌する。酢酸エチル層を分離し
て，これに無水硫酸ナトリウムを加えて脱水する。つぎ
に無水硫酸ナトリウムを濾別した後，酢酸エチル層を減
圧濃縮すると淡黄色物質が８００ｍｇ得られる。

【００５７】実施例５．実施例４で得られた淡黄色物質
８００ｍｇをクロロホルム−メタノール−２８％アンモ
ニア水（５０：１：０．１）の溶液１ｍｌに溶解させ
る。次にワコーゲルＣ−２００（和光純薬製）１６ｇを
クロロホルムメタノール２８％アンモニア水（６０：
１：０．１）で充填したカラムに試料を含む溶液１ｍｌ
を乗せクロロホルム−メタノール−２８％アンモニア水
（５０：１：０．１）を展開溶剤とするカラムクロマト
グラフィーを行ない，５ｍｌずつ分画する。溶出された
各分画をクロロホルム−メタノール−２８％アンモニア
水（１６０：４０：０．５）を展開溶剤とするシリカゲ
ル６０Ｆ_２５４（メルク社製）を用いる薄層クロマトグ
ラフィーを行ないＵＶ_２５４検出器においてＲｆ値０．
６２を示し，かつバチルス・サブチリスＡＴＣＣ６６３
３株に抗菌活性を示す物質を含む分画を集め，減圧濃縮
すると無色粉末として純粋な抗生物質ＹＳ−０２９３０
Ｋ−Ｈ物質が２０ｍｇ得られた。

【００５８】

【図面の簡単な説明】

図１：ＹＳ−０２９３０Ｋ−Ｄ物質の赤外線吸収スペク
トル図２：同物質の核磁気共鳴スペクトル図３：ＹＳ−０２９３０Ｋ−Ｈ物質の赤外線吸収スペク
トル図４：同物質の核磁気共鳴スペクトルである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所Ｃ１２Ｒ 1:29）

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】抗生物質ＹＳ−０２９３０Ｋ−Ｄ及び／又
はＹＳ−０２９３０Ｋ−Ｅ及び／又はＹＳ−０２９３０
Ｋ−Ｈ生産能を有するミクロモノスポライゼナエンシ
ス
【請求項２】ミクロモノスポラエスピーＹＳ−０
２９３０Ｋ株（微工研条寄第１０７６号）である請求項
１記載の菌。