JPS61268176A - 新規微生物及びその使用方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明はミクロモノスポラ属に属し、抗生物質ＹＳ−０
２９３０Ｋ−Ｄ及び／又はＹＳ−０２９３０Ｋ　−Ｅ及
び／又はＹＳ−０２９３０Ｋ−Ｈ生産能を有する新規微
生物、及び該抗生物質の生産方法において該微生物を使
用する方法に関する。

［従来の技術］ 本発明によって生産される抗生物質は下記の一般式で式
示されるマクロライド系の抗生物質（式中、Ｒは水素原
子又は°ホルミル基を１点線はこの間が二重結合又は△
で示される結合を意味する。） ＹＳ−０２９３０Ｋ−Ｄ物質はＲがホルミル基で９点線
が二重結合の化合物であり　、　ＹＳ−０２９３０Ｋ　
−Ｅ物質はＲがホルミル基で１点線がΔで示される結合
の化合物であり、　ＹＳ−０２９３０Ｋ−Ｈ物質はＲが
水素原子で１点線が二重結合で示される結合の化合物で
ある（以下それぞれ単にＤ物質、Ｅ物質、およびＨ物質
という）。

従来、Ｄ物質は特開昭５７−２８１００号公報に。

Ｅ物質は特開昭５９−３３２９８号公報におよびＨ物質
は特開昭５８−９６０９６号公報にそれぞれ示された発
明に包含され、いずれも公知の物質である。

上記の公報によればＤ物質は３．２３−０−メトキシメ
チル（又はテトラヒドロフラニル）マイカミノシル　タ
イロノライド　ジエチルアセタールを原料として、その
４′位のヒドロキシ基を脱離させた後、３．２３位のヒ
ドロキシ基の保護基。

１８位のアルデヒド基の保護基を脱離させる化学的合成
法により製造されている。また、Ｅ物質は、４′−デオ
キシ　マイカミノシル　タイロノライド　ジエチルアセ
タールを過酸で処理し。

次いでトリフェニルホスフィンで処理して１２゜１３位
をエポキシ化し２次いでアルデヒドの保護基を脱離させ
る方法により、Ｈ物質は、４′−デオキシ　マイカミノ
シル　タイロノライドにクロロトリス（トリフェニルホ
スフィン）ロジウムを作用させる方法により化学的に合
成されている。

［発明の解決しようとする課題］ しかしながら、化学的合成法によらず９発酵法によって
前記り、Ｅ及びＨ物質を生産することについては従来全
く知られていない。

本発明の目的の一つは、これらＤ物質及び／又はＥ物質
及び／又はＨ物質の生産能を有するミクロモノスポラ属
の新種の微生物を提供することにある。また１本発明の
他の目的は、Ｄ物質及び／又はＥ物質及び／又はＨ物質
を発酵法により生産する方法において、Ｄ物質及び／又
はＥ物質及び／又はＨ物質生産能を有するミクロモノス
ポラ属に属する微生物を使用することを特徴とする方法
の提供にある。

［課題解決のための手段コ 本発明者らは、薬理作用物質を生産する微生物を探索し
た結果、土壌から常法によって分離した微生物がその菌
学的性質より判断してミクロモノスポラ属に属する新種
の放線菌であることをつきとめ、その放線菌が抗生物質
り、Ｅ及びＨ物質を産生ずることを知見して１本発明を
完成するに至った。

すなわち９本発明はミクロモノスポラ属に属し、抗生物
質り物質及び／又はＥ物質及び／又はＨ物質生産能を有
することを特徴とする微生物、並びに微生物を培養し、
培養液から抗生物質り物質及び／又はＥ物質及び／又は
Ｈ物質を採取する抗生物質り物質及び／又はＥ物質及び
／又はＨ物質の生産方法において、ミクロモノスポラ属
に属し、抗生物質り物質及び／又はＥ物質及び／又はＨ
物質生産能を有する微生物を使用することを特徴とする
方法である。

（微生物） 本発明のミクロモノスポラ属に属し、抗生物質り物質及
び／又はＥ物質及び／又はＨ物質生産能を有する微生物
としては具体的には例えばミクロモノスポラエスピー（
Ｍｉｃｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａ　ｓｐ、）ＹＳ−０２９
３０に株を挙げることができる。

ＹＳ−０２９３０に株の菌学的性質は以下の通りである
。

１、形態学的性質 本菌は、一般に使用されている種々の寒天培地上で真性
気菌糸を形成しない。胞子形成の良好な培地に生育した
菌糸をかきと９．顕微鏡下で観察すると、胞子は塞化菌
糸から分枝した胞子柄（０，２〜０．８μｍ）の頂点に
１個（まれに２個）着生し、菌糸全体にくまなく形成歯
れる。

ルートマン（Ｌｕｅｄｅｍａｎｎ　、）らの分類［アン
チミクロバイアル・エイジェンッ・アンド・ケモセラピ
ー（Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ、　Ａｇ、Ｃｈｅｍｏｔｈ、
）　１９６４゜４７〜５２（１９６５）］によれば、胞
子柄の分枝方式はモノポジアルタイブ（Ｍｏｎｏｐｏｄ
ｉａｌ　ｔｙｐｅ　）に属する。

電子顕微鏡的には、胞子は球状（直径約０．８〜１．２
μｍ）で２表面は平滑である。

液体培地で培養すると、菌糸はほとんど分枝せず、長く
伸長し、菌糸間に球状の構造（長径８〜１０μｍ）が観
察される。電顕的観察により、これらの構造は菌糸の融
合により生じたものであると判断された。

２、各培地における生育状態 各種寒天培地上の生育状態は以下に示すとおりである。

特に記載しない限り、２８°Ｃで２１日間培養し、常法
に従って観察したものである。色調の記載は色の標準（
日本色採研究所）によった。

（注）　Ｇ：生育及び集落表面の菌叢色Ｒ：裏面の色相 Ｓ：可溶性色素 ３、生理的性質 （注）生育温度は各温度（５，１０，１５，２０，２５
，２８，３０，３３゜３７、４０．４５．５０　Ｃ）で
７〜２１日までの観察結果ミルクに対する作用は３７Ｃ
で３〜２１日までの観察結果、それ以外は特に指摘のな
い限り２８Ｃで２週間後の観察結果を示す。

４、各炭素源の資化性（プリドハム・ゴドジーブ寒天培
地上、２８ｃ培養） （注）＋８生育スう　　　　　　　士：わずかに生育す
る壬；はとんど生育しない　　−；生育しない５、細胞
壁組成の分析 リチェバリアー（Ｌｅｃｈｅｖａｌｉｅｒ　）らの方法
［リチェバリアー、エムピー等：ダイエノツ、ニーＰＰ
２２７−２２８等、アクチノマイセテ・タシソノミー・
ニスアイエム　スペシャル　パラ′リケーシコン（Ｌｅ
ｃｈｅｖａｌｉｅｒ、　Ｍ、　Ｐ、ｅｔ　ａｌ　；ＰＰ
２２７−２２８　ｉｎ　Ｄｉｅｔｚ、　Ａ、　ｅｔ　ａ
ｔ　ｅｄ、、　ＡｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅＴａｘｏｎｏ
ｍｙ、　Ｓ　ＩＭ　　５ｐｅｃｉａｌ　ｐｕｂｌｉｃａ
ｔｉｏｎ　）　Ｎ１６．１９８０〕 年〉に従い９本菌株の細胞壁成分及び全菌体の酸加水分
解物の分析を行った結果、特徴酷なアミノ酸として、メ
ソジアミノピメリン酸。

３−ヒドロキシジアミノピメリン酸、及びグリシンを含
み、糖成分としてキシロースとアラビノースを含有する
ことが確認された。

以上の菌学的性質をまとめると、　ＹＳ　−０２９３０
に株は、各種寒天培地上で、真性の気菌糸を形成せず、
塞化菌糸より生じた胞子柄（Ｍｏｎｏ−ｐｏｄｉａｌ　
ｔｙｐｅ　）に胞子を単一（まれに２個）形成する。液
体培養において、菌糸は、はとんど分枝せず、長く伸長
し、菌糸が融合して球状の構造が形成される。細胞壁、
及び全細胞酸加水分解物の分析によりメンジアミノピメ
リン酸とグリシンを有し、また糖として、キシロースと
、アラビノースの存在が確認された。

以上の性質から１本菌株はミクロモノスポラ（Ｍｉｃｒ
ｏｍｏｎｏｓｐｏｒａ　）属に属する放線菌であると判
断される。本菌株に類似の既知菌株をバーギイーズ・マ
ニュアル・オプ・デターミネイティブ・バクテリオロジ
ー第８版、　　１９７４年（Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ　Ｍａｎ
ｕａｌ　ｏｆ　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ　Ｂａｃｔ
ｅｒｉｏｌｏｇｙ　８　ｔｈＥｄｉｔｉｏｎ（１９７４
））、および種々の文献などにより検すると、胞子が球
状でその表面が平滑であり、寒天培地での生育の色調が
オレンジル黄茶を呈する菌として、ミクロモノスポラ　
カルセア（Ｍｉｃｒｏｍｏ−ｎｏｓｐｏｒａ　ｃｈａｌ
ｃｅａ　）、ミクロモノスポラ　ハロフイテイカ（Ｍｉ
ｃｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａ　ｈａｌｏｐｈｙｔｉｃａ　
）およびミクロモノスポラカルボナセア（Ｍｉｃｒｏｍ
ｏｎｏｓｐｏｒａ　ｃａｒｂｏｎａｃｅａｅ　）があげ
られる。しかしＭ、カルセアは後記表１のように、炭素
源として、α−メリビオース、ラフィノース、Ｌ−アラ
ビノース、Ｄ−グルコース、Ｄ−ガラクトース、スター
チ、シュクロース、　Ｄ−キシロースヲ資化できるのに
対し、　ＹＳ−０２９３０Ｋ株は、Ｌ−アラビノース、
Ｄ−グルコース、シュクロース。

スターチを資化するが、上記のそれ以外の糖を資化でき
ない（α−メリビオースはわずかに資化する）。また、
　ＹＳ−０２９３０Ｋ株はＭ。

カルセアにみられる様なセルロース分解能はない。

また１Ｍ、ハロフィティ力は、後記表１の様に炭素源と
して、Ｌ−アラビノース、Ｄ−ガラクトース、Ｄ−グル
コース、Ｄ−フラクトース、　Ｄ　−マンノース、α−
メリビオース、ラフィノース。

スターチ、シュクロース、Ｄ−キシロースを資化し、　
ＹＳ　−０２９３０Ｋ株とは、炭素源の利用性の点で大
きく異なる。また２Ｍ、ハロフィティ力は硝酸塩の還元
性（陽性）、セルロースの分解能（陽性）においてもＹ
Ｓ　−０２９３０Ｋ株と性質を異にする。

次にミクロモノスポラ　力ルボナセアは胞子が球状で表
面は平滑であり液体培養において、枝分れのない長い菌
糸を形成し、また寒天培地上の生育の色調はオレンジル
黄茶〜黒でＹＳ−０２９３０Ｋ株と類似している。しか
し糖の利用性に関しては２表１の様にＹＳ　−０２９３
０Ｋ株とはＤ−キシロース、Ｄ−フラクトース、α−Ｌ
−７ラビノース　　　＋　　　　　＋＋十〇−キシロー
ス　　　　−　　　　　＋＋＋Ｄ−グルコース　　　　
±　　　　　＋　　　　　＋　　　　　＋Ｄ−フラクト
ース　　　−　　　　　＋＋＋シェクロース　　　　　
＋　　　　　＋＋＋イノシトール　　　　　−−−− Ｌ−ラムノース　　　　−−−− ラフィノース　　　　　−−十十 〇−マンニトール　　　−−壬　　　　　−可溶性スタ
ーチ　　　　＋　　　　　＋＋＋メリビオースの利用性
が異なり、また、硝酸塩の還元能においても性質を異に
する。また。

胞子柄の着生様式がＭ、カルボナセアではシンポジアル
タイブ（Ｓｙｍｐｏｄｉａｌ　ｔｙｐｅ　）であるのに
対し、　ＹＳ　−０２９３０Ｋ株ではモノポジアルタイ
ブ（Ｍｏｎｏｐｏｄｉａｌ　ｔｙｐｅ　）であり異なる
。

さらにその他の菌種としてマクロライド抗生物質生産性
の報告をされているＭｉｃｒｏｍｏｎｏｓ−ｐｏｒａ属
の菌種には、■ミクロモノスポラ　ロザリア（Ｍｉｃｒ
ｏｍｏｎｏｓｐｏｒａ　ｒｏｓａｒｔａ　）　　■ミク
ロモノスポラ　メガロミシア（Ｍｉｃｒｏｍｏｎｏｓｐ
ｏｒａ　ｍｅｇａｌｏ−ｍｉｃｉａｅ　）■ミクロモノ
スポラ　イノシトラ（Ｍｉｃｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａ　
ｔｎｏｓｉｔｏｌａ　）　　■ミクロモノスポラカルセ
アハリエタス　イズメンシス（Ｍｉｃｒ−ｏｍｏｎｏｓ
ｐｏｒａ　ｃｈａｌｃｅａ　ｖａｒ　ｉｚｕｍｅｎｓｉ
ｓ　）があるが■はワインレッドカラーの可溶性色素を
生産し、胞子表面が特徴的なとげ状構造を呈する。■は
チロシン寒天培地で良く生育し、メラニン色素の生産が
認められる。■はグルコース・アスパラギン寒天上に生
育しない。また、イノシトールを唯一の炭素源として利
用する。

■はＭ、カルセアの項で記した様に、炭素源の利用性が
ＹＳ−０２９３０株と比べて良好で、特にα−メリビオ
ース、ラフィノースの利用性が特徴的である。以上の点
から、上記４菌種もＹＳ−０２９３０に株とは明らかに
異なっている。

以上の様に、すでに報告されたミクロモノスポラ属の菌
でＹＳ−０２９３０にと一致する菌種はみあたらず、新
菌種であると判断される。よって本菌株をミクロモノス
ポラ　エスピー（Ｍｉｃｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａ　ｓｐ
、）　ＹＳ　−０２９３０Ｋ株と命名した。

本菌株は通商産業省工業技術院微生物工業技術研究所に
微工研菌寄第７９６１号として寄託されている。

本発明に係る微生物は、上記菌学的性質における特徴の
他、抗生物質り物質及び／又はＥ物質及び／又はＨ物質
を生産する点でも特徴づけられる。本発明に用いられる
菌株は。

他の放線菌にも見られるごとく９人工的にまた自然に変
異をおこしやすいが９本発明のいうＹＳ−０２９３０Ｋ
株は天然から分離された放線菌、あるいはこれを紫外線
、Ｘ線、化学薬剤などで人工的に変異させた菌株及びそ
れらの自然変異株をも包含するものである。

本発明の新菌種に属する微生物は天然の土壌より分離し
て取得したものであるが、前記微生物工業技術研究所に
寄託した菌株の凍結乾燥品を復元することによって容易
に取得することかできる。

（培養法） 本発明に係る微生物の培養は、その微生物が利用する栄
養源を含有する培地を用いて行なわれる。培地は合成、
半合成、又は天然の。

固体又は液体培地のいずれを用いてもよいが。

通常天然の栄養源を含む液体培地が好適である。培地に
添加する栄養源としては、炭素源としては同化可能な炭
素化合物であればよく。

例えばアラビノース、シュクロース、スターチ、グルコ
ース、ブドウ糖、澱粉、デキストリン、ヤシ油、大豆油
、α−メリビオース等が単独または組４合わせて用いら
れる。

さらに、アルコール類２　有機酸なども用いうる場合が
ある。無機及び有機窒素源としては、塩化アンモン、硝
酸ンーダ、硫酸アンモン、硝酸アンモン、尿素などが、
有機窒素源としては、ペプトン、酵母エキス、乾燥酵母
、肉エキス、グルテンミール、コーンスチープリカー、
大豆粉、魚粉、落花生粉、綿実粕、カザミノ酸や各種ア
ミノ酸（例えばグルタミン酸、アラニア、リジン等）な
どが単独又は組み合せて用いられる。

また、培地には必要に応じナトリウム、カリウム、マグ
ネシウム、カルシウム、亜鉛、鉄、コバルトなどの金属
の硫酸塩、硝酸塩、塩化物。

炭酸塩、リン酸塩などを添加することができる。

培養は好気的条件下に行なうのがよく、静置、振盪１通
気攪拌培養のいずれも可能であるが、振盪あるいは通気
攪拌培養が有利である。培養温度はおよそ２５〜３３　
Ｃの範囲内が好ましく、殊に約２７〜２９　Ｃが有利で
ある。

また、培地のｐＨは約５．５〜８，５の中性付近に保持
するのが好適である。培養期間は培地の組成、温度等の
培養条件によって異なるが２通常約２日〜１４日程度で
あり、上記り、Ｅ及びＨ物質が最高力価に達する時期を
見計らって適当な時期に培養を終了する。

このよ５Ｋして培養された培養物中に蓄積された抗生物
質を単離精製するＫは２通常用いられる単離精製手段を
適用すればよい。ミクロモノスポラ　エスピー　ＹＳ　
−０２９３０Ｋ　株を実施例に記載の培養条件下で培養
すると。

培養液中に少なくとも２種類の抗菌活性物質が蓄積され
る。

抗菌活性物質の単離、精製は培養物を遠心分離又は沢過
して、菌体を除去した後、適当な溶剤に対する溶解性及
び溶解度の差、溶液からの析出性及び析出速度の差、ｆ
ｆｌ々の吸着剤に対する吸着親和性の差、２種の液相間
における分配の差などを利用する方法を適用して行なう
のが好ましい。これらの方法は必要に応じて単独に用い
られ、あるいは任意の屓序に組合せ、また反覆して適用
できる。

ＹＳ−０２９３０に株の培養による生産物のうち、Ｄ物
質とＥ物質はその混合物のメタノール溶液をメルク社製
シリカゲル６０Ｆｚｓ＋薄層プレート上でクロロホルム
：メタノール＝２８％アンモニア水（４０：　１０　：
　０．２　）を展開溶媒とする薄層クロマトグラフィー
な行なうと、　Ｒｆ値０．５８と０．６２のスポットに
分かれ。

この性質を利用することにより容易に単離することがで
きる。前者のスポットから単離された精製品がＤ物質で
あり、後者のスポットから単離された精製品がＥ物質で
ある。

また、■物質は、上記メタノール溶媒の代わりにクロロ
ホルム−メタノール−２８％アンモニア水の混液を用い
、これをシリカゲル薄層プレート（たとえば、メルク社
製シリカゲル６０Ｆｚｓ＋）上で、上記混液（混合比１
６０：４０：　０．５　）を展開溶媒とする薄層クロマ
トグラフィーを行うことによりＲｆ値０．６２のスポッ
トから単離することができる。

（生産物） このようにして得られた抗生物質り物質。

Ｅ物質及びＨ物質の理化学的性質は以下のとおりである
。

（Ａ）　　Ｄ物質の理化学的性質 （２）赤外線吸収スペクトル：本物質の臭化カリウム錠
剤法による赤外線吸収スペクトルを第１図に示す。

（３）核磁気共鳴スペクトル二本物質の重クロロホルム
中での１００ＭＨｚの核磁気共鳴スペクトルを第２図に
示す。

（４）質量分析：　　ＥＩ−ＹＳによる主なフラグメン
ト・ピーク１５８，４０７および ５８１（Ｍ”） ＴＹＳ誘導体のＥＩ−ＹＳによる ビーク７９７（Ｍ＋） （５）外観：無色粉末 （６）塩基性・中性・酸性の区別：塩基性物質（力　薄
層クロマトグラフィーのＲｆ値ニジリカゲル６０　Ｆ２
５４（メルク社製）を使用 検出：　ＵＶ２５４　ｎｍ （Ｂ）　Ｅ物質の理化学的性質 （２）質量分析：ＥＩ−ＹＳによる主なフラグメント・
ピーク１５８，４２３および ５９７（Ｍ”） ＴＹＳ誘導体のＥＩ−ＹＳによるビ ーク８１’３（Ｍ＋） （３）外観：無色粉末 （４）塩基性・中性・酸性の区別：塩基性物質（５）溶
解性：メタノール、エタノール、アセトン酢酸エチルお
よびクロロホルムに 可溶 （６）薄層クロマトグラフィーのＲｆ値ニジリカゲル６
０Ｆ２Ｓ４（メルク社製）を使用 検出：　ＵＶ２５４．ｎｍ （Ｃ）　Ｈ物質の理化学的性質 （２）赤外線吸収スペクトル二本物質の臭化カリウム錠
剤法による赤外線吸収スペクトルを第３図に示す。

（３）核磁気共鳴スペクトル：本物質の重クロロホルム
中での１００ＭＨｚの核磁気共鳴スペクトルを第４図に
示す。

（４）質量分析：ＥＩ−ＹＳによるフラグメント・ピー
ク１５８、１７４．３７９および５５３（Ｍ＋）（５）
分子量および分子式：５５３Ｃ，。Ｈｆｉ、ＮＯ。

（６）外観：無色粉末 （７）塩基性・中性・酸性の区別：塩基性物質（８）薄
層クロマトグラフィーのＲｆ値ニジリカゲル５ｏｐ２ｓ
４（メルク社製）を使用 検出：　ＵＶ２Ｂ４　ｎｍ 上記、Ｄ物質、Ｅ物質及びＨ物質はいずれもダラム陽性
菌、ダラム陰性菌及びマイコプラズマなどの病原菌に対
し抗菌活性を有する。

以上の理化学的性質や生物活性などから２本発明の発酵
法によって得られる生産物は、Ｄ物質が式 で示される物質、物質Ｅが式 で示される物質、Ｈ物質が式 で示される物質であると同定された。

［発明の効果コ 前記の如く２本発明の方法によって提供される上記抗生
物質り物質、Ｅ物質及びＨ物質は従来のマクロライド抗
生物質に比し、ダラム陽性菌、ダラム陰性菌及びマイコ
プラズマなどの病原菌に対し優れた抗菌活性を有し、こ
れらの細菌感染症の予防、治療に有用な物質である。

Ｅ物質及びＨ物質を、直接発酵法で生産することを可能
にした点で産業上顕著な効果を奏する。

（実施例） 以下に実施例を掲記し本発明を更に詳細に説明する。

実施例　１゜ 白色デキストリン２．０％、グルコース０．５％、ポリ
ヘフトンＯ：５％、酵母エキス０．５％、プレイン・ハ
ート・インフユジョン０．５２％、コーン・ステイープ
・リカー０．５％、肉エキス０．３％、炭酸カルシウム
０．２％を含む培地（ｐＨ８，０）を炸裂し、これを５
００　ｍｌ三角フラスコに各６０　ｍｌずつ分注し、１
２０ｃで２０分間滅菌したものにベネット寒天培地上に
生育させたミクロモノスポラ・エスピー　ＹＳ　−０２
９３０Ｋ　株の菌糸をかき取って接種し、２７ｃで７２
時間振盪培養を行ない種培養液とする。つぎにポテト・
スターチ３．０％、大豆粉１．５％、コーン°ステイー
プ・’）　カー　０．５％、酵母エキス０．２％、硫酸
マグネシウム・７水塩０，０５％、塩化ナトリウム０．
３％、塩化コバルト・６水塩０．００２％、アデヵノー
ル　（旭を化製）　０．０３％を加えた培地２５１　（
ｐＨ７，１）を含む３０を容のステンレス製醗酵槽に種
培養液を３．０％の割合で植菌した。通気量２５１／分
・攪拌９５〜１５０回転／分、温度２８．０〜２８．５
　Ｃで７２時間培養を続けるとバチルス・サブチリスＡ
ＴＣＣ６６３３株に対する抗菌活性は最大となる。この
ようにして得られた培養液にラジオライ）　＃６００　
（昭和化学工業製）を加えて攪拌の後、濾過するとデ液
２０１が得られる。

このｒ液に０．１規定の水酸化ナトリウムを加えてｐＨ
８，５に調整した後、２０ｔの酢酸エチルを加えてよく
攪拌する。酢酸エチル層を分離した後、これにｐＨ３に
調整した塩酸水５ｔを加えよく攪拌する。

ｐＨ３塩酸水層を分離した後２重曹を添加してｐＨ８，
５に調整した後、酢酸エチル５ｔを加えよく攪拌する。

酢酸エチル層を分離して、これに無水硫酸ナトリウムを
加えて脱水する。つぎに無水硫酸すトリウムをｒ別した
後、酢酸エチル層を減圧濃縮すると淡黄色物質が２００
　［１１ｇ得られる。

実施例　２゜ 実施例１１で得られた淡黄色物質２００ＩＩＩｌ１ｇに
少量のメタノールを加え溶解させた後、メルク社製シリ
カゲル６０　Ｆ、、４薄層プレートに帯状に塗布してク
ロロホルム：メタノール：２８％アンモニア水（４０：
１０：０．２）を展開溶剤とする薄層クロマトグラフィ
ーな行ない、　Ｒｆ値０．５８を示し、バチリス・サブ
チリスＡＴＣＣ６６３３株に抗菌活性を示す部分をかき
取り、かき取ったシリカゲル粉末をカラムにつメ、クロ
ロホルム：メタノール＝２８％アンモニア水（４０：１
０：０．２）で抗菌活性物質を溶離させた後、減圧濃縮
すると無色粉末として純粋な抗生物質ＹＳ　−０２９３
０Ｋ　−Ｄ物質が１５ｍｇ得られた。

実施例　３゜ 実施例−４１で得られた淡黄色物質２００　Ｉｎｇに少
量のメタノールを加え溶解させた後、メルク社製シ４リ
カゲル６０　Ｆ２５４薄層プレートに帯状に塗布してク
ロロホルム：メタノール２２８％アンモニア水（４０：
　１０　：　０．２　）を展開溶剤とする薄層クロマト
グラフィーを行ない、　Ｒｆ値０．６２を示し、バチル
ス・サブチリスＡＴＣＣ６６３３株に抗菌活性を示す部
分をかき取り、かき取ったシリカゲル粉末なカラムにつ
メ、クロロホルム：メタノール＝２８％アンモニア水（
４０：　１０　：　０．２　）で抗菌活性物質を溶離さ
せた後、減圧濃縮すると無色粉末として純粋な抗生物質
ＹＳ　−０２９３０Ｋ　−Ｅ物質が１０■得られた。

実施例　４゜ 白色デキストリン２．０％、グリコース０．５％、ポリ
ヘフトン０．５％、酵母エキス０．５％、プレイン・ハ
ート・インツユ２３フ０．５２ ー０．５％，肉エキス０．３％，炭酸カルシウム０．２
％を含む培地（ｐ）Ｉ８．Ｏ）を作製し，これを５００
ｍ４三角フラスコに各６　０　ｍｌずつ分注し，１２０
°Ｃで２０分間滅菌したものにベネット寒天培地上に生
育させたミクロモノスポラ・エスピー　ＹＳ−０２９３
０に株の菌糸をかき取って接種し，２７°Ｃで７２時間
振盪培養を行ない種培養液とする。つぎにポテト・スタ
ーチ３．０％，大豆粉１．５％，コーン・ステイープ・
リカー０、５％，酵母エキス０．２％，硫酸マグネシウ
ム・７水塩０．０５％，塩化ナトリウム０．３％，塩化
コバルト・６水塩０．００２％，アデカノール（地竜化
製）０．０３％を加えた培地１００　Ａ　（ｐＨ７．１
　）を含む１５０を容のステンレス製醗酵槽に種培養液
を３．０％の割合で植菌した。通気量１０１７分・攪拌
９５〜１５０回転／分。

温度２８，０〜２８．５°Ｃで７２時間培養を続けると
バチルス・サブチリスＡＴＣＣ６６３３株に対する抗菌
活性は最大となる。このようにして得られた培養液にラ
ジオライト＃−　６００　（昭和化学工業製）を加えて
攪拌の後，濾過するとｆ液８５４が得られる。このｒ液
に０．１規定の水酸化ナトリウムを加えてｐＨ８．５に
調整した後，８５Ｌの酢酸エチルを加えてよく攪拌する
。酢酸エチル層を分離し，た後，これにｐＨ３に調整し
た塩酸水１０ｔを加えよく攪拌する。ｐＨ３塩酸水層を
分離した後９重曹を添加してｐＨ８．５に調整した後，
酢酸エチルＩＯＺを加えよく攪拌する。酢酸エチル層を
分離して，これに無水硫酸す）　ＩＪウムを加えて脱水
する。つぎに無水硫酸ナトリウムをｆ別した後，酢酸エ
チル層を減圧濃縮すると淡黄色物質がｓｏｏ　ｍｇ得ら
れる。

実施例　５。

実施例４で得られた淡黄色物質ｓｏｏ　Ｉｎｇをクロロ
ホルム−メタノール−２８％アンモニア水（５０　：　
１：０．１）の溶液１　ｔｎｌに溶解させる。次にワコ
ーゲルＣ−２００（和光紬薬製）１６ｇをクロロホルム
−メタノール−２８％アンモニア水（６０：１：０．１
）で充填したカラムに試料を含む溶液１　ｒｎｌを乗せ
クロロホルム−メタノール−２８％アンモニア水（５０
：１：０１）を展開溶剤とするカラムクロマトグラフィ
ーを行ない、５ｍｔずつ分画する。溶出された各分画を
クロロホルム−メタノール−２８％アンモニア水（１６
０：４０：０．５）を展開溶剤とするシリカゲル６０　
Ｆ２５４　（メルク社製）を用いる薄層クロマトグラフ
ィーを行ないＵｖ２５４検出器においてＲｆ値０．６２
を示し、かつバチルス・サブチリスＡＴＣＣ６６３３株
に抗菌活性を示す物質を含む分画を集め、減圧濃縮する
と無色粉末として純粋な抗生物質ＹＳ　−０２９３０Ｋ
　−Ｈ物質が２０［１１ｇ得られた。

【図面の簡単な説明】

第１図はＹＳ−０２９３０Ｋ　−Ｄ物質の赤外線吸収ス
ペクトル、第２図は同物質の核磁気共鳴スペクトル、第
３図はＹＳ−０２９３０Ｋ−Ｈ物質の赤外線吸収スペク
トル、第４図は同物質の核磁気共鳴スペクトルである。

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. （１）ミクロモノスポラ属に属し、抗生物質ＹＳ−０２
   ９３０Ｋ−Ｄ及び／又はＹＳ−０２９３０Ｋ−Ｅ及び／
   又はＹＳ−０２９３０Ｋ−Ｈ生産能を有することを特徴
   とする微生物
2. （２）ミクロモノスポラエスピーＹＳ−０２９３０に株
   である特許請求の範囲第（１）項記載の微生物
3. （３）微生物を培養し、培養液から抗生物質ＹＳ−０２
   ９３０Ｋ−Ｄ及び／又はＹＳ−０２９３０Ｋ−Ｅ及び／
   又はＹＳ−０２９３０Ｋ−Ｈを採取する抗生物質ＹＳ−
   ０２９３０Ｋ−Ｄ及び／又はＹＳ−０２９３０Ｋ−Ｅ及
   び／又はＹＳ−０２９３０Ｋ−Ｈの生産方法において、
   ミクロモノスポラ属に属し、抗生物質ＹＳ−０２９３０
   Ｋ−Ｄ及び／又はＹＳ−０２９３０Ｋ−Ｅ及び／又はＹ
   Ｓ−０２９３０Ｋ−Ｈ生産能を有する微生物を使用する
   ことを特徴とする方法
4. （４）微生物がミクロモノスポラエスピーＹＳ−０２９
   ３０に株である特許請求の範囲第（３）項記載の方法