JPH07505372A - ３−ｏ−脱アシル化モノホスホリル脂質ａ含有の肝炎ワクチン - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ３−０−説アシル化モノホスホリル脂質Ａ含有の肝炎ワクチン本発明は新規ワク チン処方、その製法および治療におけるその使用に関する。

とりわけ、本発明は肝炎感染症を治療するための新規処方および肝炎ワクチン成 分を配合した混合ワクチン処方に関する。

Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｂ型およびＥ型肝炎ウィルスにより発病するウィルス性肝炎 は、ごく一般的なウィルス病である。特に、Ｂ型およびＣ型ウィルスを介すると 、それは多くの肝臓病の原因である。かくして、効果的なワクチンの開発が臨界 的であり、成功が望まれているにもかかわらず、研究はまだ進行中である。多数 の鍵となる文献を含む、最新の肝炎ワクチンについての報文が、ランセット（Ｌ ａｎｃｅｔ）　（１９９０年５月１２日）　１１４２　ｆ　ｆ　（Ｐｒｏｆ　Ａ 、Ｌ、１．Ｆ、Ｅｄｄｌｅｓｔｏｎ）に掲載されている。さらにまた、［つ゛イ ルス性肝炎および肝臓病」　（ピアス・ビー・エフ、ディーンスタック・ジェイ ・エルおよびホーンアグル・ジエイ・エッチ（Ｖｙａｓ、　Ｂ、　Ｎ、　、　Ｄ ｉｅｎｓｔａｇ、　Ｊ、　Ｌ、およびＨｏｏｆｎａｇｌｅ、　Ｊ、　Ｈ，）　、 グルーンおよびストラb トン社（Ｇｒｕｎｅおよび５ｔｒａｔｔｏｎ、　Ｉｎｃ、　）　（１９８４）お よび「ウィルス性肝炎および肝臓病」　（ブロン−ディング・オン・ザ・１９９ ０・インターナショナル・シンポジウム（Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ　ｏｆ　ｔｈ ｅ　１９９０　Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｓｙｍｐｏｓｉｕｌｌｌ）　、エ フ・ビー・ホーリンガ−、ニス・エム・レモンおよびエッチ・マーゴリス（Ｆ、 　Ｂ、　Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ、　Ｓ、　Ｍ、　Ｌｅｗｏｎおよび口Ｍａｒｇｏｌ ｉｓ）編、ウィリアムスおよびウィルキンス（ｆｉｌｌｉａｍｓおよびｆｉｌｋ ｉｎｓ）出版）も参照。

本明細書にて用いる「肝炎抗原」なる語は、ヒトにて肝炎ウィルスに対する免疫 性を誘発するのに用いることができる、該ウィルス由来のいずれの抗原物質を言 うのにも用いられる。肝炎抗原は、例えば、組換え型ＤＮＡ技法により得られる ポリペプチドまたは公知方法により所望により不活性化されていてもよい肝炎ウ ィルスの弱毒化菌株である。本発明は、Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｂ型またはＥ型、以 下に記載されている例のすべての肝炎抗原を包含する。

Ａ型肝炎ウィルス（ＨＡＶ）による感染症は世界的な病気であるが、集団免疫化 に用いることができるワクチン、例えば、ＨＡＶのＨＭ−１７５株より得られる 死菌弱毒化ワクチンである製品ｒＨａｖｒｉｘＪ　（スミスクライン・ビーチャ ム・バイオロジカルズ（ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ　Ｂｅｅｃｈａｍ　Ｂｉｏｌｏｇ ｉｃａｌｓ）が入手可能である［エフ・イー・アンビル、エイ・ヘプバーンおよ びイー・ディー・フント（Ｆ、　Ｅ、　Ａｎｄｒｅ。

Ａ、　ＢｅｐｂｕｒｎおよびＥ、　Ｄ、　Ｈｏｎｄｔ）の「Ａ型肝炎用の不活性 化カンジダ・ワクチン」、プログ・メト・パイロール（Ｐｒｏｇ　Ｗｅｄ、　ｖ ｉｒｏｌ、　）第３７巻、７２〜９５頁（１９９０）およびスミスクライン・ビ ーチャム・バイオロジカルズによって公開された研究論文「ハブリックス（Ｂａ ｖｒｉｘ）　Ｊ　（１９９１）参照］。

フレミグ（Ｆｌａｈｍｉｇ）ら（前掲５６７１頁）は、Ａ型肝炎のウィルス学、 免疫学および疫学の臨床的態様を報告しており、この一般的ウィルス感染症に対 するワクチンを開発する手段を示唆している。

本明細書にて用いる場合、ｒＨＡＶ抗原」なる語は、ヒトにてＨＡＶに対する中 和抗体刺激能を有するいずれの抗原をも言う。ＨＡＶ抗原は主属毒化ウィルス粒 子または不活性化弱毒化ウィルス粒子からなるか、あるいは例えば、ＨＡＶカプ シドまたはＨＡＶウィルス蛋白質からなり、都合よくは、組換え型ＤＮＡ技法に より得ることができる。

Ｂ型肝炎ウィルス（ＨＢＶ）による感染症は世界的な病気であるが、集団免疫化 に用いることができるワクチン、例えば、ｒ　Ｅ　ｎｇｅｒｉスーＢＪ　（スミ スクライン・ビーチャム・パブリック・リミテッド・カンパ＝　−（Ｓｍｉｔｈ Ｋｌｉｎｅ　Ｂｅｅｃｈａｍ　ｐｌｃ）　）が現在入手可能であり、遺伝子操作 技法により得られる。

Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢＳＡｇ）の製剤が詳しく説明されている。例えば、ハー フオード（Ｂａｒｆｏｒｄ）らによる、デベロップ・パイオール・スタンダード （Ｄｅｖｅｌｏｐ、Ｂｉｏｌ、５ｔａｎｄａｒｄ）　５４．　１２５頁（１９８ ３）、ブレツブ（Ｇｒｅｇｇ）ら、パイテクノロジー（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏ ｇｙ）　、５．　４７９頁（１９８７）　、ＥＰ−Ａ−０２２６８４６、ＥＰ− Ａ−０２９９１０８およびその中に記載の引用文献参照のこと。

本明細書にて用いる場合、「Ｂ型肝炎表面抗原」またはｒＨＢｓＡｇＪなる語は 、ＨＢＶ表面抗原の抗原性を示すいずれのＨＢｓＡｇ抗原またはそのフラグメン トを包含する。ＨＢｓＡｇ　Ｓ抗原の２２６個のアミノ酸配列（チオライス（Ｔ ｉｏｌｌａｉｓ）ら、ネイチ＋−（Ｎａｔｕｒｅ）、３１７．　４８９　（１９ ８５）およびその中に記載されている引用文献参照）に加えて、本明細書に記載 のＨＢｓＡｇは、所望により、前記文献およびＥＰ−Ａ−０２７８９４０に記載 のプレーＳ配列の全部または一部を含有していてもよい。特に、ＨＢｓＡｇは、 ａｄ血清型のＢ型肝炎ウィルスのオーブンリーディングフレームに相対的なＨＢ ｓＡｇのＬ−蛋白質の１２〜５２残基、つづいて１３３〜１４５残基、ついで１ ７５〜４００残基からなるアミノ酸配列を含有するポリペプチドからなる（この ポリペプチドをＬ＊と称する；ＥＰＯ４１４３７４参照）。本発明の範囲内にあ るＨＢｓＡｇはまた、ＥＰＯ１９８４７４、（エンドトロエックス（Ｅｎｄｏｔ ｒｏｎｉｃｓ）　）に記載のブレＳ１−プレ５２−Ｓポリペプチドまたはその類 似体、例えばＥＰＯ３０４５７８（マコーミックおよびジョーンズ（ＭｃＣｏｒ ｍｉｃｋおよびＪｏｎｅｓ）に記載されているポリペプチドを包含する。本明細 書に記載されているＨＢｓＡｇはまた、変異体、例えば、ＷＯ９１／１４７０３ または欧州特許出願公開番号０　５１１　８５５Ａ１に記載の「逸脱変異体」、 特に１４５位でのアミノ酸置換がグリノンからアルギニンへの置換であるＨＢｓ Ａｇに言及しうるちのである。

通常、ＨＢｓＡｇは粒子形態である。その粒子は、例えば、Ｓ蛋白質単独でなる か、または、粒子、例えば（Ｌ＊、Ｓ）（ここに、Ｌ＊は前記と同じであり、Ｓ はＨＢｓＡｇのＳ−蛋白質を言う）からなっていてもよい。該粒子は、それが酵 母にて発現される形態であることが有利である。

Ｃ型肝炎ウィルス（ＨＣＶ）は、詳しくは、ＧＢ２　２１２５１１Ｂおよびその 中の引用文献に示されている。そのワクチンはＨＣＶｃＤＮＡに由来の１または それ以上の免疫原性ポリペプチドより調製できると報告されている。

Ｄ型肝炎ウィルスは、「ウィルス性肝炎および肝臓病Ｊ　（１９９０シンポジウ ム（前掲））。

Ｅ型肝炎ウィルス（ＨＥＶ）は、詳細には、ＷＯ３９／１２４６２およびその中 の引用文献に示されている。ワクチン組成物の一例は、薬理学上許容されるアジ ュバント、ＨＥＶに由来する組換え型蛋白質または蛋白質混合物からなる。

実験的および商業上利用できる肝炎ワクチン、例えばＨａｖｒｉｘおよびＥｎｇ ｅｒｉｘ−Ｂは優れた結果を付与するにもかかわらず、最適ワクチンは中和抗体 を刺激するだけでなく、Ｔ−細胞を介して媒介される細胞免疫性をできる限り効 果的に刺激することが必要であるということは認められている事実である。さら にまた、このように細胞免疫性を刺激するのに、肝炎成分を含有する混合ワクチ ンについての必要性がある。本発明はこれらの目的を達成するためのものである 。

本発明は、３−０−説アシル化モノホスホリル脂質Ａ（本明細書中、ＭＰＬとい う）と適当な担体とを組み合わせた肝炎抗原からなるワクチンを提供する。

３−０−説アシル化モノホスホリル脂賀Ａ（または３Ｄｅ−０−アシル化モノホ スホリル脂質Ａ）は、前は、３Ｄ−ＭＰＬまたはｄ　３−ＭＰ　Ｌと称され、還 元末端グルコサミンの３位が脱−〇−アンル化されていることを意味する。調製 には、ＧＢ２２２０　２１１Ａ参照。それは、化学的には、３−説アシル化モノ ホスホリル脂質Ａと、４．５または６アシル化鎖との混合物である。ｒＭＰＬＪ はリビ（Ｒｉｂｉ）により使用されている、モンタナ州、リビ・イムノケム（Ｒ ｉｂｉ　Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｔ）の登録商標であり、疑いなく、その３−０−説 アシル化モノホスホリル脂質Ａ製品を指すものであるため、本明細書中、３Ｄ− ＭＰＬ　（またはｄ３−ＭＰＬ）なる語はＭＰＬと略する。

ＧＢ２　２２０　２１１Ａは、先に用いられた腸内菌のリポ多糖（ＬＰＳ）の内 毒素性は減少するが、その免疫原性は保持されることを示唆している。しかし、 ＧＢ２２２０２１１Ａは、これらの知見を単に細菌（グラム陰性細菌）系との関 係で示しているにすぎない。本発明の優先口の時点で、肝炎ウィルス抗原配合の ワクチン用のアジュバントとして、３−説アシル化モノホスホリル脂質Ａの適合 性は何ら示唆されていなかった。

しかし、意外にも、肝炎ウィルス抗原からなる本発明のワクチン組成物が、前記 のような特に有利な特性を有することが見いだされた。

特に有利な点は、本発明のワクチン処方が、非常に低用量の抗原であっても、保 護免疫性を誘発するのに非常に効果的であるということである。

該処方は一次感染に対して優れた保護を提供し、有利には、特異的な体液性（中 和抗体）およびまたエフェクター細胞媒介（ＤＴＨ）免疫応答の両方を刺激する 。

さらに重要な利点は、本発明に係るワクチン組成物をまた治療用ワクチンとして 用いてもよいことである。

前記のＭＰＬは、通常、−用量当たり１０−１００μｇ１好ましくは２５−５０ μｇの範囲にて存在し、その場合、肝炎抗原は、典型的には、−用量当たり２− ５０μｇの範囲にて存在する。

担体は、水中油型エマルジョン、脂質ビヒクル、またはアラム（アルミニウム塩 ）であってもよい。

非毒性の水中油型エマルジョンは、好ましくは、水性担体中、非毒性油（例、ス クアレン）およびツイーン（Ｔｖｅｅｎ）　８０のような乳化剤を含有する。該 水性担体は、例えば、リン酸緩衝生理食塩水である。

本発明の−の具体例は、以下に示す、ＭＰＬと水酸化アルミニウムの混合物中の ＨＡＶ抗原（例えば、）（ａｖｒｉｘ中にある抗原）である。

本発明のさらなる具体例は、以下に示す、ＭＰＬと水酸化アルミニウムの混合物 中のＨＢｓＡｇ　Ｓ抗原（例えば、Ｅｎｇｅｒｉｘ−Ｂ中にある抗原）である。

本発明のさらなる態様は、ＭＰＬと水酸化アルミニウムの混合物中の、前記した （Ｌ＊、Ｓ）粒子としてのＨＢｓＡｇ抗原である。

前記の具体例において、水中油型エマルジョンをアラムの代わりに用いてもよい 。

別の具体例を以下の実施例に示す。

本発明は、さらなる態様において、医薬治療における用途として、特に肝炎ウィ ルス感染症の治療または予防における用途としてのワクチン処方を提供する。

好ましい態様において、本発明のワクチンは、。進行中の肝炎感染症、さらに詳 しくはＢ型肝炎および／またはＣ型肝炎に罹患しているヒトにおけるそれらの感 染症の治療に有用な治療用ワクチンである。

意外にも得られた効能のある結果を考えた場合、さらに好ましい態様において、 本発明はＡ型肝炎および／またはＢ型肝炎感染症の治療または予防用のワクチン 組成物を提供する。

有利には、本発明の肝炎ワクチン組成物は、それか−またはそれ以上の他の細菌 、ウィルスまたは真菌感染症の治療または予防に効果的であるように、他の抗原 を含有していてもよい。

したがって、本発明の肝炎ワクチン処方は、好ましくは、−またはそれ以上の次 に示すニジフチリア、破傷風、百日咳、ヘモフィルス・インフルエンザｂ（Ｈｉ ｂ）およびポリオに対して保護を付与することがその分野において知られている 、非肝炎抗原より選択される、少な（とも１種の別の成分を含有する。

好ましくは、本発明のワクチンは、前記のＨＢｓＡｇを含有する。

本発明の範囲内にある混合ワクチンは、ＤＴＰ　（ジフテリア−破傷風−百日咳 ）−Ｂ型肝炎混合ワクチン処方、Ｈｉｂ−Ｂ型肝炎ワクチン処方、ＤＴＰ−Ｈｉ ｂ−Ｂ型肝炎ワクチン処方およびＩＰＶ（不活性化ポリオワクチン）−ＤＴＰ− Ｈｉｂ−Ｂ型肝炎ワクチン処方を包含゛する。

前記の組み合わせは、有利には、Ａ型肝炎に対して保護を付与する成分、特にＨ ａｖｒｉｘ中にあるようなＨＭ−１７５菌株に由来の死菌弱毒化株を包含する。

このようなワクチンにおける用途としての適当なワクチンはすでに商業上入手可 能であり、ワールド・ヘルス・オーガニゼーションより入手できる。例えば、Ｉ ＰＶ成分は５ａｌｋ不活性化ポリオワクチンである。百日咳ワクチンは、全細胞 または非細胞生成物からなっていてもよい。

有利には、本発明の肝炎または混合ワクチンは、小児用ワクチンである。

ワクチン製剤は、一般に、米国、メリーランド州、ボルチモア、ユニバーシティ ・パーク・プレス（Ｌｌｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　Ｐａｒｋ　Ｐｒｅｓｓ）　、ボラ −（Ｖｏｌｌｅｒ）ら編、二ニー・トレンズ・アンド・デベロップメンツ・イン ・ワクチンズ（Ｎｅｗ　Ｔｒｅｎｄｓ　ａｎｄＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓ　ｉｎ 　Ｖａｃｃｉｎｅｓ）　１９７８に記載されている。リポソーム中のカプセル化 が、例えば、フラートン（Ｆｕｌｌｅｒｔｏｎ）らにより、米国特許第４，２３ ５，８７７号に記載されている。蛋白質の高分子への接合が、例えば、リグハイ ド（Ｌｉｋｈｉｔｅ）による、米国特許第４．３７２．９４５号、アルモア（Ａ ｒｍｏｒ）らによる、米国特許第４，４７４，７５７号に開示されている。

各ワクチン用量中の抗原量は、典型的なワクチン接種を受けた者にて有意に有害 な副作用を及ぼすことなく、免疫保護応答を誘発する量として選択される。その ような量は、いずれの特異的な免疫原を用いるかにより変化する。一般に、各用 量は、１−１０００μｇ１好ましくは２−１００μｇ１最も好ましくは４−４０ μｇの全免疫原からなると考えられる。個々のワクチンについての最適量は、対 象における抗体価および他の応答を観察することを包含する標準的研究により確 認できる。最初のワクチン処理の後、対象は約４週間でブーストを受けてもよい 。

さらなる態様にて、本発明は、肝炎感染症の予防または治療にて効果的なワクチ ンの製法であって、前記の肝炎抗原を担体およびＭＰＬと混合することからなる 製法を提供するものである。

この方法を用いて、１またはそれ以上の付加的な成分を、好ましくは、ＨＢｓＡ ｇと混合し、有利には小児用の混合ワクチンを得る。

以下の実施例を用いて本発明およびその有利な点を説明する。

実施例１：Ｂ型肝炎ワクチン処方 ＭＰＬをリビ・イムノケム・リサーチ・インコーホレイテッドより入手した。

水酸化アルミニウムをスーパーホス（Ｓｕｐｅｒｆｏｓ）　（アルヒドロゲル（ Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ）　）より入手した。

写真修正光散乱により測定しながら、ＭＰＬの粒径が８０と５００ｎｍの間に達 するまで、該粒子を水浴中にて超音波処理に付して、０．２〜１ｍｇ／ｍ＋の種 々の濃度で注射水に再び懸濁させた。

リン酸緩衝液（１ｍｇ／ｍｌ）中、１〜２０μｇのＨＢｓＡｇ　（Ｅｎｇｅｒｉ ｘ−Ｂ中にあるようなＳ−抗原）を、撹拌しながら室温で１時間、３０〜１００ μｇの水酸化アルミニウム（Ａｌ”１０．３８ｍｇ／ｍｌの溶液）上に吸着させ る。ついで、該溶液に３０〜５０μｇのＤＭＰＬ　（１ｍｇ／ｍ＋溶液）を加え る。容量および浸透性を注射水および５倍濃縮したリン酸緩衝液で６００μｍに 調整する。溶液を室温で１時間インキュベートし、使用するまで４℃に維持する 。貯蔵の間に処方の熟成が起こる。これはマウスにて試験するための１０回分の 注射量を意味する。

同様の処方を、ＨＢｓＡｇ成分として前記した混合（Ｌ＊、ｓ）抗原を用いて調 製してもよい。

実施例２：Ａ型肝炎ワクチ：／処方 ＭＰＬをリビ・イムノケム・リサーチ・インク−ポレイテッドより入手し７た。

水酸化アルミニウムをスーパホス（アルヒドロゲル）より入手した。

ＨＡＶ　（−用量当たり３６０〜２２ＥＵ）を１０％の水酸化アルミニウム、最 終濃度（０，５ｍｇ／ｍｌ）上に前吸着させる。ＭＰＬ（−用量当たり１２．５ 〜１００μｇ）を該溶液に加える。

残りの水酸化アルミニウムを該溶液に加え、室温で１時間放置する。容量をりで 最終処方を４℃で貯蔵する。

実施例３：混合ワクチン処方−Ｂ型肝炎＋Ａ型肝炎ＨＢｓＡｇを最終量の９０％ の水酸化アルミニウム（０，５ｍｇ／ｍＩ）上に吸着させ、室温で一夜インキユ ベートする。そのｐＨを６．２に調整し、製剤の熟成のため室温で１４日間放置 する。

（Ｈａｖｒｉｚ中にあるような）ＨＭ−１７５菌株の不活性化誘導体の形態であ る、−用量当たり３６０〜２２ＥＵのＡ型肝炎抗原を１０％の水酸化アルミニウ ム、最終濃度（０，５ｍｇ／ｍｌ）上に前吸着させる。ついで、残りの水酸化ア ルミニウムを該溶液に加え、撹拌しながら室温で１時間放置する。

ついで、水酸化アルミニウム上に吸着させたＨＡＶをＨＢｓＡｇ処方に加える。

ＭＰＬを、１ｍｌ用量当たり１２．５〜１００μｇの最終濃度でＨＡＶ／ＨＢｓ Ａｇ溶液に加え、その容量を最終の投与容量に調整し、使用まで該処方を４℃で 貯蔵する。

実施例４：付加的抗原を含有する混合ワクチンＤＴＰ、ＩＰＶ、Ｈ４ｂまたは無 細胞もしくは全細胞性百日咳抗原を含有する混合ワクチンを、１またはそれ以上 の所望の抗原を前記の実施例１、実施例２または実施例３に加えることにより調 製する。

実施例５ 水酸化アルミニウムおよびＭＰＬと一緒に処方したＨＢｓＡｇを用いるマウスの 免疫化による体液免疫性の増加および細胞媒介免疫性の誘発Ａ、抗−ＨＢｓ抗体 の誘発についてのＡ　１（ＯＨ）　ｓ　＋　Ｍ　Ｐ　Ｌの効果Ｂａ１ｂ／ｃマウ スを、皮下経路によりまたは皮肉経路により、アジュバントとしてＭＰＬと、Ａ Ｉ（ＯＨ）！上に吸着させた組換え型ＨＢｓＡｇで免疫化した。マウスをＨＢｓ Ａｇ／ＡＩ／ＭＰＬ処方で２回免疫化し、第１および第２の投与後に抗体応答を 測定した。全ＴｇをＥＬＩＳ’ＡまたはＡＵＳＡＢキット（アボット・ラボｍ　 （Ａｂｂｏｔｔ　Ｌａｂ、　Ｉ［［）　）により測定し、ＩｇＧ２ａイソタイプ の抗体の誘発に特に注意を払った。というのは、このイソタイプは主としてｇ− インターフェロンの分泌により誘発されるからである。すなわち、このイソタイ プの誘発は、間接的に、細胞媒介免疫性の活性化、すなわち、Ｔｈｌの活性化を 反映している。

ＨＢｓＡｇ／ＭＰＬ比がＭＰＬ粒子の径と同様に研究されている、というのは、 ＭＰＬの水中懸濁液は＜１１００ｎまたは＞５００ｎｍの粒子で得ることができ るからである。

実験１−ＡＩ（ＯＨｈ上に吸着させた組換え型ＨＢｓＡｇの免疫原性についての ＭＰＬ　（＞５００ｎｍ）投与量の効果一群１０匹の雌のＢａ１ｂ／ｃマウスに 、５ＱｍｃｇのＡＩ”　（Ａｌ（ＯＨ）ｓとして）上に吸着させた２、５ｍｃｇ の組換え型ＨＢｓＡｇおよび増加量（３，１〜５０＋ｃｇ）のＭＰＬ　（粒径＞ ５００ｎｍ）を注射した。マウスを１００ｍｃｉの容量にて２週間の間隔で２回 注射した。第１の注射（一部採血）の２週間後、ブースターの１週間後に該マウ スを採血した。獲得抗原として組換え型ＨＢｓＡｇを用い、ＥＬＩＳＡにより全 抗−ＨＢｓ１　ｇＧおよび特異的１ｇＧ２ａを測定した。抗体価を最大値の５０ ％に相当する希釈の逆数（中点希釈）として表す。結果を表１に示す。それらは 、ＭＰＬの量の増加と共に、特に１２．５〜５０ｍｃｇの用量でＩｇＧとＩｇＧ ２ａが共に増加することを示している。その効果は第１次または第２次応答の両 方で認められ、特にＩｇＧ２ａ（２０倍増）で明らかである。

これは、間接的に、ＭＰＬを用いる免疫化によってｇ−インターフェロンの分泌 が誘発されることを示す。

実験ＩＩ−ＭＰＬ　（＞５００ｎｍ）含有のまたは不含の吸着組換え型ＨＢｓＡ ｇの臨床用ロフトの比較 Ａｌ（ＯＨ）ｓに吸着させた組換え型ＨＢｓＡｇの３臨床用ロフトを調製した： 対照として供するＭＰＬ不含のＤＳＡＨ１６０ット；ＤＳＡＲ５０１および５０ ２０ツトを同様の操作により調製した（Ａｌ（ＯＨ）ｓとしてＡＩ”０．５ｍｇ 上に吸着させた組換え型ＨＢｓＡｇ２Ｑｍｃｇ）　、ただしＭＰＬ　（＞５００ ｎｍ）５０ｍｃｇを含有する。

一群１０匹のマウスに、２週間間隔で、３０ツトを２回皮下注射した（ＨＢｓＡ ｇ２．５ｍｃｇ、Ａｌ”１００ｍｃｇおよびＭＰＬ６．２５ｍｃｇ含有の２００ ｍｃｌ）。１４日目およびブースター処理の１週間後にマウスを採血した。Ｉｇ ＧまたはＩｇＧ２ａのいずれかについて、ＡＵＳＡＢキットまたは１ｎ−ｈｏｕ ｓｅ　ＥＬＩＳＡを用いて抗−ＨＢｓ抗体を測定した。結果を表２に示す。該結 果は、第１の注射の２週間後、ＭＰＬを含有する２０ツトは、非常に有意な抗− ＨＢｓ応答（１２，４および４１．９ｍＩＵ／ｍ＋）を誘発するが、ＭＰＬ、不 含の０７トは単にぎりぎりの応答（０，７５ｍＩＵ／ｍ＋）を誘発するにすぎな いことを示す。

応答者の数もまたＭＰＬが含有されていればより高い（ＭＰＬ不含では１／１０ であるのに対し、９／１０および９／１０である）。ＭＰＬの効果はブースター 処理後に確認される。というのは、ＤＳＡＲ５０１および５０２０ツトについて 得られる抗体価は、ＭＰＬ不含の場合に観察される抗体価の約６倍強だからであ このことは、少なくともマウスにおいて、ＭＰＬ　（＞５００ｎｍ）が抗−ＨＢ ｓ応答のキネティクスおよび抗−ＨＢｓ応答のレベルを改善し得ることを示す。

これらの結果は、ＤＳＡＨ１６０ット（ＭＰＬ不含）およびＤＳＡＲ５０２（含 ＭＰＬ）で免疫化した後に特異的ＩｇＧおよびＩｇＧ２ａを測定した場合に認め られ、ＭＰＬが存在する場合、抗−ＨＢｓ１ｇＧ抗体価は５倍（第１次応答）お よび３倍（第２次応答）である。

ＩｇＧ２ａ応答の場合、ＭＰＬの効果はさらに顕著であり、少なくとも第２の投 与後に、ＩｇＧ２ａを優先的に誘発する。これは、間接的に、ＭＰＬ含有の製剤 による細胞媒介免疫の活性化（ｇ−インターフェロンの分泌）を反映している。

実験ｍ−ＡＩ（ＯＨ）ｓ上に吸着させた組換え型ＨＢｓＡｇの免疫原性について のＭＰＬ　（＜１０１００ｎ投与量の効果ＭＰＬは＞５００ｎｍの粒径のものよ りも＜１１００ｎの方が再生方法にて得るのがずっと容品であるため、Ａｌ（Ｏ Ｈｈ上に予め吸着させた組換え型ＨＢｓＡｇの免疫原性についてのＭＰＬ粒子（ ＜１０１００ｎの効果を研究した。

一群１０匹のマウス（Ｂ　ａｌｂ／　ｃ　、雌、７週齢）に増加量（３，１〜２ ５ｍｃｇ）のＭＰＬ　（＜１０１００ｎの存在下、（Ａ１（ＯＨ）ｓとして）Ａ Ｉ”５０ｍｃｇ上に吸着させた組換え型ＨＢｓＡｇ（１ｍｃｇ）を皮下注射した 。該マウスに２００ｍｃ！容量を２週間間隔にて２回注射した。第１の注射の２ 週間後およびブースター処理の１週間後に該マウスを採血した。抗−ＨＢｓ応答 をプール血清についてＥＬＩＳＡ（全１ｇ、ＩｇＧ、ＩｇＧ２ａ）により測定し た。抗体価を中点希釈（最高値の５０％を付与する希釈の逆数）として表した。

結果はわずか３．１ｍｃｇのＭＰＬが第１次および第２次応答について、抗体応 答の強い増加を誘発することを示す。応答は６．２５ｍｃｇで最高点に達し、高 用量のＭＰＬ　（２５ｍｃｇ）を用いると、ＭＰＬが不含である場合に見られる のと同様に応答は減少するようになる。抗体応答のパターンはＩｇＧ、ＩｇＧ２ ａおよび全１ｇについて同様である。それは大粒径（＞５００ｎｍ）のＭＰＬに ついて得られる結果と対照的であり（実験ｌ参照）、最大効果を得るのに、多量 のＭＰＬを必要としないため、（少なくとも、体液免疫性では）、小径（＜１０ １００ｎのＭＰＬ粒子が大径（＞５００ｎｍ）の粒子よりもより効果的であるこ とを示唆する。小径ＭＰＬの最大活性を数種の実験で確認した。

大径のＭＰＬ　（＞５００ｎｍ）で示されているように、ＭＰＬのアジュバント 効果は全１ｇＧまたはＩｇに対してよりもＩｇＧ２ａに対して高度である。第２ 次応答（６，２５ｍｃｇのＭＰＬ）の最大効果で、ＩｇＧ２ａについては２．５ 倍増であるが、ＩｇＧまたは全Ｉｇについての増加は、各々、７．６および４， ３であった。

Ｂ　、　Ａ　Ｉ（ＯＨ）ｓ上に吸着させた組換え型ＨＢｓＡｇによる細胞媒介免 疫性の誘発−ＭＰＬの効果 たとえ、体液免疫性がＢ型肝炎に拮抗して保護するのに十分であるとしても、細 胞媒介免疫性（ＣＴＬ、Ｔｈ１）の誘発は該疾患の治療に特に重要であると言え る。

しかしながら、ＡＩ（ＯＨ）ｓは体液免疫性の改良する能力を有するが、細胞媒 介免疫性を改良する能力を有しないため、治療用ワクチンについて新規な処方が 要求される。

本発明者らは、Ａ　１（ＯＨ）　ｓ上に吸着させた組換え型ＨＢｓＡｇで免疫処 理したＢａ１ｂ／　Ｃマウスにて、ＩＬ−２およびｇ−（すなわち、γ−）イン ターフェロンの分泌能を有するＴｈｌ細胞の誘発に対するＭＰＬの効果を研究し た。

実験１−ＡＩ（ＯＨ）ｓに吸着させたＨＢｓＡｇでＢａ１ｂ／ｃマウスを免疫化 した後のＴｈｌ細胞の誘発についてのＭＰＬ　（＞５００ｎｍ）の効果一群１０ 匹のＢａ１ｂ／ｃマウス（雌、５週齢）の各足蹟にＨＢｓＡｇｌＯｍｃＬＡｌ” 　（Ａｌ（ＯＨ）ｓとして）１５ｍｃｇおよびＭＰＬ１５ｍｃｇ含有の３０ｍｃ ｉを注射することにより該マウスを免疫化した。対照マウスに、同様に、ＦＣＡ を混合するか（正の対照）、またはＭＰＬ不含でＡｌ（ＯＨ）ｓ上に吸着させた （負の対照）、同量の組換え型ＨＢｓＡｇを注射した。

免疫化の６日後、マウスを殺し、腰高リンパ節を取り出した。該リンパ節細胞（ ＬＮＧ２．１０５／ｍｌ）を、種々の時間（２４時間〜７４時間）、１％の負の マウス血清を補足し、５ｍｃｇ／ｍ＋の組換え型ＨＢｓＡｇを含有するＲＰＭＩ 培地中で培養した。培養終了後、培地中に分泌されたＩＬ−２、ＩＮＦ−ｇおよ びＩＬ−４の量ヲ測定シタ。ｌ−２を、ＩＬ−２依存性ＣＴＬ株（ＶＤＡ２１Ｂ 胞）の増殖（３Ｈ−チミジンの取り込みにより測定）を刺激するその能力により 　”評価し、抗体価を刺激指数（Ｓ１＝刺激細胞に取り込まれた３Ｈ−チミジン 量／非刺激細胞中に取り込まれた３Ｈ−チミジン量）として表した。！Ｌ−４お よびＩＮＦ−ｇの量を市販のＥＬＩ　ＳＡキットＣＩＮＦ−ｇについてはオラン ダ・バイオテクノロジー（Ｈｏｌｌａｎｄ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、Ｉ 　Ｌ−４についてはエンドゲン（Ｅｎｄｏｇｅｎ）　）を用いて測定した。その 抗体価をＩＮＦ−ｇ／ｍｌのｐｇとして表す。

その結果は、Ａ　１（ＯＨ）　ｓ上に吸着させたＨＢｓＡｇで免疫化したマウス に由来するＬＮＧにより、有意な量のＩＬ−２、ＩＬ−４またはＩＮＦ−ｇが分 泌されないことを示している。その逆に、Ａｌ（ＯＨ）ｓ上に吸着させたＨＢｓ Ａｇ十ＭＰＬで免疫化したマウスに由来するＬＮＧにより、高レベルのＩＬ−２ （１，Ｓ、＝３８（４８時間））および有意な量のＩＮＦ−ｇが分泌される。こ の分泌はＨＢｓＡｇ十ＦＣＡで免疫化したマウスについて観察される量と同等で あるか（ＩＮＦ−ｇ）またはより高い（ＩＬ−２）量であり、ｉｎ　ｖｉｔｒｏ における分泌はより速く起こる。

１−４は、ＭＰＬの存在下、Ａｌ（ＯＨ）ｓ上に吸着させたＨＢｓＡｇで免疫化 した後であっても検出されなかった。

この分泌プロフィールは、特異的Ｔｈｌ細胞（ＩＬ−２、ＩＮＦ−ｇ）が、ＭＰ Ｌの存在下、吸着させたＨＢｓＡｇでの免疫化により誘発されるが、ＭＰＬの不 在下では誘発されないことを示している。しかし、Ｔｈ２　（ＩＬ−４）は、免 疫化のこれらの条件では検出されなかった。

実験１ｌ−ＡＩ（ＯＨ）３吸着の組換え型ＨＢｓＡｇでＢａ１ｂ／Ｃマウスを免 疫化した後のＴｈｌ細胞の誘発についてのＭＰＬ　（＜１０１００ｎの投与量の 効果一群５匹のＢａ１ｂ／Ｃ７ウスを、各々の２足踵にて、ＡＩ”　（ＡＩ（Ｏ Ｈ）ｌとして）１５ｍｃｇ上に吸着させた組換え型ＨＢｓＡｇｌＱｍｃｇおよび 増加量（０〜１５ｍｃｇ）のＭＰＬ　（１００ｎｍ）含有の３０ｍｃ＋で免疫化 した。

注射した６日後、マウスを殺し、腰高リンパ節細胞（ＬＮＧ）を２．１０６細胞 ／ｍｌで、種々の時間（２４時間ないし９６／２５）、１％の負のマウス血清を 補足したＲＰＭＩ中、５ｍｃｇ／ｍｌの組換え型ＨＢｓＡｇの存在下にて培養し た。

ＩＬ−２の分泌を、ＶＤＡ２細胞の増殖の刺激により評価し、ＩＬ−２の濃度を 刺激指数（Ｓｌ）として表す：ＩＮＦ−ｇの分泌を市販キットを用いて測定し、 ｐｇ／ｍｌで表した。

ＩＬ−２分泌が低用量のＭＰＬ　（７，５ｍｃｇ）により劇的に増加し、その最 大効果がＭＰＬ１５ｍｃｇで得られることが判明した。

ＩＬ−２分泌は、一般に、４８または７２時間でよりも２４時間でより重要であ る。

ＨＢｓＡｇを、ＭＰＬの存在下、ＡＩ（ＯＨ）ｓ上に吸着させた場合、ＩＮＦ− ｇ分泌は見られない。少量（７，５ｍｃｇ）のＭＰＬは、ＩＮＦ−ｇの分泌を誘 発し、その最大効果が、再び、ＭＰＬ１５ｍｃｇで得られる。ＩＬ−２で観察さ れることとは逆に、ＩＮＦ−ｇ分泌は、培養中にて遅れ、９６時間まで増加する 。

これらのデータは、Ａｌ（ＯＨ）ｓ上に吸着させたＨＢｓＡｇと組み合わせた場 合、ＭＰＬ　（１００ｎｍ）がＴｈｌの強力な誘発剤であることを示す。

Ｃ０結論 Ｂａ１ｂ／ｃマウスにおける体液および細胞媒介免疫性の両方の誘発について、 Ａｌ（ＯＨ）３上に吸着させたＨＢｓＡｇおよびＭＰＬ含有の処方の効果を研究 した。

その結果はＭＰＬが明らかに抗−ＨＢｓ応答のキネティクスを改良することを示 す。というのは、第１次および第２次免疫化の後に、ずっと多くの抗−ＨＢｓ抗 体が認められるからである。抗−ＨＢｓの量もまた修飾され、ＩｇＧ２ａの優先 的誘発が観察され、それは間接的にＩＮＦ−ｇの分泌、すわなち細胞媒介免疫の 誘発を反映している。

ＨＢｓＡｇ、Ａｌ（ＯＨ）！およびＭＰＬ含有の処方によるＴｈｌ細胞の誘発の 直接的評価は、明らかに、ＭＰＬが！Ｌ−２およびＩＮＦ−ｇを共に分泌するＴ ｈｌ細胞の強力な誘発剤であることを示す。かくして、この種の処方は、ワクチ ンの開発において重要である。

前記の実験結果を示す表として、以下の表１〜６を参照のこと。

実施例６ ＨＢｓＡｇに対するアジュバントとしてのＭＰＬ１７）臨床的使用−予備結果Ｍ ＰＬ−ＨＢＶ−００２研究（継続中）この研究は、ＨＢｓＡｇ−ＭＰＬを、若い 健康な非感作の成人ボランティアにて’　Ｅｎｇｅｒｉｘ　−Ｂと比較する。

最終点 −免疫原性；抗−ＨＢｓ抗体応答の大きさ−抗−ＨＢｓ抗体応答のキネティクス −両ワクチン（ｉｎ　ｖｉｔｒｏおよびｉｎ　ｖｉｖｏ　）により誘発される細 胞媒介免疫性−反応原性、毒物学および安全性。

物質および方法 ａ）ワクチン ＨＢｓＡｇ　アラム　ＭＰＬ （Ｅ　ｎｇｅｒｉｘ　−Ｂ中にあるような抗原）１　２０μｇ　５００μｇ　５ ０μｇ ｎ　２０μｇ５００μｇ無 ｂ）個体群 ＊　健康な成人ボランティア、Ｏ：１８〜３０歳＊　該ボランティアはＨＢＶマ ーカーについて陰性でなければならず、Ｂ型肝炎に対してワクチン接種されたこ とがあってはならない。

Ｃ）様式 −二重盲検の無作為実験法 −ワクチン接種のスケジュール二〇、１．６力月−１２力月まで追跡 −血液サンプル ＊　抗−ＨＢｓ抗体試験を、各ワクチン接種の前、７日後、１５日後、３０日後 に行う。

本　生化学および血液学的変数を各投与の前および２日後に評価する。

＊　細胞媒介免疫性を評価するための血液を一次ワクチン接種工程およびブース ター投与の前後に摂取する。　。

−反応原性： 対象は、ワクチン接種をした日およびその後の７日間、局所的および全身性兆候 および症状の発生を日誌に記録することをめられる。

結果 第２の投与の２力月後までの結果を以下に示す。

個体群： 合計２９人の対象はその告知に基づく同意を与えるが、２７人−１５人の男性お よび１２人の女性だけがその基準に合致した。１５人の対象を１群に、１２人を ■群に割り当てた。平均年齢は２２歳であった。

安全性： 重度の有害な経験は報告されず、対象は研究から外されることなくまたは外す必 要はなかった。血液学的または生化学的変数の臨床上有意な修飾は何ら観察され なかった。局所および全身性兆候および症状の発生率および重度は両方のワクチ ン群で同様であった。

免疫原性、 抗−ＨＢｓ抗体価を９０日、すなわち、第２投与の２力月後まで測定した。血清 変換率（ｓｅｒｏｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ　ｒａｔｅ）　（Ｓ　Ｃ，％）を初期血 清陰性の対象における抗体出現率として定義する。

血清保護率を保護抗−ＨＢｓ抗体価を有する対象の割合として定義する。たとえ 、２つの群の間で比較できるＧＭＴで抗体応答の大きさに明らかな違いがないと 思われても、その応答のキネティクスは異なり、ＭＰＬ含有のワクチンは明らか に有利な点を有する。事実、第２投与の７日後、Ｅｎｇｅｒｉｘ−Ｂ群の９５％ の血清変換率および５８％の血清保護率と比較して、ＭＰＬ−ＨＢＶワクチンを 受けている対象は、各々、９３％血清変換し、および８０％保護されている。こ の違いは、第２投与の後、２力月まで維持され、特に血清保護率について明白で ある。

ＭＰＬ−ＨＢＶ−００３研究（継続中）物質および方法はＭＰＬ−ＨＢＶ−００ ２実験（前記参照）のものと同様である。ワクチン接種のスケジュールは異なる 。

群　対象数　ワクチン　スケジュール １　２５　ＭＰＬ−ＨＢｓＡｇ／アラム　０〜２力月ｎ　２５　Ｅｎｇｅｒｉｘ −Ｂ　Ｏ〜２カ月ｍ　２５　ＭＰＬ−ＨＢｓＡｇ／アラム　０〜６力月ｒＶ　２ ５　Ｅｎｇｅｒｉｘ−Ｂ　Ｏ〜６カ月結果 抗−ＨＢｓ抗体応答のキネティクスは前記研究と同じようになされないが、同一 の結論をこの研究にて導き出すことができるのは明白である。ＭＰＬアジュバン トのワクチンを受ける対象は、第２投与後に、ＭＰＬ不含のワクチンを注射した 人よりもさらに良好に応答する。−を除（全ての対象（９５，８％）は、Ｅｎｇ ｅｒｉｘ−Ｂ群における７２．７％と比較して、ＭＰＬ−ＨＢＶワクチンの第２ 投与後の１力月、保護抗体価を有する。さらには、前記実験とは対照的に、ＭＰ Ｌ−ＨＢＶワクチンはＥｎｇｅｒｉｘ−Ｂよりもより高い抗体価を誘発すると考 えられる（各々、２１４および７２ｍ１Ｕ／ｍ＋）。

結論 これら２つの研究において、ＭＰＬと共にアジュバントした（Ｅｎｇｅｒｉｘ− Ｂ中にあるようなＨＢｓＡｇおよびアラムを含有する）Ｂ型肝炎ワクチンを、健 康な成人ボランティアにて評価し、種々のスケジュールに従ってＥｎｇｅｒｉｘ 　−Ｂ　（アラムと一緒に処方したＨＢｓＡｇ　Ｓ−抗原）と比較した。たとえ 、第１投与後、２種のワクチンの間で免疫原性に差異がないとしても、ＭＰＬ− ＨＢＶワクチンは、ずっと高割合の対象で、特に保護抗体価で、第２投与後に明 らかな利点を示す。

また、２回の投与を１力月の代わりに２力月で行った場合、ＧＨＴはこの群でよ り高度である。

ＭＰＬを抗原に加えた場合、これは応答にて良好な感作を示すことができた。

したがって、このようなワクチンはＢ型肝炎ワクチン接種に対して遅いまたは低 い応答者、例えば老人または免疫抵抗性濾別の対象にて非常に有用である。

前記の実験の結果を示す表として、以下の表７〜９参照のこと。

実施例７ Ａ型肝炎−マウスにおけるＭＰＬ実験 次の実験は、ＭＰＬのＡ型肝炎ワクチンへの添加が効果的な作用を有することを 証明する。これは低ＥＤ５０値（注射された動物の５０％にて血清学的応答を付 与する、ＥＬＩＳＡ単位、−ＥＵ−にて表される、用量）に反映される。

方法 ＮＭＲＴマウスに、種々の濃度のＭＰＬ　（０−１，５−６−１２，５μｇ／用 量）を組み合わせた、３６０−１２０−４０−１３．３ＥＵ／用量含有の１用量 の実験的ＨＡＶワクチンを注射した。血液試料を接種の２８日後に摂取し、血清 を（２０％カットオフを用いる）ＨＡＶＡＢ試験にて試験した。ＥＤ５０　（Ｅ Ｕにて表示）を算定した。それは、試験動物の５０％にて血清学的応答を誘発す る用量に相当する。

結果 結果を以下の表に要約する。ＭＰＬ不含のワクチンは１２３．７ＥＵのＥＤ５０ を有し、それに対して１．５μｇＭＰＬ／用量を含有するワクチンは１５４のＥ Ｄ５０を有した。高用量のＭＰＬは効果的な効果を有した（ＥＤ５０が低ＥＵ結 論 マウスの効能検定（０〜６力月）にて試験した場合、適量のＭＰＬのＨＡＶ−ワ クチンへの混合は、このワクチンの効能を改良する。

表：ＭＰＬをＡ型肝炎ワクチンに添加する効果ＨＡＶ−ワクチンに添加するＭＰ Ｌの用量　ＥＤ５０　（ＥＵ／用量）（μｇ／用量） １２、５　４７．１ 表１： Ａｔ（ＯＨ）！上に吸着させた組換え型ＨＢＳＡｇの免疫原性についての増加量 のＭＰＬ　（＞５００ｎｍ）（７）効果＊Ａ１上のＨＢｓＡｇ 表２＝ ＭＰＬ含有のまたは不含の３臨床用口・ソトの比較ＡＵＳＡＢ応答 ＭＰＬ　（＞５００ｎｍ）含有のまたは不含の２臨床用口・ットの比較抗−ＨＢ ｓＩｇＧおよびＩｇＧ２ａ応答表４： 担坦里辻ｑ１酎佐削凶阻咀込（鰯哩塑（ヅ翌ＭＰＬ　（＜１０１００ｎ投与量の 効果表５： 明細書に記載したように免疫化した後、リンパ節細胞を、所定の時間、５　ｍｃ ｇ組換え型ＨＢｓＡｇ／ｍｌと共に培養し、ＩＬ−２、ＩＮＦ−７およびＩＬ− ４の分泌を、各々、ＶＤＡ２　Ｔ−細胞株および２種の市販のＥＬＩＳＡキット を用いて測定した。

表６ 表９ ＭＰＬ−ＨＢＶ−００３研究 、、−−＝Ｎ、ＰＣＴ／ＥＰ　９３１００７１２国際調査報告 フロントページの続き （３１）優先権主張番号　９２０６７８９．　１（３２）優先日　１９９２年３ 月２７日（３３）優先権主張国　イギリス（ＧＢ）（３１）優先権主張番号　９ ２０６７９７．４（３２）優先日　１９９２年３月２７日（３３）優先権主張国 　イギリス（ＧＢ）（８１）指定国　ＥＰ（ＡＴ、ＢＥ、ＣＨ，ＤＥ。

ＤＫ、ＥＳ、ＦＲ，ＧＢ、ＧＲ，ＩＥ、ＩＴ、ＬＵ、ＭＣ，ＮＬ、　ＰＴ、　Ｓ Ｅ）、０Ａ（ＢＦ、ＢＪ、ＣＦ、ＣＧ、　ＣＩ、　ＣＭ、　ＧＡ、　ＧＮ、　Ｍ Ｌ、　ＭＲ，ＮＥ、　ＳＮ。

ＴＤ、ＴＧ）、ＡＴ、ＡＵ、ＢＢ、ＢＧ、ＢＲ，ＣＡ。

ＣＨ，ＣＺ、　ＤＥ、　ＤＫ、　ＥＳ、　ＦＩ、　ＧＢ、　ＨＵ、ＪＰ、　ＫＰ 、　ＫＲ，ＬＫ、　ＬＵ、　ＭＧ、　ＭＮ、　ＭＷ、　ＮＬ、　Ｎｏ、　ＮＺ、 　ＰＬ、　ＰＴ、　ＲＯ，ＲＵ、　ＳＤ、　ＳＥ。

ＳＫ、　ＵＡ、　ＵＳ （７２）発明者　ハウザー、ピエール ベルギー国ベー−１３３０リクセンザルト、リュ・デュ・ランスティチュー８８ ９番スミスクライン・ビーチャム・バイオロジカルス（ソシエテ・アノニム） （７２）発明者　シリアルド、クロシルドベルギー国ベーー１３３０リクセンザ ルト、リュ・デュ・ランスティチュー８８９番スミスクライン・ビーチャム・バ イオロジカルス（ソシエテ・アノニム） （７２）発明者　ポエ、ピエール ベルギー国ベーー１３３０リクセンザルト、リュ・デュ・ランスティチュー８８ ９番スミスクライン・ビーチャム・バイオロジカルス（ソシエテ・アノニム）

Claims (20)

【特許請求の範囲】
1. １．肝炎抗原を３−Ｏ−脱アシル化モノホスホリル脂質Ａおよび適当な担体と組 み合わせてなるワクチン組成物。
2. ２．担体がアラムである請求項１記載のワクチン組成物。
3. ３．担体が水中油型エマルジョンまたは他の脂質基材ビヒクルである請求項１記 載のワクチン組成物。
4. ４．肝炎抗原がＡ型肝炎に対する抗原である前記いずれかの請求項に記載のワク チン組成物。
5. ５．Ａ型肝炎抗原がＨＭ−１７５菌株由来の不活化全細胞組成物である請求項４ 記載のワクチン組成物。
6. ６．肝炎抗原がＢ型肝炎に対する抗原である請求項１〜３のいずれか１つに記載 のワクチン処方。
7. ７．抗原がＢ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）またはその変異体からなる請求項６ 記載のワクチン組成物。
8. ８．ＨＢｓＡｇがＨＢｓＡｇのＳ抗原（２２６アミノ酸）からなる請求項７記載 のワクチン組成物。
9. ９．ＨＢｓＡｇが、付加的に、プレ−Ｓ配列からなる請求項８記載のワクチン組 成物。
10. １０．ＨＢｓＡｇが、式（Ｌ＊，Ｓ）の複合粒子であり、ここにし＊はし蛋白質 の残基１２〜５２、つづいて残基１３３〜１４５、ついで残基１７５〜４００か らなるアミノ酸配列を有するＢ型肝炎ウイルスの修飾Ｌ蛋白質を意味し、ＳはＨ ＢｓＡｇのＳ−蛋白質を意味する請求項８または請求項９記載のワクチン組成物 。
11. １１．付加的に、Ａ型肝炎抗原からなる請求項６〜１０のいずれか１つに記載の ワクチン組成物。
12. １２．１種またはそれ以上の肝炎抗原と、１またはそれ以上の次に示す：ジフテ リア、破傷風、百日咳、ヘモフィルス・インフルエンザｂ（Ｈｉｂ）およびポリ オに対して保護を付与する非肝炎抗原から選択される少なくとも１種の他の成分 とからなる前記いずれかの請求項に記載のワクチン組成物。
13. １３．ＤＴＰ（ジフテリアー破傷風−百日咳）−ＨＢｓＡｇの組み合わせ、Ｈｉ ｂ−ＨＢｓＡｇの組み合わせ、ＤＴＰ−Ｈｉｂ−ＨＢｓＡｇの組み合わせ、およ びＩＰＶ（不活化ポリオワクチン）−ＤＴＰ−Ｈｉｂ−ＨＢｓＡｇの組み合わせ から選択される請求項１２記載のワクチン組成物。
14. １４．付加的に、Ａ型肝炎抗原からなる請求項１２記載のワクチン組成物。
15. １５．肝炎抗原がＣ型肝炎、Ｄ型肝炎またはＥ型肝炎に対する抗原である請求項 １〜３のいずれか１つに記載のワクチン組成物。
16. １６．３−Ｏ−脱アシル化モノホスホリル脂質Ａが一用量当たり１０μｇ〜１０ ０μｇの範囲にて存在する前記いずれかの請求項に記載のワクチン組成物。
17. １７．医薬において用いるための前記請求項に記載のワクチン組成物。
18. １８．肝炎感染症の予防または治療用の医薬の製造において、３−Ｏ−脱アシル 化モノホスホリル脂質Ａと組み合わせてなる肝炎抗原の使用。
19. １９．肝炎感染症に罹患しているかまたは感受的であるヒト対象の治療法であっ て、有効量の請求項１〜１６のいずれか１つのワクチンを投与することからなる 治療法。
20. ２０．進行中の肝炎感染症に罹患しているヒト対象の治療法であって、有効量の 請求項１〜１６のいずれかに記載の治療用ワクチンを投与することからなる治療 法。