SK280160B6 - Vakcína proti hepatitíde a použitie príslušného an - Google Patents

Vakcína proti hepatitíde a použitie príslušného an Download PDF

Info

Publication number
SK280160B6
SK280160B6 SK1152-94A SK115294A SK280160B6 SK 280160 B6 SK280160 B6 SK 280160B6 SK 115294 A SK115294 A SK 115294A SK 280160 B6 SK280160 B6 SK 280160B6
Authority
SK
Slovakia
Prior art keywords
vaccine
hepatitis
antigen
hbsag
mpl
Prior art date
Application number
SK1152-94A
Other languages
English (en)
Other versions
SK115294A3 (en
Inventor
Nathalie Marie-Josephe C. Garcon-Johnson
Pierre Hauser
Clothilde Thiriart
Pierre Voet
Original Assignee
Smithkline Beecham Biologicals S.A.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=27450853&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=SK280160(B6) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Priority claimed from GB929206789A external-priority patent/GB9206789D0/en
Priority claimed from GB929206788A external-priority patent/GB9206788D0/en
Priority claimed from GB929206797A external-priority patent/GB9206797D0/en
Priority claimed from GB929206786A external-priority patent/GB9206786D0/en
Application filed by Smithkline Beecham Biologicals S.A. filed Critical Smithkline Beecham Biologicals S.A.
Publication of SK115294A3 publication Critical patent/SK115294A3/sk
Publication of SK280160B6 publication Critical patent/SK280160B6/sk

Links

Classifications

    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/39Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12Viral antigens
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12Viral antigens
    • A61K39/29Hepatitis virus
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12Viral antigens
    • A61K39/29Hepatitis virus
    • A61K39/292Serum hepatitis virus, hepatitis B virus, e.g. Australia antigen
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12Viral antigens
    • A61K39/295Polyvalent viral antigens; Mixtures of viral and bacterial antigens
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12Antivirals
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525Virus
    • A61K2039/5252Virus inactivated (killed)
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55505Inorganic adjuvants
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511Organic adjuvants
    • A61K2039/55572Lipopolysaccharides; Lipid A; Monophosphoryl lipid A
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/70Multivalent vaccine
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2730/00Reverse transcribing DNA viruses
    • C12N2730/00011Details
    • C12N2730/10011Hepadnaviridae
    • C12N2730/10111Orthohepadnavirus, e.g. hepatitis B virus
    • C12N2730/10134Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011Details
    • C12N2770/32011Picornaviridae
    • C12N2770/32411Hepatovirus, i.e. hepatitis A virus
    • C12N2770/32434Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • YGENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02ATECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Description

Vynález sa týka vakcíny proti hepatitíde, obsahujúcej 3-O-deacylovaný monofosforyllipid A. Vynález sa taktiež týka spôsobu výroby tejto vakcíny, ktorá je vhodná na použitie na prevenciu aj na liečebné účely.
Doterajší stav techniky
Vírusová hepatitída, ktorá je spôsobená vírusom hepatitídy typu A, B, C, D a E je veľmi bežným vírusovým ochorením. V prípade vírusov typu B a C môže tiež byť príčinou vzniku zhubných nádorov pečene. Účinná vakcinácia proti tomuto ochoreniu je teda veľmi dôležitá a cez zrejmé pokroky je stále ešte nedoriešenou úlohou. Zhrnutie doterajších poznatkov o modernej vakcinácii proti tomuto ochoreniu, včítane dôležitých literárnych odkazov, je možné nájsť v publikácii Lancet, 12. mája 1990, str. 1142 ff, Prof.
A. L. W. F. Eddleston, ďalej Viral Hepatitis and Liver Disease, Vyas B. N., Dienstag J. L. a Hoofnagle J. H., eds, Grúne and Stratton, Inc., 1984 a Viral Hepatitis and Liver Disease, Proceedings oľ the 1990 Intemational Symposium, eds F. B. Hollinger, S. M. Lemon a H. Margolis, tlač Williams and Wilkins.
Pod pojmom antigén hepatitídy, tak ako je v priebehu prihlášky používaný, sa rozumie akýkoľvek antigénny materiál, odvodený od vírusu hepatitídy, ktorý je možné použiť na vyvolávanie imunity proti vírusu u človeka. Antigénom hepatitídy môže byť napríklad polypeptid, získaný rekombinantnou technikou DNA alebo atenuovaný kmeň vírusu hepatitídy, prípadne ešte inaktivovaný známymi postupmi. Vynález sa týka všetkých antigénov hepatitídy kmeňov A, B, C, D alebo E, príklady týchto antigénov budú uvedené.
Infekcia vírusom hepatitídy A (HAV) je problémom, rozšíreným po celom svete, ale sú použiteľné vakcíny, vhodné na imunizáciu veľkého množstva ľudí, ide napríklad o produkt dodávaný pod názvom Havrix (SmithKline Beecham Biologicals), ide o vakcínu na báze usmrteného atenuovaného kmeňa HM-175 vírusu HAV, ako bolo opísané v publikácii Inactivated Candidate Vaccines for Hepatitis A, F. E. Andre, A. Hepbum a E. D'Hondt, Prog. Med. Virol., Zv. 37, str. 72 až 95, 1990 a v monografii Havrix, SmithKline Beecham Biologicals, 1991.
Flemig a ďalší (loc. cit., str. 56 až 71) zhrnuli klinické prejavy, virológiu, imunológiu a epidemiológiu hepatitídy A a podrobne opísali možné prístupy pri vývoji vakcíny proti tejto častej vírusovej infekcii.
Ako už bolo opísané, znamená pojem antigén HAV akýkoľvek antigén, schopný vyvolať tvorbu neutralizačných protilátok proti HAV u človeka. Takýto antigén môže byť tvorený živými časticami atenuovaného vírusu alebo inaktivovanými časticami atenuovaného vírusu, alebo môže ísť o kapsid HAV, alebo o vírusovú bielkovinu HAV, ktorá môže byť získaná aj s použitím rekombinantnej DNA.
Pokiaľ ide o infekciu vírusom hepatitídy B, HBV, ide taktiež o široko rozšírený problém, ale k dispozícii sú vakcíny, vhodné na imunizáciu v širokom meradle, ide napríklad o výrobok Engerix-B (SmithKline Beecham plc), ktorý bol získaný pomocou genetického inžinierstva.
Príprava povrchového antigénu hepatitídy B, HBsAg, je dobre dokumentovaná a bola opísaná napríklad v publi kácii Garford a ďalší, Develop. Biol. Štandard 54, str. 125, 1983, Gregg a ďalší, Biotechnology 5, str. 479, 1987 a v európskych patentových spisoch č. 226 846 a 299 108.
Tak ako bude v priebehu prihlášky používaný, zahrnuje pojem povrchový antigén hepatitídy B alebo HBsAg akýkoľvek antigén HBsAg alebo jeho fragment s antigenitou, zodpovedajúcou povrchovému antigénu HBV. Je zrejmé, že okrem reťazca 226 aminokyselín antigénu H BsAg S (Tiollais a ďalší, Náture, 317, 489, 1985 a literárne údaje), môže opísaný antigén HBsAg v prípade potreby obsahovať celý reťazec alebo časť predbežného S-rcťazca, ako už bolo opísané v uvedených publikáciách a okrem toho aj v európskom patentovom spise č. 278 940. Výhodne obsahuje uvedený antigén polypeptid s reťazcom aminokyselín 12 až 52, za ktorým nasleduje reťazec zvyškov 133 až 145 a potom ešte reťazec zvyškov 175 až 400 L-bielkoviny antigénu HBsAg vzhľadom na otvorený čítací rámec vírusu hepatitídy B, serotypu ad, tento peptid sa uvádza ako peptid L* podľa EP 414 374. HBsAg v zmysle vynálezu môže zahŕňať aj polypeptid preSl-PreS2-S, opísaný v EP 198 474 (Endotronics) alebo jeho analógy, tak ako boli opísané napríklad v EP 304 578 (McCormick a Jones). Opísaný HBsAg sa môže týkať aj mutant, tak ako boli opísané napríklad v medzinárodnej patentovej prihláške WO 91/14703 alebo v zverejnenej európskej patentovej prihláške č. 511 855 Al, zvlášť v prípade, že aminokyselinou, zamenenou v polohe 145 je glycín, ktorý je nahradený arginínom.
Zvyčajne má HBsAg časticovú formu. Častice môžu obsahovať napríklad samotnú bielkovinu S alebo môže ísť o zložené častice, napríklad (L*, S), kde L* má uvedený význam a S znamená bielkovinu S antigénu HBsAg. Častice majú výhodne formu, schopnú expresie v kvasinkách.
Vírus hepatitídy C, HCV, ktorý je špecificky opísaný v GB 2 212 511B spôsobuje ochorenie, ktoré je možné liečiť vakcínou, pripravenou z jedného alebo väčšieho počtu imunogénnych polypeptidov, odvodených z cDNA pre HCV.
Vírus hepatitídy D bol podrobne opísaný v publikácii Viral Hepatitis and Liver Disease, (1990, Symposium, loc. cit.).
Vírus hepatitídy E, HEV bol opísaný v patentovej prihláške WO 89/12462. Vakcína, podávaná napríklad vo farmaceutický prijateľnom pomocnom prostriedku, obsahuje rekombinantnú bielkovinu alebo zmes bielkovín, odvodených od HEV.
Aj keď pokusné i komerčne vydávané vakcíny proti hepatitíde, ako Havrix a Engerix-B poskytujú veľmi dobré výsledky, všeobecne sa uznáva, že optimálna vakcína by mala nielen vyvolávať tvorbu neutralizačných protilátok, ale taktiež by mala čo najúčinnejšie stimulovať bunkovú imunitu, sprostredkovanú T-bunkami. Existuje taktiež potreba pripraviť kombinačné vakcíny proti hepatitíde na stimuláciu bunkovej imunity týmto spôsobom. Vynález si kladie za úlohu takú vakcínu navrhnúť.
Podstata vynálezu
Podstatu vynálezu tvorí vakcína, ktorá obsahuje antigén hepatitídy v spojení s 3-O-deacylovaným monofosforyllipidom A (skratka MPL) a vhodný nosič.
3-O-deacylovaný monofosforyllipid A (alebo 3-De-O-acylovaný monofosforyllipid A) bol skôr označovaný 3D
-MPL alebo d3-MPl, aby bolo naznačené, že poloha 3 redukujúceho zakončenia glukozaminu je de-O-acylovaná. Príprava tejto látky bola opísaná v GB 2 220 211 A. Chemický ide o zmes 3-deacylovaného monofosforyllipidu A so 4, 5 alebo 6 acylovanými reťazcami. Uvedené označenie bolo skrátené na MPL vzhľadom na to, že MPL je ochranná známka firmy Ribi Immunochem., Montana na označenie 3-O-deacylovaného monofosforyllipidu A, ktorý táto firma bežne dodáva.
V GB 2 220 211 A sa uvádza, že endotoxicita skôr používaného enterobakteriálneho lipolysacharidu LPS je znížená, zatiaľ čo imunogénne vlastnosti sú zachované. Ale uvedený patentový spis spája tieto zistenia len v súvislosti s bakteriálnymi gram-negatívnymi systémami. Dosiaľ nikde nebolo navrhované možné použitie 3-deacylovaného monofosforyllipidu A ako pomocného prostriedku pre vakcínu s obsahom antigénu vírusu hepatitídy.
Neočakávane však bolo zistené, že vakcína podľa vynálezu, ktorá obsahuje uvedenú látku spolu s antigénmi vírusu hepatitídy má zvlášť výhodné vlastnosti, ako bude ďalej opísané.
Veľkou výhodou vakcíny podľa vynálezu je skutočnosť, že vakcína je veľmi účinná pri vyvolávaní imunity a to aj pri veľmi nízkych dávkach antigénu.
Vakcína poskytuje veľmi dobrú ochranu proti primárnej infekcii a vyvoláva tak tvorbu špecifických neutralizačných protilátok, ako aj imunologickú odpoveď, sprostredkovanú efektorovými bunkami (DTH).
Ďalšou dôležitou výhodou je, že vakcíny podľa vynálezu je možné použiť nielen na prevenciu, ale aj na liečenie už vzniknutého ochorenia.
MPL v uvedenom význame je zvyčajne obsiahnutý v rozmedzí 10 až 100, výhodne 25 až 50 mikrogramov v jednej dávke, zatiaľ čo antigén hepatitídy bude typicky obsiahnutý v množstve 2 až 50 mikrogramov na jednu dávku.
Nosičom môže byť emulzia typu olej vo vode, lipidové nosné prostredie alebo síran hlinitodraselný.
Netoxická emulzia typu olej vo vode výhodne obsahuje netoxický olej, napríklad skvalen a emulgátor, napríklad Tween 80 vo vodnom nosiči. Vodným nosičom môže byť napríklad fyziologický roztok chloridu sodného s fosfátovým pufrom.
V jednom uskutočnení vynálezu sa použije antigén HAV (napríklad Havrix) v zmesi s MPL a hydroxidom hlinitým, ako bude ďalej podrobnejšie opísané.
V ďalšom uskutočnení sa použije antigén HBsAg S (napríklad Engerix-B) v zmesi s MPL a hydroxidom hlinitým, ako bude taktiež ďalej opísané.
V ďalšom špecifickom uskutočnení sa použije antigén HBsAg vo forme častíc (L*,S) v uvedenom význame v zmesi s MPL a hydroxidom hlinitým.
V uvedených uskutočneniach je možné namiesto síranu hlinitodraselného použiť emulziu typu olej vo vode.
Ďalšie výhodné uskutočnenia budú uvedené v príkladovej časti prihlášky.
V ďalšom uskutočnení sa vynález týka vakcíny na použitie v lekárstve, zvlášť na liečenie alebo profylaxiu infekcie vírusom hepatitídy. Vo výhodnom uskutočnení ide o liečebnú vakcínu, použiteľnú pri liečení už vzniknutej infekcie, zvlášť infekcie hepatitídou B a/alebo C u ľudí.
Vzhľadom na celkom neočakávanú účinnosť je v ďalšom výhodnom uskutočnení možno navrhnúť vakcínu na liečenie alebo profylaxiu hepatitídy A a/alebo B.
Vakcína podľa vynálezu výhodne obsahuje ešte ďalšie antigény, takže je účinná pri liečení alebo profylaxii jednej alebo väčšieho počtu ďalších bakteriálnych, vírusových alebo hubových infekcií.
Vakcína proti hepatitíde podľa vynálezu teda výhodne obsahuje aspoň jednu ďalšiu zložku, ktorá sa volí z antigénov odlišných od antigénu hepatitídy, známych na použitie na výrobu vakcín, napríklad proti záškrtu, tetanu, čiernemu kašľu, detskej obrne a proti Haemophilus infuenzae b (Hib).
Vakcína podľa vynálezu výhodne obsahuje antigén HBsAg v uvedenom význame.
Špecifickými kombinačnými vakcínami v rozsahu vynálezu môžu byť napríklad kombinácie DTP (difterie-tetanus-pertusse) a hepatitída B, vakcína Hib-hepatitída B, vakcína DTP-Hib-hepatitída B a vakcína IPV (inaktivovaný vírus detskej obmy)-DTP-Hib-hepatitída B.
Uvedené prostriedky môžu výhodne obsahovať zložku, chrániacu proti hepatitíde A, ide zvlášť o usmrtený atenuovaný kmeň, odvodený od kmeňa HM-175 tak, ako je použitý vo vakcíne Havrix.
Zložky, vhodné na použitie v týchto vakcínach, sa už bežne dodávajú, podrobnosti je možné získať od svetovej organizácie WHO. Napríklad ako zložka IPV sa môže použiť inaktivovaná vakcína pre detskú obrnu (Salk). Vakcína proti čiernemu kašľu môže obsahovať celé bunky alebo bezbunkový materiál.
Výhodne je vakcína proti hepatitíde alebo kombinačná vakcína podľa vynálezu určená na použitie v detskom lekárstve.
Príprava vakcíny je všeobecne opísaná v publikácii New Trends and Development in Vaccines, ed. Voliér a ďalší, University Park Press, Baltimore, Maryland, USA, 1987. Zapuzdrenie do lipozómov je opísané v US patentovom spise č. 4 235 877 (Fullerton). Konjugácia s bielkovinami a makromolekulami je opísaná napríklad v US patentovom spise č. 4 372 945 (Likhite) a US patent, č. 4 474 757 (Armor a ďalší).
Množstvo antigénu v každej dávke vakcíny sa volí tak, aby toto množstvo bolo schopné vyvolať imunoprotektívnu odpoveď bez významnejších nepriaznivých vedľajších účinkov, typických pre takéto vakcíny. Toto množstvo bude závisieť od použitej imunogénnej látky. Zvyčajne bude každá dávka obsahovať 1 až 1000, výhodne 2 až 100 a zvlášť 4 až 40 mikrogramov celkového množstva imunogénnych látok. Optimálne množstvo pre určitú vakcínu je možné zistiť bežným spôsobom podľa pozorovania titra protilátok a ďalších odpovedí. Po počiatočnom očkovaní je možné ešte preočkovať po približne 4 týždňoch.
Podstatu vynálezu tvorí aj spôsob výroby uvedenej vakcíny, pri ktorom sa spracováva antigén hepatitídy v uvedenom význame s nosičom a s MPL.
Týmto spôsobom je možné spracovať s HBsAg ešte ďalšie zložky za vzniku kombinačnej vakcíny, výhodne určenej na použitie v detskom lekárstve.
Praktické uskutočnenie vynálezu bude vysvetlené nasledujúcimi príkladmi.
Príklady uskutočnenia vynálezu
Príklad 1
Vakcína proti hepatitíde B
MPL bol získaný od Ribi Immunochem Research Inc. Hydroxid hlinitý bol získaný od Superfos (Alhydrogél).
MPL sa uvedie do suspenzie vo vode na injekčné podanie v koncentrácii 0,2 až 1 mg/ml s použitím ultrazvuku vo vodnom kúpeli na tak dlho, až častice majú rozmer 80 až 500 nm, merané rozptylom svetla.
až 20 mikrogramov HBsAg (S-antigén ako Engerix B) v roztoku vo fosfátovom pufri v koncentrácii 1 mg/ml sa adsorbuje na 30 až 100 mikrogramov hydroxidu hlinitého v roztoku obsahujúcom 10,38 mg Aľ3/ml počas jednej hodiny pri teplote miestnosti za miešania. K tomuto roztoku sa potom pridá 30 až 50 mikrogramov DMPL vo forme roztoku, obsahujúceho 1 mg/ml tejto látky. Objem a osmotický tlak sa upraví doplnením na 600 mikrolitrov vodou pre injekčné podanie a 5 x koncentrovaným fosfátovým pufrom. Roztok sa inkubuje 1 hodinu pri teplote miestnosti a potom sa až do použitia uschováva pri teplote 4 °C. V priebehu skladovania dochádza k zreniu prostriedku. Týmto spôsobom je možné získať desať injekčných dávok pre skúšky na myšiach.
Podobný prostriedok je možné pripraviť tak, že sa ako antigén použije HBsAg (L*, S) tak, ako bol definovaný.
Príklad 2
Vakcína proti hepatitíde A
MPL bol získaný od Ribi Immunochem Research Inc. Hydroxid hlinitý bol získaný od Superfos (Alhydrogél).
HAV (360 až 22 EU na dávku) sa vopred adsorbuje na 10 % hydroxid hlinitý (0,5 mg/ml). K roztoku sa pridá MPL v množstve 12,5 až 100 mikrogramov na jednu dávku.
K roztoku sa pridá zvyšný hydroxid hlinitý a zmes sa nechá stáť 1 hodinu pri laboratórnej teplote. Objem sa doplní fosfátovým pufrom s obsahom 10 mM fosfátu a 150 mM chloridu sodného a výsledný prostriedok sa uloží až do použitia pri teplote 4 °C.
Príklad 3
Kombinačná vakcína proti hepatitíde B a A
HBsAg sa adsorbuje na 90 % konečného množstva hydroxidu hlinitého (0,5 mg/ml) a zmes sa inkubuje cez noc pri laboratórnej teplote. Potom sa pH upraví na 6,2 a prostriedok sa nechá zrieť 14 dní pri laboratórnej teplote.
Antigén hepatitídy A v množstve 360 až 22 EU na jednu dávku sa vo forme inaktivovaného derivátu kmeňa HM-175, ktorý je použitý aj vo vakcíne Havrix vopred adsorbuje na 10 % konečného množstva hydroxidu hlinitého (0,5 mg/ml). Zvyšný hydroxid hlinitý sa potom pridá do roztoku a roztok sa nechá stáť za miešania 1 hodinu pri laboratórnej teplote.
HAV, adsorbovaný na hydroxid hlinitý, sa potom pridá k prostriedku s obsahom HBsAg.
K roztoku HAV/HBsAg sa potom pridá MPL do konečnej koncentrácie 12 až 100 mikrogramov nadávku 1 ml, objem sa upraví na konečný objem dávky a prostriedok sa až do použitia uloží pri teplote 4 °C.
Príklad 4
Kombinačné vakcíny, obsahujúce druhotné antigény
Kombinačné vakcíny, obsahujúce DTP, IPV, Hib alebo bezbunkové antigény, alebo celé bunky mikroorganizmov, vyvolávajúceho pcrtussi sa pripravia pridaním jedného alebo väčšieho počtu požadovaných antigénov k prostriedkom, ktoré boli opísané v príkladoch 1, 2 alebo 3.
Príklad 5
Zvýšenie humorälnej imunity a indukcia bunkovo sprostredkovanej imunity imunizáciou myší s použitím antigénu HBsAg, spracovaného s hydroxidom hlinitým a MPL.
A. Účinok hydroxidu hlinitého a MPL na tvorbu protilátok proti HBs
Myšie kmene Balb/c boli imunizované podkožné alebo vnútrokožne rekombinantným HBsAg, adsorbovaným na hydroxid hlinitý s MPL ako pomocným prostriedkom. Myši boli dvakrát imunizované s použitím HBsAg/Al/MPL a množstvo protilátok bolo stanovené po prvej a po druhej dávke. Celkové množstvo Ig bolo merané skúškou ELISA alebo s použitím skúšobného balíčka AUSAB (Abbott, Lab. 111.), zvlášť veľká pozornosť bola venovaná vyvolaniu tvorby protilátok izotypu IgG2 a vzhľadom na to, že tento izotyp sa prevažne tvorí v dôsledku vylučovania g-interferónu. To znamená, že indukcia tvorby tohto izotypu nepriamo odráža aktiváciu bunkovo sprostredkovanej imunity, najmä aktiváciou Thl.
Bol skúmaný pomer HBsAg/MPL rovnako ako vplyv veľkosti častíc MPL vzhľadom na to, že suspenzia tejto látky vo vode môže obsahovať častice menšie než 100, ale aj väčšie než 500 nm.
Pokus I Účinok MPL s veľkosťou častíc väčšou než 500 nm na imunogenitu rekombinantného HBsAg, adsorbovaného na hydroxid hlinitý
Skupinám po desiatich myších samiciach kmeňa Balb/c bolo podkožné podaných 2,5 mikrogramov rekombinantného HBsAg, adsorbovaného na 50 mikrogramov Al444 vo forme hydroxidu hlinitého pri zvyšujúcom sa množstve MPL v rozmedzí 3,1 až 50 mikrogramov pri veľkosti častíc väčšej než 500 nm. Myšiam boli podané dve injekcie v objeme 100 mikrolitrov v intervaloch 2 týždne. Myšiam bola odoberaná krv dva týždne po prvej injekcii a týždeň po druhom očkovaní. Celkové množstvo IgG proti HBs a celkové množstvo špecifického IgG2a bolo merané metódou ELISA s použitím rekombinantného HBsAg. Titre boli vyjadrené ako prevrátená hodnota riedenia, ktoré zodpovedá 50 % maximálnej hodnoty (riedenie do stredného bodu). Výsledky sú uvedené v tabuľke 1. Výsledky ukazujú zvýšenie množstva špecifického IgG a IgG2a pri zvyšujúcej sa dávke MPL, zvlášť v rozmedzí dávok 12,5 až 50 mikrogramov. Účinok je možné pozorovať pre primárnu a sekundárnu odpoveď aje zvlášť zrejmý v prípade IgG2a, kde dochádza až k 20-násobnému vzostupu, čo nepriamo ukazuje na to, že pri imunizácii s použitím MPL dochádza k vylučovaniu g-interťerónu.
Pokus II
Porovnanie prostriedkov s adsorbovaným rekombinantným HBsAg v prítomnosti alebo neprítomnosti MPL s časticami väčšími než 500 nm, určených na klinické skúšky
Boli pripravené tri prostriedky, určené na klinické skúšky a obsahujúce rekombinantný HBsAg, adsorbovaný na hydroxid hlinitý. Prostriedok BSAH16 neobsahoval MPL a bol kontrolný. Prostriedky DSAR501 a 502 obsahovali 20 mikrogramov rekombinantného HBsAg, adsorbovaného na 0,5 mg Al444 vo forme hydroxidu hlinitého a okrem toho 50 mikrogramov MPLs s veľkosťou častíc väčšou než 500 nm.
Uvedené tri prostriedky boli podkožné podané skupinám po desiatich myšiach, celkom dvakrát v intervale dva týždne, podaných bolo 200 mikrolitrov s obsahom 2,5 mikrogramov HBsAg, 100 mikrogramov ΑΓ4“* a 6,25 mikrogramov MPL. Myšiam bola odobratá krv po dvoch týždňoch a potom jeden týždeň po preočkovaní. Množstvo protilátok proti HBS bolo merané s použitím skúšobného balíčka AUSAB alebo metódou ELISA pre IgG alebo IgG2a. Výsledky sú uvedené v tabuľke 2 a je z nich zrejmé, že dva týždne po prvej injekcii vyvolávajú oba prostriedky s obsahom MPL veľmi významnú tvorbu protilátok proti HBs a to 12,4 a 41,9 mlU/ml, zatiaľ čo prostriedok bez obsahu MPL vyvolal len hraničnú odpoveď 0,75 mlU/ml. Množstvo jedincov s preukázateľnou odpoveďou bola taktiež vyššia v prípade MPL a to 9/10 a 9/10 proti 1/10 v neprítomnosti MPL. Účinok MPL bol potvrdený aj po preočkovaní, pretože titre pre prostriedky DSAR 501 a 502 sú približne 6x vyššie než pre prostriedok bez MPL.
To preukazuje, že aspoň pri myšiach môže MPL s veľkosťou častíc vyššou než 500 nm zlepšiť kinetiku vzniku odpovede na HBs aj úroveň tejto odpovede.
Uvedené výsledky boli potvrdené aj pri meraní množstva špecifického IgG a IgG2a po imunizácii prostriedkom DSAH16 bez MPL a DSAR502 s obsahom MPL. Titer IgG proti HBS je 5x väčší pre primárnu odpoveď a 3x vyšší pre sekundárnu odpoveď v prítomnosti MPL.
Pre odpoveď, spočívajúcu v tvorbe IgG2a je účinok MPL ešte nápadnejší, aspoň po druhej dávke a ukazuje na prednostnú tvorbu IgG2a. To nepriamo ukazuje na aktiváciu bunkovo sprostredkovanej imunity (sekrécia g-interferónu) pri podaní prostriedku s obsahom MPL.
Pokus III
Účinok MPL s veľkosťou častíc menšou než 100 nm na imunogenitu rekombinantného HBsAg, adsorbovaného na hydroxid hlinitý'
Vzhľadom na to, že MPL je oveľa ľahšie dosiahnuteľný reprodukovateľným spôsobom v časticiach menších než 100 nm než v časticiach väčších než 500 nm, bol sledovaný aj účinok MPL s veľkosťou častíc menšou než 100 nm na imunogenitu rekombinantného HBsAg, adsorbovaného na hydroxid hlinitý'.
Skupinám desiatich myších samíc kmeňa Balb/c vo veku 7 týždňov bol podkožné podaný 1 mikrogram rekombinantného HBsAg, adsorbovaného na 50 mikrogramoch Al+rh vo forme hydroxidu hlinitého v prítomnosti zvyšujúceho sa množstva 3,1 až 25 mikrogramov MPL s veľkosťou častíc menšou než 100 nm. Myšiam boli podané dve injekcie v intervale dvoch týždňov v objeme 200 mikrolitrov. Myšiam bola odobratá krv dva týždne po prvej injekcii a týždeň po preočkovaní. Odpoveď proti HBs bola vyhodnotená skúškou ELISA na zmesi sér, hodnotené bolo množstvo Ig, IgG a IgG2a. Titre boli vyjadrené ako recipročná hodnota riedenia, poskytujúceho 50 % najvyššej hodnoty. Výsledky ukazujú, že už 3,1 mikrogramov MPL vyvolá silné zvýšenie tvorby protilátok pri primárnej a sekundárnej odpovedi. Zvýšenie vyvrcholí pri použití 6,25 mikrogramov tejto látky a potom pomaly klesá, až pri použití vysokých dávok MPL až 25 mikrogramov je odpoveď podobná ako v prípade, ak sa MPL vôbec nepoužije. Tento typ tvorby protilátok je podobný pre IgG, IgG2a aj pre celkové množstvo Ig. Na rozdiel od výsledkov, získaných pri použití MPL s väčšími časticami nad 500 nm v pokuse I jc zrejmé, že častice s menším rozmerom do 100 nm sú prav depodobne účinnejšie, aspoň v prípade humorálnej imunity vzhľadom na to, že je potrebné menšie množstvo MPL na dosiahnutie maximálneho účinku. Vyššia účinnosť MPL s menšími časticami bola potvrdená v priebehu niekoľkých pokusov.
Ako bolo preukázané, pre MPL s časticami vyššími než 500 nm, je účinok MPL vyšší v prípade IgG2 než z prípade celkového IgG alebo Ig. Pri maximálnom účinku pre sekundárnu odpoveď pri použití 6,25 mikrogramov MPL dochádza k 25-násobnému zvýšeniu množstva IgG2a, zatiaľ čo zodpovedajúce zvýšenie je 7,6 x pre IgG a 4,3 x pre celkový Ig.
B. Vyvolanie bunkovo sprostredkovanej imunity s použitím rekombinantného HBsAg, adsorbovaného na hydroxid hlinitý, vplyv MPL
Aj keď je humorálna imunita dostatočná na ochranu proti hepatitíde B, mohlo by mať vyvolanie bunkovo sprostredkovanej imunity (CTL, Thl) zvláštny význam pri liečení tejto choroby.
Pre liečebné vakcíny je však potrebné navrhnúť nové typy prostriedkov vzhľadom na to, že hydroxid hlinitý môže zvýšiť humorálnu imunitu, ale nie bunkovo sprostredkovanú imunitu.
Z uvedeného dôvodu bol sledovaný vplyv MPL na indukciu tvorby Thl-buniek, schopných sekrécie IL-2 a gamma-interferónu pri myšiach Balb/c, imunizovaných rekombinantným HBsAg, adsorbovaným na hydroxid hlinitý.
Pokus I
Vplyv MPL s veľkosťou častíc väčšou než 500 nm na indukciu tvorby buniek Thl po imunizácii myší Balb/c HBsAg, adsorbovaným na hydroxid hlinitý
Skupiny po 10 myších samiciach kmeňa Balb/c vo veku 5 týždňov boli imunizované do každej labky injekciou 30 mikrolitrov, obsahujúcich 10 mikrogramov HBsAg, 15 mikrogramov Al++4 vo forme hydroxidu hlinitého a 15 mikrogramov MPL. Kontrolným myšiam bolo vstreknuté to isté množstvo rekombinantného HBsAg v zmesi s FCA (pozitívna kontrola) alebo adsorbovaného na hydroxid hliníka bez MPL (negatívna kontrola).
Šesť dní po imunizácii boli myši usmrtené a boli odstrániteľné popliteálne lymfatické uzliny. Bunky lymfatických uzlín UNC v množstve 2105/M1 boli pestované počas rôznych časových období v rozmedzí 24 až 74 hodín v prostredí RPMI, doplnenom 1 % negatívneho myšieho séra a obsahujúcom 5 mikrogramov/ml rekombinantného ABsAg. Po skončení pestovania bolo merané množstvo IL-2, INF-g a IL-4 v živnom prostredí. IL-2 bol stanovený na základe svojej schopnosti stimulovať proliferáciu bunkovej línie, závislej od IL-2, buniek VDA-2, proliferácia bola vyhodnotená príjmom 3H-tymidínu, titer bol vyjadrený ako stimulačný index SI, ktorý sa rovná pomeru 3H-tymidí-nu, prijatého stimulovanými bunkami a tej istej látky, prijatej nestimulovanými bunkami. Množstvo IL-4 a INF-g bolo merané s použitím komerčných balíčkov ELISA (Holland Biotechnology pre IFN-g a endogén pre IL-4). Titre boli vyjadrené v pg pre IFN-g/ml.
Výsledky ukazujú, že LNC myší, imunizovaných HBsAg, adsorbovaným na hydroxid hlinitý neprodukujú podstatnejšie množstvo IL-2, IL-4 ani INF-g. Na druhej strane u LNC myší, imunizovaných HBsAg, adsorbovaným na hydroxid hlinitý s pridaním MPL dochádza k sekrécii
SK 280160 Β6 vysokého množstva IL-2 (I.S. = 38 po 48 hodinách) a podstatného množstva INF-g. Táto sekrécia je v prípade IN-g podobná a v prípade IL-2 vyššia než sekrécia pri myšiach, imunizovaných HBsAg + FCA a k sekrécii in vitro tiež dochádza o niečo skôr.
Žiadny IL-4 nebolo možné pozorovať po imunizácii HBsAg, adsorbovaným na A1(OH)3 ani v prítomnosti MPL.
Tento profil sekrécie preukazuje, že pri imunizácii adsorbovaným HBsAg v prítomnosti MPL, ale nie v neprítomnosti MPL došlo k tvorbe špecifických buniek Thl (IL-2, INF-g). Ale za týchto podmienok imunizácie nebolo možné preukázať tvorbu buniek Th2 (IL-4).
Pokus 11
Účinok MPL s veľkosťou častíc menšou než 100 nm na indukciu tvorby buniek Thl po imunizácii myší Balb/c rekombinantným HBsAg, adsorbovaným na hydroxid hlinitý
Skupiny po piatich myších Balb/c boli imunizované do každej z dvoch labiek podaním 30 mikrolitrov prostriedku s obsahom 10 mikrogramov rekombinantného HBsAg, adsorbovaného na 15 mikrogramov Al+++ vo forme hydroxidu hlinitého s pridaním zvyšujúceho množstva MPL s veľkosťou častíc 100 nm, dávka 0 až 15 mikrogramov.
Šesť dni po injekcii boli myši usmrtené a bunky popliteálnych lymfatických uzlín, LNC, boli pestované pri hustote 2106 buniek/ml v prostredí RPMI, doplnenom 1 % negatívneho myšieho séra po rôzny čas 24 až 96 hodín v prítomnosti 5 mikrogramov/ml rekombinantného HBsAg.
Sekrécia IL-2 bola meraná stimuláciou proliferácie buniek VDA2 a koncentrácia IL-2 bola vyjadrená ako stimulačný index SI. Sekrécia INF-g bola meraná pomocou bežne dodávaného skúšobného balíčka a vyjadrená v pg/ml.
Bolo preukázané, že sekrécia IL-2 sa dramaticky zvyšuje už pri nízkej dávke 7,5 mikrogramov MPL, k maximálnemu účinku dochádza pri dávke 15 mikrogramov MPL.
Sekrécia IL-2 je zvyčajne vyššia po 24 než po 48 alebo 72 hodinách.
K sekrécii INF-g nedochádza v prípade, že sa použije HBsAg, adsorbovaný na hydroxid hlinitý bez pridania MPL. Malá dávka 7,5 mikrogramov MPL vyvolá sekréciu INF-g a maximálny účinok jc dosiahnutý pri 15 mikrogramoch MPL. Na rozdiel od pozorovania pre IL-2 je sekrécia INF-g o niečo oneskorená a zvyšuje sa v priebehu času až do 96 hodín.
Záverom je možné zhrnúť, že MPL s veľkosťou častíc 100 nm môže vyvolať tvorbu buniek Thl v prípade, že táto látka je pridaná k HBsAg, adsorbovanému na hydroxid hlinitý.
C. Záver
Bol sledovaný účinok prostriedku, obsahujúceho HBsAg, adsorbovaný na hydroxid hlinitý a MPL na vyvolanie humorálnej a bunkovej sprostredkovanej imunity pri myšiach kmeňa Balb/c. Výsledky ukazujú, že MPL celkom zrejme zlepšuje kinetiku odpovede proti HBs vzhľadom na to, že po primárnej a sekundárnej imunizácii je možné pozorovať ďaleko väčšie množstvo protilátok proti tomuto antigénu. Kvalita týchto protilátok je taktiež pozmenená, bolo možné pozorovať prednostnú tvorbu IgG2a, čo nepriamo preukazuje sekréciu INF-g a tým aj indukciu bunkovo sprostredkovanej imunity.
Priame vyhodnotenie indukcie tvorby buniek Thl pomocou prostriedkov, obsahujúcich HBsAg, hydroxid hlinitý a MPL jasne preukazuje, že MPL môže vyvolať silnú indukciu tvorby buniek Thl, pri ktorých dochádza k sekrécii IL-2 a INF-g. Tento typ prostriedku je teda veľmi dôležitý pre vývoj vakcíny, používanej na liečebné účely.
Výsledky uvedených pokusov budú zhrnuté v tabuľkách 1 až 6.
Príklad 6
Klinické použitie MPL ako pomocného prostriedku pre IIBsAg, predbežné výsledky
Štúdia s použitím MPL-HBV-002 (stále ešte pokračuje)
Pri tejto štúdii bol porovnaný prostriedok HBsAg-MPL s vakcínou Engerix-B u mladých zdravých dospelých dobrovoľníkov bez akéhokoľvek predbežného ošetrenia. Pokusy boli vykonávané do nasledujúcich konečných bodov:
- imunogenita: veľkosť odpovede vo forme množstva protilátok proti HBs,
- kinetika tvorby protilátok proti HBs,
- bunkovo sprostredkovaná imunita, vyvolaná oboma vakcínami in vivo a in vitro,
- vznik reakcie, toxikológie a bezpečnosť.
Materiály a metódy
a) Vakcína
HBsAg síran MPL _______ako v Engerix B hlinitodraselnv_______________
I 20 pg 500 pg 50 pg
II 20 ug 500 ug 0
b) Pokusné osoby
Išlo o zdravých dospelých dobrovoľníkov vo veku 18 až 30 rokov, negatívnych na HBV a nikdy predtým očkovaných proti vírusu hepatitídy B.
c) Uskutočnenie pokusu
- Dvojitá slepá skúška s náhodným vybraním subjektov
- Schéma vakcinácie: 0, 1 a 6 mesiacov
- Sledovanie až do 12 mesiaca
- Odbery krvi:
protilátky proti HBs boli stanovené pred vakcináciou a 7, 15 a 30 dní po každom očkovaní, biochemické a hematologické parametre boli vyhodnotené pred a dva dni po každej dávke, krv na vyhodnotenie bunkovo sprostredkovanej imunity bola odobratá pred a po primárnej vakcinácii a pred a po očkovaní.
- Výskyt reakcií:
Pokusné osoby zaznamenali výskyt miestnych a celkových príznakov do denníka v deň očkovania a v priebehu siedmich nasledujúcich dní.
Výsledky
Výsledky sledovania do dvoch mesiacov po druhej dávke budú uvedené.
Pokusné osoby:
Celkom 29 osôb súhlasilo s vykonaním pokusu, ale len 27 osôb, 15 mužov a 12 žien splnilo kritéria. 15 osôb bolo zaradených do skupiny I a 12 osôb do skupiny II. Priemerný vek osôb bol 22 rokov.
Bezpečnosť:
Neboli pozorované žiadne nežiaduce vedľajšie účinky a žiadnu osobu nebolo nutné vyradiť zo štúdie. Neboli pozorované žiadne významné klinické zmeny, pokiaľ ide o hematologické alebo biochemické parametre. Výskyt a závažnosť miestnych a celkových príznakov boli podobné u oboch očkovaných skupín.
Imunogenita:
Titer protilátok proti HBs bol meraný až do dňa 90, to znamená dva mesiace po očkovaní. Rýchlosť tvorby protilátok SC v percentách je definovaná okamihom, v ktorom je už možné preukázať protilátky u osôb, ktoré na začiatku tohto pokusu mali negatívne krvné sérum.
Dosiahnutá ochrana je definovaná percentom osôb, u ktorých bol dosiahnutý dostatočne vysoký titer protilátok proti HBS. V prípade, že nie je možné preukázať jasný rozdiel v množstve vytvorených protilátok medzi oboma skupinami, je kinetika odpovede odlišná a je zrejme výhodné použiť vakcínu, obsahujúcu MPL. Sedem dní po druhej dávke skutočne došlo u 93 a u 80 % osôb, ktorým bola podávaná vakcína MPL-HBV a osoby z týchto skupín boli teda chránené, na porovnanie je možné uviesť, že hodnota SC pre skupinu, ktorej bola podávaná vakcína Engerix-B bola 95 % a dosiahnutá ochrana 58 %. Tento rozdiel sa udržuje až 2 mesiace po podaní druhej dávky a je zvlášť zrejmý pre dosiahnutú ochranu. V uvedenom časovom období boli všetky osoby, ktorým bola podávaná vakcína MPL-HBV dostatočne chránené, zatiaľ čo v skupine osôb, ktorým bola podávaná vakcína s hlinitou soľou ako pomocným prostriedkom bolo chránených len 58 % očkovaných osôb.
Štúdia s podaním MPL-HBV-003 (ešte pokračuje)
Materiály a metódy sú obdobné ako pri predchádzajúcej štúdii s podaním MPL-HBV-002, tak ako bolo uvedené. Spôsob vakcinácie však bol odlišný.
skupinu, počet osôb vakcín·. čaaové rozmedzie
I 25 MPL-HBsAg/siran hlinitodraselný 0-2 mesiace
II 25 Engerlx>B 0-2 mesiace
III 25 MPL-HB$Ag/siran hlinitodrasclný 0-6 mesiacov
IV 25 Engerix-B 0-6 mesiacov
Napriek tomu, že kinetika tvorby protilátok proti HBs nebola tak presne sledovaná ako v predchádzajúcich štúdiách, je zrejmé, že z výsledkov je možné vyvodiť rovnaký záver. Osoby, ktorým bola podávaná vakcína s obsahom MPL boli lepšie chránené po podaní druhej dávky než osoby, ktorým bola podaná vakcína bez obsahu MPL. Všetky osoby až na jednu, to znamená 95,8 % osôb malo dostatočný ochranný titer jeden mesiac po podaní druhej dávky vakcíny MPL-HBV v porovnaní so 72,7 % osôb v skupine, ktorým bola podávaná vakcína Engerix-B. Okrem toho na rozdiel od predchádzajúceho pokusu vyvolávala vakcína MPL-HBV tvorbu vyššieho titra protilátok než vakcína Engerix-B a to 214 a 72 mlU/ml, čo môže znamenať, že dlhší interval medzi dávkami je dôležitý'.
Záver
V uvedených štúdiách bol vyhodnotený účinok vakcíny proti hepatitíde B s obsahom antigénu HBsAg, ktorý obsahuje aj vakcína Engerix-B a účinok doplnenia tejto vakcíny MPL, štúdie boli vykonávané na zdravých dospelých dobrovoľníkoch a porovnávané s účinkom vakcíny Engerix-B, obsahujúcich antigén HBsAg A a síran hlinitodrasclný. Po podaní prvej dávky sa zdá, že medzi oboma vakcínami nie je podstatný rozdiel v imunogenite, zatiaľ čo po druhej dávke je zrejmé, že vakcína MPL-HBV je ďaleko výhodnejšia vzhľadom na to, že po jej podaní je možné u väčšieho percenta osôb preukázať ochranný titer protilátok. GMT je taktiež v tejto skupine vyšší v prípade, že sa obe dávky podávajú v intervale 2 mesiacov namiesto v intervale 1 mesiac.
Pridanie MPL k antigénu teda vyvoláva výhodnejšiu imunologickú odpoveď a vakcína tohto typu by mala byť zvlášť vhodná na použitie u osôb, u ktorých dochádza k tvorbe protilátok pomaly alebo u osôb, ktoré vytvárajú len malé množstvo protilátok po očkovaní proti vírusu hepatitídy B, tak ako tomu je u starších ľudí alebo u ľudí s porušeným imunitným systémom.
Výsledky uvedených pokusov sú zhrnuté v ďalej uvedených tabuľkách 7 až 9.
Príklad 7
Hepatitída A - štúdia s vakcínou s obsahom MPL u myší
V nasledujúcom pokuse je preukázané, že pridanie MPL k vakcíne proti hepatitíde A má priaznivý účinok. Tento účinok sa odráža v nižšej hodnote ED50, ide o dávku, vyjadrenú v jednotkách ELISA, EU, ktorá poskytuje serologickú odpoveď pri 50 % očkovaných zvierat.
Metóda
Myšie kmene NMRI boli očkované raz injekčnou dávkou pokusnej vakcíny HAV, obsahujúcej 360, 120, 40 alebo 13,3 EU/dávka, súčasne bola vakcína doplnené rôznymi koncentráciami MPL a to 0, 1,5, 6 alebo 12,5 mikrogramov /dávka. Vzorky krvi boli odobraté 28 dní po očkovaní a sérum bolo podrobené skúške pri použití testu HAVAB. Bola vypočítaná hodnota ED50, vyjadrená v EU, zodpovedajúca dávke, schopnej vyvolať serologickú odpoveď pri 50 % pokusných zvierat.
Výsledky
Získané výsledky sú zhrnuté v nasledujúcej tabuľke. Hodnoty ED50 pre vakcínu bez obsahu MPL boli 123,7 EU, zatiaľ čo hodnota ED50 pre vakcínu, obsahujúcu 1,5 mikrogramov MPL/dávka bola táto hodnota 154. Vyššie dávky MPL mali priaznivý účinok, ED50 bolo možné dosiahnuť pri nižších hodnotách EU. Pri použití 12,5 mikrogramov MPL/dávka bola hodnota ED50 rovnajúca sa 47,1 EU.
Záver
Kombinácia príslušného množstva MPL a vakcíny HAV môže zlepšiť účinok vakcíny pri pokusoch na myšiach.
Tabuľka
Vplyv pridania MPL k vakcíne proti hepatitíde A
Pridaná dávka MPL (Hg/dávka) ED50 (vEU/dávka)
0 123,7
1.5 tS4
6 101,1
12, S 47,1
SK 280160 Β6
Tabuľka 1
Vplyv zvyšujúcich sa dávok MPL (> 500 nm) na imunogenitu rekombinantného antigénu, adsorbovaného na hydroxid hlinitý
Množstvo MPL Odpoveď proti HBs (pg/dávka) celkový IgO lgG2a
deň 14 deň 21 deň 14 deň 21
0* 69 743 3,2 11
3,13 122 541 3.8 20
6,25 296 882 6.4 24
12,5 371 1359 10 48
25 456 1493 18 138
50 403 1776 33 242
Tabuľka 2
Porovnanie troch klinických prostriedkov bez obsahu alebo s obsahom MPL pri meraní pomocou AUSAB
prostriedok dávka HBsAg na Al(CH)j Gs) dávka MPL (pg) GMT proti HBs (nIU/nl)
DSAH16 2.5 0 0,75 15.1
DSAR501 2.5 6,25 12.4 96.7
DSAR502 2,5 6,25 41,9 89.2
Tabuľka 3
Porovnanie dvoch klinických prostriedkov s obsahom alebo bez obsahu MPL s časticami väčšími než 500 nm
Odpoveď vo forme IgG a IgG2a proti HBS prostriedok dávka HBsAg dávka MPL odpoveď proti HBs na Al(0H)3 (gg) IgG IgG2a (μβ) d 15 d 21 d 15 d 21
Po imunizácii, opísanej v texte, boli bunky lymfatických uzlín pestované s 5 mg rekombinantného HBsAg/ml po uvedený čas a bola meraná sekrécia IL-2, INGgamma a IL-4 s použitím buniek VDA2 T a dvoch skúšobných balíčkov ELISA.
Tabuľka 6
Účinok rôznych dávok MPL s časticami pod 100 nm na indukciu tvorby buniek TH1, špecifických pre HBsAg dávka prostrie- sekrécia in vivo
HB&Ag dok IL-2(SI) INF- 24h (pg/al)
24h 48h 72h 48h 72h 96h
20 0 2.6 28 21.8 <67 <67 <67 <67
20 7,5 207 173 $8 <67 207 S22 698
20 15 270 71 36 275 878 1249 1582
20 30 41 59 36 <67 <67 <67 207
Tabuľka 7
Štúdia MPL-HBV-002
skupina vakcína čas N hodnota SC « GMT tvorba ochranných protilátok %
I MPL-HBsAg Pre 15 0,0 0 0.0
(20 μβ) PI(d7) 15 0,0 0,0
PI(dl5) 14 42.9 4 7.1
PI(d30) 15 40,0 13 26,7
PH(d37) 15 93.3 41 80,0
PH(d45) 15 100,0 42 73,3
PH(dóO) 15 100,0 25 80,0
PH(d90) 15 100.0 44 100,0
II Engerix B Pre 12 0,0 0 0.0
(20 pg) Pl(d7) 12 0,0 0.0
PI(dl5) 12 33.3 26 25,0
PI(d3O) 12 50.0 9 25.0
PH(d37) 12 75.0 37 58,3
PH(d45) 12 83,3 20 41,7
PH(d6O) 12 66,7 36 50,0
PH(d9O) 12 83,3 31 58.3
DSAH16 2.5 0 20 178 <5 5
DSAR502 2,5 6.25 113 641 <5 28
Tabuľka 4
Vplyv MPL s časticami pod 100 nm na imunogenitu rekombinantného HBsAg, adsorbovaného na hydroxid hlinitý
Tabuľka 8
Štúdia MPL-002:
titer ochranných protilátok proti HBS je vyšší alebo rovnajúci sa 10 mlU/ml (je znázornená na priloženom obrázku)
dávka HBsAg na ai(oh)3 (pg) dávka MPL (<100nm) (pg) odpoveď proti HBs
celkový Tg IgO d 15 d 21 IgG2a
d 15 d 21 d 15 d 21
1 0 30 637 67 516 15 99
1 3,12 312 2302 335 3532 167 1752
1 6.25 538 2719 856 3932 261 2521
1 12,5 396 2104 485 3625 125 1393
1 25,0 38 446 141 638 28 233
Tabuľka 5
Vplyv MPL s časticami nad 500 nm na indukciu tvorby buniek TH1, špecifickými pre HBsAg pri myšiach Balb/c dávka prostrie- sekrécia in vivo
HBsAg dok IL-2(SI) 1NF- (pg/nl) IL-4(pg/ul)
24h 48h 72h 24h 48h 72h 24h 48h 72h
Tabuľka 9
Štúdia MPL-HBV-003
skupina vakcína N SC(»> GMT SP(»>
I MPL-HBsAg Pre 25 0.0 0 0,0
(20 gg) Pl(al) 23 56.5 10 26.1
PI (1.2) 24 66.7 6 16,7
P2(n3) 24 100,0 214 95,8
II Engerix B Pre 25 0.0 0 0.0
(20 /ig) Pl(nl) 24 41,7 12 29,2
Pl(n2) 19 52.6 4 5,3
P2(»3) 22 90.9 72 72,7
PATENTOVÉ NÁROKY
20 FCA 1.3 2.0 8.0 <125 <125 385 NT NT NT
- FCA 0,7 1.8 0.7 <125 <125 <125 NT NT NT
20 A1(OH)3 1.0 1.4 1.2 <125 <125 <125 <40 <40 <40
20 A1(OH)3 2 38 10 <125 280 280 <40 <40 <40
+ MPL

Claims (17)

1. Vakcína proti hepatitíde, vyznačujúca sa t ý m , že obsahuje antigén hepatitídy A spolu s 3-O-deacylovaným monofosforyllipidom A a príslušný nosič.
2. Vakcína podľa nároku 1, vyznačujúca sa t ý m , že ako nosič obsahuje síran hlinitodraselný.
3. Vakcína podľa nároku 1, vyznačujúca sa t ý m , že ako nosič obsahuje emulziu typu olej vo vode alebo iný nosič na báze lipidu.
4. Vakcína podľa nárokov 1 až3, vyznačujúca sa tým, že ako antigén hepatitídy obsahuje antigén hepatitídy A.
5. Vakcína podľa nároku 4, vyznačujúca sa t ý m , že ako antigén hepatitídy A obsahuje inaktivované celé bunky, pripravené z kmeňa HM-175.
6. Vakcína podľa nárokov laz 3, vyznačujúca sa tým, že ako antigén obsahuje antigén hepatitídy B.
7. Vakcína podľa nároku 6, vyznačujúca sa t ý m , že ako antigén obsahuje povrchový antigén hepatitídy B HBsAg alebo jeho variant.
8. Vakcína podľa nároku 7, vyznačujúca sa t ý m , že obsahuje S-antigén HBsAg s obsahom 226 aminokyselín.
9. Vakcína podľa nároku 8, vyznačujúca sa t ý m , že ako antigén obsahuje HBsAg, navyše obsahujúci pre-S-reťazec.
10. Vakcína podľa nárokov 8 alebo 9, v y z n a čujúca sa tým, že antigén HBsAg je tvorený zloženými časticami (L*,S), kde L* znamená modifikovanú bielkovinu L vírusu hepatitídy B, s reťazcom aminokyselín, obsahujúcom zvyšky 12 až 52, za ktorými nasledujú zvyšky 133 až 145 a potom zvyšky 175 až 400 bielkoviny L a S znamená bielkovinu S antigénu HBsAg.
11. Vakcína podľa nárokov 6až 10, vyznačujúca sa tým, že obsahuje antigén hepatitídy A.
12. Vakcína podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 11, vyznačujúca sa tým, že obsahuje aspoň jeden antigén hepatitídy a aspoň jednu ďalšiu zložku, zvolenú z antigénov, odlišných od antigénu hepatitídy a vyvolávajúcich ochranu proti záškrtu, tetanu, pertussi, Haemophilus influenzae b (Hib) a/alebo detskej obrne.
13. Vakcína podľa nároku 12, vyznačujúca sa t ý m , že obsahuje kombináciu DTP - difterietetanus-pertusse a HBsAg, kombináciu Hib-HBsAg, kombináciu DTP-Hib-HBsAg alebo kombináciu IPV - inaktivovaná vakcína proti detskej obrne -DTP-Hib-HBsAg.
14. Vakcína podľa nároku 12, vyznačujúca sa t ý m , že navyše obsahuje antigén hepatitídy A.
15. Vakcína podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 3, vyznačujúca sa tým, že ako antigén hepatitídy obsahuje antigén hepatitídy C, D alebo E.
16. Vakcína podľa ktoréhokoľvek z predchádzajúcich nárokov, vyznačujúca sa tým, že obsahuje 3-O-deacylovaný monofosforyllipid A v množstve 10 až 100 mikrogramov na jednu dávku.
17. Použitie antigénu hepatitídy spolu s 3-O-deacylovaným monofosforyllipidom A na výrobu prostriedkov na profylaxiu alebo na liečenie hepatitídy.
SK1152-94A 1992-03-27 1993-03-24 Vakcína proti hepatitíde a použitie príslušného an SK280160B6 (sk)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB929206789A GB9206789D0 (en) 1992-03-27 1992-03-27 Vaccine
GB929206788A GB9206788D0 (en) 1992-03-27 1992-03-27 Vaccine
GB929206797A GB9206797D0 (en) 1992-03-27 1992-03-27 Vaccine
GB929206786A GB9206786D0 (en) 1992-03-27 1992-03-27 Vaccine
PCT/EP1993/000712 WO1993019780A1 (en) 1992-03-27 1993-03-24 Hepatitis vaccines containing 3-o-deacylated monophoshoryl lipid a

Publications (2)

Publication Number Publication Date
SK115294A3 SK115294A3 (en) 1995-06-07
SK280160B6 true SK280160B6 (sk) 1999-09-10

Family

ID=27450853

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SK1152-94A SK280160B6 (sk) 1992-03-27 1993-03-24 Vakcína proti hepatitíde a použitie príslušného an

Country Status (28)

Country Link
EP (1) EP0633784B2 (sk)
JP (1) JP3470719B2 (sk)
KR (1) KR100270134B1 (sk)
CN (1) CN1072963C (sk)
AP (1) AP570A (sk)
AT (1) ATE146678T1 (sk)
AU (4) AU3751693A (sk)
CA (1) CA2132833C (sk)
CZ (1) CZ283424B6 (sk)
DE (1) DE69306940T3 (sk)
DK (1) DK0633784T4 (sk)
ES (1) ES2098029T5 (sk)
FI (1) FI110843B (sk)
GR (1) GR3022174T3 (sk)
HK (1) HK1003218A1 (sk)
HU (1) HU221253B1 (sk)
IL (1) IL105161A (sk)
MA (1) MA22842A1 (sk)
MY (1) MY111880A (sk)
NO (1) NO309458B1 (sk)
NZ (1) NZ249868A (sk)
RU (1) RU2121849C1 (sk)
SA (1) SA93130573B1 (sk)
SG (1) SG48375A1 (sk)
SI (1) SI9300149B (sk)
SK (1) SK280160B6 (sk)
UA (1) UA44688C2 (sk)
WO (1) WO1993019780A1 (sk)

Families Citing this family (46)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB9105992D0 (en) * 1991-03-21 1991-05-08 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
ES2162139T5 (es) * 1993-03-23 2008-05-16 Smithkline Beecham Biologicals S.A. Composiciones de vacuna que contienen monofosforil-lipido a 3-o-desacilado.
GB9503863D0 (en) * 1995-02-25 1995-04-19 Smithkline Beecham Biolog Vaccine compositions
US6488934B1 (en) 1995-02-25 2002-12-03 Smithkline Beecham Biologicals S.A. Hepatitis B vaccine
GB9513261D0 (en) * 1995-06-29 1995-09-06 Smithkline Beecham Biolog Vaccines
IL137998A0 (en) * 1998-03-09 2001-10-31 Smithkline Beecham Biolog Combined vaccine compositions
US6306404B1 (en) 1998-07-14 2001-10-23 American Cyanamid Company Adjuvant and vaccine compositions containing monophosphoryl lipid A
EP1126876B1 (en) 1998-10-16 2007-03-21 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Adjuvant systems and vaccines
GB9822714D0 (en) * 1998-10-16 1998-12-09 Smithkline Beecham Sa Vaccines
FI108150B (fi) 1999-02-15 2001-11-30 Sulzer Pumpen Ag Menetelmä ja laitteisto massan käsittelemiseksi
US6635261B2 (en) 1999-07-13 2003-10-21 Wyeth Holdings Corporation Adjuvant and vaccine compositions containing monophosphoryl lipid A
GB9921147D0 (en) * 1999-09-07 1999-11-10 Smithkline Beecham Biolog Novel composition
ES2540770T3 (es) 2004-09-22 2015-07-13 Glaxosmithkline Biologicals Sa Composición inmunógena para uso en vacunación contra estafilococos
TW200722101A (en) 2005-03-23 2007-06-16 Glaxosmithkline Biolog Sa Novel composition
PL2368572T3 (pl) 2005-11-04 2020-11-16 Seqirus UK Limited Szczepionki z adjuwantem z niewirionowymi antygenami otrzymane z wirusów grypy hodowanych w hodowli komórkowej
JP2009514839A (ja) 2005-11-04 2009-04-09 ノバルティス ヴァクシンズ アンド ダイアグノスティクス エスアールエル サイトカイン誘導剤を含むアジュバントインフルエンザワクチン
CA2628328A1 (en) 2005-11-04 2007-05-10 Novartis Vaccines And Diagnostics S.R.L. Influenza vaccines including combinations of particulate adjuvants and immunopotentiators
NZ567978A (en) 2005-11-04 2011-09-30 Novartis Vaccines & Diagnostic Influenza vaccine with reduced amount of oil-in-water emulsion as adjuvant
PT1962899E (pt) 2005-12-22 2011-10-19 Glaxosmithkline Biolog Sa Vacina conjugada polissacarídica pneumocócica
GB0607088D0 (en) 2006-04-07 2006-05-17 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine
EP3753574A1 (en) 2006-01-27 2020-12-23 Seqirus UK Limited Influenza vaccines containing hemagglutinin and matrix proteins
EP2010537B1 (en) 2006-03-23 2011-12-28 Novartis AG Imidazoquinoxaline compounds as immunomodulators
WO2007110776A1 (en) 2006-03-24 2007-10-04 Novartis Vaccines And Diagnostics Gmbh & Co Kg Storage of influenza vaccines without refrigeration
EA020459B1 (ru) 2006-03-30 2014-11-28 Глаксосмитклайн Байолоджикалс С.А. Иммуногенная композиция
US20100015168A1 (en) 2006-06-09 2010-01-21 Novartis Ag Immunogenic compositions for streptococcus agalactiae
MX2009000660A (es) 2006-07-17 2009-04-08 Glaxosmithkline Biolog Sa Vacuna de influenza.
GB0614460D0 (en) 2006-07-20 2006-08-30 Novartis Ag Vaccines
NZ575271A (en) 2006-09-11 2011-09-30 Novartis Ag Making influenza virus vaccines without using eggs
PL2121011T3 (pl) 2006-12-06 2014-10-31 Novartis Ag Szczepionki zawierające antygeny czterech szczepów wirusa grypy
TW200908994A (en) 2007-04-20 2009-03-01 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine
BRPI0813644B8 (pt) 2007-06-26 2021-05-25 Glaxosmithkline Biologicals Sa composição imunogênica, vacina, processo para fabricar a mesma, e, uso da composição imunogênica ou vacina
CN101784283A (zh) 2007-06-27 2010-07-21 诺华有限公司 低添加流感疫苗
GB0810305D0 (en) 2008-06-05 2008-07-09 Novartis Ag Influenza vaccination
GB0818453D0 (en) 2008-10-08 2008-11-12 Novartis Ag Fermentation processes for cultivating streptococci and purification processes for obtaining cps therefrom
WO2009081172A1 (en) 2007-12-24 2009-07-02 Novartis Ag Assays for adsorbed influenza vaccines
AU2010220824A1 (en) 2009-03-05 2011-10-20 Jenny Colleen Mccloskey Treatment of infection
PL3178490T3 (pl) 2009-07-15 2022-08-01 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Kompozycje białka f rsv i sposoby ich wytwarzania
GB0913680D0 (en) 2009-08-05 2009-09-16 Glaxosmithkline Biolog Sa Immunogenic composition
GB0913681D0 (en) 2009-08-05 2009-09-16 Glaxosmithkline Biolog Sa Immunogenic composition
EA025152B1 (ru) 2010-12-02 2016-11-30 Бионор Иммуно Ас Конструкция пептидного каркаса
AU2012204955B2 (en) 2011-01-06 2016-10-06 Bionor Immuno As Monomeric and multimeric immunogenic peptides
EP4144368A1 (en) 2011-01-26 2023-03-08 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Rsv immunization regimen
WO2012158613A1 (en) 2011-05-13 2012-11-22 Novartis Ag Pre-fusion rsv f antigens
KR20150018870A (ko) 2012-06-06 2015-02-24 바이오노르 이뮤노 에이에스 면역원 및 투여 반응제로서 사용하기 위한 바이러스 단백질로부터 유래하는 펩타이드
EP3313439A2 (en) 2015-06-26 2018-05-02 Seqirus UK Limited Antigenically matched influenza vaccines
US20230109142A1 (en) 2020-02-14 2023-04-06 Immunor As Corona virus vaccine

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ATE70308T1 (de) * 1984-09-12 1991-12-15 Chiron Corp Hybridpartikel-immunogene.
JPH02500880A (ja) * 1987-11-18 1990-03-29 カイロン コーポレイション Nanbvの診断用薬およびワクチン
AU3748489A (en) * 1988-06-17 1990-01-12 Genelabs Incorporated Enterically transmitted non-a/non-b hepatitis viral agent
US4912094B1 (en) * 1988-06-29 1994-02-15 Ribi Immunochem Research Inc. Modified lipopolysaccharides and process of preparation
ATE159031T1 (de) * 1989-07-25 1997-10-15 Smithkline Biolog Antigene sowie verfahren zu deren herstellung
CA2065287C (en) * 1989-09-15 1999-12-21 Tatsuo Miyamura New hcv isolates
IL97985A0 (en) * 1990-05-07 1992-06-21 North American Vaccine Inc Improved vaccine compositions
EP0563091A1 (en) * 1990-12-20 1993-10-06 SMITHKLINE BEECHAM BIOLOGICALS s.a. Vaccines based on hepatitis b surface antigen

Also Published As

Publication number Publication date
AU3397499A (en) 1999-08-19
GR3022174T3 (en) 1997-03-31
EP0633784B2 (en) 2001-10-17
SG48375A1 (en) 1998-04-17
KR100270134B1 (ko) 2000-10-16
SK115294A3 (en) 1995-06-07
AU6445796A (en) 1996-11-07
HK1003218A1 (en) 1998-10-16
ES2098029T5 (es) 2002-03-16
RU94042386A (ru) 1996-08-20
IL105161A0 (en) 1993-07-08
ES2098029T3 (es) 1997-04-16
CZ235594A3 (en) 1995-02-15
CZ283424B6 (cs) 1998-04-15
SI9300149A (en) 1993-12-31
EP0633784A1 (en) 1995-01-18
AP9300502A0 (en) 1993-04-30
NO943571D0 (no) 1994-09-26
CN1085805A (zh) 1994-04-27
DE69306940D1 (de) 1997-02-06
AU767755B2 (en) 2003-11-20
MY111880A (en) 2001-02-28
AU1000802A (en) 2002-02-21
HUT69931A (en) 1995-09-28
CA2132833C (en) 2007-03-06
KR950700757A (ko) 1995-02-20
DK0633784T3 (da) 1997-01-20
JP3470719B2 (ja) 2003-11-25
WO1993019780A1 (en) 1993-10-14
CA2132833A1 (en) 1993-10-14
RU2121849C1 (ru) 1998-11-20
NZ249868A (en) 1997-03-24
FI944442A (fi) 1994-09-26
ATE146678T1 (de) 1997-01-15
AU3751693A (en) 1993-11-08
FI944442A0 (fi) 1994-09-26
DE69306940T2 (de) 1997-06-26
AP570A (en) 1996-11-29
MA22842A1 (fr) 1993-10-01
HU221253B1 (en) 2002-09-28
HU9402758D0 (en) 1994-12-28
DK0633784T4 (da) 2001-12-31
NO943571L (no) 1994-11-14
JPH07505372A (ja) 1995-06-15
IL105161A (en) 1998-08-16
SI9300149B (sl) 2003-02-28
EP0633784B1 (en) 1996-12-27
DE69306940T3 (de) 2002-09-19
NO309458B1 (no) 2001-02-05
CN1072963C (zh) 2001-10-17
UA44688C2 (uk) 2002-03-15
SA93130573B1 (ar) 2004-08-31
FI110843B (fi) 2003-04-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SK280160B6 (sk) Vakcína proti hepatitíde a použitie príslušného an
EP0812593B2 (en) Vaccine compositions containing 3-0 deacylated monophosphoryl lipid a
AP766A (en) A vaccine based on hepatitis B antigen.
US6893644B2 (en) Hepatitis vaccines containing 3-O-deacylated monophoshoryl lipid A
US20020192224A1 (en) Hepatitis b vaccine
CA2157376C (en) Vaccine compositions containing 3-o deacylated monophosphoryl lipid a
AU705739B2 (en) A method of preparing vaccine compositions containing 3-0-deacylated monophosphoryl lipid A

Legal Events

Date Code Title Description
MK4A Patent expired

Expiry date: 20130324