JP2002527105A - ワクチン - Google Patents
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Abstract
(57)【要約】
宿主細胞の汚染物を実質的に含まない失活Ａ型肝炎ウイルスの製法であって：ａ）Ａ型肝炎ウイルスを培養し、そしてＡ型肝炎調製物を収獲し；ｂ）上記Ａ型肝炎調製物をプロテアーゼで処理し；そしてその後、ｃ）プロテアーゼ消化材料から無傷のウイルスを分離し；ｄ）上記ウイルスを失活させる、を含む前記製法を記載する。また、好ましくは、強いアジュバントと併合させて、上記失活Ａ型肝炎ウイルスを含むワクチンをも記載する。
Description
【０００１】 本発明は、新規ワクチン製剤、それらの製法、及び医療におけるそれらの使用
に関する。特に、本発明は、有効な免疫刺激剤、好ましくは、例えば、モノホス
ホリル・リピドＡ又はその誘導体で補強された改良Ａ型肝炎ワクチンに関する。
本発明は、上記Ａ型肝炎ワクチンが１成分であるところの併合ワクチンにも関す
る。
に関する。特に、本発明は、有効な免疫刺激剤、好ましくは、例えば、モノホス
ホリル・リピドＡ又はその誘導体で補強された改良Ａ型肝炎ワクチンに関する。
本発明は、上記Ａ型肝炎ワクチンが１成分であるところの併合ワクチンにも関す
る。
【０００２】 Ａ型肝炎ワクチンは知られている。例えば、Ｓｍｉｔｈｋｌｉｎｅ Ｂｅｅｃ
ｈａｍ ＢｉｏｌｏｇｉｃａｌｓからのワクチンＨａｖｒｉｘ（商標）が、Ａ型
肝炎の感染を防ぐために使用されることができ、そしてまた、アジュバントとし
て水酸化アルミニウムと配合される。このワクチンは、Ａｎｄｒｅ ｅｔ ａｌ
．の手順に従って製造される。それは、ホルモール（ホルムアルデヒド）で失活
されたＨＭ−１７５Ａ型肝炎ウイルスの減弱株を含む；Ａｎｄｒｅ ｅｔ ａｌ
．〔Ｐｒｏｇ Ｍｅｄ．Ｖｉｒｏｌ．１９９０，ｖｏｌ３７；−ｐ７２−９５〕
を参照のこと。
ｈａｍ ＢｉｏｌｏｇｉｃａｌｓからのワクチンＨａｖｒｉｘ（商標）が、Ａ型
肝炎の感染を防ぐために使用されることができ、そしてまた、アジュバントとし
て水酸化アルミニウムと配合される。このワクチンは、Ａｎｄｒｅ ｅｔ ａｌ
．の手順に従って製造される。それは、ホルモール（ホルムアルデヒド）で失活
されたＨＭ−１７５Ａ型肝炎ウイルスの減弱株を含む；Ａｎｄｒｅ ｅｔ ａｌ
．〔Ｐｒｏｇ Ｍｅｄ．Ｖｉｒｏｌ．１９９０，ｖｏｌ３７；−ｐ７２−９５〕
を参照のこと。
【０００３】 上記Ａ型肝炎とＢ型肝炎抗原の併合物であるワクチンＴｗｉｎｒｉｘ（商標）
は、Ａ型肝炎とＢ型肝炎に対して同時に保護するために使用されることができる
。上記Ａ型肝炎抗原とサルモネラ・チフィムリアム（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔ
ｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）の精製Ｖｉ多糖の併合物であるワクチンＨｅｐａｔｙｒ
ｉｘ（商標）は、肝炎と腸チフスに対して同時に保護するために使用されること
ができる。
は、Ａ型肝炎とＢ型肝炎に対して同時に保護するために使用されることができる
。上記Ａ型肝炎抗原とサルモネラ・チフィムリアム（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔ
ｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）の精製Ｖｉ多糖の併合物であるワクチンＨｅｐａｔｙｒ
ｉｘ（商標）は、肝炎と腸チフスに対して同時に保護するために使用されること
ができる。
【０００４】 国際特許出願ＷＯ９３／１９７８０（Ｓｍｉｔｈｋｌｉｎｅ Ｂｅｅｃｈａｍ
Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ ｓ．ａ．）は、とりわけ、３Ｄ−ＭＰＬで補強され
たＡ型肝炎ワクチンを開示している。 ヨーロッパ特許第０３３９６６７号（Ｃｈｅｍｏ Ｓｅｒｏ）は、Ａ型肝炎抗
原とＢ型肝炎抗原を併合して、併合ワクチンを製造するという一般概念について
記載している。その明細書には、使用されるアジュバントは決定的でなく：それ
は、望ましい程度までこの免疫活性を高めることができるだけでなければならず
、そしていかなる副効果をも生じさせないと述べられている。アルミニウム・ゲ
ル、特に、水酸化アルミニウム・ゲルとリン酸アルミニウム・ゲルが使用されう
ると述べられている。
Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ ｓ．ａ．）は、とりわけ、３Ｄ−ＭＰＬで補強され
たＡ型肝炎ワクチンを開示している。 ヨーロッパ特許第０３３９６６７号（Ｃｈｅｍｏ Ｓｅｒｏ）は、Ａ型肝炎抗
原とＢ型肝炎抗原を併合して、併合ワクチンを製造するという一般概念について
記載している。その明細書には、使用されるアジュバントは決定的でなく：それ
は、望ましい程度までこの免疫活性を高めることができるだけでなければならず
、そしていかなる副効果をも生じさせないと述べられている。アルミニウム・ゲ
ル、特に、水酸化アルミニウム・ゲルとリン酸アルミニウム・ゲルが使用されう
ると述べられている。
【０００５】 今般、Ａ型肝炎ワクチンのための失活ウイルスを製造及び精製する伝統的な方
法が、Ａ型肝炎ウイルスがその中で成長するところの宿主細胞からの汚染物の少
量の残渣を残すことができるということが発見された。このような宿主細胞汚染
物は、特にそれらがヒト起源であり、天然において２倍体であり、そして低レベ
ルであるときは、そのワクチンがアルミニウム塩で補強されるときには心配ない
。しかしながら、そのワクチンが強い免疫刺激剤で補強されるとき、ワクチン接
種を受けた人が、その宿主汚染物に対して、有害な免疫応答を引き起こすことが
できる理論的な可能性が存在する。
法が、Ａ型肝炎ウイルスがその中で成長するところの宿主細胞からの汚染物の少
量の残渣を残すことができるということが発見された。このような宿主細胞汚染
物は、特にそれらがヒト起源であり、天然において２倍体であり、そして低レベ
ルであるときは、そのワクチンがアルミニウム塩で補強されるときには心配ない
。しかしながら、そのワクチンが強い免疫刺激剤で補強されるとき、ワクチン接
種を受けた人が、その宿主汚染物に対して、有害な免疫応答を引き起こすことが
できる理論的な可能性が存在する。
【０００６】 従って、上記宿主細胞タンパク質の微量成分の実質的に全てを除去する、製法
の必要性が在る。 従って、本発明の１の局面においては、宿主細胞汚染物を実質的に含まない、
失活Ａ型肝炎ウイルスの製法であって： ａ）Ａ型肝炎ウイルスを培養し、そしてＡ型肝炎調製物を収獲し； ｂ）上記Ａ型肝炎調製物をプロテアーゼで処理し；そしてその後、 ｃ）プロテアーゼ消化材料から無傷のウイルスを分離し； ｄ）上記ウイルスを失活させる、 を含む前記製法が提供される。
の必要性が在る。 従って、本発明の１の局面においては、宿主細胞汚染物を実質的に含まない、
失活Ａ型肝炎ウイルスの製法であって： ａ）Ａ型肝炎ウイルスを培養し、そしてＡ型肝炎調製物を収獲し； ｂ）上記Ａ型肝炎調製物をプロテアーゼで処理し；そしてその後、 ｃ）プロテアーゼ消化材料から無傷のウイルスを分離し； ｄ）上記ウイルスを失活させる、 を含む前記製法が提供される。
【０００７】 驚くべきことに、上記プロテアーゼ消化処理は、上記Ａ型肝炎ウイルスに悪影
響を及ぼさないが、上記Ａ型肝炎調製物から宿主細胞汚染物の分解及び分離を容
易にする。 好ましくは、上記Ａ型肝炎ウイルスは、ＨＭ−１７５株由来である。 宿主細胞汚染物を実質的に含まないとは、銀染色されたＳＤＳ ＰＡＧＥをス
キャンすることにより、１０％未満の、好ましくは、８％未満の、より好ましく
は、５％未満の宿主細胞タンパク質が検出されることができるということを意味
する。より重要には、そしてスロット・ドット・ハイブリダイゼーションにより
測定されるとき、上記ワクチン中のＨＡＶの１投与量は、好ましくは、１０ng未
満の宿主細胞タンパク質を含有する。
響を及ぼさないが、上記Ａ型肝炎調製物から宿主細胞汚染物の分解及び分離を容
易にする。 好ましくは、上記Ａ型肝炎ウイルスは、ＨＭ−１７５株由来である。 宿主細胞汚染物を実質的に含まないとは、銀染色されたＳＤＳ ＰＡＧＥをス
キャンすることにより、１０％未満の、好ましくは、８％未満の、より好ましく
は、５％未満の宿主細胞タンパク質が検出されることができるということを意味
する。より重要には、そしてスロット・ドット・ハイブリダイゼーションにより
測定されるとき、上記ワクチン中のＨＡＶの１投与量は、好ましくは、１０ng未
満の宿主細胞タンパク質を含有する。
【０００８】 好ましくは、使用されるプロテアーゼは、トリプシンである。使用されること
ができる他のプロテアーゼは、プロナーゼ（ｐｒｏｎａｓｅ）、パパイン（ｐａ
ｐａｉｎ）、及びペプシン（ｐｅｐｓｉｎ）を含む。 上記プロテアーゼ処理は、好ましくは、約２時間、室温より高い温度で、例え
ば、約３７℃で、行われる。
ができる他のプロテアーゼは、プロナーゼ（ｐｒｏｎａｓｅ）、パパイン（ｐａ
ｐａｉｎ）、及びペプシン（ｐｅｐｓｉｎ）を含む。 上記プロテアーゼ処理は、好ましくは、約２時間、室温より高い温度で、例え
ば、約３７℃で、行われる。
【０００９】 上記プロテアーゼ及び消化成分からの無傷のウイルスの分離は、さまざまな好
適な方法により、例えば、パーミエーション（ｐｅｒｍｅａｔｉｏｎ）クロマト
グラフィーにより達成されることができる。 あるいは、上記プロテアーゼ及び消化された成分は、サイズに基づき分離する
いずれかの分離方法、例えば、限外濾過により、分離されることができる。
適な方法により、例えば、パーミエーション（ｐｅｒｍｅａｔｉｏｎ）クロマト
グラフィーにより達成されることができる。 あるいは、上記プロテアーゼ及び消化された成分は、サイズに基づき分離する
いずれかの分離方法、例えば、限外濾過により、分離されることができる。
【００１０】 次に、上記生成物は、他の汚染物を除去するための他のステップによりさらに
精製されることができる。例えば、上記生成物は、上記生成物をイオン交換クロ
マトグラフィーにかけて、核酸残渣を除去することにより、さらに精製されるこ
とができる。 本発明に係る方法のプロテアーゼ消化ステップは、２つの効果に因りＡ型肝炎
調製物の精製を改良することができる。第１に、上記プロテアーゼは、それらが
、上記プロテアーゼ処理に続くクロマトグラフィー分離ステップにおいてより容
易に分離するように、汚染性宿主タンパク質を消化する。第２に、汚染性宿主タ
ンパク質の消化は、上記イオン交換ステップにおいて、未消化の宿主タンパク質
と他の方法で会合されるであろう他の汚染性材料、特に核酸のよりよい分離を許
容する。これらの観察された効果は、いかなる方法においても本発明を必ずしも
限定しないと理解されよう。
精製されることができる。例えば、上記生成物は、上記生成物をイオン交換クロ
マトグラフィーにかけて、核酸残渣を除去することにより、さらに精製されるこ
とができる。 本発明に係る方法のプロテアーゼ消化ステップは、２つの効果に因りＡ型肝炎
調製物の精製を改良することができる。第１に、上記プロテアーゼは、それらが
、上記プロテアーゼ処理に続くクロマトグラフィー分離ステップにおいてより容
易に分離するように、汚染性宿主タンパク質を消化する。第２に、汚染性宿主タ
ンパク質の消化は、上記イオン交換ステップにおいて、未消化の宿主タンパク質
と他の方法で会合されるであろう他の汚染性材料、特に核酸のよりよい分離を許
容する。これらの観察された効果は、いかなる方法においても本発明を必ずしも
限定しないと理解されよう。
【００１１】 本発明の他の局面においては、先に定義したような、汚染性宿主タンパク質を
実質的に含まない、失活Ａ型肝炎ウイルスが提供される。 次に失活Ａ型肝炎ウイルスはワクチンに配合されることができる。 従って、本発明は、さらなる局面において、宿主細胞汚染物を実質的に含まな
い失活Ａ型肝炎ウイルスを含むＡ型肝炎ウイルスを提供する。
実質的に含まない、失活Ａ型肝炎ウイルスが提供される。 次に失活Ａ型肝炎ウイルスはワクチンに配合されることができる。 従って、本発明は、さらなる局面において、宿主細胞汚染物を実質的に含まな
い失活Ａ型肝炎ウイルスを含むＡ型肝炎ウイルスを提供する。
【００１２】 このようなワクチンは、有利には、好適なアジュバントを含む。好適なアジュ
バントは、アルミニウム塩、例えば、水酸化アルミニウムのゲル又はリン酸アル
ミニウムを含むが、カルシウム、鉄又は亜鉛の塩であることも、又はアシル化チ
ロシン、又はアシル化糖、カチオン又はアニオン誘導体化多糖、又はポリホスフ
ァゼンの不溶性懸濁液であることもできる。有利には、高く精製されたＡ型肝炎
ウイルスは、強いアジュバント系と配合されることができる。従って、本発明の
配合物においては、上記アジュバント組成物が、Ｔｈ１性状を含む免疫応答を誘
発することが望ましい。
バントは、アルミニウム塩、例えば、水酸化アルミニウムのゲル又はリン酸アル
ミニウムを含むが、カルシウム、鉄又は亜鉛の塩であることも、又はアシル化チ
ロシン、又はアシル化糖、カチオン又はアニオン誘導体化多糖、又はポリホスフ
ァゼンの不溶性懸濁液であることもできる。有利には、高く精製されたＡ型肝炎
ウイルスは、強いアジュバント系と配合されることができる。従って、本発明の
配合物においては、上記アジュバント組成物が、Ｔｈ１性状を含む免疫応答を誘
発することが望ましい。
【００１３】 一般的な意味においては、Ｔｈ１−型応答は、サイトカイン、例えば、ＩＬ−
４，ＩＬ−５、及びＩＬ−１０の産生を特徴とするＴｈ２−型応答とは異なり、
ＩＦＮ−γの産生を特徴とする。体液性応答のアイソタイプ特性は、Ｔｈ１又は
Ｔｈ２−型応答のためのマーカーとして、使用されることもできる。マウスにお
いては、Ｔｈ１−型応答は、しばしば、ＩｇＧ２ａサブタイプの抗体の産生に関
係し、一方、ＩｇＧ１は、Ｔｈ２−型応答のマーカーである。この状況は、ヒト
においては明らかではないが、データは、ＩｇＧ１とＩｇＧ４がそれぞれＴｈ１
−とＴｈ２−型応答のマーカーであることができるであろうということを示唆し
ている。
４，ＩＬ−５、及びＩＬ−１０の産生を特徴とするＴｈ２−型応答とは異なり、
ＩＦＮ−γの産生を特徴とする。体液性応答のアイソタイプ特性は、Ｔｈ１又は
Ｔｈ２−型応答のためのマーカーとして、使用されることもできる。マウスにお
いては、Ｔｈ１−型応答は、しばしば、ＩｇＧ２ａサブタイプの抗体の産生に関
係し、一方、ＩｇＧ１は、Ｔｈ２−型応答のマーカーである。この状況は、ヒト
においては明らかではないが、データは、ＩｇＧ１とＩｇＧ４がそれぞれＴｈ１
−とＴｈ２−型応答のマーカーであることができるであろうということを示唆し
ている。
【００１４】 好適なアジュバント系は、例えば、モノホスホリル・リピドＡ、好ましくは、
３−０−脱アシル化モノホスホリル・リピドＡ（３Ｄ−ＭＰＬ）の併合物を含み
、そして好ましくは、アルミニウム塩とともに配合される。 強化系は、モノホスホリル・リピドＡとサポニン誘導体の併合物、好ましくは
、ＷＯ９４／００１５３中に開示されたような、ＱＳ２１と３Ｄ−ＭＰＬの併合
物、又はＱＳ２１がＷＯ９６／３３７３９中に開示されたようなコレステロール
でクエンチされているところのより反応原性の低い組成物を含む。
３−０−脱アシル化モノホスホリル・リピドＡ（３Ｄ−ＭＰＬ）の併合物を含み
、そして好ましくは、アルミニウム塩とともに配合される。 強化系は、モノホスホリル・リピドＡとサポニン誘導体の併合物、好ましくは
、ＷＯ９４／００１５３中に開示されたような、ＱＳ２１と３Ｄ−ＭＰＬの併合
物、又はＱＳ２１がＷＯ９６／３３７３９中に開示されたようなコレステロール
でクエンチされているところのより反応原性の低い組成物を含む。
【００１５】 油／水エマルジョン中に、ＱＳ２１，３Ｄ−ＭＰＬ、及びｄ，ｌ−アルファ−
トコフェロールを含む特に強力なアジュバントが、ＷＯ９５／１７２１０中に記
載されている。 包含されることができる他の知られたアジュバントは、例えば、ＷＯ９６／０
２５５５中に開示されたような、ＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドである。
トコフェロールを含む特に強力なアジュバントが、ＷＯ９５／１７２１０中に記
載されている。 包含されることができる他の知られたアジュバントは、例えば、ＷＯ９６／０
２５５５中に開示されたような、ＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドである。
【００１６】 従って、本発明の好ましい態様においては、モノホスホリル・リピドＡ又はそ
の誘導体により補強された、本発明に係るウイルスを含むワクチンが提供される
。 好ましくは、上記ワクチンは、さらに、サポニン、より好ましくは、ＱＳ２１
を含む。
の誘導体により補強された、本発明に係るウイルスを含むワクチンが提供される
。 好ましくは、上記ワクチンは、さらに、サポニン、より好ましくは、ＱＳ２１
を含む。
【００１７】 好ましくは、上記配合物は、さらに、油／水エマルジョン及びｄ，ｌ−アルフ
ァ−トコフェロールを含む。 本発明は、医薬として許容される賦形剤又は担体、例えば、３Ｄ−ＭＰＬと、
本発明に係る精製ウイルスを混合することを含む、ワクチン配合物の製法をも提
供する。
ァ−トコフェロールを含む。 本発明は、医薬として許容される賦形剤又は担体、例えば、３Ｄ−ＭＰＬと、
本発明に係る精製ウイルスを混合することを含む、ワクチン配合物の製法をも提
供する。
【００１８】 本発明の精製ウイルスは、有利には、それが、Ａ型肝炎感染に加えて他の疾患
の予防又は治療において有効であるように、他の抗原と併合されることができる
。好ましい併合は、Ｂ型肝炎抗原を含む併合を含む。 Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢS Ａｇ）の調製は、よく文書化されている。例えば、
Ｈａｒｆｏｌｄ ｅｔ ａｌ．ｉｎ Ｄｅｖｅｌｏｐ．Ｂｉｏｌ．Ｓｔａｎｄａ
ｒｄ ５４，ｐａｇｅ １２５（１９８３），Ｇｒｅｇｇ ｅｔ ａｌ．ｉｎ
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，５，ｐａｇｅ４７９（１９８７），ＥＰ−Ａ−０
２２６８４６，ＥＰ−Ａ−０２９９１０８、及びその文献中の引用文献を参照の
こと。
の予防又は治療において有効であるように、他の抗原と併合されることができる
。好ましい併合は、Ｂ型肝炎抗原を含む併合を含む。 Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢS Ａｇ）の調製は、よく文書化されている。例えば、
Ｈａｒｆｏｌｄ ｅｔ ａｌ．ｉｎ Ｄｅｖｅｌｏｐ．Ｂｉｏｌ．Ｓｔａｎｄａ
ｒｄ ５４，ｐａｇｅ １２５（１９８３），Ｇｒｅｇｇ ｅｔ ａｌ．ｉｎ
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，５，ｐａｇｅ４７９（１９８７），ＥＰ−Ａ−０
２２６８４６，ＥＰ−Ａ−０２９９１０８、及びその文献中の引用文献を参照の
こと。
【００１９】 本明細書中に使用するとき、表現“Ｂ型肝炎表面抗原”又は“ＨＢS Ａｇ”は
、ＨＢＶ表面抗原の抗原性を提示するいずれかのＨＢS Ａｇ抗原又はその断片を
含む。ＨＢS Ａｇ Ｓ抗原の２２６アミノ酸配列（Ｔｉｏｌｌａｉｓ ｅｔ ａ
ｌ，Ｎａｔｕｒｅ，３１７，４８９（１９８５）及びこの文献中の引用文献を参
照のこと）に加えて、本明細書中に記載するＨＢS Ａｇは、所望により、上記文
献及びＥＰ−Ａ−０２７８９４０中に記載されたようなプレ−Ｓ配列の全部又は
一部を含む。特に、ＨＢS Ａｇは、ａｄ血清型のＢ型肝炎ウイルス上のオープン
・リーディング・フレームに対して、ＨＢS ＡｇのＬ−タンパク質の残基１２〜
５２、その後の残基１３３−１４５、その後の残基１７５−４００を含むアミノ
酸を含むポリペプチド（このポリペプチドをＬ* という；ＥＰ０４１４３７４を
参照のこと。）を含むことができる。本発明の範囲内のＨＢS Ａｇは、ＥＰ０１
９８４７４（Ｅｎｄｏｔｒｏｎｉｃｓ）中に記載されたプレＳ１−プレＳ２ポリ
ペプチド又はそのアナログ、例えば、ＥＰ０３０４５７８（ＭｃＣｏｒｍｉｃｋ
ａｎｄ Ｊｏｎｅｓ）中に記載されたものをも含む。
、ＨＢＶ表面抗原の抗原性を提示するいずれかのＨＢS Ａｇ抗原又はその断片を
含む。ＨＢS Ａｇ Ｓ抗原の２２６アミノ酸配列（Ｔｉｏｌｌａｉｓ ｅｔ ａ
ｌ，Ｎａｔｕｒｅ，３１７，４８９（１９８５）及びこの文献中の引用文献を参
照のこと）に加えて、本明細書中に記載するＨＢS Ａｇは、所望により、上記文
献及びＥＰ−Ａ−０２７８９４０中に記載されたようなプレ−Ｓ配列の全部又は
一部を含む。特に、ＨＢS Ａｇは、ａｄ血清型のＢ型肝炎ウイルス上のオープン
・リーディング・フレームに対して、ＨＢS ＡｇのＬ−タンパク質の残基１２〜
５２、その後の残基１３３−１４５、その後の残基１７５−４００を含むアミノ
酸を含むポリペプチド（このポリペプチドをＬ* という；ＥＰ０４１４３７４を
参照のこと。）を含むことができる。本発明の範囲内のＨＢS Ａｇは、ＥＰ０１
９８４７４（Ｅｎｄｏｔｒｏｎｉｃｓ）中に記載されたプレＳ１−プレＳ２ポリ
ペプチド又はそのアナログ、例えば、ＥＰ０３０４５７８（ＭｃＣｏｒｍｉｃｋ
ａｎｄ Ｊｏｎｅｓ）中に記載されたものをも含む。
【００２０】 本明細書中に記載するとき、ＨＢS Ａｇは、突然変異体、例えば、ＷＯ９１／
１４７０３又はＥＰ０５１１８５５Ａ１中に記載された“逸脱（ｅｓｃａｐｅ）
空然変異体”、特に、１４５位においてグリシンからアルギニンへのアミノ酸置
換が存在するところのＨＢS Ａｇをもいう。 通常、上記ＨＢS Ａｇは粒子形態になるであろう。この粒子は、例えば、Ｓタ
ンパク質だけを含むことができるし、又は複合粒子、例えば、（Ｌ* ，Ｓ）｛こ
こで、Ｌ* は先に定義したものと同じであり、そしてＳはＨＢS ＡｇのＳ−プロ
テインを表す。｝であることができる。上記粒子は、有利には、それが酵母内で
発現されるところの形態である。
１４７０３又はＥＰ０５１１８５５Ａ１中に記載された“逸脱（ｅｓｃａｐｅ）
空然変異体”、特に、１４５位においてグリシンからアルギニンへのアミノ酸置
換が存在するところのＨＢS Ａｇをもいう。 通常、上記ＨＢS Ａｇは粒子形態になるであろう。この粒子は、例えば、Ｓタ
ンパク質だけを含むことができるし、又は複合粒子、例えば、（Ｌ* ，Ｓ）｛こ
こで、Ｌ* は先に定義したものと同じであり、そしてＳはＨＢS ＡｇのＳ−プロ
テインを表す。｝であることができる。上記粒子は、有利には、それが酵母内で
発現されるところの形態である。
【００２１】 本発明は、さらなる局面において、医学療法における使用のために、特に、肝
炎ウイルス感染の治療又は予防における使用のために、本明細書中に記載するよ
うなワクチン配合物を提供する。好ましい局面においては、本発明に係るワクチ
ンは、進行性の肝炎感染、より特にそれを患うヒトにおけるＡ型肝炎及び／又は
Ｂ型肝炎感染のために有用である治療用ワクチンである。
炎ウイルス感染の治療又は予防における使用のために、本明細書中に記載するよ
うなワクチン配合物を提供する。好ましい局面においては、本発明に係るワクチ
ンは、進行性の肝炎感染、より特にそれを患うヒトにおけるＡ型肝炎及び／又は
Ｂ型肝炎感染のために有用である治療用ワクチンである。
【００２２】 得られた驚くべき有効な結果に照らして、さらに好ましい局面においては、本
発明は、Ａ型肝炎及び／又はＢ型肝炎感染の治療又は予防のためのワクチン製剤
を提供する。 有利には、本発明の肝炎ワクチン製剤は、それが１以上の他のバクテリア、ウ
イルス又は真菌（ｆｕｎｇａｌ）感染の治療又は予防において有効であるように
、他の抗原を含む。
発明は、Ａ型肝炎及び／又はＢ型肝炎感染の治療又は予防のためのワクチン製剤
を提供する。 有利には、本発明の肝炎ワクチン製剤は、それが１以上の他のバクテリア、ウ
イルス又は真菌（ｆｕｎｇａｌ）感染の治療又は予防において有効であるように
、他の抗原を含む。
【００２３】 従って、本発明に係る肝炎ワクチン配合物は、好ましくは、以下の疾患： ジフテリア、破傷風、百日咳、ヘモフィルス・インフルエンザ（Ｈａｅｍｏｐ
ｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ ｂ）（Ｈｉｂ）、及びポリオ、の中の１以
上に対して保護を与えるために、本分野において知られた非肝炎抗原から選ばれ
ることができる少なくとも１の他の成分を含む。
ｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ ｂ）（Ｈｉｂ）、及びポリオ、の中の１以
上に対して保護を与えるために、本分野において知られた非肝炎抗原から選ばれ
ることができる少なくとも１の他の成分を含む。
【００２４】 好ましくは、本発明に係るワクチンは、先に定義したようなＨＢS Ａｇを含む
。 上記併合ワクチンにおける使用のために好適な成分は、既に商業的に入手でき
、そして詳細は、世界保健機構から得られることができる。例えば、ポリオ成分
は、Ｓａｌｋ失活ポリオ・ワクチン（ＩＰＶ）であることができる。百日咳ワク
チン成分は、全細胞又は無細胞製品を含むことができる。
。 上記併合ワクチンにおける使用のために好適な成分は、既に商業的に入手でき
、そして詳細は、世界保健機構から得られることができる。例えば、ポリオ成分
は、Ｓａｌｋ失活ポリオ・ワクチン（ＩＰＶ）であることができる。百日咳ワク
チン成分は、全細胞又は無細胞製品を含むことができる。
【００２５】 有利には、本発明に係る肝炎又は併合ワクチンは、小児ワクチン又は青年期ワ
クチンである。 青年用途のための好ましい本発明に係る併合ワクチンは、以下の疾患： ヒト乳頭腫ウイルス（ＨＰＶ）、単純ヘルペス・ウイルス（ＨＳＶ）、エプス
タイン・バール・ウイルス（ＥＢＶ）、水疱瘡ウイルス（ＶＺＶ）、ヒト・Ｈイ
トメガロウイルス（ＨＣＭＶ）、トキソプラズマ・ゴンジイ（Ｔｏｘｏｐｌａｓ
ｍａ ｇａｎｄｉｉ）、の中の１以上に対し保護を提供することが、本分野にお
いて知られている抗原から選ばれる１以上の成分を含む。
クチンである。 青年用途のための好ましい本発明に係る併合ワクチンは、以下の疾患： ヒト乳頭腫ウイルス（ＨＰＶ）、単純ヘルペス・ウイルス（ＨＳＶ）、エプス
タイン・バール・ウイルス（ＥＢＶ）、水疱瘡ウイルス（ＶＺＶ）、ヒト・Ｈイ
トメガロウイルス（ＨＣＭＶ）、トキソプラズマ・ゴンジイ（Ｔｏｘｏｐｌａｓ
ｍａ ｇａｎｄｉｉ）、の中の１以上に対し保護を提供することが、本分野にお
いて知られている抗原から選ばれる１以上の成分を含む。
【００２６】 上記ワクチン投与量中の各抗原の量は、典型的なワクチン接種を受けた者にお
いて有意な有害副作用を伴わずに免疫保護応答を誘導する量として選ばれる。こ
のような量は、どの特異的免疫原が使用されるかということに依存して変化する
であろう。一般に、各投与は、Ａ型肝炎のために投与当り０．１〜１．０μｇの
タンパク質、最も好ましくは、０．０６〜０．２２０μｇタンパク質／投与を含
むであろうと予想される。Ａ型肝炎以外の抗原、例えば、ＨＢS Ａｇ、ＨＳＶ、
等のためには、投与当りのタンパク質の量は、より高く、例えば、約２０μｇ／
投与までであることができる。特別なワクチンのための１以上の免疫原のそれぞ
れの最適量は、被験体（患者 ｓｕｂｊｅｃｔｓ）における抗体力価及び／又は
他の応答の観察を含む標準的な試験により確められることができる。最初のワク
チン接種後、被験体は、約４週間以内にブーストを受容することができる。
いて有意な有害副作用を伴わずに免疫保護応答を誘導する量として選ばれる。こ
のような量は、どの特異的免疫原が使用されるかということに依存して変化する
であろう。一般に、各投与は、Ａ型肝炎のために投与当り０．１〜１．０μｇの
タンパク質、最も好ましくは、０．０６〜０．２２０μｇタンパク質／投与を含
むであろうと予想される。Ａ型肝炎以外の抗原、例えば、ＨＢS Ａｇ、ＨＳＶ、
等のためには、投与当りのタンパク質の量は、より高く、例えば、約２０μｇ／
投与までであることができる。特別なワクチンのための１以上の免疫原のそれぞ
れの最適量は、被験体（患者 ｓｕｂｊｅｃｔｓ）における抗体力価及び／又は
他の応答の観察を含む標準的な試験により確められることができる。最初のワク
チン接種後、被験体は、約４週間以内にブーストを受容することができる。
【００２７】 本発明のさらなる局面においては、肝炎感染の予防又は治療において有効なワ
クチンの製法であって、本明細書中に定義するような肝炎抗原をＭＰＬ又はその
誘導体と混合することを含む、前記製法が提供される。 上記方法を用いて、１以上の追加の成分が、好ましくは、失活Ａ型肝炎ワクチ
ンと混合されて、併合ワクチンが提供される。
クチンの製法であって、本明細書中に定義するような肝炎抗原をＭＰＬ又はその
誘導体と混合することを含む、前記製法が提供される。 上記方法を用いて、１以上の追加の成分が、好ましくは、失活Ａ型肝炎ワクチ
ンと混合されて、併合ワクチンが提供される。
【００２８】 以下の実施例は、本発明とその利点を説明する。実施例 実施例１ ａ）精製ステップ 本実施例中に与える一連のステップを、本発明に係る方法に従うが、常に、ト
リプシン又は他のプロテアーゼ消化ステップを含んで、異なる組合せにおいて、
行うことができる。
リプシン又は他のプロテアーゼ消化ステップを含んで、異なる組合せにおいて、
行うことができる。
【００２９】 培養及び収獲 Ａ型肝炎ウイルスＨＭ１７５を、ＭＲＣ５細胞（Ａｎｄｒｅ ｅｔ ａｌ．前
掲）上で培養し、そしてそのウイルスを、上記細胞層の洗浄後に収獲して、成長
培地中で使用した血清を除去する。凍結／解凍後、界面活性剤（Ｔｗｅｅｎ２０
（商標））を添加して、上記細胞死骸から上記ウイルスを抽出する。細胞死骸を
、０．２２μｍ膜を通した濾過により、除去する。濾液をさらに限外濾過にかけ
る。得られた濃縮物は、最終的に、１〜２時間、５〜１０，０００xgにおける遠
心分離により清澄化されることができる。
掲）上で培養し、そしてそのウイルスを、上記細胞層の洗浄後に収獲して、成長
培地中で使用した血清を除去する。凍結／解凍後、界面活性剤（Ｔｗｅｅｎ２０
（商標））を添加して、上記細胞死骸から上記ウイルスを抽出する。細胞死骸を
、０．２２μｍ膜を通した濾過により、除去する。濾液をさらに限外濾過にかけ
る。得られた濃縮物は、最終的に、１〜２時間、５〜１０，０００xgにおける遠
心分離により清澄化されることができる。
【００３０】 トリプシン処理 上記ＨＡＶウイルスを含有する濃縮物を、ブタの膵臓から抽出した精製トリプ
シンで処理する。使用したトリプシンを２回結晶化し、そして使用前に凍結を保
った。トリプシンの添加前、上記濃縮物を、一定の撹拌の下、３７℃で前もって
温める。次に、トリプシンを、濃縮物１ml当り４４０IUの比で添加し、そしてそ
の混合物を、３７℃で、最短で２時間（最長で２．５時間）緩やかに撹拌する。
シンで処理する。使用したトリプシンを２回結晶化し、そして使用前に凍結を保
った。トリプシンの添加前、上記濃縮物を、一定の撹拌の下、３７℃で前もって
温める。次に、トリプシンを、濃縮物１ml当り４４０IUの比で添加し、そしてそ
の混合物を、３７℃で、最短で２時間（最長で２．５時間）緩やかに撹拌する。
【００３１】 濃縮 トリプシン処理の後、上記産物を、その容量を減少させるために限外濾過装置
上で周囲温度で直ちに処理することができる。使用した膜は３０，０００ダルト
ンの名目カット−オフをもつ再生セルロースであり、そして膜１cm2 当り最大８
mlまでのトリプシン処理産物を、０．２〜０．６バールの間の経膜圧で処理して
、８〜１２の目の濃縮率を達成する。
上で周囲温度で直ちに処理することができる。使用した膜は３０，０００ダルト
ンの名目カット−オフをもつ再生セルロースであり、そして膜１cm2 当り最大８
mlまでのトリプシン処理産物を、０．２〜０．６バールの間の経膜圧で処理して
、８〜１２の目の濃縮率を達成する。
【００３２】 パーミエーション・クロマトグラフィー このステップの目的は、無傷のＨＡＶウイルスからタンパク質を分離すること
である。トリプシン処理後にパーミエーション・クロマトグラフィー・ステップ
が行れるとき、条件は、残存トリプシンをも除去するように適合されなければな
らない。使用された分離ゲルは、Ｐｅｒｍｅａｔｉｏｎ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ
４ＢＦＦである。
である。トリプシン処理後にパーミエーション・クロマトグラフィー・ステップ
が行れるとき、条件は、残存トリプシンをも除去するように適合されなければな
らない。使用された分離ゲルは、Ｐｅｒｍｅａｔｉｏｎ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ
４ＢＦＦである。
【００３３】 上記ウイルスは、（カラムの全容量に近い）より大きな保持容量を用いて溶出
されるより小さなタンパク質断片よりも、より小さな保持容量で、溶出される。 クロマトグラフィー・パラメーターは以下のようである： クロマトグラフィー材：（Ｐｈａｒｍａｃｉａからの）Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４ＢＦＦ インジェクト容量：ゲル容量の１〜５％ 溶出速度：５〜１０cm／時間 温度：１０〜１６℃ 画分のプール：標的１００ngプロット／７２０Ｅｌｉｓａ単位（＋／−１０
％） イオン交換 この精製ステップの目的は、（ＭＲＣ５細胞に起源をもつ）ＤＮＡ含量を低下
させることである。このステップを、バッチ原理に従って走らせる。
されるより小さなタンパク質断片よりも、より小さな保持容量で、溶出される。 クロマトグラフィー・パラメーターは以下のようである： クロマトグラフィー材：（Ｐｈａｒｍａｃｉａからの）Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４ＢＦＦ インジェクト容量：ゲル容量の１〜５％ 溶出速度：５〜１０cm／時間 温度：１０〜１６℃ 画分のプール：標的１００ngプロット／７２０Ｅｌｉｓａ単位（＋／−１０
％） イオン交換 この精製ステップの目的は、（ＭＲＣ５細胞に起源をもつ）ＤＮＡ含量を低下
させることである。このステップを、バッチ原理に従って走らせる。
【００３４】 先のクロマトグラフィ・ステップからのプールを、０．３Ｍ ＮａＣｌに調整
し、そして次に室温で１時間（最長１．５時間）緩かに撹拌しながらイオン交換
樹脂と混合する。 ＤＮＡ固定の後、上記ゲルを濾過により除去する。次に、固定されていないＨ
ＡＶウイルス懸濁液を、そのＮａＣｌ濃度を１５０mMに調整するように希釈する
。あるいは、このイオン交換精製ステップは、カラム・クロマトグラフィーによ
り行われることもできる。
し、そして次に室温で１時間（最長１．５時間）緩かに撹拌しながらイオン交換
樹脂と混合する。 ＤＮＡ固定の後、上記ゲルを濾過により除去する。次に、固定されていないＨ
ＡＶウイルス懸濁液を、そのＮａＣｌ濃度を１５０mMに調整するように希釈する
。あるいは、このイオン交換精製ステップは、カラム・クロマトグラフィーによ
り行われることもできる。
【００３５】 最終的に精製された産物を、０．２２μｍフィルター上で滅菌濾過する。クロ
マトグラフィー・パラメーターは以下のようなものである： 供給：上記プールの容量に対して３％のゲル（容量／容量） 温度：周囲 失活を、Ａｎｄｒｅ ｅｔ ａｌ．中に記載されたように行う。但し、２５０
μｇ／mlのホルモールを使用する。
マトグラフィー・パラメーターは以下のようなものである： 供給：上記プールの容量に対して３％のゲル（容量／容量） 温度：周囲 失活を、Ａｎｄｒｅ ｅｔ ａｌ．中に記載されたように行う。但し、２５０
μｇ／mlのホルモールを使用する。
【００３６】 ホルムアルデヒド低下 上記失活の終わり後４８時間以内に、そのホルムアルデヒド含量を低下させ、
そしてアルミニウム塩（好ましくは、水酸化アルミニウム又はリン酸アルミニウ
ム）上に事前吸着させるために、上記産物をダイアフィルトレートし、そして濃
縮する。
そしてアルミニウム塩（好ましくは、水酸化アルミニウム又はリン酸アルミニウ
ム）上に事前吸着させるために、上記産物をダイアフィルトレートし、そして濃
縮する。
【００３７】 使用前に、完全限外濾過装置を、少なくとも３０分間、０．１Ｎ ＮａＯＨを
用いて除菌する。次に、この装置を、ダイアフィルトレーション・バッファーで
十分に濯ぎ、そしてその膜を、アミノ酸含有バッファー（Ｔｒａｖａｓｏｌ）で
被覆する。最終的に、この装置を、ダイアフィルトレーション・バッファーで濯
ぐ。
用いて除菌する。次に、この装置を、ダイアフィルトレーション・バッファーで
十分に濯ぎ、そしてその膜を、アミノ酸含有バッファー（Ｔｒａｖａｓｏｌ）で
被覆する。最終的に、この装置を、ダイアフィルトレーション・バッファーで濯
ぐ。
【００３８】 ダイアフィルトレーション及び濃縮の後、最終生成物を０．２２μｍフィルタ
ー上で滅菌濾過する。 ｂ）精製スキーム 上記の精製ステップを、純粋な生成物が経済的なやり方で得られるような方法
で、併合した。２つのこのような精製スキームを、スキーム１に示す。この両者
が類似の生成物を作り出す。スキーム１に示すようなステップの１の形態（ｃｏ
ｎｆｉｇｕｒａｔｉｏｎ）においては、上記ステップを実施例１ａ中に記載する
順番で行い、そして他の形態においては、上記トリプシン・ステップを、上記限
外濾過ステップと第１のパーミエーション・クロマトグラフィー・ステップの間
で行った。これは、第２のパーミエーション・クロマトグラフィー・ステップが
省略されることができるということを意味する。実施例２−特徴付け 精製された産物のサンプルを、ＳＤＳ ＰＡＧＥ（１２．５％アクリルアミド
、スタッキング・ゲル中１％ＳＤＳ、４０〜５０ボルトで１５時間の移動）によ
り分析した。このゲルを、ＡｇＮＯ3 で染色し、そしてその色を、１０〜２０分
間、発色させ、そして伝統的なＨＡＶプロセス（Ａｎｄｒｅ ｅｔ ａｌ．）と
比較した。
ー上で滅菌濾過する。 ｂ）精製スキーム 上記の精製ステップを、純粋な生成物が経済的なやり方で得られるような方法
で、併合した。２つのこのような精製スキームを、スキーム１に示す。この両者
が類似の生成物を作り出す。スキーム１に示すようなステップの１の形態（ｃｏ
ｎｆｉｇｕｒａｔｉｏｎ）においては、上記ステップを実施例１ａ中に記載する
順番で行い、そして他の形態においては、上記トリプシン・ステップを、上記限
外濾過ステップと第１のパーミエーション・クロマトグラフィー・ステップの間
で行った。これは、第２のパーミエーション・クロマトグラフィー・ステップが
省略されることができるということを意味する。実施例２−特徴付け 精製された産物のサンプルを、ＳＤＳ ＰＡＧＥ（１２．５％アクリルアミド
、スタッキング・ゲル中１％ＳＤＳ、４０〜５０ボルトで１５時間の移動）によ
り分析した。このゲルを、ＡｇＮＯ3 で染色し、そしてその色を、１０〜２０分
間、発色させ、そして伝統的なＨＡＶプロセス（Ａｎｄｒｅ ｅｔ ａｌ．）と
比較した。
【００３９】 図２と図３から分かるように、上記産物をプロテアーゼ処理に供することによ
り、高分子量汚染物のほとんどが除去される。実施例３−ＨＡＶワクチン配合物 ３．１ ＨＡＶ−アルミニウム（ａｌｕｍ）３Ｄ−ＭＰＬ 実施例１のＨＡＶ粒子を、まず、水酸化アルミニウム（Ｓｕｐｅｒｆｏｓ）に
吸着させ、その後、遊離の３Ｄ−ＭＰＬを添加する。０．５ml投与量７２０ＥＬ
ＵのＡ型肝炎ウイルス粒子／０．０２５mgＡｌ3+イオン、及び５０μｇの３Ｄ−
ＭＰＬ。 ３．２ ＨＡＶ＋ＨｂS Ａｇ配合物 以下の配合物を作った：
り、高分子量汚染物のほとんどが除去される。実施例３−ＨＡＶワクチン配合物 ３．１ ＨＡＶ−アルミニウム（ａｌｕｍ）３Ｄ−ＭＰＬ 実施例１のＨＡＶ粒子を、まず、水酸化アルミニウム（Ｓｕｐｅｒｆｏｓ）に
吸着させ、その後、遊離の３Ｄ−ＭＰＬを添加する。０．５ml投与量７２０ＥＬ
ＵのＡ型肝炎ウイルス粒子／０．０２５mgＡｌ3+イオン、及び５０μｇの３Ｄ−
ＭＰＬ。 ３．２ ＨＡＶ＋ＨｂS Ａｇ配合物 以下の配合物を作った：
【００４０】
【化１】
【００４１】 群１において、個々の抗原を、ＨＡ，０．４７５mg Ａ１３＋イオン（ＡｌＰ
Ｏ4 Ｓｕｐｅｒ ｆｏｓ型）について、アルミニウム塩０．０２５mg Ａｌ3+イ
オン（Ａｌ（ＯＨ)3Ｓｕｐｅｒｆｏｓ）に吸着させた。群２と５においては、５
０μｇ／投与の遊離３Ｄ−ＭＰＬを、肝炎Ｓ抗原に添加し、それに上記の吸着さ
れたＡ型肝炎成分を添加した。群３と４においては、３Ｄ−ＭＰＬを、別々に上
記アルミニウム塩に吸着させ、そして次に上記３つの吸着された成分を互いに混
合せた。実施例４−免疫原性実験 Ｂａｌｂ／Ｃマウス １０匹のマウスからなる群を、ＨＡＶ／ＨＢS 配合物（１／１０ＨＤ）で２週
間間隔で３回筋中、免疫感作させた。ＨｂS に対する抗体応答を、IIに後（ｐｏ
ｓｔII）１４日目に、そしてIII の後１４日目に、ＥＬＩＳＡによりモニターし
た。抗−ＨＢS 応答のアイソタイプ特性を、IIの後１４日目に分析した。ＨＡＶ
に対する抗体応答をIII の後１４日目にモニターした。
Ｏ4 Ｓｕｐｅｒ ｆｏｓ型）について、アルミニウム塩０．０２５mg Ａｌ3+イ
オン（Ａｌ（ＯＨ)3Ｓｕｐｅｒｆｏｓ）に吸着させた。群２と５においては、５
０μｇ／投与の遊離３Ｄ−ＭＰＬを、肝炎Ｓ抗原に添加し、それに上記の吸着さ
れたＡ型肝炎成分を添加した。群３と４においては、３Ｄ−ＭＰＬを、別々に上
記アルミニウム塩に吸着させ、そして次に上記３つの吸着された成分を互いに混
合せた。実施例４−免疫原性実験 Ｂａｌｂ／Ｃマウス １０匹のマウスからなる群を、ＨＡＶ／ＨＢS 配合物（１／１０ＨＤ）で２週
間間隔で３回筋中、免疫感作させた。ＨｂS に対する抗体応答を、IIに後（ｐｏ
ｓｔII）１４日目に、そしてIII の後１４日目に、ＥＬＩＳＡによりモニターし
た。抗−ＨＢS 応答のアイソタイプ特性を、IIの後１４日目に分析した。ＨＡＶ
に対する抗体応答をIII の後１４日目にモニターした。
【００４２】 ＮＭＲＩマウス １０匹のマウスからなる群を、ＨＡＶ／ＨＢS 配合物（１／２ＨＤ）で１回腹
腔内に免疫感作させた。ＨｂS とＨＡＶに対する抗体応答を、注射後２８日目に
ＥＬＩＳＡによりモニターした。
腔内に免疫感作させた。ＨｂS とＨＡＶに対する抗体応答を、注射後２８日目に
ＥＬＩＳＡによりモニターした。
【００４３】
【表１】
【００４４】 ＨＡＶマウス血清学 抗−Ａ型肝炎ウイルス抗原（ＨＡＶ）抗体の定量を、ＢｅｈｒｉｎｇからのＥ
ｎｚｙｇｎｏｓｔキット（ｒｅｆ：ＯＱＥＣ１１）を用いて行った。このアッセ
イは、競合テスト原理に基づくＥＬＩＳＡであり、１ステップで走らせられ、そ
して最初に、ヒト血清学のために開発された。
ｎｚｙｇｎｏｓｔキット（ｒｅｆ：ＯＱＥＣ１１）を用いて行った。このアッセ
イは、競合テスト原理に基づくＥＬＩＳＡであり、１ステップで走らせられ、そ
して最初に、ヒト血清学のために開発された。
【００４５】 マウス血清（１／１０から出発する４希釈）、（８０ mIU／mlから出発する８
希釈）、及び対照の２倍希釈を、抗−ＨＡＶ陰性ヒト血清中で行った。テスト／
対照サンプル（２５μｌ）、ＨＡＶ抗原溶液（５０μｌ）、及びペルオキシダー
ゼと結合した抗−ＨＡＶマウス・モノクローナル（コンジュゲート・バッファー
中で行われた１／４１希釈の５０μｌ）の混合物を、３７℃で２時間、ＨＡＶプ
レ−コートされたマイクロプレート上でインキュベートした。次に、このプレー
トを洗浄し、そしてＴＭＢの溶液（１００μｌ）で３０分間インキュベートした
。この反応を、Ｈ2 ＳＯ4 ０．５Ｎで停止させ、そして４５０／６２０nmで読ん
だ。
希釈）、及び対照の２倍希釈を、抗−ＨＡＶ陰性ヒト血清中で行った。テスト／
対照サンプル（２５μｌ）、ＨＡＶ抗原溶液（５０μｌ）、及びペルオキシダー
ゼと結合した抗−ＨＡＶマウス・モノクローナル（コンジュゲート・バッファー
中で行われた１／４１希釈の５０μｌ）の混合物を、３７℃で２時間、ＨＡＶプ
レ−コートされたマイクロプレート上でインキュベートした。次に、このプレー
トを洗浄し、そしてＴＭＢの溶液（１００μｌ）で３０分間インキュベートした
。この反応を、Ｈ2 ＳＯ4 ０．５Ｎで停止させ、そして４５０／６２０nmで読ん
だ。
【００４６】 抗−ＨＡＶ抗体力価を、（４つのパラメーターの等式を用いて）Ｓｏｆｔｍａ
ｘＰｒｏにより上記文献から計算し、そして mIU／mlで表す。 結果 上記結果を図１に示す。 図１の中、結果は、ＭＰＬを含有する配合物が、アルミニウム塩群単独よりも
、有意に高い、Ａ型肝炎成分に対する抗体応答を誘発するということを表す。同
様に、図１ｂ中に示す結果は、ＭＰＬ含有配合物が、ＨｂS Ａｇに対する高い抗
体力価を誘発することを表す。実施例５−臨床試験 ＨＡＶ／ＨＢS(ＨＡＢ）配合物を、健康な被験体に投与した。
ｘＰｒｏにより上記文献から計算し、そして mIU／mlで表す。 結果 上記結果を図１に示す。 図１の中、結果は、ＭＰＬを含有する配合物が、アルミニウム塩群単独よりも
、有意に高い、Ａ型肝炎成分に対する抗体応答を誘発するということを表す。同
様に、図１ｂ中に示す結果は、ＭＰＬ含有配合物が、ＨｂS Ａｇに対する高い抗
体力価を誘発することを表す。実施例５−臨床試験 ＨＡＶ／ＨＢS(ＨＡＢ）配合物を、健康な被験体に投与した。
【００４７】 抗−ＨＡＶ抗体の血清力価を、ＥＬＩＳＡ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎ
ｈｅｉｍからのＥｎｚｙｍｕｎテスト）により計測し、そして抗−ＨＢS 抗体の
血清力価を、テスト・キットＡＵＳＡＢ−Ａｂｂｏｔｔを用いたラジオイムノア
ッセイ（ＲＩＡ）により計測した。抗−ＨＡＶ抗体についての上記アッセイのカ
ット−オフは３３ mIU／mlであり、そして抗−ＨＢS 抗体についての上記アッセ
イのカット−オフは１ mIU／mlであった。
ｈｅｉｍからのＥｎｚｙｍｕｎテスト）により計測し、そして抗−ＨＢS 抗体の
血清力価を、テスト・キットＡＵＳＡＢ−Ａｂｂｏｔｔを用いたラジオイムノア
ッセイ（ＲＩＡ）により計測した。抗−ＨＡＶ抗体についての上記アッセイのカ
ット−オフは３３ mIU／mlであり、そして抗−ＨＢS 抗体についての上記アッセ
イのカット−オフは１ mIU／mlであった。
【００４８】 ３３ mIU／mlの抗−ＨＡＶ抗体力価をもつ被験体を、抗−ＨＡＶ抗体について
血清陽性であると考えた。１ mIU／mlの抗−ＨＢS 抗体力価をもつ被験体を、抗
−ＨＢS 抗体について血清陽性であると考えた。抗−ＨＢS についての血清保護
率を、１０ mIU／mlの抗−ＨＢS 力価をもつ被験体の割合として定義した。
血清陽性であると考えた。１ mIU／mlの抗−ＨＢS 抗体力価をもつ被験体を、抗
−ＨＢS 抗体について血清陽性であると考えた。抗−ＨＢS についての血清保護
率を、１０ mIU／mlの抗−ＨＢS 力価をもつ被験体の割合として定義した。
【００４９】
【表２】 結果： ＨＡＢ／ＭＰＬが健康な被験体に投与されるところの上記フェーズＩ臨床試験
においては、免疫応答の際に免疫刺激剤として働くＭＰＬの顕著な効果が存在す
る。
においては、免疫応答の際に免疫刺激剤として働くＭＰＬの顕著な効果が存在す
る。
【００５０】 ＭＰＬは、抗−ＨＡＶ動態に対して明らかな効果をもつ。それは、６．５ヶ月
目及び７ヶ月目（すなわち、最後のワクチン投与後、それぞれ、１４と３０日後
）に観察される顕著な既往反応をもつ、より速く、かつ、強い免疫応答を誘発す
る。 この試験の制限内で、上記候補ＨＡＢ／ＭＰＬワクチンは、ひじょうに良好な
安全性及び反応原性特性を示したと結論することができる。１８〜４０歳の健康
な成人の試験群における２投与からなるワクチン接種の全経過の後、それはひじ
ょうに免疫原性であった。両Ａ型肝炎抗原とＢ型肝炎抗原に対する強いプライミ
ング及びより速い免疫応答が存在した。
目及び７ヶ月目（すなわち、最後のワクチン投与後、それぞれ、１４と３０日後
）に観察される顕著な既往反応をもつ、より速く、かつ、強い免疫応答を誘発す
る。 この試験の制限内で、上記候補ＨＡＢ／ＭＰＬワクチンは、ひじょうに良好な
安全性及び反応原性特性を示したと結論することができる。１８〜４０歳の健康
な成人の試験群における２投与からなるワクチン接種の全経過の後、それはひじ
ょうに免疫原性であった。両Ａ型肝炎抗原とＢ型肝炎抗原に対する強いプライミ
ング及びより速い免疫応答が存在した。
【００５１】
【表３】
【００５２】
【表４】
【００５３】
【表５】
【００５４】
【表６】
Claims (16)
- 【請求項１】 宿主細胞汚染物を実質的に含まない失活Ａ型肝炎ウイルスの
製法であって： ａ）Ａ型肝炎ウイルスを培養し、そしてＡ型肝炎調製物を収獲し、 ｂ）上記Ａ型肝炎調製物をプロテアーゼで処理し、その後、 ｃ）無傷のウイルスを、プロテアーゼ消化タンパク質から分離し、そして ｄ）上記ウイルスを失活させる、 を含む前記製法。 - 【請求項２】 前記Ａ型肝炎ウイルスがＨＭ−１７５株由来である、請求項
１に記載の製法。 - 【請求項３】 前記プロテアーゼがトリプシンである、請求項１又は２に記
載の製法。 - 【請求項４】 前記パートｃ）が、パーミエーション（ｐｅｒｍｅａｔｉｏ
ｎ）クロマトグラフィー・ステップを含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載
の製法。 - 【請求項５】 プロテアーゼ消化後にイオン交換ステップをさらに含む、請
求項１〜４のいずれか１項に記載の製法。 - 【請求項６】 請求項１〜５のいずれか１項に記載の製法により得られた失
活Ａ型肝炎ウイルス。 - 【請求項７】 宿主細胞汚染物を実質的に含まない失活Ａ型肝炎ウイルス調
製物。 - 【請求項８】 ＳＤＳ ＰＡＧＥをスキャンすることにより検出することが
できる、１０％未満の又は８％未満の又は５％未満の汚染性宿主細胞タンパク質
を含む、請求項７に記載の失活Ａ型肝炎ウイルス。 - 【請求項９】 請求項６〜８のいずれか１項に記載の失活Ａ型肝炎ウイルス
を含むＡ型肝炎ワクチン。 - 【請求項１０】 Ｔｈ１−タイプ誘発性アジュバントと配合された、請求項
９に記載のワクチン。 - 【請求項１１】 前記アジュバントが、モノホスホリル・リピドＡ又はその
誘導体を含む、請求項１０に記載のワクチン。 - 【請求項１２】 ＱＳ２１をさらに含む、請求項１１に記載のワクチン。
- 【請求項１３】 油／水エマルジョン及びトコフェロールをさらに含む、請
求項１２に記載のワクチン。 - 【請求項１４】 Ｂ型肝炎抗原をさらに含む、請求項９〜１３のいずれか１
項に記載のワクチン。 - 【請求項１５】 非肝炎抗原をさらに含む、請求項９〜１４のいずれか１項
に記載のワクチン。 - 【請求項１６】 Ａ型肝炎ワクチンの製法であって、請求項６〜８のいずれ
か１項に記載の失活Ａ型肝炎ウイルスの調製物を、医薬として許容される担体と
混合することを含む、前記製法。
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|---|---|---|---|
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|---|---|
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| WO2005070454A2 (en) * | 2004-01-27 | 2005-08-04 | Bharat Biotech International Limited | A novel process of hepatitis a vaccine preparation |
| KR20070110513A (ko) * | 2005-02-16 | 2007-11-19 | 노바티스 백신즈 앤드 다이아그노스틱스 인코포레이티드 | 알루미늄 포스페이트 및 3ｄ－ｍｐｌ을 포함하는 보조약조성물 |
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| WO2011005772A1 (en) | 2009-07-06 | 2011-01-13 | Variation Biotechnologies, Inc. | Methods for preparing vesicles and formulations produced therefrom |
| BR112013000394B8 (pt) | 2010-07-06 | 2022-01-18 | Variation Biotechnologies Inc | Composição imunogênica, uso da mesma e método para preparar a referida composição |
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| CN104302323A (zh) | 2012-01-12 | 2015-01-21 | 变异生物技术公司 | 用于治疗病毒感染的组合物和方法 |
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| EP3695849A1 (en) * | 2019-02-13 | 2020-08-19 | Mediagnost Gesellschaft für Forschung und Herstellung von Diagnostika GmbH | Method for extracting hepatitis a virus (hav) antigen from cell culture |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH01279842A (ja) * | 1988-04-28 | 1989-11-10 | Chemo Sero Therapeut Res Inst | Ａ型及びｂ型肝炎混合アジュバントワクチン |
| US5268292A (en) * | 1988-06-27 | 1993-12-07 | Robertson Betty H | Reproducible generation of high yields of hepatitis A virus by cell culture |
| JPH07505372A (ja) * | 1992-03-27 | 1995-06-15 | スミスクライン・ビーチャム・バイオロジカルス（ソシエテ・アノニム） | ３−ｏ−脱アシル化モノホスホリル脂質ａ含有の肝炎ワクチン |
| JPH09506887A (ja) * | 1993-12-23 | 1997-07-08 | スミスクライン・ビーチャム・バイオロジカルス （ソシエテ・アノニム） | ワクチン |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| US4702909A (en) | 1982-05-05 | 1987-10-27 | Louisiana State University A & M | Non-A, non-B hepatitis antigen, antigen compositions, vaccine and diagnostic reagent |
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| ES2162139T5 (es) | 1993-03-23 | 2008-05-16 | Smithkline Beecham Biologicals S.A. | Composiciones de vacuna que contienen monofosforil-lipido a 3-o-desacilado. |
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- 1998-10-16 GB GB9822714A patent/GB9822714D0/en not_active Ceased
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1999
- 1999-10-08 JP JP2000577285A patent/JP4523164B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1999-10-08 CA CA 2347084 patent/CA2347084C/en not_active Expired - Fee Related
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- 1999-10-08 US US09/807,659 patent/US6991929B1/en not_active Expired - Fee Related
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-
2004
- 2004-06-28 US US10/878,094 patent/US20050112144A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH01279842A (ja) * | 1988-04-28 | 1989-11-10 | Chemo Sero Therapeut Res Inst | Ａ型及びｂ型肝炎混合アジュバントワクチン |
| US5268292A (en) * | 1988-06-27 | 1993-12-07 | Robertson Betty H | Reproducible generation of high yields of hepatitis A virus by cell culture |
| JPH07505372A (ja) * | 1992-03-27 | 1995-06-15 | スミスクライン・ビーチャム・バイオロジカルス（ソシエテ・アノニム） | ３−ｏ−脱アシル化モノホスホリル脂質ａ含有の肝炎ワクチン |
| JPH09506887A (ja) * | 1993-12-23 | 1997-07-08 | スミスクライン・ビーチャム・バイオロジカルス （ソシエテ・アノニム） | ワクチン |
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| Title |
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