JPH07500733A

JPH07500733A - カゼイン加水分解物および該カゼイン加水分解物の製造方法

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Publication number: JPH07500733A
Application number: JP5508107A
Authority: JP
Inventors: ニールセン，ペル　ムンク
Original assignee: ノボ　ノルディスク　アクティーゼルスカブ
Priority date: 1991-11-08
Filing date: 1992-11-09
Publication date: 1995-01-26
Anticipated expiration: 2015-12-25
Also published as: NO941701D0; EP0610411B1; FI942122A; JP3121014B2; WO1993008702A1; NO317313B1; RU2086143C1; FI942122A0; FI110660B; AU657451B2; DE69213755D1; DK0610411T3; CA2123091A1; US5486461A; NZ245031A; DE69213755T2; EP0610411A1; CA2123091C; AU2942392A; NO941701L

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】カゼイン加水分解物および該カゼイン加水分解物の製造方法本発明は、カゼイン加水分解物および該カゼイン加水分解物の製造方法に関する。

カゼイン加水分解物は、乳児食品における成分として主に使用されており、そして多くの異なるカゼイン加水分解物およびカゼイン加水分解物の製造方法は公知である。カゼイン加水分解物およびその製造方法に関し、少なくとも４個の見地が最高の可能な結果をもたらすために重要である：ｌ）高ＤＨ（加水分解の程度）、これは製品中により短いペプチドを生起し従って低いアレルギ発現性をもたらす、２）低含量の遊離アミノ酸、これは製品が食品に配合されるとき好ましいものである。低容量オスモル濃度をもたらす、３）苦みの少なさ、および４）高収率。

良好な感覚刺激特性を有するカゼイン加水分解物の製造方法は、低収率でのみ行うことができる。より一般的に述べれば、前記の４個の見地間の最高バランスを得ることが困難である。従って、本発明の目的はカゼイン加水分解物並びに最適特性、すなわち高ＤＩ（、低含量の遊離アミノ酸、苦味の少なさおよび高収率を有するそのようなカゼイン加水分解物の製造方法を述べることにある。

驚くべきことに、本発明によれば、次の内容が見出された：すなわち、特定した酵素および非−ｐＨスタット加水分解の成る組合せはＤＨ１遊離アミノ酸、苦味および収率間の最適バランスを有するカゼイン加水分解物の製造方法を与える。

本発明に係るカゼイン加水分解物は、加水分解されていないカゼインを含有せず、そしてカゼイン加水分解物はｐＨ３，５〜７．０の範囲内のｐｉ値を有する水性媒質中で完全に可溶であるか又は殆ど完全に可能であることを特徴とし、更に該カゼイン加水分解物は良好な感覚刺激特性を有し更に該カゼイン加水分解物は次のＭＩＮ　（ＭＷは分子量の略記号である）分布：重量％ＭＷ＞５０００　０−１５０００＞ＭＷ＞１５００　１５−３５１５００＞ＭＷ＞５００　４０−８０５００＞ＭＷ　１５−３５に相当する相対量のペプチドおよび１０％未満量の遊離アミノを含有しそして数平均分子量（Ｍｎ）は４００〜６５０であることを特徴とする。

蛋白質加水分解物中のペプチドの四分子は次の如く測定される。

ｌ、原理試料を希釈し、濾過しそしてゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）法で操作する、液体クロマトグラフィーシステムに注入する。この分離技術は、十分規制された孔径の細孔を有する多孔性粒子を充てんしたカラム内の流体の流れを利用する。種々の分子径を有するペプチドの溶液をカラム内に流した場合、小さなペプチドは細孔内に流入できるであろうし、一方より大きな粒子は細孔かち排除されるであろう。従って、溶液中のペプチドは、分子径（および分子量）に従って分離されるであろう。何故ならより大きなペプチドはより小さなペプチドよりもカラムからより速く溶離されるであろうからである。カラム出口の検出器は流出液を連続的に測定する。クロマトグラフィーシステムは公知の分子量を有するペプチドを用いて測定される。

２、クロマトグラフィー装置２．１　高圧ポンプ、ウォーターズ（ｗａｔｅｒｓ）　Ｍ５１０　、流速０．７ｎ＋１／分；注大器、ウォーターズＷＩＳＰＭ７１０　、検出器、ウォーターズＭ４４０　、２１４　ｎｍで延びた波長を有する；から成るＨＰＬＣシステム。

２．２　連続して接続されそして室温で操作されるＧＰＣカラム、３ＸＴＳＫＧ２０００ＳＷＸＬ　、　７．８　ｍｍＸ３００　ｍｍ。

２．３　集積／データ加工、’Ｆｒ−ターズ８２０　ＭＡＸＩＭＡ　３１Ｍデータシステム（８１０／８２０　ＧＰＣオプションを有す）。

３、試薬３．１　ホスフェート緩衝剤、ＮａｔＰＯｔ　’　２８！０３．２　塩化アンモニウム、ＮＨ，Ｃ１０，３三フッ化酢酸（ＴＦＡ）、ＣＦ、Ｃ００Ｈ３，４アセトニトリル、ＣＨＩ　ＣＮ３．５　移動相：０、０５Ｍホスフェート緩衝剤１０．１％ＴＦＡおよび２５％アセトニトリルを含有する０、５Ｍ塩化アンモニウム溶液クロマトグラフィーシステムは、公知の分子量を有する多数の標準ペプチドを注入することにより較正される。各標準の分子量を、カラムからペプチドを溶離するために必要とされる移動相の観察される容量に対し半対数的にプロットする。最少の平方計算により、最良に適合する３桁のポリノミラム（ｐｏｌｙｎｏｍｉｕｍ）を計算する。この曲線は較正曲線を表わす。

４．２　分析試料を移動相内で約５ｍｇ／ｍｌに希釈するか又は溶解する。溶液を２２μｍフィルターを通して濾過し次いで２０μｌをクロマトグラフィーへの注入に対して用る。検出器の応答対溶出量を記録する。記録された曲線−クロマトグラムは、試料の実際のＭＷ分布を示す。累積重量分布および平均分子量の計算に関して計算をなさしめるため、クロマトグラムを小時間（および溶離容量）に分別する一各セグメントは時間間隔にわたって溶出量およびクロマトグラムの領域によって特徴づけられる。

結果は、重量および数平均分子量によって与えられる。

Ｍｗ　：重量平均分子量Ｍ７　：数平均分子量Ａ１　：各セグメントに対するクロマトグラムの領域、各時間間隔にわたって蓄積される検出器の応答として計算される。

Ｍｅ　＋　１　’各セグメントに対して応答する分子量。この値は時間間隔にわたって平均溶出量。

本発明に係るカゼイン加水分解物の好ましい態様は、カゼイン加水分解物がレンネット（ｒｅｎｎｅｔ）沈殿カゼインから製造されること更に該カゼイン加水分解物が下記のＭＷ　（ＭＷは分子量の各記号である）重量％ＭＷ＞５０００　０−０．２ＭＷ＞３０００　＜　５５０００＞ＭＷ＞１５００　１５−３５１５００　＞　ＭＷ＞　５００　４０− ６０５００＞ＭＷ　１５−３５に相当する量のペプチドおよび１０％未満の量の遊離アミノ酸を含有すること並びに数平均分子量（Ｍｎ）が４００〜６５０であることを特徴とする。本発明に係るカゼイン加水分解物の態様において、加水分解物の分子量は異なっている、何故ならそれは比較的低量の長鎖ペプチドを含有するからである。高分子量ペプチドの不存在は抗原性を減少する。この効果は、低抗原性が望まれている母乳代用品中の成分としてレンネットカゼインからの加水分解物の利用に関して極めて重要である。また、消化されやすさは改善され、腹痛のより減少がもたらされる。従って、本発明は、本発明に係るカゼイン加水分解物のこの態様を含有する乳児食品処方品又は母乳代用品を含んでなる。

本発明に係るカゼイン加水分解物の好ましい態様は、カゼイン加水分解物が３．５〜７．０のｐＨ範囲内のｐＨ値を有する水性媒質中に完全に可溶であることを特徴とする。カゼイン加水分解物の完全な溶解性のために、規定食の食品中の成分として極めて良好に適合している。また、更に本発明は示された低ｐＩ（値で良好な安定性を有し更に蛋白質三原として本発明に係るカゼイン加水分解物のこの態様を含む、十分に可溶性の規定食処方品を含んでなる。本発明に係るカゼイン加水分解物のこの態様を基礎にしたこのような十分な可溶性規定食処方品は、正常な管供給製品において特に問題である胃内の凝固を防止するであろう。

また、カゼイン加水分解物の製造のための本発明に係る方法は次の１）〜４）：ｌ）乾物として計算した蛋白質の少なくとも８５％を有するカゼイン又はカゼイン塩を水性媒質中に懸濁又は溶解し約２０％まで、好ましくは１０％までの蛋白質含量を有する溶液とし、２）ｌ工程反応における工程りからの懸濁液又は溶液を以下の群のプロテアーゼ：ｍ　１００　ｇの蛋白質当たり少なくとも０．００５アンソン単位の濃度のバシラス由来の１種又はそれ以上の中性エンドプロテアーゼ、（２１１００ｇの蛋白質当たり少なくとも０．００５アンソン単位の濃度のバシラス由来の１種又はそれ以上のアルカリエンドプロテアーゼ、および（３１１００ｇの蛋白質当たり、少なくとも１０００ペプチダーゼ単位に相当する濃度のアスペルギルス由来の１種又はそれ以上のエキソプロテアーゼ、を用い、４５℃〜６０℃の温度で非ｐＨスタット法を用い１５〜３５％、好ましくは２２〜２８％のＤＨに蛋白加水分解し、３）加水分解を酵素の不活性化により停止し、ついで４）工程３）からの流出液を乾燥状態に変換することを特徴とする。

米国特許３．７６１．３５３は蛋白質加水分解物を記載しており、これに関連し乳蛋白質が原料物質として使用され得る。この蛋白質加水分解物は本発明に係る方法よりもより低い収率で製造される。また、従来技術は本発明に係る方法と同じ蛋白質分解酵素の組合せを用いていない。

ヨーロッパ特許３８４３０３は、カゼイン加水分解物となり得る蛋白質加水分解物の製造方法を記載する。このカゼイン加水分解物は苦味が少ないけれども、囲が４．４％の次数であり、−力木発明方法におけるＤＨは１５〜３５％である。

また、ｐＨは加水分解中一定に保持され、６頁３５行参照、−古本発明に係る加水分解は非ｐＨスタット反応として行なわれる。

ヨーロッパ特許２２３５６０は、連結加水分解による、カゼイン加水分解物であろう。蛋白質加水分解物の製造方法を記載する。本発明に係る方法における加水分解は一工程反応であるが、この従来方法は本発明方法で使用される蛋白質分解酵素の特定の組合せについては記載していない。

米国特許４．６００．５８８は、本発明に係る方法において用いられる蛋白質分解酵素の組合せ以外の蛋白質分解酵素の他の組合せにより製造される乳蛋白質加水分解物を記載する。また、従来技術の乳蛋白質加水分解物は乳化剤として用いられ、−古本発明に係るカゼイン加水分解物は食品添加物として使用される。

語句［バシラス由来の中性エンドプロテアーゼＪは、バシラスによって生産される如何なる中性エンドプロテアーゼおよびまた他の宿主においてクローン化により生産された、この群の酵素と同一であるプロテアーゼを包含するものを理解されるべきである。この解釈は、同様の語句、例えば［アスペルギルス由来のエキソプロテアーゼ」に関しても用いられるべきである。

バシラス由来の中性エンドプロテアーゼの典型例はノボノルディスク社からのノイドラーゼ（Ｎｅｕｔｒａｓｅ）（登録商標）であり、バシラス由来のアルカリプロテアーゼの典型例はノボノルディスク社からのアルカラーゼ（Ａｌｃａｌａｓｅ）　（登録商標）、エスペラーゼ（Ｅｓｐｅｒａｓｅ）（登録商標）およびサビナーゼ（Ｓａｖｉｎａｓｅ）　（登録商標）であり、そしてアスペルギルス由来のエキソプロテアーゼの典型例は、ノボノルディスク社からのノボザイム（Ｎｏｖｏｚｙｍ）　（登録商標）５１５である。

三種の酵素の濃度に対する上限は示されてきていないが、しかし上限は生産物の感覚刺激特性を損なうか又は不経済なプロセスをもたらす酵素の量は望まれていないという事実によって誘導されるということは理解されるべきである。

本発明に係る方法に関連して、炭素処理は感覚刺激特性を改善するために行うことができる。この炭素処理は別個の工程として又は存在する工程の１つに関して行うことができる。もし限外濾過が行われる場合、限外濾過の前に任意工程において炭素を添加してもよく、そしてスペント炭素は限外濾過工程において反応混合物から自動的に分離される。何故なら透過物が所望生成物だからである。もしも限外濾過が行なわれない場合、炭素処理は別個の工程として行なわれるべきである。

酵素の不活性化（工程３）は、ｐＨ値を好ましくは約４．５に低下することにより行うことができ、これにより最終生成物は刺激性飲料、例えばオレンジジュースに対する添加剤として直接適当であり、および／又は温度を増加することによって行うことができる。もしも不活性化がｐＨ値を低下させることにより行なわれる場合、炭素処理は感覚刺激特性を改善するために必要でないことが見出されている。

本発明に係る方法の好ましい態様は工程２）における三群のプロテアーゼが、１）１種又はそれ以上のバシラス　ズブチリス中性エンドプロテアーゼ、２）１種又はそれ以上のバシラス　リケニフオルミス　アルカリエンドプロテアーゼ、および３）１種又はそれ以上のアスペルギルス　オリゼ　エキソプロテアーゼであることを特徴とする。

本発明によって生産されたカゼイン加水分解物の感覚刺激特性は優れたものであることが見出された。

本発明方法の好ましい態様は、工程３）における加水分解の停止前の工程２）からの、又は工程３）における加水分解の停止後の混合物を限外濾過／精密濾過ユニットで分離し、透過物はカゼイン加水分解物を構成する。５０００未満のカット−オフ値を有する限外濾過膜は非常に珍しくそしてわずか１％のカゼイン加水分解物は５０００超のＭＷを示すので、この態様で用いられる限外濾過膜のカットーオフ値はたいてい重要性はない。しかしより高いフラックス（ｆｌｕｘ）のため、より高いカット−オフ値が好ましい。

本発明方法の好ましい態様は、工程２）の加水分解が６時間未満で行なわれることにある。この態様において、微生物学的安定性を生ぜしめるため原料物質を予備処理する必要はない。

本発明方法の好ましい態様は、酵素の不活性化が食物品質の酸、好ましくは塩酸又はクエン酸で処理することにより行なわれる。この態様は簡単でありそして精製目的のための活性炭の使用を必要とせず、そして又製品が製造でき、この製品は水に溶解したとき３．５〜７．０の任意のｐｉ（値を示す。

本発明方法の好ましい態様は、酵素の不活性化を熱処理により行なうこと、および工程３）からの流出液を活性炭で処理し、これは引続き分離され、しかる後工程４）として工程３）からの活性炭のない流出液を乾燥状態に変換することを特徴とする。

本発明方法の好ましい態様は、工程４）が超濾過および／又は蒸発の組合せにより引き続き噴霧乾燥により行なわれることを特徴とする。超濾過は２０〜３０° Ｂまで濃縮に対し最も安価でありそして又好ましくない塩を除去できる。噴霧乾燥は取扱い容易な最終製品を与える。

本発明方法の好ましい態様は酸沈殿カゼインが出発物質として用いられること、およびそれが塩基により溶解されることを特徴とする。この態様は、最も安価な原料物質を利用可能にする。

本発明方法の好ましい態様は、酸沈殿カゼインがＣａ（ＯＨ）　２により溶解されることを特徴とする。この態様は、秀れた感覚刺激特性を有する最終カゼイン加水分解物を与える。

本発明方法の好ましい態様は、しΦンネット沈殿カゼインを出発物質として用いられること、およびそれがりん酸ナトリウム又は炭酸ナトリウムで溶解することを特徴とする。この態様において、加水分解物の分子量が異なる、何故ならそれが比較的低員の長いペプチドを有するからである。この効果は低抗原性が望まれている母乳代用品における成分としてレンネットカゼインからの加水分解物の利用に関して極めて重要である。最終製品は次の分子量分布、重量％ＭＷ＞５０００　０−０．２ＭＷ＞３０００　＜　５５０００＞ＭＷ＞１５００　１５−３５１５００＞　ＭＷ＞　５００　４０−６０５００＞ＭＷ　１５−３５および１０％未満量の遊離酸を示すことおよび数平均分子量（Ｍｎ）が４００〜６５０であることが見出された。

本発明方法の好ましい態様は、レンネット沈殿カゼインがリン酸ナトリウム又は炭酸ナトリウムで溶解されていることを特徴とする。

この態様において、速い加水分解および高収率が得られる。

本発明を次の実施例により説明する。

例１加水分解に対する原料物質は、約８７％の蛋白質を含有するＭＤ−フードデンマークから得られる。Ｃａ−カゼイン塩（ミブロダン（ＩＪｌｐｒ−ｏｄａｎ）４０）であった。カゼイン塩を５０℃の脱イオン水中に８％蛋白質の濃度で懸濁させた。ｐＨ１容量オスモル濃度およびブリックスを記録した。：　ｐｌ＝　６．９６、容量オスモル濃度＝　２４ｍ０５ｍ／　ｋｇであり、そして’　Ｂｒ１ｘ　（ブリックス）　＝７．２０．酵素を加えた：蛋白質の２．０％の量のノイドラーゼ（Ｎｅｕｔｒａｓｅ）　（登録商標）０．５Ｌ蛋白質の量の０．５％量のアルカラーゼ（Ａｌｃａｌａｓｅ）　（登録商標）２．４Ｌ。

蛋白質の０．８％量のノボザイム（Ｎｏｖｏｚｙｍ）　（登録商標）５１５ｐＨ１容量オスモル濃度およびブリックスを監視しながら、加水分解を５０℃で６時間行なった。加水分解の終了時にはｐＨは５．９１であり、容量オスモル濃度は２２２　ｍ０ｓｒｎ／ｋｇであり、ブリックスは１２．００°Ｂであり、モしてＤ）１は２６．２％であった。加水分解を８５℃で３分間熱処理することにより停止させた。

加水分解混合物の分離は、ＦＰ１００膜（カットオフＭＷ＝　１０００００）を備えたＰＣＩ限外濾過装置によって行った。ＵＰ後の収率は９３％超、原料物質中の蛋白質の量基準で。生成物を、ＡＦＣ３０膜を備えたＰＣ１ナノ濾過装置によって濃縮した。このプロセス工程後の全収率は９０．７％であった。濃縮物を噴霧乾燥した。

得られた生成物は、図１に従った分子量分布を有する、乾物中９１％の蛋白質を含有する完全に可溶性の粉末であった。平均Ｍｎ＝５１６゜遊離アミノ酸＝７％。生成物は３．５〜７．０のｐＨ範囲で完全に可溶性である。生成物の５％溶液中のｐｉ（値は６．４５であった。

例２加水分解に対する原料物質は、約８７％の蛋白質を含有するＭＤ−フードデンマークから得られる。Ｃａ−カゼイン塩（ミブロダン（Ｍｉｐｒ−ｏｄａｎ）４０）であった。カゼイン塩を５０℃の脱イオン水中に８％蛋白質の濃度で懸濁させた。ｐＨ，容量オスモル濃度およびブリックスを記録した。：ｐＨ＝６．９６、容量オスモル濃度＝　２４ｍ０５ｍ／　ｋｇであり、そして’　Ｂｒ１ｘ　（ブリックス’Ｉ　＝７．２０．酵素を加えた・蛋白質の２．０％の量のノイドラーゼ（Ｎｅｕｔｒａｓｅ）　（登録商標）０．５Ｌ蛋白質の０．５％の量のアルカラーゼ（Ａｌｃａｌａｓｅ）　（登録商標）２．４Ｌ蛋白質の０．８％の量のノボザイム（Ｎｏｖｏｚｙｍ）　（登録商標）５１５ｐＨ１容量オスモル濃度およびブリックスを監視しながら、加水分解を５０℃で６時間行なった。加水分解の終了時にはｐＨは５．９１であり、容量オスモル濃度は２２２　ｍ０５ｍ／ｋｇであり、ブリックスは１２．００°Ｂであり、そしてＤＨは２６．２％であった。加水分解を８５℃で３分間熱処理することにより停止させた。活性炭（Ｐｉｅａｔｉｆ１２０ＢＷ）をｏＢの用量４％で加えた。

加水分解混合物の分離は、ＦＰ１００膜（カットオフＭＷ＝　１０００００）を備えたＰｃｔ限外濾過装置によって行った。ＵＦ後の収率は９３％超、原料物質中の蛋白質基準で。生成物を、ＡＦＣ３０膜を備えたＰＣ１ナノ濾過装置によって濃縮した。このプロセス工程後の全収率は９０．７％であった。濃縮物を噴霧乾燥した。

得られた生成物は、図２に従った分子量分布を有する、乾物中９１％の蛋白質を含有する完全に可溶性の粉末であった。平均Ｍｎ＝５６４゜遊離アミノ酸＝７％。生成物は３．５〜７．０のｐＨ範囲で完全に可溶性である。生成物の５％溶液中のｐＨ値は６．３８であった。

例３加水分解に対する原料物質は、約８７％の蛋白質を含有するＭＤ−フードデンマークから得られる。Ｃａ−カゼイン塩（ミプロダン（Ｍｉｐｒ−ｏｄａｎ）４０）であった。カゼイン塩を５０℃の脱イオン水中に８％蛋白質の濃度で懸濁させた。２％のジナトリウム−ジホスフェートおよび１％のモノナトリウム−ジホスフェート（蛋白質の量に対する）を、カゼインを溶解するために加えた。３０分以内に完全な溶解が得られた。混合物を５０６に冷却した。ｐＨ，容量オスモル濃度およびブリックスを記録した。：　ｐＨ＝６．９６、容量オスモル濃度＝　２４ｍＯｓ＋ｎ／　ｋｇであり、そして”　Ｂｒ１ｘ　（ブリックス）　＝１１．４．酵素を加えた：蛋白質の２．０％の量のノイドラーゼ（Ｎｅｕｔｒａｓｅ）　（登録商標）０．５　Ｌ蛋白質の０．５％の量のアルカラーゼ（八１ｃａｌａｓｅ）　（登録商標）２．４Ｌ蛋白質の０．５％の量のノボザイム（Ｎｏｖｏｚｙｗ＋）　（登録商標）５１５ｐＨ１容量オスモル濃度およびブリックスを監視しながら、加水分解を５０℃で６時間行なった。加水分解の終了時にはｐＨは６．１５であり、容量オスモル濃度は２１１　ｍｏｓ＋ｎ／ｋｇであり、ブリックスは］、２．ＯＯｏＢであった。加水分解を８５℃で３分間熱処理することにより停止させた。

加水分解混合物の分離は、ＦＰ１００膜（カットオフＭＷ＝　１０００００）を備えたＰｃｔ限外濾過装置によって行った。ＵＦ後の収率は８０％超、原料物質中の蛋白質の量基準で。生成物を、ＡＦＣ３０膜を備えたＰＣ１ナノ濾過装置によって濃縮した。このプロセス工程後の全収率は７７．５％であった。濃縮物に活性炭（Ｐｉｃａｔｉｆ　１２０ＥＷ）を０Ｂの４％の用量で加え、次いでそれをプレートフィルター内で濾過しそして噴霧乾燥した。

得られた生成物は、図３に従った分子量分布を有する、乾物中９１．３％の蛋白質を含有する完全に可溶性の粉末であった。平均Ｍｎ＝４９６゜遊離アミノ酸＝５％この生成物の味は例１からの生成物の味を比較するとわずかにより風味をもったものとして記載される。生成物は３．５〜７．０のｐＨ範囲で完全に可溶性である。生成物の５％溶液中のｐＨ値は６．５０であった。

例４加水分解に対する原料物質は、約８７％の蛋白質を含有するＭＤ−フードデンマークから得られるＣａ−カゼイン塩（ミプロダン（ＭＬｐｒｏｄ＋ａｎ）４０）であった。カゼイン塩を５０℃の脱イオン水中に８％蛋白質の濃度で懸濁させた。酵素を加えた：蛋白質の２．０％の量のノイドラーゼ（Ｎｅｕｔｒａｓｅ）　（登録商標）０．５　Ｌ蛋白質の０．５％の量のアルカラーゼ（Ａｌｃａｌａｓｅ）　（登録商標）２．４　Ｌ蛋白質の０．８％の量のノポザイム（Ｎｏｖｏｚｙｍ）　（登録商標）５１５加水分解を５０℃で６時間行なった。同じ条件下で加水分解を平行して行った。唯一の差異はＣａ−カゼイン塩（ミプロダン（Ｍｉｐｒｏｄａｎ）４０）の使用であった。加水分解、熱処理および濾過後の混合物の味評価は、Ｃａ−カゼイン塩から造られた加水分解物はＮａ−カゼイン塩から造られた加水分解物よりも味のプロフィールに関し著るしくより低いことを示した。

生成物は３．５〜７．０のｐＨ範囲内で完全に可溶性であった。

例５加水分解の速度を、加水分解の効率に関する可溶化の影響を調べるため原料物質としてレンネットカゼインを比較して試験した。加水分解に対する原料物質は、約８７％蛋白質を含有するＭＤ−フードデンマーク（ミブロダン２６）から得られるレンネットカゼインであった。カゼインを７５℃で８％の濃度で脱イオン水中に懸濁させた。２％のジナトリウム−ジホスフェートおよび１％のモノナトリウム−ジホスフェート（蛋白質の量の基準で）を、カゼインを溶解するため加えた。完全な可溶化が３０分以内に得られた。混合物を５０℃に冷却した。

容量オスモル濃度の増加を監視しながら、加水分解を４時間行った。同じ条件下でしかしホスフェートなしで加水分解を平行して行った。加水分解の速度は図４示すように著るしくより低かった。これはレンネットカゼインを加水分解する前にホスフェートで可溶化するとき、収率の増加に相関している。

例６加水分解に対する原料物質は、約８７％の蛋白質を含有するＭＤ−フードデンマークから得られる。Ｃａ−カゼイン塩（ミブロダン（Ｍｉｐｒ−ｏｄａｎ）４０）であった。カゼイン塩を５０℃の脱イオン水中に８％蛋白質の濃度で懸濁させた。ｐＨ１容量オスモル濃度およびブリックスを記録した。：ｐｌ（＝６．８６、容量オスモル濃度＝　２５ｍ０５ｍ／　ｋｇであり、そして’　Ｂｒ１ｘ　（ブリックス）　＝８．４０．酵素を加えた：蛋白質の２．０％の量のノイドラーゼ（Ｎｅｕｔｒａｓｅ）　（登録商標）０．５　Ｌ蛋白質の０．５％の量のアルカラーゼ（Ａｌｃａｌａｓｅ）　（登録商標）２．４　Ｌ蛋白質の０．８％の量のノポザイム（Ｎｏｖｏｚｙｍ）　（登録商標）５１５ｐＨ１容量オスモル濃度およびブリックスを監視しながら、加水分解を５０℃で６時間行なった。加水分解の終了時にはｐｎは５．９２であり、容量オスモル濃度は２１２　ｍ０５ｍ／ｋｇであり、ブリックスは１１．４００Ｂであり、そしてＤＨは２６．１％であった。３０％ＭＣＩでｐＨを４．５に低下させ次いで７５ ℃で３分間熱処理することにより、加水分解を停止させた。

加水分解混合物の分離は、ＦＰ１００膜（カットオフＭＷ＝　１０００００）を備えたＰｃｔ限外濾過装置によって行った。ＵＦ後の収率は８４．７％超、原料物質中の蛋白質の量基準でこれはダイア濾過を効果的に活用することなく得られた。

生成物を、ＡＦＣ３０膜を備えたＰｃｔナノ濾過装置によって濃縮した。

このプロセス工程後の全収率は７９．７％であった。濃縮物を噴霧乾燥した。

得られた生成物は、図５に従った分子量分布を有する、乾物中９０％の蛋白質を含有する完全に可溶性の粉末であった。平均Ｍｒ＋＝５０００遊離アミノ酸＝７％。５％溶液中のｐＨ値は６．４５であった。

例７加水分解に対する原料物質は、約８７％の蛋白質を含有するＭＤ−フードデンマークから得られる。Ｃａ−カゼイン塩（ミブロダン（Ｍｉｐｒ−ｏｄａｎ）４０）であった。カゼイン塩を５０℃の脱イオン水中に８％蛋白質の濃度で懸濁させた。ｐＨ１容量オスモル濃度およびブリックスを記録した。：　ｐＨ＝６．８６、容量オスモル濃度＝　２５ｍ０５ｍ／　ｋｇであり、そして’　Ｂｒ１ｘ　（ブリックス）　＝８．４０．酵素を加えた：蛋白質の２．０％の量のノイドラーゼ（Ｎｅｕｔｒａｓｅ）　（登録商標）０．５Ｌ蛋白質の０．５％の量のアルカラーゼ（Ａｌｃａｌａｓｅ）　（登録商標）２．４Ｌ蛋白質の０．８％の量のノボザイム（Ｎｏｖｏｚｙｍ）　（登録商標）５１５ｐｕ、容量オスモル濃度およびブリックスを監視しながら、加水分解を５０℃で６時間行なった。加水分解の終了時にはｐＨは５．９２であり、容量オスモル濃度は２１２　ｍ０５ｍ／ｋｇであり、ブリックスは１１．４０°Ｂであり、そしてＤＨは２６．１％であった。３０％ＨＣＩでｐＨを４．５に低下させ次いで８５ ℃で３分間熱処理することにより、加水分解を停止させた。

加水分解混合物の分離は、ＦＰ１００膜（カットオフＭＷ＝　１０００００）を備えたＰＣＩ限外濾過装置によって行った。ＵＦ後の収率は８４．７％超、原料物質中の蛋白質の量基準で。これはダイア濾過を効果的に活用することなく得られた。

生成物を、ＡＦＣ３０膜を備えたＰＣ１ナノ濾過装置によって濃縮した。

このプロセス工程後の全収率は７９．７％であった。濃縮物に活性炭（Ｐｉｃａｔｉｆ１２０ＥＷ）を６Ｂの４％の溶量で加え、次いでそれをプレートフィルターで濾過しそして噴霧乾燥した。

得られた生成物は、図６に従った分子量分布を有する、乾物中８９゜６％の蛋白質を含有する完全に可溶性の粉末であった。平均Ｍｎ＝５４１゜遊離アミノ酸；７％。５％溶液中のｐＨ値は４．６４であった。味の評価（トライアングル試験）は、この生成物および先の例からの生成物間では著るしい差異を示さなかったが、ここにおいて活性炭による処理は行なわれなかった。

Ｆｉｇ、　１Ｆｉｇ、　２Ｆｉｇ、　３容量オスモル濃度の増加ｍｏｓｍ／ｋｇＦｉｇ、　４Ｆｉｇ、　５Ｆｉｇ、　６国際調査報告国際調査報告

Claims

【特許請求の範囲】１．加水分解されていないカゼインを含有しないカゼイン加水分解物であって、該カゼイン加水分解物は、ｐＨ３．５〜７．０の範囲内のｐＨ値を有する水性媒質中で完全に可溶であるか又は殆ど完全に可能であること該カゼイン加水分解物は良好な感覚刺激特性を有すること、該カゼイン加水分解物は次のＭＷ（ＭＷは分子量の略記号である）分布：　　　　　　　　　　　　　重量％ＭＷ＞５０００　　　　　　０−１５０００＞ＭＷ＞１５００　１５−３５１５００＞ＭＷ＞５００　　４０−６０５００＞ＭＷ　　　　　　　１５−３５に相当する相対量のペプチドおよび１０％未満量の遊離アミノを含有しそして数平均分子量（Ｍｎ）は４００〜６５０であることを特徴とする、カゼイン加水分解物。２．カゼイン加水分解物がレンネット沈殿カゼインから製造されること更に該カゼイン加水分解物が下記のＭＷ（ＭＷは分子量の略記号である）：　　　　　　　　　　　　　重量％ＭＷ＞５０００　　　　　　０−０．２ＭＷ＞３０００　　　　　　＜５５０００＞ＭＷ＞１５００　１５−３５１５００＞ＭＷ＞５００　　４０−６０５００＞ＭＷ　　　　　　　１５−３５に相当する量のペプチドおよび１０％未満の量の遊離アミノ酸を含有すること並びに数平均分子量（Ｍｎ）が４００〜６５０であることを特徴とする、請求の範囲第１項記載のカゼイン加水分解物。３．カゼイン加水分解物が、３．５〜７．０のｐＨ範囲内のｐＨ値を有する水性媒質中に完全に可溶である、請求の範囲第１項記載のカゼイン加水分解物。４．カゼイン加水分解物の製造方法であって、１）乾物として計算した蛋白質の少なくとも８５％を有するカゼイン又はカゼイン塩を、水性媒質中に懸濁又は溶解し約２０％まで、好ましくは１０％までの蛋白質含量を有する溶液とし、２）１工程反応における工程１）からの懸濁液又は溶液を以下の三群のプロテアーゼ：（１）１００ｇの蛋白質当たり少なくとも０．００５アンソン単位の濃度のバシラス由来の１種又はそれ以上の中性エンドプロテアーゼ、（２）１００ｇの蛋白質当たり少なくとも０．００５アンソン単位の濃度のバシラス由来の１種又はそれ以上のアルカリエンドプロテアーゼ、および（３）１００ｇの蛋白質当たり、少なくとも１０００ペプチダーゼ単位に相当する濃度のアスペルギルス由来の１種又はそれ以上のエキソプロテアーゼ、を用い、４５℃〜６０℃の温度で非ｐＨスタット法を用い１５〜３５％、好ましくは２２〜２８％のＤＨに蛋白加水分解し、３）加水分解を酵素の不活性化により停止し、ついで４）工程３）からの流出液を乾燥状態に変換することを特徴とする、請求の範囲第１〜３項のいずれかに記載のカゼイン加水分解物の製造方法。５．工程２）における三群のプロテアーゼが、次の１）〜３）：１）１種又はそれ以上のバシラスズブチリス中性エンドプロテアーゼ、２）１種又はそれ以上のバシラスリケニフォルミスアルカリエンドプロテアーゼ、および３）１種又はそれ以上のアスペルギルスオリゼエキソプロテアーゼであることを特徴とする、請求の範囲第１〜３項のいずれかに記載のカゼイン加水分解物の製造方法。６．工程３）における加水分解の停止前工程２）から又は工程３）における加水分解の停止後の混合物を限外濾過／精密濾過ユニットで分離し、透過物はカゼイン加水分解物を構成する、請求の範囲第４又は５項記載の方法。７．加水分解工程２）を６時間未満内で行う、請求の範囲第４〜６項のいずれかに記載の方法。８．酵素の不活性化を食品特性の酸、好ましくは塩酸又はクエン酸で処理することにより行う、請求の範囲第４〜７項のいずれかに記載の方法。９．酵素の不活性化を熱処理により行ない、そして工程３）からの流出液を活性炭で処理し、引き続きこれを分離し、しかる後工程４）として工程３）からの活性炭遊離流出液を乾燥状態に変換する、請求の範囲第４〜７項のいずれかに記載の方法。１０．工程４）を超濾過および／又は蒸発の組合せにより、次いで噴霧乾燥により行なう、請求の範囲第４〜９項のいずれかに記載の方法。１１．酸沈殿カゼインを出発物として用い、そして塩基を用いてそれを溶解することを特徴とする、請求の範囲第１又は３次のカゼイン加水分解物を製造するための請求の範囲第４〜１０項のいずれかに記載の方法。１２．酸沈殿カゼインをＣａ（ＯＨ）２によって溶解する、請求の範囲第１１項記載の方法。１３．レンネット沈殿カゼインを出発物質として用い、そして出発物質をリン酸ナトリウム又は炭酸ナトリウムで溶解する、請求の範囲第４〜１０項のいずれかに記載の方法。