JPH06500005A - ヒト免疫不全ウイルスのアンチセンス阻害薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ヒト免疫不全ウィルスのアンチセンス阻害薬発明の分野 本発明は、療法、特にヒト免疫不全ウィルス（Ｈ［Ｖ）の感染の処置に関するも のである。本発明は、ＨＩＶその他のレトロウィルスの活性を阻害するオリゴヌ クレオチドおよびオリゴヌクレオチド同族体の設計、合成および使用に関するも のである。

発明の背景 本発明は、ＨＩＶ　ＲＮＡの活性を変調させるための材料および方法に関するも のである。本発明は一般に′アンチセンス′配合物、すなわちＲＮＡのヌクレオ チド配列と特異的にハイブリダイズしつる配合物に関するものである。本発明は 好ましい形態によれば、疾病の療法処置を達成し、実験系における遺伝子発現を 調節する方法を目的とする。

感染性疾患状態を含めて哺乳動物の身体状態は大部分が蛋白質により影響される ことは周知である。これらの蛋白質は直接に、またはそれらの酵素機能を介して 作用することにより、動物およびヒトにおける多くの疾病に主として関与する。

古典的な療法は一般にこれらの蛋白質との相互作用に注目し、それらが疾病を引 き起こし、または疾病を増強する機能を緩和する努力を行ってきた。しかし最近 では、それらの合成を指示する分子、すなわち細胞内ＲＮＡとの相互作用により それらの蛋白質の実際の産生を調整する試みがなされている。蛋白質の産生に干 渉することにより最大の効果および最小の副作用において療法結果に効果を得る ことが期待された。これらの療法の一般的な目的は、望ましくない蛋白質の形成 をもたらす遺伝子発現を妨害その他の形で変調させることである。

ある程炭受は入れられている特異的遺伝子発現阻害のための１方法は、特異的な ターゲットメツセンジャーＲＮＡ、ｍＲＮＡ、配列に相補的なオリゴヌクレオチ ド同族体を用いる″アンチセンス“法である。多数の研究者がこのような試みを 報告している。関連の総説には下記のものが含まれるニスタインおよびコーエ： ／（Ｃ，Ａ、５ｔｅｉｎ、Ｊ、Ｓ、Ｃｏｈｅｎ）、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅ５ｅａｒ ａｌｄｅｒ）、Ｇｅｎｅｓ　＆　Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ、ｖｏｌ、２．ｐ、５ ０２−５０４　（１９８８）；？−カスーセクラ（Ｃ，Ｊ、Ｍａｒｃｕｓ−５ｅ ｋ５、ｐ、５３９−５４９　（１９８８）；ファン・デル・クロル、モルおよび ストライチェ（Ａ、　Ｒ，Ｖａｎ　ｄｅｒ　Ｋｒｏｌ、Ｊ、　Ｎ、　Ｍｏ１．　 Ａ、　Ｒ，５ｔｕｉｔｊｅ）、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、ｖｏｌ、６．ｐ、 ９５８−９７３　（１９８８）およびルーズーミッチェル（Ｄ、Ｓ、Ｌｏｏｓｅ −Ｍｉ　ｔｃｈｅ　ｌ　Ｉ）。

ＴＩＰＳ、ｖｏｌ、９．ｐ、４５−４７　（１９８８）、以上はそれぞれ一般的 アンチセンス理論に関する背景および先行技術を提示する。

ＨＩＭウィルスを種々のアンチセンス法により阻害する試みがこれまで多数の研 究者によりなされた。ザメクニクおよび共同研究者らは、逆転写酵素プライマ一 部位およびスプライスドナー／アクセプタ一部位をターゲットとするホスホジエ ステルオリゴヌクレオチドを用いた。ザメクニク、グツドチャイルド、タグチ、 リジン（Ｐ、Ｃ，Ｚａｍｅｃｎｉｋ、Ｊ、Ｇｏｏｄｃｈｉｌｄ、Ｙ、Ｔａｇｕｃ ｈｉ、Ｐ、Ｓ、５ａｒｉｎ）、Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳＡ ８３．４１４３　（１９８６）。グツドチャイルドおよび共同研究者らは、翻訳 間を調製した。グツドチャイルド、アグラワル、シベイラ、リジン、サン、ザメ クニク　（Ｊ、Ｇｏｏｄｃｈｉ　ｌｄ、Ｓ、Ａｇｒａｗａ　１．Ｍ、Ｐ、Ｃ１ｖ ｅ　ｉｒａ。

チャイルドの研究において、ポリアデニル化シグナルをターゲットとすることに よって極めて高い活性が達成された。アグラワルおよび共同研究者らは、同様に キャップおよびスプライスドナー／アクセプタ一部位をターゲットとする化学的 に修飾されたオリゴヌクレオチド同族体を用いることによりグツドチャイルドの 研究を拡張した。アガルワル、グツドチャイルド、シベイラ、ソーントン、リジ ン、ザメクニク　（Ｓ、Ａｇａｒｗａｌ、　Ｊ、Ｇｏｏｄｃｈｉ　ｌｄ、Ｍ、Ｐ 、Ｃ１ｖｅｉｒａ、Ａ、Ｈ，Ｔｈｏｒｎｔｏｎ、Ｐ、Ｓ、５ａｒｉｎ、Ｐ、Ｃ， Ｚａｍｅｃｎｉｋ）、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔ　１．　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　Ｕ ＳＡ　８５．７０７９　（１９８８）。これらのうちの１種類の一部はＨＩＭ　 ＴＡＲｆＪｉ域の一部と重複していたが、例示となる作用を備えていることは認 められなかった。このオリゴヌクレオチドはいずれもＨＩＭ　ＴＡＲ６ｉ域に干 渉すべく設計されていなかった。アグラワルおよび共同研究者らは、初期感染お よび慢性感染状態の細胞（こおいて感染を阻害するために、スプライスドナー／ アクセプタ一部位をターゲットとするオリゴヌクレオチド同族体を用いた。アグ ラワル、イケウチ、サン、リジン、コノプカ、メイゼル（Ｓ、Ａｇｒａｗａｌ、 Ｔ、Ｉｋｅｕｃｈｉ、Ｄ、Ｓｕｎ、Ｐ、Ｓ、５ａｒｉｎ、Ａ、Ｋｏｎｏｐｋａ、 Ｊ、Ｍａｉｚｅｌ）、Ｐｒｏｃ。

Ｎａｔ　１．Ａｃａｄ、Ｓｃ　ｉ、Ｕ、Ｓ、Ａ、８６．７７９０　（１９８９） 。

リジンおよび共同研究者らも、キャップおよびスプライスドナー／アクセプタ一 部位をターゲットとする化学的に修飾されたオリゴヌクレオチド同族体を用いた 。リジン、アグラワル、シベイラ、グツドチャイルド、イケウチ、ザメクニク（ Ｐ、Ｓ、５ａｒｉｎ、Ｓ、Ａｇａｒｗａｌ、Ｍ、Ｐ、Ｃ１ｖｅｉｒａ、Ｊ、Ｇｏ ｏｄｃｈｉ　ｌｄ、Ｔ、Ｉｋｅｕｃｈｉ、Ｐ、Ｃ，Ｚａｍｅｃｎｉｋ）、Ｐｒ。

ｃ、Ｎａｔ　１．Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、Ｕ、Ｓ、Ａ、８５．７４４８　（１９８８ ）。

ザイアおよび共同研究者らも、ＨＩＶを阻害するために、スプライスアクセプタ 一部位をターゲットとするオリゴヌクレオチド同族体を用いた。ザイア、ロッジ 、ムラカワ、スバローン、ステフェンス、カブラン（Ｊ、　Ａ、Ｚａｉａ、Ｊ、 Ｊ。

Ｒｏｓｓ　ｉ、Ｇ、Ｊ、Ｍｕｒａｋａｗａ、Ｐ、Ａ、’Ｓｐａ　ｌ　１ｏｎｅ、 Ｄ、Ａ。

５ｔｅｐｈｅｎｓ、　Ｂ、　Ｅ、　Ｋａｐｌａｎ）、　Ｊ、　Ｖｉｒｏｌ、　６ ２．３９１４（１９８８）。マツクラおよび共同研究者らは、工遺伝子ｍＲＮＡ の翻訳開始をターゲットとするオリゴヌクレオチド同族体を合成した。マツクラ 、シノヅカ、シン（Ｍ、Ｍａｔｓｕｋｕｒａ、に、５ｈｉｎｏｚｕｋａ、Ｇ、Ｚ ｏｎ）ら、ｒ、Ｇ、　Ｒ，Ｚｈａｎｇ、　Ｄ、Ｋ、　Ｓｕｎ、Ｔ、　Ｉｋｅｕｃ ｈｉ、　Ｐ、　Ｓ、　５ａｒｉｎ）、Ｐｒｏｃ、Ｎａｔ　１．Ａｃａｄ、Ｓｃｉ 、Ｕ、Ｓ、Ａ、８６．６５５３　（１９８９）。モリおよび共同研究者らは、マ ツクラと同じ頭載をターゲットとする異なるオリゴヌクレオチド同族体を用いた 。モリ、ボイジャー、カゼカブ（Ｋ、Ｍｏｒｉ、Ｃ，Ｂｏｉｚｉａｕ、Ｃ，Ｃａ ｚｅｎａｖｅ）　ら、Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅｓ、１７．８２０７　 （１’１８９）、シバハラおよび共同研究者らは、スプライスアクセプタ一部位 および逆転写酵素プライマー結合部位をターゲットとするオリゴヌクレオチド同 族体を用いた。シバ／−ラ、ムカイ、モリサワ、ナカシマ、コバヤシ、ヤマモト （Ｓ、５ｈｉｂａｈａｒａ、Ｓ、Ｍｕｋａｉ、Ｈ，Ｍｏｒｉｓａｗａ、Ｈ，Ｎａ ｋａｓｈｉｍａ、Ｓ、Ｋｏｂａｙａｓｈｉ、Ｎ、Ｙａｍａｍｏ　ｔｏ）、Ｎｕｃ 　ｌｅ　ｊｃ−Ｊｃ　ｉｄｓ　Ｒｅｓ、１７，２３９　（１９８９）。レフトシ ンガーおよび共同研究者らは、スプライス部位をターゲットとする、結合コレス テロールを含むオリゴヌクレオチド同族体を合成し、試験した。そり、ボイジャ ー、カゼカブ（Ｋ、Ｍｏｒｉ、Ｃ，Ｂｏｉｚｉａｕ。

（：、（：Ｂｚｅｎａｖｅ）　ら、Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅｓ、１７ ．８２０７　（１９８９）。ステイーブンランおよびアイバーセンは、スプライ スドナーおよびｔａｔ遺伝子の第１エクソンの５′末端をターゲットとするオリ ゴヌクレオチド同族体にポリリジンを結合させた。ステイーブンラン、アイバー セン（Ｍ。

５ｔｅｖｅｎｓｏｎ、Ｐ、Ｌ、Ｉｖｅｒｓｅｎ）、Ｊ、Ｇｅｎ、Ｖｉｒｏｌ、７ ０．２６７３　（１９８９）、バックおよび共同研究者らは最近、ＨＩＭ　ｍＲ ＮＡおよびＤＮＡをターゲットとするホスフェート−メチル化ＤＮＡオリゴヌク レオチド同族体の使用につき述べている。バック、クーμ、ファン・ジエンダー セン、スミス、グリーン、シュリアーンスおよびゴウドスミット（Ｈ，Ｍ、Ｂｕ ｃｋ、Ｌ、Ｈ，Ｋｏｏｌｅ、Ｍ、Ｈ，Ｐ、ｖａｎ　Ｇｅｎｄｅｒｓｅｎ、Ｌ、Ｓ ｍ１ｔｈ、Ｊ、Ｌ、Ｍ、Ｃ，Ｇｒｅｅｎ、Ｓ、Ｊｕｒｒｉａａｎｓ、Ｊ、Ｇａｕ ｄｓｍ日）、釘お工■２４８．２０８−２１２　（１９９０）。

ＨＩＶをターゲットとするこれらの従来の試みは、大部分はオリゴヌクレオチド 同族体に用いる化学的修飾の性質に注目していた。上記刊行物はそれぞれある程 度はウィルスのある機能を阻害するのに成功したことを報告しているが、ＨＩＶ その他のレトロウィルスをターゲットとする一般的療法方式は見出されていなか った。従って効果的に療法用アンチセンスとして使用しうるオリゴヌクレオチド およびオリゴヌクレオチド同族体を設計することが長年の要望であり、依然とし てそうである。

この長年の要望は、ＨＩＶその他のレトロウィルスおよびウィルスに対するアン チセンスオリゴヌクレオチド療法の分野の従来の研究によっては満たされなかっ た。他の研究者はアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド同 族体が妥当な使用率において療法上有効であるターゲット部位を同定することが できなかった。

発明の目的 本発明の主な目的は、ヒトの疾患、特にヒトの免疫不全ウィルスその他のヒトレ トロウィルスに対する療法を提供することである。

本発明の他の目的は、ｍＲＮＡの構造を混乱させる分子、特にオリゴヌクレオチ ドおよびオリゴヌクレオチド同族体を提供することである。

本発明のさらに他の目的は、細胞における遺伝子の発現を変調させることである 。

他の目的は、ＲＮＡ構造体とオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド同族 体との相互作用によりＲＮＡの二次構造に干渉することである。

本発明のこれらおよび他の目的は本明細書を参照することによって明らかになる であろう。

発明の要約 ＨＩＭをターゲットとするアンチセンスに対する従来の試みは、感染の成立にと って必須であると考えられるある特定のウィルス蛋白質の合成を阻害することに 注目していた。本発明の場合、同一の目標（ウィルス遺伝子発現の阻害）か達成 されるが、ＨＩＭその他のレトロウィルスＲＮＡ上の特定の部位をターゲットと することによって、より大きな、療法上重要な活性が得られる。本発明において 、重要な生物学的機能をもつターゲットＲＮＡが鍵部位であることが見出された 。これらのＲＮＡ領域をターゲットとすることがオリゴヌクレオチドおよびオリ ゴヌクレオチド同族体を用いるアンチセンス療法の鍵であると判定された。

ｔ　ａ　ｔ　ＲＮＡ構造に特異的に結合し、ｔａｔトランス活性化（ｔｒａｎｓ −ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ）に干渉する配合物がＨＩＶ感染に対する療法薬として の活性をもつことが今回見出された。ＨｌＶのすべての株か本発明の精神および 節回に含まれるものとする。異なるＨｌＶ株は異なるｔ　ａ　ｔ　ＲＮＡ配列を もつ可能性があるが、本発明はオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド同 族体の配列を本発明方法に従って異なる株の構造に相補的となるように変化させ ることにより、異なるＨｌＶ株について実施することができる。

本発明によれば、遺伝子の発現を変調させる方法が提供される。ターゲットとさ れるＲＮＡまたはそれを含む細胞を、そのＲＮＡの少なくとも１部分と結合しう るオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド同族体と接触させる。その遺伝 子は一般に生物において疾病状態を引き起こすと考えられるものであり、一般的 にはウィルスまたは好ましくはレトロウィルス、たとえばＨｒＶであるが、ウィ ルスまたはレトロウィルス感染を伴う疑いのある動物にオリゴヌクレオチドまた はオリゴヌクレオチド同族体を投与することにより他の感染性生物を同様に攻撃 して、疾病状態を処置する療法を得ることができる。

特にレトロウィルス、たとえばＨＩＭに対して、感染を軽減する効果をもつオリ ゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド同族体を設計しうろことが今回見出さ れた。ＨＩｖに対しては、多数の有効な配列が見出されており、当業者は他のも のを容易に同定しうるであろう。これらの配列は、ＨＩＭのｔａｔ領域を阻害す るのに有効であり、ＨＩｖ療法が得られることが証明された最初の実際上有効な アンチセンス配列である。従って本発明は、ＨＩＶのｔａ　ｔｍＲＮＡの少なく とも１部分と結合しうるオリゴヌクレオチドおよびオリゴヌクレオチド同族体を 摘供する。これらのオリゴヌクレオチドおよび同族体は下記のヌクレオチド配列 に相当することが認められた　ＱＧＣＴＣＣＡＴＴＴＣＴＴＧＣＴＣＴＣ。

ＣＣＡＴ’！’ＴＣＴＴＧＣＴＣ’Ｉ’ＣＣＴｃＪ’Ｇ’＄’、　ＧＯ’Ｉ’Ａ ’ｒＧ？ＣＧＡＣＡＣ（ＩＣ＾＾ＴＴにれらのオリゴヌクレオチドおよび同族体 は、これらの配列の、少なくとも約６の連続サブユニットを含むことか奸ましく 、約１０か好ましく、約１５がよりいっそう好ましい。ある形態については、オ リゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド同族体か実質的に上記配列に相当す ることか好ましい。これはオリゴヌクレオチドまたは同族体が上記配列のサブユ ニットまたは有効な置換体をすべて含むことを意味する。たとえば野生型オリゴ ヌクレオチドにおいてＴの代わりにＵという置換かなされてもよい。さらにもち ろん、本発明の精神から逸脱することなくオリゴヌクレオチド同族体を形成する 他の化学的修飾をなしうる。

上記の配列部分は効果をもつと思われる特定の配列内のいずれの位置にあっても よい。オリゴヌクレオチドおよび同族体、たとえば好ましいホスホロチオエート 同族体を、薬剤学的に受容しうるキャリヤー中において提供してもよい。

遺伝子の発現、特に↓土工遺伝子の発現を阻害する方法も見出された。この阻害 は療法、診断または研究のためにＩＩＩ用することができる。たとえば工見↓遺 伝子発現を特色とする疾病、特にエイズを伴う疑いのある動物の処置法において 、それらの動物を本発明によるオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド同 族体と接触させることよりなる方法が見出された。

オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド同族体が少なくとも約６サブユニ ツトのＲＮＡ部分と結合しうろことが仔ましい。８−５０ユニツトに結合しうろ ことがより好ましく、約１０−約２０サブユニツトがよりいっそう好ましい。

好ましい形態によれば、オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド同族体は ＲＮＡの部分と２重らせん構造を形成しうる。相互作用の機構は確実には分かつ ていないが、それは多数の様式で遺伝子発現の変調を生じるということが考えら れる。

好ましい形態によれば、干渉されるＲＮＡ部分はＨ［Ｖのｔａｔ　ｍＲＮＡの少 なくとも１部分をなす。本発明によるオリゴヌクレオチドおよびオリゴヌクレオ チド同族体はそれ自体新規であると考えられる。たとえばｔａｔＲＮＡの部分と 相互作用しうるオリゴヌクレオチドが包含される。たとえばその疾病を伴う疑い のある動物を、ｔ　ａ　ｔ　ＲＮＡと結合しうるオリゴヌクレオチドまたはオリ ゴヌクレオチド同族体と接触させる。特に本発明は哺乳動物、殊にヒトのＨ［Ｖ 感染の処置に有効であると考えられる。

図面の簡単な説明 第１図は、線状ＨＩＶ−１ｔａｔ　ｍＲＮＡ配列を示す。

第２図は、ＴＡＲ／ｌａｔト？ンス活性化に関する細胞培養アッセイにおける本 発明による一連のオリゴヌクレオチドおよびオリゴヌクレオチド同族体の活性を 示す。

好ましい形態の詳細な説明 細胞内のＨＩＶ−１ｔａｔ　ＲＮＡ活性を、そのｔａｔ　ｍＲＮＡに結合するオ リゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド同族体の導入により調節しうろこと か見出された。これらのオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド同族体は 上記ｍＲＮＡの正常な機能に干渉し、これらの方法は疾病、特にＨＩＭを処置す るために採用しうる。

本発明に関してオリゴヌクレオチドという鱈は、天然のホスホンエステル結合に より結合した天然の塩基およびシクロフラノシル基から形成される複数の結合ヌ クレオチド単位を意味する。この語は実際には天然種または天然のサブユニ・ノ ドから形成された合成種を意味す就 ″オリゴヌクレオチド同族体′は、この語が本発明に関して用いられる場合、オ リゴヌクレオチドと同様に機能す塩が、天然でない部分を含むものを意味する。

たとえばオリゴヌクレオチド同族体は変化した糖部分または糖量結合を含みうる 。

これらの例には、当技術分野で用いることが知られているホスホロチオエートそ の他のイオウ含有種が含まれる。それらは本発明の精神と一致する変化した塩基 単位または他の修飾を含んでもよい。

ある好ましい形態によれば、オリゴヌクレオチドのホスホンエステル結合の少な くとも若干は、その活性を変調させるべきＲＮＡが位置する細胞領域内へ組成物 か透過する能力を高める機能をもつ構造体により置換されている。このような結 合はイオウを含有することが好ましい。このような置換がホスホロチオエート結 合からなることが現在では好ましい。他のもの、たとえばアルキルホスホチオエ ート結合、Ｎ−アルキルホスホルアミデート、ホスホロジチオエート、アルキル ホスホネート、および短鎖アルキルまたはシクロアルキル構造体も有用である。

他の好ましい形態によれば、ホスホジエステル結合は同時に実質的に非イオン性 かつ非キラル性である構造体により置換されている。当業者は本発明の実施に際 して使用しうる他の結合を選択することができるであろう。

本発明のある形態に用いるためには、一般にオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌ クレオチド同族体の少なくとも若干のサブユニットにおいて結合糖部分の２′位 が置換されていることが好ましい。たとえば２′置換基、たとえばＯＨ，ＳＨ。

Ｆ、ＯＣＨ３、ＯＣＮ、０ＣＨｆｉＣＨ３（式中４７）ｎＧ；ｔｌ−約２０であ ル）、および同様な特性をもつ他の置換基が若干の形態においては有用である。

オリゴヌクレオチド同族体には、少なくとも若干の修飾された塩基形を含む種も 含まれる。たとえば普通に天然に見られるもの以外のプリン類およびピリミジン 類もこのように用いることができる。同様に、本発明の本質的見解が固守される 限り、ヌクレオチドサブユニットのシクロフラノース部分における修飾も起こり うる。

このような同族体は、機能的には天然のオリゴヌクレオチド（または天然の系列 に沿った合成オリゴヌクレオチド）と互換性があるが、天然の構造体とは１また は２以上の相異をもつものであると記述するのが最良である。このような同族体 はすべて、それらがｔａｔ　ＲＮＡの選ばれた部分に効果的に結合する機能をも つ限り、本発明に包含される。

本発明によるオリゴヌクレオチドおよびオリゴヌクレオチド同族体は、好ましく は約３−約１００サブユニツトからなる。このようなオリゴヌクレオチドおよび 同族体が少なくとも約６サブユニツトからなることが好ましく、約８−約５０サ ブユニットがより好ましく、約１０−約２０サブユニツトを含むことかよりいっ そう好ましい。自明のとおり、サブユニットはホスホジエステルその他の結合に より隣接サブユニットに適切な状態で結合した塩基と糖の組み合わせである。

本発明のオリゴヌクレオチドおよびオリゴヌクレオチド同族体は、診断、療法に 、ならびに研究用試薬、およびキットとして使用しうる。療法に用いるためには 、ウィルス性またはレトロウィルス性感染、たとえばエイズに冒された動物、特 にヒトに、上記のオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド同族体を投与す る。

一般に本発明による療法藁を体内に、たとえば経口的、静脈内または筋肉内に付 与することが好ましい。他の投与形態、たとえば経皮、局所または病巣内投与も 有用である。重刑に含有させることも有用である。予防における本発明のオリゴ ヌクレオチドおよびオリゴヌクレオチド同族体の使用も有用であると思われる。

若干の形態については薬剤学的に受容しうるキャリヤーの使用も好ましい。

本発明によればオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド同族体とＲＮＡの 部分またはサブポーション（ｓｕｂｐｏｒｔ　１ｏｎ）との相互作用を意味する 語“結合する（ｔｏ　ｂｉｎｄ）″が数種の関連する意味をもちうろことは理解 されるであろう。たとえば本発明には、オリゴヌクレオチドまたは同族体とｔａ ｔＲＮＡの少なくとも１部分との結合が含まれる。オリゴヌクレオチドまたは同 族体がＲＮＡ部分の少なくとも１部分とワトランークリック様式で結合して、局 部的にそのＲＮＡ部分とオリゴヌクレオチドまたは同族体との間でヘテロ２本鎖 を形成することは理解されるであろう。このヘテロ２本鎖の形成によりそのＲＮ Ａ部分の構造または機能が変化すると考えられる。この作用の厳密な機構および 結果は正確には分かっていないが、そのＲＮＡ部分の正常な構造または機能がＲ ＮＡの１または２以上の部分とオリゴヌクレオチドが結合することにより次第に 置換されると考えられる。新たなヘテロ２本鎖に伴う電子的および立体的因子は その天然のＲＮＡ部分のものと異なるので、そのＲＮＡから蛋白質を産生ずる機 能の効率および性質が干渉される。その結果生じる蛋白質産生の欠損または食失 自体が全体として、ＲＮＡをコードする遺伝子の発現の変調として現れる。

要約すると、オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド同族体とｔａｔＲＮ Ａとの相互作用または結合はいずれも、ＲＮＡの機能に干渉し、従ってそのＲＮ Ａが由来する遺伝子の発現を変調させる可能性をもつと考えられる。ターゲット の部分に対応するオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド同族体か感染細 胞に投与された場合にＨＩＶ活性の全体的低下を示すｔ　ａ　ｔ　ＲＮＡターゲ ットが見出された。

多様なオリゴヌクレオチドおよびオリゴヌクレオチド同族体が本発明の実施に際 して有用であると考えられるが、それらのオリゴヌクレオチドおよび同族体を少 なくとも６サブユニツトのＲＮＡ部分と結合すべく設計するのか好ましいことか 認められた。他の好ましい形態によれば、約６−約３０、よりいっそう好ましく は約１０−約２０サブユニツトと結合するオリゴヌクレオチドが好ましい。前記 のように、現在ではＨＩｖのｔ　ａ　ｔ　ＲＮＡが本発明に用いるための卓越し たターゲットであると考えられる。従ってＨ［Ｖのｔ　ａ　ｔ　ＲＮＡ領域の１ または２以上の部分と結合するオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド同 族体を調製することが好ましい。

療法は本発明の特別な目的である。従って薬剤学的に受容しうるキャリヤー中に おける本発明によるオリゴヌクレオチドおよびオリゴヌクレオチド同族体を提供 することは極めて有用である。これは疾病エイズの処置に関して特にそうである 。

全体として、前記の疾病状態を伴う疑いのある患者にその疾病の症状を軽減する のに有効である量の、かつその処置計画に基づいた量のオリゴヌクレオチドまた は同族体を、そのままの形で、またはキャリヤー媒質中に懸濁して投与すること が好ましい。このような処置法に最適な用量および処置計画を決定することは当 業者が容易になしうる範囲のものである。

ＨＩｖゲノム中の複雑な１組の制御要素が、そのウィルスが複製されるか、また は潜伏状態を維持するかを決定する。ＨＩＶゲノム中に同定された９遺伝子のう ち３遺伝子のみがコアおよびエンベロープに由来する。ヘイゼルタイン、ワン− スクール（Ｗ、Ａ、Ｈａｓｅ　！　ｔ　ｉｎｅ、Ｆ、Ｗｏｎｇ−３ｔａａ　ｌ） 、５ｃｉｅｎＬｉｆｉｃ　Ａｍｅｒｉｃａｎ　ＬＯｆｌ、５２　（１９８８）、 ｆ出の６Ｊ云子はウィルス蛋白質の産生の調節に関与する。調節遺伝子は、ウィ ルスケツム上の他のいずれかの位！にある応答性要素と相互作用する蛋白質をコ ートすることにより作動する。′ＩＭ製バーストの開始に関与する主要な調節遺 伝子は、［１工（トランスアクチヘーター）遺伝子である。第１図はＨＩＭ中の ｔａｔ６Ｅ域のｃＤＮＡに関する配列である。ｔａｔ遺伝子の産物であるｔａｔ 蛋白質は、”ｌ”ＡＲ（トランス作用性応答要素）として知られる短い配列の要 素と相互作用することにより作動する。ＴＡＲ配列はウィルスの長末端反復（Ｌ ＴＲ）中にコートされ、従ってあらゆるＨＩＶ遺伝子からのｍＲＮＡに含まれる 。

ｔａｔ蛋白質の発現により、１見工遺伝子自身を含めて他のＨｒＶ遺伝子の発現 か最高１．０００倍増大する。この自動制御による正のフィードパ・ｌり、およ びＴＡＲ配列があらゆるＨＩＭ転写体からのｍＲＮＡに含まれるという事実のだ 極めて重要であり、この相互作用を特異的に混乱させることによりこのウィルス の増殖が妨害されると思われる。

ｔａｔ蛋白質によるＴＡＲ含有遺伝子のトランス活性化の機構が最近熱心に研究 された。シャープ、マルシニアク（Ｐｈｉ　ｌ　ｉｐ、Ａ、５ｈａｒｐ、Ｒｏｂ ｅｒｔ、Ａ、Ｍａｒｃｉｎｉａｋ）、Ｃ−ｇ↓↓　５９．２２９　（１９８９） 、研究すべきことは多数性されてはいるが、重要な２点が明らかになった；すな わちｔａｔはウィルスｍＲＮＡの量およびその翻訳の効率の双方を高めることに より′ｒＡＲ含有遺伝子の発現を高めるという点、ならびにＴＡＲＩ！ＤＮＡ構 遺体としてではなくＲＮＡ横遺体として機能するという点である。

ｔａｔはＴＡＲ含有遺伝子の転写を高めるが、これはＲＮＡ中のＴＡＲ要素との 相互作用により行われるという異例の結論は、多数の所見から導かれた。シャー プ、マルシニアク（Ｐｈｉ　！　ｉｐ、Ａ、５ｈａｒｐ、Ｒｏｂｅｒ　ｒ、Ａ、 Ｍａｒｃｉｎｉａｋ）、Ｃｅ１ｌ　５９，２２９　（１９８Ｇ）。トランス活性 化を達成するためには、ＴＡＲＷ素は転写開始部位のすく下流に位置しなければ ならない。さらにＴＡＲは配向依存性であり、逆配向で挿入された場合、それは 機能し得ない。

ｔａｔがＲＮＡ横遺体としてのＴＡＲと相互作用するという極めて強力な幾つか の証拠は、突然変異誘発実験により得られた。ＨＩｖ−１からのｔａｔ蛋白質が ＨＩｖ−２（異なるウィルス株）のＴＡＲ領域を含むベクターを、これら２株間 にＴＡＲ領域の一次配列相同性がごくわずかしかないにもかかわらずトランス活 性化し得たという所見によって、ＴＡＲ要素を研究する活動が促進された。フェ ン、ホランド（Ｓ、Ｆｅｎｇ、Ｅ、Ｃ，Ｈｏ１ｌａｎｄ）、Ｎａｔｕｒｅ　３３ ４．１６５　（１９８８）。しかしＲＮＡを予想するコンピータ−プログラムに よルＨＩ　Ｖ−１およびＨＩＭ−２から（７）ＴＡＲ配列の調査は、ＨＩＭ−１ （７）ＴＡＲ領域における１個のステム・ループ、およびＨｆＶ−２における３ 個のステム・ループ構造を含む、ＲＮＡステム・ループ構造の可能性を二次的に 明らかにした。

ステムの組成および長さは異なるが、４ループはすべてＩＡおよび１８図に示さ れるようにペンタヌクレオチドＣＵＧＧＧを含んでいた。ループ内に存在するヌ クレオチドはそれぞれｔａｔによるトランス活性化に絶対的に必須であるが、ス テム！道が維持される限りステム内における塩基の置換はある程炭は許容される ということが、突然変異誘発実験により明らかになった。フェン、ホランド（Ｓ 。

Ｆｅｎｇ、Ｅ、Ｃ，Ｈｏ１ｌａｎｄ）、Ｎａｔｕｒｅ　３３４．１６５　（１９ ８８）。

ＲＮＡとして機能するＴＡＲ構造に関する他の証拠は、ステム・ループ構造をフ ランクする配列を変化させて天然のＴＡＲステム・ループより安定なＲＮＡの競 合性二次構造体を形成する実験により得られた。バークハウト（Ｂ、Ｂｅｒｋｈ ｏｕｔ）、Ｃｅ１ｌ　５９，２７３　（１９８９）。これは、ステム・ループ構 造の５′側に対してアンチセンスである付加的な配列をＴＡＲ含有ＲＮＡ内へ導 入することにより達成された。この修飾されたＴＡＲ構遺体のトランス活性化は 消失した。これはＴＡＲ配列のみではトランス活性化に十分ではなく、活性であ るためにはこれらの配列が適正な二次構造に折り畳まれていなければならないこ とを示唆する。これはＴＡＲステム・ループに対するアンチセンス配列が天然の ＲＮへ構造体を混乱させうることをも示唆する。

ＴＡＲステム・ループ構造に関する直接の生化学的証拠ら得られた。ＴＡＲＲＮ Ａがインビトロで酵素により合成され、ＲＮＡの１本鎖領域を選択的に開裂させ るが２本鎖構造は開裂させない酵素を用いて証明された。この酵素開裂パターン の結果は、コンピューターが予想したＲＮＡ二次構造と一致した。バークハウト （Ｂ、Ｂｅｒｋｈｏｕｔ）、Ｃｅ１ｌ　５９．２７３　（１９８９）。

要約すると、ＨＩｖ　ｔａｔ蛋白質は膨大な量のウィルス遺伝子発現の引き金を 引くことに関与し、これがあらゆるＨＩＶ　ｍＲＮＡ転写体に含まれるＴＡＲ配 列との相互作用により起こり、ＨＩＶ　ＴＡＲ配列はＲＮＡ構造として機能し、 そして適正なＴＡＲＲＮＡ構造がｔａｔトランス活性化にとって必須であるとい う強力かつ直接的な証拠が多数の研究から得られた。

ＨＩＶゲノムから遺伝子を取り出し、それらを細胞系内で隔離して調べることに より、ＴＡＲおよびｔａｔの機能が研究された。ｔａｔ蛋白貫とＴＡＲ要素の相 互作用を調べるためにベクターが構成された。工１１遺伝子はＳＶ４０プロモー ターの下で発現される。ＴＡＲ領域は、容易にアッセイされるリポータ−遺伝子 、胎盤性アルカリホスファターゼ遺伝子（ＰＡＰ）、に融合した別個のプラスミ ドから発現される。ヘンソーン、セルポス、ラデューチヤ、ハリス、カブシュ（ Ｐ、Ｈｅｎｔｈｏｒｎ、Ｐ、Ｚｅｒｖｏｓ、Ｍ、Ｒａｄｕｃｈａ、Ｈ，Ｈａｒｒ ｉｓ、　Ｔ、　Ｋａｄｅｓｃｈ）、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔ　１．　Ａｃａｄ、　 Ｓｃｉ、　ＵＳＡ　８５．６３４２　（１９８８）。細胞培養モデルにおける酵 素活性はＴＡＲ／Ｑ域の本質的要素の存在およびｔａ杏蛋白質の存在の双方に依 存することが示された。シャープ、マルシニアク（Ｐ、５ｈａｒｐ、Ｒ，Ｍａｒ ｃｉｎｉａｋ）、Ｃイス、マシューズ（Ｍｉｃｈａｅｌ、Ｆ、Ｌａ５ｐｉａ、Ａ ｎｄｒｅｗ、Ｐ、Ｒｉｃｅ、Ｍｉｃｈａｅ　１．Ｂ、Ｍａｔｈｅｗｓ）、Ｃｅ　 Ｉ　Ｉ　５９，２８３（１９８９）、ガルシア、ハリッヒ、サウルタナキス、ウ ー、ミツヤス、ガイノー（Ｊ。

Ａ、Ｇａｒｃ　ｉａ、Ｄ、Ｈａｒｒ　ｉｃｈ、Ｅ、５ｏｕｌ　ｔａｎａｋｉｓ、 Ｆ、Ｗｕ、Ｒ，Ｍｉ　ｔｓｕｙａｓｕ、Ｒ，Ｂ、Ｇａｙｎｏｒ）、ＥＭＢＯＪ、 ８．７６５　（１９８９）；およびバークハウト（Ｂ、Ｂｅｒｋｈｏｕｔ）、Ｃ ｅ↓±５９．２７３　（１９８９）。本質的にこのヘクター系はＨ［Ｖ感染細胞 内で起こるｔａｔ仲介ＴＡＲトランス活性化の事象を再構成する。

ＴＡＴ／ＴＡＲトランス活性化は、ヒト胎盤性アルカリホスファターゼ遺伝子（ ＰＡＰ）をＨｒＶ−Ｉ　ＬＴＲ配列−−ｘンｔｚンサー、プロモーターおよびｔ ａｒ要素を含むｍ＝の制御下におくことにより簡便にアッセイしうる。ＨＩＶ− Ｉ　ＬＴＲを含むプラスミド、ｐＨＩＶｃＡＴ　Ｏ（７エン、ホランド（Ｓ、Ｆ ｅｎｇ、Ｅ、Ｃ，Ｈｏ１ｌａｎｄ）、Ｎａｔｕｒｅ　３３４，１６５　（１９８ ８））はＨＡＹ　Ｕ３の全体、および＋７８位（ＨｉｎｄＩ１１部位）　マフ！ ０）Ｒラミｔ；。

このプラスミドをＨｉｎｄＩＩＩおよびＡａｔ［Ｉで消化すると、このＲＮＡの プロセシングに関与するＳＶ４０配列と共にＣＡＴカセットが放出される。第２ のプラスミド、Ｉ）ＳＶ２Ａｐａｐは、ＳＶ４０プロモーターの転写制御下にあ る、真核生物プロセシングシグナルを有するＰＡＰカセットを含む。ヘンソーン 、セルポス、ラデューチャ、ハリス、カブシュ（Ｐ、Ｈｅｎｔｈｏｒｎ、Ｐ、Ｚ ｅ　ｒｖｏｓ、Ｍ、Ｒａｄｕｃｈａ、Ｈ，Ｈａｒｒ　ｉ　ｓ、Ｔ、Ｋａｄｅｓｃ ｈ）、Ｐｒｏｃ、Ｎａｔ　１．Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳＡ　８５．６３４２　（ １９８８）、ＰＡＰカセットおよびプロセシング配列は、ＨｉｎｄＩＩＩおよび Ａａｔ［Ｉで消化することによりこのプラスミドから放出される。新規なプラス ミド、ｐＨｒｖＰＡＰが、ｐＨＩＶｃＡＴ−０からのＨＩＶ−Ｉ　ＬＴＲおＪ： びベクター配列を含むＨｉｎｄｌ　Ｉ　Ｉ／Ａａｔ　Ｉ　Ｉフラグメントを、ｐ ｓ’ｌ／２ＡｐａｐからのＨｉｎｄＩＩＩ／ＡａｔＩＩ　ＰＡＰカセットにリゲ ートさせることにより形成された。

オリゴヌクレオチド同族体の活性を試験するために、ｐｃＤＥＢｔａｔおよびｐ ＨＩ’ｌ／ＰＡＰをＨｅＬａｍ胞内ヘカルシウム／ホスフェート沈殿法により同 時にトランスフェクトした。選ばれたオリゴヌクレオチド同族体の効果は下記に より測定された。ＨｅＬａ細胞をトランスフェクションの前日に１：８で６−ウ ェルディツシュ内へ分配した。各ディツシュにつきｌｕｇのｐＨＩＶＰＡＰおよ び１２ｕｇのｐｃＤＥＢｔａｔを５００μｌのＨＢＳおよび３２μｌの２．５Ｍ ＣａＣ１，中で沈殿させた。ＣａＰＯ＜沈殿を６個のウェルに均一に分配した。

オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド同族体を同様にして沈殿させ、図 に示した濃度で細胞に添加した。沈殿を細胞上に２０分間沈着させ、次いで培地 全部を添加し、細胞をさらに４時間インキュベートした。次いて細胞にＨＢＳ中 の１０％グリセリンでショックを与えた。

４８時間後に細胞を採取し、蛋白質およびＰＡＰのアッセイをヘンソーンらの方 法・ヘンソーン、セルポス、ラデューチャ、ハリス、カブシュ（Ｐ、Ｈｅｎｔｈ ｏｒｎ、Ｐ、Ｚｅｒｖｏｓ、Ｍ、Ｒａｄｕｃｈａ、Ｈ，Ｈａｒｒｉｓ、Ｔ、Ｋａ ｄｅｓｃｈ）、Ｐｒｏｃ、Ｎａｔ　１．Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳＡ　８５．６３ ４２（１９８８）により、下記の修正を行って実施した。細胞を０．５ｍｌのＴ ＢＳ中に採取し、そのうち０．１ｍｌを蛋白質アッセイに用いた。残り０．４ｍ ｌの細胞懸濁液をベレット化し、次いで５０μＩのＴＢＳに再懸濁した。細胞を ６５℃に３０分間加熱することにより内在ホスファターゼを失活させた。細胞懸 濁液にＰＮＰＰ　（０，５ｍＬ　５ｍＭ　ＰＮＰＰ）を添加し、次いでこれを３ ７℃でインキュベートすることにより、熱安定性ヒト胎盤性アルカリホスファタ ーゼ活性をアッセイした。活性は、３０分間隔で１５０μｌアリコートの反応混 合物を用い、４０５ｎｍにおける吸光度をタイターチク・マルチスキャンＭＣＣ ＼３４０　ＥＬＩＳＡプレート読取り装置で測定することにより判定さ杵た。Ｐ ＡＰ活性は各ウェル中の全蛋白質に対して正規化された。蛋白質はバイオ−ラッ ド蛋白質アッセイにより測定され、その際ＴＢＳ　（０，１μｌ）中に採取した 細胞の１＼５を３０μＪのパイオーラッド蛋白質アッセイ試薬に添加し、次いで 室温で１０分間インキュベートしたのち、５９５ｎｍにおける吸光度をタイター チクプレート読取り装置で測定した。

下記のホスホロチオエート骨格をもつオリゴヌクレオチド同族体で細胞を処理し た・ １　５１　コ・ ｚｌ照　Ｔ’ＧＧＣＡＴＣｑＡＴ　ＧＣＴＣＡこれらのデータを第２図にグラフ で示す。ＨＩＭ　ＬＴＲからの遺伝子発現の直接的尺度であるＰＡＰ活件の有意 の低下が、コード番号４６１．４６２．４６３．４６４および４６５を有するホ スホロチオエートオリゴヌクレオチド同族体により示された。オリゴヌクレオチ ド４６６および対照オリゴヌクレオチドーーｔａｔ　ｍＲＮＡに対して相捕的に 設計されなかったもの−−はこのアッセイにおいて有意の活性を示さなかった。

対照オリゴヌクレオチドおよび配合物番号４６６に関する１ｕＭ用量におけるＰ ＡＰ活性の見かけ上の上昇は、トランスフェクションの時点でオリゴヌクレオチ ドがプラスミドの取込みを促進するキャリヤー効果により生じたムのと考えられ る。活性オリゴヌクレオチドを用いる実験においてはこの効果は存在するであろ うが、これらの配合物の特異的阻害活性により遮蔽された。

ＦＩＧＵＲＥ　１ １２０１　υＵＡＡＧＡＣＣＡＡ　ＵＧＡＣＵＵＡＣＡＡ　ＧＧＣＡＧＣＵＣＵ Ａ　ＧＡＩＪＣＵＵＡＧＣＣＡＣＵＵＵＵＵＡＡＡ１２５１　ＡＧＭＡＡＧ＋ｌ ；ＧＧ　ＧＧＡＣＵＧＧＡＡＧ　ＧＧＣＵＡＡＩＪｔｊＣＡ　ＣＵＣＣＣＡＡＣ ＧＡ　ＡにＡＣＡＡにＡｔ１Ａ１３０１　ＵＣＣＵＵＧＡＵＣＵ　Ｇ［ＪＧＧＡ ｔＪＣＵＡＣＣＡＣＡＣＡＣＡＡＧ　ＧＣＵＡＣＵＵＣＣＣＵＧＡＵＵＡＧＣＪ ｋＧ１８０１　ＧＣＣＵＵＧＡＧＴＪＧ　ＣＵＧＵＣＡＡＡＡＡ　〜五〜いλｖ 講ＡＡＡ手続補正書 平成４年１１月λ日−

Claims (27)

【特許請求の範囲】
1. １．下記ヌクレオチド配列のいずれかに相当する、少なくとも６の連続サブユニ ットを含むオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド同族体：【配列があり ます】
2. ２．少なくとも約１０の連続サブユニットを含む、請求の範囲第１項に記載のオ リゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド同族体。
3. ３．少なくとも約１５の連続サブユニットを含む、請求の範囲第１項に記載のオ リゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド同族体。
4. ４．実質的に上記配列の１つに相当する、請求の範囲第１項に記載のオリゴヌク レオチドまたはオリゴヌクレオチド同族体。
5. ５．薬剤学的に受容しうるキャリヤー中における、請求の範囲第１項に記載のオ リゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド同族体。
6. ６．ＨＩＶのｔａｔｍＲＮＡの少なくとも１部分と結合しうるオリゴヌクレオチ ドまたはオリゴヌクレオチド同族体。
7. ７．少なくとも約６のサブユニットを含む、請求の範囲第６項に記載のオリゴヌ クレオチドまたはオリゴヌクレオチド同族体。
8. ８．少なくとも約１５のサブユニットを含む、請求の範囲第６項に記載のオリゴ ヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド同族体。
9. ９．少なくとも約８−約５０のサブユニットを含む、請求の範囲第６項に記載の オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド同族体。
10. １０．少なくとも約１０−約２０のサブユニットを含む、請求の範囲第６項に記 載のオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド同族体。
11. １１．該部分とヘテロ２本鎖を形成しうる、請求の範囲第６項に記載のオリゴヌ クレオチドまたはオリゴヌクレオチド同族体。
12. １２．ＨＩＶｔａｔ遺伝子の発現を特色とする疾病を伴う疑いのある動物の処置 法において、該動物を、下記ヌクレオチド配列のいずれかに相当する、少なくと も６の連続サブユニットを含むオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド同 族体と接触させることよりなる方法：【配列があります】
13. １３．オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド同族体が少なくとも約１０ の連続サブユニットを含む、請求の範囲第１２項に記載の方法。
14. １４．オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド同族体が少なくとも約１５ の連続サブユニットを含む、請求の範囲第１２項に記載の方法。
15. １５．オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド同族体が実質的に上記配列 の１つに相当する、請求の範囲第１２項に記載の方法。
16. １６．オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド同族体が薬剤学的に受容し うるキャリヤー中にある、請求の範囲第１２項に記載の方法。
17. １７．ＨＩＶｔａｔ遺伝子の発現を特色とする疾病を伴う疑いのある動物の処置 法において、該動物をＨＩＶのｔａｔｍＲＮＡの少なくとも１部分と結合しうる オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド同族体と接触させることよりなる 方法。
18. １８．オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド同族体が少なくとも約６の サブユニットを含む、請求の範囲第１７項に記載の方法。
19. １９．オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド同族体が少なくとも約１５ のサブユニットを含む、請求の範囲第１７項に記載の方法。
20. ２０．オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド同族体が少なくとら約８− 約５０のサブユニットを含む、請求の範囲第１７項に記載の方法。
21. ２１．オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド同族体が少なくとも約１０ −約２０のサブユニットを含む、請求の範囲第１７項に記載の方法。
22. ２２．オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド同族体が該部分とヘテロ２ 本鎖を形成しうる、請求の範囲第１７項に記載の方法。
23. ２３．オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド同族体が薬剤学的に受容し うるキャリヤー中にある、請求の範囲第１７項に記載の方法。
24. ２４．ＨＩＶ感染の疑いのある動物の処置法において、該動物をＨＩＶのｔａｔ ｍＲＮＡの少なくとも１部分と結合しうるオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌク レオチド同族体と接触させることよりなる方法。
25. ２５．動物がヒトである、請求の範囲第２４項に記載の方法。
26. ２６．ＨＩＶｔａｔ遺伝子の発現を変調させる方法において、ＨＩＶに感染した 細胞または動物を、下記ヌクレオチド配列のいずれかに相当する、少なくとも６ の連続サブユニットを含むオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド同族体 と接触させることよりなる方法： 【配列があります】
27. ２７．ＨＩＶｔａｔ遺伝子の発現を変調させる方法において、ＨＩＶに感染した 細胞または動物を、ＨＩＶのｔａｔｍＲＮＡの少なくとも１部分と結合しうるオ リゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド同族体と接触させることよりなる方 法。