JPH06213900A - 磁性粒子を用いた沈殿分画測定方法および測定装置 - Google Patents
磁性粒子を用いた沈殿分画測定方法および測定装置Info
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- JPH06213900A JPH06213900A JP808493A JP808493A JPH06213900A JP H06213900 A JPH06213900 A JP H06213900A JP 808493 A JP808493 A JP 808493A JP 808493 A JP808493 A JP 808493A JP H06213900 A JPH06213900 A JP H06213900A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】本発明は、磁性粒子を用いた沈殿分画測定に関
し、臨床検査に適用し得る簡便な沈殿分離操作の測定法
を提供するものである。さらに自動分析装置に組み込む
のに適した測定法を提供する。 【構成】沈殿分画測定は、次の如き工程により実行され
る。（１）試料（Ａ），沈殿試薬（Ｂ），磁性体粒子
（Ｃ）の混合工程、（２）混合液の静置工程、（３）磁
石５２による不溶性物質の捕捉，除去工程、（４）上清
を用いた分析工程。このような測定方法により臨床検査
の効率化が達成される。
し、臨床検査に適用し得る簡便な沈殿分離操作の測定法
を提供するものである。さらに自動分析装置に組み込む
のに適した測定法を提供する。 【構成】沈殿分画測定は、次の如き工程により実行され
る。（１）試料（Ａ），沈殿試薬（Ｂ），磁性体粒子
（Ｃ）の混合工程、（２）混合液の静置工程、（３）磁
石５２による不溶性物質の捕捉，除去工程、（４）上清
を用いた分析工程。このような測定方法により臨床検査
の効率化が達成される。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、被測定物質を選択的に
測定するために沈殿分画操作を必要とする測定方法およ
び測定装置に関するものであり、特に体液中の高比重リ
ポ蛋白（以下ＨＤＬと略称する）を選択的に分画測定す
るのに適した測定方法および測定装置に関するものであ
る。
測定するために沈殿分画操作を必要とする測定方法およ
び測定装置に関するものであり、特に体液中の高比重リ
ポ蛋白（以下ＨＤＬと略称する）を選択的に分画測定す
るのに適した測定方法および測定装置に関するものであ
る。
【０００２】
【従来の技術】近年、臨床検査の対象がより細分化され
てきており、従来総量としてのみ捉えていた測定対象を
構成要素に分離する（分画と呼ぶ）ことにより、より的
確な診断を行うことが可能となった。その例としては、
蛋白分析におけるアルブミンやグロブリンの比を求める
蛋白分画や、酵素活性測定におけるアイソザイム分画な
どが挙げられる。
てきており、従来総量としてのみ捉えていた測定対象を
構成要素に分離する（分画と呼ぶ）ことにより、より的
確な診断を行うことが可能となった。その例としては、
蛋白分析におけるアルブミンやグロブリンの比を求める
蛋白分画や、酵素活性測定におけるアイソザイム分画な
どが挙げられる。
【０００３】その内、分画を沈殿処理で行う測定には、
リポ蛋白コレステロール分画やアルカリフォスファター
ゼアイソザイム分画がある。血清中の高比重リポ蛋白(H
DL）中に含有されるコレステロールは、冠動脈性心疾患
の危険因子として診断に重要な役割を果たすことが認め
られ、血清リポ蛋白中からＨＤＬを分画し、これに含有
されるコレステロールの測定が重要な脂質検査の一つに
なっている。
リポ蛋白コレステロール分画やアルカリフォスファター
ゼアイソザイム分画がある。血清中の高比重リポ蛋白(H
DL）中に含有されるコレステロールは、冠動脈性心疾患
の危険因子として診断に重要な役割を果たすことが認め
られ、血清リポ蛋白中からＨＤＬを分画し、これに含有
されるコレステロールの測定が重要な脂質検査の一つに
なっている。
【０００４】血清中には大別して４種のリポ蛋白が存在
しており、最も直径が大きくかつ比重が低いのはカイロ
ミクロンであり、ついで超低比重リポ蛋白（以下ＶＬＤ
Ｌと略称する）、低比重リポ蛋白（以下ＬＤＬと略称す
る），ＨＤＬの順に直径は小さく、比重は重くなってい
く。
しており、最も直径が大きくかつ比重が低いのはカイロ
ミクロンであり、ついで超低比重リポ蛋白（以下ＶＬＤ
Ｌと略称する）、低比重リポ蛋白（以下ＬＤＬと略称す
る），ＨＤＬの順に直径は小さく、比重は重くなってい
く。
【０００５】ＨＤＬコレステロール測定法の研究の総論
は、ワーニックらによる、クリニカルケミストリー（Wa
rnick,G.R.,et al,Clin.Chem.)、第２５巻、５９６ペー
ジ、１９７９年に詳しい。ＨＤＬコレステロール測定の
為に各種リポ蛋白中よりHDLを分離する手段としては、
超遠心法，電気泳動法，イオン交換やゲル浸透クロマト
グラフィーおよび沈殿法が提唱されている。沈殿試薬を
用いたＨＤＬコレステロールの測定は、試料（血清）に
沈殿試薬を加え混合静置後、遠心分離によりリポ蛋白中
のカイロミクロン，ＶＬＤＬ，ＬＤＬを沈殿させ、上清
中に残存するＨＤＬを分画し、その中のコレステロール
を公知のコレステロール測定法にて測定することによ
り、ＨＤＬコレステロールの濃度を求めている。沈殿試
薬としては、硫酸多糖類（ヘパリンなど），ポリアニオ
ン（リンタングステン酸など），界面活性剤（コール酸
ナトリウムなど）、および二価のカチオン（マグネシウ
ム，カルシウムなど）と共存させたものが用いられてい
る。ＨＤＬの分離を遠心操作を介さずに行う方法は、特
開昭63−18269 号に示されている。この方法は、高比重
リポ蛋白分画用沈殿試薬及びそれを用いた高比重リポ蛋
白コレステロールの測定方法に関し、上述の沈殿試薬の
うち、硫酸多糖類に高比重の不溶性担体を結合し、自然
落下により沈殿を除去する方法である。
は、ワーニックらによる、クリニカルケミストリー（Wa
rnick,G.R.,et al,Clin.Chem.)、第２５巻、５９６ペー
ジ、１９７９年に詳しい。ＨＤＬコレステロール測定の
為に各種リポ蛋白中よりHDLを分離する手段としては、
超遠心法，電気泳動法，イオン交換やゲル浸透クロマト
グラフィーおよび沈殿法が提唱されている。沈殿試薬を
用いたＨＤＬコレステロールの測定は、試料（血清）に
沈殿試薬を加え混合静置後、遠心分離によりリポ蛋白中
のカイロミクロン，ＶＬＤＬ，ＬＤＬを沈殿させ、上清
中に残存するＨＤＬを分画し、その中のコレステロール
を公知のコレステロール測定法にて測定することによ
り、ＨＤＬコレステロールの濃度を求めている。沈殿試
薬としては、硫酸多糖類（ヘパリンなど），ポリアニオ
ン（リンタングステン酸など），界面活性剤（コール酸
ナトリウムなど）、および二価のカチオン（マグネシウ
ム，カルシウムなど）と共存させたものが用いられてい
る。ＨＤＬの分離を遠心操作を介さずに行う方法は、特
開昭63−18269 号に示されている。この方法は、高比重
リポ蛋白分画用沈殿試薬及びそれを用いた高比重リポ蛋
白コレステロールの測定方法に関し、上述の沈殿試薬の
うち、硫酸多糖類に高比重の不溶性担体を結合し、自然
落下により沈殿を除去する方法である。
【０００６】一方、アルカリフォスファターゼアイソザ
イム分画は、特に骨性ＡＬＰが骨疾患に有用であり、電
気泳動法の他に近年沈殿法が提唱されている。ロザルキ
らは、クリニカルケミストリー（Rosalki,S.B.,et al,C
lin.Chem.)、第３０巻、1182ページ、１９８４年の中
で、血清中のアルカリフォスファターゼ（ＡＬＰ）を、
小麦由来レクチンによって主に骨性ＡＬＰを沈降させ、
分離する。上清中の残存ＡＬＰを全ＡＬＰより引くこと
により骨性ＡＬＰを求める。
イム分画は、特に骨性ＡＬＰが骨疾患に有用であり、電
気泳動法の他に近年沈殿法が提唱されている。ロザルキ
らは、クリニカルケミストリー（Rosalki,S.B.,et al,C
lin.Chem.)、第３０巻、1182ページ、１９８４年の中
で、血清中のアルカリフォスファターゼ（ＡＬＰ）を、
小麦由来レクチンによって主に骨性ＡＬＰを沈降させ、
分離する。上清中の残存ＡＬＰを全ＡＬＰより引くこと
により骨性ＡＬＰを求める。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】ＨＤＬにおいては、長
年超遠心法が唯一の手段であったが、高価な装置を必要
とし、かつ長時間を要するなどの欠点を有していた。電
気泳動法は、臨床的に最も重要である濃度２０−４０mg
／dl付近での再現性に欠ける欠点があった。イオン交換
やゲル浸透クロマトグラフィーは、複雑な実験装置を要
し、かつ長時間を要する欠点があった。ＨＤＬの分画に
リポ蛋白を選択的に沈殿させる方法は、日常の臨床検査
では最も広く用いられている。しかしながら、沈殿試薬
を用いた方法によるＨＤＬ以外のリポ蛋白の沈殿は、比
重が水の値に近いためＨＤＬが残存する上清との分離
は、短時間の静置では不可能であり、遠心分離を必要と
するため、実験操作の工程が他の臨床検査の測定項目よ
り複雑となり、かつコレステロール測定としてこれを捉
えると試料が元の血清ではなく上清液となるため多項目
自動分析装置による一括測定ができない点が効率の上で
大きな欠点となっていた。特開昭63−18269 号による方
法は、上清液中にカイロミクロン，ＶＬＤＬ，ＬＤＬが
浮遊沈殿物として残存しやすく、ＨＤＬの正確性を欠く
欠点があった。ＡＬＰアイソザイムの測定法である電気
泳動法と沈殿法についても、欠点はＨＤＬと同様であっ
た。
年超遠心法が唯一の手段であったが、高価な装置を必要
とし、かつ長時間を要するなどの欠点を有していた。電
気泳動法は、臨床的に最も重要である濃度２０−４０mg
／dl付近での再現性に欠ける欠点があった。イオン交換
やゲル浸透クロマトグラフィーは、複雑な実験装置を要
し、かつ長時間を要する欠点があった。ＨＤＬの分画に
リポ蛋白を選択的に沈殿させる方法は、日常の臨床検査
では最も広く用いられている。しかしながら、沈殿試薬
を用いた方法によるＨＤＬ以外のリポ蛋白の沈殿は、比
重が水の値に近いためＨＤＬが残存する上清との分離
は、短時間の静置では不可能であり、遠心分離を必要と
するため、実験操作の工程が他の臨床検査の測定項目よ
り複雑となり、かつコレステロール測定としてこれを捉
えると試料が元の血清ではなく上清液となるため多項目
自動分析装置による一括測定ができない点が効率の上で
大きな欠点となっていた。特開昭63−18269 号による方
法は、上清液中にカイロミクロン，ＶＬＤＬ，ＬＤＬが
浮遊沈殿物として残存しやすく、ＨＤＬの正確性を欠く
欠点があった。ＡＬＰアイソザイムの測定法である電気
泳動法と沈殿法についても、欠点はＨＤＬと同様であっ
た。
【０００８】本発明は、上述したような従来の問題点に
着目してなされたもので、その目的は、ＨＤＬ沈殿コレ
ステロール分画測定方法において、遠心分離操作をする
ことなく、短時間にかつ簡便に分離が達成できる測定方
法を提供することにある。
着目してなされたもので、その目的は、ＨＤＬ沈殿コレ
ステロール分画測定方法において、遠心分離操作をする
ことなく、短時間にかつ簡便に分離が達成できる測定方
法を提供することにある。
【０００９】本発明の他の目的は、新規な測定方法を自
動分析装置内に組み込むことによりＨＤＬコレステロー
ルを他の臨床検査項目と同様に一つの試料（血清）から
分析できる多項目自動分析装置を提供することにある。
動分析装置内に組み込むことによりＨＤＬコレステロー
ルを他の臨床検査項目と同様に一つの試料（血清）から
分析できる多項目自動分析装置を提供することにある。
【００１０】上記において、測定対象をＨＤＬ（コレス
テロール）とすることは、本発明を特徴づける一つの特
徴に過ぎず、ＡＬＰアイソザイムについても本発明の課
題は同様である。
テロール）とすることは、本発明を特徴づける一つの特
徴に過ぎず、ＡＬＰアイソザイムについても本発明の課
題は同様である。
【００１１】
【課題を解決するための手段】本発明による解決手段の
概念は、試料と沈殿試薬と磁性体粒子の混合液中で試料
中の成分の一部と沈殿試薬に選択的な沈殿反応をなさし
め、該混合液中に拡散した磁性体粒子と該沈殿物（混合
不溶物）を磁力を用いて収斂させることにより捕捉また
は除去し、上清中の残存被測定物を分析することによ
り、分画することを特徴とする。
概念は、試料と沈殿試薬と磁性体粒子の混合液中で試料
中の成分の一部と沈殿試薬に選択的な沈殿反応をなさし
め、該混合液中に拡散した磁性体粒子と該沈殿物（混合
不溶物）を磁力を用いて収斂させることにより捕捉また
は除去し、上清中の残存被測定物を分析することによ
り、分画することを特徴とする。
【００１２】
【作用】本発明による測定方法は、以下の工程を具備す
る。
る。
【００１３】（１）反応容器に試料を注入し、それに沈
殿試薬と磁性体粒子を添加する工程。 （２）上記（１）の磁性体粒子を含む混合液を一定時間
沈殿生成のため静置する工程。
殿試薬と磁性体粒子を添加する工程。 （２）上記（１）の磁性体粒子を含む混合液を一定時間
沈殿生成のため静置する工程。
【００１４】（３）沈殿生成後、沈殿物と磁性体粒子の
混合不溶物を磁力を用いて捕捉または除去する工程。
混合不溶物を磁力を用いて捕捉または除去する工程。
【００１５】（４）上記（３）の捕捉された沈殿物と磁
性体粒子の混合不溶物を除く上清の一部または全てを測
定対象を測定する分析の試料に供する工程。
性体粒子の混合不溶物を除く上清の一部または全てを測
定対象を測定する分析の試料に供する工程。
【００１６】上記（１）の工程は、試料の注入と、沈殿
試薬および磁性体粒子の添加する順序はどちらが先でも
構わない。沈殿試薬としては、ＨＤＬについては沈殿剤
としてデキストラン硫酸，マグネシウムイオン，リンタ
ングステン酸を含有する市販の『ＨＤＬ−Ｃ・２第一』
（第一化学薬品社製の商品名）や『イアトロリポハイコ
レスト』（ヤトロン社製の商品名）が使用可能である。
また、ＡＬＰアイソザイムの沈殿試薬としては、沈殿剤
としてレクチンを含有する『アイソＡＬＰ測定用試薬』
（ベーリンガーマンハイム山之内社製の商品名）が使え
る。磁性体粒子としては、市販の『DYNABEADS Ｍ−２
８０』(ＤＹＮＡＬ社製の商品名）や『FERRI SPHERE
１００』（日本ペイント社製の商品名）を表面を化学的
に修飾することなく使える。
試薬および磁性体粒子の添加する順序はどちらが先でも
構わない。沈殿試薬としては、ＨＤＬについては沈殿剤
としてデキストラン硫酸，マグネシウムイオン，リンタ
ングステン酸を含有する市販の『ＨＤＬ−Ｃ・２第一』
（第一化学薬品社製の商品名）や『イアトロリポハイコ
レスト』（ヤトロン社製の商品名）が使用可能である。
また、ＡＬＰアイソザイムの沈殿試薬としては、沈殿剤
としてレクチンを含有する『アイソＡＬＰ測定用試薬』
（ベーリンガーマンハイム山之内社製の商品名）が使え
る。磁性体粒子としては、市販の『DYNABEADS Ｍ−２
８０』(ＤＹＮＡＬ社製の商品名）や『FERRI SPHERE
１００』（日本ペイント社製の商品名）を表面を化学的
に修飾することなく使える。
【００１７】上記（２）の工程では、磁性体粒子を混在
させた状態で沈殿形成が進む。磁性体粒子と沈殿物との
関係は、磁性体粒子を一切化学修飾せず、かつ表面に磁
性体であるフェライトを露出させた状態でも、フェライ
トをラテックスによりコーティングした状態でも同じ結
果が得られることから、化学的結合が存在すると結論づ
けることはできない。
させた状態で沈殿形成が進む。磁性体粒子と沈殿物との
関係は、磁性体粒子を一切化学修飾せず、かつ表面に磁
性体であるフェライトを露出させた状態でも、フェライ
トをラテックスによりコーティングした状態でも同じ結
果が得られることから、化学的結合が存在すると結論づ
けることはできない。
【００１８】上記（３）の工程は、沈殿物と磁性体粒子
の混合不溶物の分離工程である。混合不溶物の磁力によ
る分離は、沈殿物の間に拡散された磁性体粒子に磁石を
近づけ、磁性体粒子間に沈殿物を物理的に捕捉した状態
で収斂させることによりなされる。磁石を反応容器の外
側より近づけて反応容器内の底面あるいは側面に混合不
溶物を捕捉することができる。あるいは、磁石を反応容
器内に挿入し混合不溶物を磁石表面に捕捉することも可
能である。磁石は、原則的には永久磁石でも電磁石でも
使用できる。永久磁石は反応容器外側からの接近に適
し、電磁石は反応容器内への挿入に適する。
の混合不溶物の分離工程である。混合不溶物の磁力によ
る分離は、沈殿物の間に拡散された磁性体粒子に磁石を
近づけ、磁性体粒子間に沈殿物を物理的に捕捉した状態
で収斂させることによりなされる。磁石を反応容器の外
側より近づけて反応容器内の底面あるいは側面に混合不
溶物を捕捉することができる。あるいは、磁石を反応容
器内に挿入し混合不溶物を磁石表面に捕捉することも可
能である。磁石は、原則的には永久磁石でも電磁石でも
使用できる。永久磁石は反応容器外側からの接近に適
し、電磁石は反応容器内への挿入に適する。
【００１９】上記（４）の工程は、捕捉された沈殿物と
磁性体粒子の混合不溶物と上清との分離工程である。上
記（３）の工程で混合不溶物を反応容器底面または側面
に捕捉した場合には、上清の一部をピペットで吸引しこ
れを被測定物質分析の試料とすることができる。磁石を
反応容器内に挿入し磁石表面に混合不溶物を捕捉する場
合は、磁石を外に出した後の液（上清と同組成）を被測
定物質分析の試料とすることができる。
磁性体粒子の混合不溶物と上清との分離工程である。上
記（３）の工程で混合不溶物を反応容器底面または側面
に捕捉した場合には、上清の一部をピペットで吸引しこ
れを被測定物質分析の試料とすることができる。磁石を
反応容器内に挿入し磁石表面に混合不溶物を捕捉する場
合は、磁石を外に出した後の液（上清と同組成）を被測
定物質分析の試料とすることができる。
【００２０】
【実施例】以下、本発明の実施例を詳細に説明する。
【００２１】実施例１（図１）磁性粒子を用いた沈殿分画法によるＨＤＬコレステロー
ルの検出の原法 （１）３ｍｌ容量の試験管を用意しこれを反応容器５１
とした。これに血清(Ａ)５０μｌ、沈殿試薬（Ｂ)(ＨＤ
Ｌ−Ｃ・２第一）５０μｌおよび磁性体粒子（Ｃ)(DYNA
BEADS Ｍ−２８０、２０ｍｇ又はFERRI SPHERE １０
０，１００μｌ）を加え、混合した。
ルの検出の原法 （１）３ｍｌ容量の試験管を用意しこれを反応容器５１
とした。これに血清(Ａ)５０μｌ、沈殿試薬（Ｂ)(ＨＤ
Ｌ−Ｃ・２第一）５０μｌおよび磁性体粒子（Ｃ)(DYNA
BEADS Ｍ−２８０、２０ｍｇ又はFERRI SPHERE １０
０，１００μｌ）を加え、混合した。
【００２２】（２）上記の試験管を室温（２５℃）の条
件で５分間静置した。
件で５分間静置した。
【００２３】（３）上記の試験管の下に永久磁石５２
（５００ガウス）を１分間密着させ、混合不溶物を試験
管底部に捕捉した。
（５００ガウス）を１分間密着させ、混合不溶物を試験
管底部に捕捉した。
【００２４】（４）上記の試験管の上清の５０μｌを別
の試験管５３にＨＤＬコレステロール測定の試料として
分注し、これにコレステロール測定検査薬（Ｄ)(オート
セラＣＨＯ・２第一）を加えた。コレステロール測定検
査薬は、コレステロールエステラーゼ，コレステロール
オキシダーゼ，パーオキシダーゼをカップリングさせ、
遊離型コレステロールの酸化反応の過程で生ずる過酸化
水素をパーオキシダーゼの存在下で４−アミノアンチピ
リンとフェノールと反応させて赤色色素を生じさせる。
試料と試薬を混和後、３７℃で１０分間反応させた後、
単色光波長５４５ｎｍで吸光度を測定し濃度に換算し
た。この実施例１による測定結果と従来の沈殿試薬およ
び遠心分離工程を用いた測定結果の患者検体を対象とし
たＨＤＬコレステロール相関分析図を図３に示す。
の試験管５３にＨＤＬコレステロール測定の試料として
分注し、これにコレステロール測定検査薬（Ｄ)(オート
セラＣＨＯ・２第一）を加えた。コレステロール測定検
査薬は、コレステロールエステラーゼ，コレステロール
オキシダーゼ，パーオキシダーゼをカップリングさせ、
遊離型コレステロールの酸化反応の過程で生ずる過酸化
水素をパーオキシダーゼの存在下で４−アミノアンチピ
リンとフェノールと反応させて赤色色素を生じさせる。
試料と試薬を混和後、３７℃で１０分間反応させた後、
単色光波長５４５ｎｍで吸光度を測定し濃度に換算し
た。この実施例１による測定結果と従来の沈殿試薬およ
び遠心分離工程を用いた測定結果の患者検体を対象とし
たＨＤＬコレステロール相関分析図を図３に示す。
【００２５】実施例２（図２）磁性粒子捕捉用磁石を反応容器内に挿入する実施例 （１）３ｍｌ容量の試験管を用意しこれを反応容器５１
とした。これに血清(Ａ)５０μｌ、沈殿試薬（Ｂ）（Ｈ
ＤＬ−Ｃ・２第一）５０μｌおよび磁性体粒子（Ｃ）
（実施例１と同じ）を加え、混合した。
とした。これに血清(Ａ)５０μｌ、沈殿試薬（Ｂ）（Ｈ
ＤＬ−Ｃ・２第一）５０μｌおよび磁性体粒子（Ｃ）
（実施例１と同じ）を加え、混合した。
【００２６】（２）上記の試験管５１を室温（２５℃）
の条件で５分間静置した。
の条件で５分間静置した。
【００２７】（３）上記の試験管５１に電磁石５４（通
電時４００ガウス）を試験管上部から挿入し、１５秒間
通電することにより、混合不溶物を電磁石表面に捕捉し
た。
電時４００ガウス）を試験管上部から挿入し、１５秒間
通電することにより、混合不溶物を電磁石表面に捕捉し
た。
【００２８】（４）上記の試験管の上清の５０μｌを別
の試験管５３にＨＤＬコレステロール測定の試料として
分注し、これにコレステロール測定検査薬（Ｄ）（実施
例１と同じ）を加えた。混和後、３７℃で１０分間反応
させた後、波長５４５ｎｍでの吸光度を測定し濃度に換
算した。実施例１と同様の結果が得られた。
の試験管５３にＨＤＬコレステロール測定の試料として
分注し、これにコレステロール測定検査薬（Ｄ）（実施
例１と同じ）を加えた。混和後、３７℃で１０分間反応
させた後、波長５４５ｎｍでの吸光度を測定し濃度に換
算した。実施例１と同様の結果が得られた。
【００２９】実施例３（図４）自動分析装置による完全自動化の実施例−１ 本発明を適用した自動分析装置の概略構成図を図４に示
す。図４において、反応ディスク１は、図示していない
駆動機構によって回転と停止を行う。反応ディスク１の
円周に沿って１２０個の反応容器２が配列されており、
サークル状の反応ラインを形成している。反応容器２の
列は、保温槽３によって一定温度に保たれる。保温槽３
へは恒温流体供給装置４からの恒温流体が供給される。
反応ライン上には、サンプルが添加される分注位置３
１，２個所の試薬分注位置，２個所の撹拌位置，測光位
置３３，洗浄位置などがあり、これらは一定の場所に配
置されている。
す。図４において、反応ディスク１は、図示していない
駆動機構によって回転と停止を行う。反応ディスク１の
円周に沿って１２０個の反応容器２が配列されており、
サークル状の反応ラインを形成している。反応容器２の
列は、保温槽３によって一定温度に保たれる。保温槽３
へは恒温流体供給装置４からの恒温流体が供給される。
反応ライン上には、サンプルが添加される分注位置３
１，２個所の試薬分注位置，２個所の撹拌位置，測光位
置３３，洗浄位置などがあり、これらは一定の場所に配
置されている。
【００３０】サンプルディスク５は、駆動機構によって
回転され、円周上に多数配置されたサンプルカップ３５
を順次サンプル吸入位置に停止させることができる。サ
ンプルディスク５上には、多数の分析すべき血清サンプ
ルカップの他に、標準液やコントロール血清用のサンプ
ルカップが保持されている。吸排ポンプを備えたサンプ
ル分注機構２１は、上下動および旋回動作可能なサンプ
ルピペティング機構７に保持されているサンプル分注用
ノズル８に接続されている。ノズル８は、サンプルディ
スク５上のサンプル吸引位置にあるサンプルカップ３５
から所定量のサンプルを吸引保持し、反応ディスク１上
へ旋回してサンプル分注位置３１に停止している反応容
器２内へ、その被検項目に応じた量のサンプルを吐出す
る。
回転され、円周上に多数配置されたサンプルカップ３５
を順次サンプル吸入位置に停止させることができる。サ
ンプルディスク５上には、多数の分析すべき血清サンプ
ルカップの他に、標準液やコントロール血清用のサンプ
ルカップが保持されている。吸排ポンプを備えたサンプ
ル分注機構２１は、上下動および旋回動作可能なサンプ
ルピペティング機構７に保持されているサンプル分注用
ノズル８に接続されている。ノズル８は、サンプルディ
スク５上のサンプル吸引位置にあるサンプルカップ３５
から所定量のサンプルを吸引保持し、反応ディスク１上
へ旋回してサンプル分注位置３１に停止している反応容
器２内へ、その被検項目に応じた量のサンプルを吐出す
る。
【００３１】試薬供給装置は、各被検項目に特有の反応
を生じさせるための試薬を収容した多数の試薬液槽４０
Ａ，４０Ｂを保持している試薬はディスク９Ａ，９Ｂ
と、試薬ピペッティングノズル４１Ａ，４１Ｂを上下動
および旋回動させる機構１０Ａ，１０Ｂと、ノズル４１
Ａ，４１Ｂに吸排動作をさせるためのポンプを備えた試
薬分注機構１９とを含む。
を生じさせるための試薬を収容した多数の試薬液槽４０
Ａ，４０Ｂを保持している試薬はディスク９Ａ，９Ｂ
と、試薬ピペッティングノズル４１Ａ，４１Ｂを上下動
および旋回動させる機構１０Ａ，１０Ｂと、ノズル４１
Ａ，４１Ｂに吸排動作をさせるためのポンプを備えた試
薬分注機構１９とを含む。
【００３２】この試薬供給装置は、被検項目に応じて４
種類の試薬まで反応容器に加えることができる。第１試
薬と第４試薬は試薬ディスク９Ａ上から選択され、第２
試薬と第３試薬は試薬ディスク９Ｂ上から選択される。
選択された試薬液槽は、試薬ディスク９Ａ，９Ｂの回転
によって所定の吸入位置に位置付けられ、ノズル41Ａ，
Ｂによって必要な試薬が反応容器に分注される。試薬添
加の後、反応容器内の液は撹拌機構１１Ａ，１１Ｂによ
り撹拌される。
種類の試薬まで反応容器に加えることができる。第１試
薬と第４試薬は試薬ディスク９Ａ上から選択され、第２
試薬と第３試薬は試薬ディスク９Ｂ上から選択される。
選択された試薬液槽は、試薬ディスク９Ａ，９Ｂの回転
によって所定の吸入位置に位置付けられ、ノズル41Ａ，
Ｂによって必要な試薬が反応容器に分注される。試薬添
加の後、反応容器内の液は撹拌機構１１Ａ，１１Ｂによ
り撹拌される。
【００３３】反応ラインを光束が横切るように多波長光
度計１２が配置されている。光源１３からの白色光が測
光位置３３を通り多波長光度計１２の分光部に導かれ、
分光された多数の波長の光が同時にフォトダイオードア
レイからなる光検出器によって受光される。受光信号の
内の必要なものだけが対数変換器１７で変換され、アナ
ロデジタル変換器１８によってデジタル信号に変換さ
れ、被検項目の濃度演算や活性値演算に用いられる。マ
イクロコンピュータ１５は、測光データを演算してその
結果をプリンタ２２およびＣＲＴ２３に出力することが
できる。また、マイクロコンピュータ１５は、インター
フェース１６を介して分析装置内の各機構部を所望のプ
ログラムに従って動作させることができ、操作パネル２
５から入力される分析条件および各種の情報を処理し、
および自身の持っている記憶部やフロッピーディスク２
４のようなメモリにそれらの情報，データを記憶させる
ことができる。
度計１２が配置されている。光源１３からの白色光が測
光位置３３を通り多波長光度計１２の分光部に導かれ、
分光された多数の波長の光が同時にフォトダイオードア
レイからなる光検出器によって受光される。受光信号の
内の必要なものだけが対数変換器１７で変換され、アナ
ロデジタル変換器１８によってデジタル信号に変換さ
れ、被検項目の濃度演算や活性値演算に用いられる。マ
イクロコンピュータ１５は、測光データを演算してその
結果をプリンタ２２およびＣＲＴ２３に出力することが
できる。また、マイクロコンピュータ１５は、インター
フェース１６を介して分析装置内の各機構部を所望のプ
ログラムに従って動作させることができ、操作パネル２
５から入力される分析条件および各種の情報を処理し、
および自身の持っている記憶部やフロッピーディスク２
４のようなメモリにそれらの情報，データを記憶させる
ことができる。
【００３４】反応ディスク１上の分注位置３１に停止し
ている反応容器２に、サンプル分注ノズル８によってサ
ンプルカップ３５からサンプルが添加される際には、所
定の試薬添加位置に停止している反応容器に各被検項目
に応じた試薬液が分注される。その後、反応ディスク１
は、１回転プラス１容器分の距離を回動され、先の反応
容器の隣の反応容器が分注位置３１に停止される。この
回動動作の間に、光度計１２は測光位置３３を通過する
反応容器をすべて測光する。このような回動動作は、新
しい反応容器にサンプルが分注される都度行われる。す
なわち、反応ライン上の１つの反応容器に着目すれば、
その反応容器から分注位置３１を出発して次々と回動と
停止を繰り返して反応ライン上を進行し、測光位置３３
を過ぎた位置に停止されるようになるまでの間は、回動
ごとに光度計による測光が行われることになる。
ている反応容器２に、サンプル分注ノズル８によってサ
ンプルカップ３５からサンプルが添加される際には、所
定の試薬添加位置に停止している反応容器に各被検項目
に応じた試薬液が分注される。その後、反応ディスク１
は、１回転プラス１容器分の距離を回動され、先の反応
容器の隣の反応容器が分注位置３１に停止される。この
回動動作の間に、光度計１２は測光位置３３を通過する
反応容器をすべて測光する。このような回動動作は、新
しい反応容器にサンプルが分注される都度行われる。す
なわち、反応ライン上の１つの反応容器に着目すれば、
その反応容器から分注位置３１を出発して次々と回動と
停止を繰り返して反応ライン上を進行し、測光位置３３
を過ぎた位置に停止されるようになるまでの間は、回動
ごとに光度計による測光が行われることになる。
【００３５】停止位置が測光位置３３を過ぎた反応容器
にたいしては、洗浄液による洗浄動作がなされる。洗浄
機構１４は、複数の吸引排出用ノズルと、複数の洗浄液
吐出用ノズルを備えており、反応容器内の使用済み反応
液の排出と反応容器の洗浄を行う。洗浄ポンプ２０は、
洗浄機構１４への洗浄液の供給および洗浄機構１４から
の液の廃棄を受け持つ。洗浄操作の間も反応ディスク１
の回動と停止は、２０秒間隔で継続される。この自動分
析装置では、洗浄工程において反応容器に最後に添加さ
れたイオン交換水を反応容器に留めたまま測光し、次回
の分析のセルブランク値として演算に使用する。
にたいしては、洗浄液による洗浄動作がなされる。洗浄
機構１４は、複数の吸引排出用ノズルと、複数の洗浄液
吐出用ノズルを備えており、反応容器内の使用済み反応
液の排出と反応容器の洗浄を行う。洗浄ポンプ２０は、
洗浄機構１４への洗浄液の供給および洗浄機構１４から
の液の廃棄を受け持つ。洗浄操作の間も反応ディスク１
の回動と停止は、２０秒間隔で継続される。この自動分
析装置では、洗浄工程において反応容器に最後に添加さ
れたイオン交換水を反応容器に留めたまま測光し、次回
の分析のセルブランク値として演算に使用する。
【００３６】上述した自動分析装置において実施例１に
基づく特徴は、以下の如く実現される。サンプル（血
清）４０μｌが分注された後２０秒後に第１試薬として
実施例１で述べた磁性体粒子２０μｌを分注し、更に
１.５ 分後に第２試薬として沈殿試薬４０μｌを分注す
る。自動分析装置のマイクロコンピュータは、当該サン
プルが分注された反応容器を記憶しており、ＨＤＬの沈
殿に供された反応容器は最終測光位置３３を過ぎても洗
浄工程が行われない。当該反応容器は、混合不溶物が入
ったまま次の周回のサンプル分注位置３１に到達する。
サンプル分注位置３１の下面には永久磁石４２（８００
ガウス）を埋設し、混合不用物を反応容器内の底面に捕
捉する。捕捉後、上清はＨＤＬコレステロール測定用の
試料としてノズル８によって吸引され、当該反応容器の
隣の反応容器に吐出される。隣の反応容器には、２０秒
後にコレステロール測定試薬が添加され１０分後に吸光
度が測光され、濃度に換算されたのちプリンターまたは
ＣＲＴ上に出力される。
基づく特徴は、以下の如く実現される。サンプル（血
清）４０μｌが分注された後２０秒後に第１試薬として
実施例１で述べた磁性体粒子２０μｌを分注し、更に
１.５ 分後に第２試薬として沈殿試薬４０μｌを分注す
る。自動分析装置のマイクロコンピュータは、当該サン
プルが分注された反応容器を記憶しており、ＨＤＬの沈
殿に供された反応容器は最終測光位置３３を過ぎても洗
浄工程が行われない。当該反応容器は、混合不溶物が入
ったまま次の周回のサンプル分注位置３１に到達する。
サンプル分注位置３１の下面には永久磁石４２（８００
ガウス）を埋設し、混合不用物を反応容器内の底面に捕
捉する。捕捉後、上清はＨＤＬコレステロール測定用の
試料としてノズル８によって吸引され、当該反応容器の
隣の反応容器に吐出される。隣の反応容器には、２０秒
後にコレステロール測定試薬が添加され１０分後に吸光
度が測光され、濃度に換算されたのちプリンターまたは
ＣＲＴ上に出力される。
【００３７】本実施例によれば、患者から採血した血清
を自動分析装置に置くだけでＨＤＬコレステロールの測
定を完全自動的に行うことができ、かつ他の臨床検査項
目と同時に処理することができるので、作業の効率化に
寄与することができる。なお本実施例でも実施例１と同
様の結果が得られた。
を自動分析装置に置くだけでＨＤＬコレステロールの測
定を完全自動的に行うことができ、かつ他の臨床検査項
目と同時に処理することができるので、作業の効率化に
寄与することができる。なお本実施例でも実施例１と同
様の結果が得られた。
【００３８】実施例４（図４，図５）自動分析装置による完全自動化の実施例−２ 実施例３と同様の処理原理を持つ自動分析装置による更
なる実施例を説明する。
なる実施例を説明する。
【００３９】上述した自動分析装置において、反応容器
２にサンプル（血清）４０μｌが分注された後２０秒後
に第１試薬として実施例１で述べた磁性体粒子２０μｌ
を分注し、更に１.５分後に第２試薬として沈殿試薬４
０μｌを分注する。３.５分後、第３試薬の吐出タイミ
ングで試薬は吐出せず、撹拌タイミングで実施例３で述
べたのと同様の電磁石を撹拌子の代わりに取付け、分注
位置３１にて上記の反応容器２に電磁石４３（通電時４
００ガウス）を反応容器上部から挿入し、５秒間通電す
ることにより、混合不溶物を電磁石表面に捕捉した（図
５−Ａ）。短時間で捕捉が終了したのは、自動分析装置
の反応容器が試験管に比べ小さく、磁性粒子と磁石表面
の平均距離が短いためである。捕捉した混合不溶物６０
は、反応容器外に取り出し（図５−Ｂ）、電磁石への通
電を切って混合不溶物６０を磁石４３から離脱させ磁石
４３を洗浄する（図５−Ｃ）。その５分後に、反応容器
２にコレステロール測定試薬が添加され、さらに５分後
に光度計１２により吸光度が測光され、濃度に換算され
たデータがプリンタ２２またはＣＲＴ２３上に出力され
る。
２にサンプル（血清）４０μｌが分注された後２０秒後
に第１試薬として実施例１で述べた磁性体粒子２０μｌ
を分注し、更に１.５分後に第２試薬として沈殿試薬４
０μｌを分注する。３.５分後、第３試薬の吐出タイミ
ングで試薬は吐出せず、撹拌タイミングで実施例３で述
べたのと同様の電磁石を撹拌子の代わりに取付け、分注
位置３１にて上記の反応容器２に電磁石４３（通電時４
００ガウス）を反応容器上部から挿入し、５秒間通電す
ることにより、混合不溶物を電磁石表面に捕捉した（図
５−Ａ）。短時間で捕捉が終了したのは、自動分析装置
の反応容器が試験管に比べ小さく、磁性粒子と磁石表面
の平均距離が短いためである。捕捉した混合不溶物６０
は、反応容器外に取り出し（図５−Ｂ）、電磁石への通
電を切って混合不溶物６０を磁石４３から離脱させ磁石
４３を洗浄する（図５−Ｃ）。その５分後に、反応容器
２にコレステロール測定試薬が添加され、さらに５分後
に光度計１２により吸光度が測光され、濃度に換算され
たデータがプリンタ２２またはＣＲＴ２３上に出力され
る。
【００４０】本実施例によれば、患者から採血した血清
を自動分析装置に置くだけでＨＤＬコレステロールの測
定を完全自動的に行うことができる。さらにＨＤＬコレ
ステロール１テストを１本の反応容器中でシーケンシャ
ルに処理できるため、実施例３に比べて自動分析装置の
処理能力を低下させない利点がある。なお本実施例でも
実施例１と同様の結果が得られた。
を自動分析装置に置くだけでＨＤＬコレステロールの測
定を完全自動的に行うことができる。さらにＨＤＬコレ
ステロール１テストを１本の反応容器中でシーケンシャ
ルに処理できるため、実施例３に比べて自動分析装置の
処理能力を低下させない利点がある。なお本実施例でも
実施例１と同様の結果が得られた。
【００４１】実施例５磁性粒子を用いた沈殿分画法による骨性アルカリフォス
ファターゼの検出法 （１）３ｍｌ容量の試験管を用意しこれを反応容器とし
た。これに血清５０μｌ，レクチンを含む分離液（アイ
ソＡＬＰ測定用試薬、ＢＭＹ）５０μｌおよび磁性体粒
子（DYNABEADS Ｍ−２８０、２０ｍｇ又はFERR Ｉ SPH
ERE１００、１００μｌ）を加え、混合した。
ファターゼの検出法 （１）３ｍｌ容量の試験管を用意しこれを反応容器とし
た。これに血清５０μｌ，レクチンを含む分離液（アイ
ソＡＬＰ測定用試薬、ＢＭＹ）５０μｌおよび磁性体粒
子（DYNABEADS Ｍ−２８０、２０ｍｇ又はFERR Ｉ SPH
ERE１００、１００μｌ）を加え、混合した。
【００４２】（２）上記の試験管を室温（２５℃）の条
件で３０分間静置した。
件で３０分間静置した。
【００４３】（３）上記の試験管の下に永久磁石（５０
０ガウス）を１分間密着させ、混合不溶物を試験管底部
に捕捉した。
０ガウス）を１分間密着させ、混合不溶物を試験管底部
に捕捉した。
【００４４】（４）上記の試験管の上清の５０μｌを別
の試験管にアルカリフォスファターゼの試料として分注
し、これにアルカリフォスファターゼ測定検査薬（モノ
テストALPopt，ＢＭＹ）を加えた。アルカリフォスファ
ターゼ測定検査薬は、緩衝液によりｐＨ９.５ に調整さ
れた中にパラニトロフェニルリン酸が溶解しており、試
料中のアルカリフォスファターゼによりパラニトロフェ
ニルリン酸が分解され、パラニトロフェノールが生成す
るのを原理としている。混和後、３７℃で５分間インキ
ュベートした後、４０５ｎｍでの吸光度変化率を測定し
酵素活性値に換算した。レクチンは、骨性アルカリフォ
スファターゼと選択的に結合し沈殿するため、上清中に
は骨性アルカリフォスファターゼ以外の残存アルカリフ
ォスファターゼが存在する。そのため原血清のトータル
アルカリフォスファターゼ活性を別途測定しておき、ト
ータル活性値から残存活性値を引いたのが骨性活性値と
なる。本実施例による測定結果と遠心分離法による測定
結果の患者検体を対象とした骨性アイソザイム相関分析
図を図６に示す。
の試験管にアルカリフォスファターゼの試料として分注
し、これにアルカリフォスファターゼ測定検査薬（モノ
テストALPopt，ＢＭＹ）を加えた。アルカリフォスファ
ターゼ測定検査薬は、緩衝液によりｐＨ９.５ に調整さ
れた中にパラニトロフェニルリン酸が溶解しており、試
料中のアルカリフォスファターゼによりパラニトロフェ
ニルリン酸が分解され、パラニトロフェノールが生成す
るのを原理としている。混和後、３７℃で５分間インキ
ュベートした後、４０５ｎｍでの吸光度変化率を測定し
酵素活性値に換算した。レクチンは、骨性アルカリフォ
スファターゼと選択的に結合し沈殿するため、上清中に
は骨性アルカリフォスファターゼ以外の残存アルカリフ
ォスファターゼが存在する。そのため原血清のトータル
アルカリフォスファターゼ活性を別途測定しておき、ト
ータル活性値から残存活性値を引いたのが骨性活性値と
なる。本実施例による測定結果と遠心分離法による測定
結果の患者検体を対象とした骨性アイソザイム相関分析
図を図６に示す。
【００４５】本実施例に示す通り、本発明はＨＤＬコレ
ステロールに限定されるものではなく、沈殿形成を伴う
測定法に広く適用可能である。
ステロールに限定されるものではなく、沈殿形成を伴う
測定法に広く適用可能である。
【００４６】
【発明の効果】以上に説明したように、本発明によれば
沈殿形成による分離分画を含む測定法を遠心分離操作な
しに実行することができ、遠心分離器などの設備を準備
する必要がなく簡便な定量法を提供できる。また、自動
分析装置への応用も可能であるため、検査の効率化を図
ることができる。
沈殿形成による分離分画を含む測定法を遠心分離操作な
しに実行することができ、遠心分離器などの設備を準備
する必要がなく簡便な定量法を提供できる。また、自動
分析装置への応用も可能であるため、検査の効率化を図
ることができる。
【図１】本発明に基づく実施例１の工程を示す図。
【図２】実施例２の工程を示す図。
【図３】実施例１によるＨＤＬコレステロールの相関
図。
図。
【図４】実施例３および実施例４を実行するための自動
分析装置の概略構成を示す図。
分析装置の概略構成を示す図。
【図５】実施例４による自動分析装置の要部の動作概略
を示す図。
を示す図。
【図６】実施例５による骨性アルカリフォスファターゼ
の相関図。
の相関図。
１…反応ディスク、２…反応容器、５…サンプルディス
ク、７…サンプルピペッティング機構、８…サンプル分
注ノズル、９Ａ，９Ｂ…試薬ディスク、１０Ａ，１０Ｂ
…試薬ピペッティング機構、１２…多波長光度計、１５
…マイクロコンピュータ、２３…ＣＲＴ、２５…操作パ
ネル、３１…サンプル分注位置、３３…最終測光位置、
４２，５２…永久磁石、４３…電磁石。
ク、７…サンプルピペッティング機構、８…サンプル分
注ノズル、９Ａ，９Ｂ…試薬ディスク、１０Ａ，１０Ｂ
…試薬ピペッティング機構、１２…多波長光度計、１５
…マイクロコンピュータ、２３…ＣＲＴ、２５…操作パ
ネル、３１…サンプル分注位置、３３…最終測光位置、
４２，５２…永久磁石、４３…電磁石。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 古田 芳輝 茨城県勝田市市毛882番地 株式会社日立 製作所計測器事業部内
Claims (5)
- 【請求項１】反応容器に試料を注入し試料成分の一部を
選択的に沈殿せしむる沈殿試薬と該沈殿成分と選択的な
化学結合を生じぬ表面構造を有する磁性体粒子を添加す
る工程と、該磁性体粒子を含む混合液を一定時間沈殿生
成させる工程と、沈殿生成後沈殿物と磁性体粒子の混合
不溶物を磁力を用いて容器内に捕捉するか容器外に除去
する工程と、捕捉または除去された沈殿物と磁性体粒子
の該混合不溶物を除く上清を分析する工程とを含む沈殿
分画測定方法。 - 【請求項２】請求項１の沈殿分画測定方法において、磁
力による沈殿分離を反応容器外に置いた磁石によって行
うことを特徴とする沈殿分画測定方法。 - 【請求項３】請求項１の沈殿分画測定方法において、磁
力による沈殿分離を反応容器内の混合液に挿入した磁石
によって行うことを特徴とする沈殿分画測定方法。 - 【請求項４】試料と沈殿試薬と磁性体粒子を混合するこ
とにより混合不溶物を形成し、磁力により該混合不溶物
を収斂せしめることにより上清を得る沈殿分画測定方
法。 - 【請求項５】容器内に試料と沈殿試薬と磁性粒子を加
え、上記容器を搬送し、磁石を沈殿生成の最終工程位置
に置いたことを特徴とする測定装置。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP808493A JPH06213900A (ja) | 1993-01-21 | 1993-01-21 | 磁性粒子を用いた沈殿分画測定方法および測定装置 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP808493A JPH06213900A (ja) | 1993-01-21 | 1993-01-21 | 磁性粒子を用いた沈殿分画測定方法および測定装置 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06213900A true JPH06213900A (ja) | 1994-08-05 |
Family
ID=11683470
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP808493A Pending JPH06213900A (ja) | 1993-01-21 | 1993-01-21 | 磁性粒子を用いた沈殿分画測定方法および測定装置 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH06213900A (ja) |
Cited By (12)
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|---|---|---|---|---|
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| US10119971B2 (en) | 2008-08-07 | 2018-11-06 | Quest Diagnostics Investments Incorporated | Detection apparatus for differential-charged particle mobility analyzer |
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| CN114136927A (zh) * | 2021-10-15 | 2022-03-04 | 国科温州研究院(温州生物材料与工程研究所) | 一种溶液磁性的检测装置及其检测方法 |
-
1993
- 1993-01-21 JP JP808493A patent/JPH06213900A/ja active Pending
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| US9791464B2 (en) | 2007-06-08 | 2017-10-17 | Quest Diagnostics Investments Incorporated | Lipoprotein analysis by differential charged-particle mobility |
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