JPH0552841B2 - - Google Patents
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- JPH0552841B2 JPH0552841B2 JP85233118A JP23311885A JPH0552841B2 JP H0552841 B2 JPH0552841 B2 JP H0552841B2 JP 85233118 A JP85233118 A JP 85233118A JP 23311885 A JP23311885 A JP 23311885A JP H0552841 B2 JPH0552841 B2 JP H0552841B2
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- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
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- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
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- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
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-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
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- C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明は大きな抗トロンビン活性を有するムコ
多糖組成物の製法に係る。
多糖組成物の製法に係る。
周知の如くこの種の組成物はアルコール抽出に
より、又は化学的もしくは酵素による解重合によ
つてヘパリンから形成されてきた。
より、又は化学的もしくは酵素による解重合によ
つてヘパリンから形成されてきた。
通常これらの方法は、鎖が約25から最高30まで
のパターンを含み且つイン・ウエスラー（Yin
Wessler＝YW）力価で測定される抗Xa作用がヘ
パリンより大きく、USP力価で表わされる全体
的抗凝血作用がヘパリンより小さくて殆んどゼロ
に近いような極めて低い値さえ示し得るムコ多糖
即ちMPSからなる組成物又は分画を製造せしめ
る。
のパターンを含み且つイン・ウエスラー（Yin
Wessler＝YW）力価で測定される抗Xa作用がヘ
パリンより大きく、USP力価で表わされる全体
的抗凝血作用がヘパリンより小さくて殆んどゼロ
に近いような極めて低い値さえ示し得るムコ多糖
即ちMPSからなる組成物又は分画を製造せしめ
る。
これらの生成物は凝血プロセスで用いられる或
る種のステツプに対して、ヘパリンより特異性の
高い作用を及ぼすという利点を有する。
る種のステツプに対して、ヘパリンより特異性の
高い作用を及ぼすという利点を有する。
所定の処理の場合、生成物の選択はYW力価の
値とYW力価対USP力価の比とに応じて行なわれ
る。
値とYW力価対USP力価の比とに応じて行なわれ
る。
そこで本発明者等は特にYW力価とYW力価対
USP力価の比とに関して所定のプロフイルを示
す組成物を容易に形成せしめるような方法を研究
した。研究の結果本発明者等は、特定の条件下で
操作すれば前述の如き生成物を他のMPS組成物
から分離し得ることを確信するに至つた。
USP力価の比とに関して所定のプロフイルを示
す組成物を容易に形成せしめるような方法を研究
した。研究の結果本発明者等は、特定の条件下で
操作すれば前述の如き生成物を他のMPS組成物
から分離し得ることを確信するに至つた。
従つて本発明はより高い抗トロンビン作用を持
つMPS組成物を得るための下記の如き新規製法
を提供する。この方法の基本はこれら組成物を含
有する別のMPS組成物を処理することにあり、
この方法を使用すれば有用性の高い組成物を容易
に得ることができる。
つMPS組成物を得るための下記の如き新規製法
を提供する。この方法の基本はこれら組成物を含
有する別のMPS組成物を処理することにあり、
この方法を使用すれば有用性の高い組成物を容易
に得ることができる。
本発明の方法の特徴は、分子量（PM）が約
1800〜8000ダルトンでありYW力価とYW対USP
力価比とがヘパリンより大きいようなMPS鎖の
大部分で構成されたMPS組成物を少なくとも１
回分別処理して、これら組成物からPM約2000以
下の鎖と分子量はより大きいが硫酸化率が該組成
物の鎖の平均硫酸化率より小さい鎖とを少なくと
も大部分選択的に分離し、最早これらの鎖を含ま
ない分画を回収することにある。このような分画
はUSP力価が出発組成物より大きく、YW力価対
USPの比が出発組成物よりは小さいがヘパリン
よりは大きい。
1800〜8000ダルトンでありYW力価とYW対USP
力価比とがヘパリンより大きいようなMPS鎖の
大部分で構成されたMPS組成物を少なくとも１
回分別処理して、これら組成物からPM約2000以
下の鎖と分子量はより大きいが硫酸化率が該組成
物の鎖の平均硫酸化率より小さい鎖とを少なくと
も大部分選択的に分離し、最早これらの鎖を含ま
ない分画を回収することにある。このような分画
はUSP力価が出発組成物より大きく、YW力価対
USPの比が出発組成物よりは小さいがヘパリン
よりは大きい。
分別処理は好ましくは、(a)無機塩含有水と(b)有
機溶媒との混合物を用いて行なう。この溶媒は所
望の生成物の少なくとも大部分がその中で不溶性
を示し選択的に沈澱するような溶剤から選択す
る。
機溶媒との混合物を用いて行なう。この溶媒は所
望の生成物の少なくとも大部分がその中で不溶性
を示し選択的に沈澱するような溶剤から選択す
る。
前記無機塩及び溶倍の相対比は所望のMPS鎖
を沈澱させるべく媒質のPHに応じて調整する。
を沈澱させるべく媒質のPHに応じて調整する。
本発明の好ましい方法では前記有機溶媒が有利
にはアルコール溶媒、特にエタノールである。
にはアルコール溶媒、特にエタノールである。
別の好ましい方法では使用有機用媒に混和し得
る塩、例えば塩化ナトリウム又は塩化カリウムを
前記無機塩として使用する。
る塩、例えば塩化ナトリウム又は塩化カリウムを
前記無機塩として使用する。
更に別の好ましい方法では前記反応混合物のPH
を酸PHに該当する値、より特定的には４以下のPH
に調整する。
を酸PHに該当する値、より特定的には４以下のPH
に調整する。
本発明の好ましい実施例では分別に使用される
MPS組成物が(1)約1800〜8000の分子量、(2)少な
くとも約10のYW対USP力価比、(3)約200〜
250u／mgのYW力価を有する鎖の大部分を含む、
尚YW力価はイン・イーテイー（Yin.E.T）、ウ
エスラー、エス（Wessler.S）、バトラー・ジエ
ーヴイ（ButlerJ.V）によればラブ、クリメント
誌（J.LAS.CLN.MTD）、1973年、81、298−310
ページに記載の如く抗Xa活性測定に有用である。
MPS組成物が(1)約1800〜8000の分子量、(2)少な
くとも約10のYW対USP力価比、(3)約200〜
250u／mgのYW力価を有する鎖の大部分を含む、
尚YW力価はイン・イーテイー（Yin.E.T）、ウ
エスラー、エス（Wessler.S）、バトラー・ジエ
ーヴイ（ButlerJ.V）によればラブ、クリメント
誌（J.LAS.CLN.MTD）、1973年、81、298−310
ページに記載の如く抗Xa活性測定に有用である。
使用するMPS組成物は亜硝酸の如き化学物質
の作用下でヘパリンを部分的に解重合させる方法
によつて得ると有利である。特に、1978年11月６
日付仏国特許第7831357号明細書に対する1980年
３月20日付第２追加特許出願第8006282号明細書
に本出願人によつて記載されている方法を使用し
得る。
の作用下でヘパリンを部分的に解重合させる方法
によつて得ると有利である。特に、1978年11月６
日付仏国特許第7831357号明細書に対する1980年
３月20日付第２追加特許出願第8006282号明細書
に本出願人によつて記載されている方法を使用し
得る。
有利には、本出願人名義1981年４月10日付仏国
特許出願第8107283号明細書に記載の如き解重合
反応の自動調整に基づく前述タイプの解重合法を
使用する。
特許出願第8107283号明細書に記載の如き解重合
反応の自動調整に基づく前述タイプの解重合法を
使用する。
この自動調整解重合の最も一般的な態様ではPH
約２〜３、有利には2.5の水性媒質中でヘパリン
と亜硝酸とを、ヘパリン濃度が少なくとも約８重
量％になり且つ亜硝酸のモル濃度が約0.02〜
0.1Mになるような量で反応させ、亜硝酸の消耗
によつてヘパリンの解重合反応が停止したら有機
溶媒により沈澱し得るタイプのMPS混合物を回
収する。
約２〜３、有利には2.5の水性媒質中でヘパリン
と亜硝酸とを、ヘパリン濃度が少なくとも約８重
量％になり且つ亜硝酸のモル濃度が約0.02〜
0.1Mになるような量で反応させ、亜硝酸の消耗
によつてヘパリンの解重合反応が停止したら有機
溶媒により沈澱し得るタイプのMPS混合物を回
収する。
亜硝酸は、有利には生物学的に許容し得るアニ
オンを含む酸、例えば塩酸又は酢酸を亜硝酸の誘
導体、特に塩、エーテル塩、より特定的にはアル
カリ金属塩又はアルカリ土類金属塩に加えること
によりその場で生成する。より特定的には亜硝酸
ナトリウムを0.03〜0.05Mのモル濃度で使用す
る。
オンを含む酸、例えば塩酸又は酢酸を亜硝酸の誘
導体、特に塩、エーテル塩、より特定的にはアル
カリ金属塩又はアルカリ土類金属塩に加えること
によりその場で生成する。より特定的には亜硝酸
ナトリウムを0.03〜0.05Mのモル濃度で使用す
る。
本発明の方法の実施には0.040〜0.046M、より
特定的には約0.043MのNaNO2を使用するのが好
ましい。
特定的には約0.043MのNaNO2を使用するのが好
ましい。
その製法に起因してこれらMPS組成物は還元
末端に２，５−アンヒドロマンノ構造、好ましく
は２，５−アンヒロマンノース、２，５−アンヒ
ドロマンニトール又は２，５−アンヒドロマンノ
ン酸の中から選択した構造のパターンを有する。
末端に２，５−アンヒドロマンノ構造、好ましく
は２，５−アンヒロマンノース、２，５−アンヒ
ドロマンニトール又は２，５−アンヒドロマンノ
ン酸の中から選択した構造のパターンを有する。
使用出発MPS組成物は10ｇ／のNaClを含有
する水中に５％ｐ／ｖで溶解する。
する水中に５％ｐ／ｖで溶解する。
PHを3.8に調整した後、最も大きい分子量を持
ち及び／又は該組成物の最も高い硫酸化率の鎖を
有するMPSを選択的に沈澱させる有機溶媒を用
いて前記MPSの分別処理を行なう。
ち及び／又は該組成物の最も高い硫酸化率の鎖を
有するMPSを選択的に沈澱させる有機溶媒を用
いて前記MPSの分別処理を行なう。
有機溶媒はより特定的にアルコール溶媒、特に
エタノールからなる。
エタノールからなる。
分子量の小さい鎖及び硫酸塩率の小さい鎖を除
去するとUSP力価のより大きいMPS分画が得ら
れる。YW力価は殆んど変らない。
去するとUSP力価のより大きいMPS分画が得ら
れる。YW力価は殆んど変らない。
沈澱時に回収されるMPS組成物は一般的に、
(1)4000〜5000ダルトン、特に約4500ダルトンの平
均分子量と、(2)約180〜200u／mgのYW力価及び
約10以下特に約６〜３、より特定的には約4YW
対USP力価化とを有する鎖で本質的に構成され
るという特徴を有する。
(1)4000〜5000ダルトン、特に約4500ダルトンの平
均分子量と、(2)約180〜200u／mgのYW力価及び
約10以下特に約６〜３、より特定的には約4YW
対USP力価化とを有する鎖で本質的に構成され
るという特徴を有する。
これらの組成物は、また、出発組成物をヘパリ
ンの亜硝酸による解重合によつて得た場合には
２，５−アンヒドロマンノ構造のパターンで終わ
る鎖の大部分によつて構成される。
ンの亜硝酸による解重合によつて得た場合には
２，５−アンヒドロマンノ構造のパターンで終わ
る鎖の大部分によつて構成される。
本発明の方法によつて得られる組成物は、特に
凝血のステツプのうち或るものを特異的に制御で
きるようにする生物学的活性を有する。
凝血のステツプのうち或るものを特異的に制御で
きるようにする生物学的活性を有する。
従つてこれらの組成物は、主として血栓病及び
組織老化の予防及び治療に使用し得る薬剤を製造
する上で特に貴重である。この種の薬剤は種々の
投与形態で且つ対象適応症に関して通常用いられ
る薬用量で使用される。
組織老化の予防及び治療に使用し得る薬剤を製造
する上で特に貴重である。この種の薬剤は種々の
投与形態で且つ対象適応症に関して通常用いられ
る薬用量で使用される。
本発明の方法で得られるムコ多糖組成物は、ま
た、特にXa因子抑制レベルでの抗凝血活性をテ
ストしたい別の組成物の研究で、主に比較対照と
して実験室で使用し得る生物学的試薬を製造する
上でも有用である。
た、特にXa因子抑制レベルでの抗凝血活性をテ
ストしたい別の組成物の研究で、主に比較対照と
して実験室で使用し得る生物学的試薬を製造する
上でも有用である。
分別に用いられる水／有機溶媒混合物中に溶解
し得る生成物は抗トロンビン活性を全く又は殆ん
ど示さない。
し得る生成物は抗トロンビン活性を全く又は殆ん
ど示さない。
これらの生成物は可溶分画をゲルで過するこ
とによつて回収し得る。イオン交換クロマトグラ
フイ処理を使用すると、所望であれば該組成物か
ら種々のタイプのオリゴ糖、特にネオ血管形成に
対して大きな抑制作用を示すヘキサ糖鎖を分離す
ることができる。
とによつて回収し得る。イオン交換クロマトグラ
フイ処理を使用すると、所望であれば該組成物か
ら種々のタイプのオリゴ糖、特にネオ血管形成に
対して大きな抑制作用を示すヘキサ糖鎖を分離す
ることができる。
前記分画からの前記生成物の回収は例えばアル
コールによる沈澱及び凍結乾燥などによつて行な
うと有利である。
コールによる沈澱及び凍結乾燥などによつて行な
うと有利である。
以下実施例を挙げて本発明の他の特徴及び利点
を明らかにする。尚、実施例１及び２は約４の
YW対USP力価比を持つMPS組成物の製造に係
り、実施例３及び４は夫々実施例１及びで得られ
た生成物の活性に係り、実施例５は可溶分画から
抗トロンビン活性を殆んど持たない生成物を得る
方法に係る。
を明らかにする。尚、実施例１及び２は約４の
YW対USP力価比を持つMPS組成物の製造に係
り、実施例３及び４は夫々実施例１及びで得られ
た生成物の活性に係り、実施例５は可溶分画から
抗トロンビン活性を殆んど持たない生成物を得る
方法に係る。
実施例 １
約４のYW対USP力価比を有するMPS組成物
の製法 ナトリウム塩形態の注入可能ヘパリン500ｇを
脱鉱物質水4500ml中に18℃の温度で溶解する。
の製法 ナトリウム塩形態の注入可能ヘパリン500ｇを
脱鉱物質水4500ml中に18℃の温度で溶解する。
使用ヘパリンのYW対USP力価比は約１であ
り、これら力価の値は約160〜170である。
り、これら力価の値は約160〜170である。
得られた溶液を激しく撹拌し、濃塩酸の添加に
よつてPHを2.5に下げる。次いで水300mlに溶解し
た亜硝酸ナトリウム15ｇを加える。濃塩酸により
該反応溶液のPHを2.5に調整し、総体積を5000ml
にする。45分間反応させた後、例えば糊つけした
ヨードカリウム含浸試験紙を用いて前記反応溶液
中の残留亜硝酸イオンの有無を調べる（NO2 -イ
オンの存在下では色が紫がかつた青に変化）。
よつてPHを2.5に下げる。次いで水300mlに溶解し
た亜硝酸ナトリウム15ｇを加える。濃塩酸により
該反応溶液のPHを2.5に調整し、総体積を5000ml
にする。45分間反応させた後、例えば糊つけした
ヨードカリウム含浸試験紙を用いて前記反応溶液
中の残留亜硝酸イオンの有無を調べる（NO2 -イ
オンの存在下では色が紫がかつた青に変化）。
亜硝酸イオンが完全に消滅して糊つけヨード試
験紙に反応が見られなくなるまで、３〜４分毎に
検査を行ないながら反応を継続させる。
験紙に反応が見られなくなるまで、３〜４分毎に
検査を行ないながら反応を継続させる。
検査結果が陰になれば反応は終了したと見なさ
れる。反応が終了したら濃ソーダを用いて溶液の
PHを10に上げ、５ｇの水素化ホウ素ナトリウム
（NaBH4：t′etrahydruroborate de sodium）を
加える。
れる。反応が終了したら濃ソーダを用いて溶液の
PHを10に上げ、５ｇの水素化ホウ素ナトリウム
（NaBH4：t′etrahydruroborate de sodium）を
加える。
この溶液を15時間撹拌する。
濃塩酸によりPHを3.0に下げて、反応しなかつ
た水素化ホウ素ナトリウムを破壊する。この溶液
を15分間撹拌し、次いで濃ノーダによりPHを7.0
に再調整する。
た水素化ホウ素ナトリウムを破壊する。この溶液
を15分間撹拌し、次いで濃ノーダによりPHを7.0
に再調整する。
10のエタノールを加えることにより反応生成
物を回収する。48時間放置した後生成物のデカン
テーシヨンを行なつて上澄みを除去する。
物を回収する。48時間放置した後生成物のデカン
テーシヨンを行なつて上澄みを除去する。
沈澱物を９の脱鉱物質水中に再溶解する。塩
化ナトリウム100ｇを添加した後濃塩酸によつて
溶液のPHを3.8に下げる。脱鉱物質水を用いて溶
液量を正確に10に調整し、激しく撹拌しながら
10のエタノールを加える。48時間放置する。上
澄みをサイホンで吸上げて除去し、沈澱物を回収
してエタノールで洗浄し、粉砕した後真空下で乾
燥させる。
化ナトリウム100ｇを添加した後濃塩酸によつて
溶液のPHを3.8に下げる。脱鉱物質水を用いて溶
液量を正確に10に調整し、激しく撹拌しながら
10のエタノールを加える。48時間放置する。上
澄みをサイホンで吸上げて除去し、沈澱物を回収
してエタノールで洗浄し、粉砕した後真空下で乾
燥させる。
下記の特性を持つ生成物が230ｇ得られる。
USP力価＝52uI／mg
YW力価＝225uI／mg
平均分子量＝4000〜5000ダルトン
実施例 ２
YW力価及びUSP力価を約４の比で有する
MPS分画の製法 5000ｇの注入可能ヘパリンを45の脱鉱物質水
に18℃で溶解する。
MPS分画の製法 5000ｇの注入可能ヘパリンを45の脱鉱物質水
に18℃で溶解する。
実施例１と同様に、但し試薬量を10倍にして、
即ち −150ｇの亜硝酸ナトリウムを３の水に溶解し、 −反応溶液の量を50に調整し、 −50ｇの水素化ホウ素ナトリウムを加え、 −100のエタノールを用いて沈澱させ、 −90の水に再溶解し、 −1000ｇの塩化ナトリウムを加え、 −最終量を100に調整し、 −最後に100のエタノールを加えて操作を行な
う。
即ち −150ｇの亜硝酸ナトリウムを３の水に溶解し、 −反応溶液の量を50に調整し、 −50ｇの水素化ホウ素ナトリウムを加え、 −100のエタノールを用いて沈澱させ、 −90の水に再溶解し、 −1000ｇの塩化ナトリウムを加え、 −最終量を100に調整し、 −最後に100のエタノールを加えて操作を行な
う。
その結果下記の如き特徴を持つ生成物が2230ｇ
得られる。
得られる。
USP力価＝54uI／mg
YW力価＝232uI／mg
平均分子量＝4000〜5000ダルトン
10のエタノールを加えて反応生成物を回収
し、48時間放置した後デカンテーシヨンによつて
上澄みを除去する。
し、48時間放置した後デカンテーシヨンによつて
上澄みを除去する。
沈澱物を９の脱鉱物質水に再溶解する。塩化
ナトリウム100ｇを加えた後、濃塩酸によつて該
溶液のPHを3.8に下げる。脱鉱物質水を用いて量
を正確に10に調整し、激しく撹拌しながら10
のエタノールを加える。48時間放置した後上澄み
をサイホンで吸上げて除去する。沈澱物を回収
し、エタノールで洗浄し、粉砕後真空下で乾燥さ
せる。
ナトリウム100ｇを加えた後、濃塩酸によつて該
溶液のPHを3.8に下げる。脱鉱物質水を用いて量
を正確に10に調整し、激しく撹拌しながら10
のエタノールを加える。48時間放置した後上澄み
をサイホンで吸上げて除去する。沈澱物を回収
し、エタノールで洗浄し、粉砕後真空下で乾燥さ
せる。
下記の特徴を持つ生成物が230ｇ得られる。
USP力価＝52uI／mg
YW力価＝225uI／mg
平均分子量＝4000〜5000ダルトン
次の実施例３では、実施例１の生成物を用いて
行なつた薬理学テストを結果を述べる。
行なつた薬理学テストを結果を述べる。
実施例 ３
実施例１の生成物の活性のインビトロ検査。
市販ヘパリン及び実施例１の生成物の量を漸増
することによりヒト血漿中で誘発される凝血時間
の変化をインビトロで調べて得られた曲線を第１
図から第４図に示す。
することによりヒト血漿中で誘発される凝血時間
の変化をインビトロで調べて得られた曲線を第１
図から第４図に示す。
第３図及び第４図に示した結果に対応するテス
トでは、血小板を除去したXI因子が少ない血漿
を使用した。
トでは、血小板を除去したXI因子が少ない血漿
を使用した。
トロンピン時間（第１図）及びセフアリン−カ
オリン時間（第２図）は双方共夫々活性化第因
子の抑制及び全体的凝血に関するテスト調製物の
作用を主として反映するタイプの測定値である。
第１図及び第２図の曲線から明らかなように、本
発明のMPSはプロトロンビンの活性化の抑制、
且つ全体的凝血レベルに関してはヘパリンより明
らかに小さい効果を及ぼす。外因性凝血（特に
XIa因子が相対的に存在しない場合）の特徴であ
る一連の酵素反応により直接的に関連する現象が
表わす第３図及び第４図は本発明のMPSがヘパ
リンより有利な効果をもたらすことを明示してい
る。
オリン時間（第２図）は双方共夫々活性化第因
子の抑制及び全体的凝血に関するテスト調製物の
作用を主として反映するタイプの測定値である。
第１図及び第２図の曲線から明らかなように、本
発明のMPSはプロトロンビンの活性化の抑制、
且つ全体的凝血レベルに関してはヘパリンより明
らかに小さい効果を及ぼす。外因性凝血（特に
XIa因子が相対的に存在しない場合）の特徴であ
る一連の酵素反応により直接的に関連する現象が
表わす第３図及び第４図は本発明のMPSがヘパ
リンより有利な効果をもたらすことを明示してい
る。
次の実施例４はウサギを用いて実施例２の生成
物をインビボ検査を行なつた場合の結果を示す。
物をインビボ検査を行なつた場合の結果を示す。
実施例 ４
ウサギにおける実施例２の生成物の抗トロンビ
ン活性。
ン活性。
500uYWをウサギに投与すると多きな抗Xa活
性が得られるが、全体的抗凝血作用は比較的小さ
いままである。
性が得られるが、全体的抗凝血作用は比較的小さ
いままである。
投与後２時間目のYW活性は約0.88u／mlであ
るが、セフアリン−カオリン時間は約0.09uI／ml
である。
るが、セフアリン−カオリン時間は約0.09uI／ml
である。
従つてこれらインビトロテスト及びインビボテ
ストは本発明のMPSが特にXa因子抑制レベルで
ヘパリンより明らかに選択的な活性を示すことを
表わしている。
ストは本発明のMPSが特にXa因子抑制レベルで
ヘパリンより明らかに選択的な活性を示すことを
表わしている。
実施例 ５
抗トロンビン活性を実質的に有さないMPS画
分の製法 実施例１の可溶画分を回収する。この画分は２
個〜14個のパターンからなる鎖を有する。
分の製法 実施例１の可溶画分を回収する。この画分は２
個〜14個のパターンからなる鎖を有する。
この画分を更にアルコール分別処理して沈澱物
と可溶画分とに分け、該沈澱物を分離し、該可溶
画分から組成物ｙを回収する。この組成物は本質
的に６〜８個のパターンまでの鎖からなり、70以
下のYW力価と５以下のUSP力価とを有する。
と可溶画分とに分け、該沈澱物を分離し、該可溶
画分から組成物ｙを回収する。この組成物は本質
的に６〜８個のパターンまでの鎖からなり、70以
下のYW力価と５以下のUSP力価とを有する。
前記組成物ｙを従来の方法に従いゲルによつて
過し、ヘキサ糖組成物ｚを回収する。この種の
組成物は全体的抗凝血活性とYW活性とを実質的
に全く示さない。
過し、ヘキサ糖組成物ｚを回収する。この種の
組成物は全体的抗凝血活性とYW活性とを実質的
に全く示さない。
実施例 ６
組成物ｙと及びｚのネオ血管形成に対する作用
ペトリ皿で６日間培養したニワトリ胎児の漿尿
膜を用いて抗血管形成活性に関するインビトロテ
ストを行なつた。
膜を用いて抗血管形成活性に関するインビトロテ
ストを行なつた。
5μｇのヒドロコルチゾンを10μのメチルセル
ロースに混入し、次いで組成物ｙ及びｚを5μｇ
〜100μｇの用量を加えてペレツトを形成する。
これらペレツトを乾燥させた後前記漿尿膜上に配
置して付着させる。各テスト毎に４個の卵を使用
する。
ロースに混入し、次いで組成物ｙ及びｚを5μｇ
〜100μｇの用量を加えてペレツトを形成する。
これらペレツトを乾燥させた後前記漿尿膜上に配
置して付着させる。各テスト毎に４個の卵を使用
する。
48時間インキユベートした後無血管ゾーンの存
在を調べる。血管ゾーンの大幅な縮小が観察され
る。これらの結果は僅か6μｇのテスト生成物で
顕著に生じる。
在を調べる。血管ゾーンの大幅な縮小が観察され
る。これらの結果は僅か6μｇのテスト生成物で
顕著に生じる。
実施例 ７
マウスのB16型メラノーマに対するヘキサ多糖
組成物ｚの利用 B16メラノーマを有するC57BL／６マウスを用
いてテストを行なう。
組成物ｚの利用 B16メラノーマを有するC57BL／６マウスを用
いてテストを行なう。
処理は15日に恒つて行なう。各マウス毎に一日
２回の皮下注射により0.15mgのヘキサ多糖組成物
と酢酸コルチゾンとを投与する。酢酸コルチゾン
の用量は処理期間中に250mg／Kg／日から40〜50
mg／Kg／日まで漸減させる。15日間の処理終了
後、腫瘍の成長停止が確認される。
２回の皮下注射により0.15mgのヘキサ多糖組成物
と酢酸コルチゾンとを投与する。酢酸コルチゾン
の用量は処理期間中に250mg／Kg／日から40〜50
mg／Kg／日まで漸減させる。15日間の処理終了
後、腫瘍の成長停止が確認される。
有利なことに、これら腫瘍の退行さえ観察され
る。
る。
第１図はテスト生成物即ち第１実施例の生成物
（曲線ａ１，ａ２，ａ３及びａ４）及びヘパリン
（曲線ｂ１，ｂ２，ｂ３及びｂ４）によつて誘導
されるトロンビン時間（秒）の変化を夫々の使用
量の関数として示すグラフ、第２図は第１図と同
条件下のセフアリン−カオリン時間の変化を示す
グラフ、第３図は濃縮トロンボプラスチンの存在
下での凝血時間変化を前記条件で示すグラフ、第
４図は希釈トロンボプラスチンの存在下での凝血
時間変化を前記条件で示すグラフである。
（曲線ａ１，ａ２，ａ３及びａ４）及びヘパリン
（曲線ｂ１，ｂ２，ｂ３及びｂ４）によつて誘導
されるトロンビン時間（秒）の変化を夫々の使用
量の関数として示すグラフ、第２図は第１図と同
条件下のセフアリン−カオリン時間の変化を示す
グラフ、第３図は濃縮トロンボプラスチンの存在
下での凝血時間変化を前記条件で示すグラフ、第
４図は希釈トロンボプラスチンの存在下での凝血
時間変化を前記条件で示すグラフである。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 抗トロンビン活性の高いムコ多糖即ちMPS
の製法であり、約1800〜8000ダルトンの分子量と
ヘパリンより大きいYW力価及びYW対USP力価
比とを有するMPS鎖の大部分からなる組成物を
少なくとも１回の分別処理にかけて、これら組成
物から分子量約2000以下の鎖と分子量はより大き
いが硫酸化率が該組成物の鎖の平均硫酸化率より
小さい鎖とを少なくとも大部分分離し、これら鎖
を最早有さない分画、即ちUSP力価が出発組成
物より大きくYW対USP力価比が出発組成物より
は小さいがヘパリンよりは大きい分画を回収する
ことを特徴とする製法。 ２ 無機塩含有水と所望の生成物の少なくとも大
部分を選択的に不溶状態で保持し得る有機溶媒と
の混合物を用いて前記分別処理を行なうことを特
徴とする特許請求の範囲第１項に記載の方法。 ３ 平均分子量が4000〜5000ドルトン、特に約
4500であり、YW対USP力価比が約10以下、好ま
しくは約６〜３、より特定的には約４であり、
YW力価が約180〜200u／mgであるような鎖から
なるMPSを選択的に沈殿せしめる有機溶媒を用
いて前記分別処理を行なうことを特徴とする特許
請求の範囲第２項に記載の方法。 ４ 前記有機溶媒がアルコール溶媒、より特定的
にはエタノールであることを特徴とする特許請求
の範囲第２項又は第３項に記載の方法。 ５ 使用無機塩が特に使用する有機溶媒に混和し
得る塩、例えば塩化ナトリウム又は塩化カリウム
からなることを特徴とする特許請求の範囲第２項
に記載の方法。 ６ 反応混合物のPHを酸PHに対応する値、より特
定的には４以下のPHに調整することを特徴とする
特許請求の範囲第２項から第５項のいずれかに記
載の方法。 ７ 分別処理に使用されるMPS組成物が少なく
とも約10のYW対USP力価比と約200〜250u／mg
のYW力価とを有することを特徴とする特許請求
の範囲第１項から第６項のいずれかに記載の方
法。 ８ 20ｇ／のNaClを含むMPS組成物を５％
ｐ／ｖで水に溶解し、PHを3.8に調整した後或る
量のエタノールを加えて分別処理を行ない、形成
された沈殿物を回収することを特徴とする特許請
求の範囲第１項に記載の方法。 ９ 出発MPS組成物が還元末端に好ましくは２，
５−アンヒドロマンノース、２，５−アンヒドロ
マンニトール又は２，５−アンヒドロマンノン酸
の中から選択した２，５−アンヒドロマンノ構造
のパターンを有することを特徴とする特許請求の
範囲第１項から第８項のいずれかに記載の方法。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR8415979 | 1984-10-18 | ||
| FR8415978 | 1984-10-18 | ||
| FR8415978A FR2572080B1 (fr) | 1984-10-18 | 1984-10-18 | Procede de preparation de compositions de mucopolysaccharides dotees d'une activite antithrombotique elevee, les compositions obtenues et leur application en tant que medicaments |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61101502A JPS61101502A (ja) | 1986-05-20 |
| JPH0552841B2 true JPH0552841B2 (ja) | 1993-08-06 |
Family
ID=9308784
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60233118A Granted JPS61101502A (ja) | 1984-10-18 | 1985-10-18 | 抗トロンビン活性の高いムコ多糖組成物の製法 |
Country Status (18)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS61101502A (ja) |
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-
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-
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