JPS60152501A - 化学修飾多糖及びその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は化学修飾多糖及びその製造法に関するものであ
る。

担子用由来の多糖は、抗Ｊｉｌｙ瘍性を示すことで注目
されている。この例としては、シイタケよりのレンチナ
ン、スエヒロタケよりのシゾフィランなどが知られてい
る。これらはいずれもβ−１，３−グルカンを主食・Ｊ
ｌとし、β−１，６−結合でグルコースが分岐している
といわれている。

担子繭ブクリヨウよりのパキマン、スクレロチウムＡ１
の微生物よりのスクレログルカン、キクラゲ由来の多糖
等も同様の構造を持つといわれている。

しかしながら、このような類似したｆｈ造を持つ多糖で
あっても、それらの抗１康瘍性には走が昭められるので
あり、その原因の一つとして、分岐゛した楯、即ち１１
（す知の形態（例えば、側鎖の蚊や長さ）の違いによる
ことが考えられる。

これらの多裾烟はいずれもその起源である両刀１から単
純な抽出分８Ｉｉ　燥作を行って得たものが、又（キこ
うして傅た多糖頬から１俊化’Ｐ−Ｍ元等の単純な反応
によって誘導されたものであった。

本発明は式（＋） −（７＋５）β−Ｄ−Ｇ１ｕ（１−）＋（式中Ｇｌｕは
グルコピラノシル基を、数字は結合位置を示す）で表わ
されるβ−１，３−グルコピラノシル基単位を繰り返し
単位とする主知並びにとの主知に結合された、式（ＩＩ
ン （式中Ｇｌｕ及び数字は前記同様の意味を表わし、Ｘは
アミドカルボニルアミノ基又はヒドロキシル檀を表わし
、ｍは口ないし２の整数を示す）で表わされる第二の繰
り返し単位、又はこの第二の繰り返し単位及び式（１）
、 −〔→６）β−Ｄ　Ｃ）ｌｕ’　（１−］−＞（式式中
ｌｕ及び数字は前記同様の意味を表わし、ｎは口ないし
２の整数を示す）で表わされる第三の繰り返し単位から
成る化学１じ飾多楯を提供するものである。

本うら明の化字誘師多糖は、好ましくは主鎖のグルコピ
ラノシル、１ｌＩ一単位１００１４１あたり、式（ＩＩ
）で表わされる第二の繰り返し単位の数が約２０ないし
約８５制、式（１）で表わされる第三の繰り返し単位の
数が約０ないし約６０個である多糖である。

本発明の化学修ａｉ５多糖は代表的には以下のような物
理的、化学的特性を示す。

ｔｘｔ　分子量 痛度ｏ、ｉモル／１０）塩化ナトリウム溶成を移ｊｉｉ
ＪＩ相とするゲル沖過高速液体クロマトグラフィーで、
カラムとして東洋曹達４Ｇ　５００　ｏｐｗを用い、ゲ
ルｒ過を行うと、分子量１０万〜１５０万のリテンショ
ンタイムの位置に溶出する。

（２）元素分析値 化学式から期イｆ　８れる値と実質的に一致する匝を与
える。

１３１　ｑ５酸分解 ２Ｎ−硫酸で、８０℃、１８時間で化学修飾多糖を完全
に加水分解し、ガスクロマトグラフィーで分４１ｒｉる
と、グルコースは認められるがグリセロールは認められ
ない。

（４）塩１便分解 ＩＮ−Ｊ、ｑ酸水溶液に、化学修１１１ｊ多糖を溶解し
煮沸しても、何らの沈殿をも生じない。

１５）溶解性 水及びジメチルスルホキシドに可溶で、メタノール、エ
タノール、アセトン、ベンゼ／に不溶である。

（６）　メチル化分析 メチル死後加水分解して得られるメチル化楯をアルジト
ールアセテートに誘導し、ガスクロマトグラフィーによ
る分析を行なうと、２．４−ジーＯ−メチルグルシース
及び２．４．６−　）ソー０−メチルグルコースが分＝
ａ四足される。

２、へ４−トリー〇−メチルグルコース及び２，３゜４
．６−チトラーＯ−メチルグルコースは分離・同定され
る場合と、全く認められない場合がある。

本うラ明の化学修０１１ｉ多楯は非常に強い抗腫瘍性を
有するが、’ｔ１７乳動物への毒性は極めて低く、マウ
スに対する急性毒性はＬＤ、。　値で１．５００　ｍｙ
　／　Ｉ＜ｇ以上である。

本発明の化学修飾多糖は公知の抗腫瘍性多糖と同１）Ｒ
１生理的に許容し得る基剤に溶解または分散させて、皮
下、筋肉内、静脈内などへの江射その他の慣用の方法に
よって投与することができる。

投与捕は体重１にｇ当り約α１ないし約１００＋ｙ程度
、好ましくは間約１ないし約２０η程度である。

本発明の化学修飾多糖は式（１）、 −〔→５）β−Ｄ−Ｇｌｕ（１→→ （式中Ｇｌｕはグルコピラノシル基を、数字は結合位餓
を示す）で表わされるβ−１，６−グルコピラノシル基
羊位を繰り返し単位とする主鎖並びにこの主鎖に結合さ
れた、式ＱＶ） （式中Ｇｌｕ及び数字は前記同様の意味を表わし、ｍは
口ないし２の整数を示す）で表わされるカルボニル基を
有する繰り返し単位、又はこのカルボニル基を有する繰
り返し単位及び式（１）、 β−Ｄ−Ｇ　ｌ　ｕ　。

（式中Ｇｌｕ及び数字は前記同様の意味を表わし、ｎは
口ないし２の整数を示す）で表わされるか、ｉり返し単
位からなるアルデヒド型β−１，５−グルカンをセミカ
ルバジド又はヒドロキシルアミンと反″応させてシック
塩基を形成させ、これを還元することによって製造する
ことができる。

この方法（以下、本発明の方法と云う）で出発旬刊であ
るアルデヒド型β−１，６−グルカンの式（ＩＶ）で表
わされるカルボニル基を有する練り返し単位は以下の反
応式に従って式（ｎ）で表わされる繰り返し単位に変換
される。

本発明の方法で出発物質として用いるアルデヒ゛ド型β
−１．６−グルカンは、例えば、特開昭５５−２−５４
０９号公報に開示されているように、キクラゲ（Ａｕｒ
ｉｃｕｌａｒｉａ、　ａｕｒｉｃｕｌａｊｕｄａｅ）子
実体を、アルカリ性水溶液で抽出し、そのアルカリ性水
溶液に溶解しない部分（以下、アルカリ不溶部と云う）
を過ヨウ素酸塩で分解することによって調製することが
できる。

本発明の方法で、アルデヒド型β−１，３−グルカンと
セミカルバジド又はヒドロキシルアミンからシック塩基
を形成させる反応は、水性媒体中、前者１２に対して後
者約０．０口１ないし約α５モル、好ましくは０．０１
ないし０，１モルを添加することによって行うことがで
きる。その際のアルデヒド型β−１，５−グルカンは、
水性媒体中によく分散させる。アルデヒド型β−１，３
−グルカンに対する水性媒体の量は、重量比で約１０な
いし約１、０００倍量、好ましくは約３０ないし３００
倍量程度である。

反応の際の液性ｐＨ約５ないし約１０、好ましくは約６
ないし約８とする。液性調整のために酸、例えば、１月
酸又はアルカリ、例えば、水酸化ナトリウム等を使用す
ることができる。

反応は、通常温度約５ないし約８０℃、好ましくは約１
０ないし約５０℃程度で行う。反応時間は辿常約１０時
同ないし５日間程度、好ましくは２日間程！尼である。

こうしてシック塩基を形成させた後、還元を行う。衛元
剤としては強い還元剤、例えば水素化ホウ素ナトリウム
、シア２７化水素化ホウ素ナトリウムなどを用いる。特
にシアノ化水素化ホウ素ナトリウムが好ましい。還元剤
の量は出発物質として用いたアルデヒド型β−１，３−
グルカン中のカルボニル茫に対して当量以上である。還
元剤の濃度は限定的ではないが約Ｑ、００．１モル濃度
以上、例えば約０．００１ないし約０．１モル程１現を
例示することができる。反応温度は約０ないし約８０℃
、好ましくは約１０ないし約５０℃程ＩＷ１反応時間は
通常数時間ないし５日間程度、好ましくは２日間程度で
ある。

これらの反応によって水溶性の本発明の多糖は水性媒体
中へ溶出される。水性幌：体中へ溶出した本発明の多糖
は、遠心分離などの慣用の方法で不溶性画分を除去した
のち、透析、凍結乾燥等の常法によって単離することが
できる。

以下本発明を実施例によりさらに詳しく説明する。

実施例１ ８Ｍ””　０”のフラスコに原料調製例で得たアルデヒ
ド型β−１，６−グルカン１１をとり、これにセミカル
バジド０．１モルを加え蒸留水を加えて全量１００プと
した。アルデヒドをβ−１，６−グルカンをディスパー
サ−でよく分散させた後、塩酸でｐＨ７に調整し、２日
間マグネチックスターラーで攪拌した。そのあと塩酸で
ｐＨ＆５に調整した後シアン化水素化ホウ素ナトリウム
１．１６　ｆｆを加え攪拌しながら、さらに２日間反応
させた。反応終了後、懸濁物を含んだ反応液を、遠心分
離、濾過し、水溶性画分を、水道水で流水透析した。透
析チューブ内容液を凍結乾燥して目的とする化学修飾多
糖３４ｍｇを得た。

（収率５．４％） 得られた化学修飾多糖の分析結果は以下の通りであった
。

分子量 ４度０．１モル／ｌの塩化ナトリウム水溶液を移動相と
するゲルＦｉ１Ｍ高速液体クロマトグラフィーで、カラ
ムとして東洋Ｕ達工業佃ン製Ｇ−６０００ｐｙを用い、
ゲル瀘過を行うと分子１２１万のりテンションタイムの
位１Ｋに溶出した。

元素分析値 Ｑ：５４．５％ ）１：５．３％ Ｎ　二　９５％ メチル化分析 メチル化分析の結果から 式（Ｉｆ）で表わされる繰り返し単位の個数（主鎖１０
０個当り）　８２．５個 式（１）で表わされる繰り返し単位の個数　“（主鎖１
００個当り）　ロ個 実施例２ セミカルバジド０．１モルに代えてヒドロキシルアミン
０．１モルを用いたほかは実施例１と同様にして化学１
’ｆＱを行い、化学修飾多糖を得た。（収率＆９％） 分子１社 分子４’Ｈ−、９５万のりテンションタイムの位置に溶
出したつ 元素分析値 Ｃ：３６．５％ Ｈ：５．１％ Ｎ：　２．５％ メチル化分析 メチル化分析の結果から 式（Ｉｆ）で表わされる繰り返し単位の個数（主鎖１０
０個当り）　７４個 式（１）で表わされる繰り返し単位の個数（主鎖１００
個当り）　ａ５個 実施例５ ＩＣＲＣウマウス群施例１で得た化学修飾多糖のザルコ
ーマ１８０固形Ｉｔ！　ＩＮに対する効果を試験した。

工ＯＲマウスー匹につキ、ザルコーマ１８０＋＋＝水癌
（１１１１泡６　ｘ　１０’個を、そけい部皮下に接種
した。実験７１Ｆ、は１右ｒｉ　６匹とした。＄ｌｖＪ
細胞移植後、翌日より１０日四重１日１回栗繭重を月見
腔内にα１ｍ／！ずつ投与した。試験４＋７４には、本
発明の化学１で１′Ｉｉｊ多糖（実施例１で得たもの）
を５　ｍｙ　／　ｋｇ・ｄａｙの投与量になるようにし
て用（・、対照群には生理、【【塩水のみを投与した。

腫瘍移植後３５日０にＩＰ！傷を歳出してその重＃１ｋ
を測定した。各群の肺瘍抑１１ｉ１１率は次式により４
卓出した。

−Ｔ 紳潟仰制率（至）＝　Ｘ１００ に こで　Ｃ：対照群の平均腫瘍Ｍ量 Ｔ：試験群の平均１１１−１ｔ４易重量結果を第１表に
示す。

第１表 実施例４ 実施例２で得た化学修飾多糖を用いて実施例６と同様に
して抗腫偏性試験を行った。

結果を第２表に示す。

第２表 本発明で原料として用いたアルデヒド型β−１，３−グ
ルカンは以下のようにして調製した。

原料調製例 アルカリ不浴部の調製 市販の乾燥させたキクラゲ５０４１を、１％塩化ナトリ
ウム水溶液６１で、家庭用ミキサーにより十分粉砕し、
−昼夜静置、浸漬した。このあと１％塩化ナトリウム水
浴液５１を加え、さら−［６０℃、６時間攪拌しながら
加熱し、キクラゲを十分膨叫させた。

さらにキクラゲを微細化するため、ホモジナイザーで粉
砕した後、１２０℃、２０分間オートクレーブで熱水抽
出を行い遠心分離して熱水抽出画分を除いた。残査画分
について、もう一度熱水抽出操作を同様にして行った。

このようにして得られた残置画分に水９１と水酸化ナト
リウム３２４２を加え（この時全容量は１２１となった
）、６０℃、４時間′侃素ガ囲気下でアルカリ抽出を行
った。遠心分離を行いアルカリ抽出画分を除き、アルカ
　□す抽出残置を得た。

このアルカリ抽出残有に水８１と水酸化ナトリウム１５
６１を加え（この時全容量は９１となった）、丹び同様
にしてアルカリ抽出操作を行った。

アルカリ抽出残有に水１０７を加え洗浄、遠心分＾ｔａ
およびｅＪｈ堰濁の操作をｉｆｆ濁液のｐＨが約９にな
るまで繰り返した。懸濁液に希塩酸を加えｐＨを７に調
整した。

次に、この懸濁液に水５／を加え、ホモジナイザー処理
し、アルカリ抽出残有をさらに細分化した。懸濁液にさ
らに水を加えて凍結乾燥し、１４６ｆのアルカリ不溶部
を得た（収率２９％）。このものは実質的に式 ％式％ （式中Ｇｌｕ及び数字は前記同様の意味を表わす）で表
わされるβ−１，３−ゲルコピジノシル基単位を繰り返
し単位とする主鎖とこの主鎖に結合された式値） ÷５）β−Ｄ−Ｇｌｕ’（１→−→ （式中Ｇｌｕ及び数字はＭｊＪ記同悸の意味を表わす）
で表わされる繰り返し単位からなり、主鎖の繰り返し単
位１００個当り式（１）の繰り返し単位の数が約８２．
５個である多糖であった。

ｎの１１自は平均値で約０．１であった。

アルデヒド型多糖の調製 自答≠５１の細口かっ色びんに、アルカリ不溶部２５２
を入れ、蒸留水５１を加え、マグネチックスターラーで
アルカリ不溶部をよく分散させた後、アスピレータ−を
用い脱気した。そのあとメタ過ヨウ素酸ナトリウム６６
２を加え、溶解させた後、攪拌しながら室温で７日間反
応させた。反応が終了後、水洗と改心分離を３回繰り返
して行い、生成したギ酸および残存のメタ過ヨウ素酸ナ
トリウムを除去した。同相に水を加え、凍結乾燥してｚ
ｎｓｒのアルデヒド型多糖を得た（収率８２％）。

このアルデヒド型多糖は実質的に式（１）で表わされる
主鎖と式（＋Ｖ）で表わされる繰り返し単位からなるβ
−１，３−グルカンであった。

式（ロ））のｍの値は平均値で約［１１であった。

また、式（＋）で表わされる主鎖１００個当りの式ＯＶ
）で表わされる繰り返し単位の個数は８２．５個であっ
た。このアルデヒド型多糖の窒素の含有縫は定量限界以
下であった。

特許出與人　東洋留達工業株式会社

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 ＋１１　式（１）、 千−→６）β−Ｄ−Ｇ１ｕ（１÷→ （式中Ｇｌｕはグルコピラノシル基を、数字は結合位置
   を示す）で表わされるβ−１，６−グルコピラノシル基
   単位を繰り返し単位とする主鎖並びにとの主鎖に結合さ
   れた、式（１１）、％式％（１ （式中Ｇｌｕ及び数字は前記同様の意味を表わし、Ｘは
   アミドカルボニルアミノ基又はヒドロキシル基を表わし
   、ｍは口ないし２の整数を示す）で表わされる第二の繰
   り返し単位、又・はこの第二の繰り返えし単位及び式（
   厘）、＋−４ｓ　＞β−Ｄ−Ｇｌｕ’　（１シ（式中ｏ
   １ｕ　’ｌＪｔ、び数字は前記同様の意味を表わし、ｎ
   は口ないし２の整数を示す）で表わされる第三の繰り返
   し単位から成る化学修飾多４病。 （２）　主鎖のグルコピラノシル基単位１００個あた１
   り第二の繰り返し単位の数が約２０ないし８５昭、第三
   の繰り返えし単位の数が、口ないし約５０個である特許
   請求の範囲第１項記載の化学修飾多糖。 （３）濃度α１モル／ｌの塩化す）　ＩＪウム水溶液を
   移動相とするゲル濾過高速液体クロマトグラフィにおい
   て、分子量の値として約１０万ないし約１５０万を示す
   化学修飾多糖である特許請求の範囲第１項又は第２項記
   載の化学修飾多糖。 （４）式（１） 壬→５）β−トｅ１ｕ（１÷→ （式中Ｇｌｕはグルコピラノシル基を、数字は結合位（
   ４を示す）で表わされるβ−１，３−グルコピラノシル
   基単位を繰り返し単位とする主鎖並びにこの主鎖に結合
   された、式（６））％式％（１ （式中Ｇｌｕ及び数字は前記同様の意味を表わし、ｍは
   ０ないし２の整数を示す）で表わされるカルボニル基を
   有する繰り返し単位、又はこのカルボニル基／基を有す
   る繰り返し単位及び式（１）、 ＋−＋３　）β−Ｄ−Ｇｌｕ６（１＋→（式中Ｇｌｕ及
   び数字は前記同様の意味を表わし、ｎは口ないし２の整
   数を示す）で表わされる繰り返し単位から成るアルデヒ
   ド型−β−１，３−グルカンをセミカルバ、シト又はヒ
   ドロキシルアミンと反応させてンッン塩基を形成させ、
   これを還元することを特徴とする、式（１） ％式％（１） （式中Ｇｌｕ及び数字は前記同様の意味を表わす）で表
   わされるβ−１，３−グルコピラノシル基単位を繰り返
   えし単位とする主鎖、並びにこの主鎖に結合された式（
   １１） （式中Ｇｌｕ及び数字は前記同様の意味を表わし、Ｘは
   アミドカルボニルアミノ基又はヒドロキシル基を表わす
   ）で表わされる第二の繰り返し単位、又はこの第二の繰
   り返し半截及び式（１） ％式％（ （式中Ｇｌｕ　、　ｎ及び数字は前記同様の意味を表わ
   す）で表わされる第三の繰り返し単位から成る化学・修
   飾多糖を得ることを特徴とする化学修飾多糖の製造法。 （５）　主鎖のグルコピラノシル基単位１００個あたり
   、式＠）で表わされるカルボニル基を有する繰り返し単
   位の数が約２０ないし約８５個であり、式（１）で表わ
   される繰り返し単位の数が口ないし約６０個であるアル
   デヒド型−β−１，３−グルカンを出発物質として用い
   、主鎖のグルコピラノシル基単位１００個あたり、式（
   Ｆｌ）で表わされる第二の繰り返し単位の数が約２０な
   いし約８５個、式（１）で表わされる第三の繰り返し単
   位の数が口ないし約３０個で−ある化学修飾多糖を得る
   、特許請求の範囲第４項記載の製造法。 （６）化学修飾多糖として、濃度０．１モル／ｌの塩化
   ナトリウム水溶液を移動相とするゲル濾過高速液体クロ
   マトグラフィにおいて、分子量の値として約１０万ない
   し約１５０万を示す多糖を得る、特許請求の範囲第４項
   または第５項記載の製造法。 （７）　出発物質として用いるアルデヒド型−β−１．
   ６−グルカンがキクラゲ子実体のアルカリ不溶部分を過
   ヨウ素酸で酸化して得たものである特許請求の範囲第４
   項ないし第６項のいずれかの項記載の製造方法。