JPS60199001A - 抗腫瘍性多糖誘導体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 の多糖誘導体を有効成分として含む抗腫瘍剤に関するも
のである。

担子菌由来の多糖は、抗腫瘍性を示すことで注目されて
いる。この例としては、シイタケよりのレンチナン、ス
エヒロタケよりのシゾフィランなどが知られている。こ
れらは、いずれも、β−１、３−グルカンを主鎖とし、
β−１、６一結合でグルコースが分岐しているといわれ
ている。

担子菌ブクリツウよりのバキマン、スクレロチウム属の
微生物よりのスクレログルカン同様の構造を持つといわ
れている。

しかしながらこのような類似した構造を持つ多糖であっ
ても，それらの抗腫瘍性には、差が認められるのであり
、時に抗腫瘍性のほとんど認められない場合もある。そ
の原因の一つとして、分岐した糖、即ち側鎖の形態（例
えば、側鎖の数や長さ）の違いによることが考えられる
。

本発明者等は分岐を有するβ−１、６−グルカンにさら
に強力な抗腫瘍性を付与すべく鋭意研究の結果本発明を
なした。

本発明は本質的に式 ％式％（１３ で表わされる第１のくり返えし単位（式中Ｄ　−　Ｇｌ
ｕはＤ一グルコビラノース残基を表わし、βは結合様式
を表わし、数字は結合位置を表わす）、ならびに式 ％式％（１ で表わされる第２のくり返えし単位（式中Ｄ−Ｇｌｕ、
β、及び数字は前記同様の意味を表わし、＋３）βーＤ
ーＧＪｕ（１）＋は主鎖部分を表わし、ｎはロないし２
の整数を表わし，Ｘは式 であられされる基（人は一ＯＨ又は Ｃ）１，ＯＨ で表わされるＤ−グルコピラノシル基を表わし、Ｙは式 で表わされる基（人は前記同様の意味である）、で表わ
されるＤ−グルコビラノース残基な表わす。

これらの両式中、（ＰＩを付した炭素にＸが結合し、０
を付した酸素でグルコビラノース残基に結合する意味で
ある）からなり、前記第２のくり返えし単位中のＸの少
なくとも一部は前記 ＣＨ，ＯＨ 奮 で表わされる基であり、さらにＡの少なくとも一部分は
前記 で表わされる基を同時に含有することを特徴とする、β
−１，５−グル力／を主鎖とする多糖誘導体ならびＫそ
の製造法ならびにそれを含んで成る抗腫瘍剤を提供する
ものである。

本発明の多糖誘導体は好ましくは前記第１および第２の
各くりかえし単位の個数の和１００個あたり、各平均で
第２のくりかえし単位の個数が約１６ないし８５個であ
ることを特徴とする、β−１，３−グルカンを主鎖とす
る多糖誘導体である。

本発明の多糖の物理的化学的性質は以下の通りである。

＋１）　溶解性 ヒスタミンの結合量が少ない場合ＩＮか性ソーダ水溶液
およびジメチルスルホキシドに可溶（しばしばゾル状溶
液となる）であり、メチルアルコール、エチルアルコー
ル、アセトン等に不溶性ないし離溶性である。

（２）元素分析 原料として用いる多糖類の種類ならびにヒスタミンの結
合量によっても異なるが、その元素分析値は、充分に乾
燥した試料においては、通常 Ｃ＝　４１％〜４８％ Ｈ＝５．８％〜＆８％ Ｎ＝α１％〜７．０％ を与える。

（３）分子量 原料として用いる多糖類の種類ならびに調製方法にもよ
るが、通常ジメチルスルホキシドを移動相とする高速液
体クロマトグラフィーでカラムとして東洋曹達製Ｇ−６
ｏｏｏＰＷおよびＧ−３０００ＰＷを用いた場合、分子
量７万〜４５０万の範囲に溶出する。

（４）赤外吸収スペクトル 臭化カリウム錠剤法による赤外吸収スペクトルを第一図
に示した。

（５）構成糖 本発明の多糖誘導体をギ酸および硫酸あるいは硫酸で加
水分解した後、高速液体クロマトグラフィ（移動相：　
ＣＨ，ＣＮ／Ｈ，０＝７５／２５、カラム：東洋１達製
ＬＳ−４５０Ｋ）ならびにペーパークロマトダラフイ（
展開溶媒：ブタノール／ピリジン／水、、＝６／４１５
、発色剤；硫酸銀溶液）ならびにアルジトールアセテー
トに誘導した後ガスクロマトグラフィ（カラＡ　：　Ｔ
ｈｅｒｍｏｎ　−５０００およびＥＣＮ３８−Ｎ）で同
定ならびに定量した。

（イ）本発明の多糖誘導体を完全に加水分解すると糖質
としてはグルコースとグリセロールとグリコールアルデ
ヒドが生成した。

（ロ）本発明の多糖誘導体を箱守法によりメチル化し、
加水分解した後分解物をそのままあるいはアルジトール
アセテートに誘導してガスクロマトグラフィで分析した
所、糖質として主成分として２．４．６−トリー〇−メ
チルグルコースが検出され、少量成分として２．４−０
−メチルグルコースならびに１．３−ジー０−メチル−
グリセリンが検出され、他にごく少量の２．３．４．６
−チトラーＯ−メチルーグルコースと２゜３．４−トリ
ー〇−メチルーグルコースが認められる場合と認められ
ない場合がある。

ｅ→　本発明の多糖誘導体を酸で緩和加水分解すると白
色の沈殿を生ずる。この水溶性画分を高速液体クロマト
グラフィで分析スると糖質としてグリセリンの存在が確
認される。一方この白色沈殿をメチル化し加水分解した
後分解物をそのままあるいはアルジトールアセテートに
誘導してガスクロマトグラフィで分析した所、糖質由来
の化合物としては２．４，６−）リーＯ−メチルーグル
コースのみが主成分として検出され、他に痕跡量の２．
３．４．６−チトラーＯ−メチルグルコースが検出され
る場合がある。

本発明の多糖誘導体は非常に強い抗腫瘍性を有するが哺
乳動物への毒性は極めて低′く、マウスに対する急性毒
性はＬＤお　で１５００１１９／Ｋｔ以上である。

本発明の多糖誘導体は公知の抗腫瘍性多糖と同様、生理
的に許容し得る基剤に溶解または分散させて、皮下、筋
肉内、静脈内などへの注射その他の慣用の方法によりて
投与することができる。投与量は体重１ＫＦ当り約０．
０５ないし約５０１９程度である。

本発明の多糖誘導体は、本質的に式 ％式％（１）） で表わされる第１のくり返えし単位（式中Ｄ　−ＧＪｕ
　ハＤ−グルコビラノース残基を表わし、βは結合様式
を表わし、数字は結合位置を表わす）、ならびに式 ％式％（１３ で表わされる第２のくり返えし単位（式中Ｄ−ＧＪｕ、
β、及び数字は前記同様の意味を表わし、÷５）β−Ｄ
−Ｇｊ！ｕ（１：３＋は主鎖部分を表わし、ｎは口ない
し２の整数な表わで表わされるＤ−グルコピラノシル基
又はＣＨ，ＯＨ １ で表わされる基を表わし、 で表わされる基または式 で表わされるＤ−グルコビラノース残基ヲ表わす。これ
らの前式中、（ト）を付した炭素にＬが結合し、（Ｑを
付した酸素でグルコビラノース残基に結合する意味であ
る）からなり、前記第２のくり返えし単位中のしの少な
くとも一部は前記 ＣＨ，ＯＨ で表わされる基であるカルボニル基を含有するアルデヒ
ド型β−１，３−グルカンをヒスタミン又はその許容し
うる塩類と反応させてシッフ塩基を形成させ、これを還
元することにより製造することができる。

この方法（以下本発明の方法と云う）で出発物質として
用いるアルデヒド型β−１，３−グルカンは、例えばＡ
ｇｒｉｃ％Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、す２）、４１７〜４２
５（１９７Ｂ）に開示されている様にキクラゲ（Ａｕｒ
ｉｃｕｌａｒｉａ　ａｕｒｉ−ｃｕｌａ−ｊｕｄａｅ　
）子実体を、アルカリ性水溶液で抽出し、そのアルカリ
性水溶液に溶解しない部分（以下キクラゲアルカリ不溶
部という）、あるいはフクロタケ（Ｖｏｌｖａｒｉｅｌ
　１ａｖｏｌｖａｃｅａ　）の冷アルカリ抽出多糖ある
いはシイタケ（Ｌｅｎｔｉｎｕｓ　ｅｄｏｄｅｓ　）の
熱水抽出多糖等の主鎖の６位でグルコースの分岐を有す
るβ−１，３−グルカンを過ヨウ素酸又はその水溶性塩
類たとえばメタ過ヨウ素酸ナトリウム又はメタ過ヨウ素
酸カリウムで酸化することにより調製することができる
。

一方の反応物であるヒスタミンあるいはその許容しうる
塩類としては、ヒスタミンあるいはその塩酸塩、リン酸
塩等があげられる。

本発明の方法で、アルデヒド型β−１，３−グルカンと
ヒスタミンあるいはその許容しうる塩類とからシッフ塩
基を形成させる反応は、水性媒体中で行うことができる
。

その際のアルデヒド型β−１，３−グルカンは水性媒体
中によく分散させる。アルデヒド型β−１，３−グルカ
ンに対する水性媒体の量は重量比で約１０ないし約１，
０００倍量、好ましくは約３０ないし３００倍量程度で
ある。反応の際の液性はｐＨ約３ないし約１０．好まし
くは約６ないし約８とする。液性調整のために酸、例え
ば塩酸、又はアルカリ、例えば水酸化ナトリウム等を使
用することができる。

反応は、通常温度約５ないし約８０℃、好ましくは約１
０ないし約５０℃程度で行なう。反応時間は特に限定す
るものではないが、２時間以上が好ましく通常１０時間
ないし５０時間が用いられる。

こうしてシップ塩基を形成させたのち還元を行う。還元
剤としては強い還元剤、例えば水素化ホウ素ナトリウム
、シアン化水素化ホウ素ナトリウムなどが用いられる。

還元剤の量は出発物質として用いたアルデヒド型β−１
，３−グルカン中のカルボニル基に対して当量以上であ
り、通常光量の１．５倍量以上用いる。

還元剤の濃度は限定的ではないが約０．００１モル濃度
以上、例えば約０００１ないし約０．１モル程度を例示
することができる。反応温度は約０ないし約８０℃、好
ましくは約１０ないし約５０℃程度、反応時間は通常数
時間ないし５日間程度、好ましくは数時間ないし２日間
程度である。

なお、この還元反応に先だって、たとえば重炭酸ソウダ
のような化合物で反応液を弱塩基性に調製するのは何ら
差しつかえない。

この反応によって本発明の多糖は水性媒体中へ溶出され
る。水性媒体中へ溶出した本発明の多糖は遠心分離など
の慣用の方法で不溶性画分を除去したのち、アルコール
沈殿透析、凍結乾燥等の常法によって単離することがで
きる。

なお原料として用いるアルデヒド型β−１，３−グルカ
ンは、さらにその原料であるβ−１，５−グル力／を過
ヨウ素酸又はその水溶性塩類で酸化した後、水洗したま
まのものをそのまま用いてもよく、さらに乾燥されたも
のを用いても何らさしつかえない。

また、原料であるアルデヒド型β−１，６−グルカン調
製の段階ないし本発明の多糖誘導体調製の任意の段階で
たとえば超音波処理等の低粘度化処理、ギ酸による主鎖
切断操作など行なうのは何ら差しつかえない。

以下、本発明を実施例によりさらに詳しく説明する。

実施例１ フラスコに原料調製例１で調製したキクラゲアルカリ不
溶部５ｔをいれ、蒸留水４００−を加えディスパーザ−
でよく分散させる。メタ過ヨウ素酸ナトリウム１０Ｆを
６００−の蒸留水に溶解させた溶液を加え、０．３規定
のか性ソウダを滴下しＰＨを５８に保ち、ちっ累算囲気
で遮光下に３０℃で４４時間反応させた。

ついで１０−のエチレングリコールを加え約２時間攪拌
後、反応液を１２０００Ｇで１５分間遠心分離した。得
られる固形物を蒸留水１１に加え、ディスパーザ−で分
散させた後、再び遠心分離を行なった。得られた固形物
をもう一度水洗し、固形物を得た。この固形物を５００
ＷＩｔの蒸留水にいれディスパーザ−でよく分散させた
後、ヒスタミン・二塩酸塩α５ｆを加え室温下ｐＨ８で
１日攪拌した。次いで遠心分離し沈殿を得た。この沈殿
ＫＩＪの蒸留水を加えよく分散させ水素化ホウ素す）Ｉ
Ｊウム３．５ｔを加え１０℃で１日攪拌した後遠心分離
し上清と沈殿に分けた。この沈殿に対し水素化ホウ素ナ
トリウムを１ｆとした他は前記と同様に還元操作をさら
に２回施し、上清と沈殿を得た。

３回のこの操作の上清区分を合せ、酢酸で中和しＰＨａ
ｏとした。この液を減圧下に約４００ｄにまで濃縮し、
濃縮液に３倍量のメチルアルコールを加えた。遠心分離
により生じた沈殿を分離した後、この沈殿に水を加え溶
解させ次いで７日間流水中で透析した。透析内液を凍結
乾燥し目的の物質０．９９　ｆを得た。

かくして得られた多糖誘導体は以下の性状を有していた
。

１）元素分析値 充分に乾燥した本物質の元素分析値は以下の通りであっ
た。

Ｃ：４４．８％ Ｈ：　６３％ Ｎ：　ｔｉ％ 本化合物のヒスタミン結合量は、前記したくりかえし単
位１００個あたり約１１個と計算される。

２）赤外吸収スペクトル 臭化カリウム錠剤法による赤外吸収スペクトルを第１図
に示す。

３）アセチル化分析 よく乾燥された試料５１１９を精秤し、蒸留水１−を加
えよ〈分散させた。次いで２規定硫酸１−を加え９８℃
〜１００℃で１８時間加熱し加水分解した。冷却後水酸
化バリウムで中和後、内部標準としてトリエチレングリ
コールを加え、よく混合し遠心分離した。上澄液をとり
よく乾燥させた後、ピリジンと無水酢酸の混合液（に１
）α２−を加え、１００℃で２時間加熱しアセチル化し
た。

反応液をガスクロマトグラフィー（カラム：　Ｔｈｅｒ
ｍｏｎ　５０００．５％ｃｈｒｃｍｏｓｏｒｂｉｖ−Ａ
Ｗ　ＤＭＣ８）で分析した所、酸水解液中のグリセリン
量は試料乾燥重量あたり１４．１％であった。このグリ
セリンは前記したＡが水酸基である式Ｘより生成し友も
のである。

り分子量 ジメチルスルホキシドを移動相とし、東洋１達製Ｇ６０
００　ＰＷおよびＧｓｏｏｏＰＷカラムを用いた高速液
体クロマトグラフィーで分子量約５００万の位置を中心
に溶出した。

実施例２ 原料調製例２で調製したキクラゲのアルデヒド型β−１
，３−グルカン４ｔを蒸留水４０（ｌａｇにいれ攪拌下
に減圧で充分脱気した後ディスパーザ−でよく分散させ
た。次いでヒスタミン・二塩酸塩０．７５　ｆを加え、
ちっ累算囲気下にｐ　Ｈｓ、　ｏで２日間よく攪拌した
。ついで還元、中和、濃縮、アルコール沈殿まで実施例
１と同様な操作を行なりだ。アルコール沈殿物を蒸留水
５００ＴＩｔにいれ攪拌下に２０ＫＨｚ　１４０Ｗで１
２０分超音波を照射した。次いで７日間流水中で透析を
行ない内液を凍結乾燥し、目的の物質０．８４ｆを得た
。

本多糖誘導体は次の性質を有していた。

１）元素分析 充分に乾燥した本物質の元素分析値は以下の通りであっ
た。

Ｃ：４６．０％ Ｈ：　６．４％ Ｎ：４．３％ この元素分析値より本化合物のヒスタミン結合量は前記
したくりかえし単位１００個あたり約１６個と計算され
る。

２）アセチル化分析 実施例１と同様にアセチル化分析を行なった所、酸水解
液中のグリセリン量は試料乾燥重量あたり１ｔ２％であ
った。グリセリンは前記したＡが水酸基である式Ｘより
生成したものである。

３）分子量 実施例１と同様の条件において分子量約１２０万の位置
に溶出した。

実施例３ 原料調製例２で調製したキクラゲのアルデヒド型β−１
，Ｓ−／ルカン４ｆとヒスタミンα６ｔを用い、実施例
２と同様に反応を行なった。

遠心分離した後の沈殿の還元操作において液量を２ｊに
した以外、は実施例２と同様に行ない、目的の多糖誘導
体α２４１を得た。

本多糖誘導体は次の性質を有していた。

り元素分析 充分に乾燥された本物質の元素分析値は以下の通りであ
った。

Ｃ：４＆６％ Ｈ二　６５％ Ｎ：　４８％ であった。この結果より本化合物のヒスタミン結合量は
前記したくりかえし単位１００個あたり約１８個と計算
される。

２）アセチル化分析 実施例１と同様にアセチル化分析を行なった所酸水解液
中のグリセリン量は試料乾燥重量あたり９８％であった
。

３）分子量 実施例１と同様の条件において分子量約１００万の位置
を中心に溶出した。

実施例４ 原料調製例６で調製したフクロタケのアルデヒド型β−
１，３−グルカン２ｆを蒸留水２０（ｌｑｔ中にいれ攪
拌下に減圧にして脱気し、またディスハーサーでよく分
散させた。次いでヒスタミン２塩酸塩０．２ｇを加えｐ
Ｈ７に調製し、室温下で２日間攪拌した。次いで遠心分
離し、沈殿を得た。

この沈殿を１ｊの蒸留水中に分散させ、シアノ化水素化
ホウ素ナトリウム４ｆを加え一日間攪拌した。遠心分離
して上清と沈殿に分離し、沈殿を再び１１の蒸留水に分
散させシアノ化水素化ホウ素ナトリウム１ｆを加え同様
に遠心分離し上清と沈殿を得た。上清を合し以下実施例
１と同様な操作により目的の多糖誘導体α８５ｆを得た
。

本多糖誘導体は次の性質を示した。

１）元素分析値 充分に乾燥された本物質の元素分析値は以下の通りであ
った。

Ｃ：　４５．１％ Ｈ：　６．４％ Ｎ：　１４％ この結果より本化合物のヒスタミン結合量は前記したく
りかえし単位１００個あたり約７個と計算される。

２）赤外吸収スペクトル 臭化カリウム錠剤法による赤外吸収スペクトルを第２図
に示す。

Ｓ）アセチル化分析 実施例１と同様にアセチル化分析を行なった所酸水解液
中のグリセリン量は試料乾燥重量あたり、４．７％であ
りた。

す分子量 実施例１と同様の条件において分子量約３００万の位置
を中心に溶出した。

実施例５ 原料調製例３で調製したフクロタケのアルデヒド型β−
１，５−グルカン２ｖとヒスタミンニリン酸塩［１２５
ｆを実施例４と同様にして反応させ、ついで遠心分離し
た。得られる沈殿を４００−の蒸留水中にいれ、水素化
ホウ素ナトリウム２ｔを加えディスパーザ−でよく分散
させた後、攪拌下に２０ＫＨ１１４０Ｗで１２０分超音
波を照射した。

次いて蒸留水６００−を加え１夜攪拌後遠心分離した。

この沈殿を１１の蒸留水によく分散させ、１ｆの水素化
ホウ素ナトリウムを加え２０時間攪拌後再び遠心分離し
た。２回の遠心分離の上清を合し、同上の条件で２０分
間超音波を照射し、以下実施例１と同様の操作により目
的の多糖誘導体１０３Ｆを得た。

１）元素分析値 充分に乾燥された本物質の元素分析値は以下の通りであ
った。

Ｃ：４４．９％ Ｈ：　６４％ Ｎ：　ｔｏ％ この結果より１本化合物のヒスタミン結合量は前記した
くりかえし単位１００個あたり、約５個と計算される。

２）アセチル化分析 実施例１と同様にアセチル化分析を行なった所、酸水解
液中のグリセリン量は試料乾燥重量あたり　９．５％で
あった。

３）実施例１と同様の条件において分子量約７０万の位
置に溶出した。

実施例６ 体重的２５１のＴＣＲ系マウスを用い、本発明の多糖誘
導体のザルコーマ１８０固型腫瘍に対する効果を試験し
た。腹水化されたザルコーマ１８０細胞６００万個をそ
けい部皮下から背部に向は皮下に接種した。実験群は１
群６匹とした。腫瘍細胞接種後翌日より１０日間、１日
１回薬剤を腹腔内にＱ、１−ずつ投与した。対照群とし
ては０．５％のカルボキシメチルセルロースを含む生理
食塩水を用い、試験群は本発明の多糖誘導体を５１ｑ／
Ｋｇ／　ｄａｙの投与量になるように上記生理食塩水に
溶解させ用いた。

腫瘍移植後３５日０に腫瘍を摘出してその重量を測定し
た。各群の腫瘍抑制率は次式により算出した。

−Ｔ 腫瘍抑制率％＝了Ｘ１００ ここでＣ：対照群の平均腫瘍重量 Ｔ：試験群の平均腫瘍重量 結果を第１表に示す。

比較例１ 実施例６と同様腫瘍ならびにマウスを用いての方法を用
い、原料調製例１ないし３の化合物の抗盾瘍を検討した
。

結果を第２表に示した。

実施例７ 体重的２５９のＩＣＲ系マウスにエールリッヒ・カルシ
ノーマ細胞５００万個を実施例６と同様に移植し、以下
実施例６と同様に行なった。

結果を第３表に示す。

比較例２ 原料調製例１ならびに３の化合物の抗腫瘍性を実施例７
と同様に試験したところ第４表の結果を得た。

実施例８ 体重的２１ｆのＣ３Ｈ／Ｈｅ系マウスにザルコーマ１８
０細胞を実施例６と同様に移植し、以下実施例６と同様
に行なった結果を第５表に示す。

また、比較例として同時に原料多糖の抗腫瘍性結果を第
５表に示した。

［ 「 第２表 試　料　売４．ア一　″′ｉ謬１１１　”ｒ“原料調製
例　５　６．５１　２１．１ １の多糖 原料調製例 ２のフルデ　５　７．８９　４．４ ヒト型多糖 原料調製例 ３のフルデ　５　７．４７　９．５ ヒト型多糖 第３表 第４表 第５表 原料調製例１ キクラゲアルカリ不溶部の調卿 乾燥キクラゲ５００ｆを粉砕した後、１％食塩水６１に
いれ一夜浸漬した後、さらに５１の１％食塩水３１を加
え６０℃で６時間攪拌した。遠心分離により得られる沈
殿を蒸留水１０ｊにいれホモジナイザーでよく粉砕した
ｆｌｋ１２０℃で２時間熱水抽出を行なった。遠心分離
により得られる沈殿に再び同様の熱水抽出を施した。

このようにして得られた残置画分にＩＮ水酸化す）　９
ウム溶液９！を加え６０℃、４時間、窒素雰囲気下でア
ルカリ抽出を行っ九。遠心分離を行ないアルカリ抽出画
分を除き、アルカリ抽出残置を得た。このアルカリ抽出
残置に１Ｎ水酸化ナトリウム溶液８１を加え、再び同様
にしてアルカリ抽出操作を行った。

アルカリ抽出残置に水１０１を加え洗浄、遠心分離及び
再懸濁の操作を懸濁液の・ｐＨが約９になるまで繰り返
した。懸濁液に希塩酸を加え吊Ｈを７に調整した。

次にこの懸濁液に水５１を加え、ホモジナイザー処理し
、アルカリ抽出残置をさらに細分化した。

懸濁液にさらに水を加えて凍結乾燥し、１４６ｆのアル
カリ不溶部を得た（収率２９％）。

このキクラゲアルカリ不溶部は本質的にグルコースより
成る、分岐を有するβ−１，３−グルカンであり本質的
に式 ％式％（１３ で表わされる第１のくり返えし単位（式中Ｄ−ＧＪ　ｕ
はＤ−グルコピラノシル基を表わし、βは結合様式を表
わし数字は結合位置を表わす）、ならびに式 ％式％ ） （１ で表わされる第２のくり返えし単位（式中Ｄ−Ｇｌｕ、
β、及び数字は前記同様の意味を表わし。

→３）β−Ｄ−Ｇｌｕ（１′３＋は主鎖部分を示し、ｎ
は１又は２である）からなるβ−１，５−グルカンであ
り、齢記第１、第２のくりかえし巣位の和１００個あた
り、第２のくり返えし単位は約７０個であり、第１のく
り返えし単位は約５０個でありた。

原料調製例２ キクラゲアルデヒド型多糖の調製 内容量５ｊの細口かっ色びんに、上記したキクラゲアル
カリ不溶部２５ｆを入れ、蒸留水５１を加え、ディスパ
ーザ−でよく分散させた後、メタ過ヨウ素酸ナトリウム
６６２を加え、溶解させた後、攪拌しながら、５℃でつ
いで１１日間反応させた。エチレングリコール５０−を
加え１時間攪拌後、遠心分離し沈殿に対し水洗と遠心分
離を３回繰り返して行い、生成したギ酸及び残存のメタ
過ヨウ素酸ナトリウム等を除去した。沈殿を凍結乾燥し
て２０．１Ｆのアルデヒド型β−１，３−グルカンを得
た。

このアルデヒド型β−１，５−グルカンの窒素の含有量
は定量限界以下であり、原料であるアルカリ不溶部の分
岐グルコースが酸化された形態を有する。

原料調製例６ 乾燥したフクロタケ子実体５００ｆを０．９％の食塩を
含むｐ　Ｈ７，０の０．１　Ｍ　ＩＪン酸塩緩衝液５ｊ
に一夜浸した後、ディスパーザ−で破砕した。さらにこ
れに同じ緩衝液７１を加えて４時間攪拌し遠心分離した
。得られた固形分を同じ緩衝液７１に入れディスパーザ
−で分散させた後、４時間攪拌、遠心分離し沈殿を得た
。この沈殿を６１の水に分散させ、オートクレーブ中で
１２０℃で３０分間加熱した。冷却後遠心分離して沈殿
を得た。

この熱水抽出処理をさらに４回くり返し、水溶性画分を
ほぼ完全に抽出除去した。

こうして得られた水不溶性画分を、水素化ホウ素す）　
ＩＪウム５ｔを溶解させた１規定水酸化ナトリウム水溶
液１０！に分散させた。窒素気流下に２５℃で４時間攪
拌した後遠心分離した。この沈殿に対して１規定水酸化
ナトリウム水溶液による抽出操作をくり返した。雨水酸
化ナトリウム抽出液を合併し、これを酢酸で中和し、ｐ
　Ｈ６，５に調整した。

次いで２倍量のエチルアルコールを加えた後遠心分離を
した。得られる沈殿に２１の蒸留水な加え流水中で５日
間透析した。透析内液にα０２モル／！の硫酸ナトリウ
ム溶液２１を加え約２０時間よく攪拌した後遠心分離し
九。

得られる沈殿を４１の０．０１モル／ｌの硫酸ナトリク
ム溶液中に分散させ、同様の洗浄操作を行なった。遠心
分離により得られる沈殿を２１の蒸留水に分散させ、流
水中で８日間透析した後、フクロタケのβ−１，３−グ
ルカン２１ｆを得た。

このβ−１，３−グルカンは、原料調製例１で記した第
１および第２のくりかえし単位から成り、第１および第
２のくりかえし単位の和１００個あたり、第２のくりか
えし単位は約２２個であった。

かくして調製した分岐を有するβ−１，３−グルカンｉ
ｏｆをかっ色びんにとり２ｊの蒸留水を加えよく分散さ
せ、１２ｔのメタ過ヨウ素酸ナトリウムを加え、遮光下
に５℃で１０日間攪拌し友。

ついでエチレングリコール１０−を加え１時間攪拌後遠
心分離し沈殿を得た。この沈殿を２１の蒸留水中に充分
分散させ、再び遠心分離して得た沈殿を透析し凍結乾燥
しフクロタケのアルデヒド製多糖７．８　ｆを得た。こ
のアルデヒド型多糖の窒素の含有量は元素分析で定量限
界以下であり、原料であるフクロタケアルカリ不溶部の
分岐グルコースが酸化された形態を有する。

特許出願人　東洋１達芋業株式会社

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）本質的に式 ％式％（１ で表わされる第１のくり返えし単位（式中Ｄ−Ｑｌｕは
   Ｄ−グルコビラノース残基を表わし、βは結合様式を表
   わし、数字は結合位置を表わす）、ならびに式 で表わされる第２のくり返えし単位（式中り−Ｇｌｕ、
   β、及び数字は前記同様の意味を表わし、−１＋３）β
   −Ｄ−ＧＪｕ（１＊は主鎖部分な表わし、ｎは口ないし
   ２の整数を表わし、Ｘは式であられされる基（Ａは一〇
   〇又は ＣＨ，ＯＨ で表わされるＤ−グルコピラノシル基を表わし、Ｙは式 ％式％ で表わされる基（Ａは前記同様の意味である）。 又は で表わされるＤ−グルコビラノース残基を表わす。これ
   らの前式中、（乃を付した炭素にＸが結合し、（Ｑを付
   した酸素でグルコビラノース残基に結合する意味である
   ）からなり、前記第２のくり返えし単位中のＸの少なく
   とも一部は前記 ＣＨ，ＯＨ で表わされる基であり、さらにＡの少なくとも一部分は
   前記 で表わされる基を同時に含有することを４！徴とするβ
   −１，ｓ−グルカンを主鎖とする多糖誘導体。 （２）前記第１および第２の各〈り返えし単位の個数の
   和１００個当り、各平均で、第２のくり返えし単位の個
   数が約１６ないし約８５個であることを特徴とするβ−
   １，３−グルカンを主鎖とする多糖誘導体。 （３）　ジメチルスルホキシドを移動相とし、東洋盲達
   製Ｇ４ｏｏｏＰＷおよびＧ６ｏｏｏＰＷをカラムとした
   高速液１１本クロマトグラフィーで分子量７万ないし４
   ５０万の範囲に溶出する特許請求の範囲第（１１項又は
   第（２）項記載の多糖誘導体。 （４）本質的に式 ％式％（１ で表わされる第１のくり返えし単位（式中Ｄ−Ｇｊｕ［
   Ｄ−グルコビラノース残基を表わし、βは結合様式を表
   わし、数字は結合位置を表わす）ならびに式 ％式％（１）） で表わされる第２のくり返えし単位（式中Ｄ−ＧｊｕＪ
   ”β、及び数字は前記同様の意味を表わし、÷３）β−
   Ｄ−ＧＪｕ（１シは主鎖部分を表わし、ｎＵＯないし２
   の整数を表わし、で表わされるＤ−グルコピラノシル基
   又はＣＨ，ＯＦ（ ■ １ で表わされる基を表わし、 Ｍは式 で表わされる基または式 で表わされるＤ−グルコビラノース残基な表わす。これ
   らの前式中、（Ｐｉを付した炭素にＬが結合し、０を付
   した酸素でグルコビラノース残基に結合する意味である
   ）からなり、前記第２のくり返えし単＾Ｌの少なくとも
   一部は前記 ＣＨ，ＯＨ １ で表わされる基であるカルボニル基を含有するアルデヒ
   ド型β−１，３−グルカンをヒスタミン又はその許容し
   つる塩類と反応させてシップ塩基を形成させ、これを還
   元することを特徴とする、本質的に式 ％式％（１ で表わされる第１のくり返えし単位（式中り−Ｇｊｕハ
   Ｄ−グルコビラノース残基を表わし、βは結合様式を表
   わし、数字は結合位置を表わす）、ならびに式 ％式％（１） で表わされる第２のくり返えし単位（式中Ｄ−Ｇｌｕ、
   β、及び数字は前記同様の意味を表わし、＋３）β−Ｄ
   −ＧＪｕ　（１−）は主鎖部分を表わし、ｎは口ないし
   ２の整数を表わし、Ｘは式 であられされる基（Ａは−ＯＨ又は ＼、／ ＾　占Ｈ で表わされるＤ−グルコピラノシル基を表わし、Ｙは式 で表わされる基（人は前記同様の意味である。）、又は で表わされるＤ−グルコビラノース残基を表わす。これ
   らの前式中、（乃を付した炭素にＸが結合し、（Ｑを付
   した酸素でグルコビラノース残基に結合する意味である
   ）からなり、前記第２のくり返えし単位中のＸの少なく
   とも一部は前記 Ｈ１ＯＨ で表わされる基であり、さらに人の少なくとも一部分は
   前記 で表わされる基を同時に含有することを特徴とするβ−
   １，３−グルカンを主鎖とする多糖誘導体の製造法 （５）前記第１および第２のくり返えし単位の個数の和
   １００個当り、各平均で、第２のくり返えし単位の個数
   が約１６ないし、約８５個であることを特徴とする、β
   −１，３−グルカンを主鎖とする多糖誘導体を特徴する
   特許請求の範囲第（４）項記載の製造法。 （６）　ジメチルスルホキシドを移動相とし、東洋１達
   製Ｇ　４０００　ＰＷおよびＧ１０ＯＰＷをカラムとし
   た高速液体クロマトグラフィーで分子量７万ないし４５
   ０万の範囲に溶出する多糖誘導体を得る。特許請求の範
   囲第（４）項又は第（５）項記載の方法。 （力　出発物質として用いるアルデヒド型−β−（学名
   Ｖｏｌｖａｒｉｅｌ　Ｉａ　ｖｏｌｖａｃｅａ　）のア
   ルカリ抽出部分を過ヨウ葉酸あるいはその水溶性塩類で
   酸化して得たものである特許請求の範囲第４項ないし第
   ６項のいずれかの項記載の製造方法 （８）本質的に式 ％式％（１） で表わされる第１のくり返えし単位（式中Ｄ−Ｇｊｕハ
   Ｄ−グルコビラノース残基な表わし、βは結合様式を表
   わし、数字は結合位置を表わす）、ならびに式 ％式％（１ で表わされる第２のくり返えし単位（式中Ｄ−ＧＡ　ｕ
   、β、及び数字は前記同様の意味を表わし、（＋３）β
   −Ｄ−ＧＪｕ（１＋＋ｉ主鎖部分を表わし、ｎは口ない
   し２の整数を表わし、Ｘは式 であられされる基（人は−ＯＨ又は ＼ｌ ＣＨ，０）（ で表わされるＤ−グルコピラノシル基を表わで表わされ
   る基（Ａは前記同様の意味である）、で表わされるＤ−
   グルコビラノース８基を表わす。これらの前式中、（Ｄ
   を付した炭素にＸが結合し、ｑを付した酸素でグルコビ
   ラノース残基に結合する意味である）からなり、前記第
   ２のくり返えし巣位中のＸの少なくとも一部は前記 ＣＨ，ＯＨ 園 で表わされる基であり、さらにＡの少なくとも一部分は
   前記 ＼Ｃ／ で表わされる基を同時に含有することを特徴とするβ−
   １，３−グル力／を主鎖とする多糖誘導体を含んで成る
   抗腫瘍剤。 （９）前記第１および第２の各〈り返えし単位の個数の
   和１００個当り、各平均で、第２のくり返えし単位の個
   数が約１６ないし約８５個であることを特徴とするβ−
   １，３−グルヵンを主鎖とする多糖誘導体を含んでなる
   抗腫瘍剤 α〔キクラゲ属（学名Ａｕｒｉｃｕｌａｒｉａ　）の菌
   類のアルカリ不溶部分あるいはフクロタケ（学名Ｖｏｌ
   ｖａｒｉｅｌｌａ　＄アルカリ抽出部分から製造される
   特許請求の範囲（８）ないしく９）記載の抗腫瘍剤