JPH0469344B2 - - Google Patents
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- JPH0469344B2 JPH0469344B2 JP58191087A JP19108783A JPH0469344B2 JP H0469344 B2 JPH0469344 B2 JP H0469344B2 JP 58191087 A JP58191087 A JP 58191087A JP 19108783 A JP19108783 A JP 19108783A JP H0469344 B2 JPH0469344 B2 JP H0469344B2
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Description
発明の分野
哺乳類の赤血球（RBC）は、多数の抗原を保
持しており、そのいくつかは輸血のような医療に
際し、患者及び供与者において正確に同定されな
ければならないものである。血液型Ａ，Ｂ，AB
またはＯの正確な決定及びRh因子の決定は極め
て重要である。また、このような抗原に対する血
中の抗体も診断上重要である。 これまで、凝集法が顕微鏡用スライドガラス上
また試験管内で用いられている。しかしながら、
試験すべき試料の数が多いという状況を考える
と、改良された、迅速且つ正確な赤血球のスクリ
ーニングが要望される。 従来技術 凝集法による赤血球（RBC）抗原の同定が標
準的なものであり、たとえば、C.ハドソン
（Hudson）及びF.ヘイ（Hay）の方法〔プラクテ
イカル・イムノロジー（Practical
Immunology），第２版、ブラツクウエル・サイ
エンテイフイツク・パブリケーシヨンズ
（Blackwell Seientific Publications），オクスフ
オード（Oxford），（1980），P.139，米国特許第
3862303号〕はラテツクスビーズのようなキヤリ
アー粒子を用いた血清因子の免疫学的検出及び同
定を代表するものである。スミス（Smith）〔フ
エブス・レターズ（FEBS Letters）77，25
（1977）〕は螢光イムノアツセイについて述べてい
る。 発明の概要 本発明によれば、螢光粒子を用いて赤血球
（RBC）または赤血球に対する抗体の型を判定す
る方法が提供される即ち、本発明に従えば、赤血
球に結合した赤血球の表面抗原または該表面抗原
に対する抗体の試料中における存在を分析する方
法であつて、 該試料を、該表面抗原と相同性のレセプターま
たは該表面抗原と接合し、その螢光が該赤血球に
よつて消光され得る螢光粒子と混合し、 該赤血球に結合した表面抗原の分析にはレセプ
ター接合体のみを用い、該抗体の分析には（ａ）
抗原接合体を同一抗原を有する赤血球と組み合わ
せて用いるかまたは（ｂ）レセプター接合体を該
抗体と相同性の抗原を有する赤血球と組み合わせ
て用い、そして 既知赤血球抗原またはこれに対する抗体を有す
る試料と比較して螢光の変化を測定する ことを含んでなる分析方法が提供される。粒子
は、所定のRBC表面リガンドまたは抗原に特異
的に結合する相同性のレセプター（注：「相同性」
とは接合関係にあるような二種の物質又は部分、
例えばリガンドとレセプター、抗原−抗体接合体
を意味し、表面抗原と相同性のレセプターは例え
ば抗体とすることができる）に接合させる。
RBCが相同性のリガンドを有する場合には、結
合が起こつて螢光が消える。抗体の検出には適切
な抗原を有するRBCを用い、抗体が存在すると
螢光は減少する。 本発明は、検出可能なシグナルを生じさせるた
めに螢光粒子を用いるアツセイにおいて、赤血球
を螢光消光物質として用いることによつて赤血球
の型を判定するかまたは赤血球（RBC）抗原も
しくは赤血球抗原に対する抗体を同定するための
新規方法を提供する。RBC抗原に結合する物質、
通常は抗体またはレクチン（以下、「レセプター」
と称する）を螢光粒子に接合させる。粒子−接合
体の溶液を適当な緩衝液とともに赤血球、たとえ
ば、全血と合する。レセプターに対して特異的な
結合部位または決定基部位を有する抗原がRBC
上に存在する場合には、接合粒子は螢光消光物質
として働くRBCに結合するであろう。 使用するレセプターは種々のRBC表面抗原に
選択的に結合する。従つて、所定のRBC試料中
に所定の抗原が存在する場合には、存在しない場
合に比較して螢光分析法によつて測定可能な螢光
の減少がみられるであろう。たとえば、Ａ，Ｂ，
Ｏ系においては、螢光粒子を抗−Ａ抗体に接合さ
せると、分析物質がＡ型またはAB型血液のＡ抗
原を含む場合には結合が起こり、分析物質が血液
型ＢまたはＯを含む場合よりも螢光が大きく減少
するであろう。 抗体の他に、ある種のレクチンが種々の結合度
でRBC表面抗原に結合することが知られており、
これらは螢光分析に使用するのに適したレセプタ
ーである。 本方法はまた、RBC抗原に対する抗体の存在
の分析にも使用できる。次の２種の方法が使用で
きる。第一の方法では、抗体を接合させた螢光粒
子を既知の血液型のRBC上の抗原部位に関して
血漿または血清試料中の抗体と競合させる。この
方法では、試料中の特異抗原に対する抗体の量の
増加に伴い、観察される螢光が増大する。第二の
方法では、問題の表面抗原に螢光ビーズを接合さ
せ、そして試料中に存在する抗体が既知の血液型
のRBCと抗原を接合させた螢光粒子との間の橋
として作用する。この場合には、螢光の減少が抗
体の存在を示すであろう。 螢光物質を選択する場合、RBCは415nmを越
える波長で光学的密度が高いので、螢光の励起ま
たは発光415nmまたはそれ以上、通常は約400〜
430nmで測定するのが望ましい。 螢光物質については高い吸光係数が望ましく、
10よりかなり大きく、好ましくは100以上とすべ
きである。螢光粒子は高量子収量のものを選択す
る。 さらに、螢光物質は大きいストークス・シフト
（Stokes shift）、好ましくは20nmより大きい、
より好ましくは30nmより大きいストークスシフ
トを有するのが望ましい。すなわち、螢光物質に
関して吸収極大と発光極大の間にかなりの波長が
広がり、すなわち、差があるのが好ましい。 望ましい特性を多数有する一群の螢光物質はキ
サンテン染料、たとえば、３，６−ジヒドロキシ
−９−フエニルキサンチヒドロールから誘導され
るフルオレセイン類ならびに３，６−ジアミノ−
９−フエニルキサンテンから誘導されるローダミ
ン類及びローザミン（rosamine）類である。ロ
ーダミン及びフルオレセイン類は９−０−カルボ
キシフエニルキサンテン基を有し、９−０−カル
ボキシフエニルキサンテン誘導体である。 これらの化合物はフエニル基上に置換基を有す
るものも有さないものも市販されている。 別の群の螢光化合物は、αまたはβ位、通常は
β位にアミノ基を有するナフチルアミン類であ
る。ナフチルアミノ化合物としては、１−ジメチ
ルアミノナフチル−５−スルホネート、１−アニ
リノ−８−ナフタレンスルホネート及び２−ｐ−
トルイジニル−６−ナフタレンスルホネートが挙
げられる。問題の他の螢光物質としては、クアリ
ン類、たとえば、ウンベリフエロン及び希土類キ
レート、たとえば、Tb，Tu等が挙げられる。 標準法を用いて適当な粒子を螢光物質と結合さ
せて螢光ビーズまたは微小球を生成する。螢光粒
子は市販されている。螢光ビーズは寸法も組成も
広範囲に変えることができ、その寸法は一般には
直径約0.1〜2μ、より普通には約0.6〜1μである。
ビーズは通常は不活性材料から作られ、複数の螢
光発色団官能価を含む。ビーズはビーズあたりの
シグナルが大きいように充分な濃度の螢光官能価
を有する。ビーズには種々の有機ポリマー、たと
えば、ポリスチレン、ポリメタクリレート等もし
くは無機ポリマー、たとえば、ガラスまたはそれ
らの組み合わせを使用できる。ポリマー組成物の
特定の選択は主として便宜上のものである。 共有結合または非共有結合によつて螢光ビーズ
に接合されるレセプターは単クローン性抗体を含
む抗体またはレクチンであることができ、これら
は特異RBC表面抗原またはこのようなRBC表面
抗原の決定部位を有する抗原に特異的に、すなわ
ち、識別して結合する。 レセプターは文献（既に述べたのでここでは繰
り返さない）中に広範囲に述べられている標準法
を用いて螢光ビーズに吸着させる。あるいは、レ
セプターは常法に従つて共有結合させてもよい。 アツセイの実施の際には、１〜50容量％、好ま
しくは約２〜20容量％、より好ましくは約３〜５
容量％のRBC′sを含んでなる緩衝化した水溶液中
のRBC試料を、螢光ビーズの濃度が約0.1〜５重
量％、通常は0.1〜３重量％である約同容量の接
合螢光ビーズ−レセプター溶液と混合する。 対照として、RBC−結合能を有さない同一容
量の螢光ビーズ溶液を同容量のRBC溶液と混合
する。混合した溶液は０〜約37℃、好ましくは約
15〜25℃の緩和な温度に120分以下、好ましくは
１〜10分間放置する。他の対照も使用できる。一
例として遊離抗原もしくは抗体と添加できるであ
ろうし、あるいはＡ，ＢもしくはＯ型の血液もし
くは血清の標準標品と比較することもできるであ
ろう。 実施例 本発明を以下の実施例について説明するが、こ
れらは本発明を限定するものではない。 螢光ラテツクスの調整 試験管内で、燐酸塩を緩衝剤として添付した生
理食塩液（PBS）中0.1％ｗ／ｖトリトン
（Triton）Ｘ−100の溶液5.0mlを染料〔クマリン
（Coumarin）153、イーストマン・コダツク
（Eastman Kodak）〕のトルエン中0.2M溶液
0.035mlと合した。よく混合した後、多少乳白光
を発する溶液を得た。この染料／洗浄剤混合物
に、粒度0.5μの単分散ポリスチレンラテツクス
〔ポリサイエンシーズ（Polysciences）〕の2.5％
懸濁液0.50mlを加えた。この混合物を３時間放置
し、次いで遠心分離し、そしてPBS中0.1％トリ
トンＸ−100でよく洗浄した。然る後に、ラテツ
クス懸濁液をPBS中0.1％トリトンＸ−100で5.0
mlとした。 欧州産ハリエニシダ（Ulex europaeus）レ
クチンの螢光ラテツクスへの吸着 PBS／TX−100中2.5％の前記着色ラテツクス
150μをpH8.2のグリシンを緩衝剤として添加し
た生理食塩液（GBS）1.0mlに加えた。このラテ
ツクス懸濁液に欧州産ハリエニシダレクチン〔シ
グマ（Sigma）〕の2.0mg／ml溶液200μを加え
た。この懸濁液をよく混合し、そして遠心分離し
た。上清を捨てた。ラテツクスをGBS中に再懸
濁させ、再び欧州産ハリエニシダレクチンの
GBS中1.0mg／ml溶液200μで処理した。この懸
濁液をよく混合し、次いで遠心分離した。上清を
捨てた。ラテツクスをGBS1.0ml中に再懸濁させ、
そして欧州産ハリエニシダレクチンの1.0mg／ml
溶液0.20mlで３回目の処理をした。この懸濁液を
よく混合し、そして37℃で２時間インキユベート
した。次いで、ラテツクスを遠心分離し、そして
GBS中１mg／mlウサギ血清アルブミン（RSA）
で２回洗浄した。然る後、ラテツクスをRSA／
GBS100μ中に懸濁させた。 レクチンの代わりにウサギ血清アルブミン
（RSA）を用いる以外は前述と同様にして、着色
したラテツクスの別の一部分を処理した。この材
料をラテツクスの試験の対照として用いた。 RBCとの結合時における螢光ラテツクスの
「消光」の証明 レクチン接合ラテツクスまたはRSA対照ラテ
ツクスを１：10稀釈でまたは稀釈せずに試験し
た。 プロトコール：ラテツクス懸濁液10mlをRBC′s
の３％懸濁液〔デイド（Dade）〕10μと混合し
た。使用したRBC′sはＢ型またはＯ型であつた。
室温に３分間放置後、RSA／GBS1.0mlを加え
た。螢光強度は415nmの励起において測定し、
490nmにおいて発光を監視した。 結果は次の通りである：
持しており、そのいくつかは輸血のような医療に
際し、患者及び供与者において正確に同定されな
ければならないものである。血液型Ａ，Ｂ，AB
またはＯの正確な決定及びRh因子の決定は極め
て重要である。また、このような抗原に対する血
中の抗体も診断上重要である。 これまで、凝集法が顕微鏡用スライドガラス上
また試験管内で用いられている。しかしながら、
試験すべき試料の数が多いという状況を考える
と、改良された、迅速且つ正確な赤血球のスクリ
ーニングが要望される。 従来技術 凝集法による赤血球（RBC）抗原の同定が標
準的なものであり、たとえば、C.ハドソン
（Hudson）及びF.ヘイ（Hay）の方法〔プラクテ
イカル・イムノロジー（Practical
Immunology），第２版、ブラツクウエル・サイ
エンテイフイツク・パブリケーシヨンズ
（Blackwell Seientific Publications），オクスフ
オード（Oxford），（1980），P.139，米国特許第
3862303号〕はラテツクスビーズのようなキヤリ
アー粒子を用いた血清因子の免疫学的検出及び同
定を代表するものである。スミス（Smith）〔フ
エブス・レターズ（FEBS Letters）77，25
（1977）〕は螢光イムノアツセイについて述べてい
る。 発明の概要 本発明によれば、螢光粒子を用いて赤血球
（RBC）または赤血球に対する抗体の型を判定す
る方法が提供される即ち、本発明に従えば、赤血
球に結合した赤血球の表面抗原または該表面抗原
に対する抗体の試料中における存在を分析する方
法であつて、 該試料を、該表面抗原と相同性のレセプターま
たは該表面抗原と接合し、その螢光が該赤血球に
よつて消光され得る螢光粒子と混合し、 該赤血球に結合した表面抗原の分析にはレセプ
ター接合体のみを用い、該抗体の分析には（ａ）
抗原接合体を同一抗原を有する赤血球と組み合わ
せて用いるかまたは（ｂ）レセプター接合体を該
抗体と相同性の抗原を有する赤血球と組み合わせ
て用い、そして 既知赤血球抗原またはこれに対する抗体を有す
る試料と比較して螢光の変化を測定する ことを含んでなる分析方法が提供される。粒子
は、所定のRBC表面リガンドまたは抗原に特異
的に結合する相同性のレセプター（注：「相同性」
とは接合関係にあるような二種の物質又は部分、
例えばリガンドとレセプター、抗原−抗体接合体
を意味し、表面抗原と相同性のレセプターは例え
ば抗体とすることができる）に接合させる。
RBCが相同性のリガンドを有する場合には、結
合が起こつて螢光が消える。抗体の検出には適切
な抗原を有するRBCを用い、抗体が存在すると
螢光は減少する。 本発明は、検出可能なシグナルを生じさせるた
めに螢光粒子を用いるアツセイにおいて、赤血球
を螢光消光物質として用いることによつて赤血球
の型を判定するかまたは赤血球（RBC）抗原も
しくは赤血球抗原に対する抗体を同定するための
新規方法を提供する。RBC抗原に結合する物質、
通常は抗体またはレクチン（以下、「レセプター」
と称する）を螢光粒子に接合させる。粒子−接合
体の溶液を適当な緩衝液とともに赤血球、たとえ
ば、全血と合する。レセプターに対して特異的な
結合部位または決定基部位を有する抗原がRBC
上に存在する場合には、接合粒子は螢光消光物質
として働くRBCに結合するであろう。 使用するレセプターは種々のRBC表面抗原に
選択的に結合する。従つて、所定のRBC試料中
に所定の抗原が存在する場合には、存在しない場
合に比較して螢光分析法によつて測定可能な螢光
の減少がみられるであろう。たとえば、Ａ，Ｂ，
Ｏ系においては、螢光粒子を抗−Ａ抗体に接合さ
せると、分析物質がＡ型またはAB型血液のＡ抗
原を含む場合には結合が起こり、分析物質が血液
型ＢまたはＯを含む場合よりも螢光が大きく減少
するであろう。 抗体の他に、ある種のレクチンが種々の結合度
でRBC表面抗原に結合することが知られており、
これらは螢光分析に使用するのに適したレセプタ
ーである。 本方法はまた、RBC抗原に対する抗体の存在
の分析にも使用できる。次の２種の方法が使用で
きる。第一の方法では、抗体を接合させた螢光粒
子を既知の血液型のRBC上の抗原部位に関して
血漿または血清試料中の抗体と競合させる。この
方法では、試料中の特異抗原に対する抗体の量の
増加に伴い、観察される螢光が増大する。第二の
方法では、問題の表面抗原に螢光ビーズを接合さ
せ、そして試料中に存在する抗体が既知の血液型
のRBCと抗原を接合させた螢光粒子との間の橋
として作用する。この場合には、螢光の減少が抗
体の存在を示すであろう。 螢光物質を選択する場合、RBCは415nmを越
える波長で光学的密度が高いので、螢光の励起ま
たは発光415nmまたはそれ以上、通常は約400〜
430nmで測定するのが望ましい。 螢光物質については高い吸光係数が望ましく、
10よりかなり大きく、好ましくは100以上とすべ
きである。螢光粒子は高量子収量のものを選択す
る。 さらに、螢光物質は大きいストークス・シフト
（Stokes shift）、好ましくは20nmより大きい、
より好ましくは30nmより大きいストークスシフ
トを有するのが望ましい。すなわち、螢光物質に
関して吸収極大と発光極大の間にかなりの波長が
広がり、すなわち、差があるのが好ましい。 望ましい特性を多数有する一群の螢光物質はキ
サンテン染料、たとえば、３，６−ジヒドロキシ
−９−フエニルキサンチヒドロールから誘導され
るフルオレセイン類ならびに３，６−ジアミノ−
９−フエニルキサンテンから誘導されるローダミ
ン類及びローザミン（rosamine）類である。ロ
ーダミン及びフルオレセイン類は９−０−カルボ
キシフエニルキサンテン基を有し、９−０−カル
ボキシフエニルキサンテン誘導体である。 これらの化合物はフエニル基上に置換基を有す
るものも有さないものも市販されている。 別の群の螢光化合物は、αまたはβ位、通常は
β位にアミノ基を有するナフチルアミン類であ
る。ナフチルアミノ化合物としては、１−ジメチ
ルアミノナフチル−５−スルホネート、１−アニ
リノ−８−ナフタレンスルホネート及び２−ｐ−
トルイジニル−６−ナフタレンスルホネートが挙
げられる。問題の他の螢光物質としては、クアリ
ン類、たとえば、ウンベリフエロン及び希土類キ
レート、たとえば、Tb，Tu等が挙げられる。 標準法を用いて適当な粒子を螢光物質と結合さ
せて螢光ビーズまたは微小球を生成する。螢光粒
子は市販されている。螢光ビーズは寸法も組成も
広範囲に変えることができ、その寸法は一般には
直径約0.1〜2μ、より普通には約0.6〜1μである。
ビーズは通常は不活性材料から作られ、複数の螢
光発色団官能価を含む。ビーズはビーズあたりの
シグナルが大きいように充分な濃度の螢光官能価
を有する。ビーズには種々の有機ポリマー、たと
えば、ポリスチレン、ポリメタクリレート等もし
くは無機ポリマー、たとえば、ガラスまたはそれ
らの組み合わせを使用できる。ポリマー組成物の
特定の選択は主として便宜上のものである。 共有結合または非共有結合によつて螢光ビーズ
に接合されるレセプターは単クローン性抗体を含
む抗体またはレクチンであることができ、これら
は特異RBC表面抗原またはこのようなRBC表面
抗原の決定部位を有する抗原に特異的に、すなわ
ち、識別して結合する。 レセプターは文献（既に述べたのでここでは繰
り返さない）中に広範囲に述べられている標準法
を用いて螢光ビーズに吸着させる。あるいは、レ
セプターは常法に従つて共有結合させてもよい。 アツセイの実施の際には、１〜50容量％、好ま
しくは約２〜20容量％、より好ましくは約３〜５
容量％のRBC′sを含んでなる緩衝化した水溶液中
のRBC試料を、螢光ビーズの濃度が約0.1〜５重
量％、通常は0.1〜３重量％である約同容量の接
合螢光ビーズ−レセプター溶液と混合する。 対照として、RBC−結合能を有さない同一容
量の螢光ビーズ溶液を同容量のRBC溶液と混合
する。混合した溶液は０〜約37℃、好ましくは約
15〜25℃の緩和な温度に120分以下、好ましくは
１〜10分間放置する。他の対照も使用できる。一
例として遊離抗原もしくは抗体と添加できるであ
ろうし、あるいはＡ，ＢもしくはＯ型の血液もし
くは血清の標準標品と比較することもできるであ
ろう。 実施例 本発明を以下の実施例について説明するが、こ
れらは本発明を限定するものではない。 螢光ラテツクスの調整 試験管内で、燐酸塩を緩衝剤として添付した生
理食塩液（PBS）中0.1％ｗ／ｖトリトン
（Triton）Ｘ−100の溶液5.0mlを染料〔クマリン
（Coumarin）153、イーストマン・コダツク
（Eastman Kodak）〕のトルエン中0.2M溶液
0.035mlと合した。よく混合した後、多少乳白光
を発する溶液を得た。この染料／洗浄剤混合物
に、粒度0.5μの単分散ポリスチレンラテツクス
〔ポリサイエンシーズ（Polysciences）〕の2.5％
懸濁液0.50mlを加えた。この混合物を３時間放置
し、次いで遠心分離し、そしてPBS中0.1％トリ
トンＸ−100でよく洗浄した。然る後に、ラテツ
クス懸濁液をPBS中0.1％トリトンＸ−100で5.0
mlとした。 欧州産ハリエニシダ（Ulex europaeus）レ
クチンの螢光ラテツクスへの吸着 PBS／TX−100中2.5％の前記着色ラテツクス
150μをpH8.2のグリシンを緩衝剤として添加し
た生理食塩液（GBS）1.0mlに加えた。このラテ
ツクス懸濁液に欧州産ハリエニシダレクチン〔シ
グマ（Sigma）〕の2.0mg／ml溶液200μを加え
た。この懸濁液をよく混合し、そして遠心分離し
た。上清を捨てた。ラテツクスをGBS中に再懸
濁させ、再び欧州産ハリエニシダレクチンの
GBS中1.0mg／ml溶液200μで処理した。この懸
濁液をよく混合し、次いで遠心分離した。上清を
捨てた。ラテツクスをGBS1.0ml中に再懸濁させ、
そして欧州産ハリエニシダレクチンの1.0mg／ml
溶液0.20mlで３回目の処理をした。この懸濁液を
よく混合し、そして37℃で２時間インキユベート
した。次いで、ラテツクスを遠心分離し、そして
GBS中１mg／mlウサギ血清アルブミン（RSA）
で２回洗浄した。然る後、ラテツクスをRSA／
GBS100μ中に懸濁させた。 レクチンの代わりにウサギ血清アルブミン
（RSA）を用いる以外は前述と同様にして、着色
したラテツクスの別の一部分を処理した。この材
料をラテツクスの試験の対照として用いた。 RBCとの結合時における螢光ラテツクスの
「消光」の証明 レクチン接合ラテツクスまたはRSA対照ラテ
ツクスを１：10稀釈でまたは稀釈せずに試験し
た。 プロトコール：ラテツクス懸濁液10mlをRBC′s
の３％懸濁液〔デイド（Dade）〕10μと混合し
た。使用したRBC′sはＢ型またはＯ型であつた。
室温に３分間放置後、RSA／GBS1.0mlを加え
た。螢光強度は415nmの励起において測定し、
490nmにおいて発光を監視した。 結果は次の通りである：
【表】
クチン
【表】
ンク
次のことが推論される： Ａ RBC′sの存在により、螢光強度は基礎値の約
61％に減少する。 Ｂ 稀釈しないラテツクスの螢光はＢ型RBC′sで
対照の78％に、Ｏ型RBC′sで対照の63％に減少
した。 １：10稀釈では、Ｂ型で対照の89％に、Ｏ型
では対照の57％に減少した。 Ｃ これらの結果は、Ｏの強い凝集因子であり且
つＡ及びＢに対しては弱い欧州産ハリエニシダ
レクチンの既知の特異性と一致する。同様に、
Ｂよりも高いＯの見掛の特異性は稀釈によつて
増大する。 Ｄ 対照についての結果の再現性は良好である。
試験管３と６，９と１２を比較されたい。ま
た、試験管４と５，１０と１１を比較された
い。 本発明は赤血球抗原の新規同定法を提供する。
RBC溶液の乳白度が高いために、これまでは、
このような溶液中の螢光の変化を螢光分析によつ
て測定できることも不明であつたし、また赤血球
が有効で信頼性のある螢光消光物質として作用す
ることも不明であつた。本方法は迅速、簡易且つ
正確であり、また、研究にそして臨床において、
特に多数の血液試料を速く正確に型判定しなけれ
ばならない場所、たとえば、血液銀行において有
用である。 前述の発明は、明白にするため及び理解を深め
るために説明及び実施例によつてある程度詳細に
記載したが、添付の特許請求の範囲の範囲内にお
いて変形及び修正が可能なことは言うまでもな
い。
次のことが推論される： Ａ RBC′sの存在により、螢光強度は基礎値の約
61％に減少する。 Ｂ 稀釈しないラテツクスの螢光はＢ型RBC′sで
対照の78％に、Ｏ型RBC′sで対照の63％に減少
した。 １：10稀釈では、Ｂ型で対照の89％に、Ｏ型
では対照の57％に減少した。 Ｃ これらの結果は、Ｏの強い凝集因子であり且
つＡ及びＢに対しては弱い欧州産ハリエニシダ
レクチンの既知の特異性と一致する。同様に、
Ｂよりも高いＯの見掛の特異性は稀釈によつて
増大する。 Ｄ 対照についての結果の再現性は良好である。
試験管３と６，９と１２を比較されたい。ま
た、試験管４と５，１０と１１を比較された
い。 本発明は赤血球抗原の新規同定法を提供する。
RBC溶液の乳白度が高いために、これまでは、
このような溶液中の螢光の変化を螢光分析によつ
て測定できることも不明であつたし、また赤血球
が有効で信頼性のある螢光消光物質として作用す
ることも不明であつた。本方法は迅速、簡易且つ
正確であり、また、研究にそして臨床において、
特に多数の血液試料を速く正確に型判定しなけれ
ばならない場所、たとえば、血液銀行において有
用である。 前述の発明は、明白にするため及び理解を深め
るために説明及び実施例によつてある程度詳細に
記載したが、添付の特許請求の範囲の範囲内にお
いて変形及び修正が可能なことは言うまでもな
い。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 赤血球に結合した赤血球の表面抗原または該
表面抗原に対する抗体の試料中における存在を分
析する方法であつて、 該試料を、該表面抗原と相同性のレセプターま
たは該表面抗原と接合し、その螢光が該赤血球に
よつて消光され得る螢光粒子と混合し、 該赤血球に結合した表面抗原の分析にはレセプ
ター接合体のみを用い、該抗体の分析には（ａ）
抗原接合体を同一抗原を有する赤血球と組み合わ
せて用いるかまたは（ｂ）レセプター接合体を該
抗体と相同性の抗原を有する赤血球と組み合わせ
て用い、そして 既知赤血球抗原またはこれに対する抗体を有す
る試料と比較して螢光の変化を測定する ことを含んでなる分析方法。 ２ 前記表面抗原がＡ及びＢから成る群から選ば
れる特許請求の範囲第１項記載の分析方法。 ３ 前記表面抗原がRh因子である特許請求の範
囲第１項記載の分析方法。 ４ 前記レセプターが赤血球表面抗原に対する抗
体である特許請求の範囲第１項記載の分析方法。 ５ 前記抗体が単クローン性抗体である特許請求
の範囲第４項記載の分析方法。 ６ 前記レセプターがレクチンである特許請求の
範囲第１項記載の分析方法。 ７ 前記螢光粒子がラテツクス粒子である特許請
求の範囲第１項記載の分析方法。 ８ 前記レセプター接合体を抗体の検出に用いる
特許請求の範囲第１項記載の分析方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US06/434,761 US4550017A (en) | 1982-10-15 | 1982-10-15 | Fluorescence screening for blood typing |
| US434761 | 1982-10-15 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5991370A JPS5991370A (ja) | 1984-05-26 |
| JPH0469344B2 true JPH0469344B2 (ja) | 1992-11-05 |
Family
ID=23725573
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58191087A Granted JPS5991370A (ja) | 1982-10-15 | 1983-10-14 | 血液型判定のための螢光スクリ−ニング |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4550017A (ja) |
| EP (1) | EP0106685B1 (ja) |
| JP (1) | JPS5991370A (ja) |
| AT (1) | ATE37095T1 (ja) |
| CA (1) | CA1212317A (ja) |
| DE (1) | DE3377943D1 (ja) |
| HK (1) | HK93690A (ja) |
| SG (1) | SG78890G (ja) |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| US5145774A (en) * | 1984-08-28 | 1992-09-08 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Fluorescent dyes |
| US4748129A (en) * | 1984-08-28 | 1988-05-31 | Snytex (U.S.A.) Inc. | Assay method employing fluorescent cell incorporative dye |
| US4774189A (en) * | 1984-12-24 | 1988-09-27 | Flow Cytometry Standards Corp. | Fluorescent calibration microbeads simulating stained cells |
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| CA1326435C (en) * | 1987-03-13 | 1994-01-25 | Wallace H. Coulter | Method and apparatus for rapid mixing of small volumes for enhancing biological reactions |
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| US5089384A (en) * | 1988-11-04 | 1992-02-18 | Amoco Corporation | Method and apparatus for selective cell destruction using amplified immunofluorescence |
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| US5776711A (en) * | 1996-11-12 | 1998-07-07 | The Regents Of The University Of California | Simultaneous human ABO and RH(D) blood typing or antibody screening by flow cytometry |
| CA2309528C (en) | 1999-06-08 | 2007-10-09 | Ortho-Clinical Diagnostics, Inc. | Simultaneous determination of forward and reverse abo blood group |
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| US8669418B2 (en) | 2005-12-22 | 2014-03-11 | Vib Vzw | Means and methods for mediating protein interference |
| JP5210551B2 (ja) * | 2007-06-19 | 2013-06-12 | ベックマン コールター バイオメディカル リミテッド | 赤血球標識用磁性粒子 |
| US20090270269A1 (en) * | 2008-04-28 | 2009-10-29 | Ashok Kumar | Nano-scale fluoro-biosensors exhibiting a low false alarm rate for rapid detection of biological contaminants |
| CN101957366A (zh) * | 2009-07-15 | 2011-01-26 | 英科新创(厦门)科技有限公司 | 人红细胞膜抗原包被的微球及其应用 |
| LT2683419T (lt) | 2011-03-11 | 2018-07-25 | Vib Vzw | Molekulės ir būdai baltymo slopinimui ir aptikimui |
| CN103344772B (zh) * | 2013-07-19 | 2015-06-24 | 中国科学院苏州生物医学工程技术研究所 | Miltenberger血型抗体检测新方法 |
| US11872262B2 (en) | 2017-05-09 | 2024-01-16 | Vib Vzw | Means and methods for treating bacterial infections |
| CN114660305A (zh) * | 2022-03-31 | 2022-06-24 | 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 | 一种快速检测血型抗体滴度的试剂、制备方法、试纸条及应用 |
Family Cites Families (11)
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1982
- 1982-10-15 US US06/434,761 patent/US4550017A/en not_active Expired - Lifetime
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1983
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- 1983-10-14 AT AT83306245T patent/ATE37095T1/de not_active IP Right Cessation
- 1983-10-14 JP JP58191087A patent/JPS5991370A/ja active Granted
- 1983-10-14 DE DE8383306245T patent/DE3377943D1/de not_active Expired
-
1990
- 1990-09-25 SG SG788/90A patent/SG78890G/en unknown
- 1990-11-08 HK HK936/90A patent/HK93690A/xx not_active IP Right Cessation
Also Published As
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| SG78890G (en) | 1990-11-23 |
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| EP0106685B1 (en) | 1988-09-07 |
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