JPS5991370A - 血液型判定のための螢光スクリ−ニング - Google Patents
血液型判定のための螢光スクリ−ニングInfo
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- JPS5991370A JPS5991370A JP58191087A JP19108783A JPS5991370A JP S5991370 A JPS5991370 A JP S5991370A JP 58191087 A JP58191087 A JP 58191087A JP 19108783 A JP19108783 A JP 19108783A JP S5991370 A JPS5991370 A JP S5991370A
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- antigen
- fluorescent
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- antibodies
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- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/80—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood groups or blood types or red blood cells
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- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/827—Lectins
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- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
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- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Eye Examination Apparatus (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
発明の分野
哺乳類の赤血球（ＲＢＣ）は、多数の抗原を保持してお
シ、そのいくつかは輸血のような医療に際し、患者及び
供与者において正確に同定されなければならないもので
ある。血液型Ａ 、 Ｂ 、 ＡＢ または０の正確な
決定及びＲｈ因子の決定は極めて重鬼である。また、こ
のよう々抗原に対する血中の抗体も診断上重要である。
シ、そのいくつかは輸血のような医療に際し、患者及び
供与者において正確に同定されなければならないもので
ある。血液型Ａ 、 Ｂ 、 ＡＢ または０の正確な
決定及びＲｈ因子の決定は極めて重鬼である。また、こ
のよう々抗原に対する血中の抗体も診断上重要である。
これまで、凝集法が顕微鏡用スライドガラス上または試
験管内で用いられている。しかしながら、試験すべき試
料の数が多いという状況を考えると、改良はれた、迅速
１つ正確な赤血球のスクリーニングが装甲される。
験管内で用いられている。しかしながら、試験すべき試
料の数が多いという状況を考えると、改良はれた、迅速
１つ正確な赤血球のスクリーニングが装甲される。
従来技術
凝集法による赤血球（ＲＢＣ）抗原の同定が標準的々も
のであシ、たとえば、（Ｃ，ハドソン（Ｈｕｄｓｏｎ）
− １” Ｆ、ヘイ（Ｈａｙ）の方法〔ゾラクティヵル・イ
ムノロジー（Ｐｒａｃｔｉｃａｌ’Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇ
ｙ） ＊第２版、ブラックウェル・サイエンティフィッ
ク・パブリケーシ８７ズ（Ｂｌａｅｋｔｖｅｌｌ ５ｃ
ｉｅｎｔｌｆｉｃ Ｐｕｂｌｌ−ｃａｔｉｏｎｓ ）
＋オフスフオード（Ｏｘｆｏｒｄ ）、 （１９８０）
。
のであシ、たとえば、（Ｃ，ハドソン（Ｈｕｄｓｏｎ）
− １” Ｆ、ヘイ（Ｈａｙ）の方法〔ゾラクティヵル・イ
ムノロジー（Ｐｒａｃｔｉｃａｌ’Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇ
ｙ） ＊第２版、ブラックウェル・サイエンティフィッ
ク・パブリケーシ８７ズ（Ｂｌａｅｋｔｖｅｌｌ ５ｃ
ｉｅｎｔｌｆｉｃ Ｐｕｂｌｌ−ｃａｔｉｏｎｓ ）
＋オフスフオード（Ｏｘｆｏｒｄ ）、 （１９８０）
。
Ｐ、１３９．米国特許第３，８６２，３０３号」はラテ
ックスビーズのようなキャリアー粒子を用いた血清因子
の免疫学的検出及び同定を代表するものである。
ックスビーズのようなキャリアー粒子を用いた血清因子
の免疫学的検出及び同定を代表するものである。
スミス（Ｓｍｉｔｈ）（フェツス・レターズ（ＦＥＢＳ
Ｌｅｔｔｅｒｓ） ７７ 、２５（１９７７） ）は螢
光イムノアッセイについて述べている。
Ｌｅｔｔｅｒｓ） ７７ 、２５（１９７７） ）は螢
光イムノアッセイについて述べている。
発明の棚要
本発明によれば、螢光粒子を用いて赤血球（ＲＢＣ）ま
たは赤血球に対する抗体の型を判定する方法が提供さｉ
する。粒子は、Ｑｉ定のＲＢＣ表面リガンドまたは抗原
に特異的に結合する同種レセプターに接合させる。ＲＢ
Ｃが同種リガンドを有する場合には、結合が起こって螢
光が消える。抗体の検出にに１、適切な抗原を有するＲ
ＢＣを用い、抗体が存在すると螢光は減少する。
たは赤血球に対する抗体の型を判定する方法が提供さｉ
する。粒子は、Ｑｉ定のＲＢＣ表面リガンドまたは抗原
に特異的に結合する同種レセプターに接合させる。ＲＢ
Ｃが同種リガンドを有する場合には、結合が起こって螢
光が消える。抗体の検出にに１、適切な抗原を有するＲ
ＢＣを用い、抗体が存在すると螢光は減少する。
本発明は、検出可能なシグナルを生じσせるために螢光
粒子を用いるアッセイにおいて、赤血球を螢光消光物側
として用いることＫよって赤血球の型を判定するかまた
れ赤血球（ＲＢＣ）抗原もしくは赤血球抗原に対する抗
体を同定するための清規方法を提供する。ＲＢＣＫ原に
結合する物質、通猟は抗体またはレクチン（以下、「レ
セプター」と称する）を螢光粒子に接合させる。粒子−
接合体の溶液を適当な緩衝液とともに赤血球、たとえは
、全血と合する。レセプターに対して判異的なＬ合部位
または決定基部位を有する抗塵がＲＪ３ Ｃ’ ｓ上に
存在する場合には、接合粒子ね、螢光消′）Ｙ、物質と
して８１＜ＲＢＣに結合するであろう。
粒子を用いるアッセイにおいて、赤血球を螢光消光物側
として用いることＫよって赤血球の型を判定するかまた
れ赤血球（ＲＢＣ）抗原もしくは赤血球抗原に対する抗
体を同定するための清規方法を提供する。ＲＢＣＫ原に
結合する物質、通猟は抗体またはレクチン（以下、「レ
セプター」と称する）を螢光粒子に接合させる。粒子−
接合体の溶液を適当な緩衝液とともに赤血球、たとえは
、全血と合する。レセプターに対して判異的なＬ合部位
または決定基部位を有する抗塵がＲＪ３ Ｃ’ ｓ上に
存在する場合には、接合粒子ね、螢光消′）Ｙ、物質と
して８１＜ＲＢＣに結合するであろう。
使用するし士ゲター＃′ｉ種々のＲＢＣ表面抗原に選択
的に結合する。従って、所定のＲＢＣ試刺中に所定の抗
原が存在する場合には、存在しない場合に比較して螢光
分析法によって測定可能な螢光の減少がみられるであろ
う。たとえば、Ａ、Ｂ、Ｑ系においては、螢光粒子を抗
−Ａ抗体に接合させると、分析物質がＡ型またはＡＢ型
血液のＡ抗原を含む場合には結合が起こシ、分析物質が
血液型ＢまたはＯを含む場合よルも螢光が大きく減少す
るであろう。
的に結合する。従って、所定のＲＢＣ試刺中に所定の抗
原が存在する場合には、存在しない場合に比較して螢光
分析法によって測定可能な螢光の減少がみられるであろ
う。たとえば、Ａ、Ｂ、Ｑ系においては、螢光粒子を抗
−Ａ抗体に接合させると、分析物質がＡ型またはＡＢ型
血液のＡ抗原を含む場合には結合が起こシ、分析物質が
血液型ＢまたはＯを含む場合よルも螢光が大きく減少す
るであろう。
抗体の他に、ある種のレクチンが櫛々の結合度でＲＢＣ
表面抗原に結合することが知られており、これらは螢光
分析に使用するのに適したレセプターである。
表面抗原に結合することが知られており、これらは螢光
分析に使用するのに適したレセプターである。
本方法はまた、ＲＢＣ抗原に対する抗体の存在の分析に
も使用できる。次の２Ｉｉの方法が使用できる。第一の
方法では、抗体を接合させた螢光粒子を既知の血液型の
ＲＢＣ上の抗原部位に関して血漿または血？ｌ￥試料中
の抗体と競合させる。この方法では、試料中の特異抗原
に対する抗体の邦の増加に伴い、観察される螢光が増大
する。第二の方法では、問題の表面抗原に螢光ビーズを
接合させ、そして試料中に存在する抗体が既知の血液型
のＲＢＣと抗原を接合させた螢光粒子との間の橋として
作用する。この場合には、擲光の減少が抗体の存在を示
すであろう。
も使用できる。次の２Ｉｉの方法が使用できる。第一の
方法では、抗体を接合させた螢光粒子を既知の血液型の
ＲＢＣ上の抗原部位に関して血漿または血？ｌ￥試料中
の抗体と競合させる。この方法では、試料中の特異抗原
に対する抗体の邦の増加に伴い、観察される螢光が増大
する。第二の方法では、問題の表面抗原に螢光ビーズを
接合させ、そして試料中に存在する抗体が既知の血液型
のＲＢＣと抗原を接合させた螢光粒子との間の橋として
作用する。この場合には、擲光の減少が抗体の存在を示
すであろう。
螢光物質を選択する場合、ＲＢＣ’ｓは４１５ｎｍを越
える波長で光学的密度が高いので、螢光の励起または発
光は４１５ｎｒｒｌ！ｔたけそれ、り上、通常は約４０
０〜４３０ｎｍで測定するのが望ましい。
える波長で光学的密度が高いので、螢光の励起または発
光は４１５ｎｒｒｌ！ｔたけそれ、り上、通常は約４０
０〜４３０ｎｍで測定するのが望ましい。
螢光物質については高い吸光係数が望ましく、ｌＯよシ
かなシ大きく、好ましくり、１００以上とすべきである
。螢光粒子は高量子収開のものをｊく択する。
かなシ大きく、好ましくり、１００以上とすべきである
。螢光粒子は高量子収開のものをｊく択する。
さらに、螢光物質は大きいストークス・シフト（Ｓｊｏ
ｋｅｓ ５ｈｉｆｔ ）、好ましくは２０ ｎｍ よル
大きい、よシ好ましくは３０ ｎｍより大きいストーク
ス・シフトを有するのが望ましい。すなわち、螢光物質
に関して吸収極大と発光極大の間にがなシの波長の広が
り、すなわち、差があるのが好ましい。
ｋｅｓ ５ｈｉｆｔ ）、好ましくは２０ ｎｍ よル
大きい、よシ好ましくは３０ ｎｍより大きいストーク
ス・シフトを有するのが望ましい。すなわち、螢光物質
に関して吸収極大と発光極大の間にがなシの波長の広が
り、すなわち、差があるのが好ましい。
望ましい特性を多数有する一群の螢光物質はキザンデン
染料、たとえば、３．６−シヒドロキシー９−フェニル
キザンチヒドロールから誘導されるフルオレセイン類な
らびに３．６−ジアミツー９−フェニルキサンチンから
誘導されるローダミン類及びローザミン（ｒｏｓａｍｉ
ｎｅ ）類である。ローダミン及びフルオレセイン類ｕ
９−０−カルボキシフェニル、Ｉ’を有Ｌ、９−０−カ
ルボキシフェニルキャンテンの誘導体である。
染料、たとえば、３．６−シヒドロキシー９−フェニル
キザンチヒドロールから誘導されるフルオレセイン類な
らびに３．６−ジアミツー９−フェニルキサンチンから
誘導されるローダミン類及びローザミン（ｒｏｓａｍｉ
ｎｅ ）類である。ローダミン及びフルオレセイン類ｕ
９−０−カルボキシフェニル、Ｉ’を有Ｌ、９−０−カ
ルボキシフェニルキャンテンの誘導体である。
これらの化合物はフェニル基上に置換基を有するものも
有さないものも市販されている。
有さないものも市販されている。
別の群の螢光化合物は、αまたはβ位、通常はβ位にア
ミン基を有するナフチルアミン類である。
ミン基を有するナフチルアミン類である。
ナフチルアミノ化合物としては、１−ジメチルアミノナ
フチル−５−スルホネート、ｌ−アニリノ−８−ナフタ
レンスルホネート及び２−ｐ−）ルイジニルー６−ナフ
タレンスルホネートが挙ケラｔする。問題の他の螢光物
質としては、グアリン類、たとえ（よ、Ｉ″７７ンペリ
フエロン希土類キレート、たとえば、Ｔｂ、Ｔｕ 等が
挙げられる。
フチル−５−スルホネート、ｌ−アニリノ−８−ナフタ
レンスルホネート及び２−ｐ−）ルイジニルー６−ナフ
タレンスルホネートが挙ケラｔする。問題の他の螢光物
質としては、グアリン類、たとえ（よ、Ｉ″７７ンペリ
フエロン希土類キレート、たとえば、Ｔｂ、Ｔｕ 等が
挙げられる。
柳準法を用いて適尚な粒子を螢プＹ物Ｔと結合させて螢
光ビーズまたけ徽小球を生成する。螢光粒子は市販され
ている。螢光ビーズは寸法も組成も広範囲に変えること
ができ、その寸法は一般には直径約０．１〜２μ、より
普通には約０．６〜１μである。ビーズは通常は不活色
材料から作らｉｌ、複数の螢光発色団官奸価を含む。ビ
ーズはビーズあたりのシグナルが大きいように充分な濃
度の螢光官能価を有する。ビーズには種々の有機ポリマ
ー、たとえば、ポリスチレン、ポリメタクリレート等も
しくは無＠ポリマー、たとえば、ガラスまた−それらの
組み合わせを使用できる。ポリマー組成物の特定の選択
は主として便宜上のものである。
光ビーズまたけ徽小球を生成する。螢光粒子は市販され
ている。螢光ビーズは寸法も組成も広範囲に変えること
ができ、その寸法は一般には直径約０．１〜２μ、より
普通には約０．６〜１μである。ビーズは通常は不活色
材料から作らｉｌ、複数の螢光発色団官奸価を含む。ビ
ーズはビーズあたりのシグナルが大きいように充分な濃
度の螢光官能価を有する。ビーズには種々の有機ポリマ
ー、たとえば、ポリスチレン、ポリメタクリレート等も
しくは無＠ポリマー、たとえば、ガラスまた−それらの
組み合わせを使用できる。ポリマー組成物の特定の選択
は主として便宜上のものである。
共有結合または非共有結合によって螢光ビーズに接合さ
れるレセプターは却りローン竹抗体を含む抗体またはレ
クチンであることができ、こわらは特異Ｒ８０表面抗原
またはこのようなＲＢＣ表面抗片の決定部位を有する抗
原に％ｊＪ４的に、すなわち、識別して結合する。
れるレセプターは却りローン竹抗体を含む抗体またはレ
クチンであることができ、こわらは特異Ｒ８０表面抗原
またはこのようなＲＢＣ表面抗片の決定部位を有する抗
原に％ｊＪ４的に、すなわち、識別して結合する。
レセプターは文献（既に述べたのでとこては繰り返さな
い）中に広範囲に述べられている標単法を用いて螢光ビ
ーズに吸着させる。あるいは、レセプターは常法に従っ
て共有結合させてもよい。
い）中に広範囲に述べられている標単法を用いて螢光ビ
ーズに吸着させる。あるいは、レセプターは常法に従っ
て共有結合させてもよい。
アッセイの実施の際には、１〜５０容邪％、好ましくは
約２〜２０容弼％、よシ好ましくは約３〜５容量−のＲ
ＢＣ’ｓを含んでなる緩衝化した水溶液中のＲＢＣ試料
を、螢光ビーズの濃度が約０．１〜５重弁％、通常は０
．１〜３重１％である約同容量の接合螢光ビーズ−レセ
プター溶液と混合する。
約２〜２０容弼％、よシ好ましくは約３〜５容量−のＲ
ＢＣ’ｓを含んでなる緩衝化した水溶液中のＲＢＣ試料
を、螢光ビーズの濃度が約０．１〜５重弁％、通常は０
．１〜３重１％である約同容量の接合螢光ビーズ−レセ
プター溶液と混合する。
対照として、ＲＢＣ−結合能を有さない同一容量の螢光
ビーズ溶液を同容量のＲＢＣ溶液と混合する。
ビーズ溶液を同容量のＲＢＣ溶液と混合する。
混合した溶液はＯ〜約３７℃、好ましくは約１５〜２５
℃の緩和な温度に１２０分以下、好ましくは１−１０分
間放置する。他の対照も使用できる。
℃の緩和な温度に１２０分以下、好ましくは１−１０分
間放置する。他の対照も使用できる。
−例として遊離抗原もしくは抗体と添加できるであろう
し、あるいはＡ、ＢもしくはＯ型の血液もしくは血清の
標準標品と比較することもできるであろう。
し、あるいはＡ、ＢもしくはＯ型の血液もしくは血清の
標準標品と比較することもできるであろう。
実施例
本発明を以下の実施例について説明するが、これらは本
発明を限定するものではない。
発明を限定するものではない。
１、 Ｉ光うテックスの調製
試験管内で、燐酸塩を緩衝剤として添付した生理食塙液
（ＰＢＳ）中０．１％ｗ／ｖ）リドン（Ｔｒｌｔｏｎ）
Ｘ−１００の溶液５．０ｄを染料〔クマリン（Ｃｏｕｍ
ａｒｊｎ）１５３、イーストマン・コダック（Ｅａｓｔ
ｍａｎ Ｋｏｄａｋ） ）のトルエン中０６２Ｍ溶液Ｑ
、Ｑ３５＃Ｉ／と合した。よく混合した後、多少乳白光
を発する溶液を得た。この染料／洗浄剤混合物に、粒度
０．５μの単分散４ｅリスチレンラテツクス〔ポリサイ
エンシーズ（Ｐｏｌｙｇｅｉｅｎｅｅｓ ） ）の２．
５％懸濁液０．５０１１１４’ｉ加えた。この混合物を
３時間放置し、次いで遠心分１１１ｔシ、そしてＰＢＳ
中０，１％トリトンＸ−１００でよく洗浄した。然るｆ
Ｋ、ラテックス懸濁液をＰＢＳ中０．１％トリトンＸ−
１００で５．Ｏｄとした。
（ＰＢＳ）中０．１％ｗ／ｖ）リドン（Ｔｒｌｔｏｎ）
Ｘ−１００の溶液５．０ｄを染料〔クマリン（Ｃｏｕｍ
ａｒｊｎ）１５３、イーストマン・コダック（Ｅａｓｔ
ｍａｎ Ｋｏｄａｋ） ）のトルエン中０６２Ｍ溶液Ｑ
、Ｑ３５＃Ｉ／と合した。よく混合した後、多少乳白光
を発する溶液を得た。この染料／洗浄剤混合物に、粒度
０．５μの単分散４ｅリスチレンラテツクス〔ポリサイ
エンシーズ（Ｐｏｌｙｇｅｉｅｎｅｅｓ ） ）の２．
５％懸濁液０．５０１１１４’ｉ加えた。この混合物を
３時間放置し、次いで遠心分１１１ｔシ、そしてＰＢＳ
中０，１％トリトンＸ−１００でよく洗浄した。然るｆ
Ｋ、ラテックス懸濁液をＰＢＳ中０．１％トリトンＸ−
１００で５．Ｏｄとした。
■、欧州産ハリエニシダ（Ｕｌｅｘ ｅｕｒｏｐａｅｕ
ｓ）レクチンの螢光ラテックスへの吸着 ＰＢＳ／ＴＸ−１００中２．５％の前記着色ラテックス
１５０μｔをｐＨ８，２のグリシンを緩衝剤として添加
した生理食塩液（ＧＢＳ ） １．、 Ｏｍ、ｅに加え
た。このラテックス懸濁沼に欧州産・・リエニシダレク
チン〔シグマ（Ｓｉｇｍａ） 〕の２．０ ｍｙ／ ｍ
ｌ溶液２００ Ａｉｌを加えた。この１゛１１濁液をよ
く混合し、そして遠心分１１１１ した。上清を捨てた
。ラテックスをＧＢＳ中に再懸濁させ、角び欧州産ノ・
リエニシダレクチンのＧＢＳ中１．０ｍ９／ｍｌ溶液２
００μｌで処理した。この懸濁液をよく混合し、次いで
遠心分前した。上清を捨てた。ラテックスをＧＢＳ １
． Ｏｍ中に再懸濁させ、そして欧州産ハリエニシダレ
クチンの１．０ｍ９／ｍ溶液０．２０１１１７で３回目
の処理をした。この懸濁液をよく混合し、そして３７℃
で２時間インキュベートした。次いで、ラテックスを遠
心分離し、そしてＧＢＳ中ｌ ｍｇ ／ ｍｅウサギ血
消アルブミン（Ｒ８Ａ）で２回洗浄した。然る後、ラテ
ックスをＲ８Ａ／ＧＢＳ１００μノ中に懸濁させた。
ｓ）レクチンの螢光ラテックスへの吸着 ＰＢＳ／ＴＸ−１００中２．５％の前記着色ラテックス
１５０μｔをｐＨ８，２のグリシンを緩衝剤として添加
した生理食塩液（ＧＢＳ ） １．、 Ｏｍ、ｅに加え
た。このラテックス懸濁沼に欧州産・・リエニシダレク
チン〔シグマ（Ｓｉｇｍａ） 〕の２．０ ｍｙ／ ｍ
ｌ溶液２００ Ａｉｌを加えた。この１゛１１濁液をよ
く混合し、そして遠心分１１１１ した。上清を捨てた
。ラテックスをＧＢＳ中に再懸濁させ、角び欧州産ノ・
リエニシダレクチンのＧＢＳ中１．０ｍ９／ｍｌ溶液２
００μｌで処理した。この懸濁液をよく混合し、次いで
遠心分前した。上清を捨てた。ラテックスをＧＢＳ １
． Ｏｍ中に再懸濁させ、そして欧州産ハリエニシダレ
クチンの１．０ｍ９／ｍ溶液０．２０１１１７で３回目
の処理をした。この懸濁液をよく混合し、そして３７℃
で２時間インキュベートした。次いで、ラテックスを遠
心分離し、そしてＧＢＳ中ｌ ｍｇ ／ ｍｅウサギ血
消アルブミン（Ｒ８Ａ）で２回洗浄した。然る後、ラテ
ックスをＲ８Ａ／ＧＢＳ１００μノ中に懸濁させた。
レクチンの代わシにウサギ血清アルブミン（Ｒ８Ａ）を
用いる以外は前述と同様にして、着色したラテックスの
別の一部分を処理した。この材料をラテックスのハ゛、
＃の対照として用いた。
用いる以外は前述と同様にして、着色したラテックスの
別の一部分を処理した。この材料をラテックスのハ゛、
＃の対照として用いた。
１１Ｔ、 ＲＢＣとの結合時におりる螢光ラテックス
の「消光」のｄ正門 レクチン接合ラテックスまたＮｉ Ｒ８Ａ対柩ラテック
スを１：１０稀釈でまたは稀釈せずに試験した。
の「消光」のｄ正門 レクチン接合ラテックスまたＮｉ Ｒ８Ａ対柩ラテック
スを１：１０稀釈でまたは稀釈せずに試験した。
プロトコール：ラテックス懸濁液１０μｌをＲＩＩＣ’
ｓの３％懸濁液〔ディト（Ｄａｄｅ）］ １０μｌと混
合した。
ｓの３％懸濁液〔ディト（Ｄａｄｅ）］ １０μｌと混
合した。
使用したＲＢＣ’ｓはＢ型またはＯ型でおった。室温に
３分間放置後、Ｒ８Ａ／ＧＢＳ １． Ｏｍ／を加えた
。螢光強度は４１５ ｎｍの励起において測定し、４９
０ｎｍにおいて発光を監視した。
３分間放置後、Ｒ８Ａ／ＧＢＳ １． Ｏｍ／を加えた
。螢光強度は４１５ ｎｍの励起において測定し、４９
０ｎｍにおいて発光を監視した。
結果は次の通りである：
２ 欧州産・・リエニシダレクチン 稀釈せず ０
９５１七ＢＣ ３欧州産−リエニシダレクチン 稀釈せず ２３
４斤し ４ Ｒ８Ａ対照 稀釈ぜず Ｂ１４８５
Ｒ８Ａ対照 稀釈せす ０１４９ＢＣ ６Ｒ８Ａ対照 稀釈ぜす ２４３な
し２ ７ 欧州産ハリエニシダレクチン １：１０ Ｂ
１８．４８ 欧州産ハリエニシダレクチン １
：１０ ０ １４．４なし １０ Ｒ８Ａ対Ｊｌ’６ １：１０ Ｂ
２０．５１１ Ｒ８Ａ対？ １：１０
０ ２０．７次のことが推諭される： Ａ、 Ｒｕｅ−の存在により、螢光強度は基礎値の約
６１％に減少する。
９５１七ＢＣ ３欧州産−リエニシダレクチン 稀釈せず ２３
４斤し ４ Ｒ８Ａ対照 稀釈ぜず Ｂ１４８５
Ｒ８Ａ対照 稀釈せす ０１４９ＢＣ ６Ｒ８Ａ対照 稀釈ぜす ２４３な
し２ ７ 欧州産ハリエニシダレクチン １：１０ Ｂ
１８．４８ 欧州産ハリエニシダレクチン １
：１０ ０ １４．４なし １０ Ｒ８Ａ対Ｊｌ’６ １：１０ Ｂ
２０．５１１ Ｒ８Ａ対？ １：１０
０ ２０．７次のことが推諭される： Ａ、 Ｒｕｅ−の存在により、螢光強度は基礎値の約
６１％に減少する。
Ｂ−ａｔ釈しないラテックスの螢光ハＢ ｐ ＲＢＣ’
！１で対照の７８％に、０型ＲＢＣ’ｓで対照の６３％
に減少した。
！１で対照の７８％に、０型ＲＢＣ’ｓで対照の６３％
に減少した。
１：１０稀釈では、Ｂ型で対照の８９％に、０ハ１ｊで
は対照の５７％に減少した。
は対照の５７％に減少した。
Ｃ，コｉらの結果は、０（１）強い凝集因子でｂシ且つ
Ａ及びＢに対して杖弱い欧州産ハリエニシダレクチンの
既知の傷兵性と一致する。同様Ｋｓ Ｂよりもｌ？ｌ
い０の１掛の特か＋＋は稀釈によって増大する。
Ａ及びＢに対して杖弱い欧州産ハリエニシダレクチンの
既知の傷兵性と一致する。同様Ｋｓ Ｂよりもｌ？ｌ
い０の１掛の特か＋＋は稀釈によって増大する。
Ｂ６ 対照についての結果のｆ１現性社良好である。
試験管３と６．９と１２を比彰されたい。まｌこ、試験
管４と５．ＩＯと１１を比重ぜれ／Ｃい。
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本発明は赤血球抗原の新規同定法を’Ｉｆｆ供する。
ＲＢＣ溶液の乳白度が高いために、これ゛までｔま、こ
のような溶液中の螢光の変化１螢光分析によって測定で
きることも不明であったし、盪た赤血球が有効で信頼性
のある螢光消光物質として作用することも不明であった
。本方法ｔユ迅速、簡易且つ正孫であシ、また、研究に
そして臨床においで、勃に多数の血液試料を速く正確に
型判定しなｋｙ ｔ′ＬｉＬ′ならない場所、たとえは
、抜液銀行におい１イ」用である。
のような溶液中の螢光の変化１螢光分析によって測定で
きることも不明であったし、盪た赤血球が有効で信頼性
のある螢光消光物質として作用することも不明であった
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そして臨床においで、勃に多数の血液試料を速く正確に
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前述の発明は、明白にするため及び理肴Ｆを泳めるため
に説明及び実施例によっである程度肝細に記載したが、
添付の竹許請求の範胎」の範囲内において変形及び修正
が可能なことＦｉ＝うチでもない。
に説明及び実施例によっである程度肝細に記載したが、
添付の竹許請求の範胎」の範囲内において変形及び修正
が可能なことＦｉ＝うチでもない。
１” Ｖ：’ｉｚ白
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、赤血球に結合した赤血球の表面抗原または該表面抗
原に対する抗体の試料中存在を分析する方法であって、 該ザンノルを、該表面抗原と同種のレセプターまたは核
表面抗原と接合した螢光粒子と混合し、該赤血球に結合
した表面抗原の分析にはレセプター接合体のみを用い、
該抗体の分析には（ａ）抗原接合体を同一抗原を有する
赤血球と組み合わせて用いるかまたｉｉ： （ｂ）レセ
プター接合体を用い、そして 既知赤血球抗原またはこれに対する抗体を有する試料と
比較して螢光の変化を測定することを含んでなる分析方
法。 ２、前記表面抗原がＡ及びＢから成る群から選ばれる特
許請求の範囲第１項記載の分析方法。 ３、前記表面抗原がＲｈ因子である特許請求の範囲第１
項記載の分析方法。 ４、前記レセプターが赤血球表面抗原に対する抗体であ
る特許請求の範囲第１項記載の分析方法。 ５、前記抗体が単クローン性抗体である特許請求の範囲
第４項記載の分析方法。 ６、前記レセプターがレクチンであ、る特許請求の範囲
第１項記載の分析方法。 ７、前記螢光粒子がラテックス粒子である特許請求の範
囲第１項記載の分析方法。 ８、前記レセプター接合体を抗体の検出に用いる特許請
求の範囲第１項記載の分析方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US06/434,761 US4550017A (en) | 1982-10-15 | 1982-10-15 | Fluorescence screening for blood typing |
| US434761 | 1982-10-15 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5991370A true JPS5991370A (ja) | 1984-05-26 |
| JPH0469344B2 JPH0469344B2 (ja) | 1992-11-05 |
Family
ID=23725573
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58191087A Granted JPS5991370A (ja) | 1982-10-15 | 1983-10-14 | 血液型判定のための螢光スクリ−ニング |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4550017A (ja) |
| EP (1) | EP0106685B1 (ja) |
| JP (1) | JPS5991370A (ja) |
| AT (1) | ATE37095T1 (ja) |
| CA (1) | CA1212317A (ja) |
| DE (1) | DE3377943D1 (ja) |
| HK (1) | HK93690A (ja) |
| SG (1) | SG78890G (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH087139B2 (ja) * | 1988-03-29 | 1996-01-29 | アプライド リサーチ システムス エー アール エス ホールディング エヌ ヴイ | 導波管センサ及び分析方法 |
| JP2009002685A (ja) * | 2007-06-19 | 2009-01-08 | Olympus Corp | 赤血球標識用磁性粒子 |
Families Citing this family (25)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4584277A (en) * | 1983-04-05 | 1986-04-22 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Fluorescent multiparameter particle analysis |
| US5145774A (en) * | 1984-08-28 | 1992-09-08 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Fluorescent dyes |
| US4748129A (en) * | 1984-08-28 | 1988-05-31 | Snytex (U.S.A.) Inc. | Assay method employing fluorescent cell incorporative dye |
| US4774189A (en) * | 1984-12-24 | 1988-09-27 | Flow Cytometry Standards Corp. | Fluorescent calibration microbeads simulating stained cells |
| FR2582103B1 (fr) * | 1985-03-19 | 1989-05-05 | Canavaggio Michel | Procede de determination d'une substance biologique dans un echantillon |
| US5206143A (en) * | 1985-11-01 | 1993-04-27 | Smithkline Beecham Corporation | Method and reagents for performing subset analysis using quantitative differences in fluorescence intensity |
| EP0279525A1 (en) * | 1987-01-23 | 1988-08-24 | Seitetsu Kagaku Co., Ltd. | Blood group substance-carrying latex and process for preparing the same |
| US5238812A (en) * | 1987-03-13 | 1993-08-24 | Coulter Corporation | Method and apparatus for rapid mixing of small volumes for enhancing biological reactions |
| CA1326435C (en) * | 1987-03-13 | 1994-01-25 | Wallace H. Coulter | Method and apparatus for rapid mixing of small volumes for enhancing biological reactions |
| JPS6435373A (en) * | 1987-07-31 | 1989-02-06 | Fujirebio Kk | Method and device for high-sensitivity immunoassay |
| US5086002A (en) * | 1987-09-07 | 1992-02-04 | Agen Biomedical, Ltd. | Erythrocyte agglutination assay |
| GB8800292D0 (en) * | 1988-01-07 | 1988-02-10 | Int Inst Cellular Molecul Path | Assay method |
| US5089384A (en) * | 1988-11-04 | 1992-02-18 | Amoco Corporation | Method and apparatus for selective cell destruction using amplified immunofluorescence |
| FR2638848B1 (fr) * | 1988-11-04 | 1993-01-22 | Chemunex Sa | Procede de detection et/ou de dosage dans un milieu liquide ou semi-liquide d'au moins une substance organique, biologique ou medicamenteuse soluble, par une methode d'agglutination |
| US5583003A (en) * | 1989-09-25 | 1996-12-10 | Agen Limited | Agglutination assay |
| US5776711A (en) * | 1996-11-12 | 1998-07-07 | The Regents Of The University Of California | Simultaneous human ABO and RH(D) blood typing or antibody screening by flow cytometry |
| CA2309528C (en) | 1999-06-08 | 2007-10-09 | Ortho-Clinical Diagnostics, Inc. | Simultaneous determination of forward and reverse abo blood group |
| EP1962883B1 (en) | 2005-12-22 | 2012-10-10 | VIB, vzw | Means and methods for mediating protein interference |
| US8669418B2 (en) | 2005-12-22 | 2014-03-11 | Vib Vzw | Means and methods for mediating protein interference |
| US20090270269A1 (en) * | 2008-04-28 | 2009-10-29 | Ashok Kumar | Nano-scale fluoro-biosensors exhibiting a low false alarm rate for rapid detection of biological contaminants |
| CN101957366A (zh) * | 2009-07-15 | 2011-01-26 | 英科新创(厦门)科技有限公司 | 人红细胞膜抗原包被的微球及其应用 |
| LT2683419T (lt) | 2011-03-11 | 2018-07-25 | Vib Vzw | Molekulės ir būdai baltymo slopinimui ir aptikimui |
| CN103344772B (zh) * | 2013-07-19 | 2015-06-24 | 中国科学院苏州生物医学工程技术研究所 | Miltenberger血型抗体检测新方法 |
| US11872262B2 (en) | 2017-05-09 | 2024-01-16 | Vib Vzw | Means and methods for treating bacterial infections |
| CN114660305A (zh) * | 2022-03-31 | 2022-06-24 | 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 | 一种快速检测血型抗体滴度的试剂、制备方法、试纸条及应用 |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4108972A (en) * | 1974-03-15 | 1978-08-22 | Dreyer William J | Immunological reagent employing radioactive and other tracers |
| US4275053A (en) * | 1975-08-14 | 1981-06-23 | Mt. Sinai School Of Medicine Of The City University Of New York | Blood cell typing and compatibility test procedure |
| US4035316A (en) * | 1975-11-24 | 1977-07-12 | California Institute Of Technology | Cell specific, variable density, polymer microspheres |
| US4219335A (en) * | 1978-09-18 | 1980-08-26 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Immunochemical testing using tagged reagents |
| CA1111762A (en) * | 1977-12-28 | 1981-11-03 | David S. Frank | Fluorescent rare earth chelate in polymeric latex particles |
| US4193983A (en) * | 1978-05-16 | 1980-03-18 | Syva Company | Labeled liposome particle compositions and immunoassays therewith |
| US4224198A (en) * | 1978-05-26 | 1980-09-23 | California Institute Of Technology | Protein specific polymeric immunomicrospheres |
| US4261968A (en) * | 1979-05-10 | 1981-04-14 | Syva Company | Fluorescence quenching with immunological pairs in immunoassays |
| US4254096A (en) * | 1979-10-04 | 1981-03-03 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Reagent combination for solid phase immunofluorescent assay |
| FR2482309A1 (fr) * | 1980-04-21 | 1981-11-13 | Fax Gie | Procede de detection de la presence d'antigenes d'un groupe sanguin dans une coupe histologique, et produits pour mettre en oeuvre ce procede |
| EP0092344A1 (en) * | 1982-04-15 | 1983-10-26 | AMERSHAM INTERNATIONAL plc | Assay method |
-
1982
- 1982-10-15 US US06/434,761 patent/US4550017A/en not_active Expired - Lifetime
-
1983
- 1983-10-14 EP EP83306245A patent/EP0106685B1/en not_active Expired
- 1983-10-14 CA CA000439015A patent/CA1212317A/en not_active Expired
- 1983-10-14 AT AT83306245T patent/ATE37095T1/de not_active IP Right Cessation
- 1983-10-14 JP JP58191087A patent/JPS5991370A/ja active Granted
- 1983-10-14 DE DE8383306245T patent/DE3377943D1/de not_active Expired
-
1990
- 1990-09-25 SG SG788/90A patent/SG78890G/en unknown
- 1990-11-08 HK HK936/90A patent/HK93690A/xx not_active IP Right Cessation
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH087139B2 (ja) * | 1988-03-29 | 1996-01-29 | アプライド リサーチ システムス エー アール エス ホールディング エヌ ヴイ | 導波管センサ及び分析方法 |
| JP2009002685A (ja) * | 2007-06-19 | 2009-01-08 | Olympus Corp | 赤血球標識用磁性粒子 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0106685A2 (en) | 1984-04-25 |
| SG78890G (en) | 1990-11-23 |
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| US4550017A (en) | 1985-10-29 |
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