JPH04253919A - 生理活性蛋白含有経口製剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は生理活性蛋白である顆粒
球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）及びエリスロポエチ
ン（ＥＰＯ）を有効成分として含有する経口製剤に関す
る。

【０００２】

【従来の技術】Ｇ−ＣＳＦは、造血因子のひとつであり
、ヒト膀胱癌細胞株５６３７（ＡＴＣＣ　ＨＴ８−９）
の培養液中に存在していることが示されている。（ウェ
ルト等；Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．
Ｓ．Ａ．　８２，　１５２６−１５３０，（１９８５）
）。 又、この遺伝子をコードするＤＮＡ配列が決定され（特
表昭第６３−５００６３６号）、遺伝子組換えによるＧ
−ＣＳＦの生産が可能となっている。

【０００３】Ｇ−ＣＳＦは、通常の造血障害の治療や化
学療法、又は放射線療法による造血障害の治療、骨髄移
植時等に有効である（ウェルト等：前述）。

【０００４】Ｇ−ＣＳＦ含有製剤としては、製剤の保存
における不活性化並びに容器壁への吸着を防止し、安定
化させることを目的としてＧ−ＣＳＦに界面活性剤を添
加した製剤（特開昭第６３−１４６８２６号）や、糖類
を添加した製剤（特開昭第６３−１４６８２７号）、高
分子を添加した製剤（特開昭第６３−１４６８２８号）
、アミノ酸、含硫還元剤、酸化防止剤のいずれかを添加
した製剤（特開昭第６３−１４６８２９号）、あるいは
蛋白質を添加した製剤（特開昭第６３−１５２３２６号
）が各々出願されている。しかしこれらはいずれも注射
剤としての形態をとっている。

【０００５】また、投与時のＧ−ＣＳＦの不活化を防ぎ
薬効の持続性の増大を目的として、Ｇ−ＣＳＦを生体内
組織適合性高分子からなる基剤に包含せしめて成る徐放
性製剤（特開昭第６３−９１３２５　号）が出願されて
いる。また、経口投与を目的として、Ｇ−ＣＳＦと界面
活性剤、常温で固体の有機溶媒可溶性物質及び腸溶性基
剤とから成る経口腸溶製剤が報告されている（ＰＣＴ公
開公報ＷＯ９０／０１３２９　号）。

【０００６】一方、ＥＰＯは主に腎臓で産生・分泌され
る造血ホルモンの一種であり、赤芽球前駆体細胞に作用
して該細胞を赤血球に分化させる機能を有する、分子量
約３４，０００の糖タンパク質である。

【０００７】これまでに、ＥＰＯはヒトをはじめとする
哺乳動物に於いて、貧血症の治療に代表されるエリスロ
ポエチン治療に有用な物質であることが、判明している
。

【０００８】天然由来のＥＰＯとしては、例えば、再生
不良性貧血患者の尿から精製したものが知られているが
（ミヤケ他，ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミ
ストリー、第２５２　巻、第１５号，５５５８−５５６
４頁，１９７７年）、この方法では収率が低くその供給
量には限界があり、工業的大量生産には適さないもので
ある。そこで、組換えＤＮＡ技術を利用した生産性の高
いＥＰＯ生産方法が提案されている（特公平第　２−１
７１５６　号）。

【０００９】ＥＰＯ含有製剤としては製剤の安定化また
は、容器壁への吸着防止を目的として、ＥＰＯに血清ア
ルブミン、デキストランまたはポリエチレングリコール
等を添加した製剤（特開昭第６１−９１１３１　号、特
開昭第６１−９７２２９　号）、及びＥＰＯと界面活性
剤を含む水性および／または非水性媒体とから成る経鼻
投与剤（特開昭第６２−８９６２７　号）が出願されて
いる。

【００１０】

【発明が解決しようとする課題】一般に生理活性を持つ
蛋白は胃酸や消化管内あるいは消化管壁の酵素により分
解を受け易く、またその分子量の大きさや複雑な分子構
造等により、消化管から吸収させることはきわめて困難
である。したがって従来、その適用は静脈、皮下あるい
は筋肉内への注射剤投与に限られていた。

【００１１】しかしながらこのような注射剤投与は患者
に苦痛を与え、投与部位の組織障害さらには患者自身に
よる摂取が困難である等の問題を含んでいる。そこでこ
れらの問題に対応して他の投与方法が　　種々試みられ
ている。例えば経鼻投与（Ｐｈａｒｍ．　Ｒｅｓ．，２
１，１０５　（１９８９）　）、口腔内投与（Ｒｅｓ．
Ｃｏｍｍｕｎ．Ｐａｔｈｏｌ．Ｐａｒｍａｃｏｌ．，　
６３，５３（１９８９））、気管内投与（Ｄｉａｂｅｔ
ｓ，２０，５５２（１９７１））、経皮投与（Ｊ．Ｐｈ
ａｒｍ．Ｓｃｉ．，７８，　３７６　（１９８９））、
直腸内投与（Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．３
３，　３３４　（１９８１））などがあるが、いずれも
種々の問題を含んでおり実用化に至ってない。 　　Ｇ−ＣＳＦやＥＰＯについても事情は同様である。 中でも投与方法が古来から存在しなじみ易く、きわめて
簡便で苦痛を伴わず、患者自身による薬物摂取が可能で
ある経口製剤が望まれているが、他の投与方法に比べて
経口投与の試みはきわめて少ない。例えば、リポソーム
に封入して投与する方法（Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕ
ｌｌ．，３０，　２２４５（１９８２））、マイクロカ
プセルに封入して投与する方法（特願昭第６３−１９０
８３３号）、アゾアロマティックコポリマーで被覆し投
与する方法（Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３３，１０８１（１９
８６））などが知られているにすぎない。

【００１２】そこで本発明の目的はこのような問題点を
改善したＧ−ＣＳＦまたはＥＰＯの経口製剤を提供する
ことである。

【００１３】

【課題を解決するための手段】上記状況に鑑み、本発明
者等はＧ−ＣＳＦまたはＥＰＯを効率的に消化管より吸
収させる製剤の開発及びその製造法の確立を目的に種々
検討した結果、界面活性剤、脂肪酸、腸溶性基剤を添加
することが有効であることを見だし、本発明に到達した
。

【００１４】即ち、本発明の経口製剤は、Ｇ−ＣＳＦま
たはＥＰＯ、界面活性剤、脂肪酸、及び腸溶性基剤から
成ることを特徴とする。

【００１５】本発明におけるＧ−ＣＳＦは遺伝子組換え
によって形質転換して得た形質転換体から産生せしめ、
単離精製したものを使用することができる。好ましくは
、実質的に以下のアミノ酸配列を有する遺伝子組換え大
腸菌により産生されたヒトＧ−ＣＳＦを用いる。ここで
「実質的」とは、配列が同一であるか、又は天然Ｇ−Ｃ
ＳＦ蛋白との間に有害な機能的非類似性を生じさせない
ような１以上のアミノ酸変化（即ち欠失、付加、挿入、
置換）を含むことを意味する。

【００１６】 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　（Ｍｅｔ）ｎ　Ｔｈｒ　Ｐｒ
ｏ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ａｌａ　ＳｅｒＳｅｒ　
Ｌｅｕ　Ｐｒｏ　Ｇｌｎ　Ｓｅｒ　Ｐｈｅ　Ｌｅｕ　Ｌ
ｅｕ　Ｌｙｓ　Ｃｙｓ　Ｌｅｕ　Ｇｌｕ　Ｇｌｎ　Ｖａ
ｌ　Ａｒｇ　Ｌｙｓ　Ｉｌｅ　Ｇｌｎ　Ｇｌｙ　Ａｓｐ
　Ｇｌｙ　Ａｌａ　Ａｌａ　Ｌｅｕ　Ｇｌｎ　Ｇｌｕ　
Ｌｙｓ　Ｌｅｕ　Ｃｙｓ　Ａｌａ　Ｔｈｒ　Ｔｙｒ　Ｌ
ｙｓ　Ｌｅｕ　Ｃｙｓ　Ｈｉｓ　Ｐｒｏ　Ｇｌｕ　Ｇｌ
ｕ　Ｌｅｕ　Ｖａｌ　Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　Ｈｉｓ
　Ｓｅｒ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　Ｉｌｅ　Ｐｒｏ　Ｔｒｐ　
Ａｌａ　Ｐｒｏ　Ｌｅｕ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ｃｙｓ　Ｐ
ｒｏ　Ｓｅｒ　Ｇｌｎ　Ａｌａ　Ｌｅｕ　Ｇｌｎ　Ｌｅ
ｕ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ｃｙｓ　Ｌｅｕ　Ｓｅｒ　Ｇｌｎ
　Ｌｅｕ　Ｈｉｓ　Ｓｅｒ　Ｇｌｙ　Ｌｅｕ　Ｐｈｅ　
Ｌｅｕ　Ｔｙｒ　Ｇｌｎ　Ｇｌｙ　Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　Ｇ
ｌｎ　Ａｌａ　Ｌｅｕ　Ｇｌｕ　Ｇｌｙ　Ｉｌｅ　Ｓｅ
ｒ　Ｐｒｏ　Ｇｌｕ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｔｈｒ
　Ｌｅｕ　Ａｓｐ　Ｔｈｒ　Ｌｅｕ　Ｇｌｎ　Ｌｅｕ　
Ａｓｐ　Ｖａｌ　Ａｌａ　Ａｓｐ　Ｐｈｅ　Ａｌａ　Ｔ
ｈｒ　Ｔｈｒ　Ｉｌｅ　Ｔｒｐ　Ｇｌｎ　Ｇｌｎ　Ｍｅ
ｔ　Ｇｌｕ　Ｇｌｕ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　Ｍｅｔ　Ａｌａ
　Ｐｒｏ　Ａｌａ　Ｌｅｕ　Ｇｌｎ　Ｐｒｏ　Ｔｈｒ　
Ｇｌｎ　Ｇｌｙ　Ａｌａ　Ｍｅｔ　Ｐｒｏ　Ａｌａ　Ｐ
ｈｅ　Ａｌａ　Ｓｅｒ　Ａｌａ　Ｐｈｅ　Ｇｌｎ　Ａｒ
ｇ　Ａｒｇ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　Ｖａｌ　Ｌｅｕ
　Ｖａｌ　Ａｌａ　Ｓｅｒ　Ｈｉｓ　Ｌｅｕ　Ｇｌｎ　
Ｓｅｒ　Ｐｈｅ　Ｌｅｕ　Ｇｌｕ　Ｖａｌ　Ｓｅｒ　Ｔ
ｙｒ　Ａｒｇ　Ｖａｌ　Ｌｅｕ　Ａｒｇ　Ｈｉｓ　Ｌｅ
ｕ　Ａｌａ　Ｇｌｎ　Ｐｒｏ　 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　（ｎ＝０又は１）更に好ましくは
、上記のｎ＝１のアミノ酸配列を有するものを用いる。 上記のヒトＧ−ＣＳＦは、例えば、特表昭第６３−５０
０６３６号公報の開示に従い得ることができる。

【００１７】一方、本発明で使用し得るＥＰＯは、ヒト
及びサル等の哺乳動物に於いて天然に産生されるものの
他、前記特公平第　２−１７１５６　号公報に開示の組
換えＥＰＯに代表される組換えＤＮＡ技術によって得ら
れ天然ＥＰＯの生物学的活性を有するポリペプチド、及
び同じく天然ＥＰＯの生物学的活性を有するそれらの類
縁体をも意味する。

【００１８】本発明で使用するＥＰＯは、好ましくはヒ
ト型ＥＰＯであり、更に好ましくは組換えＤＮＡ技術に
よって得られるヒト型ＥＰＯである。

【００１９】本発明に用いられる界面活性剤は、アニオ
ン性界面活性剤であるラウリル硫酸ナトリウム、ジオク
チルスルホコハク酸ナトリウム、ジオクチルスルホン酸
ナトリウムなどが、またカチオン性界面活性剤である塩
化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム等が、さらに
非イオン性界面活性剤であるラウロマクロゴール、ステ
アリン酸ポリオキシル４０、ポリオキシエチレン硬化ヒ
マシ油１０、５０、６０、モノステアリン酸グリセリン
、ポリソルベート４０、６０、６５、８０、ショ糖脂肪
酸エステル、メチルセルロース、カルボキシルメチルセ
ルロースなどで、これらの１種または２種以上の混合物
を用いる。これらの界面活性剤は、一般にＧ−ＣＳＦ１
重量部に対し　０．１重量部〜１０００重量部の範囲内
で添加することが好ましい。ＥＰＯについても同様であ
る。

【００２０】本発明に用いられる脂肪酸とはオレイン酸
、リノール酸、リノレン酸等の食用植物に含まれている
脂肪酸の１種または２種以上の混合物が挙げられる。 この中でも、特にオレイン酸およびリノール酸が好まし
い。これらの脂肪酸は、一般にＧ−ＣＳＦ　１重量部に
対し、　０．１重量部〜１０００重量部の範囲内で添加
することが好ましい。ＥＰＯについても同様である。

【００２１】本発明で用いられる腸溶性基剤としては、
セルロースアセテートフタレート、メチルアクリレート
メタアクリレートコポリマー、カルボキシメチルエチル
セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタ
レート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテー
トサクシネートの１種または２種以上の混合物が挙げら
れる。かかる腸溶性基剤は、腸溶カプセル及び腸溶剤皮
等の形態をとることができる。

【００２２】本発明では必要に応じて賦形剤を用いる。 本発明に用いられる賦形剤にはデンプン類、糖類、無機
質類、有機酸類、セルロース類、合成および半合成高分
子類、アミノ酸類などが挙げられる。デンプン類として
は、トウモロコシデンプン、小麦デンプン、バレイショ
デンプンなどが含まれる。糖類としては、乳糖、ブドウ
糖、白糖、果糖、Ｄ−ソルビトール、Ｄ−マンニトール
、イノシトール、ショ糖などが含まれる。無機質類とし
ては、ステアリン酸マグネシウム、リン酸カルシウム、
リン酸水素カルシウム、沈降炭酸カルシウム、炭酸水素
ナトリウム、炭酸マグネシウム、塩化ナトリウム、硫酸
カルシウムなどが含まれる。有機酸類としては、コハク
酸、酒石酸、クエン酸、フマール酸、マレイン酸、マロ
ン酸、グルタル酸、アジピン酸、リンゴ酸、グルコン酸
及びグルクロン酸などが含まれる。セルロース類として
は、微結晶セルロース、メチルセルロース、エチルセル
ロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロ
ピルセルロース、カルボキシプロピルセルロース、カル
ボキシメチルセルロースナトリウムなどが含まれる。合
成および半合成高分子類としては、ポリビニルアルコー
ル、カルボキシビニルポリマー、ポリエチレングリコー
ル、ポリビニルピロリドン、ポリアクリル酸ナトリウム
などが含まれる。アミノ酸類としては、Ｌ−アルギニン
、Ｄ，Ｌ−メチオニン、Ｌ−フェニルアラニン、Ｌ−グ
ルタミン酸などが含まれる。

【００２３】本発明の経口製剤においては、とくに脂肪
酸を添加することにより主薬である生理活性蛋白の消化
管での吸収性が高められている。これは、脂肪酸が界面
活性剤と相乗的に消化管粘膜に作用し、生理活性蛋白の
吸収性を高めるため、あるいは脂肪酸が界面活性剤とと
もに生理活性蛋白に作用し、吸収性の高い複合体を形成
することによるものと考えられる。

【００２４】本発明の経口製剤の製造法としては、以下
の方法が考えられる。例えば、まず緩衝液中あるいは蒸
留水中に界面活性剤及び脂肪酸を溶解し、ついで超音波
処理を行う。この溶液にＧ−ＣＳＦまたはＥＰＯの溶液
を加え必要に応じて賦形剤を添加し、低温で攪拌混合す
る。さらにこの溶液を凍結乾燥し粉末とする。この粉末
に必要に応じて賦形剤を添加混合し篩過し粒度を整えて
腸溶カプセルに封入する。別法として、緩衝液中あるい
は蒸留水中に界面活性剤及び脂肪酸を溶解する。この溶
液に生理活性物質の原液を加え必要に応じて賦形剤を添
加し、低温で攪拌混合する。さらにこの溶液を凍結乾燥
し粉末とする。この粉末に必要に応じて賦形剤を添加混
合した後篩過し粒度を整えて打錠して錠剤とした後、腸
溶剤皮を施して腸溶錠とする。あるいはこの粉末に必要
に応じて賦形剤を添加混合した後篩過し粒度を整えて顆
粒とし、これに腸溶剤皮をほどこして硬ゼラチンカプセ
ルに封入する。

【００２５】本発明の経口製剤を製造するにあたり、有
機溶媒を使用してもよいが、主薬であるＧ−ＣＳＦまた
はＥＰＯの失活を抑制し、更には残留溶媒の影響を除く
ためには緩衝液もしくは蒸留水を用いることが好ましい
。また上述の製造例のように製造工程で熱処理を行わな
い方がＧ−ＣＳＦまたはＥＰＯの失活を抑制するために
は好ましい。凍結乾燥は本発明の経口製剤の製造工程に
おいて必須ではないが、製剤中の主剤の含量を高含量と
する上で有効である。

【００２６】腸溶カプセルの製造法としては以下の方法
が考えられる。例えば腸溶性基剤を有機溶媒に溶解する
か蒸留水に分散させ、この溶液に（硬または軟）カプセ
ルをつけ込み乾燥させるかあるいはこの溶液をカプセル
に噴霧し乾燥させることにより得られる。別法として腸
溶性基剤を有機溶媒に溶解するか蒸留水に分散させ、こ
の溶液にカプセルのボディー部鋳型およびキャップ部鋳
型をつけ込んだ後乾燥させ、鋳型から基剤をはずすこと
により得られる。さらに別法として、腸溶性基剤を有機
溶媒に溶解するか蒸留水に分散させ、この溶液に硬ゼラ
チンカプセルのボディー部およびキャップ部の外部をつ
け込み、乾燥させる。これを蒸留水中に入れ内部のゼラ
チン部を除去し再び乾燥させて得られる。

【００２７】

【実施例】以下に実施例および実験例を示し本発明をさ
らに具体的に説明する。

【００２８】実施例１ 蒸留水　１００ｍｌ中にポリオキシエチレン硬化ヒマシ
油６０　　０．２０ｇおよびリノール酸０．２８ｇを溶
解させ、ついで超音波処理を行った。これにＧ−ＣＳＦ
溶液（０．５０ｍｇ／ｍｌ）　２００ｍｌを加え低温庫
内で一晩攪拌した後凍結乾燥して均一な凍乾品を得た。

【００２９】一方、ヒドロキシプロピルメチルセルロー
ス　　フタレート　４．０ｇをメタノール：塩化メチレ
ン（３：１０）１０ｍｌに溶かし、これに硬ゼラチンカ
プセルのボディー部およびキャップ部の外部をつけ込ん
だ後充分乾燥させた。

【００３０】これを蒸留水中に入れ内部のゼラチン部を
除去し再び乾燥させて腸溶カプセルを得た。この腸溶カ
プセルに前述の凍乾品を封入した。更にリノール酸を添
加せずに、その他は全く同様にして腸溶カプセル剤を調
製した。

【００３１】実施例２ 蒸留水　１００ｍｌ中にステアリン酸ポリオキシル４０
０．４０ｇおよびオレイン酸　０．２ｇを溶解させ、つ
いで超音波処理を行った。これにＧ−ＣＳＦ溶液（０．
５０ｍｇ／ｍｌ）２００ｍｌ　および乳糖　１．０ｇを
加え低温庫内で一晩攪拌した後凍結乾燥して均一な凍乾
品を得た。これにヒドロキシプロピルセルロース０．１
０ｇを加え造粒し、実施例１と同様にして調製した腸溶
カプセルに封入した。

【００３２】実施例３ クエン酸緩衝液　１００ｍｌ中にステアリン酸ポリオキ
シル４０　　０．５０ｇおよびリノール酸０．２０ｇを
溶解させ、ついで超音波処理を行った。これにＧ−ＣＳ
Ｆ溶液（２．０ｍｇ／ｍｌ）　１００ｍｌ、Ｌ−アルギ
ニン０．１０ｇおよび白糖　１．０ｇを加え低温庫内で
一晩攪拌した後凍結乾燥して均一な凍乾品を得た。これ
にコハク酸０．１０ｇ、微結晶セルロース０．１０ｇお
よびステアリン酸マグネシウム０．１０ｇを添加混合し
打錠した。この錠剤にヒドロキシプロピルメチルセルロ
ースアセテートサクシネート懸濁液を噴霧、乾燥するこ
とにより腸溶剤皮を施した。

【００３３】実施例４ クエン酸緩衝液　１００ｍｌ中にショ糖脂肪酸エステル
０．４０ｇおよびリノール酸０．１０ｇを溶解させ、つ
いで超音波処理を行った。これにＧ−ＣＳＦ溶液（２．
０ｍｇ／ｍｌ）２００ｍｌおよび乳糖　１．０ｇを加え
低温庫内で一晩攪拌した後凍結乾燥して均一な凍乾品を
得た。これにヒドロキシプロピルセルロース０．１　ｇ
を加え造粒し、さらにヒドロキシプロピルメチルセルロ
ースアセテートサクシネート懸濁液を噴霧、乾燥するこ
とにより腸溶剤皮を施し硬ゼラチンカプセルに封入した
。

【００３４】実施例５ 蒸留水　１００ｍｌ中にショ糖脂肪酸エステル０．４０
ｇおよびリノール酸０．３０ｇを溶解させ、ついで超音
波処理を行った。これにＥＰＯ溶液（２５万ＩＵ／ｍｌ
）２００ｍｌ　を加え低温庫内で一晩攪拌した後凍結乾
燥して均一な凍乾品を得た。これにリン酸ナトリウム０
．１０ｇを加えヒドロキシプロピルメチルセルロースフ
タレートを用いて調製した腸溶カプセルに封入した。

【００３５】実施例６ 蒸留水　１００ｍｌにステアリン酸ポリオキシル４０　
　０．３０ｇおよびオレイン酸０．２０ｇを溶解させ、
ついで超音波処理を行った。これにＥＰＯ溶液（２５万
ＩＵ／ｍｌ）　２００ｍｌおよび乳糖１．０ｇを加え低
温庫内で一晩攪拌した後凍結乾燥して均一な凍乾品を得
た。この凍乾品を篩過し粒度を整え微結晶セルロース０
．２０ｇおよびステアリン酸マグネシウム０．０５ｇを
添加混合し打錠した。この錠剤にカルボキシメチルエチ
ルセルロース懸濁液を噴霧、乾燥することにより腸溶剤
皮を施した。

【００３６】実施例７ 蒸留水　１００ｍｌにステアリン酸ポリオキシル４０　
　０．３０ｇおよびリノレン酸０．２０ｇを攪拌し溶解
させ、ついで超音波処理を行った。これにＥＰＯ溶液（
２５万ＩＵ／ｍｌ）　２００ｍｌ、Ｄ−マンニトール　
１．０ｇおよびＬ−アルギニン０．１０ｇを加え低温庫
内で一晩攪拌した後凍結乾燥して均一な凍乾品を得た。 これにヒドロキシプロピルセルロース０．１０ｇを加え
造粒し、さらにこれにヒドロキシプロピルメチルセルロ
ースアセテートサクシネート懸濁液を噴霧、乾燥するこ
とにより腸溶剤皮を施し硬ゼラチンカプセルに封入した
。

【００３７】実施例８ クエン酸緩衝液　１００ｍｌ中にステアリン酸ポリオキ
シル４０　　０．８０ｇおよびリノール酸０．８０ｇを
溶解させ、ついで超音波処理を行った。この液　８ｍｌ
にＧ−ＣＳＦ溶液（７３ｍｇ／ｍｌ）　２ｍｌを加え低
温庫内で一晩攪拌し試験液とした。 更にリノール酸の代わりにオレイン酸，リノレン酸を添
加し、その他は全く同様にして調製した試験液および脂
肪酸を添加せずにその他は全く同様にして対照例となる
試験液を調製した。

【００３８】実施例９ クエン酸緩衝液　１００ｍｌ中にステアリン酸ポリオキ
シル４０　１．６ｇおよびリノール酸　０．４ｇ，　１
．６ｇ，　３．２ｇ，　６．４ｇそしてリノール酸を含
有させない溶液を各々調製し、ついで超音波処理を行っ
た。この液　９ｍｌにＧ−ＣＳＦ溶液（２０ｍｇ／ｍｌ
）１ｍｌを加え低温庫内で一晩攪拌し各試験液とした。

【００３９】実験例１ 投与前２０時間絶食（水は自由に与える。）した雄性ビ
ーグル犬（１３−１５月齢）を用い実施例１で調製した
リノール酸を含有する本発明製剤と含有しない製剤各々
をＧ−ＣＳＦとして　２．２ｍｇ／ｋｇを経口投与した
。投与後前腕静脈から　０．５ｍｌ採血しＥＤＴＡ処理
したポリスチレンチューブにサンプリングした。採血し
た血液中の白血球数はｍｉｃｒｏｃｅｌｌ　ｃｏｕｎｔ
ｅｒ　ＳＹＳＭＥＸ　ＣＣ−１８０Ａを用いてカウント
した。各採血時における白血球数を第１図に示した。

【００４０】この結果リノール酸を含有する本発明製剤
では、経口投与後２４〜４８時間目から白血球数が増加
し、投与後５６時間目にピークに達し７２時間後には投
与時のレベルまで下がった。これに比べ、リノール酸を
含有しない製剤及びＧ−ＣＳＦを含まない製剤（対照例
）では薬理効果は見られなかった。

【００４１】実験例２ 投与前２０時間絶食（水は自由に与える。）した雄性ビ
ーグル犬（１３−１５月齢）を用い実施例３で調製した
製剤をＧ−ＣＳＦとして　２．０ｍｇ／ｋｇを経口投与
した。投与後前腕静脈から　０．５ｍｌ採血しＥＤＴＡ
処理したポリスチレンチューブにサンプリングした。採
血した血液中の白血球数はｍｉｃｒｏｃｅｌｌ　ｃｏｕ
ｎｔｅｒ　ＳＹＳＭＥＸ　ＣＣ−１８０Ａを用いてカウ
ントした。各採血時における白血球数を第２図に示した
。

【００４２】この結果本発明製剤の経口投与後　８〜２
４時間目から白血球数が増加し、投与後４８時間目にピ
ークに達し７２時間後には投与時のレベルまで下がった
。これに比べＧ−ＣＳＦを含まない製剤（対照例）では
薬理効果は見られなかった。

【００４３】実験例３ 手術によりカニューレを胃経由十二指腸内へ挿入した雄
性ラット（ＳＤ系　　体重　４００−５００ｇ）を用い
、手術の影響が見られなくなるまで数日間経過させた後
実施例８で調製した各試験液をＧ−ＣＳＦとして１５ｍ
ｇ／ｋｇを十二指腸内投与した。投与後頸静脈から　０
．３ｍｌ採血しＥＤＴＡ処理したポリスチレンチューブ
にサンプリングした。採血した血液中の白血球数は　ｍ
ｉｃｒｏｃｅｌｌ　ｃｏｕｎｔｅｒ　ＳＹＳＭＥＸ　Ｃ
Ｃ−１８０Ａを用いてカウントし、残りの血液の一部を
プレパラートに塗沫し染色後白血球数中の好中球数を顕
微鏡下でカウントし両者の結果から血液中の好中球数を
求めた。各採血時の投与前に対する好中球数増加率を第
３図に示した。

【００４４】この結果脂肪酸を全く含まない製剤（脂肪
酸未含有）は投与後　６時間目および１２時間目でわず
かに好中球数が増加したのにとどまったのに比べ、各脂
肪酸を含有させた本発明製剤では投与後　６〜４８時間
で著しい好中球数の増加が観察された。中でもオレイン
酸およびリノール酸含有製剤が高い薬理効果を示した。

【００４５】実験例４ 手術によりカニューレを胃経由十二指腸内へ挿入した雄
性ラット（ＳＤ系　　体重４００−５００　ｇ）を用い
、手術の影響が見られなくなるまで数日間経過させた後
実施例９で調製した各試験液をＧ−ＣＳＦとして　２．
４ｍｇ／ｋｇを十二指腸内投与した。投与後頸静脈から
　０．３ｍｌ採血しＥＤＴＡ処理したポリスチレンチュ
ーブにサンプリングした。 採血した血液中の白血球数はｍｉｃｒｏｃｅｌｌ　ｃｏ
ｕｎｔｅｒ　ＳＹＳＭＥＸ　ＣＣ−１８０Ａを用いてカ
ウントし、残りの血液の一部をプレパラートに塗沫し染
色後白血球数中の好中球数を顕微鏡下でカウントし両者
の結果から血液中の好中球数を求めた。各採血時の投与
前に対する好中球数増加率を第４図に示した。

【００４６】この結果リノール酸を含有させなかった製
剤はほとんど薬理効果が見られなかったのに比べ、リノ
ール酸を各々　０．４％，　１．４％，　２．９％，　
５．８％含有させた本発明製剤では投与後　６時間目お
よび１２時間目で好中球数の著しい増加が観察された。 本実験例においてはリノール酸の添加量０．４％〜５．
８％（Ｇ−ＣＳＦ　１重量部に対して　１．９重量部〜
４５重量部）では効果に明らかな差は観察されなかった
。

【００４７】

【発明の効果】以上のことから、本発明の経口製剤にあ
っては、製剤調製時の主薬の失活が抑制され、特には脂
肪酸の添加により、腸管における主薬の吸収促進等の効
果が認められた。

【００４８】これらは、投与量の減少へとつながるとと
もに投与量の正確な管理を容易にし、経口製剤としての
実用性を高めるものといえる。

【００４９】

【配列表】配列番号：１ 配列の長さ：１７５ 配列の型：アミノ酸 配列の種類：タンパク質 配列 　　　　Ｍｅｔ　Ｔｈｒ　Ｐｒｏ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　Ｐ
ｒｏ　Ａｌａ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ｌｅｕ　Ｐｒｏ　Ｇｌ
ｎ　Ｓｅｒ　Ｐｈｅ　Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　　　　１　　　
　　　　　　　　　　　　５　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　１０　　　　　　　　　　　　　　　　
　　１５　　　　Ｌｙｓ　Ｃｙｓ　Ｌｅｕ　Ｇｌｕ　Ｇ
ｌｎ　Ｖａｌ　Ａｒｇ　Ｌｙｓ　Ｉｌｅ　Ｇｌｎ　Ｇｌ
ｙ　Ａｓｐ　Ｇｌｙ　Ａｌａ　Ａｌａ　Ｌｅｕ　　　　
　　　　　　　　　　　　　２０　　　　　　　　　　
　　　　　　　　２５　　　　　　　　　　　　　　　
　　　３０　　　　Ｇｌｎ　Ｇｌｕ　Ｌｙｓ　Ｌｅｕ　
Ｃｙｓ　Ａｌａ　Ｔｈｒ　Ｔｙｒ　Ｌｙｓ　Ｌｅｕ　Ｃ
ｙｓ　Ｈｉｓ　Ｐｒｏ　Ｇｌｕ　Ｇｌｕ　Ｌｅｕ　　　
　　　　　　　　　　３５　　　　　　　　　　　　　
　　　　　４０　　　　　　　　　　　　　　　　　　
４５　　　　Ｖａｌ　Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　Ｈｉｓ
　Ｓｅｒ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　Ｉｌｅ　Ｐｒｏ　Ｔｒｐ　
Ａｌａ　Ｐｒｏ　Ｌｅｕ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　　　　　　
　　　５０　　　　　　　　　　　　　　　　　　５５
　　　　　　　　　　　　　　　　　　６０　　　　Ｃ
ｙｓ　Ｐｒｏ　Ｓｅｒ　Ｇｌｎ　Ａｌａ　Ｌｅｕ　Ｇｌ
ｎ　Ｌｅｕ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ｃｙｓ　Ｌｅｕ　Ｓｅｒ
　Ｇｌｎ　Ｌｅｕ　Ｈｉｓ　　　　　６５　　　　　　
　　　　　　　　　　　　７０　　　　　　　　　　　
　　　　　　　７５　　　　　　　　　　　　　　　　
　　８０　　　　Ｓｅｒ　Ｇｌｙ　Ｌｅｕ　Ｐｈｅ　Ｌ
ｅｕ　Ｔｙｒ　Ｇｌｎ　Ｇｌｙ　Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　Ｇｌ
ｎ　Ａｌａ　Ｌｅｕ　Ｇｌｕ　Ｇｌｙ　Ｉｌｅ　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　８５　　　　　　
　　　　　　　　　　　　９０　　　　　　　　　　　
　　　　　　　９５　　　　Ｓｅｒ　Ｐｒｏ　Ｇｌｕ　
Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｔｈｒ　Ｌｅｕ　Ａｓｐ　Ｔ
ｈｒ　Ｌｅｕ　Ｇｌｎ　Ｌｅｕ　Ａｓｐ　Ｖａｌ　Ａｌ
ａ　　　　　　　　　　　　　　　　　１００　　　　
　　　　　　　　　　　　　１０５　　　　　　　　　
　　　　　　　　１１０　　　　　Ａｓｐ　Ｐｈｅ　Ａ
ｌａ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｉｌｅ　Ｔｒｐ　Ｇｌｎ　Ｇｌ
ｎ　Ｍｅｔ　Ｇｌｕ　Ｇｌｕ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　Ｍｅｔ
　Ａｌａ　　　　　　　　　　　　　１１５　　　　　
　　　　　　　　　　　　１２０　　　　　　　　　　
　　　　　　　１２５　　　　　Ｐｒｏ　Ａｌａ　Ｌｅ
ｕ　Ｇｌｎ　Ｐｒｏ　Ｔｈｒ　Ｇｌｎ　Ｇｌｙ　Ａｌａ
　Ｍｅｔ　Ｐｒｏ　Ａｌａ　Ｐｈｅ　Ａｌａ　Ｓｅｒ　
Ａｌａ　　　　　　　　　１３０　　　　　　　　　　
　　　　　　　１３５　　　　　　　　　　　　　　　
　　１４０　　　　　Ｐｈｅ　Ｇｌｎ　Ａｒｇ　Ａｒｇ
　Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　Ｖａｌ　Ｌｅｕ　Ｖａｌ　
Ａｌａ　Ｓｅｒ　Ｈｉｓ　Ｌｅｕ　Ｇｌｎ　Ｓｅｒ　　
　　　１４５　　　　　　　　　　　　　　　　　１５
０　　　　　　　　　　　　　　　　　１５５　　　　
　　　　　　　　　　　　　１６０　　　　　Ｐｈｅ　
Ｌｅｕ　Ｇｌｕ　Ｖａｌ　Ｓｅｒ　Ｔｙｒ　Ａｒｇ　Ｖ
ａｌ　Ｌｅｕ　Ａｒｇ　Ｈｉｓ　Ｌｅｕ　Ａｌａ　Ｇｌ
ｎ　Ｐｒｏ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　１６５　　　　　　　　　　　　　　　　　１７０　
　　　　　　　　　　　　　　　　１７５

【図面の簡単な説明】

【図１】実験例１の結果を示すグラフである。

【図２】実験例２の結果を示すグラフである。

【図３】実験例３の結果を示すグラフである。

【図４】実験例４の結果を示すグラフである。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 （ａ）　顆粒球コロニー刺激因子またはエリスロポエチ
   ン、（ｂ）　界面活性剤、 （ｃ）　脂肪酸、及び （ｄ）　腸溶性基剤 から成ることを特徴とする経口製剤。