JPH0347114A - 直腸及び膣適用に適する、生物学的に活性なペプチド薬剤を製造する方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （本発明の利用分野〕 本発明は、生物学的に活性なペプチドを直腸及び膣にヒ
ト−及び獣医薬剤の形で適用するための調製物を製造す
る方法に関する。

〔公知技術の特徴〕

インシュリン治療の導入以来、適する投与形態について
研究されている。その形態はインシュリンの需要に即応
した供給を高い生物利用性で通常の腸管外適用の環境下
で可能にすることができるものである。吸収媒体の使用
は（東ドイツ特許第１１７６８１号明細書）、インシュ
リン調製物の鼻及び直腸適用を可能にする。

しかし吸収媒体を単独で適用した場合、膵臓のプロテア
ーゼに対するプロテアーゼ阻害剤の添加下（１東ドイツ
特許第２５４８８１号明細書）及び吸収速度に有効な割
合でポリマー担体からのインシュリンの遊離速度の調節
下で（ＷＰ東ドイツ特許第２５２５３９号、第２５４８
８１号、第２５７１９７号明細書）依然として著しい欠
損がインシュリン注射に対するインシュリンの生物利用
性の点で生じる。これは著しい経済的損失と結びつく。

その点で従来まだ臨床的に使用できない結果に到達する
という原因となる。

一方で胃腸域中でインシュリンの不安定の問題が他方で
大きい極性分子の悪い吸収性が、種々他の生物学的に活
性なペプチドに於ても生じる。

吸収及び酵素分解に対する安定性は分子の構造上の変化
によって左右されることが試みられた。

その際一般にペプチドの意図された作用品質は変化する
。吸収媒体の使用及びペプチドのプロテアーゼ阻害剤に
よる酵素分解に対する保護は、夫々元来記載されている
。これは担体にペプチドを固定することによって遊離を
調節することに対してもいえる。

ポリペプチド、たとえばインシュリンの、しかもオリゴ
ペプチドに対する安定性及び同時に直腸及び膣吸収でこ
のペプチドの生物利用性は、嫌気性細菌に作用する剤に
よっても有利に影響を受けることができる。

しかし記載した可能性の各々自体だけでは、直腸及び膣
投与でのペプチドの不十分な生物利用性の問題を広範囲
にわたって解決しない。薬学的調製物の形で上記可能性
を本発明に従って組合せて初めて、ペプチド有効物質の
経済的に重要な直腸又は膣吸収を可能にする。

〔本発明の目的〕

本発明の目的は、生物学的に活性なペプチドを直腸又は
膣に投与することができる調製物の製造方法を開示する
ことである。但し、この際持続性作用が使用されるペプ
チドの一定の高い有効性と共に保証されねばならない。

ｃ本発明の詳細な説明〕 本発明は、生物学的に活性なペプチドをそれ自体公知の
個々の因子−これは組合せ効果を示す−の使用下に投与
するための調製物を製造する新規方法を示すことを課題
とする。

本発明の課題は、生物学的に活性なペプチド、たとえば
インシュリン、ＧｎＲＨ及び−同族体、物質ｐ及び誘導
体、オリゴペプチド、たとえば胸腺ペプチド及び同族体
、しかもまた微生物学的に製造されるペプチド、たとえ
ばシクロスポリンを高分子の不活性な担体に固定し、ゆ
っくり連続的に遊離し、アニオン性吸収媒体、たとえば
アミノ酸ペプチド−又はたん白−脂肪酸−縮合物によっ
て粘膜通過を可能にし、プロテアーゼ阻害剤と嫌気性細
菌に対する有効物質との組合せの併用によ、ってペプチ
ドの生物学的活性及び吸収媒体の作用が遅延された遊離
の持続期間にわたって直腸／膣投与の条件下に完全に得
られるという方法によって解決する。

生物学的に活性なペプチドの担体固定は、東ドイツ特許
第２１９６７３号及び第２５７１９７号明細書に従って
行われる。

アニオン性吸収媒体は、アミノ酸又はたん白加水分解物
と脂肪酸との縮合によって得られる（ＢＯＮＤｌ、　Ｓ
、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｚ、　１７／１９０９１５４５
；　ＩＺＡＲ，Ｇ。

Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｚ、　４０／１９１２／４０２；東
ドイツ特許第１１７６８１号明細書）。この方法で得ら
れた高純度吸収媒体は、粘膜相容性及び生物学的に分解
可能である。

生物活性なペプチドの及び吸収媒体の生化学的分解を遅
延された遊離の持続期間にわたって直腸又は膣域で阻害
するために、プロテアーゼと投与環境で活性な嫌気性菌
の作用を最小にする物質との組合せの存在が重要である
。プロテアーゼ阻害剤としてたとえばアプロチニン又は
ＥＡＣを使用する。嫌気性細菌に対する物質として本発
明の範囲内で化学療法剤及び（又は）消毒剤、たとえば
ρ−ヒドロキシ安息香酸エステルを使用することができ
る。

上記投与形でのペプチドの生物利用性は達成されうる個
々の因子の合計に相当するばかりでなく、それをはるか
に越えているという見い出された解決法は驚くべきであ
る。ペプチドの生物利用性が個々の因子の付加によって
約３０％に増加するので、本発明による方法でＩＭ−投
与に対して６０〜７５％の生物利用性が認められる。

実施例 例１ ゼラチン２００００ｇをグリセロール２５０００ｇ、水
１９．０−及び２ｎＮａＯＨ４，０−から成る混合物中
で６０分室温で膨潤し、６０℃で均一化し、４０℃に冷
却後、インシュリン−寒天−付加物２０．０ｇ　、たん
白−脂肪酸縮合１０００ｇ　、ニパギン５．０ｇ及びア
プロチニン１５０．０００ＡＴｒＥを混入し均一に撹拌
する。次いで型中に注ぐ。

例２ 付加物２００ｇあたりインシュリン５ＩＥを有するイン
シュリン−寒天−付加物２００００ｇをラウロイルロイ
シン０．２４０ｇ、メトロニダゾール６Ｂ及びアプロチ
ニン１５０．０００ＡＴｒＥと共にロスポール（Ｒｏｓ
ｕｐｏｌ）　Ｒ型の溶融された坐剤成形型中に均一に分
配し、坐剤型中に夫々２．０ｇを注ぐ。冷却後、離型す
る。

例３ 付加物２００ｍｇあたりインシュリン２．４ＩＥを有す
るインシュリン−寒天−付加物２００００ｇをラウロイ
ルロイシン０．２４０ｇ、メトロニダゾール２５０Ｂ及
びアプチニン１５０．０００ＡＴｒＥと共にロスポール
Ｒ型の溶融された坐剤成形型中に分配し、ガラス製毛細
管中に取り、直ちに０℃に冷却する。生じる円筒を糖尿
病のラットに投与するために使用する。

例４ ５５％インシュリン−ポリグリシン−錯体を、ポリグリ
シン（Ｍ　〜４０００）　２５０ｍｇを８５％ギ酸７．
５ｎｄ中にインシュリンＲ液１　、１　ｄ　（２５０ｒ
ａｇインシュリン／−８５％ギ酸）の添加下に懸濁して
製造する。この錯体５．７ｍｇを鋳造仕込物（７，５ｇ
グリセロール、８．９ｇクエン酸塩−リン酸塩−緩衝液
、ｐＨ７，５、ゼラチン９ｇ）に加える。更に例２と同
様に吸収媒体、保存剤及びプロテアーゼ阻害剤を加える
。この混合物を坐剤成形のために鋳型に流す。

１．２Ｉ［！／ｋｇ体重のインシュリン投薬で、１〜４
時間持続する血糖低下が約４０％で生じる。開始水準を
６時間後に達成する。コントロール動物−これはポリグ
リシンにインシュリンを固定せずに吸収媒体を有するイ
ンシュリン生薬のみを保有するーは、１〜２時間持続す
る血糖低下３０％しか示さない。

例５ 例４と同様に５５％インシュリン−ポリグリシン−錯体
１１．４Ｂとラウロイルロイシン３０抛ｇとを加工して
生薬となし、ｌ０ＩＥインシユリン含有坐剤が得られる
。　２．５ＩＥ／ｋｇ体重のインシュリンの直腸投与の
後、実験動物は４時間持続する血糖低下約５０％を示す
。開始水準を７時間後に達成する。

例６ ５５％インシュリン−ポリリジン−錯体の製造のために
、ポリリジン（Ｍ〜４０００）　４５０ｇを蒸留水２〇
−中に溶解し、この溶液にインシュリン５６０ｍｇを加
える。得られた錯体１１．４ｍｇをラウロイルロイシン
３００Ｂと共に、メチルヒドロキシベンゾアート１００
＋ａｇ及びアプロチニン１５０．０ＯＯＡＴｒ［！の添
加下に例４に於けると同様に坐剤に加工する。　２．５
ＩＥ／ｋｇ体重のインシュリン投薬から、実験動物は、
６０％血糖低下を３時間にわたって示す、この場合開始
水準に６時間後に再び達する。

例７ デキストラン（Ｍ〜５０００００）　５．６ｇを蒸留水
４．６−と攪拌して粘性混合物となし、この混合物に１
０００μ！インシユリン溶液（２５０ｍｇインシュイン
シュリン／ｄ２ｎＮａｌＨＰＯ＊−溶液、ｐＨ９，７を
加え、攪拌する。ゲルをアンドンの添加下にｌｖ＋＋Ｈ
ｇ及び２５℃で乾燥する。粉砕後、乾燥混合物あたりイ
ンシュリン含有率３．５％を検出することができる。

例８ ７．５％寒天−寒天−溶液を蒸留水４．５−中に寒天寒
天４５０Ｂを７０℃まで溶解して製造する。４０℃に冷
却された寒天−寒天−溶液の完全なゲル化直前に１００
０＃　ｌ　ＧｎＲＨ−溶液（蒸留水１−中にＧｎＲＨｌ
ｏｏｍｇ。

ｐＨ６、Ｏ）を加え、攪拌する。粉砕、次いで乾燥を行
う、得られたゲルは乾燥混合物に対してＧｎＲＨ割合１
３％を有する。

例９ セファデックスＧ１００１．８ｇ及び蒸留水７．２ｎ１
１を均一化し、２４時間放置する。その後インシュリン
溶液１　ｄ　＜２５０ｔ＠ｇ／　ｙｙｄｌ、０．２モル
／　ｌ　ＮａｚＨＰＯａ−溶液、ｐＨ９，７）を加え、
１時間十分に攪拌し、８時間放置する。次いで無水アセ
トン２０〇−中で沈殿させ、吸収濾取し、３６時間Ｐ２
０．によって一定の重量になるまで乾燥する（１ｏ＋ｍ
Ｈｇ、２５℃）。

１０１Ｂ／３．４ｍｇセファデックスを含有する、得ら
れたゲルを次の様に更に加工する： ロスポール４９．４１５ｇにラウロイルロイシン５０抛
ｇを４０℃で加え、インシュリン−セファデックス付加
物８５ｓ＋ｇを加え、鋳造して坐剤となす、　１０１ｆ
！／坐剤のインシュリン投薬で、血糖低下約５０％が生
じ、６．５時間後開始水準に達する。

生物学的実験結果 １、材料と方法 イエウサギ 試験は雄性の物堅代謝健康な、ドイツヒツジと交配され
たイエウサギ（生体重３．５−４．０ｋｇ）−チンチラ
で行う。この動物を通常のインシュリン敏感性について
予備試験する。

動物は試験開始前１８時間飼料、水なしで、しかし精力
剤（Ｉｉｂｉ　ｔｕｇ）を与えて保つ。飼育は、敷ワラ
なしの家庭用ワイヤー鳥かご中で１００ｇ標準ペレット
飼料／日及び２８℃＋／−２℃の温度で明暗の規制なく
行われる。特別な試験規定は東ドイツのＡＢを参照され
たい。

投与は頂部皮膚の皮下に行われる。試験グループにつき
動物１０匹を使用する。動物１０匹はコントロールグル
ープとする（グループ１）採血は耳静の穿孔術で行われ
る。ブドウ糖測定を、フエルモグノストテスト器機を用
いて実施する。

マウス排卵試験 生まれて３週間のマウスに０．５１Ｅ　ＰＭＳＧを与え
５３〜５４時間後、排卵誘発性皮下注射２本を行う。１
８〜１９時間後、殺害し、卵管中に存在する排卵された
卵細胞について顕微鏡検査する。

注射容ｌｌ：　　　　　　　夫々０．２−溶剤：　　　
　　　　　生理ＮａＣ１−溶液マウスの数／グリープ　
９〜１１ 平均有効量５０　（ＥＤ５０）の数学的算定はブロービ
ル（Ｐｒｏｂｉｌ）分析によって行われる。

２゜ ２．１ 血しょうブドウ糖−吸収時間特徴 例１に対する試験結果　１．試験動物；正常糖血症イエ
ウサギ ｔ　　　２０’　　　４０’　　　６０’　　　８０’
　　１２０’１８０゛ ２４０゜ ３００゛ ５８．６ ４９．３ ５２．３ ６５．８ ７８．４ ８４．３ ９２．７ ９０．９ ± ＳＸ １５．３ ９．７２　１１．１２　１５．７ １９．３ ２０．６３　１８．７７　１５．６９ ５５．３ ５２．９ ４４．７ ４５．２ ５３．７ ５６．５ ６７．２ ７６．８ ２　　± ＳＸ　　　１３．６２１１．５９１３．７２　９．３６
１４．８４１？、６１１４．３１：　５１Ｅインシュリ
ン−寒天−付加物　＋５％たん白−脂肪酸−縮合物を有
するゼラチン坐薬 ２：　例１に相当するゼラチン坐薬 １８．８ ２．２゜ 例２に対する試験結果、試験動物： イエウサギ 正常糖血症の （ ２０゜ ４０゜ ６０’ ８０゛ ２０ １８０゛ ２４０″ ３００゜ Ｘ　　６５．５　５０．５　５０．６　４６．７　６３
．５　　Ｂｏ、４　９１．５　８６．６± ＳＸ　　１９．５７１２．３４　９．０３１３．５７１
８．２０１？、６３１９．５Ｂ　１９．０３Ｘ　　６３
．４　５５．３　５０．３　４２．３　５１．９　５０
．３　５０．６　４７．９± ｓｘ　　１８．２Ｂ　１５．７３１２．８０１５．７０
１３．５０１６．８０１８．４０２０．３０１：５１ｔ
ｉ　　インシュリン−寒天 ラウロイルロイシン（１，２％） ２：　例２に相当する生薬 付加物及び７．５ｘｌＯ−’モル を有する吸収生薬 ２．３ 例３に対する試験結果、試験動物： 糖尿病のラット １０’ ２０’ ３０゜ ４０’ ５０’ ６０′ ８０゜ ８８．９３６５．３７５７．６８５２．６９４Ｂ、７３
５１．１９４６．２８１１．３２ １２．３２　１０．９ ８８．３３６７．００５５．５１ ９．０５　１０．７６　１２．１５　１０．０１４７．
８２４２．１６４４．１４３６．１５９．７２ １２．７７ １１．８８ １０．９２ ９．８２ ９．９７ ６．２９ １； ２： ｔ　　　１００’　　　１２０’　　１３５”　　１５
０°　　１８０°　　２１０Ｘ　　　５７．３７　？５
．５３８２．０３９１．５２　１１０．２７　１０３．
６２± ＳＸ　　１５．２６　１？、０２　１５．６Ｂ　　１９
．２５　２１．３４　２４．６３Ｘ　　　４１．６７３
８．５５４５．７１５４．８Ｂ　　５６．７１　５７．
６６± ＳＸ　　１Ｂ、５７１３．５３　１？、９５２５．５７
　２７．９６　２９．４０２．４１Ｂ　　インシュリン
−寒天−付加物／生薬＋７．５×１０−Ｓモル　Ｎ−チ
ウロイルロイシン（１，２％）例１しかし２．４１Ｂ　
　インシュリン−寒天−付加物／坐薬１−８ ２．４ 例４ に対する試験結果 ２０’ ４０’ ６０’ ０ １００’ １２０′ １８０″ ２４０′ ３００′ ３６０″ １００．５５ ８４．８２ ７２．５１ ７１、．６９ １７．３２　１３．２６　１２．４３　１４．５９１５
．０８　１０．８８　１０．９１　１１．３７　１４．
０１　１２．０３８２．５６６８．３２６２．３１　５
８．９２５７．３２６３．２５　＆７．７９６９．０８
７８．９２９２．１８１２．４６ １４．０１ １１．０１ ８．９６ １０．３２ １５．７７ １４．３２ ］、０．７７ １５．６１ １２．３１ ５１Ｅインシユリン／坐剤及び 縮合物を有するゼラチン生薬 ２：　例４に相当するゼラチン生薬 １： ５％たん白−脂肪酸− ２，５ 例８ グループ （ｎｇ）　　　２．６ ２６．８５ Ｒ％ ＥＤ　　５０ に対する試験結果− マウス排卵試験 ５．９　１３．２ １０　　１０ ２ 　　２０ ＋／−８，７７ 生殖腺−注射 ３ ２９゜６ １ ０ ９０．９１ ６６．７ １ ０ ９０．９１ グループ ■ Ｘ　　（ｎｇ）　　　　１．７ ３　　　　　　　１０ ８ Ｒ％　　　　　８０ ＥＤ　５０２．７１　＋　／ 生殖腺−注射 ２　３　４ ２．６　　３．９　　５．９ １０　　　１０　　　１０ ８　　　９　　　９ ８０　　　９０　　　９０ ８．０６ 最初の試験で、コントロールグループに於ては２６．８
５ｎｇのＨＤｓｏ、試験グループに於ては２．７１ｎｇ
のＥＤＳ、を測定した。したがって排卵放出に必要な投
薬量は、！／１０力価低い。

３、　例１〜４の表面積の比較 （表１） 表１：　ＡＵＣ：　（表面積）例１〜３のブドウ１１！
（ｎｕ＋＋） くヤＬす林式！＆鵜！ 例 比較調剤 による ＡＵＣ：　　（ｍｍ） 本発明による　％作用増加率 １　　　　３７２１　　　　　　　６９１８　　　　　
　　　８５２　　　　４６４３　　　　　　　８０９４
　　　　　　　７５３　　　　３０３４　　　　　　　
５７４０　　　　　　　　９０４　　　　２２３８　　
　　　　　５３１９　　　　　　　１３８

【図面の簡単な説明】

第１図〜第４図は、本発明によるペプチド薬剤の試験結
果を示す図である。第１図は例１に対する試験結果、第
２図は例２に対する試験結果、第３図は例３に対する試
験結果及び第４図は例４に対する試験結果である。 ２：　ＪＰＩＩ　１’、オ百当するπ゛ラテシ４目第２
図 第３図 介（１２ｒ−ぢ１ろ該轡騨 臂１１３にナテする吉截＾峻掴り１ 今１２１ぐ相当？るロスボールタ民１

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）ペプチドが高分子担体に固定された公知の処置体を
   吸収媒体と並びにプロテアーゼ阻害剤と抗菌性有効物質
   との及び他の通常の担体及び助剤との混合物と共に薬剤
   形に加工することを特徴とする、直腸及び膣適用のため
   の、生物学的に活性なペプチド薬剤を製造する方法。 ２）生物学的に活性なペプチドとしてインシュリン、Ｇ
   ｎＲＨ及び−同族体、物質Ｐ及びその誘導体並びに部分
   配列及び他の合成されたオリゴペプチド、たとえばチム
   スペプチド、また微生物学的に製造されたペプチド、た
   とえばシクロスポリンを使用する請求項１記載の方法。 ３）高分子担体としてポリアミノ酸、寒天−寒天、デキ
   ストリン、セフアデックス及びアガロースを使用する請
   求項１又は２記載の方法。 ４）吸収媒体としてアニオン性アミノ酸、ペプチド−又
   はたん白−脂肪酸−縮合物を使用する請求項１ないし３
   のいずれかに記載した方法。 ５）プロテアーゼ阻害剤として天然に又は合成法で得ら
   れた物質、たとえばアプロチニン又はＥＡＣを使用する
   請求項１ないし４のいずれかに記載した方法。 ６）抗菌性有効物質として保存剤又は嫌気性細菌に作用
   する化学療法剤を使用する請求項１ないし５のいずれか
   に記載した方法。 ７）投与形として坐剤、丸剤、カプセル又は溶液及び懸
   濁液を製造する請求項１ないし６のいずれかに記載した
   方法。 ８）投与形を親油性又は親水性形で製造する請求項１な
   いし７のいずれかに記載した方法。 ９）ペプチドを高分子担体に固定し、これを吸収媒体で
   並びにプロテアーゼ阻害剤と抗菌性有効物質との混合物
   及び他の通常の担体及び助剤と共に加工することを特徴
   とする、直腸及び膣適用のための、生物学的に活性なペ
   プチド薬剤。 １０）生物学的に活性なペプチドとしてインシュリン、
   ＧｎＲＨ及び−同族体、物質Ｐ及びその誘導体並びに部
   分配列及び他の合成されたオリゴペプチド、たとえばチ
   ムスペプチド、また微生物学的に製造されたペプチド、
   たとえばシクロスポリンを使用する請求項９記載の薬剤
   。 １１）吸収媒体としてアニオン性アミノ酸−、ペプチド
   −又はたん白−脂肪酸−縮合物を、プロテアーゼ阻害剤
   として天然に又は合成法で得られた物質、たとえばアプ
   ロチニン又はＥＡＣを、抗菌性有効物質として保存剤又
   は嫌気性細菌に作用する化学療法剤を使用する請求項９
   又は１０に記載した薬剤。 １２）高分子担体としてポリアミノ酸、寒天−寒天、デ
   キストリン、セフアデックス及びアガロースを使用する
   請求項９ないし１１のいずれかに記載した薬剤。