EA012982B1 - Стабилизированная фармацевтическая композиция лейкотриен в(ltb) агента - Google Patents

Abstract

Данное изобретение касается новой фармацевтической композиции, включающей LTBагент при щелочной рН, эффективной для стабилизации LTBагента, и представляет композицию с повышенным сроком годности. Композиция по данному изобретению имеет повышенный срок годности, предпочтительно по меньшей мере 24 месяца.

Description

Данное изобретение касается новой фармацевтической композиции ЬТВ₄ агента со щелочной рН, эффективной для стабилизации ЬТВ₄ агента и обеспечения повышенного срока годности композиции.

Таким образом, данное изобретение касается композиции, включающей ЬТВ₄ агент и фармацевтически приемлемый носитель при щелочной рН.

Описание известного уровня техники

Лейкотриен В₄ представляет собой тетраненасыщенную жирную кислоту с двадцатью атомами углерода и является относительно нестабильной молекулой. Изотонические водные растворы ЬТВ₄ при рН 7,0-7,6, которые приемлемы для введения людям и животным, стабильны только короткие периоды времени (от недель до месяцев), если хранятся при температурном диапазоне от 2 до 25°С (и выше 25°С). Фактически ЬТВ₄ агенты подвергаются окислению, изомеризации двойных связей (ЬТВ₄ содержит две С18 и две 1гаи8 двойные связи), рацемизации (ЬТВ₄ содержит два хиральных центра), этерификации (ЬТВ₄ содержит карбоксильную группу), лактонизации в числе возможных различных структуральных перестроек.

Несмотря на то что ЬТВ₄ агенты широко применяются в фармацевтике, их применение как терапевтических агентов для животных или людей проблематично из-за их недостаточной стабильности и срока годности в растворе при температурах от 2 до 25°С.

В научной литературе указывается, что до настоящего времени композиции ЬТВ₄ для введения людям и животным представляют собой водные растворы при рН 7,0-7,5, которые хранятся при очень низких температурах (-20°С или ниже) во избежание разложения. Альтернативно, ЬТВ₄ применяют в форме растворов в этаноле, которые также хранятся при низкой температуре во избежание разложения, которые разбавляют буфером (рН 7,0-7,5) или выпаривают досуха и заново растворяют в буфере (рН 7,0-7,5) непосредственно перед применением. Такие композиции не отвечают требованиям для применения ЬТВ₄ в качестве терапевтического агента для людей и животных (нецелесообразны и имеют короткий срок годности).

Учитывая потенциал ЬТВ₄ агентов как терапевтических агентов для профилактики и лечения инфекций и рака у людей и животных, было бы желательно получение новой фармацевтической композиции ЬТВ₄ агента, действующей в щелочной рН для стабилизации ЬТВ₄ агента, и получение композиции с повышенным сроком годности.

Краткое описание данного изобретения

Одной из целей данного изобретения является получение новой фармацевтической композиции ЬТВ₄ агента, действующей в щелочной рН для стабилизации ЬТВ₄ агента, и получение композиции с повышенным сроком годности.

Согласно одному варианту осуществления данного изобретения представлена фармацевтическая композиция ЬТВ₄ агента, включающая терапевтически эффективное количество ЬТВ₄ агента, его соли, его сложного эфира или его эфира вместе с фармацевтически приемлемым носителем при щелочной рН, эффективной для стабилизации ЬТВ₄ агента, что таким образом повышает срок годности композиции. Таким образом, данное изобретение касается композиции, включающей ЬТВ₄ агент, его соль, его сложный эфир или его эфир и фармацевтически приемлемый носитель при щелочной рН.

Согласно другому варианту осуществления данного изобретения предпочтительная щелочная рН изменяется от 7,1 до 14, более предпочтительно от 7,5 до 10,5. Предпочтительно рН составляет более 7,6, более предпочтительно от 7,7 до 11,5. Еще более предпочтительно рН составляет более 8,1, например от 8,2 и 14, особенно от 8,5 и 12,5, например от 8,5 и 11,5, наиболее предпочтительно от 9,5 и 11,5, например около 9,5, 9,6, 9,7, 9,8, 9,9, 10,0, 10,1, 10,2, 10,3, 10,4, 10,5, 10,6, 10,7, 10,8, 10,9, 11,0, 11,1, 11,2, 11,3, 11,4 или 11,5. В другом предпочтительном варианте осуществления предпочтительно щелочная рН изменяется от 8,0 до 9,0, от 8,5 до 9,5, от 9,0 до 10,0, от 9,5 до 10,5 или от 10,0 до 11,5.

В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция ЬТВ₄ агента включает терапевтически эффективное количество ЬТВ₄ агента вместе с фармацевтически приемлемым носителем, реагирующим в щелочной среде. Данная заявка описывает вариант осуществления, касающийся фармацевтически приемлемого носителя при щелочной рН, эффективной для стабилизации рассматриваемой фармацевтической композиции, этот вариант осуществления также включает фармацевтически приемлемый носитель, реагирующий в щелочной среде.

Согласно следующему варианту осуществления данного изобретения носитель представляет собой водный носитель.

Согласно другому варианту осуществления данного изобретения носитель является твердой частицей, покрытой щелочной матрицей, или представляет собой щелочную матрицу, или может быть выбран из группы, включающей органические растворители или их смесь и воду.

Согласно следующему варианту осуществления данного изобретения стабилизированная композиция включает воду и по меньшей мере 50% (объем/объем), предпочтительно по меньшей мере 60% (объем/объем), более предпочтительно по меньшей мере 70% (объем/объем), например около 75% (объем/объем), особенно по меньшей мере 80% (объем/объем) сорастворителя. В особом варианте осуществления данного изобретения стабилизированная композиция включает воду и 1-49% сорастворителя или

- 1 012982 воду и 50-99% сорастворителя. Указанный сорастворитель может быть выбран из группы, включающей этанол, пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, изопропиловый спирт, бензиловый спирт, пропандиол, глицерол, гликофурол, диметилсульфоксид, диметилацетамид и их смеси. В особом варианте осуществления данного изобретения стабилизированная композиция включает по меньшей мере 90% (объем/объем) указанного сорастворителя.

Согласно другому варианту осуществления данного изобретения композиция находится в жидкой форме, или лиофилизированной форме, или в кристаллической форме, или в твердой аморфной форме, предпочтительно в жидкой форме или в лиофилизированной форме.

Согласно следующему варианту осуществления данного изобретения водный носитель выбран из группы, включающей воду, растворы гидроксидов щелочных металлов, например, раствор гидроксида натрия, буферные солевые растворы, например, фосфатно-буферный солевой раствор (РВ8), водный раствор, содержащий сорастворители, например водный раствор, содержащий спирт, растворы сахаров или их смесь. Указанный водный раствор, содержащий сорастворитель, обычно содержит от около 1 до около 49% (объем/объем) сорастворителя.

Согласно другому варианту осуществления данного изобретения сорастворитель, содержащийся в водном растворе, выбран из группы, включающей этанол, пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, изопропиловый спирт, бензиловый спирт, пропандиол, глицерол, гликофурол, диметилсульфоксид, диметилацетамид и их смеси.

Согласно следующему варианту осуществления данного изобретения композиция стабилизирована при температуре, изменяющейся от -25 до 45°С, предпочтительно от 0 до 40°С, например 2-35°С, особенно 5-25°С, если носитель является водным носителем, а композиция находится в жидкой форме, и при температуре, изменяющейся от -25 до 45°С, предпочтительно от -20 до 40°С, более предпочтительно -10-30°С, особенно 0-20°С, наиболее предпочтительно 0-10°С, если носитель является органическим носителем, например носитель, содержащий спирт, или композиция находится в лиофилизированной форме. Другими наиболее предпочтительными температурными диапазонами, если носитель является органическим носителем, например носитель, содержащий спирт, или композиция находится в лиофилизированной форме, являются -20-0°С, например -10-0°С, или 20-40°С, например 20-30°С.

Согласно другому варианту осуществления данного изобретения композиция дополнительно включает хелатообразующий агент или фармацевтически приемлемую соль хелатообразующего агента в количестве, эффективном для стабилизации ЬТВ₄ агента.

Предпочтительные хелатообразующие агенты согласно другому варианту осуществления данного изобретения включают, без ограничения, следующие:

аминополикарбоксильную кислоту, этилендиаминтетрауксусную кислоту (ΕΌΤΛ), диэтилентраминрентауксусную кислоту (ΌΤΡΆ), нитрилотриуксусную кислоту (ΝΤΑ), глутаминовую кислоту и аспарагиновую кислоту, этиленгликольтетрауксусную кислоту (ЕСТА) и диэтилтриаминпентауксусную (ΌΤΡΑ).

Согласно следующему варианту осуществления данного изобретения фармацевтически приемлемая соль может быть выбрана из группы, содержащей соли ионов натрия и калия.

Согласно частному варианту осуществления данного изобретения стабилизированная композиция может также быть стабилизированной в лиофилизированной форме с помощью включения в композицию человеческого сывороточного альбумина (Н8А).

Согласно следующему варианту осуществления данного изобретения хелатообразующий агент присутствует в количествах от около 0,001 до около 1,0% по весу композиции ЬТВ₄ агента, более предпочтительно хелатообразующий агент присутствует в количествах от около 0,01 до около 40% по весу композиции ЬТВ₄ агента.

Предпочтительные ЬТВ₄ агенты согласно данному изобретению включают, без ограничения, следующее:

- 2 012982 • лейкотриен В₄ [58,12К.-дигидрокси-6,8,10,14(7,Е,Е,г)- эйкозантетраэноевая кислота] ('ΈΤΒ₄χ • ЬТВ₄, 14,15-дигидро-ЬТВ₄ (ЬТВ₃”), 17,18-дегидро-ЬТВ₄ (’ЪТВ₅), 19гидрокси-ЬТВ₄, 20-гидрокси-ЬТВ₄ и 5(8)гидроперокси и их 5-деокси аналоги, • 5(К)-гидрокси и 5(К)-гидроперокси аналоги ЬТВ₄ агента, • лейкотриен А₄ (ЬТА₄), 14,15-дигидро-ЬТА₄ (ЕТА₃) и 17,18- дегидро-ЕТАд (ЬТА₅), • 14,15-дигидро-ЬТА₄ метиловый эфир и ЬТВ₄ метиловый эфир, • 5(8)-гидрокси-6,8,11,14(Е,г,7,7)-эйкозантетраэноевую кислоту (5-

НЕТЕ), 14,15-дигидро-5-НЕТЕ, 17,18-дегидро-5-НЕТЕ и их 5(К.)гидрокси, 5(8)-гидроперокси, 5(К)-гидроперокси аналоги, • лейкотриены С₄ и ϋ₄ и 14,15-дигидро или их 17,18-дегидро аналоги;

Ν-ацил или Ν-алкил производные лейкотриенов С₄ и ϋ₄ и их 14,15дигидро или 17,18-дегидро аналоги, • 5,12-дигидрокси-6,8,10,14-эйкозантетраэноевую кислоту, 5-гидрокси-

6,8,11,14-эйкозантетраэноевую кислоту и их изомеры, • 20,20,20-трифторметил-ЬТВ4; 19-метил-БТВ4, 19,19-диметил-ЬТВ4,

19-фтор-ЬТВ₄, 19,19-дифтор-ЬТВ₄, 18,20-дифтор-ЬТВ₄ и 20-фторЬТВ„

4’ • 3-тио-ЬТВ₄, 3-гидрокси-ЬТВ₄, 3-метил-ЬТВ₄, 3,3-диметил-ЬТВ₄, 3- фтор-ЬТВ₄, 3,3-дифтор-ЬТВ₄ и 2,3-дифтор-ЬТВ₄, ЬТВ₄ метилсульфониламид, ЬТВ₄ метиламид, 1-тетразоль ЬТВ₄, и • их соль, их производное простого эфира и их производное сложного эфира.

Особенно предпочтительно БТВ₄ агенты согласно данному изобретению выбраны из группы, включающей БТВ₄, БТВ₃, БТВ₅, 20-гидрокси-БТВ₄, 20,20,20-трифторметил-БТВ₄, 19-гидрокси-БТВ₄, 18гидрокси-БТВ₄, 3-гидрокси-БТВ₄, 2-гидрокси-БТВ₄, 4-гидрокси-БТВ₄, их 5-деокси аналоги и соли, их простые или сложные эфиры.

Еще более предпочтительно БТВ₄ агенты согласно данному изобретению выбраны из группы, включающей БТВ₄, БТВ₃, БТВ₅, 20-гидрокси-БТВ₄, 20,20,20-трифторметил-БТВ₄, 3-гидрокси-БТВ₄, их 5деокси аналоги и соли, их простые или сложные эфиры.

БТВ₄ агент предпочтительно присутствует в количествах от около 0,1 мкг/мл до 25 мг/мл композиции, предпочтительно от 1 мкг/мл до 25 мг/мл композиции, более предпочтительно от около 1 мкг/мл до 1 мг/мл композиции.

Краткое описание графических материалов

Фиг. 1 показывает, что хелатообразующий агент БОТА усиливает стабильность водного раствора Να соли БТВ₄ при рН 7,4.

Фиг. 2 показывает влияние концентрации БТВ₄ на стабильность водных растворов Να соли БТВ₄.

Фиг. 3 показывает влияние рН (фосфат/глициновый буфер) на стабильность водного раствора Να соли БТВ₄ при 1,75 мг/мл.

Фиг. 4 показывает влияние рН (фосфатный буфер) на стабильность водных растворов Να соли БТВ₄ при 17,5 мкг/мл.

Фиг. 5 показывает влияние различных буферных крепостей (фосфат/глициновый буфер) на стабильность водных растворов Να соли БТВ₄.

Фиг. 6 показывает, что человеческий сывороточный альбумин (И8А) или/и щелочная рН (фосфатный буфер) усиливает стабильность водных лиофилизированных растворов (содержащих маннит) Να соли БТВ₄.

Фиг. 7 показывает, что щелочная рН (фосфат/глициновый буфер) усиливает стабильность растворов

- 3 012982 в этаноле (95/5, этанол/вода и 75/25, этанол/буфер, объем/объем) ЬТВ₄ (кислотная форма и Να соль).

Фиг. 8 показывает, что щелочная рН (фосфат/глициновый буфер) усиливает стабильность различных ЬТВ₄ агентов в растворе.

Фиг. 9 дополнительно показывает, что щелочная рН (фосфат/глициновый буфер) усиливает стабильность различных ЬТВ₄ агентов в растворе.

Фиг. 10 показывает, что ЬТВ₄ стабилизирован в широком диапазоне щелочной рН и что высокую рН нужно поднять для обеспечения стабильности.

Фиг. 11 показывает эффективное поглощение ЬТВ₄ на модели крысы при введении в тонкую кишку и сравнение с внутривенным и подкожным введением.

Детальное описание даного изобретения

Стабильность водных растворов ЬТВ₄ анализировали при различных экспериментальных условиях. Выяснили, что: 1) стабильность ЬТВ₄ растворов значительно повышалась при щелочной рН; и что 2) хелатообразующие агенты, например БОТА, способствовали стабильности ЬТВ₄ растворов. Положительный эффект щелочной рН на стабильность ЬТВ₄ раствора наблюдали при применении или фосфатного буфера, или глицинового буфера; положительный эффект щелочной рН на стабильность ЬТВ₄ раствора наблюдали при всех концентрациях анализируемого лекарственного средства (17,5 мкг/мл - 17,5мг/мл) и при всех анализируемых температурах (4 и 40°С).

Выражение повышенный срок годности в контексте данного изобретения означает расширение стабильности ЬТВ₄ агентов в композициях по данному изобретению по сравнению с композициями ЬТВ₄ агентов, не включающих фактор рН, как описано выше, и/или хелатообразующих агентов, как описано выше. Временной период стабильности ЬТВ₄ агентов в композициях данного изобретения по сравнению с композициями ЬТВ₄ агентов, не включающих фактор рН, как описано выше, и/или хелатообразующих агентов, как описано выше, составляет, в зависимости от температуры, примесей и концентрации ЬТВ₄ агентов, предпочтительно более, по меньшей мере, недели, например по меньшей мере две, три или четыре недели, более предпочтительно по меньшей мере два, три или четыре месяца, особенно по меньшей мере шесть, девять или двенадцать месяцев, например по меньшей мере 24 или 48 месяцев.

Ссылку на период времени стабильности ЬТВ₄ агентов в композициях нужно понимать как период времени, когда уровень включений меньше чем 10%, предпочтительно меньше чем 6%, наиболее предпочтительно меньше чем 5%, например меньше чем 4, 3, 2 или 1%.

Выражение включения в контексте данного изобретения нужно понимать как продукты распада ЬТВ₄ агента, который измеряется обратно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографией (НРЬС) и ультрафиолетовой (ИУ) фотометрией при 270 нм. Таким образом, чем выше уровень включений, тем ниже стабильность композиции ЬТВ₄ агента. В данном описании в примерах и фигурах уровень включений выражается как процент пиковой площади включений по отношению к пиковой площади ЬТВ₄, измеренной с помощью ИУ фотометрии при 270 нм. В примерах и фигурах, имеющих к ним отношение, уровень включений можно выразить как процент общей площади под кривой при 270 нм. Используемое определение будет понятным из контекста примеров.

Выражение их соли нужно понимать как фармацевтически приемлемые основно-аддитивные соли, получаемые обработкой кислотной функциональной группы, например, карбоновой кислоты, соответствующими основаниями, такими как неорганические основания, например гидроксиды щелочных металлов; обычно гидроксид натрия или калия; карбонаты щелочных металлов; обычно карбонат или гидрокарбонат натрия или калия; гидроксиды щелочно-земельных металлов; обычно гидроксид кальция или магния; карбонаты щелочно-земельных металлов; обычно карбонат или гидрокарбонат кальция или магния; или аммония; или органические основания, например первичные, вторичные или третичные амины, алкоголяты щелочных или щелочно-земельных металлов, например метанолат натрия, этанолат натрия или этанолат калия. Предпочтительными солями данного изобретения являются основноаддитивные соли с гидроксидом натрия или калия.

Выражение их сложные эфиры нужно понимать как фармацевтически приемлемые сложные эфиры, получаемые обработкой функциональной группы кислотной формы или формы производного кислоты каким-либо типичным этерифицирующим агентом, известным специалисту в данной области. В контексте данного изобретения сложные эфиры описанных ЬТВ₄ агентов представляют собой предпочтительно С_1-6 алкильные эфиры, например метиловый эфир, этиловый эфир, η-пропиловый эфир, 1пропиловый эфир, η-бутиловый эфир, ί-бутиловый эфир, 8-бутиловый эфир, ΐ-бутиловый эфир, ηпентиловый эфир, ί-пентиловый эфир, 8-пентиловый эфир, неопентиловый эфир и η-гексиловый эфир. Сложные эфиры описанных ЬТВ₄ агентов могут также представлять собой внутримолекулярные сложные эфиры, то есть лактоны, образованные внутримолекулярной этерификацией, например 5-гидрокси группы с карбоксильной группой.

Выражение их простые эфиры нужно понимать как фармацевтически приемлемые простые эфиры, получаемые обработкой функциональной группы спиртовой формы или формы производного спирта каким-либо обычным этерифицирующим агентом, известным специалисту в данной области. В контексте данного изобретения простыми эфирами описанных ЬТВ₄ агентов являются предпочтительно С_1-6 алкильные простые эфиры, например метиловый простой эфир, этиловый простой эфир, η-пропиловый

- 4 012982 простой эфир, ί-пропиловый простой эфир, η-бутиловый простой эфир, ί-бутиловый простой эфир, 8бутиловый простой эфир, ΐ-бутиловый простой эфир, η-пентиловый простой эфир, ί-пентиловый простой эфир, 8-пентиловый простой эфир, неопентиловый простой эфир и п-гексиловый простой эфир.

ЬТВ₄ агенты

Лейкотриен В₄ (ЬТВ₄) агент по данному изобретению является или ЬТВ₄, или определенными структурально родственными полиненасыщенными жирными кислотами, которые отвечают их биологической активности. Они представляют собой или вещества природного происхождения, или аналоги таких веществ природного происхождения. Все ЬТВ₄ агенты можно получить химическим синтезом с помощью методов, описанных в литературе, и большинство из них являются коммерчески доступными.

Применяемое в данном описание выражение ЬТВ₄ агент означает одну или более следующую полиненасыщенную жирную кислоту, которая в дополнение к собственно ЬТВ₄ является аналогом ЬТВ₄ или предшественником или метаболитом ЬТВ₄ или ЬТВ₄ аналогом: ЬТВ₄, 14,15-дигидро-ЬТВ₄, 17,18дегидро-ЬТВ₄, 19-гидрокси-ЬТВ₄, 20-гидрокси-ЬТВ₄ и их 5(В)-гидрокси, 5(8)гидроперокси, 5(В)гидроперокси и 5-деокси аналоги; ЬТЛ₄; 14,15-дигидро-ЬТЛ₄, 17,18-дегидро-ЬТЛ₄; 14,15-дигидро-ЬТВ₄ метиловый сложный эфир, ЬТЛ₄ метиловый сложный эфир, 5(8)-гидрокси-6,8,11,14(Е,2,2,2)эйкозантетраэноевая кислота (5-НЕТЕ), 14,15-дигидро-5-НЕТЕ, 17,18-дегидро-5-НЕТЕ и их 5(В)гидрокси, 5(8)-гидроперокси, 5(В)-гидроперокси аналоги.

Выражение ЬТВ₄ агент также включает другие производные полиненасыщенных жирных кислот: лейкотриены С4 и Ό4 и их 14,15-дигидро или 17,18-дегидро аналоги; Ν-ацильные или Ν-алкильные производные лейкотриенов С4 и Ό4 и их 14,15-дигидро или 17,18-дегидро аналоги; все изомерные 5,12дигидрокси-6,8,10,14-эйкозантетраэноевые кислоты и 5-гидрокси-6,8,11,14-эйкозантетраэноевые кислоты.

Выражение ЬТВ₄ также включает варианты, которые представляют собой нековалентно модифицированные жирные кислоты, например натриевую или калиевую соли ЬТВ₄ агентов.

Выражение ЬТВ₄ агент также включает варианты, при которых модификацию вводят в молекулу с помощью реагирующих целевых функциональных групп жирной кислоты с органическим дериватизирующим агентом, который способен реагировать с выбранной функциональной группой (что дает, например, производные сложных или простых эфиров ЬТВ₄ агента) или вызывать внутримолекулярную перегруппировку (например, образование лактонов с гидроксилированными жирными кислотами). Образованные соединения могут изменять биологическую активность и/или биодоступность. Таким образом, ковалентно модифицированная жирная кислота может быть пролекарством со сниженной биологической активностью, которое при ίη νίνο введении медленно трансформируется в более активную молекулу (недериватизированный ЬТВ₄ агент). Вариантами также могут быть метаболически стабильные и биологически активные аналоги ЬТВ₄ агентов, изменение которых приводит к замедленному распределению соединения (пониженный метаболизм и/или элиминация). Варианты с модификациями на омега-конце (например, 20,20,20-трифторметил-ЬТВ₄) проявляют повышенную устойчивость к омега-окислению (катаболический процесс ненасыщенных жирных кислот); другие варианты с модификацией на омега-конце с 13-20 атомами углерода (например, 19-метил-ЬТВ₄, или 19,19-диметил-ЬТВ₄, или 19-фтор-ЬТВ₄, или 19,19-дифтор-ЬТВ₄, или 18,20-дифтор-ЬТВ₄, или 20-фтор-ЬТВ₄) могут проявлять повышенную устойчивость к омега-окислению, а варианты с модификациями на карбоксильном конце с числом атомов углерода 1, 2, 3 или 4 (например, 3-тио-ЬТВ₄, 3-гидрокси-ЬТВ₄, 3-метил-ЬТВ₄, или 3,3-диметил-ЬТВ₄, или 3фтор-ЬТВ₄, или 3,3-дифтор-ЬТВ₄, или 2,3-дифтор-ЬТВ₄, ЬТВ₄ метилсульфониламид, ЬТВ₄ метиламид, 1тетразоль ЬТВ₄) могут проявлять повышенную метаболическую устойчивость к бета-окислению и/или к элиминации (например, включение в чувствительный к пробенециду переносчик органических кислот). Другие варианты с модификацией(ями) с 12 атомами углерода, например 12(В)-метил-ЬТВ₄, могут проявлять повышенную устойчивость к сокращению 11,12 двойных связей (метаболический путь ЬТВ₄). Другими вариантами являются аналоги ЬТВ₄ агентов со структуральными изменениями, например изменениями в длине цепи (длина цепи повышается или понижается вплоть до 4 углеродов), добавлениями двойной связи(ей), насыщениями двойной связи(ей), изменениями в двойной связи(ей) геометрии (с18 на 1гап8 или наоборот), изменением двойной связи(ей) на тройную связь(и), изменением в конфигурации одной или нескольких функциональных групп (В на 8 или 8 на В), или где одна или несколько функциональных групп или заместителей или удалены, добавлены или заменены на другие функциональные группы или заместители (включая, но не ограничиваясь, гидропероксил, карбонил, сульфгидрил, сульфоксид, сульфон, цистеинил, глютатионил, цистеинил-глицин, метил, изопропил, бензил, хлоро, фторо), или где положения одной или нескольких функциональных групп и/или одной или нескольких двойных связей сдвинуты на один, два или три углерода по отношению к омега-концу. ЬТВ₄ агентом может быть вариант, имеющий одну или несколько вышеупомянутых структуральных модификаций.

Выражение композиция ЬТВ₄ агента также включает композиции соединений, которые могут содержать смесь двух или нескольких ЬТВ₄ агентов или ЬТВ₄ агента и одной или нескольких одинаково или менее активного изомера(ов) ЬТВ₄ агента (позиционных, геометрических или оптических изомеров).

Инфекции

Инфекциями, которые можно лечить ЬТВ₄ агентами по данному изобретению, являются инфекции,

- 5 012982 вызванные микробными патогенами человека и/или животных. Более того, рассматривается предупреждение или профилактика инфекций и стимулирование нейтрофильной функции композициями или композициями ЬТВ₄ по данному изобретению.

Выражение микробные патогены человека и/или животных включает, без ограничения, ДНК и

РНК вирусы, в общем, и Вебоушбае, бактерии, грибы и паразиты.

Диапазоны доз

Терапевтически эффективное количество ЬТВ₄ агента для введения будет варьировать в зависимости от данного применяемого ЬТВ₄ агента, типа или способа введения, одновременного применения других активных соединений, возраста и размера пациента, типа, серьезности и распространенности инфекции, отзывов отдельных пациентов и т.п. В случае ЬТВ₄ его можно вводить в достаточных дозах для получения эффективной пиковой или стабилизированной концентрации от около 0,1 нМ до 10 мкМ, предпочтительно от 0,1 до 1000 нМ, более предпочтительно от около 0,25 нМ до 2,5 мкМ, например от 0,25 до 25 нМ. Эффективное дозированное количество ЬТВ₄ агента можно определить клинически после рассмотрения всех вышеупомянутых критериев. В случае агентов ЬТВ₄, кроме ЬТВ₄, которые обладают разной биологической активностью, необходимая эффективная пиковая или стабильная концентрация может быть различной, например до 25 мкМ, такой как до 10 мкМ. Дозированное количество агента, необходимое для получения желательных концентраций в крови, можно определить фармакокинетическими исследованиями, как описано у Маг1еаи с1 а1., 1. 1ттипо1. 150: 206, 1993, алб Маг1еаи с1 а1., Вг. 1. Рйагтасо1. 112: 654, 1994.

Р^Н

Выражение щелочная рН включает щелочную рН от 7,1 до 14, которая эффективна при стабилизации ЬТВ₄ агента в водных или органических растворах или в твердой или лиофилизированной композиции по данному изобретению. Предпочтительные диапазоны щелочной рН составляют от 8,2 до 14, особенно от 8,5 и 12,5, например от 8,5 и 11,5, наиболее предпочтительно от 9,5 и 11,5, например около

9.5, 9,6, 9,7, 9,8, 9,9, 10,0, 10,1, 10,2, 10,3, 10,4, 10,5, 10,6, 10,7, 10,8, 10,9, 11,0, 11,1, 11,2, 11,3, 11,4 или

11.5. В другом предпочтительном варианте осуществления предпочтительная щелочная рН изменяется от 8,5 до 9,5, от 9,0 до 10,0, от 9,5 до 10,5 или от 10,0 до 11,5.

Выражение щелочной реагирующий носитель включает другое инертное, фармацевтически приемлемое вещество (или вещества), которое в случае стабилизированной композиции ЬТВ₄, находящейся в лиофилизированной, кристаллической или твердой аморфной форме, если вода адсорбирована частицами смеси, или если вода добавлена к смеси в небольших количествах, создает щелочную микро-рН от 8,2 до 14, особенно от 8,5 до 12,5, например от 8,5 до 11,5, наиболее предпочтительно от 9,5 до 11,5, например около 9,5, 9,6, 9,7, 9,8, 9,9, 10,0, 10,1, 10,2, 10,3, 10,4, 10,5, 10,6, 10,7, 10,8, 10,9, 11,0, 11,1, 11,2, 11,3, 11,4 или 11,5, вокруг каждой частицы ЬТВ₄. В следующем предпочтительном варианте осуществления щелочная микро-рН изменяется от 8,0 до 9,0, от 8,5 до 9,5, от 9,0 до 10,0 или от 10,0 до 11,5. Такие вещества, создающие указанную микро-рН, можно выбрать, не ограничиваясь, из веществ, например, натриевой, калиевой, кальциевой, магниевой и алюминиевой соли фосфорной кислоты, карбоновой кислоты, лимонной кислоты или других приемлемых слабых неорганических или органических кислот; веществ, обычно применяемых в антацидных препаратах, например, гидроксидов алюминия, кальция и магния; оксида магния или композитных веществ, например, А1₂О₃-6МдО-СО₂-12Н₂О, (Мд₆А1₂(ОН)₁₆СО₃-4Н₂О), МдО-А1₂О₃-2Б1О₂-лН₂О или подобных соединений; органических рН-буферных веществ, например тригидроксиметиламинометан или других подобных, фармацевтически приемлемых рН-буферных веществ.

Фармацевтически приемлемые носители

Выражение фармацевтически приемлемый носитель включает какой-либо носитель, например какой-либо водный носитель, приемлемый для физиологического и фармацевтического применения. Такой носитель выбран из группы, включающей воду, буферные солевые растворы, например фосфатнобуферный солевой раствор (РВБ), или раствор хлорида натрия, забуференный агентами, такими как Тп§, глицин или другие аминокислоты, в частности основные аминокислоты, водный раствор, содержащий спирт, например этанол, пропиленгликоль, пропандиол, глицерол или маннит, а также растворы сахаров, например растворы глюкозы или лактозы или смесь различных упомянутых растворителей. Более того, выражение фармацевтически приемлемый носитель может включать инертные разжижители или наполнители, например сахарозу, сорбитол, сахар, маннит, микрокристаллическую целлюлозу, крахмалы, включая картофельный крахмал, карбонат кальция, хлорид натрия, лактозу, фосфат кальция, сульфат кальция или фосфат натрия; гранулирующие и дезинтегрирующие агенты, например производные целлюлозы, включая микрокристаллическую целлюлозу, крахмалы, включая картофельный крахмал, кроскармеллозу натрия, альгинаты или альгиновую кислоту; связывающие агенты, например сахарозу, глюкозу, сорбитол, акациевую камедь, альгиновую кислоту, натрия альгинат, желатин, крахмал, пептизированный крахмал, микрокристаллическую целлюлозу, магния алюминия силикат, карбоксиметилцеллюлозу натрия, метилцеллюлозу, гидроксипропилметилцеллюлозу, этилцеллюлозу, поливинилпирролидон или полиэтиленгликоль; и смазывающие агенты, включая глиданты и антиадгезивы, например стеарат

- 6 012982 магния, стеарат цинка, стеариновую кислоту, кремнезем, гидрогенированные растительные масла или тальк.

В частном варианте осуществления данного изобретения выражение фармацевтически приемлемый носитель включает только нетоксичные вещества. В предпочтительном варианте осуществления данного изобретения выражение фармацевтически приемлемый носитель не включают ацетонитрил.

Выражение токсический имеет значение, хорошо известное специалисту в данной области, более детально в контексте композиций по данному изобретению токсическое вещество представляет собой вещество, которое, количественно присутствуя в композициях по данному изобретению, может снижать функциональность или вызывать структуральные повреждения клетки или организма. Следовательно, нетоксическое вещество не включает ацетонитрил.

В особенно предпочтительном варианте осуществления данного изобретения композиция включает только нетоксические вещества.

Композиция по данному изобретению может включать меньше чем 25% (объем/объем) ацетонитрила, предпочтительно меньше чем 15%, еще более предпочтительно меньше чем 5%, наиболее предпочтительно меньше чем 1% (объем/объем).

Можно применять какой-либо приемлемый тип или способ введения для обеспечения млекопитающего, особенно человека, эффективной дозой композиции ЬТВ₄ агента по данному изобретению. Например, можно применять пероральное, парентеральное, внутридуоденальное, внутрь тонкой кишки и местное введение. Дозированные формы включают таблетки, капсулы, порошки, растворы, дисперсии, суспензии, кремы, мази и аэрозоли.

Для парентерального, например подкожного, внутривенного или местного введения, композицию по данному изобретению, если необходимо, превращают в раствор, гель или эмульсию с помощью фармацевтических веществ, приемлемых для этой цели, например солюбилизаторов, загущающих агентов, эмульсификаторов, агентов для тоничности, консервантов или других вспомогательных веществ.

Местные средства, применяемые в фармацевтике, представляют собой водные растворы, среди которых, например, буферные системы или изотонические или гипертонические смеси воды и растворителей, которые смешиваются с водой, такие как, например, спирты или ариловые спирты, масла, полиалкиленгликоли, этилцеллюлоза, гидроксипропилцеллюлоза, карбоксиметилцеллюлоза, поливинилпирролидон или сополимеры этиленоксида и пропиленоксида (плюронилового) изопропилмиристата. Примеры приемлемых буферных веществ представляют собой гидроксид натрия и аминокислоты, например глицин, аргинин, гистидин и лизин; фосфат натрия, ацетат натрия или глюконатный буфер. Форма для местного введения может также содержать нетоксические вспомогательные вещества, такие как, например, полиэтиленгликоли, и противобактериальные соединения.

Композиции длительного высвобождения также рассматриваются в пределах данного изобретения. Такие композиции очень разнообразны, что понятно специалисту в данной области. Примеры веществ длительного высвобождения включают органические растворители или биоразрушающиеся, биосовместимые полимеры, включая, например, эмульсии, гели, микросферы и гидрогели. Предпочтительными композициями длительного высвобождения для использования по данному изобретению являются микрокапсула или микросферы и мицеллы. Микрокапсулы/сферы представляют собой чрезвычайно маленькие частицы активных соединений, помещенные в приемлемый полимер, чтобы сформировать сферы, варьирующиеся в диаметре от около 40 до 500 мкм (предпочтительно меньше чем 150 мкм) и легко вводимые инъекцией при суспендировании в приемлемом жидком носителе.

ЬТВ₄ агент можно формулировать как стерильную фармацевтическую композицию для терапевтического применения, которая приемлема для какого-либо местного или системного введения. Продукт может быть в форме без растворителя (например, лиофилизированный раствор, содержащий маннит) и готовым к восстановлению для применения путем добавления приемлемого носителя или разжижителя. Для избежания разложения продукт может находиться в форме раствора, который может быть водным или органическим и готовым к введению или готовым к модифицированию путем добавления приемлемого разжижителя.

Для модификации продукта в форме раствора согласно данному изобретению можно использовать стерильный разжижитель, который может содержать материалы, обычно применяемые в условиях, приближенных к физиологическим. В этом случае стерильный разжижитель может содержать соли и/или буферные агенты для достижения физиологически приемлемой тоничности и рН, например хлорид натрия, фосфат и/или другие вещества, физиологически приемлемые и/или безопасные для использования.

Применяемая в форме водного раствора фармацевтическая композиция будет, главным образом, содержать множество из веществ, описанных выше, для восстановления продукта, не содержащего растворитель. Если применять в форме раствора в органическом растворителе, то для восстановления продукта, не содержащего растворитель, небольшой объем раствора, содержащего жирную кислоту (ЬТВ₄ агент), нужно будет разбавить водным раствором, содержащим множество из веществ, описанных выше. Такая фармацевтическая композиция, главным образом, будет содержать множество из веществ, описанных выше, для восстановления продукта, не содержащего растворитель.

ЬТВ₄ агент можно применять в комбинации с другими агентами, включая, но не ограничиваясь,

- 7 012982 противомикробные агенты, противораковые агенты, иммуносуппрессивные агенты, иммуностимулирующие агенты, противовоспалительные агенты, цитокины, ростовые факторы (например, С-С8Е. МС8Е и СМ-С8Е), ретиноиды и соединения, способные понижать поглощение, элиминирование или метаболизм ЬТВ₄ агента, например пробенецид, дипиридамол или клофибрат.

Если представленный ЬТВ₄ агент вводить пациенту в качестве противоинфекционного, то это может быть пероральная, внутриартериальная, внутривенная, внутриперитониальная, подкожная, внутриназальная, внутримышечная инъекция, ингаляция или подобное.

Дозированные формы с энтеросолюбильным покрытием

Как показано на модели крысы (пример 11), внутридуоденальное введение ЬТВ₄ агентов обеспечивает необходимый фармакокинетический профиль. Таким образом, в предпочтительном варианте осуществления композиции по данному изобретению могут быть в пероральной дозированной форме с энтеросолюбильным покрытием. Из указанных выше свойств стабильности ЬТВ₄ агентов очевидно, что необходимо защитить пероральную дозированную форму указанных ЬТВ₄ агентов от контакта с кислотной реакцией желудочного сока, чтобы она достигла тонкой кишки без разрушения.

Препараты с энтеросолюбильным покрытием устойчивы к растворению в кислотной среде, но быстро растворяются в нейтральной щелочной среде. Дозированная форма с энтеросолюбильным покрытием предпочтительно характеризуется следующим образом. Ядра, содержащие ЬТВ₄ агент, смешанный с соединениями, реагирующими в щелочной среде, или соль ЬТВ₄ агента, необязательно смешанного с соединением, реагирующим в щелочной среде, покрыты двумя или более слоями, причем первый слой/слои, растворимый в воде или быстро распадающийся в воде, состоит из некислотных или же инертных фармацевтически приемлемых веществ. Этот/эти первый слой/слои отделяет/отделяют материал ядра со щелочной реакцией от внешнего слоя, являющегося энтеросолюбильным покрытием. В заключение дозированную форму с энтеросолюбильным покрытием обрабатывают приемлемым способом для снижения содержания воды до очень низкого уровня, чтобы достичь удовлетворительной стабильности дозированной формы во время длительного срока хранения.

Ядра

ЬТВ₄ агент смешивают с инертными, предпочтительно растворимыми в воде, традиционными фармацевтическими компонентами для получения предпочтительной концентрации активного соединения в финальной смеси и с реагирующим в щелочной среде или же инертным, фармацевтически приемлемым веществом (или веществами), которое создает микро-рН, как указано выше, если вода адсорбируется частицами смеси или если вода добавляется к смеси в небольших количествах. Такие вещества можно выбрать из веществ, например натриевой, калиевой, кальциевой, магниевой и алюминиевой солей фосфорной кислоты, угольной кислоты, лимонной кислоты или других приемлемых слабых неорганических или органических кислот; веществ, обычно применяемых в антацидных препаратах, например гидроксиды алюминия, кальция и магния; оксида магния или композитных веществ, например Л1₂Оз-6МдО СО₂-12Н₂О, (Мд₆Л1₂(ОН)₁₆СО₃ 4Н₂О), Μ§Ο·Α1₂Ο₃·28ίΟ₂·ηΗ₂Ο, причем η не является целым числом и меньше чем 2, или подобных соединений; органических рН-буферных веществ, например трисгидроксиметиламинометана или других подобных, фармацевтически приемлемых рН-буферных веществ.

Затем порошковую смесь формулируют в небольшие гранулы, т.е. пеллеты или таблетки, традиционными фармацевтическими способами. Эти пеллеты или таблетки используют как ядра для дальнейшего процесса.

Отделяющий слой

Ядра со щелочной реакцией, содержащие ЬТВ₄ агент, должны отделяться от полимеров энтеросолюбильного покрытия, содержащего свободные карбоксильные группы, которое иначе вызывает разрушение ЬТВ₄ агента во время процесса покрытия или во время хранения. Подслаивание (отделяющий слой) также служит рН-буферной зоной, в которой ионы водорода, диффундирующие от внешнего покрытия к щелочному ядру, могут реагировать с гидроксильными ионами, диффундирующими от щелочного ядра к поверхности покрытых частиц. рН-буферные свойства отделяющего слоя можно дополнительно усилить введением в слой веществ, выбранных из группы соединений, обычно используемых в антацидных композициях, таких как, например, магния оксид, гидроксид или карбонат, алюминия или кальция гидроксид, карбонат или силикат; композитные соединения алюминия/магния, такие как, например, А1₂Оу6МдО СО₂· 12Н₂О, (Мд₆А1₂(ОН)₁₆СО₃4Н₂О), МдОА1₂Оу281ОгиН₂О, причем η не является целым числом и меньше чем 2, или подобные соединения; или другие фармацевтически приемлемые рНбуферные вещества, такие как, например, натриевая, калиевая, кальциевая, магниевая и алюминиевая соли фосфорной, лимонной или других приемлемых слабых, неорганических или органических кислот.

Отделяющий слой состоит из одного или более растворимых в воде инертных слоев, необязательно содержащих рН-буферные вещества.

Отделяющий слой(слои) можно наносить на ядра - пеллеты или таблетки - традиционными способами нанесения покрытия в приемлемой емкости с покрытием или в аппарате с флюидизированным слоем с применением воды и/или традиционных органических растворителей для раствора покрытия. Материал для отделяющего слоя выбирают из фармацевтически приемлемых, растворимых в воде, инертных

- 8 012982 соединений или полимеров, применяемых для нанесения пленки, таких как, например, сахар, полиэтиленгликоль, поливинилпирролидон, поливиниловый спирт, гидроксипропилцеллюлоза, гидроксиметилцеллюлоза или гидроксипропилметилцеллюлоза. Толщина отделяющего слоя составляет не меньше чем мкм, для небольших сферических пеллетов предпочтительно не меньше чем 4 мкм, для таблеток предпочтительно не меньше чем 10 мкм.

В случае таблеток можно применять другой способ нанесения покрытия путем методики сухого покрытия. Сначала таблетку, содержащую кислотно-лабильное соединение, прессуют, как описано выше. Вокруг этой таблетки с помощью приемлемого таблеточного пресса прессуют другой слой. Внешний, отделяющий слой содержит фармацевтически приемлемые растворимые в воде или быстро распадающиеся в воде таблеточные наполнители. Отделяющий слой имеет толщину не меньше чем 1 мм. В отделяющий слой также могут включаться традиционные пластификаторы, пигменты, диоксид титана, тальк и другие аддитивы.

Слой энтеросолюбильного покрытия наносят на ядра с подслаиванием традиционной методикой нанесения покрытия, например, в емкости с покрытием, в аппарате с флюидизированным слоем с применением растворов полимеров в воде и/или в приемлемых органических растворителях или с помощью латексной суспензии указанных полимеров. Как энтеросолюбильные покрывающие полимеры можно использовать, например, целлюлозы ацетат фталат, гидроксипропилметилцеллюлозы фталат, поливинил ацетат фталат, сополимеризованные метакриловую кислоту/метиловые эфиры метакриловой кислоты, например соединения, известные под торговой маркой Еи6тадй^В Ь 12,5 или ЕибтадУ Ь 100, (Войт Рйагта), или подобные соединения, применяемые для получения энтеросолюбильных покрытий.

Энтеросолюбильное покрытие также можно наносить с помощью водной дисперсии полимера, например Ас.|иа1спс (ЕМС Сотротабои), Еи6тадй^В Ь 100-55 (Войт Рйагта), Соабид СЕ 5142 (ВА8Е). Слой энтеросолюбильного покрытия может необязательно содержать фармацевтически приемлемый пластификатор, такой как, например, цетанол, триацетин, эфиры лимонной кислоты, например, известные под торговой маркой С11тоДех^В (РПхсг). эфиры фталевой кислоты, дибутил сукцинат или подобные пластификаторы.

Для каждого полимера энтеросолюбильного покрытия обычно оптимизируют дозу пластификатора, и она обычно составляет 1-20% полимера энтеросолюбильного покрытия. Слой энтеросолюбильного покрытия может также включать дисперсанты, например тальк; красители и пигменты.

Таким образом, препарат с энтеросолюбильным покрытием по данному изобретению состоит из ядер, содержащих ЬТВ₄ агент, смешанный с соединением со щелочной реакцией, или ядер, содержащих соль щелочного металла кислотно-лабильного соединения, смешанного с соединением со щелочной реакцией. Ядра покрыты покрытием, растворимым в воде или быстро распадающимся в воде, необязательно содержащим рН-буферное вещество, которое отделяет щелочные ядра от энтеросолюбильного покрытия. Дозированную форму с подслоем окончательно покрывают энтеросолюбильным покрытием, что делает дозированную форму нерастворимой в кислотной среде, но быстро распадающейся/растворимой в среде от нейтральной до щелочной, такой как, например, жидкости, присутствующие в проксимальной части тонкой кишки, участке, где должно происходить растворение.

Хелатообразующий агент

Выражение хелатообразующий агент включает металлические хелатообразующие агенты, обычно известные в данной области. Хелаторы для ионов металла обычно представляют собой полифункциональные молекулы, которые имеют множество отрицательно заряженных и/или богатых электронами лиганд, которые могут блокировать ионы металла с различными аффинностями. Приемлемые богатые электронами функциональные группы включают карбоксильные группы, гидроксигруппы и аминогруппы. Расположение этих групп в аминополикарбоксильных кислотах, гидроксиполикарбоксильных кислотах, гидроксиаминокарбоксильных кислотах и т. п. приводит к образованию компонентов, которые действуют как превосходные хелаторы. При этом они включают аминополикарбоксильные кислоты, такие как, например, этилендиаминтетрауксусная кислота (ЕЭТА), диэтилентриамин пентауксусная кислота (ОТРА), нитрилотриуксусная кислота (ΝΤΑ), Х-2-ацетамидо-2-иминодиуксусная кислота (АЭА), Ь18(аминоэтил)-гликолевый эфир, Ν,Ν,Ν',Ν'-тетрауксусная кислота (ЕСТА), баик-диаминоциклогексан тетрауксусная кислота (ОСТА), глутаминовая кислота и аспарагиновая кислота; и гидроксиаминокарбоксильные кислоты, такие как, например, Ν-гидроксиэтилиминодиуксусная кислота (НГМЭА), Ν,Ν-Μδгидроксиэтилглицин (бицин) и №(трисгидроксиметилметил)глицин (трицин); и Ν-замещенные глицины, например глицилглицин. Другие кандидатные хелаторы включают 2-(2-амино-2-оксоктил)аминоэтан сульфоновую кислоту (ВЕ8). Все вышеупомянутое также включает соли карбоксильных и других кислотных функциональных групп.

Примеры таких солей включают соли натрия, калия и других слабо связанных ионов металла; природа соли и число зарядов, которые будут нейтрализованы, будут зависеть от числа присутствующих карбоксильных групп и рН, при которой добавляется стабилизирующий хелатор.

Как известно в данной области, хелатообразующие агенты обладают различной прочностью связи данных целевых ионов. В общем, ионы тяжелых металлов связаны прочнее, чем их эквиваленты с одинаковыми зарядами, но с меньшей молекулярной массой. Например, Си⁺² всегда хелатируется сильнее, чем

- 9 012982

Са⁺², что дает возможность в некоторых случаях применять кальциевые соли используемых хелаторов. Чтобы оценить относительную прочность, в качестве произвольного стандарта для сравнения хелаторов здесь используется постоянная стабильности иона меди при рН композиции. Эти постоянные стабильности, конечно, зависят от рН. Они доступны из литературы, и могут быть найдены, например, у Регли, Ό. Ό., е! а1.: ЬиГГег55 Гог рН аиб Ме1а1 Ιοη Сои1го1, Сйартаи & На11, Ьоибои, Ν.Υ., (1974), и, в частности, в 1и1етиа1юиа1 Ишои оГ Риге & Лррйеб Сйет181гу: 81аЫ1йу Соийаий, §ирр1 1 (1971) А1беи ргекк, ОхГогб. Силу хелаторов можно классифицировать с помощью найденных в этих ссылках значений стабильности комплексов Си⁺², как меры силы хелатора. Используют значения 1од бетта как отрицательные логарифмы константы диссоциации для комплекса. Чем выше значение 1од-бетта, тем сильнее связь между ионом меди и хелатообразующим компонентом. Конечно, рН, при которой проводят определение, является существенным фактором, так как различные карбоксильные группы, содержащиеся в хелаторе, сильнее связываются с отдельным ионом, поскольку они отрицательно заряжены.

Особенно эффективными в данном изобретении являются хелаторы со значениями 1од-бетта для иона меди около 7 или более (как определено при рН заявляемой композиции); более предпочтительные имеют значения 10 или более; и наиболее предпочтительные имеют значения 1од-бетта при рН применения 15 или более. Таким образом, предпочтительными являются, например, трицин, бицин, ΑΌΑ и Н1МЭА, как довольно сильные; еще более предпочтительными являются ΝΤΑ, ΌΤΡΑ и ΕΌΤΑ. Среди наиболее предпочтительных хелаторов для применения по данному изобретению - ΕΌΤΑ и ΌΤΡΑ.

В данной области известно большое число хелатообразующих агентов, а кандидатный хелатор можно легко определить по его значению 1од-бетта по отношению к иону меди при определенной рН применения, и, если он обладает фармацевтически приемлемыми свойствами, которые позволяют его применять в композициях для введения пациентам, его можно оценить как приемлемый для применения по способу данного изобретения и в композициях по данному изобретению.

Необходимо также учитывать растворимости в воде, хотя различные хелаторы могут присутствовать в различных количествах, в зависимости от природы остальной части композиции.

Тогда как хелатообразующий агент присутствует в стабилизирующих количествах, его % от общего веса может составлять от около 0,001 до около 1,0% (вес/вес) всей композиции. Предпочтительно % хелатообразующего агента от общего веса составляет от около 0,01 до около 0,1% (вес/вес). Эти значения относятся к окончательному восстановленному продукту для фармацевтических показаний. Если композиция лиофилизирована, % хелатообразующего агента в сухой массе может составлять от около 10 до около 40%. Поэтому в сухой форме хелатообразующий агент может присутствовать в количествах от около 0,01 до около 40% общего веса, предпочтительно от около 1,0 до около 30%. Как будет понятно специалисту в данной области, % хелатообразующего агента в композиции изменяется в зависимости от специфического агента, увеличивающего объем, применяемого для композиции активного соединения. Понятно, что чем выше уровни проблематичных ионов металла, присутствующих в агенте, увеличивающем объем, или в другом агенте в композиции, тем выше уровни необходимого хелатора. Это легко определить с помощью методик для определения оптимальных концентраций хелатообразующего агента, описанных ниже.

Данное изобретение будет легче понять благодаря ссылке на следующие примеры, которые приведены для иллюстрации данного изобретения, а не для ограничения его объема.

Пример 1.

Материалы и способы

ЫВ₄ (в кислотной форме) получили от Саксабе Вюсйет (Великобритания) в водно-спиртовом растворе, 95/5. Степень чистоты этого стартового материала составлял около 98,5% (±0,3%), как определили обратно-фазовой НРЬС. Раствор ЫВ₄ в этаноле нейтрализовали эквивалентом гидроксида натрия для получения натриевой (№1) соли ΌΤΒ₄. Раствор № соли ΌΤΒ₄ в этаноле выпаривали досуха при пониженном давлении с помощью роторного выпарного аппарата и водяной бани (30°С), пока не образовался маслянистый остаток. Остаток вновь растворили в фосфатно-буферном солевом растворе Дюльбекко (ΌΡΒ8) при рН 7,4, содержащем или не содержащем 0,01% этилендиаминтетрауксусную кислоту (ΕΌΤΑ), для получения окончательной концентрации ΌΤΒ₄ 5 мг/мл. Растворы разлили в 2-мл боросиликатные стеклянные ампулы типа Ι, которые затем закупорили под аргоном с помощью резиновых пробок, покрытых тефлоном, и алюминиевых крышек. Образцы хранили в темноте при 25±5°С до анализа в определенные точки времени. Анализ растворов ΌΤΒ₄ выполняли обратно-фазовой НРЬС с помощью С18, 5μ частицы, колонки 4,7x250 мм (ЦцскоШ) и метанол/ацетонитрил градиентного элюирования; определение ЫВ₄ и включений выполняли поточно с помощью НРЬС ИУ спектрофотометра при 270 нм.

Результаты

Как показано на фиг. 1, водные растворы Νι соли ЫВ₄ при 5 мг/мл, не содержащие ΕΌΤΑ, показали повышенный уровень включений уже после 7 дней хранения при 25°С, а уровень примесей достиг 23,3% пиковой площади ΌΤΒ₄ после 14 дней хранения. В отличие от них растворы Νι соли ЫВ₄ при 5 мг/мл, содержащие 0,01% ΕΌΤΑ, не показали повышение ухудшения свойств до 14 дней хранения, а уровни примесей составили 2,9 и 8,6% после 60 и 90 дней хранения при 25°С, соответственно. Эти данные четко показывают, что ΕΌΤΑ значительно замедляет деградацию водных растворов Νι соли ЫВ₄.

- 10 012982

Пример 2.

Материалы и способы

Раствор ЬТВ₄ (в кислотной форме) при концентрации 12 мг/мл в водно-спиртовом растворе, 95/5 (от Саксабе Вюсйет, Великобритания) нейтрализовали эквивалентом гидроксида натрия для образования Να соли. Этот стартовый материал, используемый в экспериментах, описанных в примерах 2-7, имел степень чистоты 96,8±0,3%, как определили обратно-фазовой НРЬС. Раствор Να соли ЬТВ₄ в этаноле выпарили (см. пример 1) до образования маслянистого остатка. Затем остаток заново растворили в фосфатном буферном растворе хлорида натрия (соляном растворе) (30 мМ фосфата натрия, рН 7,5), содержащем 0,01% ΕΌΤΆ, для получения изотонического раствора Να соли ЬТВ₄ при 25 мг/мл. Путем растворения 25 мг/мл раствора в 30 мМ изотоническом натрий-фосфатно-буферном солевом растворе, рН 7,5, содержащем 0,01% ΕΌΤΆ, получили раствор Να соли ЬТВ₄ с концентрацией 0,1 мг/мл. Аликвоты растворов разлили в 2-мл стеклянные ампулы типа I, как описано в примере 1, и хранили на воздухе в темноте при 40±5°С. Проанализировали ЬТВ₄ и включения путем определения времени обратно-фазовой НРЬС с помощью υν определения при 270 нм.

Результаты

На фиг. 2 показаны результаты изучения вынужденной деградации (40°С) водных изотонических с рН 7,5 растворов Να соли ЬТВ₄ при концентрации 0,1 и 25 мг/мл. Данные четко показывают, что при определении обратной зависимости между стабильностью и концентрацией в растворах Να соли ЬТВ₄ 25 мг/мл раствор Να соли ЬТВ₄ гораздо менее стабильный, чем раствор Να соли ЬТВ₄ при 0,1 мг/мл. Стабильность раствора Να соли ЬТВ₄ при 0,01 мг/мл подобна стабильности раствора при 0,1 мг/мл (данные не показаны).

Пример 3.

Материалы и способы

Водные изотонические растворы Να соли ЬТВ₄ при концентрации 1,75 мг/мл в фосфат/глициновом буферном солевом растворе (3 мМ фосфата натрия и 10 мМ глицинового буфера, рН 7,5, 8,5, 9,5 и 10,5), содержащем 0,01% ЕБТЛ. получили путем растворения 25 мг/мл раствора Να соли ЬТВ₄ (см. пример 2) в соответствующем фосфат/глициновом буферном солевом растворе, содержащем 0,01% ЕБТА. Растворы разлили в 2-мл ампулы для хранения на воздухе в темноте при 4±4°С и 20±5°С на протяжении 9 месяцев до анализа ЬТВ₄ и включений обратно-фазовой НРЬС, как описано в примере 1.

Результаты

На фиг. 3 четко показано, что повышение рН водных изотонических растворов Να соли ЬТВ₄ значительно усиливает стабильность ЬТВ₄, как видно по снижению уровней включений, определенных в образцах анализом НРЬС. Влияние щелочной рН на стабильность растворов Να соли ЬТВ₄ наблюдали и при 4 и при 20°С, это показало, что влияние щелочной рН на стабилизацию не зависит от температуры. При изучении вынужденной деградации (хранение при 40°С) повышение рН растворов Να соли ЬТВ₄ также привело к значительному улучшению стабильности раствора Να соли ЬТВ₄ (данные не показаны).

Пример 4.

Материалы и способы

Водные изотонические растворы Να соли ЬТВ₄ при концентрации 17,5 мкг/мл получили растворением в фосфатно-буферном солевом растворе (3 мМ натрий фосфатный буфер, рН 7,5, 8,5, 9,5 и 10,5), содержащем 0,01% ЕБТА, раствора Να соли ЬТВ₄ при 25 мг/мл (пример 2). Растворы Να соли ЬТВ₄ при

17,5 мкг/мл с 4 различными рН разлили в 2-мл ампулы для хранения на воздухе в темноте при 4±4°С или 20±5°С на протяжении 15 месяцев до анализа ЬТВ₄ и включений обратно-фазовой НРЬС, как описано в примере 1.

Результаты

На фиг. 4 четко показано, что повышение рН водных изотонических растворов Να соли ЬТВ₄ при

17,5 мкг/мл поразительно усиливает стабильность ЬТВ₄, что видно по снижению уровня включений, определенного в образцах анализом НРЬС. Это влияние щелочной рН на стабильность растворов Να соли ЬТВ₄ при 17,5 мкг/мл намного более очевидно при 20°С, чем при 4°С, подобные растворы показали очень незначительную деградацию ЬТВ₄ после 15 месяцев хранения. Эти данные вместе с данными, приведенными на фиг. 3, показывают, что влияние щелочной рН на стабилизацию четко наблюдается в растворах Να соли ЬТВ₄ при 1,75 мг/мл, а также 17,5 мкг/мл, следовательно, влияние щелочной рН на стабилизацию происходит в широком диапазоне концентраций ЬТВ₄.

Пример 5.

Материалы и способы

Водные изотонические растворы Να соли ЬТВ₄ при концентрациях 35 и 350 мкг/мл в фосфатнобуферном солевом растворе (3 мМ натрий фосфатный буфер, рН 9,5), содержащем 0,01% ЕБТА и различные концентрации глицина (от 0,01 до 10 мМ), получили растворением 25 мг/мл раствора Να соли ЬТВ₄ (пример 2). Растворы Να соли ЬТВ₄ при 35 и 350 мкг/мл с 4 различными концентрациями глицина разлили в 2-мл ампулы для хранения на воздухе в темноте при 40±5°С на протяжении 5 месяцев до анализа ЬТВ₄ и включений обратно-фазовой НРЬС, как описано в примере 1.

- 11 012982

Результаты

В этом эксперименте раствор Να соли ЬТВ₄ при 35 мкг/мл, рН 7,5, содержащий 10 мМ глицина и хранящийся 5 месяцев при 40°С, показал уровень включений 20% (данные не показаны). На фиг. 5 показано, что подобный раствор Να соли ЬТВ₄ при 35 мкг/мл, а не при рН 9,5, был более стабильный, как определили по измеренному более низкому уровню включений (6,5%), и четко показано, что концентрация глицинового буфера, изменяющаяся от 0,01 до 10 мМ, проявляла небольшое влияние на стабильность растворов Να соли ЬТВ₄. Очень схожие наблюдения сделали в растворах Να соли ЬТВ₄ при 350 мкг/мл, рН 9,5, хранящихся 5 месяцев при 40°С, с 4 различными концентрациями глицина.

Пример 6.

Материалы и способы

Водные изотонические растворы Να соли ЬТВ₄ с концентрацией 35 мкг/мл в фосфатно-буферном солевом растворе (3 мМ натрий фосфатный буфер, рН 7,5 или 9,5), содержащем 0,01% БОТА, получили, как описано в примере 5. Во все растворы добавили маннит до окончательной концентрации 4% для образования при лиофилизации твердого остатка (маннитового осадка), содержащего Να соль ЬТВ₄ и все компоненты наполнителя. К некоторым растворам до окончательной концентрации 1 мг/мл перед окончательной регулировкой рН (до 7,5 или 9,5) добавили человеческий сывороточный альбумин (Н8А, 81дша Сйетюак, Сант Луис, Миссури) без жирной кислоты (делипидированный). Растворы разлили в 2-мл ампулы, заморозили при -20°С и лиофилизировали. Затем ампулы, содержащие лиофилизированные растворы (маннитовые осадки), закупорили, как описано в примере 1 (но на воздухе вместо аргона), и хранили в темноте при 40±5°С. Через 1,5 или 4,5 месяца ампулы открыли, маннитовые осадки (содержащие ЬТВ₄) растворили в 1 мл воды для образования исходных растворов Να соли ЬТВ₄ при 35 мкг/мл. Затем обратно-фазовой НРБС проанализировали ЬТВ₄ и включения, как описано в примере 1.

Результаты

На фиг. 6 показано, что лиофилизированный раствор Να соли ЬТВ₄ при 35 мкг/мл, рН 7,5, заново растворенный в воде непосредственно после лиофилизации (время 0), имел уровень включений 2,9%, и что идентичные лиофилизированные образцы, хранившиеся 1,5 и 4,5 месяца при 40°С, имели уровни включений 22,7 и 51,3% соответственно. На фиг. 6 также показано, что добавление Н8А к раствору Να соли ЬТВ₄ (рН 7,5) перед лиофилизацией приводит к снижению приблизительно на 50% уровня включений через 1,5 месяца хранения. На фиг. 6 также четко показано, что повышение рН от 7,5 до 9,5 в растворах ЬТВ₄ перед лиофилизацией приводит к значительному снижению уровня включений, как наблюдалось и через 1,5 месяца хранения (в присутствии Н8А), и через 4,5 месяца хранения. Эти данные четко показывают, что щелочная рН также усиливает стабильность Να соли ЬТВ₄ в твердой форме, т.е. после лиофилизации, в присутствии маннита и в присутствии или отсутствии Н8А.

Пример 7.

Материалы и способы

Раствор ЬТВ₄ в этаноле (кислотная форма) (ЕЮН/вода, 95/5), полученный от производителя (С'а5саάе Вюсйет, Великобритания), разбавили раствором ЕЮН/вода, 95/5, для образования раствора ЬТВ₄ в этаноле (кислотная форма) при 9 и 0,9 мг/мл. Раствор натриевой соли ЬТВ₄ в этаноле при 9 и 0,9 мг/мл получили путем добавления 1,05 эквивалента гидроксида натрия. Растворы натриевой соли ЬТВ₄ с концентрациями 9 и 0,9 мг/мл в 75/25 в растворе ЕЮН/10 мМ глицина в воде при рН 10,5 (гидроксид натрия) получили путем смешивания 3 объемов растворов натриевой соли ЬТВ₄ при 12 и 1,2 мг/мл в растворе ЕЮН/вода, 95/5, с 1 объемом 40 мМ глицинового буфера при рН 10,5. Растворы разлили в 2-мл ампулы для хранения на воздухе в темноте при -80°С и 40±5°С в течение 17 месяцев до анализа ЬТВ₄ и включений обратно-фазовой НРБС, как описано в примере 1.

Результаты

На фиг. 7 показаны результаты изучения вынужденной деградации раствора ЬТВ₄ в этаноле (кислотная форма) или Να соли ЬТВ₄ при 2 различных концентрациях. После 17 месяцев хранения при 40°С раствора ЬТВ₄ (кислотная форма) в этаноле (ЕЮН/вода, 95/5) при 9,0 мг/мл произошла полная деградация (ЬТВ₄ не определялся) с уровнем включений 100% АИС (площадь под кривой при 270 нм). На фиг. 7 четко показано, что, если ЬТВ₄ превращен в его натриевую соль путем добавления 1,05 эквивалента гидроксида натрия, стабильность полученного раствора Να соли ЬТВ₄ в этаноле при одинаковых условиях значительно улучшилась с уровнем примесей только 5,4%. Подобным образом, изучение вынужденной деградации раствора натриевой соли ЬТВ₄ в 75/25 ЕЮН/10 мМ глицина, рН 10,5, показало, что при щелочной рН натриевая соль ЬТВ₄ более стабильна (уровень примесей 3,8%), чем ЬТВ₄ в его кислотной форме в растворе ЕЮН/вода, 95/5. Те же выводы можно сделать для растворов ЬТВ₄ (кислотная форма) и натриевой соли ЬТВ₄ при концентрации в 10 раз меньшей (0,9 мг/мл), натриевой соли ЬТВ₄ в растворе ЕЮН/вода, 95/5, с повышенной стабильностью или в растворе ЕЮН/10 мМ глицин, 75/25, рН 10,5 (уровни примесей 4,9 и 4,3% АИС, соответственно), по сравнению с кислотной формой ЬТВ₄ в растворе ЕЮН/вода, 95/5 (уровень примесей 62% АИС). Уровни примесей, измеренные в 3 одинаковых композициях ЬТВ₄ в этаноле при 9 и 0,9 мг/мл, которые хранили при -80°С 17 месяцев, варьировали от 2,8 до 3,7% АИС (данные не показаны). В табл. 1 приведены значения рН, измеренные в композициях ЬТВ₄ в этаноле, которые хранили 17 месяцев при -80 и 40°С. Данные четко показывают, что повышенная ста

- 12 012982 бильность действительно соответствует более высокой рН композиций. Наконец, на фиг. 7 также показано, что по аналогии с наблюдениями, проведенными в водных растворах Να соли ЬТВ₄, более концентрированный (9 мг/мл) раствор ЬТВ₄ в ЕЮН/вода, 95/5, менее стабильный, чем более разбавленный (0,9 мг/мл) раствор ЬТВ₄ при одинаковых условиях эксперимента.

Таблица 1. рН¹, наблюдаемая в композициях ЬТВ₄ в этаноле

Композиция

-80°С +40°С мг/мл, кислотная форма в ЕЮН/вода, 95/5 мг/мл, натриевая соль в ЕЮН/вода, 95/5 мг/мл, натриевая соль в ЕЮН/буфер , 75/25

0,9 мг/мл, кислотная форма в ЕЮН/вода, 95/5

0,9 мг/мл, натриевая соль в ЕЮН/вода, 95/5

0,9 мг/мл, натриевая соль в ЕЮН/буфер³, 75/25

7,08²

10,15

12,54

7,25

9,80

10,77

5,27

9,68

10,07

5,26

9,77

10,17 ¹ рН измерили с помощью малогабаритного рН-метра ИзЬег 8с1епПйс Ассише! с комбинированным электродом, при комнатной температуре.

рН измерили после 17 месяцев хранения при указанных температурах.

³ 10 мМ глицин/№ОН, рН 10,5.

Пример 8.

Материалы и способы

1,ТВ.| и аналоги получили в кислотной форме как растворы в этаноле. ЬТВ₄ получили от Сазсабе ВюсЪеш (Великобритания), ЬТВ₅ получили от Вюшо1 (ΡΙνιηοιιΐΙι Меейпд, РА, США), а все другие соединения (ЬТВ₃, трифтор-ЬТВ₄, 20-гидрокси-ЬТВ₄ и 5-НЕТЕ) получили от Саутап СЪеш1са1з (Апп АгЬог, М1, США). Раствор натриевой соли различных ЕТВ₄ агентов в этаноле (ЕТВ₄ и аналоги) получили добавлением 1 эквивалента гидроксида натрия. Раствор натриевой соли ЕТВ₄ агентов в этаноле выпарили досуха в потоке азота и заново растворили с концентрацией ~35 мкг/мл в фосфатном буферном солевом растворе (30 мМ), содержащем 10 мМ глицин, 0,01% ЕЭТА, рН отрегулировали гидроксидом натрия до

7,5 или 9,5. Для немедленного анализа (1ц) взяли аликвоты растворов, а оставшиеся растворы Νη соли ЕТВ₄ агента при 35 мкг/мл разлили в 2-мл ампулы для хранения на воздухе в темноте при 40±5°С шесть месяцев до анализа ЕТВ₄ агентов и включений обратно-фазовой НРЕС, как описано в примере 1.

Результаты

В этом эксперименте различные растворы натриевой соли ЕТВ₄ агентов при 35 мкг/мл показали исходный (1₀) уровень примесей, варьирующий от 2 до 15%, как показано на фиг. 8 (неокрашенные столбики). На фиг. 8 показано, что уровни примесей во всех растворах ЕТВ₄ агента, хранящихся шесть месяцев при 40°С при рН 7,5, значительно повышены (серые столбики). На фиг. 8 также показано, что растворы одинаковых ЕТВ₄ агентов, которые хранили шесть месяцев при 40°С, но при более высокой рН 9,5, значительно более стабильны, что видно из более низких уровней примесей всех растворов (черные столбики).

Пример 9.

Материалы и способы

ЕТВ₄ и аналоги получили в кислотной форме в виде растворов в этаноле. Энантиомерную форму ЕТВ₄ получили от Сазсабе ВюсЪеш (Великобритания), а все другие соединения (6-1гапз-ЕТВ₄, 12-эпиЕТВ₄ и 6-!гапз-12-эпи-ЕТВ₄) получили от Саушап СЪеш1са1з (Апп АгЬог, М1, США). Раствор натриевой соли различных ЕТВ₄ агентов (ЕТВ₄ и аналоги) в этаноле получили добавлением 1 эквивалента гидроксида натрия. Раствор натриевой соли ЕТВ₄ агентов в этаноле выпарили досуха в потоке азота и заново растворили с концентрацией ~35 мкг/мл в фосфатном буферном солевом растворе (30 мМ), содержащем 10 мМ глицина, 0,01% ЕЭТА, с помощью гидроксида натрия рН довели до 7,5 или 9,5. Взяли аликвоты растворов для немедленного анализа (1₀), а оставшиеся растворы Νίΐ соли ЕТВ₄ агента при 35 мкг/мл разлили в 2-мл ампулы для хранения на воздухе в темноте при 40±5°С шесть месяцев до анализа ЕТВ₄ агентов и включений обратно-фазовой НРЕС, как описано в примере 1.

Результаты

В этом эксперименте различные растворы натриевой соли ЕТВ₄ агентов при 35 мкг/мл показали исходный (1₀) уровень примесей 2-5%, как представлено на фиг. 9 (неокрашенные столбики). На фиг. 9 показано, что уровни примесей во всех растворах ЕТВ₄ агента, которые хранили шесть месяцев при 40°С при рН 7,5, повысились значительно (серые столбики). Также на фиг. 9 показано, что растворы одинаковых ЕТВ₄ агентов, которые хранили шесть месяцев при 40°С, но при рН выше, чем 9,5, значительно более стабильны, о чем говорят более низкие уровни примесей всех растворов (черные столбики).

- 13 012982

Пример 10.

Материалы и способы

Раствор ЬТВ₄ (кислотная форма) в этаноле, полученный от Саксабе Вюсйет (Великобритания), нейтрализовали добавлением 1 эквивалента гидроксида натрия для образования натриевой соли ЬТВ₄. Аликвоты раствора натриевой соли ЬТВ₄ в этаноле разлили в 2-мл ампулы (по 2 мг ЬТВ₄ в ампулу), а растворитель выпарили досуха в потоке азота. Остатки в ампулах растворили 0,9% хлоридом натрия (ЫаС1) (ампула 1), 0,9% ЫаС1 в 0,1 μΝ ΝαΟΗ (ампула 2), 0,9% ЫаС1 в 1 μΝ ΝαΟΗ (ампула 3), 0,9% ЫаС1 в 10 μΝ №ЮН (ампула 4), 0,3% №101 в 0,1Ν №·1ΟΗ (ампула 5) и в 1Ν №ЮН (ампула 6). Аликвоты растворов взяли для немедленного анализа (ίο), а оставшиеся растворы натриевой соли ЬТВ₄ при 2 мг/мл хранили на воздухе в темноте при 40±5°С на протяжении пяти недель до анализа ЬТВ₄ и включений обратнофазовой НРЬС, как описано в примере 1.

Результаты

На фиг. 10 приведены результаты изучения вынужденной деградации водных растворов натриевой соли ЬТВ₄ при повышающихся концентрациях гидроксида натрия (повышающаяся рН). Полученные данные показывают, что натриевая соль ЬТВ₄ полностью деградировала с уровнями примесей 100% (ЪТВ₄ не определили) в ампулах 1 и 2, где рН опустилась до значений ниже 5 после пяти недель хранения при 40°С. Наоборот, в ампулах 3-6, где окончательная рН (после пяти недель) составляла 8,02, 9,83, 12,50 и 13,03, соответственно, уровни примесей составили 5,34, 3,46, 4,38 и 5,77 (% АИС 270 нм), соответственно. Исходные уровни примесей (при ίο) варьировали от 2,65 до 3,35%. Эти данные четко показывают, что растворы натриевой соли ЬТВ₄ стабилизировались при щелочной рН, в очень широком диапазоне рН, в отсутствие и буфера, и хелатообразующего агента.

Пример 11.

В этом примере исследовались фармакокинетические параметры ЬТВ₄ на крысах после введения тремя различными способами, внутривенно (ί.ν.), внутрь тонкой кишки (Ц.) и подкожно (к.с).

Использовали три группы из трех самок крыс 8ргадие-Оает1еу (весом ~250 г); животные голодали на протяжении 18 ч, их анестезировали кетамин/ксилазином, в яремные вены им ввели канюли для постоянного забора образцов крови. ЬТВ₄ вводили дозой 50 мкг/кг на дозу объемом 4 мл/кг для всех способов введения. Образцы крови (0,5 мл/образец) забирали через 0, 0,5, 1, 2, 5, 15, 30 и 60 мин после инъекции ЬТВ₄. Образцы крови сразу же антикоагулировали БИТА и перенесли в ледяную водяную баню до центрифугирования для выделения плазмы. Образцы плазмы хранили при -80°С до анализа на содержание ЬТВ₄ с помощью коммерческого твердофазного иммуноферментного анализа (ЕЫ8А) (Саутап Сйет1са1к, Апп АгЬог, ΜΙ, США). Внутривенное введение (15 с болюс) ЬТВ₄ выполнили через хвостовую вену; при введении внутрь тонкой кишки ЬТВ₄ напрямую ввели в тонкую кишку после вскрытия абдоминальной полости; подкожное введения выполнили в области спины.

На фиг. 11А приведены фармакокинетические параметры после гр введения крысам ЫВ₄ дозой 50 мкг/кг. Данные показывают, что концентрация ЬТВ₄ в плазме быстро увеличивается у крысы после ϊ.^. инъекции, достигая максимального уровня через 5 мин после ϊ.^. введения; данные также показывают, что уровни ЬТВ₄ в плазме возвращаются к исходным уровням через 30 мин после ϊ.^. введения. Эти данные четко показывают, что ЫВ₄ эффективно переносится из тонкой кишки, в периферический кровоток. На фиг. 11В приводится сравнение площади под кривой (АИС) (для концентрации ЬТВ₄ в плазме) для трех различных способов введения. В этом случае фармакокинетический параметр АИС показывает системное воздействие лекарственного средства. Как и предполагалось, прямое введение ЬТВ₄ в кровоток (ί.ν. инъекция) приводит к наивысшей АИС. Кроме того, эти данные четко показывают, что АИС ЫВ₄ после Ц. инъекции достигает 35% от ί.ν. введенного ЬТВ₄, демонстрируя, что при Ц. введении, происходит эффективное поглощение ЬТВ₄ в кровотоке. Эти данные также означают, что пероральное введение ЬТВ₄ с помощью соответствующей композиции для доставки в тонкую кишку представляет эффективный способ системного введения лекарственного средства. Для сравнения приведена АИС при к.с. введение ЬТВ₄. Подкожное введение известно в данной области как эффективный способ введения ЬТВ₄ на моделях крыс.

Так как данное изобретение описано применительно к специфическим вариантам его осуществления, будет понятно, что возможны дополнительные модификации, а данная заявка предназначена охватить какие-либо варианты применения или адаптации данного изобретения, которые следуют в общем принципам данного изобретения и включают отступления от данного описания, попадающие под известные или традиционные методики в области, к которой принадлежит данное изобретение, которые могут быть применены к вышеупомянутым особенностям и которые находятся в объеме формулы изобретения.

Claims (32)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Композиция, включающая ЬТВ₄ агент, его соль, его сложный эфир или его простой эфир вместе с фармацевтически приемлемым носителем при щелочной рН от 8,2 до 14 или с фармацевтически приемлемым носителем со щелочной реакцией;

   где ЬТВ₄ агент представляет собой одну или более полиненасыщенную жирную кислоту, выбран

   - 14 012982 ную из группы, включающей ЬТВ₄, 14,15-дигидро-ЬТВ₄, 17,18-дегидро-ЬТВ₄, 19-гидрокси-ЬТВ₄, 20гидрокси-ЬТВ₄ и их 5(В)-гидрокси, 5(8)-гидроперокси, 5(К.)-гидроперокси и 5-деокси аналоги; ЬТЛ₄; 14,15-дигидро-ЬТЛ₄, 17,18-дегидро-ЬТЛ₄; 14,15-дигидро-ЬТЛ₄ метиловый сложный эфир, ЬТЛ₄ метиловый сложный эфир, 5(8)-гидрокси-б,8,11,14(Е,2,2,2)-эйкозатетраэноевую кислоту (5-НЕТЕ), 14,15дигидро-5-НЕТЕ, 17,18-дегидро-5-НЕТЕ и их 5(В)-гидрокси, 5(8)-гидроперокси, 5(В)-гидроперокси аналоги, и где носитель со щелочной реакцией представляет собой инертное фармацевтически приемлемое вещество (или вещества), которое создает щелочную микро-рН от 8,2 до 14 вокруг каждой частицы ЬТВ₄, в случае стабилизированной композиции ЬТВ₄, находящейся в лиофилизированной, кристаллической или твердой аморфной форме, если вода адсорбирована на частицах смеси или если вода добавлена к смеси в небольших количествах.
2. 2. Композиция по п.1, где композиция включает только нетоксичные вещества.
3. 3. Композиция по какому-либо из пп.1 и 2, где указанная щелочная рН изменяется от 8,5 до 11,5.
4. 4. Композиция по какому-либо из пп.1-3, где указанная щелочная рН изменяется от 9,5 до 11,5.
5. 5. Композиция по какому-либо из пп.1-4, где указанная композиция находится в жидкой форме, или в лиофилизированной форме, или в кристаллической форме, или в твердой аморфной форме.
6. 6. Композиция по какому-либо из пп.1-5, где указанный носитель представляет собой водный носитель.
7. 7. Композиция по п.б, где указанный водный носитель выбран из группы, включающей воду, растворы гидроксидов щелочных металлов, например раствор гидроксида натрия, буферный солевой раствор, например фосфатный буферный солевой раствор (РВ8), водный раствор, включающий спирт, растворы сахаров или их смесь.
8. 8. Композиция по п.7, где спирт указанного водного раствора, содержащего спирт, выбран из группы, включающей этанол, пропиленгликоль, бензиловый спирт, пропандиол, глицерол и маннит.
9. 9. Композиция по какому-либо из пп.1-б, где указанный носитель является носителем, выбранным из группы, включающей органические растворители и их смесь и воду.
10. 10. Композиция по п.9, где указанная смесь включает воду и по меньшей мере 50% (об./об.), преимущественно по меньшей мере 60% (об./об.) спирта.
11. 11. Композиция по п.10, где указанный спирт выбран из группы, включающей этанол, пропиленгликоль, бензиловый спирт, пропандиол, глицерол и маннит.
12. 12. Композиция по п.7, где указанная композиция является стабилизированной при температуре от -25 до 45°С, если указанный носитель является водным носителем, а указанная композиция находится в жидкой форме при температуре от -25 до 45°С, если указанный носитель является носителем, содержащим спирт, или указанная композиция находится в лиофилизированной форме.
13. 13. Композиция по какому-либо из пп.1-4, где указанный носитель представляет собой твердую частицу, покрытую щелочной матрицей, или составляет щелочную матрицу.
14. 14. Композиция по какому-либо из пп.1-13, где указанный ЬТВ₄ агент является лейкотриеном В₄ [58,12К.-дигидрокси-б,8,10,14(2,Е,Е,2)-эйкозатетраэноевой кислотой] (ЬТВ₄).
15. 15. Композиция по какому-либо из пп.1-13, где указанный ЬТВ₄ агент выбран из группы, включающей ЬТВ₄, 14,15-дигидро-ЬТВ₄ (ЬТВ₃), 17,18-дегидро-ЬТВ₄ (ЬТВ₅), 19-гидрокси-ЬТВ₄, 20-гидроксиЬТВ₄ и их 5(8)-гидроперокси и 5-деокси аналоги.
16. 16. Композиция по какому-либо из пп.1-13, где указанный ЬТВ₄ агент выбран из группы, включающей 5(В)-гидрокси и 5(К.)-гидроперокси аналоги указанного ЬТВ₄ агента.
17. 17. Композиция по какому-либо из пп.1-13, где указанный ЬТВ₄ агент выбран из группы, включающей метиловый сложный эфир ЬТВ₄ и этиловый сложный эфир ЬТВ₄.
18. 18. Композиция по какому-либо из пп.1-13, где указанный ЬТВ₄ агент выбран из группы, включающей 5(8)-гидрокси-б,8,11,14(Е,2,2,2)-эйкозатетраэноевую кислоту (5-НЕТЕ), 14,15-дигидро-5-НЕТЕ, 17,18-дегидро-5-НЕТЕ и их 5(К.)-гидрокси, 5(8)-гидроперокси, 5(К.)-гидроперокси аналоги.
19. 19. Композиция по какому-либо из пп.1-13, где указанный ЬТВ₄ агент выбран из группы, включающей ЬТВ₄, ЬТВ₃, ЬТВ₅, 20-гидрокси-ЬТВ₄, 19-гидрокси-ЬТВ₄ и их 5-деокси аналоги.
20. 20. Композиция по какому-либо из пп.1-13, где указанный ЬТВ₄ агент выбран из группы, включающей ЬТВ₄, ЬТВ₃, ЬТВ₅, 20-гидрокси-ЬТВ₄ и их 5-деокси аналоги.
21. 21. Композиция по какому-либо из пп.1-20, где указанный ЬТВ₄ агент присутствует в количествах от около 0,1 мкг/мл до 25 мг/мл композиции.
22. 22. Композиция по какому-либо из пп.1-21, где указанный ЬТВ₄ присутствует в количествах от около 0,1 мкг/мл до 1 мг/мл композиции.
23. 23. Композиция по какому-либо из пп.1-22, включающая менее чем 25% (об./об.) ацетонитрила.
24. 24. Композиция по какому-либо из пп.1-23, которая дополнительно включает хелатообразующий агент или фармацевтически приемлемую соль хелатообразующего агента в количестве, эффективном для стабилизации указанного ЬТВ₄ агента.
25. 25. Композиция по п.24, где хелатообразующий агент представляет собой аминополикарбоксильную кислоту.

    - 15 012982
26. 26. Композиция по какому-либо из пп.24-25, где хелатообразующий агент выбран из группы, включающей этилендиаминтетрауксусную кислоту (Е1)ТА), диэтилентриаминпентауксусную кислоту (1)ТРА), нитрилотриуксусную кислоту (ЭТА), глутаминовую кислоту и аспарагиновую кислоту.
27. 27. Композиция по п.26, где хелатообразующим агентом является ЕБТА.
28. 28. Композиция по п.26, где хелатообразующим агентом является БТРА.
29. 29. Композиция по п.24, где фармацевтически приемлемая соль выбрана из группы, включающей соли натрия и калия.
30. 30. Композиция по какому-либо из пп.24-29, дополнительно включающая человеческий сывороточный альбумин (Н8А).
31. 31. Композиция по какому-либо из пп.24-30, где указанный хелатообразующий агент присутствует в количествах от около 0,001 до около 1,0 вес.% стабилизированной композиции ЬТВ₄ агента.
32. 32. Композиция по какому-либо из пп.24-30, где указанный хелатообразующий агент присутствует в количествах от около 0,01 до около 40 вес.% стабилизированной композиции ЬТВ₄ агента.

    Время хранения (дни) при 25±5°С