PT1796730E - Produto farmacêutico que contém leucotrieno b4 (ltb4) estabilizado - Google Patents

Description

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DESCRIÇÃO "PRODUTO FARMACÊUTICO QUE CONTÉM LEUCOTRIENO B4 (LTB4) ESTABILIZADO"

Antecedentes da Invenção (a) Domínio da Invenção A presente invenção refere-se a uma nova formulação farmacêutica de agente de LTB4 com um pH alcalino, eficaz para estabilizar o agente de LTB4 e proporcionar uma formulação com uma vida útil aumentada. Assim, a invenção refere-se a uma composição compreendendo um agente de LTB4 e um veículo farmaceuticamente aceitável num pH alcalino. (b) Descrição da Técnica Anterior 0 leucotrieno B4 é um ácido gordo tetrainsaturado de vinte átomos de carbono e é uma molécula relativamente instável. Soluções aguosas isotónicas de LTB4 a um pH de 7,0-7,6, as quais são adequadas para administração a seres humanos e animais, são estáveis apenas durante curtos períodos de tempo (semanas a meses) quando armazenadas em temperaturas compreendidas entre 2 °C a 25 °C (e acima de 25°C). De facto, agentes de LTB4 estão sujeitos à oxidação, isomerização de ligações duplas (LTB4 contém duas ligações duplas cis e duas trans), racemização (LTB4 contém dois centros quirais), esterificação (LTB4 contém um grupo carboxílico), lactonização, dentre várias possíveis alterações estruturais. 2

Embora os agentes de LTB4 tenham uma grande utilidade farmacêutica, seu uso como agentes terapêuticos em animais ou seres humanos é problemático, em virtude de sua estabilidade e vida útil insuficientes em solução a temperaturas entre 2 °C a 25 °C. A literatura cientifica indica que, até o momento, formulações de LTB4 para administração a seres humanos e animais são soluções aquosas a um pH de 7,0-7,5 as quais são armazenadas em temperaturas muito baixas (-20 °C ou inferiores) para evitar degradação. Alternativamente, o LTB4 é usado como soluções etanólicas, também armazenadas a baixa temperatura para evitar degradação, as quais são diluídas com um tampão (pH de 7,0-7,5) ou evaporadas até secagem e redissolvidas em um tampão (pH de7,0-7,5) imediatamente antes de uso. Tais formulações são inadequadas para uso do LTB4 como um agente terapêutico em seres humanos e animais (não práticas e vida útil curta). A WO 03/105823 revela soluções que compreendem derivados de HETE, água e edetato dissódico a pH entre 6,5 e 8 para o tratamento da secura da boca.

Dado o potencial dos agentes LTB4 como agentes terapêuticos para a profilaxia e tratamento de infecções e cancro em seres humanos e animais, seria muito desejável proporcionar um novo produto farmacêutico de agente LTB4. 3

Resumo da Invenção

Um objectivo da presente invenção é proporcionar uma nova formulação farmacêutica de agente de LTB4 com um pH alcalino eficaz para estabilizar o agente de LTB4 e proporcionar uma formulação com uma vida útil aumentada de acordo com a reivindicação 1.

De acordo com uma realização, é proporcionada uma formulação farmacêutica de agente de LTB4 compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um agente de LTB4, um sal do mesmo, um éster do mesmo ou um éter do mesmo em associação com um veículo farmaceuticamente aceitável a um pH alcalino entre 8,2 e 14, eficaz para estabilizar o agente de LTB4, desse modo, aumentado a vida útil da formulação. Assim, a invenção refere-se a uma composição compreendendo um agente de LTB4, um sal do mesmo, um éster do mesmo ou um éter do mesmo e um veículo farmaceuticamente aceitável em um pH alcalino de acordo com a reivindicação 1.

De acordo com outra realização da presente invenção, o pH alcalino oscila entre 8,2 e 14, mais preferivelmente entre 8,5 e 12,5, tal como entre 8,5 e 11,5, mais preferivelmente entre 9,5 e 11,5, tal como cerca de 9,5, 9.6, 9,7, 9,8, 9,9, 10,0, 10,1, 10,2, 10,3, 10,4, 10,5, 10.6, 10,7, 10,8, 10,9, 11,0, 11,1, 11,2, 11,3, 11,4 ou 11,5. Noutra realização preferida, o pH alcalino preferido oscila entre 8,5 e 9,5, entre 9,0 e 10,0, entre 9,5 e 10,5 ou entre 10,0 e 11,5. A formulação farmacêutica de agente de LTB4 compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz de um agente de LTB4 em associação com um veículo de reacção alcalino 4 farmaceuticamente aceitável. Sempre que o presente pedido de patente descreve uma realização referente a um veiculo farmaceuticamente aceitável a um pH alcalino eficaz para estabilizar a formulação farmacêutica em questão, essa realização também inclui um veiculo de reacção alcalino farmaceuticamente aceitável.

De acordo com outra realização da presente invenção, o veiculo é um veículo aquoso.

De acordo com outra realização da presente invenção, o veículo é um sólido em partículas revestido com uma matriz alcalina ou constituído por uma matriz alcalina e o veículo pode ser seleccionado do grupo constituído por solventes orgânicos ou uma mistura dos mesmos e água.

De acordo com outra realização da presente invenção, a formulação estabilizada compreende água e pelo menos 50% (vol/vol), de preferência pelo menos 60% (vol/vol), mais preferivelmente pelo menos 70% (vol/vol), tal como cerca de 75% (vol/vol), especialmente pelo menos 80% (vol/vol) de um co-solvente. Numa matriz alcalina particular e o veículo pode ser seleccionado do grupo constituído por solventes orgânicos ou uma mistura destes e água. De acordo com outra forma de realização da invenção, a formulação estabilizada compreende água e pelo menos 50%, de preferência 60% (vol/vol), mais preferencialmente pelo menos 70% (vol/vol), tal como cerca de 75 % (vol/vol), em especial pelo menos 80% (vol/vol) de um co-solvente. Numa forma de realização particular da invenção, a formulação estabilizada compreende água ela 49% de um co-solvente e 50 a 99% de um co-solvente. O referido co-solvente pode ser seleccionado do grupo constituído por etanol, 5 propilenoglicol, polietilenoglicol, álcool isopropílico, álcool benzílico, propanodiol, glicerol, glicofurol, dimetilsulfóxido, dimetilacetamida e misturas dos mesmos. Em uma realização particular da presente invenção, a formulação estabilizada compreende pelo menos 90% (vol/vol) do referido co-solvente.

De acordo com outra realização da presente invenção, a formulação está em uma forma liquida ou em uma forma liofilizada ou em uma forma cristalina ou em uma forma amorfa sólida, de preferência em uma forma liquida ou em uma forma liofilizada.

De acordo com outra realização da presente invenção, o veiculo aquoso é seleccionado do grupo constituído por água, soluções de hidróxido de metal alcalino, tal como solução de hidróxido de sódio, soluções salinas tamponadas, tal como Solução salina Tamponada com Fosfato (PBS), solução aquosa contendo co-solvente, tal como solução aquosa contendo álcool, soluções de açúcar ou uma mistura dos mesmos. A referida solução aquosa contendo co-solvente contém, tipicamente, de cerca de 1% a cerca de 49% (vol/vol) de co-solvente.

De acordo com outra realização da presente invenção, o co-solvente presente na solução aquosa contendo co-solvente é seleccionado do grupo constituído por etanol, propilenoglicol, polietilenoglicol, álcool isopropílico, álcool benzílico, propanodiol, glicerol, glicofurol, dimetilsulfóxido, dimetilacetamida e misturas dos mesmos.

De acordo com outra realização da presente invenção, a formulação é estabilizada em uma temperatura oscilando de -25°C a 45°C, de preferência de 0°C a 40°C, tal como 2°C a 6 35°C, especialmente 5°C a 25°C, quando o veículo é um veículo aquoso e a formulação está em uma forma líquida e uma temperatura oscilando de -25°C a 45°C, de preferência de -20°C a 40°C, mais preferivelmente -10 °C a 30 °C, especialmente 0 °C a 20 °C, ainda mais preferivelmente 0°C a 10°C, quando o veículo é um veículo orgânico, tal como um veículo contendo álcool ou a formulação está em uma forma liofilizada. Outros intervalos térmicos mais preferidos, quando o veículo é um veículo orgânico, tal como um veículo contendo álcool ou a formulação está em uma . Ácido etilenodiaminatetraacético (EDTA), ácido dietilenotriaminapentaacético (DTPA), ácido nitriloacético (NTA), ácido glutâmico e ácido aspártico. EGTA e

DTPA

De acordo com outra realização da presente invenção, o sal farmaceuticamente aceitável pode ser seleccionado de um grupo consistindo nos sais de iões de sódio e potássio.

De acordo com uma realização particular da presente invenção, a formulação estabilizada pode ser ainda estabilizada na forma liofilizada por compreender Albumina de Soro Humano (HSA) na formulação.

De acordo com outra realização da presente invenção, o agente de quelação está presente em quantidades de cerca de 0,001 a cerca de 1,0 % em peso da formulação de agente de LTEq, mais preferivelmente o agente de quelação está presente em quantidades de cerca de 0,01 a cerca de 40 % em peso da formulação de agente LTB4. 7

Agentes de LTB4 preferidos de acordo com a presente invenção incluem, sem limitação, os seguintes: • leucotrieno B4 [ácido 5S,12R-hidroxidihidroxi- 6,8,10,14(Z,E,E,Z)-eicosatetraenóico] ("LTB4" ) f • LTB4, 14,15-dihidro-LTB4 ( "LTB3" ) , 17,18-dehidro-LTB4 ("LTB5"), 19-hidroxi-LTB4, 20-hidroxi-LTB4, Éster metilico de LTB4 • ácido 5 (S)-hidroxi-6,8,11,14(E,Z,Z,Z)- eicosatetraenóico ("5-HETE"), 14,15-dihidro-5-HETE, 17,18- dehidro-5-ΗΕΤΕ e • um sal dos mesmos, um derivado de éster dos mesmos e um derivado de éter dos mesmos.

Agentes de LTB4 particularmente preferidos de acordo com a presente invenção são seleccionados do grupo constituído por LTB4, LTB3, LTB5, 20-hidroxi-LTB4, 20,20,20-trifluorometil-LTB4, 19-hidroxi-LTB4, 18-hidroxi-LTB4, 3-hidroxi-LTB4, 2-hidroxi-LTB4, 4-hidroxi-LTB4, análogos de 5-deóxi dos mesmos e sais, ésteres ou éteres dos mesmos.

Agentes de LTB4 ainda mais preferidos de acordo com a presente invenção são seleccionados do grupo constituído por LTB4, LTB3, LTB5, 20-hidroxi-LTB4 e sais, ésteres ou éteres do mesmo. O agente de LTB4 está, de preferência, presente em quantidades de cerca de 0,1 pg/ml a 25 mg/ml da formulação, de preferência 1 pg/ml a 25 mg/ml da formulação, mais 8 preferivelmente de cerca de 1 pg/ml a 1 mg/ml da formulação.

Breve Descrição dos Desenhos A figura 1 ilustra que o agente de quelação EDTA intensifica a estabilidade de uma solução aquosa de sal de Na de LTB4 em um pH de 7,4. A figura 2 ilustra o efeito da concentração de LTB4 sobre a estabilidade de soluções aquosas de sal de Na de ltb4. A figura 3 ilustra o efeito do pH (tampão de fosfato/glicina) sobre a estabilidade de uma solução aquosa de sal de Na de LTB4 a 1,75 mg/ml. A figura 4 ilustra o efeito do pH (tampão de fosfato) sobre a estabilidade de soluções aquosas de sal de Na de LTB4 a 17,5 pg/ml. A figura 5 ilustra o efeito de diferentes resistências de tampão (tampão de fosfato/glicina) sobre a estabilidade de soluções aquosas de sal de Na de LTB4. A figura 6 ilustra que albumina de soro humano (HSA) e/ou pH alcalino (tampão de fosfato) intensifica a estabilidade de soluções aquosas liofilizadas (contendo manitol) de sal de Na de LTB4. A figura 7 ilustra que o pH alcalino (tampão de fosfato/glicina) intensifica a estabilidade de soluções etanólicas (95/5, etanol/água e 75/25, etanol/tampão, Vol/Vol) de LTB4 (forma ácida e sal de Na). 9 A figura 8 ilustra que o pH alcalino (tampão de fosfato/glicina) intensifica a estabilidade de vários agentes de LTB4 em solução. A figura 9 ainda ilustra que soluções aquosas de pH alcalino (tampão de fosfato/glicina) de sal de Na de LTB4 a 17,5 pg/ml. A figura 5 ilustra o efeito de diferentes resistências de tampão (tampão de fosfato/glicina) sobre a estabilidade de soluções aquosas de sal de Na de LTB4. A figura 6 ilustra que albumina de soro humano (HSA) e/ou pH alcalino (tampão de fosfato) intensifica a estabilidade de soluções aquosas liofilizadas (contendo manitol) de sal de Na de LTB4. A figura 7 ilustra que o pH alcalino (tampão de fosfato/glicina) intensifica a estabilidade de soluções etanólicas (95/5, etanol/água e 75/25, etanol/tampão, Vol/Vol) de LTB4 (forma ácida e sal de Na). A figura 8 ilustra que o pH alcalino (tampão de fosfato/glicina) intensifica a estabilidade de vários agentes de LTB4 em solução. A figura 9 ainda ilustra que o pH alcalino (tampão de fosfato/glicina) intensifica a estabilidade de vários agentes de LTB4 em solução. A figura 10 ilustra que LTB4 é estabilizada sobre uma ampla faixa de pHs alcalinos e que o pH elevado deve ser mantido para assegurar a estabilidade. A figura 11 ilustra a captação eficaz de LTB4 em um modelo com ratos através de administração intrajejunal e compara com administração intravenosa e subcutânea. 10

Descrição Detalhada da Invenção A estabilidade de soluções aquosas de LTB4 foi testada sob várias condições experimentais. Descobriu-se 1) que a estabilidade de soluções de LTB4 era dramaticamente aumentada a um pH alcalino; e 2) que aqentes de quelação, tal como EDTA, promovem a estabilidade de soluções de LTB4. O efeito positivo do pH alcalino sobre a estabilidade da solução de LTB4 foi observado usando um tampão de fosfato ou um tampão de glicina; o efeito positivo do pH alcalino sobre a estabilidade da solução de LTB4 foi observado em todas as concentrações testadas do fármaco (17,5 pg/ml a 17,5 mg/ml) e em todas as temperaturas testadas (4 °C e 40 °C) .

Quando se refere à "vida útil aumentada" no contexto da presente invenção, esta destina-se a significar uma extensão da estabilidade de agentes de LTB4 nas formulações ou composições da presente invenção comparado com formulações ou composições de agentes de LTB4 não compreendendo um pH conforme descrito acima e/ou agentes de quelação conforme descrito acima. O período de tempo de estabilidade de agentes de LTB4 nas formulações ou composições da presente invenção em comparação com formulações ou composições de agentes de LTB4 que não compreendem um pH conforme descrito acima e/ou agentes de quelação conforme descrito acima é, dependendo da temperatura, poluição e concentração dos agentes de LTB4, de preferência, aumentado em pelo menos uma semana, tal como pelo menos duas, três ou quatro semanas, mais preferivelmente pelo menos dois, três ou quatro meses, especialmente pelo menos seis, nove ou doze meses, tal como pelo menos 24 ou 48 meses. 11

Quando se refere o período de tempo de estabilidade de agentes de LTB4 em formulações ou composições, este destina-se a significar o período de tempo em que o nível de impurezas é menor do que 10%, de preferência menor do que 6%, ainda mais preferivelmente menor do que 5%, tal como menor do que 4%, 3%, 2% ou 1%. O termo "impurezas", no contexto da presente invenção, se destina a significar os produtos da degradação do agente de LTB4, conforme medido através de HPLC de fase reversa e fotometria por UV a 27 0 nm. Assim, quanto maior o nível de impurezas, menor a estabilidade da formulação de agente de LTB4. Na presente descrição, exemplos e figuras, o nível de impurezas pode ser expresso como o percentual da área total sob a curva a 27 0 nm. A definição aplicada será evidente a partir do contexto dos exemplos. 0 termo "sais dos mesmos" se destina a significar sais de adição de base farmaceuticamente aceitáveis obteníveis através de tratamento da forma ácida de um grupo funcional, tal como um ácido carboxílico, com bases apropriadas, tal como bases inorgânicas, por exemplo, hidróxidos de metal alcalino; tipicamente hidróxido de sódio ou potássio; carbonatos de metal alcalino; tipicamente carbonato ou hidrogenocarbonato de sódio ou potássio; hidróxidos de metal alcalino terroso; tipicamente carbonato ou hidrogenocarbonato de cálcio ou magnésio; ou amónia; ou bases orgânicas, por exemplo, aminas primárias, secundárias ou terciárias, alcoolatos de metal alcalino ou metal alcalino-terroso, por exemplo, metanolato de sódio, etanolato de sódio ou etanolato de potássio. Sais preferidos da presente invenção são sais de adição de base com hidróxido de sódio ou potássio. 12 0 termo "ésteres dos mesmos" destina-se a significar ésteres farmaceuticamente aceitáveis obteníveis através de tratamento do ácido ou forma derivada de ácido de um grupo funcional com qualquer agente de esterificação típico conhecido pelos peritos na especialidade. No contexto da presente invenção, ésteres dos agentes de LTB4 definidos aqui são, de preferência, ésteres de alquil Cl-6 , tais como éster metílico , éster etílico, éster n-propílico, éster i-propilico, éster n-butílico, éster i-butílico, éster s-butílico, éster t-butílico, éster n-pentílico, éster i-pentílico, éster s-pentílico, éster neo-pentílico e éster n-hexílico ou precursores ou metabolitos de LTB4 ou análogos de LTB4: LTB4, 14,15-dihidro-LTB4, 17,18-dehidro- LTB4, 19-hidroxi-LTB4, 20-hidroxi-LTB4; ácido 5(S)-hidroxi-6,8,11,14(E,Z,Z,Z)-eicosatetraenóico ("5-HETE") , 14,15- dihidro-5-ΗΕΤΕ e 17,18-dehidro-5-HETE. 0 termo formulação do agente LTB4 inclui também formulações de compostos que podem conter uma mistura de dois ou vários agentes LTB4 ou um agente LTB4 e um ou vários isómero(s) tão activos ou menos activos do agente LTB4 (isómeros posicionais, geométricos ou ópticos).

Infecções

As infecções as quais podem ser tratadas com o agente de LTB4 de acordo com a invenção são infecções causadas por agentes patogénicos microbianos humanos e/ou animais. Além disso, prevenção ou profilaxia de infecções e estimulação da função de neutrófilos com formulações ou composições de LTB4 da invenção são consideradas pelos inventores.

A expressão "agentes patogénicos microbianos humanos e/ou animais" pretende incluir, sem limitação, vírus de DNA 13 e RNA em geral e Retroviridae, bactérias, fungos e parasitas.

Intervalo de Doses A quantidade terapeuticamente eficaz do agente de LTB4 a ser administrada variará com o agente de LTB4 usado em particular, o tipo ou modo de administração, o uso concorrente de outros compostos activos, idade e tamanho do hospedeiro, tipo, gravidade e disseminação da infecção, resposta do paciente individual e semelhantes. No caso de LTB4, ele pode ser administrado em doses suficientes para obter um pico ou concentração em estado uniforme eficaz de cerca de 0,1 nM a 10 μΜ, de preferência 0,1 nM a 1000 nM, mais preferivelmente de cerca de 0,25 nM a 2,5 μΜ, tal como 0,25 nM a 25 nM. Uma quantidade de dose eficaz do agente de LTB4 pode ser determinada pelo médico após uma consideração de todos os critérios mencionados acima. No caso de outros agentes de LTB4 que não LTB4 os quais têm uma actividade biológica diferente, o pico ou concentração em estado uniforme eficaz requerida pode ser diferente, por exemplo, até 25 μΜ, tal como até 10 μΜ. A quantidade de dosagem do agente necessário para obter as concentrações desejadas no sangue pode ser determinada através de estudos farmacocinéticos, conforme descrito em Marleau e outros, J. Immunol. 150: 206, 1993 e Marleau e outros, Br. J. Pharmacol. 112: 654, 1994.

pH A expressão "pH alcalino" pretende incluir um pH alcalino entre 8,2 e 14 o qual é eficaz na estabilização do agente de LTB4 em uma solução aquosa ou orgânica ou em uma formulação sólida ou liofilizada da presente invenção. 14

Intervalos de pH alcalino preferidos estão entre 8,2 e 14, especialmente entre 8,5 e 12,5, tal como entre 8,5 e 11,5, ainda mais preferivelmente entre 9,5 e 11,5, tal como cerca de 9,5, 9,6, 9,7, 9,8, 9,9, 10,0, 10,1, 10,2, 10,3, 10,4, 10,5, 10,6, 10,7, 10,8, 10,9, 11,0, 11,1, 11,2, 11,3, 11,4 ou 11,5. Em outra realização preferida, o pH alcalino preferido oscila entre 8,5 e 9,5, entre 9,0 e 10,0, entre 9,5 e 10,5 ou entre 10,0 e 11,5. A expressão "veiculo de reacção alcalino" pretende incluir uma substância (ou substâncias) farmaceuticamente aceitável de outro modo inerte a qual cria um "micro-pH" alcalino entre 8,2 e 14, especialmente entre 8,5 e 12,5, tal como entre 8,5 e 11,5, ainda mais preferivelmente entre 9,5 e 11,5, tal como cerca de 9,5, 9,6, 9,7, 9,8, 9,9, 10,0, i—1 o i—1 10,2, o i—1 PO o t—1 10,5, 10,6, 10,7, 10,8, 10,9, 0 1 1 \—1 11,1, 11,2 , 11,3, 11, 4 ou 11,5, em torno de cada como partícula de LTB4, no caso da formulação de LTB4 estabilizada estar em uma forma liofilizada, cristalina ou amorfa sólida, quando água é adsorvida às partículas da mistura ou quando água é adicionada em pequenas quantidades à mistura. Em outra realização preferida, o "micro-pH" alcalino oscila entre 8,5 e 9,5, entre 9,0 e 10,0 ou entre 10,0 e 11,5. Tais substâncias que criam o referido "micro-pH" podem ser escolhidas dentre, mas não estão restritas a, substâncias tais como sais de sódio, potássio, cálcio, magnésio e alumínio de ácido fosfórico, ácido carbónico, ácido cítrico ou outros ácidos orgânicos e inorgânicos fracos adequados; substâncias normalmente usadas em preparações antiácido, tais como hidróxidos de alumínio, cálcio e magnésio; óxido de magnésio ou substâncias compostas, tais 15 Α1203.6MgO . C02.12H20, (Mg6Al2 (OH) 16C03.4H20) , MgO.Al203 . 2Si02.nH20 ou compostos similares; substâncias de tamponamento de pH orgânicas, tal como tri-hidroximetilaminometano ou outra similar; substâncias de tamponamento de pH farmaceuticamente aceitável.

Veículos Farmaceuticamente Aceitáveis A expressão "veículo farmaceuticamente aceitável" pretende incluir qualquer veículo, tal como qualquer veículo aquoso, adequado para uso fisiológico e farmacêutico. Tal veículo é seleccionado do grupo constituído por água, soluções salinas tamponadas, tal como solução salina tamponada com fosfato (PBS) ou soluções de cloreto de sódio tamponadas com agentes tais como Tris, glicina ou outros aminoácidos, em particular aminoácidos básicos, solução aquosa contendo álcool, tal como etanol, propilenoglicol, propanodiol, glicerol ou manitol, bem como soluções de açúcar, tais como soluções de glicose ou lactose ou uma mistura dos vários solventes mencionados. Além disso, a expressão "veículo farmaceuticamente aceitável" pode incluir diluentes ou cargas inertes, tais como sacarose, sorbitol, açúcar, manitol, celulose microcristalina, amidos, incluindo amido de batata, carbonato de cálcio, cloreto de sódio, lactose, fosfato de cálcio, sulfato de cálcio ou fosfato de sódio; agentes de granulação e desintegração, por exemplo, derivados de celulose, incluindo celulose microcristalina, amidos, incluindo amido de batata, croscarmelose de sódio, alginatos ou ácido algínico; agentes aglutinantes, por exemplo, sacarose, glicose, sorbitol, acácia, ácido algínico, alginato de sódio, gelatina, amido, amido pré-gelatinizado, celulose microcristalina, silicato de 16 alumínio magnésio, carboximetilcelulose de sódio, metilcelulose, hidroxipropilmetilcelulose, etilcelulose, polivinilpirrolidona ou polietileno glicol; e agentes de lubrificação, incluindo desmoldantes e antiadesivos, por exemplo, estearato de magnésio, estearato de zinco, ácido esteárico, sílicas, óleos vegetais hidrogenados ou talco.

Em uma realização particular da invenção, a expressão "veículo farmaceuticamente aceitável" inclui apenas substâncias não tóxicas. Em uma realização preferida da invenção, a expressão "veículo farmaceuticamente aceitável" não inclui acetonitrilo. 0 termo "tóxico" é usado aqui no sentido que é bem conhecido pelos peritos na especialidade, mais particularmente, no contexto das formulações da presente invenção, uma substância tóxica é uma substância que, na quantidade presente nas formulações da invenção, podem prejudicar o funcionamento de ou causar dano estrutural a uma célula ou organismo. Consequentemente, uma "substância não tóxica" não inclui acetonitrilo.

Em uma realização particularmente preferida da presente invenção, a formulação compreende apenas substâncias não tóxicas. A formulação de acordo com a presente invenção pode compreender menos de 25% (vol/vol) de acetonitrilo, de preferência menos de 15%, ainda mais preferivelmente menos de 5%, ainda mais preferivelmente menos de 1% (vol/vol).

Qualquer tipo ou modo de administração pode ser empregado para fornecer a um mamífero, especialmente um ser humano, uma dose eficaz de uma formulação de agente de LTB4 da presente invenção. Por exemplo, administração oral, 17 parentérica, intraduodenal, intrajejunal e tópica pode ser empregada. Formas de dosagem incluem comprimidos, cápsulas, pós, soluções, dispersões, suspensões, cremes, pomadas e aerossóis.

Para administração parentérica, por exemplo, subcutânea ou intravenosa ou tópica, a formulação da presente invenção é convertida em uma solução, gel ou emulsão, se desejado, usando as substâncias farmacêuticas comuns para essa finalidade, tais como solubilizantes, agentes de espessamento, emulsionantes, agentes para tonicidade, conservantes ou outros auxiliares.

Os veículos tópicos usados em farmácia são soluções aquosas as quais são, por exemplo, sistemas tampões ou misturas isotónicas ou hipertónicas de água e solventes as quais são miscíveis com água tais como, por exemplo, álcoois ou álcoois acrílicos, óleos, polialquilenoglicóis, etilcelulose, hidroxipropilcelulose, carboximetilcelulose, polivinilpirrolidona ou copolímeros de óxido de etileno e óxido de propileno (Pluronic), miristato de isopropilo. Exemplos de substâncias tampões adequadas são hidróxido de sódio e aminoácidos, tais como tampão de glicina, arginina, histidina e lisina, fosfato de sódio, acetato de sódio ou gluconato. A forma de administração tópica também pode conter auxiliares não tóxicos tais como, por exemplo, polietilenoglicóis e compostos antibacterianos.

Formulações de libertação contínua também são consideradas dentro do âmbito da presente invenção. Tais formulações são de uma variedade considerável, conforme será compreendido pelos peritos na especialidade. Substâncias de libertação contínua exemplificativas incluem 18 solventes orgânicos ou polímeros biocompatíveis biodegradáveis incluindo, por exemplo, emulsões, géis, microesferas e hidrogéis. Formulações com liberação contínua preferidas para uso em conjunto com a presente invenção são as microcápsulas ou microesferas e micelas. Microcápsulas/esferas são essencialmente pequenas partículas de compostos activos incrustadas em um polímero adequado para formas esferas oscilando, em diâmetro, entre cerca de 40-500 μιη (de preferência menos de 150 μιτι) e são facilmente administradas através de injecção quando suspensas em um veículo líquido adequado. 0 agente de LTB4 pode ser formulado como uma composição farmacêutica estéril para uso terapêutico a qual é adequada para o modo de administração tópico ou sistémico. O produto pode estar em uma forma isenta de solvente (por exemplo, uma solução liofilizada contendo manitol) e pronto para ser reconstituído para uso através da adição de um veículo ou diluente adequado. Alternativamente, o produto pode estar na forma de solução a qual pode ser aquosa ou orgânica e pronta para ser administrada ou pronta para ser modificada através da adição de um diluente adequado.

Para modificação do produto na forma de solução de acordo com a presente invenção, pode-se empregar um diluente estéril, o qual pode conter materiais geralmente reconhecidos por se aproximarem das condições fisiológicas. Dessa maneira, o diluente estéril pode conter sais e/ou agentes de tamponamento para obter um pH e tonicidade fisiologicamente aceitáveis, tais como cloreto de sódio, fosfato e/ou outras substâncias as quais são fisiologicamente aceitáveis e/ou seguras para uso. 19

Quando usada como uma solução aquosa, a composição farmacêutica conterá, na sua maioria, muitas das mesmas substâncias descritas acima para a reconstituição de um produto isento de solvente. Quando usada em solução em um solvente orgânico, um pequeno volume da solução contendo ácido gordo (agente de LTB4) será diluído com uma solução aquosa que conterá muitas das mesmas substâncias descritas acima para a reconstituição de um produto isento de solvente. A composição farmacêutica, em sua maioria, conterá, assim, muitas das mesmas substâncias descritas acima para a reconstituição de um produto isento de solvente. 0 agente de LTB4 pode ser usado em combinação com outros agentes incluindo, mas não limitado a, agentes antimicrobianos, agentes anticâncer, agentes imunossupressores, agentes imunoestimulatórios, agentes antiinflamatórios, citocinas, factores de crescimento (tais como G -CSF, M-CSF e GM-CSF) , retinóides e compostos que podem reduzir a captação, eliminação ou metabolismo do agente de ltb4, tais como probenecida, dipiridamol ou clofibrato.

Quando o agente de LTB4 em questão tem de ser administrado a um hospedeiro como um agente antiinfeccioso, o agente pode ser administrado, por exemplo, oralmente, intrarterialmente, intravenosamente, intraperitonealmente, subcutaneamente, intranasalmente, intramuscularmente, através de injecção, através de inalação ou semelhante.

Formas de Dosagem com Revestimento Entérico

Foi demonstrado, em um modelo com rato (Exemplo 11), que a administração intraduodenal dos agentes de LTB4 20 mencionados proporciona um perfil farmacocinético desejável. Assim, em uma realização preferida, as formulações da presente invenção podem estar em uma forma de dosagem oral com um revestimento entérico. Levando-se em conta aquilo que é mencionado a respeito das propriedades de estabilidade dos agentes de LTB4 listados acima, é óbvio que é vantajoso que uma forma de dosagem oral dos referidos agentes de LTB4 deva ser protegida de contacto com o suco gástrico de reacção ácido de forma a atingir o intestino delgado sem degradação.

As preparações com revestimento entérico são resistentes à dissolução em meios ácidos e dissolvem rapidamente em meios neutros a alcalinos. A forma de dosagem revestida entérica é, de preferência, caracterizada da seguinte forma. Núcleos tendo o agente de LTB4 misturado com compostos de reacção alcalinos ou um sal do agente de LTB4 opcionalmente misturado com um composto de reacção alcalino são revestidos com duas ou mais camadas, nas quais a(s) primeira(s) camada/camadas é/são solúvel(is) em água ou se desintegra (m) rapidamente em água e consiste (m) de substâncias farmaceuticamente aceitáveis de outro modo inertes, não ácidas. Essa(s) primeira(s) camada/camadas separa(m) o material do núcleo de reacção alcalina da camada externam, a qual é um revestimento entérico. A forma de dosagem revestida entérica final é tratada de uma forma adequada para reduzir o teor de água para um nível muito baixo, de forma a obter uma boa estabilidade da forma de dosagem durante armazenamento a longo prazo. Núcleos 21 0 agente de LTB4 é misturado com constituintes farmacêuticos convencionais inertes, de preferência solúveis em água, para obter a concentração preferida do composto activo na mistura final e com uma substância (ou substâncias) farmaceuticamente aceitáveis de reacção alcalina, de outro modo inerte, a qual cria um "micro- -pH" conforme definido acima, quando água é adsorvida às partículas da mistura ou quando água é adicionada em pequenas quantidades à mistura. Tais substâncias podem ser escolhidas dentre, mas não estão restritas a, substâncias tais como sais de sódio, potássio, cálcio, magnésio e alumínio de ácido fosfórico, ácido carbónico, ácido cítrico ou outros ácidos orgânicos e inorgânicos fracos adequados; substâncias normalmente usadas em preparados antiácido, tais como hidróxidos de alumínio, cálcio e magnésio; óxido de magnésio ou substâncias compósitas, tais como A1203.6MgO . C02.12H20, (Mg5Al2 (OH) 16C03.4H20) , Mg0.Al203.

2Si02.nH20, em que n não é um número inteiro e menor que 2 ou compostos similares; substâncias de tamponamento de pH orgânicos, tal como tris-hidroxi metilamino metano ou outra similar; substâncias de tamponamento de pH farmaceuticamente aceitáveis. A mistura em pó é, então, formulada em pequenos glóbulos, isto é, pellets ou comprimidos, através de procedimentos farmacêuticos convencionais. Os pellets ou comprimidos são usados como núcleos para processamento adicional.

Camada de separação

Os núcleos de reacção alcalinos contendo um agente de LTB4 devem ser separados do(s) polímero(s) de revestimento 22 entérico contendo grupos carboxilo livres os quais, de outro modo, causam degradação do agente de LTB4 durante o processo de revestimento ou durante armazenamento. A camada de sub-revestimento (a camada de separação) também serve como uma zona de tamponamento na qual iões de hidrogénio que se difundem do exterior em direcção ao núcleo alcalino podem reagir com iões de hidroxilo que se difundem do núcleo alcalino em direcção à superfície das partículas revestidas. As propriedades de tamponamento da camada de separação podem ser ainda fortalecidas através de introdução, na camada, de substâncias escolhidas de um grupo de compostos usualmente utilizados em formulações antiácidas tais como, por exemplo, óxido, hidróxido ou carbonato de magnésio, hidróxido de alumínio ou cálcio, carbonato ou silicato; compostos de alumínio/magnésio compósitos tais como, por exemplo, Al203.6Mg0 C02.12H20, (Mg6Al2 (OH) 16CO3, 4H20) , MgO . A1203.2Si02 · nH20, em que n não é um número inteiro e é menor do que 2 ou compostos similares; ou outras substâncias para tamponamento de pH farmaceuticamente aceitáveis tais como, por exemplo, sais de sódio, potássio, cálcio, magnésio e alumínio de ácido fosfórico, cítrico ou outros ácidos fracos orgânicos ou inorgânicos adequados. A camada de separação consiste em uma ou mais camadas inertes solúveis em água, opcionalmente contendo substâncias para tamponamento de pH. A(s) camada(s) de separação pode(m) ser aplicada(s) aos núcleos - pellets ou comprimidos - através de procedimentos convencionais de revestimento em uma panela de revestimento adequada ou em um aparelho de leito fluidizado usando água e/ou solventes orgânicos convencionais para a solução de 23 revestimento. 0 material para a camada de separação é escolhido dentre os compostos ou polímeros farmaceuticamente aceitáveis inertes, solúveis em água usados para aplicações de revestimento de filme tais como, por exemplo, açúcar, polietilenoglicol, polivinilpirrolidona, álcool polivinílico, hidroxipropilcelulose, hidroximetilcelulose ou hidroxipropilmetilcelulose. A espessura da camada de separação não é menor do que 2 μιη, para pequenos pellets esféricos, de preferência, não menor do que 4 μιη, para comprimido, de preferência, não menor do que 10 μιη.

No caso de comprimidos, outro método para aplicar o revestimento pode ser realizado através da técnica de revestimento a seco. Primeiro, um comprimido contendo o composto volátil ácido é prensado conforme descrito acima. Em torno desse comprimido, outra camada é comprimida usando uma máquina de prensagem adequada. A camada de separação externa consiste em excipientes para comprimidos que se desintegram rapidamente em água ou solúveis em água farmaceuticamente aceitáveis. A camada de separação tem uma espessura de não menos do que 1 mm. Plastificantes, pigmentos, dióxido de titânio, talco e outros aditivos comuns também podem ser incluídos na camada de separação. A camada de revestimento entérico é aplicada sobre os núcleos sub-revestidos através de técnicas convencionais de revestimento tais como, por exemplo, revestimento em panela ou revestimento em leito fluidizado usando soluções de polímeros em água e/ou solventes orgânicos adequados ou usando suspensões de látex dos referidos polímeros. Como polímeros de revestimento entérico podem ser usados, por 24 exemplo, ftalato de acetato de celulose, ftalato de hidroxipropilmetilcelulose, ftalato de acetato de polivinilo, ésteres metílicos do ácido metacrílico/ácido metacrílico co-polimerizados tais como, por exemplo, compostos conhecidos sob a marca comercial EudragitR L 12.5 ou EudragitR L 100, (Rohm Pharma) ou compostos similares usados para obter revestimentos entéricos. O revestimento entérico também pode ser aplicado usando dispersões poliméricas baseadas em água, por exemplo, Aquateric (FMC Corporation), EudragitR L 100-55 (Rohm Pharma), Coating CE 5142 (BASF). A camada de revestimento entérico pode, opcionalmente, conter um plastificante farmaceuticamente aceitável tal como, por exemplo, cetanol, triacetina, ésteres de ácido cítrico tais como, por exemplo, aqueles conhecidos sob a marca comercial CitroflexR (Pfizer), ésteres de ácido ftálico, succinato de dibutilo ou plastificantes similares. A quantidade de plastificante é, usualmente, optimizada para cada polímero de revestimento entérico e está, usualmente, na faixa de 1-20% do(s) polímero(s) de revestimento entérico. Dispersantes, tal como talco, corantes e pigmentos também podem ser incluídos na camada de revestimento entérico.

Assim, o preparado entérico revestido de acordo com a invenção consiste em núcleos contendo o agente de LTB4 misturados com um composto de reacção alcalino ou núcleos contendo um sal alcalino do composto volátil ácido misturado com um composto de reacção alcalino. Os núcleos são revestidos com um revestimento hidrossolúvel ou que se desintegra rapidamente em água, opcionalmente contendo uma 25 substância para tamponamento de PH, a qual separa os núcleos alcalinos do revestimento entérico. A forma de dosagem sub-revestida é, finalmente, revestida com um revestimento entérico que torna a forma de dosagem insolúvel em meios ácidos, mas que se desintegra/dissolve rapidamente em meios neutros a alcalinos tais como, por exemplo, os líquidos presentes na parte proximal do intestino delqado, o local onde dissolução é desejada.

Agentes Quelantes A expressão "agente quelante" pretende incluir agentes quelantes de metal geralmente conhecidos na técnica. Quelantes de iões metálicos são, geralmente, moléculas polifuncionais as quais têm uma multiplicidade de ligantes ricos em electrões e/ou negativamente carregados os quais capturam iões de metal com afinidades variadas. Grupos funcionais ricos em eléctrões adequados incluem grupos ácido carboxílico, grupos hidroxilo e grupos amina. A disposição desses grupos em ácidos aminopolicarboxílicos, ácidos hidroxipolicarboxílicos, ácidos hidroxiaminocarboxílicos e semelhantes resulta em fracções as quais se comportam como excelentes quelantes. Esses incluem ácidos aminopolicarboxílicos tais como, por exemplo, ácido etilenodiaminatetraacético (EDTA), ácido dietilenotriamina pentaacético (DTPA), ácido nitrilotriacético (NTA), ácido N-2-acetamido-2-iminodiacético (ADA), éter bis(aminoetil)glicólico, ácido N,N,N',N'-tetraacético (EGTA), ácido trans-diaminociclohexano tetraacético (DCTA), ácido glutâmico e ácido aspártico; e ácidos hidroxiaminocarboxílicos, tais como, por exemplo, ácido N-hidroxietiliminodiacético (HIMDA), N,N-bis-hidroxietilglicina (bicina) e N- 26 (trishidroximetilmetil)glicina (tricina); e glicinas N-substituídas, tal como glicilglicina. Outros quelantes candidatos incluem ácido 2-(2-amino-2-oxoctil)aminoetano sulfónico (BES). Todos os precedentes também incluem sais de carboxilo ou outras funcionalidades ácidas.

Exemplos de tais sais incluem sais formados com sódio, potássio e outros iões de metal fracamente ligados; a natureza do sal e o número de cargas a serem neutralizadas dependerá do número de grupos carboxilo presentes e do pH no qual o quelante de estabilização é fornecido.

Conforme é compreendido na técnica, os agentes de quelação têm resistências variadas com as quais iões alvo em particular são ligados. Em geral, iões de metal pesado são ligados mais fortemente do que suas contrapartes de peso molecular inferior similarmente carregadas. Por exemplo, Cu+2 é uniformemente quelado mais fortemente do que Ca+2, levando-se em conta a capacidade, em alguns casos, de usar sais de cálcio dos quelantes fornecidos. De forma a avaliar a resistência relativa, uma constante de estabilidade com relação ao ião de cobre no pH da formulação é usada aqui como um padrão arbitrário para comparação de quelantes. Essas constantes de estabilidade são, naturalmente, dependentes do pH. Eles estão prontamente disponíveis na literatura e podem ser encontradas, por exemplo, em Perrin, D. D. e outros, "Buffers for pH and Metal Ion Control" Chapman & Hall, Londres, N.Y., (1974) e, em particular, em International Union of Pure & Applied Chemistry: "Stability Constants", supl. 1 (1971) Alden press, Oxford. Usando os valores para estabilidade dos complexos de Cu+2 encontrados nessas referências como uma medida da resistência do quelante, 27 pode-se ajustar classificações da resistência do quelante. Os valores de "log beta" são usados, esses sendo os logaritmos negativos da constante de dissociação para o complexo. Quanto maior o valor de log-beta, portanto, mais forte a associação entre o ião de cobre e a porção de quelação. Naturalmente, o pH no qual a determinação é feita é significativo, uma vez que vários grupos ácido carboxilico contidos no quelante ligam-se mais fortemente ao ião capturado quando eles são negativamente carregados.

Particularmente úteis na invenção são quelantes com valores de log-beta para o ião de cobre (conforme determinado no pH da formulação proposta) de cerca de 7 ou mais; mais preferidos são aqueles com valores de 10 ou mais; e ainda mais preferidos são aqueles com valores de log-beta no pH de uso de 15 ou mais. Assim, por exemplo, tricina, bicina, ADA e Hl MD A são preferidos, uma vez que esses são razoavelmente fortes; ainda mais preferidos são NTA, DTPA e EDTA. Dentre os quelantes mais preferidos para uso na invenção estão EDTA e DTPA.

Um grande número de agentes de quelação é conhecido na técnica e um quelante candidato pode ser prontamente avaliado através de determinação de seu valor de log-beta com relação ao ião de cobre no pH de uso pretendido e, contanto que tenha propriedades farmaceuticamente aceitáveis as quais permitem seu uso em composições a serem administradas aos pacientes, podem ser avaliados convenientemente para uso no método da invenção e nas composições da invenção.

As solubilidades em água também deverão ser consideradas, uma vez que os vários quelantes podem estar 28 presentes em diferentes quantidades, dependendo da natureza do restante da formulação.

Embora o agente de quelação esteja presente em quantidades para estabilização, o percentual em peso total de agente de quelação pode ser de cerca de 0,001% a cerca de 1,0% (peso/peso) da formulação global. De preferência, o percentual em peso total de agente de quelação está presente em quantidade de cerca de 0,01% a cerca de 0,1% (peso/peso) . Esses valores referem-se ao produto final reconstituído para indicações farmacêuticas. Se a formulação é liofilizada, a percentagem de agente de quelação no bolo seco pode ser tão alta quanto cerca de 10 a cerca de 40%. Portanto, na forma seca, o agente de quelação pode estar presente em quantidade de cerca de 0,01% a cerca de 40% em peso no total, de preferência cerca de 1,0% a cerca de 30%. Conforme aqueles versados na técnica reconhecerão, a percentagem do agente de quelação na formulação varia, dependendo do agente de volume usado em particular para formular o composto activo. Evidentemente, quanto maiores os níveis de iões de metal problemáticos presentes no agente de composição de volume ou, de outro modo, na composição, maiores os níveis de quelante requeridos. Isso é uma questão simples, usando as técnicas descritas aqui abaixo, para determinar as concentrações óptimas do agente de quelação. A presente invenção será mais prontamente compreendida através de referência aos exemplos a seguir, os quais são fornecidos para ilustrar a invenção ao invés de limitar seu escopo.

Exemplo I 29

Materiais e Métodos LTB4 (forma ácida) foi obtido da Cascade Biochem (Reino Unido) em solução de etanol/água, 95/5. 0 nível de pureza desse material de iniciação era cerca de 98,5% (±0,3%), conforme avaliado através de HPLC de fase reversa. A solução etanólico de sal de Na de LTB4 foi evaporada até secagem sob pressão reduzida usando um rotoevaporador e um banho de água (30 °C) , até que um resíduo oleoso fosse obtido. O resíduo foi redissolvido em solução salina de Dulbecco tamponada com fosfato (DPBS) em um pH de 7,4 contendo ou não ácido etilenodiaminatetraacético (EDTA) a 0,01% para obter uma concentração final de 5 mg de LTB4/ml. As soluções foram distribuídas em frascos de vidro de borossilicato do tipo I de 2 ml os quais foram, então, vedados sob árgon usando rolhas de borracha revestidas de Teflon e tampas de alumínio. As amostras foram armazenadas no escuro a 25 ± 5 °C até análise nos pontos de tempo indicados. Análise das soluções de LTB4 foi realizada através de HPLC de fase reversa usando uma coluna C18, partícula de 5 μ, 4,7 X 250 mm (Nucleosil) e eluição em gradiente de metanol/cetonitrilo; detecção de LTB4 e impurezas foi realizada on line usando um espectrofotómetro por UV para HPLC a 270 nm.

Resultados

Conforme mostrado na figura 1, as soluções de sal de Na de LTB4 a 5 mg/ml sem EDTA já mostraram um nível aumentado de impurezas após 7 dias de armazenamento a 25 °C e o nível de impurezas atingiu 23,3% da área de pico de LTB4 após 14 dias de armazenamento. Em contraste, as soluções de sal de Na de LTB4 a 5 mg/ml contendo EDTA a 0,01% não mostraram 30 aumento de degradação até 14 dias de armazenamento e tinham níveis de impurezas de 2,9% e 8,6% após 60 e 90 dias de armazenamento a 25 °C, respectivamente. Esses dados demonstram claramente que o EDTA diminui dramaticamente a degradação de soluções aquosas de sal de Na de LTB4.

Exemplo II

Materiais e métodos

Uma solução de LTB4 (forma ácida) na concentração de 12 mg/ml em etanol/água, 95/5 (da Cascade Biochem, Reino

Unido) foi neutralizada com um equivalente de hidróxido de sódio para geral o sal de Na. Esse material de partida usado em experiências descritas nos Exemplos 2 a 7, tinha um nível de pureza de 96,8% (± 0,3%), conforme avaliado através de HPLC de fase reversa. A solução etanólica de sal de Na de LTB4 foi evaporada (veja Exemplo 1) até que um resíduo oleoso fosse obtido. O resíduo foi, então, redissolvido em um tampão de solução de cloreto de sódio tamponada com fosfato (salina) (fosfato de sódio a 30 mM, pH de 7,5) contendo EDTA a 0,01% de forma a obter uma solução isotónica de sal de Na de LTB4 a 25 mg/ml. A solução de sal de Na de LTB4 a 0,1 mg/ml foi obtida através de diluição da solução a 25 mg/ml com uma solução salina tamponada com fosfato de sódio a 30 mM isotónica, pH de 7,5, contendo EDTA a 0,01%. Alíquotas das soluções foram distribuídas em frascos de vidro do tipo I de 2 ml conforme descrito no Exemplo 1 e armazenadas sob ar, no escuro, a 40 ± 5 °C. LTB4 e impurezas foram analisadas nos tempos indicados através de HPLC de fase reversa usando detecção por UV a 270 nm.

Resultados 31 A figura 2 mostra os resultados de um estudo de degradação forçada (40 °C) das soluções aguosas isotónicas, pH de 7,5, do sal de Na de LTB4 em concentrações de 0,1 e 25 mg/ml. Os dados demonstram claramente que a solução a 25 mg/ml de sal de Na de LTB4 é muito menos estável do que a solução de sal de Na de LTB4 a 0,1 mg/ml, indicando uma relação inversa entre a estabilidade e a concentração nas soluções de sal de Na de LTB4. A estabilidade de uma solução de sal de Na de LTB4 a 0,01 mg/ml era similar àquela da solução a 0,1 mg/ml (dados não mostrados).

Exemplo 3

Materiais e Métodos

Soluções aquosas isotónicas de sal de Na de LTB4 na concentração de 1,75 mg/ml em solução salina tamponada com fosfato/glicina (tampão de fosfato de sódio a 3 mM e glicina a 10 mM, pH de 7,5, 8,5, 9,5 e 10,5) contendo EDTA a 0,01% foram obtidas através de diluição de uma solução a 25 mg/ml de sal de Na de LTB4 (ver Exemplo 2) com a solução salina tamponada com fosfato/glicina apropriada contendo EDTA a 0,01%. As soluções foram distribuídas em frascos de 2 ml para armazenamento sob ar, no escuro, a 4 ± 4 °C e 20 ± 5 °C durante 9 meses antes de análise por HPLC de fase reversa do LTB4 e impurezas, conforme descrito no Exemplo 1.

Resultados A figura 3 mostra claramente que aumento do pH das soluções aquosas isotónicas de sal de Na de LTB4 aumenta visivelmente a estabilidade do LTB4, conforme observado pelos níveis reduzidos de impurezas detectados através de 32 análise por HPLC das amostras. Esse efeito de estabilização do pH alcalino sobre soluções de sal de Na de LTB4 foi observado a 4 °C e 20 °C, indicando que o efeito de estabilização do pH alcalino não é dependente da temperatura. Em estudos de degradação forçada (armazenamento a 40 °C) , o aumento do pH das soluções de sal de Na de LTB4 também resultou em um aperfeiçoamento dramático da estabilidade da solução de sal de Na de LTB4 (dados não apresentados).

Exemplo 4

Materiais e métodos

Soluções aquosas isotónicas de sal de Na de LTB4 na concentração de 17,5 μg/ml foram obtidas através de diluição em solução salina tamponada com fosfato (tampão de fosfato de sódio a 3 mM, pH de 7,5, 8,5, 9,5 e 10,5) contendo EDTA a 0,01% de uma solução de sal de Na de LTB4 a 25 mg/ml (Exemplo 2). Soluções de sal de Na de LTB4 a 17,5 μρ/ιηΐ de 4 pHs diferentes foram distribuídas em frascos de 2 ml para armazenamento sob ar, no escuro, a 4 ± 4 °C ou 20 ± 5 °C durante 15 meses antes de análise por HPLC de fase reversa do LTB4 e impurezas, conforme descrito no Exemplo 1.

Resultados A figura 4 mostra claramente que aumento do pH das soluções aquosas isotónicas de sal de Na de LTB4 a 17,5 μρ/ιτιΐ aumenta visivelmente a estabilidade do LTB4, conforme observado pelo nível reduzido de impurezas detectado através de análise por HPLC das amostras. Esse efeito de estabilização do pH alcalino sobre soluções de sal de Na de 33 LTB4 a 1,75 μg/ml era muito mais evidente a 20 °C uma vez que, a 4 °C, as mesmas soluções mostraram muito pouca degradação do LTB4 após 15 meses de armazenamento. Esses dados, junto com os dados mostrados na figura 3, demonstram que o efeito de estabilização do pH alcalino é claramente observado com soluções de sal de Na de LTB4 a 1,75 mg/ml, bem como a 1,75 μρ/ιτιΐ e, portanto, que o efeito de estabilização do pH alcalino ocorre sobre uma ampla faixa de concentrações de LTB4.

Exemplo 5

Materiais e métodos

Soluções aquosas isotónicas de sal de Na de LTB4 na concentração de 35 e 350 μg/ml em solução salina tamponada com fosfato (tampão de fosfato de sódio a 3 mM, pH de 9,5) contendo EDTA a 0,01% e várias concentrações de glicina (de 0,01 mM a 10 mM) foram obtidas através de diluição de uma solução de sal de Na de LTB4 a 25 mg/ml (Exemplo 2) . Soluções de sal de Na de LTB4 a 35 e 350 μρ/ιηΐ nas 4 concentrações diferentes de glicina foram distribuídas em frascos de 2 ml para armazenamento sob ar, no escuro, a 40 ± 5 °C durante 5 meses antes de análise por HPLC de fase reversa do LTB4 e impurezas, conforme descrito no Exemplo 1.

Resultados

Nessa experiência, uma solução de sal de Na de LTB4 a 35 μg/ml, pH de 7,5, contendo glicina a 10 mM e armazenada durante 5 meses a 40 °C mostrou um nível de impurezas de 20% (dados não mostrados) . A figura 5 mostra que a mesma solução de sal de Na de LTB4 a 35 mas em um pH de 34 9,5, era mais estável, conforme indicado pelo menor nível de impurezas medido (6,5%) e demonstra claramente que a concentração do tampão de glicina oscilando de 0,01 mM a 10 mM tinha pouco impacto sobre a estabilidade das soluções de sal de Na de LTB4. Uma observação muito similar foi feita com soluções de sal de Na de LTB4 a 350 μρ/ιηΐ, pH de 9,5, armazenadas durante 5 meses a 40 °C, nas mesmas 4 concentrações diferentes de glicina.

Exemplo 6

Materiais e métodos

Soluções aquosas isotónicas de sal de Na de LTB4 na concentração de 35 μρ/ιηΐ em solução salina tamponada com fosfato (tampão de fosfato de sódio a 3 mM, pH de 7,5 ou 9,5) contendo EDTA a 0,01% foram obtidas conforme descrito no Exemplo 5. Manitol foi adicionado a todas as soluções até a concentração final de 4% de forma a gerar um resíduo sólido (pão de manitol) contendo sal de Na de LTB4 e todos os componentes do excipiente quando de liofilização. Albumina de soro humano isenta de ácido gordo livre (deslipidado) (HSA, Sigma Chemicals, St-Louis, MO) foi adicionada a algumas das soluções até a concentração final de 1 mg/ml antes de ajuste do pH final (para 7,5 ou 9,5). As soluções foram distribuídas em frascos de 2 ml, congeladas a -20 °C e liofilizadas. Os frascos contendo as soluções liofilizadas (pães de manitol) foram, então, vedados conforme descrito no Exemplo 1 (mas ar em vez de árgon) e armazenadas no escuro a 40 ± 5 °C. Após 1,5 ou 4,5 meses, os frascos foram abertos e os pães de manitol (contendo LTB4) foram dissolvidos usando 1 ml de água para regenerar as soluções de sal de Na de LTB4 a 35 μρ/ιηΐ. LTB4 35 e impurezas foram, então, analisadas através de HPLC de fase reversa, conforme descrito no Exemplo 1.

Resultados A figura 6 mostra que uma solução de sal de Na de LTB4 liofilizada a 35 μg/ml, pH de 7,5, imediatamente redissolvida em água após liofilização (tempo 0) mostra um nível de impurezas de 2,9% e que amostras liofilizadas idênticas armazenadas 1,5 e 4,5 meses a 40 °C mostram níveis de impurezas de 22,7% e 51,3%, respectivamente. A figura 6 também mostra que a adição de HSA a uma solução de sal de Na de LTB4 (pH de 7,5) antes de liofilização resulta em uma diminuição de aproximadamente 50% no nível de impurezas após 1,5 meses de armazenamento. A figura 6 também mostra claramente que elevação do pH de 7,5 para 9,5 em soluções de LTB4 antes de liofilização resulta em uma diminuição visível no nível de impurezas, conforme observado após 1,5 meses de armazenamento (na presença de HSA) ou após 4,5 meses de armazenamento. Esses dados demonstram claramente que o pH alcalino também intensifica a estabilidade da forma sólida de sal de Na de LTB4, isto é, após liofilização na presença de manitol e na presença ou ausência de HSA.

Exemplo 7

Materiais e métodos A solução etanólica de LTB4 (forma ácida) (EtOH/água, 95/5) obtida do fabricante (Cascade Biochem, Reino Unido) foi diluída com EtOH/água, 95/5 para gerar soluções etanólicas de LTB4 (forma ácida) a 9 e 0,9 mg/ml. Soluções etanólicas do sal de sódio de LTB4 a 9 e 0,9 mg/ml foram obtidas através da adição de 1,05 equivalentes de hidróxido 36 de sódio. Soluções do sal de sódio de LTB4 na concentração de 9 e 0,9 mg/ml em EtOH/glicina a 10 mM a 75/25 em água em um pH de 10,5 (hidróxido de sódio) foram obtidas através de mistura de 3 volumes de soluções do sal de sódio de LTB4 a 12 e 1,2 mg/ml em EtOH/água, 95/5 com 1 volume de tampão de glicina a 40 mM em um pH de 10,5. As soluções foram distribuídas em frascos de 2 ml para armazenamento sob ar, no escuro, a -80°C e 40 ± 5°C durante 17 meses antes de análise por HPLC de fase reversa de LTB4 e impurezas, conforme descrito no Exemplo 1.

Resultados

Os resultados desse estudo de degradação forçada de soluções etanólicas de LTB4 (forma ácida) ou sal de Na de LTB4 em 2 concentrações diferentes são mostrados na figura 7. Após 17 meses de armazenamento a 40 °C, a solução etanólica (EtOH/água, 95/5) de LTB4 (forma ácida) a 9,0 mg/ml mostrou degradação completa (LTB4 não detectável), com um nível de impurezas de 100% da AUC (área sob a curva a 270 nm) . A figura 7 mostra claramente que, quando LTB4 foi transformado em seu sal de sódio através da adição de 1,05 equivalentes de hidróxido de sódio, a estabilidade da solução etanólica de sal de Na de LTB4 resultante sob condições idênticas é drasticamente aperfeiçoada, com um nível de impureza de apenas 5,4%. Similarmente, o estudo de degradação forçada da solução de sal de sódio de LTB4 em glicina a 10 mM/EtOH a 75/25, pH de 10,5, demonstrou que, sob um pH alcalino, o sal de sódio de LTB4 é visivelmente mais estável (nível de impureza de 3,8%) do que o LTB4 em sua forma ácida em EtOH/água, 95/5. As mesmas conclusões podem ser tiradas para soluções de LTB4 (forma ácida) e sal 37 de sódio de LTB4 em uma concentração 10 vezes menor (0,9 mg/ml), com uma estabilidade aumentada do sal de sódio de LTB4 em EtOH/água a 95/5 ou EtOH/glicina a 10 mM a 72/25, pH de 10,5 (niveis de impurezas de 4,9 e 4,3% da AUC, respectivamente) com relação à forma ácida de LTB4 em EtOH/água a 95/5 (nível de impureza de 62% da AUC) . Os níveis de impureza medidos nas mesmas 3 formulações etanólicas de LTB4 a 9 e 0, 9 mg/ml armazenadas a -80 °C durante 17 dias variavam de 2,8 a 3,7% da AUC (dados não mostrados). A Tabela 1 abaixo mostra os valores de pH medidos nas formulações etanólicas de LTB4 armazenadas durante 17 meses a -80 °C e 40 °C. Os dados demonstram claramente que estabilidade intensificada corresponde a um maior pH das formulações. Finalmente, a figura 7 também mostra que, em analogia às observações feitas com soluções aquosas de sal de Na de LTB4, soluções mais concentradas (9 mg/ml) de LTB4 em EtOH/água a 95/5 são menos estáveis do que a solução mais diluída (0,9 mg/ml) de LTB4 nas mesmas condições experimentais.

Tabela 1: pH1 evidente em formulações etanólicas de LTB4

Formulação -8 0°C + 40°C 9 mg/ml, forma ácida em EtOH/água a 95/5 <\ O co to 5,27 9 mg/ml, sal de sódio em EtOH/água a 95/5 10, 15 9, 68 38

Formulação -80°C + 40°C 9 mg/ml, sal de sódio em EtOH/tampão3 a 75/25 12.54 10, 07 0,9 mg/ml, forma ácida em EtOH/água a 95/5 7,25 5,26 0,9 mg/ml, sal de sódio em EtOH/água a 95/5 9,80 9, 77 0,9 mg/ml, sal de sódio em EtOH/tampão3 a 75/25 10,77 10,17 pH foi medido usando um eletrodo de combinação de pH misto de microtamanho Fisher Scientific Accumet, à temperatura ambiente. 2 pH foi medido após 17 meses de armazenamento nas temperaturas indicadas. 3 glicina a 10 mM/NaOH, pH 10,5

Exemplo 8

Materiais e métodos LTB4 e análogos foram obtidos como soluções etanólicas, na forma ácida. LTB4 era da Cascade Biochem (Reino Unido), LTB5 foi obtido da Biomol (Plymouth Meeting, PA, EUA) e todos os outros compostos (LTB3, trifluoro-LTB4, 20-hidroxi-LTB4 e 5-HETE) foram obtidos da Cayman Chemicals (Ann Arbor, MI, EUA) . Soluções etanólicas do sal de sódio 39 dos vários agentes de LTB4 (LTB4 e análogos) foram obtidas através da adição de 1 equivalente de hidróxido de sódio. As soluções etanólicas do sal de sódio de agentes de LTB4 foram evaporadas até secagem sob uma corrente de azoto e redissolvidas na concentração de ~35 μg/ml em solução salina tamponada com fosfato (30 mM) contendo glicina a 10 mM, EDTA a 0,01%, ajustada para um pH de 7,5 ou pH de 9,5 com hidróxido de sódio. Aliquotas das soluções foram tomadas para análise imediata (t0) e as soluções restantes de sal de Na do agente de LTB4 a 35 μg/ml foram distribuídas em frascos de 2 ml para armazenamento sob ar, no escuro, a 40 ± °C durante seis meses antes de análise por HPLC de fase reversa dos agentes de LTB4 e impurezas, conforme descrito no Exemplo 1.

Resultados

Nesta experiência, as várias soluções de sal de sódio de agentes de LTB4 a 35 μg/ml mostraram um nível de impureza inicial (t0) de 2 a 15%, conforme mostrado na figura 8 (barras vazias). A figura 8 mostra < que os níveis de impurezas em todas as soluções de agente de LTB4 armazenadas durante seis meses a 40 °C em um pH de 7,5 aumentaram significativamente (barras cinzentas). A figura 8 também mostra que soluções dos mesmos agentes de LTB4 armazenadas durante seis meses a 40 °C, mas em um pH maior de 9,5, são significativamente mais estáveis, conforme demonstrado pelos menores níveis de impureza de todas as soluções (barras pretas).

Exemplo 9

Materiais e métodos 40 LTB4 e análogos foram obtidos como soluções etanólicas, na forma ácida. Enantio-LTB4 era da Cascade Biochem (Reino Unido) e todos os outros compostos (6-trans-LTB4, 12-epi-LTB4 e 6-trans-12-epi-LTB4) foram obtidos da Cayman Chemicals (Ann Arbor, MI, EUA) . Soluções etanólicas do sal de sódio de vários agentes de LTB4 (LTB4 e análogos) foram obtidas através da adição de 1 equivalente de hidróxido de sódio. As soluções etanólicas do sal de sódio de agentes de LTB4 foram evaporadas até secagem sob uma corrente de azoto e redissolvidas na concentração de ~35 μg/ml em solução salina tamponada com fosfato (30 mM) contendo glicina a 10 mM, EDTA a 0,01%, ajustada para um pH de 7,5 ou pH de 9,5 com hidróxido de sódio. Aliquotas das soluções foram tomadas para análise imediata (to) e as soluções restantes de sal de Na do agente de LTB4 a 35 μg/ml foram distribuídas em frascos de 2 ml para armazenamento sob ar, no escuro, a 40 ± °C durante seis meses antes de análise por HPLC de fase reversa dos agentes de LTB4 e impurezas, conforme descrito no Exemplo 1.

Resultados

Nessa experiência, as várias soluções de sal de sódio de agentes de LTB4 a 35 μg/ml mostraram um nível de impureza inicial (t0) de 2 a 5%, conforme mostrado na figura 9 (barras vazias) . A figura 9 mostra que os níveis de impurezas em todas as soluções de agente de LTB4 armazenadas durante seis meses a 40 °C em um pH de 7,5 aumentaram significativamente (barras cinzentas). A figura 9 também mostra que soluções dos mesmos agentes de LTB4 armazenadas durante seis meses a 40 °C, mas em um pH maior de 9,5, são significativamente mais estáveis, conforme 41 demonstrado pelos menores níveis de impureza de todas as soluções (barras pretas).

Exemplo 10

Materiais e métodos

Uma solução etanólica de LTB4 (forma ácida) obtida da Cascade Biochem (Reino Unido) foi neutralizada através da adição de 1 equivalente de hidróxido de sódio para gerar sal de sódio de LTB4. Aliquotas da solução etanólica do sal de sódio de LTB4 foram distribuídas em frascos de 2 ml (para obter 2 mg de LTB4 por frasco) e o solvente foi evaporado até secagem sob uma corrente de azoto. Os resíduos nos frascos foram dissolvidos com cloreto de sódio a 0,9% (NaCl) (frasco 1), NaCl a 0,9% em NaOH a 0,1 mN (frasco 2) , NaCl a 0, 9% em NaOH a 1 mN (frasco 3) , NaCl a 0,9% em NaOH a 10 mN (frasco 4), NaCl a 0,3% em NaOH a 0,1N (frasco 5) e em NaOH a IN (frasco 6) . Aliquotas das soluções foram tomadas para análise imediata (t0) e as soluções restantes do sal de sódio de LTB4 a 2 mg/ml foram armazenadas sob ar, no escuro, a 40 ± 5 °C durante cinco semanas, antes de análise através de HPLC de fase reversa do LTB4 e impurezas, conforme descrito no Exemplo 1.

Resultados

Os resultados desse estudo de degradação forçada de soluções aquosas de sal de sódio de LTB4 em concentrações crescentes de hidróxido de sódio (pH crescente) são mostrados na figura 10. Os dados obtidos demonstram que o sal de sódio de LTB4 foi completamente degradado, com níveis de impurezas a 100% (LTB4 não detectável) nos frascos número 1 e número 2 nos quais o pH tinha caído para valores abaixo de um pH de 5 após cinco semanas de 42 armazenamento a 40 °C. Em contraste, nos fracos 3 a 6, nos quais o pH final (após cinco semanas) era de 8,02, 9, 83, 12,50 e 13,03, respectivamente, os niveis de impureza foram medidos a 5, 34, 3, 46, 4,38 e 5,77 (% da AUC a 270nm) , respectivamente. Niveis iniciais de impureza (a t0) variavam de 2,65 a 3,35%. Esses dados demonstram claramente que soluções de sal de sódio de LTB4 são visivelmente estabilizadas a um pH alcalino, por uma faixa muito ampla de pH e na ausência de um tampão e um agente de quelação.

Exemplo 11

Nesse exemplo, a farmacocinética do LTB4 em ratos após administração através de três vias distintas, intravenosa (i.v.), intrajejunal (i.j.) e subcutânea (s.c.), foi investigada.

Três grupos de três ratos Sprague-Dawley fêmeas (-250 g de peso) foram usados; os animais foram submetidos a jejum durante 18 horas, anestesiados com cetamina/xilazina e uma cânula foi inserida nas veias jugulares para permitir amostragem repetida de sangue. LTB4 foi administrado na dose de 50 μg/kg no volume de dose de 4 ml/kg para todas as vias. Amostras de sangue (0,5 ml/amostra) foram tomadas a 0, 0,5, 1, 2, 5, 15, 30 e 60 minutos após injecção de LTB4. As amostras de sangue foram imediatamente anti-coaguladas com EDTA e transferidas para um banho de água gelada até centrifugação para isolamento do plasma. Amostras de plasma foram armazenadas a -80 °C até serem analisadas quanto ao teor de LTB4 usando um ELISA comercial (Cayman Chemicals, Ann Arbor, MI, EUA). A administração i.v. (bolus de 15 seg.) de LTB4 foi feita através de veia caudal; para administração i.j·, LTB4 foi directamente injectado no 43 jejuno após abertura da cavidade abdominal; administração s.c. foi feita na região dorsal. A figura 11A mostra a farmacocinéticas do LTB4 após administração i.j. na dose de 50 μρ/kg em ratos. Os dados mostram que a concentração plasmática de LTB4 aumenta rapidamente em ratos após injecção i.j., atingindo um nivel máximo de 5 minutos após administração i.j.; os dados também mostram que os niveis de LTB4 no plasma retornam para os niveis da linha de base 30 minutos após administração i.j. Esses dados mostram claramente que o LTB4 é eficazmente transferido do jejuno para a circulação periférica. A figura 11B proporciona uma comparação da área sob a curva (AUC) (para a concentração de LTB4 no plasma) para as três diferentes vias de administração. Nesse caso, o parâmetro farmacocinético AUC indica a exposição sistémica ao fármaco. Conforme esperado, o LTB4 administrado directamente na circulação (injecção i.v.) resultou na maior AUC. Contudo, esses dados também mostram claramente que a AUC para a injecção i.j. de LTB4 é tão alta quanto 35% aquela do LTB4 i.v., demonstrando que, quando de administração i.j., a captação de LTB4 na circulação é eficaz. Esses dados ainda sugerem que a administração oral de LTB4 usando uma formulação apropriada para distribuição ao intestino delgado representa uma via eficaz para administração sistémica do fármaco. A AUC para administração s.c. de LTB4 é mostrada para fins de comparação. Administração subcutânea é conhecida na técnica como sendo uma forma eficaz de administração de LTB4 em modelos com ratos. 44

REFERÊNCIAS CITADAS NA DESCRIÇÃO

Esta lista das referências citadas pelo requerente serve apenas para conveniência do leitor. Esta lista não faz parte do documento da patente europeia. Apesar da compilação cuidadosa das referências, os erros ou as omissões não podem ser excluídos e o EPO não assume qualquer responsabilidade a este respeito.

Documentos de patente citados na descrição: • WO 03105823 A [0005]

Literatura não relacionada com patentes citada na descrição: • Marleau et al. J. Immunol., 1993, vol. 150, 206 [0036] • Marleau et al. Br. J. Pharmacol., 1994, vol. 112, 654 [0036] • Perrin, D. D. et al. Buffers for pH and Metal Ion Control. Chapman & Hall, 1974 [0067] • Stability Constants. International Union of Pure & Applied Chemistry. Alden press, 1971 [0067]

Lisboa, 19/10/2010

Claims (20)

1. 45 REIVINDICAÇÕES 1. Formulação farmacêutica estabilizada de agente de LTB4, caracterizada por compreender uma quantidade terapeuticamente eficaz de um agente de LTB4, um sal do mesmo, um éster do mesmo ou um éter do mesmo, em associação com um veículo farmaceuticamente aceitável em um pH alcalino entre 8,2 e 14, eficaz para estabilizar o referido agente de LTB4, desse modo, aumentando a vida útil da referida formulação, ou um veículo alcalinizante farmaceuticamente aceitável; em que o agente de LTB4 é um ou mais dos ácidos gordos polinsaturados seleccionados do grupo constituído por LTB4, 14,15-dihidro-LTB4, 17,18-desidro-LTB4, 19- hidroxi-LTB4, 20-hidroxi-LTB4, ácido 5(S)-hidroxi- 6,8,11,14 (E,Z,Z,Z)-eicosatetraenóico ("5-HETE"), 14,15-dihidro-5-ΗΕΤΕ, 17,18-dehidro-5-HETE, e em que um veículo alcalinizante é , exceptuando isso, uma ou mais substâncias inertes farmaceuticamente aceitáveis, a qual gera um micro-pH entre 8,2 e 14 em torno de cada partícula de LTB4, no caso da formulação estabilizada de LTB4 estar na forma liofilizada, cristalina ou amorfa sólida, quando água é adsorvida nas partículas da mistura ou quando água é adicionada em pequenas quantidades à mistura.
2. 2. Composição, caracterizada por compreender um agente de LTB4, de acordo com a reivindicação 1, um sal do mesmo, um éster do mesmo ou um éter do mesmo, em associação com um veículo farmaceuticamente aceitável em um pH 46 alcalino entre 8,2 e 14 ou um veículo alcalinizante farmaceuticamente aceitável, em que o agente de LTB4 é um ou mais dos ácidos gordos polinsaturados seleccionados do grupo constituído por LTB4, 14,15-dihidro-LTB4, 17,18-dehidro-LTB4, 19- hidroxi-LTB4, 20-hidroxi-LTB4 ,ácido 5(S)-hidroxi-6,8,11,14 (E,Z,Z,Z)-eicosatetraenóico ( "5-HETE"), 14,15-dihidro-5-ΗΕΤΕ, 17,18-desidro-5-HETE e 1 em que o veículo alcalinizante é, exceptuando isso, uma ou mais substâncias inertes f armaceuticamente aceitáveis, a qual gera um micro-pH alcalino entre 8,2 e 14 em torno de cada partícula de LTB4, no caso da composição estabilizada de LTB4 estar na forma liofilizada, cristalina ou amorfa sólida, quando água é adsorvida nas partículas da mistura ou quando água é adicionada em pequenas quantidades à mistura.
3. 3. Composição ou formulação estabilizada de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 ou 2, em que a composição ou formulação estabilizada compreende apenas substâncias não tóxicas.
4. 4. Composição ou formulação estabilizada de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 ou 3, em que o referido pH alcalino está compreendido entre 8,5 e 11.5.
5. 5. Composição ou formulação estabilizada de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, em que o referido pH alcalino está compreendido entre 9,5 e 11.5.
6. 6. Composição ou formulação estabilizada de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizada por estar na forma liquida ou na forma liofilizada ou na forma cristalina ou na forma amorfa sólida. 2
7. 7. Composição ou formulação estabilizada de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, em que o referido veiculo é um veiculo aquoso.
8. 8. Composição ou formulação estabilizada de acordo com a reivindicação 7, em que o referido veiculo aquoso é seleccionado a partir do grupo constituído por água, soluções de hidróxidos de metais alcalinos, tal como solução de hidróxido de sódio, soluções salinas tamponadas, tal como Solução Salina Tamponada com Fosfato (PBS), solução aquosa contendo álcool, soluções de açúcar, ou uma mistura dos mesmos.
9. 9. Composição ou formulação estabilizada de acordo com a reivindicação 8, em que o álcool da referida solução aquosa que contém álcool é seleccionado a partir do grupo constituído por etanol, propilenoglicol, álcool benzílico, propanodiol, glicerol e manitol.
10. 10. Composição ou formulação estabilizada de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, em que o referido veículo é um veículo seleccionado do grupo constituído por solventes orgânicos e uma mistura dos mesmos e água.
11. 11. Composição ou formulação estabilizada de acordo com a reivindicação 10, em que a referida mistura compreende água e pelo menos 50% (vol/vol) , de preferência pelo menos 60% (vol/vol) de álcool. 3
12. 12. Composição ou formulação estabilizada de acordo com a reivindicação 11, em que o referido álcool é seleccionado a partir do grupo constituído por etanol, propilenoglicol, álcool benzílico, propanodiol, glicerol e manitol.
13. 13. Composição ou formulação estabilizada de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, em que o referido veiculo é um sólido em partículas revestido com uma matriz alcalina ou constituído de uma matriz alcalina.
14. 14. Composição ou formulação estabilizada de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, em que o referido agente de LTB4 é leucotrieno B4[ácido 5S,12R-dihidroxi-6,8,10,14(Ζ,Ε,Ε,Ζ)-eicosatetraenóico] ("LTB4").
15. 15. Composição ou formulação estabilizada de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, em que o referido agente de LTB4 é seleccionado a partir do grupo constituído por: LTB4, 14,15-dihidro-LTB4 ("LTB3"), 17,18-dehidro-LTB4 ( "LTB5") , 19-hidroxi-LTB4, 20-hidroxi-LTB4; éster metílico de LTB4 e éster etílico de LTB4; ácido 5 (S)-hidroxi-6,8,11,14 (Ε,Ζ,Ζ,Ζ)- eicosatetraenóico ("5-HETE"), 14,15-dihidro-5-HETE e 17,18-dehidro-5-HETE.
16. 16. Composição ou formulação estabilizada de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 15, em que o 4 referido agente LTB4 está presente em quantidades entre cerca de 0,1 pg/ml e 25 mg/ml da formulação.
17. 17. Composição ou formulação estabilizada de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 16, em que o referido agente LTB4 está presente em quantidades entre cerca de 1 gg/ml e 1 mg/ml da formulação.
18. 18. Composição ou formulação estabilizada de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 18, que compreende menos de 25% (vol/vol) de acetonitrilo.
19. 19. Composição ou formulação estabilizada de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 18, que compreende ainda um revestimento entérico como camada externa.
20. 20. Composição ou formulação estabilizada de acordo com a reivindicação 19, que compreende ainda uma camada separadora entre o núcleo, que contém um agente de LTB4 e um veículo alcalinizante, e a camada externa. Lisboa, 19/10/2010