JPH04248993A - 光学的に純粋な（Ｓ）−α−〔（ターシヤリー−ブチルスルホニル）メチル〕ヒドロ桂皮酸の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】本発明は、一般式

【０００２】

【化３】

【０００３】［式中、Ｒ１はＣ１−４アルキルを意味す
る］のラセミ体状（ＲＳ）−α−［（ターシャリー−ブ
チルスルホニル）メチル］ヒドロ桂皮酸エステルの酵素
的−動力学的分割による、式

【０００４】

【化４】

【０００５】の光学的に純粋な（Ｓ）−α−［（ターシ
ャリー−ブチルスルホニル）メチル］ヒドロ桂皮酸の新
規な製造方法に関するものである。

【０００６】本明細書中で使用されている「Ｃ１−４ア
ルキル」という語は、炭素数が１−４の直鎖および分枝
鎖状のアルキル基、例えばメチル、エチル、プロピル、
イソプロピル、ブチルなど、好適にはメチルまたはエチ
ル、特にエチル、を称している。

【０００７】

【化５】

【０００８】［式中、Ｒ１は上記の意味を有する］の化
合物が得られる。これらの化合物は一般的方法に従い容
易に分離することができる。

【０００９】微生物または脊髄動物器官から得られたあ
る種の微生物またはある種の酵素の選択により、ラセミ
体混合物からエナンチオマー−純粋中間生成物を製造す
るためのそれらの将来性のある用途が可能となる。希望
するエナンチオマー分子をその後に目標化合物に転化さ
せることができる。この微細物または酵素により触媒作
用を受ける異性体類の分割は、例えばジアステレオマー
誘導体類の化学的分割および高圧液体クロマトグラフィ
ーの如き伝統的な費用のかかる方法の魅力的な代用方法
を与えるものである。

【００１０】カトウ（Ｋａｔｏ）他は、コリネバクテリ
ウム・エクイ（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｅｑ
ｕｉ）ＩＦＯ３７３０が種々のエステル類をエナンチオ
選択的に加水分解することができると報告している（テ
トラヘドロン・レタース（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌ
ｅｔｔｅｒｓ）、２８巻、Ｎｏ．１２、１９８７、１３
０３−１３０６頁）。彼らの研究では、２−ベンジルオ
キシ−置換されたアルカン−およびアリール−アルカン
カルボン酸エステル類の非対称性加水分解用に微生物が
使用されていた。未反応の低級アルキルエステル類は光
学的に活性なＳ−形で高いエナンチオマー過剰量で（＞
９９％誤差除外）回収された。基質のアルキルまたはア
ルケニル残基のフェニルメチル基での置換により立体選
択性の逆転が起こり、すなわち該化合物が光学的に活性
なＲ−形で同様に高いエナンチオマー純度で得られると
いうことも立証されていた。

【００１１】キタズメ（Ｋｉｔａｚｕｍｅ）他は豚の肝
臓からのエステラーゼを用いる２−フルオロ−２−メチ
ルマロン酸ジエステル類の非対称性加水分解方法を記載
しており、それに従うと光学的に活性な（−）−２−フ
ルオロ−２−メチルマロン酸モノエステル類が低いエナ
ンチオマー純度であるが得られる。それにより光学的に
活性な（＋）−または（−）−２−フルオロ−２−置換
されたマロン酸モノエステル類が得られるようなエステ
ラーゼおよびセルラーゼを用いる２−フルオロ−２−置
換されたマロン酸ジエステル類の微生物による加水分解
も記載されている（ザ・ジャーナル・オブ・ザ・オーガ
ニック・ケミストリイ（Ｊ．　Ｏｒｇ．　Ｃｈｅｍ．）
、５１、１９８６、１００３−１００６頁）。

【００１２】イウチジマ（Ｉｕｃｈｉｊｉｍａ）他はエ
ステル類のラセミ体混合物の非対称性加水分解による光
学的に活性な２−クロロ−および２−ブロモ−置換され
たアルキルエステル類および酸類の製造方法を記載して
おり、それによると微生物類リゾプス、ムコル、アスペ
ルギルス、カンジダ、シュードモナス、アルカリゲネス
、アクロモバクターおよびバシルスまたはこれらの微生
物から得られた酵素が使用されていた（公開日本特許出
願［公開］番号５７−９４．２９５［１９８２］）。

【００１３】米国特許番号４，６６８，６２８（ダホド
（Ｄａｈｏｄ）他）は、ラセミ体混合物を酵素的に加水
分解させるために該混合物をカンジダ・リパーゼと接触
させることからなる部分的に水溶性であるエステル類の
ラセミ体混合物の酵素的分割方法を記載している。特定
例は、Ｄ，Ｌ−２−クロロプロピオン酸メチルのカンジ
ダ・リパーゼで触媒作用を受ける加水分解である。

【００１４】ヨーロッパ特許公報０．３２５．９５４お
よび０．３２５．９７１（両者ともコッフェン（Ｃｏｆ
ｆｅｎ）他は、ラセミ体混合物を酵素的に加水分解する
ために該混合物を水性媒体中溶液状または懸濁液状で約
５−約１０の間並びにそれぞれ９の調節されたｐＨ値に
おいてシュードモナス・リパーセと反応させることから
なるラセミ体状ヒドロキシ−置換されたベンゾピランカ
ルボン酸エステル類またはアリールアルカン酸エステル
類の酵素的分割方法を記載している。

【００１５】ブジェルクリング（Ｂｊｏｅｒｋｌｉｎｇ
）他は、プロキラールまたはラセミ体状アリールメチル
−置換されたジアルキルマロネート類をα−キモトリプ
シンで触媒作用を受けるエナンチオ選択性加水分解によ
り対応する光学的に活性なモノアルキルエステル類に転
化させることができる方法を記載している（バイオキャ
タリシス（Ｂｉｏｃａｔａｌｙｓｉｓ）、１９８７、１
巻、８７−９８頁）。

【００１６】プグニエレ（Ｐｕｇｎｉｅｒｅ）他は、光
学的に活性な芳香族アミノ酸類を水と有機性水非混和性
溶媒との乳化液形の対応するアルキルエステル類のプロ
テアーゼで触媒作用を受けるエナンチオ選択性加水分解
により製造することができそれによりプロテアーゼが酸
化アルミニウムに固定されるということを報告している
（バイオテクノロジー・テクニックス（Ｂｉｏｔｅｃｈ
ｎｏｌｏｇｙ　Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ）、３巻、Ｎｏ．
５、１９８９、３３９−３４４頁）。

【００１７】酵素で触媒作用を受ける動力学的分割の重
要な欠点は特に、有効な基質の酵素で触媒作用を受ける
動力学的分割に関しては立体化学に対する予測を可能に
するような有用なモデルが存在していないため一定基質
用の酵素の特異性が多くの場合に予測できないことであ
る。

【００１８】本発明に従う酵素的分割を実施するために
は、式ＩＩの化合物を最初に暖めながら、任意に共−溶
媒の存在下で、水相と共に乳化させ、そしてこれを次に
酵素で処理する。乳化は１５−５５℃の、好適には３５
−４５℃の、温度において実施されるので、式ＩＩの化
合物は融解物の形状で部分的に乳化される。乳化液は０
．１−１５％（重量／容量）の、好適には６−１０％の
、式ＩＩの化合物を含有している。共−溶媒を使用する
場合には、それの量は０．１−５％（容量／容量）、好
適には１．０−１．５％、である。共−溶媒としては、
一般的な水−混和性の極性有機溶媒、例えばアルコール
類、例えばメタノールもしくはエタノール、アセトン、
ジメチルスルホキシドなど、が考えられる。水が水相と
して使用され、好適には希望により例えば塩化カルシウ
ム、塩化マグネシウム、塩化ナトリウムなどの如き塩類
または例えば燐酸ナトリウムなどの如き緩衝塩類を含有
していてもよい普通の水道水が使用される。塩の量は好
適には水相が５−５００ｍＭとなるように選択される。

【００１９】プロテアーゼ酵素としては、脊髄動物また
は微生物から得られるもの、好適には微生物、例えばα
−キモトリプシン、ＨＴプロテオリティック２００（マ
イルス・カリ−ヘミー・ＧｍｂＨ・アンド・カンパニー
、３０００、ハノーバー・クリーフェルド）、サヴィナ
ーゼ（ノヴォ、２８８０、バグスヴェルド、デンマーク
）、アルカラーゼ（ノヴォ、２８８０、バグスヴェルド
、デンマーク）、プロザイム（アマノ・ファーマシュー
ティカル・カンパニー・リミテッド、ナゴヤ、日本）な
ど、を使用することができる。オプチマーゼ、サヴィナ
ーゼおよびアルカラーゼの使用が好適であり、オプチマ
ーゼの使用が特に好適である。式ＩＩの化合物対酵素の
比は、加水分解が約２４時間後に終了するように、選択
される。

【００２０】酵素的加水分解は約６．５−８．５のｐＨ
において、好適には約７．５のｐＨにおいて、実施され
る。反応混合物のｐＨを上記範囲に保つためには、いず
れの一般的方法でも使用することができる。塩基を用い
る自動的滴定または緩衝液の使用が好適方法として挙げ
られる。自動的滴定は簡便には例えば水酸化ナトリウム
溶液または水酸化カリウム溶液の如き水性塩基を用いて
実施される。この場合には、０．１−５Ｍ、好適には１
−２Ｍ、の溶液が有利に使用される。

【００２１】この酵素的加水分解を実施する際には、式
ＩＩのラセミ対混合物を水性媒体中に乳化させ、そして
好適にはバクテリア性プロテアーゼと反応させる。一般
的には、酵素を触媒的に活性な量で使用することが好適
である。確かに、最良の結果を得るためには、触媒的に
活性な量の特定酵素の行わなければならない決定は当技
術の専門家に公知の要素に依存している。これらの要素
には、出発物質の量、酵素源、酵素の活性、酵素の純度
などが包含される。触媒的に活性な量より過剰のプロテ
アーゼを使用することもできるが、大過剰の酵素の使用
によっても結果の改良は得られない。

【００２２】上記の如く、式ＩＩのラセミ体状化合物の
酵素的加水分解は式ＩＩＡの化合物と混合された式Ｉの
化合物を生じる。これらの化合物は、酵素的加水分解が
停止した直後にすなわち適当な有機溶媒を用いる反応媒
体の直ちに行われる抽出により、分離することができる
。一般的な分離方法を使用して式Ｉの化合物を式ＩＩＡ
の化合物から単離することができる。抽出およびクロマ
トグラフィーがこれらの２種の化合物の一般的分離方法
として挙げられる。

【００２３】本発明に従う方法の重要な面は、例えば暖
めることによる基質の乳化、簡単な水性媒体の使用、高
い基質濃度の利用およびプロテアーゼの使用、特に安価
な微生物学的プロテアーゼの使用の如き適当な特殊な反
応条件を組み合わせることにより、活性を保有するだけ
でなくこれらの特殊条件下で（高温および高い基質濃度
）エナンチオ選択的である簡単で効果的なしかも経済的
なラセミ体分割が得られることである。

【００２４】本発明に従う方法により得られる化合物は
、高血圧の治療用に使用できるレニン抑制剤を製造する
ための有用な中間生成物である。本発明に従い製造でき
るものの如き化合物から該レニン抑制剤を製造するため
のプロテアーゼは当技術の専門家には知られており、そ
して例えばヨーロッパ特許出願０　３３２　００８（ブ
ランカ（Ｂｒａｎｃａ他））の如き特許文献中に記載さ
れている。

【００２５】下記の実施例は本発明をさらに詳細に説明
するものであるが、それを限定するものではない。

【００２６】エナンチオマー純度を測定するために、得
られたα−［（ターシャリー−ブチルスルホニル）メチ
ル］ヒドロ桂皮酸をＥ．バルド（Ｂａｌｄ）、Ｋ．サイ
ゴ（Ｓａｉｇｏ）およびＴ．ムカイジャマ（Ｍｕｋａｉ
ｊａｍａ）（ケミカル・レタース（Ｃｈｅｍ．　Ｌｅｔ
ｔｅｒｓ）、１９８５、１１６３）の方法に従い、（Ｒ
）−（＋）−α−メチル−ｐ−ニトロベンジルアミンと
反応させた。得られたジアステレオマー類は毛管カラム
ＰＳ０８６（１５ｍ、５０−３００℃）上でのガスクロ
マトグラフィーにより分離された。

【００２７】

【実施例】実施例１ １．６０ｇ（５．１２ミリモル）の（ＲＳ）−α−［（
ターシャリー−ブチルスルホニル）メチル］ヒドロ桂皮
酸エチルを５０ｍｌの５ｍＭ塩化カルシウム水溶液で処
理し、そして反応混合物を撹拌しながら３８℃に暖めた
。 ｐＨ値を１Ｎ水酸化ナトリウム溶液を用いて７．５に調
節した。１５０ｍｇのサヴィナーゼ６．０Ｔ（ノヴォ、
２８８０、バグスヴェルド、デンマーク）の添加により
、加水分解を開始させた。３８℃において激しく撹拌し
ながら１Ｎ水酸化ナトリウム溶液の投与による自動的滴
定を用いて、ｐＨ値を７．５に一定に保った。２．３９
ｍｌの１Ｎ水酸化ナトリウム溶液の消費後に（２１．３
時間後に）、反応混合物を５０ｍｌの酢酸エチルを用い
て２回洗浄した。水相を２５％塩酸を用いてｐＨ２．２
に酸性化し、そして５０ｍｌの酢酸エチルを用いて２回
抽出した。有機相を硫酸マグネシウム上で乾燥し、そし
て１２００Ｐａ／４０℃において蒸発させると、それに
より６９０ｍｇ（２．４２ミリモル、４７％、理論値の
９４％）の（Ｓ）−α−［（ターシャリー−ブチルスル
ホニル）メチル］ヒドロ桂皮酸が白色結晶状で得られ、
それは＞９９％のエナンチオマー過剰量を有していた。 ガスクロマトグラフィーにより純度を測定するために、
得られた化合物をシリル化すると、それは同様に＞９９
％の純度を有していた。

【００２８】実施例２ １．６０ｇ（５．１２ミリモル）の（ＲＳ）−α−［（
ターシャリー−ブチルスルホニル）メチル］ヒドロ桂皮
酸エチルの加水分解を実施例１と同様な方法で２５ｍｌ
の５ｍＭ塩化カルシウム水溶液および１００ｍｇのアル
カラーゼ２．０Ｔ（ノヴォ、２８８０、バグスヴェルド
、デンマーク）の存在下で実施した。２．４７ｍｌの１
Ｎ水酸化ナトリウム溶液の消費後に（２１．３時間後に
）、反応混合物を実施例１と同様にして処理すると、そ
れにより７００ｍｇ（２．４６ミリモル、４８％、理論
値の９６％）の（Ｓ）−α−［（ターシャリー−ブチル
スルホニル）メチル］ヒドロ桂皮酸が得られ、それはエ
ナンチオマー過剰量を有するだけでなく各場合とも＞９
９％のＧＣ純度を有していた。

【００２９】実施例３ ５４ｇの塩化カルシウムを９７ｌの水道水に加えて５ｍ
Ｍ溶液を与えた。溶液を撹拌しながら３９−４０℃にお
いて熱安定化させた。６．５０ｋｇの溶融されている（
ＲＳ）−α−［（ターシャリー−ブチルスルホニル）メ
チル］ヒドロ桂皮酸エチル（８７％ＧＣ）をこの暖かい
溶液中に撹拌しながらゆっくり注いだ。乳化液のｐＨ値
は７．９であった。３００ｇのオプチマーゼＭ４４０の
添加により加水分解を開始させ、そして撹拌しながら自
動的滴定を用いて１Ｎ水酸化ナトリウム溶液を投与する
ことによりｐＨ値を一定に保った。９．６ｌの１Ｎ水酸
化ナトリウム溶液の消費後に（２２．５時間後に）、３
ｇのＤＩＣＡＬＩＴＥスピーデックスおよび１０ｌの酢
酸エチルを反応混合物に撹拌しながら加え、そして懸濁
液を濾過した。濾液を次に４０、３０および２０ｌの酢
酸エチル（合計９０ｌ）を用いて抽出した。急速な相分
離用に、各回毎に２、０．５およびそれぞれ０．２ｋｇ
の硫酸ナトリウム（合計量２．７ｋｇ）を加えた。３種
の有機相を硫酸マグネシウム上で乾燥しそして１２００
Ｐａ／４０℃において蒸発させると、それにより２．３
９ｋｇの（Ｒ）−α−［（ターシャリー−ブチルスルホ
ニル）メチル］ヒドロ桂皮酸エチルが得られた。水相を
１．５ｌの２５％塩酸を用いてｐＨ２．２に調節し、そ
して２５および２０ｌ（合計量４５ｌ）の酢酸エチルを
用いて抽出した。第一の相分離は０．２ｋｇの硫酸ナト
リウムの添加により促進された。２種の有機相を硫酸マ
グネシウム上で、乾燥し、そして１２００Ｐａ／４０℃
において蒸発させると、それにより２．２２ｋｇ（７．
７１６モル）の（Ｓ）−α−［（ターシャリー−ブチル
スルホニル）メチル］ヒドロ桂皮酸が得られ、それはエ
ナンチオマー過剰量および各場合とも＞９９％のガス−
クロマトグラフィー純度を有していた。

【００３０】実施例４ ７９ｇ（０．２５モル）の（ＲＳ）−α−［（ターシャ
リー−ブチルスルホニル）メチル］ヒドロ桂皮酸エチル
の１０５ｍｌのジメチルスルホキシド中溶液を激しく撹
拌しながら６．２ｌの３０℃の水に滴々添加した。ｐＨ
値を０．１Ｎ水酸化ナトリウム溶液を用いて７．５に調
節した。１．０５ｇのα−キモトリプシンの添加により
、加水分解を開始させた。ｐＨ値を、自動的滴定を用い
て０．０４３Ｎ水酸化カルシウム溶液を３０℃において
投与することにより、７．５に一定に保った。２．６７
ｌの０．０４３Ｎ水酸化カルシウム溶液の消費後に（１
９．５時間後に）、反応混合物を２ｌの酢酸エチルを用
いて３回抽出した。有機相をＤＩＣＡＬＩＴＥスピーデ
ックス上で濾過し、一緒にし、そして硫酸マグネシウム
上で乾燥した。溶媒を蒸発させそして高真空下で残渣を
乾燥した後に、３５ｇ（０．１２モル、４８．３％、理
論値の９６．９％）の（Ｓ）−α−［（ターシャリー−
ブチルスルホニル）メチル］ヒドロ桂皮酸が得られた。 ガスクロマトグラフィーにより純度を測定するために、
得られた化合物をシリル化すると、それは＞９９％の純
度を有していた。

Claims (8)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　　一般式 【化１】 ［式中、Ｒ１はＣ１−４アルキルを意味する］のラセミ
   体状（ＲＳ）−α−［（ターシャリー−ブチルスルホニ
   ル）メチル］ヒドロ桂皮酸エステルを水性媒体中に乳化
   させ、そしてラセミ体（ＲＳ）−エステルを（Ｓ）−カ
   ルボン酸に選択的に転化させるためのプロテアーゼと約
   ６．５−約８．５の間のｐＨ値において反応させ、そし
   てその後に（Ｒ）−エステルおよび（Ｓ）−酸を反応媒
   体から別個に単離することからなる、式 【化２】 の光学的に純粋な（Ｓ）−α−［（ターシャリー−ブチ
   ルスルホニル）メチル］ヒドロ桂皮酸の製造方法。
2. 【請求項２】　　基質を高温における融解により乳化さ
   せる、請求項１に記載の方法。
3. 【請求項３】　　反応を約７．５のｐＨ値において実施
   する、請求項１または２に記載の方法。
4. 【請求項４】　　Ｒ１がエチルを意味する、請求項１−
   ３のいずれかに記載の方法。
5. 【請求項５】　　水性媒体が塩化カルシウムを含有して
   いる、請求項１−４のいずれかに記載の方法。
6. 【請求項６】　　プロテアーゼが微生物から得られる、
   請求項１−５のいずれかに記載の方法。
7. 【請求項７】　　プロテアーゼがバクテリア性酵素であ
   る、請求項６に記載の方法。
8. 【請求項８】　　プロテアーゼがオプチマーゼ、サヴィ
   ナーゼまたはアルカラーゼである、請求項７に記載の方
   法。